CN105126087A - 皮肤创伤修复外用溶液制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种皮肤创伤修复外用溶液制剂,以透皮表皮生长因子和蛋清溶菌酶为原料,以甘油、海藻糖和羟丙基甲基纤维素为辅料制成。本发明还公开了上述外用溶液制剂的制备方法,包括如下步骤:准备上述原料和辅料;配制溶液基质;透皮EGF过滤除菌;溶菌酶溶解并过滤除菌;将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中,加去离子水,分装。采用上述方法获得的外用溶液制剂可广泛应用于皮肤外伤修复领域和护肤化妆品领域,且在皮肤修复动态过程中,皮肤愈合时间短,愈合效果好。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体地说,是关于一种皮肤创伤修复外用溶液制剂及其制备方法和应用。
背景技术
在日常生活中,皮肤创伤时常发生,皮肤愈合过程较慢,处理不当还会引发进一步感染,甚至引起更严重溃烂。常见的伤口包括皮肤烫伤、烧伤、挫伤、擦伤、以及外科手术、妇科手术、整形手术引起的皮肤创伤等。如何加快伤口愈合的同时又能避免瘢痕的形成,一直都是医学科研工作者试图解决的一大难题。
目前市面上用于创伤护理产品众多,其主要作用是防止伤口感染,利用皮肤自身的修复作用对伤口进行自我修复。还有一些商品化的产品通过添加促表皮细胞增殖的作用加速角质屏障的形成,如人表皮生长因子(EGF),是一种人体自有的广泛存在于皮肤细胞内的小分子蛋白,由53个氨基酸组成,能有效促进和调节表皮细胞的生长和增殖,对保护和疗养皮肤、黏膜具有十分独特的功效。EGF已被广泛应用于皮肤外伤修复领域,包括治疗烧伤、烫伤、手术伤、机械伤、微创以及皮肤其它病患如溃疡、疱疹、炎症、湿疹、过敏等;以及防止治疗上述皮肤外伤过程中疤痕形成。此外,EGF还被广泛应用于护肤化妆品领域,包括调节人体自我修复功能,深层解决皮肤问题,全面提高皮肤质量,实现延缓皮肤衰老、收缩毛孔、紧致皮肤、增进皮肤光洁度和弹性、祛皱、淡化色斑等功效。
然而当角质屏障快速形成之后,人表皮生长因子(EGF)天然的物理屏障则阻碍了蛋白类药物的皮肤渗透,药物无法继续作用于表层皮肤,使得皮肤无法完成正常修复。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种外用溶液制剂,能够加速皮肤创伤的修复与愈合。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
本发明的皮肤创伤修复外用溶液制剂以透皮EGF和蛋清溶菌酶为原料,以甘油、海藻糖、和羟丙基甲基纤维素为辅料制成。
根据本发明的优选实施例,所述外用溶液制剂的配方如下:
余量为水。
根据本发明,所述的溶液制剂的形式包括喷剂、乳剂、凝胶、软膏、硬膏和油剂。
本发明的第二个目的在于提供一种上述皮肤创伤修复外用溶液制剂的制备方法,该方法包括以下步骤:
A、将透皮EGF、甘油、海藻糖、羟丙基甲基纤维素、蛋清溶菌酶按上述配比准备好,备用;
B、配制溶液基质:
将步骤A中的羟丙基甲基纤维素、海藻糖、甘油加入容器中,加入去离子水,搅拌混匀,高温高压灭菌,取出,冷却,备用;
C、加入原料,在无菌条件下,将步骤A中的透皮EGF过滤除菌;
D、用去离子水溶解溶菌酶,并过滤除菌;
E、将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中,加去离子水,采用灭菌玻璃棒搅拌均匀,分装至灭菌的喷雾瓶中,15ml/瓶。
根据本发明,步骤B中的高温高压灭菌时间为20min。
根据本发明,步骤C和步骤D均采用0.22um针头过滤器过滤除菌。
本发明的第三个目的在于提供一种上述外用溶液制剂的用于皮肤创伤修复与愈合的应用。
本发明的皮肤创伤修复外用溶液制剂,其有益效果是:在皮肤修复动态过程中,其比常规EGF具有明显优势,愈合时间更短,同等剂量下治疗效果更佳。
附图说明
