CN105803000A - 白鬼笔提取液、发酵胞外液和发酵胞内液的制备方法及其应用 - Google Patents
白鬼笔提取液、发酵胞外液和发酵胞内液的制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于菌类提取技术领域，涉及一种白鬼笔提取液、发酵胞外液和发酵胞内液的制备方法及其应用。制备方法包括步骤A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，热风烘干至恒重，粉碎过筛，得到待提粉末，密封保存，B、将待提粉末和乙醇水溶液混合，在60‑80℃的恒温下浸提1.5‑3.5hr，C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液；还包括在抑制食品腐败菌中的应用。本发明实现了变废为宝，白鬼笔的附加值便大大提高，同时也避免了对环境造成的污染。
Description
技术领域
本发明属于菌类提取技术领域，涉及一种白鬼笔提取液、发酵胞外液和发酵胞内液的制备方法及其应用。
背景技术
白鬼笔(Phallus impudicus)隶属于鬼笔科(Phallaceae)，别名鬼笔菌、竹下菌、竹菌、无裙竹荪，由于其出菇温度偏低，也被菇农称为冬荪，与竹荪相似度极高，但口感略差于竹荪。主要分布在山西、山东、安徽、广东等地，在贵州实现了白鬼笔人工栽培，尚未大规模推广。白鬼笔可食用，食用时需去掉菌盖和菌托。白鬼笔子实体群生于竹林下、酸性土壤的杂木林、林缘、草地、菜园地等有腐殖质的环境，有时也见于火烧地。其子实体的形态如下：白鬼笔菌蕾大，呈球形，直径4-6cm，白色，待成熟后外层会有裂纹；菌盖酷似钟形，颜色为褐色，圆盘状，顶平，中央有穿孔，周围遍布深凹的网和凸脊络，有暗绿色粘而臭的孢子液；菌柄呈现圆柱形，白色中空状，高为10±2cm，直径2±0.5cm；菌托位处基部，白色苞状，厚且具有一定弹性。
“民以食为天，食以安为先”，当前我们化学合成类防腐剂在食品应用上占据主导地位，如苯甲酸钠、山梨酸、脱氢乙酸钠等，尽管国家已对使用标准做出了严格规定，但长期食用化学防腐剂，对人体仍然存在不可小觑的潜在危害。近年来，“食品安全”事件频频向人类敲响警钟，很多事件是由于不安全的食品防腐剂引起的。在经济高速发展的当下，人类“绿色”、“安全”、“健康”的观念与日俱增，开发安全绿色的纯天然食品防腐剂迫在眉睫。迄今为止，人类对棘托竹荪的研究比较多，但对于与竹荪同属一科的白鬼笔研究很少，目前对于白鬼笔的研究大都集中于白鬼笔的分离、生长发育、出菇条件以及生物学特征的研究，对于白鬼笔的抑菌杀菌研究未见报道。白鬼笔的菌柄作为可食部分，菌盖菌托采收时均被视为废弃物，如果把白鬼笔这两个部位“变废为宝”，白鬼笔的附加值便大大提高，同时也避免了对环境造成的污染。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种基于白鬼笔的废弃物的白鬼笔提取液的制备方法。
本发明的另一目的是提供一种基于白鬼笔的废弃物的白鬼笔发酵胞外液的制备方法。
本发明的再一目的是提供一种基于白鬼笔的废弃物的白鬼笔发酵胞内液的制备方法。
本发明还有一个目的是提供白鬼笔提取液在抑制食品腐败菌中的应用。
本发明还有一个目的是提供白鬼笔发酵胞外液在抑制食品腐败菌中的应用。
本发明还有一个目的是提供白鬼笔发酵胞内液在抑制食品腐败菌中的应用。
为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：一种白鬼笔提取液的制备方法，包括以下步骤：
A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，热风烘干至恒重，粉碎过筛，得到待提粉末，密封保存，
B、将待提粉末和乙醇水溶液混合，在60-80℃的恒温下浸提1.5-3.5hr，
C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
在上述的白鬼笔提取液的制备方法中，包括以下步骤：
A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，60℃热风烘干至恒重，粉碎过80目筛，得到待提粉末，密封保存，
B、将待提粉末和浓度为60-95％乙醇水溶液以1:10-30的料液比，在60-80℃的提取温度下浸提1.5-3.5hr，
C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
在上述的白鬼笔提取液的制备方法中，所述的乙醇水溶液的浓度为90％，所述的料液比为1:20，所述的浸提温度为75℃，所述的浸提时间为2hr。
一种白鬼笔发酵胞外液的制备方法，包括以下步骤：
A、菌种活化
将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，24℃恒温培养，进行活化，
B、准备菌丝
把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的PDA培养基混合均匀，倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，
C、发酵
将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，
D、发酵胞外液的制备
发酵培养基低温离心取上清液，过滤，获得发酵胞外液。
在上述的白鬼笔发酵胞外液的制备方法中，步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。
