CN101312738A - 基于海巴戟的抗真菌制剂和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了可用于农业实践的作为植物生长促进剂，土壤改良剂，杀细菌和杀虫剂，疾病和害虫预防剂既环保又有效，并且适用于有机农业的制剂。本发明的制剂由海巴戟(Morinda citrifolia)产品或提取物组成。本发明的制剂可以应用于果类蔬菜，叶类蔬菜，根类蔬菜，谷物及花和灌木，以增加产量并延长收割后的保鲜期。此外，本发明涉及海巴戟加工品及这些加工品的不同提取物流份和海巴戟植物的抗真菌和抗细菌活性，以及测定平均抑制浓度的相关方法。尤其是，本发明涉及海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物及其对常见真菌和细菌的抑制活性及平均抑制浓度的确定。
Description
1.发明领域
本发明涉及基于海巴戟(Morinda citrifolia)的组合物，其可以应用于农业，以减少真菌感染，提高作物产量，并帮助保持收割后作物的新鲜度。
2.发明背景和相关技术
有机指的是用来生产食品和纤维的农业生产系统。多种农产品是有机生产的，包括生产谷物，肉，乳品，蛋和纤维，例如棉花，花和加工食品。有机农庄管理依赖于利用自然机制破坏有害生物的生境及有目的地保持和补给土壤肥力。从事有机农业的农民不使用合成杀虫剂或肥料。有机植物种植者不使用合成农用化学药品，辐射和基因工程食品或成分。为了保持食品的完整性而无人工成分或防腐剂，有机食品尽可能少地加工。由于从事有机农业的农民坚守这些常规，因此有机食品很少有可能含有多于传统食品的杀虫剂残留。Baker，B.P.，等，Pesticide residues in conventional，integrated pest management(IPM)-grown and organic food：insights from three US data sets，19FOODADDITIVES AND CONTAMINANTS 427-446(2002)(排除长期禁用的持久性杀虫剂，13％的有机产品样本与71％的传统产品样本含有杀虫剂残留)。
有机食品市场巨大，并且在不断增长。约2％的美国食品供应采用有机方法种植。在过去的十年里，有机产品的销售额呈现出至少20％的年增长率，是农业中增长最快的部分。2001年，有机食品的零售额计划为93亿美元(Organic Consumer Trends 2001，由美国天然产品营销研究所(Natural Marketing Institute)与有机食品贸易协会(OrganicTrade Association)合作出版，http://www.ota.com/consumer trends2001.htm)。有机食品的国际市场也在增长。尤其是日本和德国正在成为有机食品的重要国际市场。
由于从事有机农业的农民代替了化学药品的劳动和集约管理，因此有机食品的成本高于传统食品的成本。这样做时，从事有机农业的农民承受了一些先前传统农业实践之外的成本(例如，健康和环境成本)。一些与有机农业相关的成本包括污染水的净化和杀虫剂污染的补救。此外，有机食品的价格还包括种植，收割，运输和储存的成本。在加工食品的情况下还包括加工和包装的成分。
除了成本较高之外，有机农业生产的作物产量通常比传统农业技术生产的作物产量少。根据不同作物的154个生长季的数据值，有机作物的产量为传统高输入条件下生长的作物的95％。
从事有机农业的农民通过滋养土壤的活的组分，即释放，转化并转运营养素的习居微生物来建立健康的土壤。土壤有机质有助于良好的土壤结构和保水能力。从事有机农业的农民供养土壤微生物群，构建土壤结构和保水能力。从事有机农业的农民用覆盖作物，堆肥和基于生物学的土壤改良剂供养土壤微生物群，构建土壤有机质。这些产生了能更好地抵御疾病的健康植物。作为最后的手段，可以使用某些植物的或其它非合成的杀虫剂。
从事传统农业的农民和从事有机农业的农民都面临着改善使食品产量和质量降低的非期望的微生物的难题。为了避免在生长过程中使用合成改良剂，从事有机农业的农民尤其必须依靠基于生物学的处理。尽管存在着成千上万的抗微生物化合物，但微生物对甚至最新的最强效抗微生物化合物或处理形成耐药性的能力迅速。为了与对新的抗微生物剂的需求保持同步，重要的是发现新的化合物。其中的一些甚至可能来自意想不到的来源(参见，例如，青霉素的开发)。
已知海巴戟汁具有许多有用的特性，并含有多种营养要素。目前己利用其果实的某些要素开发草药，健康食品，宠物食品，化妆品和其它产品。然而，利用海巴戟的不同产品的农用组合物迄今仍未见报道。
因此，通过增加产量，提高所生产食品的质量和减少有机农业成本，有机和传统农业实践可能得到改善。本发明提供了从事传统和有机农业的农民都可以使用的组合物和方法，以提高所生产食品的产量和质量。
发明概述
本发明的目标在于提供基于海巴戟的农业用途的组合物，其有效但对生态系统无有害作用，并且适用于有机农业。本发明的实施与被称为海巴戟(Morinda citrifolia L)的植物的汁，酱和其它提取物或部分的利用相关。本发明的实施方案包括设计用于农业用途的组合物，其中特定组合物包括肥料，作物生长促进剂，土壤改良剂，抗细菌和杀虫剂，抗微生物剂及疾病和害虫预防剂。此外，农用组合物包括具有例如促进作物生长，改进作物质量，提高对疾病和害虫的抵御力，增加作物产量，增加糖和味道及改善收割后的新鲜度的作用的天然原料。
本发明提供农业用途组合物，包括单独或与其它成分组合的海巴戟的各种要素。本发明提供多种基于海巴戟的组合物，其可能包括得自海巴戟的果实，叶，茎，种皮和/或根的提取物或加工品。本发明还提供海巴戟不同要素与附加成分的组合，以增强所述组合物的农业实用性。例如，本发明的一个实施方案公开了使用海巴戟果实，叶，茎，种子和/或根的提取物，其已被用水稀释了1-10,000倍(以重量计)。本发明的组合物具有提高作物产量并保持收割后作物的新鲜度的能力。
此外，本发明涉及海巴戟提取物的抗真菌和抗细菌活性及测定平均抑制浓度的相关方法。尤其是，本发明涉及海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物及其对常见真菌和细菌的抑制活性及平均抑制浓度的确定。
与本文具体实施和概述的一致，本发明的特征在于用提取自和存在于一种或多种海巴戟加工品的活性化合物和/或成分抑制，预防和破坏已有有害真菌及微生物的活性和生长的各种方法。海巴戟产品优选以设计为对非所需的微生物活性产生抑制作用的制剂供应。
海巴戟加工品包括各种各样的类型，包括但不限于，加工的海巴戟果汁，加工的海巴戟酱汁，加工的海巴戟膳食纤维，加工的海巴戟油，加工的海巴戟果汁浓缩物，加工的海巴戟酱汁浓缩物和加工的海巴戟油提取物。
本发明的特征还在于抑制和处理真菌及微生物活性和生长的制剂，其中制剂包括至少一种或多种海巴戟加工品。在海巴戟加工品中，具体表现出抗真菌和抗微生物活性的是海巴戟级分或提取物。制剂也可以包括其它天然成分。
优选实施方案详述