图1为药效学试验中正常组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图2为药效学试验中模型组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图3为药效学试验中阳性组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图4为药效学试验中透皮EGF(0.004%)组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图5为药效学试验中透皮EGF(0.008%)组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图6为药效学试验中透皮EGF(0.012%)组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图7为药效学试验中透皮EGF(0.016%)组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
图8为药效学试验中透皮EGF(0.02%)组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
本实施例中所述的透皮EGF为中国专利文献CN102247603B中公开的透皮EGF,是一种通过将蛋白类药物与透皮增强肽融合组成的融合蛋白。
实施例1-5皮肤创伤修复外用溶液制剂的制备
本实施例的皮肤创伤修复外用溶液制剂的配方如以下表1所示:
表1外用溶液制剂配方
按表1所示的配方,通过以下步骤制备外用溶液制剂:
A、将原料和辅料按表1的用量准备好,备用;
B、配制溶液基质:
将步骤A中的羟丙基甲基纤维素、海藻糖、甘油加入容器中,加入去离子水,搅拌混匀,高温高压灭菌,取出,冷却,备用;
C、加入原料,在无菌条件下,将步骤A中的透皮EGF过滤除菌;
D、用去离子水溶解溶菌酶,并过滤除菌;
E、将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中,加去离子水,采用灭菌玻璃棒搅拌,搅拌均匀,分装至灭菌的喷雾瓶中,15ml/瓶。
其中,步骤B中的高温高压灭菌时间为20min;步骤C和步骤D均采用0.22μm针头过滤器过滤除菌。
实施例6外用溶液制剂的药效学试验
本实施例中的外用溶液制剂均为喷剂,采用实施例1-5的配方制成。
1、动物种属及试验分组:
本实施例采用的动物种属为昆明种小鼠,体重18~22g,性别为雄性。取体重18~22g雄性小鼠80只,适应性饲养5天后,称重、编号,随机均分为8组,每组10只,即正常对照组(无创伤组)、模型对照组(创伤,无药物处理)、阳性药物组(烫伤治疗药物金因肽处理组)、本实施例1-5的受试药物组(外用溶液制剂组)。
2、实验方法
(1)烫伤建模的方法
于实验前1天背部脱毛2cm×2cm,次日除正常对照组(10只小鼠)外,取70只小鼠腹腔注射10%水合氯醛0.03ml/10g麻醉,将去毛的背部皮肤浸入90℃恒温水浴中持续6s,使之造成烫伤(浅Ⅱ°烫伤),烫伤面积为直径18mm。以1/5000呋喃西林清洁伤口,随后腹腔注射灭菌生理盐水1.5ml/只。造模后可见皮肤发红、水肿,将造模小鼠随机均分为7组(雌雄各半),分别为受试药物组、阳性对照组和模型对照组。其中,受试药物组为五组,分别喷实施例1-5所述的五个浓度的外用溶液制剂;模型对照组(生理盐水处理)为一组,行烫伤处理,但不接受药物治疗;阳性对照组为一组,经烫伤治疗药物金因肽处理。各组喷药后均以纱布、保鲜膜覆盖,胶布固定,每天保持烫伤部位与药物接触6h。6h后以生理盐水洗净药物,连续用药12天。
(2)检测指标
烫伤创面面积计算:于烫伤第1天、第4天及第8天以硫酸纸覆盖烫伤溃疡面沿创缘描记,剪下描绘的图形,再将图形描至小方格纸,测定小方格的格数表示烫伤创面面积。
烫伤皮肤病理组织学检查:末次用药后次日,小鼠处死,剪取烫伤部位皮肤,固定于10%甲醛溶液中,石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观察比较各组小鼠烫伤皮肤的愈合程度:"-"皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均正常;"+"皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的大量炎细胞侵润;"++"皮肤角质层、鳞状上皮层坏死,皮下组织的大量炎细胞侵润;"+++"皮肤角质层鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均坏死。