一种白鬼笔发酵胞内液的制备方法，包括以下步骤：
A、菌种活化
将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，24℃恒温培养，进行活化，
B、准备菌丝
把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的PDA培养基混合均匀，迅速倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，
C、发酵
将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，
D、发酵胞内液的制备
发酵培养基低温离心，取离心后的沉淀用蒸馏水反复洗涤3次，收集菌丝体，菌丝体加蒸馏水经过超声细胞破碎后，再加入无水乙醇，置于80℃水浴锅中水浴2h，过滤除菌，即为发酵胞内液。
在上述的白鬼笔发酵胞外液的制备方法中，步骤D中，所述的步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。
根据上述的制备方法制备的白鬼笔提取液在抑制食品腐败菌中的应用。
根据上述的制备方法制备的白鬼笔发酵胞外液在抑制食品腐败菌中的应用。
根据上述的制备方法制备的白鬼笔发酵胞内液在抑制食品腐败菌中的应用。
与现有的技术相比，本发明的优点在于：把采摘时作为废弃物的白鬼笔菌盖和菌托进行有效利用，实现了变废为宝，白鬼笔的附加值便大大提高，同时也避免了对环境造成的污染；白鬼笔提取液、白鬼笔发酵胞外液和白鬼笔发酵胞内液均具有明显的抑菌作用，可用于食品防腐，提供了一种天然的防腐剂，为食品安全提供了一种创新思路和方法。
具体实施方式
下述实施例中所用的试剂，如无特殊说明，可以从常规生化试剂商店购买得到。以下实施例中的定量数据，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1
一种白鬼笔提取液的制备方法，包括以下步骤：A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，100℃以下用鼓风机热风烘干至恒重，粉碎过筛，得到待提粉末，密封保存，B、将待提粉末和乙醇水溶液混合，在60-80℃的恒温下浸提1.5-3.5hr，C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
实施例2
一种白鬼笔提取液的制备方法，包括以下步骤：A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，60℃热风烘干至恒重，粉碎过80目筛，得到待提粉末，密封保存，B、将待提粉末和浓度为60-95％乙醇水溶液以1:10-30的料液比，在60-80℃的提取温度下浸提1.5-3.5hr，C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
不同提取液抑菌活性测定
(1)牛津杯法：吸取0.2mL供试细菌悬液在LB平板上进行涂布，37℃培养18-24h，0.2mL啤酒酵母悬浮液在PDA平板上进行涂布，30℃培养48h，采用祖若夫等的牛津杯法测定抑菌圈，按照下述公式计算其抑菌率，重复三次。
抑菌圈直径(mm)＝处理组的抑菌圈直径-对照组的抑菌圈直径。
(2)分光光度法：每个小锥形瓶里放入体积为10mL的LB或者PDA液体培养基，于121℃下灭菌20min，吸取0.2mL菌悬液分别加人带有0.2mL提取液的液体培养基与对照培养基中，细菌置于37℃，啤酒酵母置于28℃下的120r/min恒温振荡培养箱里培养20h，于560nm下测定其培养液的吸光值，按照下述公式测定其抑菌率。
抑制率(％)＝(对照菌液OD值－处理菌液OD值)/(对照菌液OD值)×100％。
乙醇浓度分别为60％、70％、80％与90％时，抑菌圈直径显著增加(P<0.05)，而乙醇浓度分别为90％、100％时，抑菌圈直径增加不显著，因此确定90％乙醇水溶液为竹荪提取溶剂。
PDA固体培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g。马铃薯去皮切成小块煮约30min，用4层纱布过滤，添加葡萄糖、琼脂，定容至1000mL，pH自然。
PDA液体培养基：与PDA固体培养基同，只是不添加琼脂。
LB固体培养基：胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，Nacl10g，最终定容至1000mL，pH自然。
LB液体培养基：与LB固体培养基同，只是不添加琼脂。
培养基均经高压蒸汽灭菌(121℃、20min)备用。
经过检测，得到以下结论：
随着乙醇浓度加大，抑菌效果不断增强，乙醇浓度分别为60％、70％、80％与90％时，抑菌圈直径显著增加(P<0.05)，而乙醇浓度分别为90％、100％时，抑菌圈直径增加不显著，因此确定90％乙醇水溶液为提取溶剂；
随着料液比的增加，浸提液的抑菌效果不断上升，料液比从1:10g.mL-1增加到1:15g.mL-1，从1:20g.mL-1增加到1:25g.mL-1、1:30g.mL-1，抑菌圈直径增加均不显著，而料液比从1:15g.mL-1增加到1:20g.mL-1，抑菌圈直径表现为显著增加(P<0.05)，因此料液比被确定为1:20g.mL-1。
随着浸提时间增加，提取液的抑菌效果表现为不断上升，提取时间从1.5h增加到2.0h，从2.5h增加到3.0h、3.5h，抑菌圈直径增加均不显著，而提取时间从2.0h增加到2.5h，抑菌圈直径显著增加(P<0.05)，因此确定提取时间为2.5h。