本发明的农用制剂和方法可以通过从海巴戟的果实，叶，茎，种子和/或根中提取有效组分来产生。另外，本发明涉及测定海巴戟提取物对常见真菌和细菌的活性及平均抑制浓度的方法。尤其是，本发明涉及海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物及不同级分及其抗真菌和抗细菌作用，所述抗真菌和抗细菌作用与其存在于制剂中时所测定的平均抑制浓度和平均致死浓度相关，所述浓度以多次实验研究为依据。
如本文通常描述的那样，本发明的组合物和制剂可以设计成包含变量。因此，不希望以下对本发明的制剂和方法的实施方案的更详细描述限制本发明的范围，如权利要求保护的那样，其仅仅代表本发明目前优选的实施方案。
在公开内容和权利要求书中，除非上下文清楚地指定为其它含义，单数形式均包括复数的指示物。
在描述和要求保护本公开内容时，下列术语将依照下述定义使用。本文所用术语“包括”，“包含”，“含有”，“特征在于”及其语法上的等同体都是包含性的或开放式的术语，其不排除额外的未列举的要素或方法的步骤。本文所用短语“由……组成”及其语法上的等同体排除权利要求中未指定的任何要素，步骤或成分。本文用到的“有效量”是足以产生有益或预期结果的量。有效量可以在一次或多次给药，应用或处理中施予。例如，基于海巴戟的组合物的有效量是足以提供抗微生物活性并改善相关病症的量。这样的有效量可以由本领域技术人员在不需要过度实验的条件下确定。
以下本发明的公开内容被分成3个副标题，即“海巴戟的一般讨论和用来生产海巴戟加工品的方法”，“农用制剂和给药方法”和“抗微生物活性”。副标题的使用只是为了方便读者，而不应理解为任何意义上的限制。
1.海巴戟的一般讨论和用来生产海巴戟加工品的方法
学名为海巴戟(Morinda citrifolia L.)的印度桑椹或诺丽(Noni)树是一种灌木或小乔木。叶对生，呈椭圆形至卵形。小白花包含在肉质，球形，头状花序中。果实大，肉质，呈卵圆形。成熟时，其为乳白色，可食用，但具有令人不快的味道和臭味。该植物原产于东南亚，早期传播至从印度到东波利尼西亚的大面积区域。其在野外随意生长，并已经在种植园和小规模独立生长样地内栽培。海巴戟花小，白色，3-5裂，管状，有香味，长约1.25cm。花发育成由许多融合成卵圆形，椭圆形或略圆形的表面凹凸不平的物体的小核果组成的聚合果，果皮呈蜡质半透明的白色或青白色或微黄色。果实表面有“眼”，状似马铃薯。果实多汁，味苦，暗黄色或微黄白色，并含有许多红棕色坚硬的长方形至三角形的有翼的两室果核，各果核均含有4粒种子。
完全成熟时，果实具有明显类似腐败乳酪的臭味。尽管果实己作为食品为几个民族所食用，但海巴戟植物的最常见用途是作为红色和黄色染料的来源。近年来，海巴戟植物的营养和健康方面的利益得到了关注，这在下文中进一步讨论。
加工的海巴戟果汁可以通过从成熟海巴戟果实的果汁和果肉中分离出种子和果皮；从果汁中过滤出果肉；包装果汁而制备得到。或者，果汁可以作为成分立即加入到其它产品中，而不是包装果汁。在一些实施方案中，果汁和果肉可以制成浓汁的同质搀和物，以与其它成分混合。其它方法包括将果实和果汁冷冻干燥。在生产最终的果汁产品时，果实和果汁可以复溶。其它方法还包括将果实和果汁风干，然后粉碎。
本发明还构思提取自海巴戟植物的果汁和/或果酱汁的应用。在目前优选的生产海巴戟果汁的方法中，果实由人工或机械设备挑选。当果实的直径为至少1英寸(2-3cm)和高达12英寸(24-36cm)时可以进行收割。果实的颜色优选为深绿色经由黄绿色至白色及两者之间过渡的各种层次的颜色。果实在收割之后，进行任何加工之前彻底清洁。
使果实成熟或老化0-14天，大多数果实进行2-3天。将果实置于设备上成熟或老化，因此其不会接触地面。优选老化期间用布或网织材料覆盖，但也可以在不覆盖的条件下进行老化。当准备好进一步加工时，果实的颜色变淡，形成淡绿色，淡黄色，白色或半透明色。检查果实的腐烂情况或过份绿的颜色及坚硬度。从合格果实中分离出腐烂和坚硬的绿色果实。
成熟和老化的果实优选置于塑料内衬的容器中，用于进一步加工和运输。老化果实的容器可以保持0-120天。大多数果实的容器在加工前保持7-14天。在进一步加工之前，容器可以任意地在冷藏条件或环境/室内温度条件下储存。从储存容器中取出果实，通过手工或机械分离器处理。从果汁和果肉中分离出种子和果皮。
果汁和果肉可以包装入容器，用于储存和运输。或者，可以将果汁和果肉立即加工成果汁成品。容器可以在冷藏，冷冻或室温条件下储存。
优选将海巴戟果汁和果肉掺和制成同质掺合物，之后，其可以与其它成分混合。果汁成品优选最低温度在181°F(83℃)或高至212°F(100℃)下加热和巴斯德消毒。
制造的另一种产品是浓缩或稀释形式的海巴戟酱和酱汁。酱本质上是分离自种子的果肉，其与本文所述果汁产品不同。
将各产品灌装入塑料，玻璃或其它可以经受加工温度的适宜材料的最终容器中，密封。容器保持灌装温度，或者可以迅速冷却，然后置于运输容器中。运输容器优选以某种方式覆盖有某种材料，以保持或控制最终容器中产品的温度。
通过用过滤设备从果汁中分离出果肉对果汁和果肉进一步进行加工。过滤设备优选由下列设备组成，但不限于沉降式离心机，孔径为0.01μm至2000μm，更优选小于500μm的筛滤器，压滤器，反渗透过滤器和任何其它标准商业化过滤装置。过滤器的操作压力范围优选为0.1psig至约1000psig。流速范围优选为0.1g.p.m.至1000g.p.m.，更优选在5-50g.p.m.之间。洗涤湿果肉，并过滤至少一次，最高10次，以从果肉中除去任何果汁。湿果肉的纤维含量以重量计通常为10-40％。湿果肉优选在最低181°F(83℃)的温度下消毒，然后装桶，用于进一步加工或制成高纤维产品。
海巴戟加工品还可以作为纤维存在。此外，海巴戟加工品还可以按油的形式存在。海巴戟油通常包括多种以甘油三酯形式存在的不同脂肪酸，例如，棕榈酸，硬脂酸，油酸和亚油酸及其它少量存在的脂肪酸的混合物。另外，油优选包括抗氧化剂，以抑制油的酸败。优选使用常规食品级的抗氧化剂。
海巴戟植物富含天然成分。已经发现的那些成分包括：(来自叶)：
丙氨酸，蒽醌，精氨酸，抗坏血酸，天冬氨酸，钙，β-胡萝卜素，半胱氨酸，胱氨酸，甘氨酸，谷氨酸，糖苷，组氨酸，铁，亮氨酸，异亮氨酸，蛋氨酸，烟酸，苯丙氨酸，磷，脯氨酸，树脂，核黄素，丝氨酸，β-谷甾醇，硫胺，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，熊果酸和缬氨酸；(来自花)：金合欢素-7-O-β-d(+)-吡喃葡糖苷，5，7-二甲基-芹菜素-4′-O-β-d(+)-吡喃半乳糖苷和6，8-二甲氧基-3-甲基蒽醌-1-O-β-鼠李糖基-吡喃葡糖苷；(来自果实)：乙酸，车叶草苷，丁酸，苯甲酸，苯甲醇，1-丁醇，辛酸，癸酸，(E)-6-十二碳烯-γ-内酯，(Z，Z，Z)-8，11，14-二十碳三烯酸，反油酸，癸酸乙酯，己酸乙酯，辛酸乙酯，棕榈酸乙酯，(Z)-6-(乙基硫甲基)苯，丁香酚，葡萄糖，庚酸，2-庚酮，己醛，己酰胺，己二酸，己酸，1-己醇，3-羟基-2-丁酮，月桂酸，柠檬烯，亚油酸，2-甲基丁酸，3-甲基-2-丁烯-1-醇，3-甲基-3-丁烯-1-醇，癸酸甲酯，反油酸甲酯，己酸甲酯，3-甲硫基-丙酸甲酯，辛酸甲酯，油酸甲酯，棕榈酸甲酯，2-甲基丙酸，3-甲硫基丙酸，肉豆蔻酸，壬酸，辛酸，油酸，棕榈酸，钾，东莨菪亭，十一烷酸，(Z，Z)-2，5-十一碳二烯-1-醇和vomifol；(来自根)：蒽醌，车叶草苷(rubichloric acid)，虎刺醛，糖苷，二羟甲基蒽醌(morindadiol)，morindine，桑酮，粘液物质，去甲虎刺醛，茜根定，茜根定单甲基醚，树脂，柚木醌二酚(soranjidiol)，甾醇和三羟甲基蒽醌单甲基醚；(来自根皮)：茜素，chlororubin，糖苷(戊糖，己糖)，二羟甲基蒽醌(morindadiol)，morindanigrine，morindine，桑酮，树脂类物质，茜根定单甲基醚和柚木醌二酚(soranjidiol)；(来自木材)：蒽棓酚-2，3-二甲基醚；(来自组织培养物)：虎刺醛，光泽汀，光泽汀-3-樱草糖苷和桑酮-6β-樱草糖苷；(来自植物)：茜素，茜素-α-甲基醚，蒽醌，车叶草苷，己酸，二羟甲基蒽醌(morindadiol)，桑酮，morindogenin，辛酸和熊果酸。