(3)统计方法
将试验数据用SPASS软件统计分析,结果以表示,并进行t检验,P<0.05有统计学意义。
(4)实验结果
1)外用溶液制剂对模型小鼠烫伤皮肤面积的影响
造模第1天,小鼠烫伤部位皮肤出现明显红斑及水肿,各组无明显差别,说明分组均匀。造模第4天、第8天,各用药组小鼠皮肤明显好转,烫伤面积显著缩小,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),且在0.004%、0.008%、0.016%、0.02%剂量间,呈现一定的量-效依赖关系;在同等用药体积下,受试药物组各组小鼠烫伤面积明显小于阳性组,与其比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),详见表2-1。
表2-1外用溶液制剂对小鼠烫伤皮肤面积的影响()
注:与模型组比较##P<0.01,受试药物与阳性组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01
2)外用溶液制剂对模型小鼠烫伤皮肤病理组织学的影响
正常组小鼠皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均正常;模型组小鼠皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺出现大面积坏死及炎细胞浸润现象;金因肽组小鼠皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织可见少量的炎细胞浸润及坏死情况,外用溶液制剂对小鼠皮肤修复较好,可见少量的炎细胞浸润,随着剂量的增加,治疗效果增强,详见表2-2及图1-6的皮肤组织病理学照片。其中,图1为模型组,其皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均正常;图2为正常组,其表面有渗出,表皮坏死、脱落,表皮下有大量炎细胞浸润;图3为阳性组,其表面有痂皮,痂皮下上皮细胞再生,表皮下少量炎细胞浸润;图4为透皮EGF(0.004%)组,其表面有痂皮,痂皮下上皮细胞再生,表皮下未见明显炎细胞浸润;图5为透皮EGF(0.008%)组,其痂皮下表皮再生,修复较好,表皮下少量炎细胞浸润;图6为透皮EGF(0.012%)组,其痂皮脱落、上皮再生修复,表皮下未见明显炎细胞浸润;图7为透皮EGF(0.016%)组,其皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺基本恢复正常;图8为透皮EGF(0.02%)组,其上皮细胞再生修复,基本恢复正常,未见炎细胞浸润。
表2-2外用溶液制剂对小鼠烫伤皮肤病理评分的影响(n=10)
注:与模型组比较##P<0.01,受试药物组与阳性组比较▲▲P<0.01
(5)实验结论:上述实验结果显示,本发明的外用溶液制剂对小鼠皮肤有修复作用,且治疗效果好。
三、安全性试验
实施例7本发明的外用溶液制剂的安全性试验
1、家兔皮肤刺激试验
(1)实验方法
1)动物的分组:取体重1.5~3.0kg白色家兔8只,雌雄各半,适应性饲养5天后,随机分成两组:即完整皮肤组和破损皮肤组。于给药前24小时将动物脊柱两侧各去毛(用硫化钠8%)6×5cm2,破损皮肤组用砂纸将去毛皮肤磨损,并做“井”形切口,以渗血为度,并且左右两侧皮肤的破损程度应基本一致。
2)给药方法:试验时于各家兔左侧去毛区喷实施例1-5的外用溶液制剂约1ml,右侧喷灭菌生理盐水1ml作为对照,每只动物分笼饲养,6小时后用温水清洗,并观察喷剂对皮肤是否有刺激性,每天2次,给药部位相同,连续给药3天,每只动物分笼饲养。