随着浸提温度的升高，提取液的抑菌效果不断上升，提取温度从60℃增加到65℃、70℃，抑菌圈直径显著增加(P<0.05)，而提取温度从70℃增加到75℃、80℃，抑菌圈直径增加均不显著，因此确定提取温度为70℃。
由此，确定最佳的提取条件：乙醇水溶液的浓度为90％，料液比为1:20，浸提温度为75℃，浸提时间为2hr。
实施例3-4
本实施例与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，实施例3的步骤A中单独取白鬼笔的菌盖进行热风烘干，实施例4的步骤A中单独取白鬼笔的菌托进行热风烘干。
实施例5
一种白鬼笔发酵胞外液的制备方法，包括以下步骤：A、菌种活化，将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，本领域技术人员应当理解，白鬼笔的菌盖、菌托可以单独接种，也可以合并接种，24℃恒温培养，进行活化，B、准备菌丝，把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的固体或液体PDA培养基混合均匀，倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，C、发酵，将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，D、发酵胞外液的制备，发酵培养基低温离心取上清液，过滤，获得发酵胞外液。
优选方案，步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。本领域技术人员应当理解，发酵胞外液可进行浓缩也可不浓缩，浓缩后的浓度变大，在作为防腐剂时添加量可适量减少。
本实施例对5种食品腐败菌：大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、啤酒酵母进行了抑菌测试，抑菌率分别为70.5％、100％、100％、100％、18.5％。
热稳定好坏常作为食品防腐剂应用的重要指标之一，发酵胞外液经过一定的热处理(121℃高压灭菌20min)后对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性影响不显著(P＞0.05)，说明发酵胞外液具有良好的热稳定性。
实施例6
一种白鬼笔发酵胞内液的制备方法，包括以下步骤：A、菌种活化，将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，24℃恒温培养，进行活化，B、准备菌丝，把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的PDA培养基混合均匀，迅速倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，C、发酵，将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，D、发酵胞内液的制备，发酵培养基低温离心，取离心后的沉淀用蒸馏水反复洗涤3次，收集菌丝体，菌丝体加蒸馏水经过超声细胞破碎后，再加入无水乙醇，置于80℃水浴锅中水浴2h，过滤除菌，即为发酵胞内液。
优选方案，步骤D中，所述的步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。本领域技术人员应当理解，发酵胞内液可进行浓缩也可不浓缩，浓缩后的浓度变大，在作为防腐剂时添加量可适量减少。
本实施例对5种食品腐败菌：大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、啤酒酵母进行了抑菌测试，抑菌率分别为16.5％、43％、44％、44％、-30％。
热稳定好坏常作为食品防腐剂应用的重要指标之一，发酵胞外液经过一定的热处理(121℃高压灭菌20min)后对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性影响不显著(P＞0.05)，说明发酵胞内液具有良好的热稳定性。
对比例1
本对比例与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，本对比例的步骤A中单独取白鬼笔的菌柄进行热风烘干，然后进行其余的步骤。
对比例2
本对比例与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，浸提用的溶液为水溶液。抑菌实验结果表明：水提物对各供试菌均未显现出明显抑制作用，而醇取液对细菌抑制作用明显，对酵母菌和霉菌表现较弱的抑制作用。
应用例1
根据实施例2-4及对比例1制备的不同提取液对猪肉、豆腐、面条和米饭等代表性食物的防腐作用见表：
相对于对照组，不同提取液对不同种类食物的防腐效果显著，实施例3和4的提取液相比于其他两种提取液防腐效果较好，确定其提取液可以应用于实际生产和生活中。在本应用例中，对比例1、实施例2、实施例3和实施例4中的提取液的加入量占食品重量的1.5％，本领域技术人员应当理解，加入量还可以根据不同的食材情况进行具体调节，如0.5％、1.0％、2％等。
应用例2
取代表性食物面条、米饭、豆腐、猪肉，以不添加发酵胞外液的食物做对照，测定实施例5和6的发酵胞外液与发酵胞内液的防腐效果，具体见下表：