本发明构思单独使用，彼此组合使用或与其它成分组合使用海巴戟植物的所有部分。上文列出的海巴戟植物的部分不是将要使用的该植物的部分的详尽目录，而只是例示性的列举。因此，虽然海巴戟植物的有些部分(例如，来自果实的种子，果实的果皮，树皮或植物)在上文中没有提及，但本发明涉及该植物的所有部分的应用。
为了获得海巴戟叶，茎，种子和/或根的提取物，首先将这些原材料切碎。然后，采用某种提取方法分离感兴趣的成分。在本发明的优选实施方案中，采用了热水提取法，其中加入5-10倍量的水，并在95℃的温度下加热，或者可以采用其中使用有机溶剂，例如乙醇，甲醇，己烷等或水与有机溶剂的混合物的提取方法。此外，可以采用使用普通高压设备的湿压和热处理法。另外，还可以将使用纤维素水解酶的处理程序加入到前述过程中。如果需要，过滤除去获自叶，茎，种子和/或根的提取物中的不溶性组分后，除去有机溶剂，得到本发明的提取物。如果必要，可以将该提取物消毒或浓缩或干燥。干燥可以用普通的喷雾干燥或冷冻干燥完成。提取物可以在冷却或冷冻条件下储存。
此外，可以从种子中提取油。油可以通过干燥，粉碎并用压榨机压榨种子而获得。加入己烷溶液等可以从剩余的籽饼中提取出更多的油。油包括脂肪酸，例如以甘油三酯形式存在的亚油酸，油酸，棕榈酸和硬脂酸。
如所提及的那样，近来己发现由含有海巴戟的产品的应用所带来的许多健康方面的利益。已发现的海巴戟的一个益处是其分离和产生赛洛宁(Xeronine)的能力。赛洛宁几乎存在于植物，动物和微生物的所有健康细胞中。即使海巴戟含有的游离赛洛宁的量可以忽略不计，但其还含有可感知数量的被称为赛洛宁原(Proxeronine)的赛洛宁的前体。另外，海巴戟包括无活性形式的赛洛宁原转化酶(Proxeronase)，其由赛洛宁原释放赛洛宁。夏威夷大学(University ofHawaii)的R.M.Heinicke的标题为“The Pharmacologically Active Ingredient of Noni”的论文指出，海巴戟由于大量赛洛宁原和赛洛宁原转化酶构建原料，因而是“用于分离赛洛宁的最佳原材料”。
赛洛宁保护和保持蛋白质分子的形状和柔软性，以便其能通过细胞壁，并用来形成健康组织。如果这些营养素没有进入细胞，则细胞不能有效完成其工作。赛洛宁帮助扩大细胞的膜孔。这种扩大允许更大的肽链(氨基酸或蛋白质)进入细胞。如果这些肽链没有被利用，则其变成废物。此外，由赛洛宁原制得的赛洛宁帮助扩大孔，以允许营养素更好的吸收。由于海巴戟的许多益处，大家已熟知其提供大量轶事一样的作用。
有利的是，本发明提供了用基于海巴戟的制剂在无任何导致有害环境效应的显著趋势的条件下处理和抑制真菌及其它微生物的活性或生长的方法。
本文所用术语海巴戟汁是指包括用印度桑椹或海巴戟植物的果实加工的果汁的产品。在一个实施方案中，海巴戟汁包括用法属波利尼西亚的纯汁酱复溶的果汁。包括至少一种海巴戟加工品的组合物或制剂还可以包含其它成分。在另一个实施方案中，海巴戟汁不是由干燥海巴戟或海巴戟粉末加工而来的。
2.制剂和给药方法
以下章节对基于海巴戟的制剂和在农业环境中使用所述制剂，以提高所生产食品的产量和质量，尤其抑制和预防有害微生物生长，为生长中的植物提供额外营养素的方法的一些优选实施方案进行详述。
本发明通过提供用一种或多种得自印度桑椹植物的海巴戟加工品配制的组合物促进真菌和其它抗微生物抑制剂的发展。海巴戟被掺入适于农业用途的不同载体或组合物。
本发明的农业组合物可以通过将用前述程序获得的海巴戟果实，茎，种子和/或根的提取物或提取物的混合物用适宜的载体材料制成液体剂，颗粒剂，粉末剂或糊剂而产生。本发明的农业制剂可以溶解或分散在水中使用。此外，本发明的制剂可以与肥料组分，例如硫酸铵，尿素，氯化钾，氯化氮和氯化铵，各种堆肥，各种粪肥，鸡粪，牛粪，鸟粪，蠕虫粪(worm castings)，昆虫粪，锯屑，米糠，大蒜油，鱼油，蛭石，蒙脱石，活性炭，木炭，硅藻土，滑石，苜蓿粉和颗粒，氮，磷，钾，甜菜的干燥碎片，玉米蛋白，棉籽粉，几种大型海藻或藻的提取物或粉末化部分，大豆粉，动物加工副产品，血粉，骨粉和鱼副产品混合。
本发明的农用活化剂可以应用于水果，蔬菜，叶类蔬菜，根类蔬菜，谷物和花及球茎。实际上，可以建议下列用法：种植前或植物生长期间将制剂喷雾或灌溉于土壤中；植物扦插，分裂或补种期间覆盖或分散在植物上；种植期间覆盖或分散在种子或球茎上；覆盖或分散在萎蔫的花和灌木上；分散在水生植物上；覆盖或分散在已感染细菌或病毒的植物上；覆盖或分散在收割后的切花上；覆盖或分散在收割后的作物和花上。
在一个例示性实施方案中，本发明的组合物包括以按重量计约0.01％至100％，优选0.01％至95％的量存在的一种或多种海巴戟加工品(例如，海巴戟果汁或果汁或酱汁)。下文中提供了制剂的几个实施方案。然而，这些实施方案仅仅是例示性的，因为本领域技术人员将认识到包括海巴戟加工品的其它制剂或组合物。
海巴戟加工品包括至少一种活性成分，例如槲皮素(Quercetin)和芦丁及其它对真菌活性产生抑制作用的成分。
海巴戟加工品内的活性成分可以用不同醇或醇基溶液，例如甲醇，乙醇和乙酸乙酯及其它基于醇的衍生物，通过本领域公知的程序和方法提取出来。活性成分槲皮素和芦丁以按重量计占总制剂或组合物的0.01-10％的量存在。如果需要，这些数量可以浓缩成其中其以10-100％的量存在的效力更强的浓缩物。
在一个例示性实施方案中，方法包括步骤：(a)配制含有一部分以按重量计约0.01％至95％的量存在的海巴戟加工品的组合物，其中组合物还包括载体，例如水或纯化水，并且还可以含有其它天然或人工成分，包括所选肥料；(b)将组合物施予土壤或植物，以允许海巴戟加工品掺入或与植物接触；(c)根据需要经常重复上述步骤，以提供抑制和/或预防真菌和其它微生物的活性或生长，同时增加作物产量所需要的有效量的海巴戟加工品。本领域技术人员将认识到，组合物的量和使用频率可以根据农业情形的变化而变化。
以下表格说明或表示了本发明期望的一些优选制剂或组合物。如声明的那样，这些仅希望作为例示性实施方案，而不应理解为任何方式的限制。
制剂1
成分 重量百分比
海巴戟酱汁或果汁 100％
制剂2
成分 重量百分比
海巴戟果汁 85-99.99％
水 0.01-15％
制剂3
成分 重量百分比
海巴戟果汁 0.01-15％
水 85-99.99％
制剂4
成分 重量百分比
海巴戟果汁 15-85％
水 15-85％
制剂5
成分 重量百分比
海巴戟果汁 20-90.8％
水 0.1-50％