相对于对照组，实施例5和6提供的发酵胞外液和发酵胞内液对供试代表性食物均有明显的防腐效果，发酵胞外液和发酵胞内液在实际生产中具有应用价值。在本应用例中，发酵胞外液和发酵胞内液加入量占食品重量的1％。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
Claims (10)
1.一种白鬼笔提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，热风烘干至恒重，粉碎过筛，得到待提粉末，密封保存，
B、将待提粉末和乙醇水溶液混合，在60-80℃的恒温下浸提1.5-3.5hr，
C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
2.根据权利要求1所述的白鬼笔提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、取白鬼笔的菌盖和/或菌托，60℃热风烘干至恒重，粉碎过80目筛，得到待提粉末，密封保存，
B、将待提粉末和浓度为60-95％乙醇水溶液以1:10-30的料液比，在60-80℃的提取温度下浸提1.5-3.5hr，
C、过滤，取清液，即为白鬼笔提取液。
3.根据权利要求2所述的白鬼笔提取液的制备方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液的浓度为90％，所述的料液比为1:20，所述的浸提温度为75℃，所述的浸提时间为2hr。
4.一种白鬼笔发酵胞外液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、菌种活化
将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，24℃恒温培养，进行活化，
B、准备菌丝
把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的PDA培养基混合均匀，倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，
C、发酵
将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，
D、发酵胞外液的制备
发酵培养基低温离心取上清液，过滤，获得发酵胞外液。
5.根据权利要求4所述的白鬼笔发酵胞外液的制备方法，其特征在于，步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。
6.一种白鬼笔发酵胞内液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、菌种活化
将白鬼笔的菌盖和/或菌托接种于斜面培养基，24℃恒温培养，进行活化，
B、准备菌丝
把活化后的白鬼笔菌种接种于PDA平板上，待长出孢子后用无菌水洗下分生孢子，制备成106-108个.mL-1的孢子悬液，把孢子悬液与冷却至45-50℃的PDA培养基混合均匀，迅速倒于各个培养皿中，待菌丝长满后低温保存待用，
C、发酵
将长满菌丝的PDA培养基用无菌打孔器制成若干菌饼，将其接入液体PDA培养基，于24℃、120r/min摇床培养10d，得发酵培养基，
D、发酵胞内液的制备
发酵培养基低温离心，取离心后的沉淀用蒸馏水反复洗涤3次，收集菌丝体，菌丝体加蒸馏水经过超声细胞破碎后，再加入无水乙醇，置于80℃水浴锅中水浴2h，过滤除菌，即为发酵胞内液。
7.根据权利要求6所述的白鬼笔发酵胞外液的制备方法，其特征在于，步骤D中，所述的步骤D中，发酵培养基的离心温度为4℃，离心速率为8000r/min，离心时间为10min。
8.根据权利要求1-3任意一项所述的制备方法制备的白鬼笔提取液在抑制食品腐败菌中的应用。
9.根据权利要求4-5任意一项所述的制备方法制备的白鬼笔发酵胞外液在抑制食品腐败菌中的应用。
10.根据权利要求6-7任意一项所述的制备方法制备的白鬼笔发酵胞内液在抑制食品腐败菌中的应用。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105250209A (zh) * | 2014-07-18 | 2016-01-20 | 上海家化联合股份有限公司 | 一种深层发酵竹荪菌丝体的制备及其在化妆品中的应用 |
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李文力等: ""黔产白鬼笔不同部位提取物的成分分析"", 《食品科学》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106580803A (zh) * | 2017-01-18 | 2017-04-26 | 贵州省生物研究所 | 一种天然面膜 |
| CN106982860A (zh) * | 2017-05-05 | 2017-07-28 | 东北林业大学 | 中华散尾鬼笔杀虫活性物质的提取方法 |
| CN107702469A (zh) * | 2017-10-26 | 2018-02-16 | 宁波华又网络科技有限公司 | 一种用于制备白鬼笔提取液的烘干磨粉装置 |
| CN109619666A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-04-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种凉味保润剂、其制备方法及用途 |
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