肥料 0.1-30％
制剂6
成分 重量百分比
海巴戟果汁 0.1-30％
水 0.1-50％
肥料 20-90.8％
制剂7
成分 重量百分比
海巴戟果实，果皮，茎，种子和/或根的提取 100％
成分
制剂8
成分 重量百分比
海巴戟果实，果皮，茎，种子和/或根的提取 85-99.9％
成分
水 0.01-15％
制剂9
成分 重量百分比
海巴戟果实，果皮，茎，种子和/或根的提取0.01-15％
成分
水 85-99.9％
制剂10
成分 重量百分比
海巴戟果实，果皮，茎，种子和/或根的提取50-90.98％
成分
水 0.01-50％
肥料 0.01-30％
制剂11
成分 重量百分比
海巴戟果实，果皮，茎，种子和/或根的提取0.1-30％
成分
水 1-99.9％
肥料 1-99.9％
制剂12
成分 重量百分比
海巴戟油 0.1-30％
载体介质 70-99.9％
其它成分(例如，肥料) 1-95％
制剂13
成分 重量百分比
海巴戟产品 10-80％
载体介质 20-90％
制剂14
成分 重量百分比
海巴戟产品 5-80％
载体介质 20-95％
制剂15
成分 重量百分比
海巴戟油或油提取物 0.1-20％
载体介质 20-90％
制剂16
成分 重量百分比
海巴戟酱汁或果汁 0.1-80％
海巴戟油 0.1-20％
载体介质 20-90％
制剂17
成分 重量百分比
海巴戟酱汁浓缩物或果汁浓缩物 100％
制剂18
成分 重量百分比
海巴戟酱汁浓缩物或果汁浓缩物 85-99.9％
水 0.1-15％
制剂19
成分 重量百分比
海巴戟酱汁或果汁级份 100％
制剂20
成分 重量百分比
海巴戟果汁级份85-99.9％
水 0.1-15％
制剂21
成分 重量百分比
海巴戟果汁级份 85-99.9％
肥料 0.1-15％
制剂22
成分 重量百分比
海巴戟果汁流份 50-90％
水 0.1-50％
肥料 0.1-30％
制剂23
成分 重量百分比
海巴戟酱汁级分 85-99.9％
水 0.1-15％
制剂24
成分 重量百分比
海巴戟汁 0.1-80％
海巴戟的提取成分 0.1-20％
肥料 20-90％
在一个并不意味着任何方式的限制的实施例中，有益的海巴戟被Morinda，Incorporated of Orem，Utah加工成TAHITIAN
汁。
在例示性实施方案中，制剂包括如下成分：以按重量计约10-80％的量存在的海巴戟加工品；及以按重量计约20-90％的量存在的载体介质。
在该实施方案中，海巴戟加工品可以包括一种或多种海巴戟果汁加工品，海巴戟酱汁加工品，海巴戟浓缩果汁或浓缩酱汁加工品，海巴戟提取成分和/或海巴戟油提取物加工品。
在另一个例示性实施方案中，制剂包括成分：以按重量计约0.1-80％的量存在的海巴戟果汁或酱汁加工品；以按重量计约0.1-20％的量存在的海巴戟油加工品；及以按重量计约20-90％的量存在的载体介质。
上文确定的制剂中所确定的载体介质可以包括任何能导入植物组织内或组织上，并能为海巴戟加工品提供运载介质的成分。具体的载体介质制剂是本领域公知的，本文中不再详细进行描述。如声明的那样，载体介质的目的在于提供在能导入植物组织内或组织上的制剂中体现海巴戟加工品的方法。
3.抗微生物活性
以下实施例阐述和呈现了海巴戟加工品对真菌活性的预防和处理效应。不希望这些实施例以任何方式限制，而只是说明海巴戟产品的益处和优点以及补救效果。
实施例1
进行了研究以确定海巴戟的某些提取物对常见真菌和细菌的平均抑制浓度。在该研究中，采用了“自上而下”法尝试鉴定海巴戟的抗微生物活性。建立了可重现的分析法，初始研究表明，可以从海巴戟提取抗微生物组分。研究证实，当用金黄色葡萄球菌(S.aureus)，埃希大肠杆菌(E.coli)，白色念珠菌(C.albicans)，须癣毛癣菌(T.mentagrophytes)和黑曲霉(A.niger)进行测试时，海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物表现出抗微生物活性。
近年来，在发现新的抗微生物化合物的尝试中，已经考察了许多不同的来源。在本研究中，建立了平均抑制浓度(MIC)试验规程，然后用其测试海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物对黑曲霉(Aspergillus niger，ATCC 6275)；白色念珠菌(Candida albicans，ATCC 10231)；须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes，ATCC 9533)；金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus，ATCC 29213)；及埃希大肠杆菌(Escherichia coli，ATCC 25922)的抗真菌和抗微生物活性。
制备提取液，并在微升孔中重复测试两次。将6ul至200μl的提取液置于孔中，干燥。制备各有机体的0.5麦氏单位(McFarland)的溶液，用适宜的介质制成1/100悬浮液。将该有机体悬浮液加至各孔中，在适当的温度下孵育适当长的时间。然后检查平板的生长情况，确定MICs。所有重复试验的结果均在同一稀释度内统一。乙酸乙酯提取物的抗微生物活性最小，其仅在对须癣毛癣菌和金黄色葡萄球菌进行测试时显示出活性。乙醇提取物对所有供试有机体均显示出抗微生物活性。该活性对须癣毛癣菌测试时为低端脱离等级，对黑曲霉为高端在等级内的结果。甲醇提取物也对所有供试有机体均具有活性，并对须癣毛癣菌测试时为低端脱离等级，对黑曲霉为高端在等级内的结果。这些结果表明，至少有些海巴戟提取物具有抗微生物活性。本试验的更详细描述如下。
本试验中所用材料包括几种培养的微生物，即，金黄色葡萄球菌ATCC 29213，埃希大肠杆菌ATCC 25922，白色念珠菌ATCC 10231，须癣毛癣菌ATCC 9533和黑曲霉ATCC 6275。按照制造商的说明书制备初始培养物。测试之前，将金黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌接种于胰蛋白胨大豆琼脂平板上，并在37℃孵育18-24小时。白色念珠菌，须癣毛癣菌和黑曲霉接种于沙氏葡糖琼脂平板上，并在25℃孵育48-72小时。
对于微生物悬浮液，用微生物在盐水中制备0.5麦氏单位的悬浮液。向9.9ml胰蛋白胨大豆培养液中加入100μl细菌悬浮液，向9.9ml沙氏葡糖培养液中加入100μl真菌悬浮液。
对于盘的制备，本研究中使用了海巴戟的乙醇，甲醇和乙酸乙酯提取物。海巴戟果汁提取物由Morinda，Inc.提供。用各提取物制备一排微升孔。孔1和6接纳200μl提取物；孔2和7接纳100μl提取物；孔3和8接纳50μl提取物；孔4和9接纳25μl提取物；孔5和10接纳12.5μl提取物；以及孔6和12接纳6.3μl提取物。这导致每行含有双份提取物原料系列。将乙醇提取物置于标准微升盘的A-B排，甲醇提取物置于标准微升盘的C-D排，乙酸乙酯提取物置于标准微升盘的E-F排。G排接纳200μl 95％乙醇，H排什么也不接纳。然后将盘置于37℃孵育48小时，使其干燥。
用微生物在介质的1/100悬浮液将各微生物接种于不同盘中。每孔加入100μl。接种后，细菌分离株在37℃孵育24-48小时。真菌分离株在25℃孵育72小时。孵育后，分析各孔的生长情况。通过记录提取物抑制生长的最低浓度，确定最小抑制浓度(MIC)。结果报告为显示MIC的孔中提取物的微升数。G排和H排作为提取物对照和生长对照。
在建立本分析法的过程中必须解决几个难题。可能最困难的是完善以干燥化合物的方法，允许其在接种后复溶。抗微生物剂的发展史综述表明，早期实验中，青霉素提取物的干燥导致了活性全部丧失。这个问题通过采用低热，持续时间延长而得到了解决。
下列表格说明了所发现的活性。活性报告为能抑制生长的干燥提取物的最小体积。
表1-乙醇提取物的活性
| 大肠埃希杆菌 | 50μl |
| 金黄色葡萄球菌 | 12.5μl |
| 须癣毛癣菌 | ≤6.3-25μl |
| 黑曲霉 | 100-200μl |
| 白色念珠菌 | 100μl |
表2-甲醇提取物的活性
| 大肠埃希杆菌 | 25-50μl |
| 金黄色葡萄球菌 | ≤6.3μl |
| 须癣毛癣菌 | ≤6.3-12.5μl |
| 黑曲霉 | 200μl |
| 白色念珠菌 | 50-100μl |
表3-乙酸乙酯提取物的活性
| 大肠埃希杆菌 | 200-＞200μl |
| 金黄色葡萄球菌 | 50-200μl |
| 须癣毛癣菌 | 50-100μl |
| 黑曲霉 | ＞200μl |
| 白色念珠菌 | ＞200μl |
表4-用大肠埃希杆菌测试的提取物
| 乙醇 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 甲醇 | 25 | 50 | 25 | 25 |
| 乙酸乙酯 | ＞200 | ＞200 | 200 | ＞200 |
表5-用金黄色葡萄球菌测试的提取物
| 乙醇 | 12.5 | 12.5 | 12.5 | 12.5 |
| 甲醇 | ≤6.3 | ≤6.3 | ≤6.3 | ≤6.3 |
| 乙酸乙酯 | 50 | 50 | 200 | 200 |
表6-用须癣毛癣菌测试的提取物
| 乙醇 | ≤6.3 | 25 | ≤6.3 | 25 |
| 甲醇 | ≤6.3 | 12.5 | ≤6.3 | 12.5 |
| 乙酸乙酯 | 50 | 50 | 100 | 100 |
表7-用黑曲霉测试的提取物
| 乙醇 | 200 | 200 | 100 | 100 |
| 甲醇 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 乙酸乙酯 | ＞200 | ＞200 | ＞200 | ＞200 |
表8-用白色念珠菌测试的提取物
| 乙醇 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 甲醇 | 100 | 100 | 50 | 50 |
| 乙酸乙酯 | ＞200 | ＞200 | ＞200 | ＞200 |
试验结果显示，乙醇提取物的活性范围为≤6.3μl至200μl；甲醇提取物的活性范围为≤6.3μl至200μl；乙酸乙酯提取物的活性范围为50ul至200μl；并且乙醇和甲醇提取物对所有供试微生物最有效。
本研究尝试进行从原材料中分离抗微生物化合物的第一步。这种“自上而下”法使用海巴戟的粗提物。结果表明，乙醇和甲醇提取物对所有供试微生物均具有活性，这进一步表明了海巴戟的抗真菌活性。
根据抗微生物活性的论证，可以说，在海巴戟中至少存在着一种，并可能有多种与本文所示抗微生物活性相关的化合物。这样，其它测试和实验便变得有必要，以具体鉴别和分离这些化合物。最有可能的是，将来的研究将包括用标准分离技术纯化本文所讨论的提取物，这将包括明确这些提取物中存在的众多化合物中的某些化合物。一旦分离，均可以测试各自的抗微生物活性。
实施例2
本实验的目的在于确定所选海巴戟果汁提取物对三种常见病原性真菌和两种常见细菌的平均抑制浓度(MIC)。
所用有机体是黑曲霉(ATCC 6275)；白色念珠菌(ATCC 10231)；须癣毛癣菌(ATCC 9533)；金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)；和大肠埃希杆菌(ATCC 9533)。
对于海巴戟果汁提取物，用适当的溶剂制备乙醇，甲醇，乙酸乙酯和水提取物。
无菌培养基制品(1L)包括：对于真菌，为沙氏葡糖培养液(SDB)；对于细菌，为Mueller Hinton培养液(MHB)；在121℃高压灭菌20分钟。
有机体悬浮液的制备包括将各有机体涂板于适宜培养基上，孵育并确认同一性，制备0.5麦氏单位的各有机体的悬浮液，并向9.9ml适当的培养基(SDB或MHB)中加入0.1ml有机体。
为制备海巴戟汁提取物，采用适宜的介质，提取物干燥，然后稀释至2mg/ml的终浓度。然后提取物在-20℃的冷冻机内储存至准备真菌涂板时。用这些2mg/ml的终溶液作为海巴戟储备液。
13支试管按下表9中进行标记：
表9-试管标签
| 1/1 | 1/32 | 1/512 |
| 1/2 | 1/64 | 1/1024 |
| 1/4 | 1/128 | 生长对照 |
| 1/8 | 1/256 | 未接种对照 |
| 1/16 |
向管1/1和1/2中分别加入100μl海巴戟储备液。向管：1/2，1/4，1/8，1/16，1/32，1/64，1/128，1/256，1/512，1/1024，生长对照和未接种对照中各加入100μl无菌培养基。
将管1/2混匀，取出100μl加入管1/4中。继续对管1/8，1/16，1/32，1/64，1/128，1/256，1/512和1/1024进行这种2倍稀释程序。从管1/1024中弃去100μl。生长对照或未接种对照管中不加入稀释的海巴戟溶液。这些都是对照管。此时所有试管中都含有100μl。
由于我们知道我们是由2mg/ml(即，2000μg/ml)的提取物储备液开始的，因此连续2倍稀释产生了下表10中所示下列浓度的海巴戟果汁提取物。
表10-连续稀释
| 管号 | 稀释度 | 提取物浓度 |
| 1 | 1/1 | 2000μg/ml |
| 2 | 1/2 | 1000μg/ml |
| 3 | 1/4 | 500μg/ml |
| 4 | 1/8 | 250μg/ml |
| 5 | 1/16 | 125μg/ml |
| 6 | 1/32 | 62.50μg/ml |
| 7 | 1/64 | 31.25μg/ml |
| 8 | 1/128 | 15.13μg/ml |
| 9 | 1/256 | 7.56μg/ml |
| 10 | 1/512 | 3.78μg/ml |
| 11 | 1/1024 | 1.89μg/ml |
| 12 | 生长对照 | 无提取物 |
| 13 | 未接种对照 | 无有机体 |
接种时，向除未接种对照管(NC)外的所有试管中加入100μl有机体悬浮液。向NC中加入另外的100μl培养基。所有试管在适当的温度下孵育适当的时间，对于真菌，为25℃5-7天；对于细菌，为37℃24-48小时。
观察浊度，记录结果。混浊的存在表明了生长，而混浊的缺乏则表明了生长的抑制。对于任何提取物，仅当生长对照管中出现混浊(即，生长)，且未接种对照管未出现混浊(即，无生长)时，结果才有效。根据系列中无混浊出现的最后的试管(即，稀释度最大的试管)确定MIC。
下表11列出了平均抑制浓度(μg/ml)：
表11-平均抑制浓度
| EtOH | MeOH | EtAc | |
| 白色念珠菌 | 1000 | 250-1000 | ＞2000 |
| 黑曲霉 | 1000-2000 | 1000-2000 | ＞2000 |
| 须癣毛癣菌 | ≤7.56 | ≤7.56 | 250-1000 |
| 金黄色葡萄球菌 | 31.25-62.50 | 31.25-62.50 | 1000-2000 |
| 大肠埃希杆菌 | 250 | 62.50-250 | ＞2000 |
结果表明，海巴戟乙醇和甲醇提取物对所有供试微生物都具有有意义的活性。初步的干燥研究表明，使用乙醇和甲醇提取物的活性范围为5-10mg/ml。乙酸乙酯提取物含有的量小于在乙醇和甲醇提取物中发现的量的10％。
从该研究的初始阶段可以无疑地证实，海巴戟果汁或其提取物表现出大量的抗真菌活性。然而，各提取物均含有数百个化合物。实际上，在1000μl/ml时，可能有100个浓度各为10μl/ml的化合物。因此，由于供试提取物不是纯的抗微生物化合物，即使非常高的MIC也可能是有意义的。下文所述后来的试验提到了一些从海巴戟浓缩果汁中分级分离或提取出来的具体化合物。
实施例3
对于下列实验，抗细菌剂的最小抑制浓度(MIC)的定义为仍抑制供试微生物的生长的产品的最大稀释度。抗细菌剂的最小致死浓度(MLC)的定义为杀死供试有机体的产品最大稀释度。MIC/MLC值可以通常大量标准试验程序确定。最常用的方法是试管稀释法和琼脂稀释法。计划用试管稀释法测定本产品的MIC，平板涂布稀释液的等分试样，证明可能存在的生长抑制，确定MLC。系列稀释液由在细菌生长培养基中的产品制成。向产品稀释液中加入供试有机体，孵育并进行生长计数。所有试验重复进行3次。
该程序是抗微生物剂的标准分析法。该程序体现了美国微生物学会(American Society for Microbiology，ASM)推荐的方法学的内容和目的。试管稀释法使用供试产品在细菌生长培养基中的稀释液，接种预定浓度的供试有机体并在孵育后目测生长情况。试管稀释程序仅限于在期望的端点范围内不使生长培养基发生沉淀或混浊的产品。
对于培养物的制备程序，所使用的供试有机体是大肠埃希杆菌0157H7ATCC#43888；金黄色葡萄球菌ATCC#6538；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC#19659；猪霍乱沙门氏菌肠炎血清型(Salmonella choleraesuis serotype enteritidis)ATCC#13706；单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)ATCC#19111；白色念珠菌ATCC#10231；和变形链球菌(Streptococcus mutans)ATCC#25175。
对于储备液，将供试有机体转移至豆酪蛋白肉汤(soybean caseindigest broth，SCDB)中，细菌在37±2℃孵育24-48小时，酵母菌在20-25℃孵育。如果需要，通过目视比浊法用生理盐水溶液(PHSS)将悬浮液调整为约108集落形成单位(CFU)/mL，并进行标准平板计数，确定起始滴度。将酵母培养物平板涂布于沙氏葡糖琼脂(SDEX)上，并在20-25℃孵育2-4天，变形链球菌在37±2℃孵育3-5天，所有其它细菌都在37±2℃孵育18-24小时。
对于平均抑制浓度(MIC)的试验程序，为了本试验的目的，将供试产品调节至pH中性。在调节前和调节后记录pH。各供试产品用无菌水连续按1∶2稀释。所选择的稀释度应该显示MIC/MLC的端点。对于各有机体，各供试产品的评价重复进行3次。将产品稀释液加至等体积的2×SCDS中，以得到另外的1∶2稀释。通过无菌水与等体积2×SCDB混合，为各供试有机体制备阳性对照管。通过供试产品的最高稀释度的稀释液与等体积2×SCDB混合，制备3支阴性对照管。这些管中不加入供试有机体。通过无菌水与等体积2×SCDB混合，制备3支培养基对照管。这些试管中液也不加入供试有机体。
向样品和阳性对照管中加入约0.05mL各供试有机体的悬浮液。装有细菌的试管在37±2℃孵育18-24小时，装有酵母的试管在20-25℃孵育2-4天。孵育后，记录各管的生长情况，阴性为(0)和阳性为(+)。
对于平均致死浓度(MLC)试验程序，仅测试疑为无任何生长的试管。从各管中取出1.0mL等分的液体，用中和肉汤制备1/10系列稀释至1/1000。将各稀释液的等分试样平板接种于中和琼脂(NUAG)上。对于阳性对照，向NUAG上接种10-100CFU。阴性对照通过向NUAG上接种2×SCDB而制成。对于酵母，平板在20-25℃孵育2-4天，对于除变形链球菌外的所有细菌，平板在37±2℃孵育18-24小时。
关于中和验证(neutralization verification)，测试的最低稀释度的用来测试MLC的供试产品对各供试微生物的中和回收率(neutralizationrecovery)。取3份0.5mL的最浓供试产品涂布于NUAG上。将10-100CFU的各供试有机体刺加入平板。为了比较，也向3个不含供试产品的平板中刺入同样为10-100CFU的各供试有机体。
除变形链球菌外，所有有机体均受到了被中和的1∶2浓度的海巴戟浓缩物的抑制。未见能证明对任何有机体的致命性的供试稀释液。用变形链球菌测试时，既未证明被中和的海巴戟浓缩物的抑制作用，也未证明其致死性。
表12-18中概述了所有有机体的MIC结果。表19-25中概述了各有机体的MLC结果。由于变形链球菌在试验的MIC部分时没有任何被记录为无生长的稀释液，因此未对该有机体进行MLC测定。
所有供试有机体的中和回收率在40-97％之间。表25中概述了本研究中所用中和介质的中和回收率。
表12-对大肠埃希杆菌0157H7ATCC#43885的平均抑制浓度结果
滴度：7.0×108CFU/mL
接种体积：0.05mL
表13-对金黄色葡萄球菌ATCC#6538的平均抑制浓度结果
滴度：6.5×108CFU/mL
接种体积：0.05mL
表14-对枯草芽孢杆菌ATCC#19659的平均抑制浓度结果
滴度：8.5×107CFU/mL
接种体积：0.05mL
表15-对猪霍乱沙门氏菌肠炎血清型ATCC#13706的平均抑制浓度结果
滴度：4.8×108CFU/mL
接种体积：0.05mL
表16-对单核细胞增生性李斯特菌ATCC#19111的平均抑制浓度结果
滴度：3.9×108CFU/mL
接种体积：0.05mL
表17-对白色念珠菌ATCC#10231的平均抑制浓度结果
滴度：1.3×108CFU/mL
接种体积：0.05mL
表18-对变形链球菌ATCC#25175的平均抑制浓度结果
滴度：1.0×107CFU/mL
接种体积：0.05mL
表19-对大肠埃希杆菌0157H7ATCC#43588的平均致死浓度结果
平板接种体积：0.5mL
TNTC：数量过大，无法计数
表20-对金黄色葡萄球菌ATCC#6538的平均致死浓度结果
平板接种体积：0.5mL
TNTC：数量过大，无法计数
表21-对枯草芽孢杆菌ATCC#19659的平均致死浓度结果
平板接种体积：0.5mL
表22-对猪霍乱沙门氏菌肠炎血清型ATCC#13706的平均致死浓度结果
平板接种体积：0.5mL
TNTC：数量过大，无法计数
表23-对单核细胞增生性李斯特菌ATCC#19111的平均致死浓度结果
平板接种体积：0.5mL
TNTC：数量过大，无法计数
表24．对白色念珠菌ATCC#10231的平均致死浓度结果
注意：
平板接种体积：0.5 mL
TNTC：数量过大，无法计数
表25-中和
实施例4
进行实验以鉴别几种海巴戟产品中存在的一或多种具体化合物或级分，其被引入机体后在其中产生抗真菌活性。
将海巴戟果汁分级分离，得到各自具有特定浓度的海巴戟正己烷级分，海巴戟CL2CL2级分，海巴戟ETOAc级分和海巴戟BuOH级分。用黑曲霉(ATCC 6275)；白色念珠菌(ATCC 10231)；金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)和大肠埃希杆菌(ATCC 9533)有机体对各级分进行研究，以确定其抗微生物活性。其它海巴戟产品也可以用本文所述类似方法进行分级分离。
在制备过程中，通过在微量滴定盘中制备一系列浓度，对各提取物进行测试。各系列的第1个孔接受200μl，第2个孔接受100μl，第3个孔接受50μl，第4个孔接受25μl，第5个孔接受12.5μl，第6个孔接受6.3μl。微量滴定盘在35-37℃孵育75小时。此时，所有提取物都已干燥。
对于有机体的制备，将ATCC分离菌平板接种于适当的培养基上并孵育。孵育以后，用盐水制备0.5麦氏单位的有机体的悬浮液。向9.9ml适当的培养基中加入100μl该悬浮液。将200μl有机体悬浮液加至系列的各孔中，用来使供试材料悬浮。将一个空的孔接种，作为生长对照，一个孔注入培养基，作为阴性对照。微量滴定盘在适当的温度下孵育适当的时间。(对于细菌样品，其为35±2℃24-48小时。对于真菌，其为20-25℃5-7天)。
观察生长对照孔的混浊的存在，并观察阴性对照的混浊的缺失。试验结果仅在生长对照孔中有生长，并且未接种孔中无生长时有效。之后，观察其它各孔的混浊的存在情况。记录结果。然后将微量滴定盘置于Multiskan读板仪上。记录550nm处的吸光度。
最小抑制浓度(MIC)是系列中未混浊的最后的管。以下表格中列出了试验结果，其中活性报告为mg/ml。
表26-海巴戟浓缩果汁的活性
| 大肠埃希杆菌 | 25mg |
| 金黄色葡萄球菌 | 25mg |
| 黑曲霉 | ＞50mg |
| 白色念珠菌 | 50mg |
表27-海巴戟己烷级分的活性
| 大肠埃希杆菌 | 25mg |
| 金黄色葡萄球菌 | 25mg |
| 黑曲霉 | 25mg |
| 白色念珠菌 | 12.5mg |
表28-海巴戟ETOAc级分的活性
| 大肠埃希杆菌 | 6.3mg |
| 金黄色葡萄球菌 | 3.1mg |
| 黑曲霉 | 25mg |
| 白色念珠菌 | 12.5mg |
表29-海巴戟正丁醇级分的活性
| 大肠埃希杆菌 | ＞12.5mg |
| 金黄色葡萄球菌 | 25mg |
| 黑曲霉 | ＞50mg |
| 白色念珠菌 | ＞50mg |
海巴戟级分和提取物对被测试有机体表现出抑制和预防活性。
本研究中遇到了两个难题。第一个是使部分高浓度ETOAc级分或提取物成为溶液的问题。当研究它们时，结果观察到了沉淀。该沉淀不影响目视观察，但却干扰了吸光度的测量。第二个难题是正己烷级分或提取物对微量滴定板中的塑料具有腐蚀作用。这也导致了吸光度的问题，但不影响目视观察。此外，由于所供给化合物的缺乏，第4个微量滴定盘没有足够的正丁醇制备所有的浓度。结果将大肠埃希杆菌的结果报高为＞12.5mg/ml。
实施例5
进行了实验以验证海巴戟产品可以抑制真菌生长，并验证海巴戟产品可以用作收割后的喷雾剂。在一组定性实验中，海巴戟加工品被喷雾至草莓植物上。经海巴戟喷雾的草莓保持新鲜的时间比对照组长。此外，经海巴戟喷雾的草莓的产量大于对照的产量。经海巴戟喷雾的草莓比对照甜(白利度高)。植物具有被称为细胞内病理(IP)的免疫样系统。IP为允许健康植物抵抗病原体提供基础。本发明构思海巴戟加工品中存在的化学成分激活IP通路的可能性。
实施例6
在另一个实验中，收获的草莓用海巴戟产品喷雾。共处理4组草莓。组1至组3用海巴戟加工品的系列稀释液喷雾(组1未稀释，组2稀释1∶200倍，组3稀释1∶1000倍)。组4用已稀释1∶500倍的苯菌灵(Benlate)喷雾。苯菌灵是由日本农业部批准的人工杀虫剂。观察草莓4天。定性分析表明，经海巴戟加工品喷雾防止了草莓上的霉菌感染。
实施例7
在另一个实验中，其种植的草莓患有由单囊壳属菌(Sphaerothecaspp)导致的白粉病的农民将海巴戟加工品(用水稀释1∶400倍)喷雾在草莓上。真菌感染减少。草莓变得比平常更厚更甜。本发明构思了海巴戟加工品直接杀死细菌和真菌和/或增强植物的免疫系统的可能性。另外，本发明还构思，增强的植物免疫系统受到了该应用的影响，其受影响的程度是在海巴戟加工品的应用提供营养素并平衡土壤正常菌群。
实施例8
在另一个实验中，在温室中安排4位种植器。每位种植器各种植10株草莓幼苗(Fragaria ananassa：Tochiotome变种)。左上方的种植者用海巴戟加工品喷雾(组1)。右上方的种植器为对照组(组2)。左下方的种植器为对照组(组3)。右下方的种植器用海巴戟加工品喷雾(组4)。6个月内，仅给植物浇水，而不进行海巴戟加工品或真菌喷雾。各种植器每4天浇水500ml。一旦花可见，便将其除去。
6个月的浇水期过后的1个月内，除了上文规定的浇水方案外，将植物用真菌喷雾。草莓叶用真菌Sphaerotheca humuli burrill感染。将真菌捣碎，用450ml蒸馏水稀释，向所有组中喷雾100ml水。真菌喷雾每4天进行一次。
从实验的第9个月内开始，将1ml海巴戟汁加工品用199ml蒸馏水稀释，所得溶液喷雾在组1和组4上。将200ml不含海巴戟加工品的蒸馏水喷雾至各对照组(组2和3)上。加工的海巴戟喷雾剂每4天喷雾一次。该实验仍在进行当中，但期望与上文所述结果类似。
实施例9
在于草莓温室内进行的实验中使用了海巴戟汁。温室中有6个长30m的沟槽，每个沟槽种有80株Tochiotome品种的草莓植物。将各沟槽分成两等分，一侧散布稀释的海巴戟汁，而另一侧则散布等量的水，作为对照。
海巴戟汁用水稀释，每次在草莓植物上每平方米散布3L的溶液。散布从草莓果实形成前的12天开始，每2天一次，共散布5次。在前3次的散布中，海巴戟汁用水按质量计稀释200倍，后两次散布则按质量计稀释300倍。收获草莓后，考察对照组和海巴戟汁散布组的产量，糖含量和新鲜度的保持力。
仅取经过测量从花萼到果实尖端长于3.0cm的草莓，用秤测定收获物的重量。对照组的产量为600g(38颗草莓)，而海巴戟汁散布组的产量为1400g(96颗草莓)。通过对比可以得出结论，海巴戟汁的覆盖和散布加速了草莓的生长，从而更快地达到了3cm的收割标准。此外，实验期间在一些植物上发现了白粉病，但海巴戟的散布阻止了疾病的扩散。
用Kyoto Denshi Kogyo KK生产的数字糖度计(测量精度为土0.2BRIX)测量糖含量。除去花萼后，将10颗草莓置于混合器中，充分搅拌。所得草莓汁倒入糖度计中，总共测量5次，取平均值。海巴戟散布组的糖含量平均值为8.0Brix，而对照组的则为7.1Brix。从实验中我们发现，海巴戟汁的散布使草莓的糖含量增加了13％。
接着，为了考察收获后新鲜度的保持力，将收获的草莓保留在冰箱中并观察10天。结果发现，收割后的10天里，对照组的某些果实发生腐烂，有白霉，而海巴戟组的草莓则未见霉菌，并且表面紧致。从这一点可以得出结论，海巴戟汁在植物上的散布延长了草莓的保鲜期，并且防止了霉菌的生长。
本发明可以在不偏离其精神或关键特征的条件下以其它具体形式体现。所述实施方案应在所有方面理解为仅仅说明性而非限制性的。因此，本发明的范围由所附权利要求书而不是前面的说明书指出。所有在本权利要求的等同体的意图和范围内的变化，都包括在其范围中。
实施例10
根据本发明加工的海巴戟产品已被用来促进草坪的护理。海巴戟加工品在不同情况下施用于草坪。海巴戟加工品的应用缓解了草坪的真菌感染。真菌感染具有导致草坪变成棕色的表型。此外，海巴戟的应用防止了其被施用的草坪的真菌感染的再次复发。
Claims (39)
1.抑制植物上的真菌和微生物生长的制剂，包括：
至少一种以按重量计约0.01％至99.9％的量存在的海巴戟加工品。
2.权利要求1的制剂，其中所述制剂包括选自海巴戟(Morindacitrifolia)的果实，茎，种子，果皮，根皮，叶和根的提取物或提取物的混合物。
3.权利要求2的制剂，其中选自海巴戟的果实，茎，种子，果皮，根皮，叶和根的提取物或提取物的混合物用水稀释1-10,000倍(以重量计)。
4.权利要求1的制剂，其中所述制剂用适宜的载体材料被制成液体剂，颗粒剂，粉末剂或糊剂。
5.权利要求1的制剂，其中制剂溶解或分散在水中。
6.权利要求5的制剂，其中海巴戟产品用水按重量稀释1-10,000倍。
7.权利要求1的制剂，其中制剂进一步包括至少一种肥料组分。
8.权利要求1的制剂，其中所述肥料组分选自硫酸铵，尿素，氯化钾，氯化氮和氯化铵，鸡粪，牛粪，鸟粪，蠕虫粪，昆虫粪，锯屑，米糠，大蒜油，鱼油，蛭石，蒙脱石，活性炭，木炭，硅藻土，滑石，苜蓿粉和颗粒，氮，磷，钾，甜菜的干燥碎片，玉米蛋白，棉籽粉，几种大型海藻或藻的提取物或粉末化部分，大豆粉，动物加工副产品，血粉，骨粉，堆肥或鱼副产品。
9.权利要求1的制剂，其中所述加工制剂进一步包括槲皮素。
10.权利要求9的制剂，进一步包括作为附加活性成分的芦丁，其与所述槲皮素协同作用，抑制所述真菌和微生物的生长。
11.权利要求10的方法，其中所述芦丁以按重量计约0.1％至10％的量存在。
12.抑制植物上的真菌和微生物生长的制剂，所述制剂包括以重量计约0.01％至10％的海巴戟正己烷级分。
13.权利要求12的制剂，其中所述海巴戟级分包括海巴戟CL2CL2级分。
14.权利要求12的制剂，其中所述海巴戟级分包括海巴戟ETOAc级分。
15.权利要求12的制剂，其中所述海巴戟级分包括海巴戟正丁醇级分。
16.权利要求12的制剂，其中所述制剂包括选自海巴戟的果实，茎，种子，果皮，根皮，叶和根的提取物或提取物的混合物。
17.权利要求12中的制剂，其中的制剂在使用前或使用中按重量稀释1-10,000倍。
18.权利要求12的制剂，其中所述制剂用适宜的载体材料被制成液体剂，颗粒剂，粉末剂或糊剂。
19.权利要求12的制剂，其中制剂溶解或分散在水中。
20.权利要求12的制剂，其中的制剂进一步包括至少一种肥料组分。
21.权利要求20的制剂，其中所述肥料组分选自硫酸铵，尿素，氯化钾，氯化氮和氯化铵，鸡粪，牛粪，鸟粪，蠕虫粪，昆虫粪，锯屑，米糠，大蒜油，鱼油，蛭石，蒙脱石，活性炭，木炭，硅藻土，滑石，苜蓿粉和颗粒，氮，磷，钾，甜菜的干燥碎片，玉米蛋白，棉籽粉，几种大型海藻或藻的提取物或粉末化部分，大豆粉，动物加工副产品，血粉，骨粉，堆肥或鱼副产品。
22.权利要求21的制剂，其中所述加工制剂进一步包括槲皮素。
23.权利要求23的制剂，进一步包括作为附加活性成分的芦丁，其与所述槲皮素协同作用，抑制所述真菌和微生物的生长。
24.权利要求23的方法，其中所述芦丁以按重量计约0.1％至10％的量存在。
25.抑制植物上的真菌和微生物活性的方法，所述方法包括以下步骤：
将所述植物接触制剂，所述制剂包括：
以按重量计约0.01％至99.9％的量存在的海巴戟加工品。
26.权利要求25的方法，其中所述植物反复接触制剂，直至所有有害真菌和微生物及相关影响得到改善。
27.权利要求25中的方法，其中所述制剂进一步包括至少一种活性成分。
28.权利要求27的方法，其中的活性成分选自槲皮素，芦丁，正己烷提取物，CL2CL2提取物，ETOAc提取物和正丁醇提取物。
29.权利要求25的方法，其中该方法进一步包括将选自水果，蔬菜，叶类蔬菜，根类蔬菜，谷物，花和球茎的植物材料接触制剂的步骤。
30.权利要求25的方法，进一步包括通过下列方法中的至少一种将植物接触制剂的步骤：种植前将制剂喷雾或灌溉于土壤中；植物生长期间将制剂喷雾或灌溉于土壤中；植物扦插，分裂或补种期间覆盖植物；种植期间覆盖种子或球茎；覆盖萎蔫的花和灌木；分散在水生植物上；覆盖已感染细菌或病毒的植物；覆盖收获后的切花；或覆盖收获后的作物和花。
31.权利要求25的制剂，其中所述制剂包括选自海巴戟的果实，茎，种子，果皮，根皮，叶和根的提取物或提取物的混合物。
32.权利要求31的制剂，其中选自海巴戟的果实，茎，种子，果皮，根皮，叶和根的提取物或提取物的混合物用水稀释1-10,000倍(以重量计)。
33.权利要求25的制剂，其中所述制剂用适宜的载体材料被制成液体剂，颗粒剂，粉末剂或糊剂。
34.权利要求25的制剂，其中的制剂溶解或分散在水中。
35.权利要求25的制剂，其中海巴戟产品用水按重量计稀释1-10,000倍。
36.权利要求25的制剂，其中的制剂进一步包括至少一种肥料组分。
37.权利要求36的制剂，其中所述肥料组分选自硫酸铵，尿素，氯化钾，氯化氮和氯化铵，鸡粪，牛粪，鸟粪，蠕虫粪，昆虫粪，锯屑，米糠，大蒜油，鱼油，蛭石，蒙脱石，活性炭，木炭，硅藻土，滑石，苜蓿粉和颗粒，氮，磷，钾，甜菜的干燥碎片，玉米蛋白，棉籽粉，几种大型海藻或藻的提取物或粉末化部分，大豆粉，动物加工副产品，血粉，骨粉，堆肥或鱼副产品。
38.抑制植物上的有害真菌和微生物的活性的方法，所述方法包括以下步骤：
先将所述植物接触包括至少一种以按重量计约0.01％至99.9％的量存在的海巴戟提取物的制剂；以及
定期重复将所述植物接触所述制剂的步骤。
39.权利要求38的方法，其中所述海巴戟加工品选自海巴戟果汁加工品，海巴戟酱汁加工品，海巴戟膳食纤维加工品，海巴戟油加工品，海巴戟浓缩果汁加工品，海巴戟浓缩酱汁加工品，海巴戟叶加工品，海巴戟根加工品，海巴戟根皮加工品，海巴戟茎加工品，海巴戟种子加工品和海巴戟油提取物加工品。
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| PB01 | Publication | ||
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| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20081126 |