3)观察指标:于最后一次给药后24小时后,去除受试物,分别在1、24、48、72小时肉眼观察并记录涂抹部位有无红斑和水肿等情况,按照皮肤刺激性反应评分标准(见表3-1、3-2),记录各时的评分值(见表3-3),并分析获得外用溶液制剂用药后皮肤刺激反应结果)(表3-4)。另外,从用药中心取皮肤2×2cm2,用10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察各实验设置组家兔皮肤病理形态学变化情况(表3-5)。
表3-1皮肤刺激性反应评分标准
表3-2皮肤刺激性强度评价
(2)实验结果
1)肉眼观察:外用溶液制剂用药后,家兔破损皮肤和完整皮肤均没有出现明显红斑、水肿等皮肤刺激现象,动物也无全身反应,详见表3-3、3-4:
表3-3外用溶液制剂用药后皮肤刺激反应情况(n=4)
表3-4外用溶液制剂用药后皮肤刺激反应结果()
2)镜下观察:完整皮肤组家兔,用药侧及对照侧均未见任何异样反应。破损组皮肤家兔,对照侧皮肤镜下可见表皮缺失、轻度炎细胞浸润等现象;而用药侧皮肤表皮角质层、鳞状上皮层、基底层清晰可见,破损皮肤修复较好,未见炎细胞浸润等异样反应。说明本发明的外用溶液制剂对家兔皮肤不产生刺激,应用安全。结果见表3-5。
表3-5外用溶液制剂对家兔皮肤刺激性实验病理形态学结果
(3)实验结论:上述实验结果显示,本发明的外用溶液制剂对家兔正常皮肤和破损皮肤无刺激性,皮肤无红肿和炎性反应,应用安全。
2、豚鼠皮肤过敏试验
(1)实验方法
1)试验分组:取体重300~350g豚鼠30只,雌雄各半,随机分成受试药物组(外用溶液制剂)、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(1%2,4-二硝基氯苯),适应性饲养5天后,于给药前24小时将动物脊柱两侧去毛4×4cm2。
2)致敏试验:受试药物组取0.2ml实施例1-5的外用溶液制剂涂在背部去毛区,然后用两层纱布和一层玻璃纸覆盖,再用无刺激性胶布和绷带加以固定,每只动物分笼饲养,持续6小时,第7天和第14天,以同样方法各重复一次,共计三次。阴性对照组(0.2ml生理盐水)和阳性对照组(0.2ml1%2,4-二硝基氯苯)给药方法同上。
3)激发试验:于末次致敏后第14天进行激发:于受试药物组豚鼠肋腹部皮肤涂抹0.2ml外用溶液制剂,于阴性对照组豚鼠肋腹部皮肤涂抹0.2ml生理盐水,于阳性对照组豚鼠肋腹部皮肤涂抹0.2ml0.1%2、4二硝基氯苯,同前方法覆盖固定,6小时后去掉药物,即刻观察。
4)观察指标:于去掉药物后24、48、72小时再次观察皮肤过敏反应情况,有无红斑和水肿等情况,按照皮肤过敏反应评分标准进行评分(见表4-1、4-2),记录各时评分值,皮肤致敏发生率。
表4-1皮肤过敏反应评分标准
表4-2皮肤致敏性评分标准
*当过敏反应发生率为0时,可判为未见皮肤过敏反应。
(2)试验结果
激发反应后,阳性对照组各豚鼠皮肤发生强烈的过敏反应,其腹部脱毛区出现不同程度的红斑、水肿现象,并且一直持续至72h后;而外用溶液制剂组及生理盐水组各豚鼠腹部皮肤均未见红斑、水肿等任何异样反应,无过敏现象发生。结果见表4-3~4-5。
表4-3皮肤致敏试验结果(n=10)
表4-4对豚鼠过敏反应皮肤评分的影响()
表4-5对豚鼠皮肤过敏反应发生率的影响
(3)实验结论
上述实验结果显示:本发明的外用溶液制剂对皮肤无过敏反应,应用安全。
Claims (7)
1.一种皮肤创伤修复外用溶液制剂,其特征在于,所述外用溶液制剂以透皮表皮生长因子和蛋清溶菌酶为原料,以甘油、海藻糖和羟丙基甲基纤维素为辅料制成。
2.如权利要求1所述的外用溶液制剂,其特征在于,所述外用溶液制剂的配方如下:
3.如权利要求1所述的外用溶液制剂,其特征在于,所述外用溶液制剂的形式包括喷剂、乳剂、凝胶、软膏、硬膏、和油剂。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的外用溶液制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
A、将透皮EGF、甘油、海藻糖、羟丙基甲基纤维素、蛋清溶菌酶按权利要求2所述的配比准备好,备用;
B、配制溶液基质:
将步骤A中的羟丙基甲基纤维素、海藻糖、甘油加入容器中,加入去离子水,搅拌混匀,高温高压灭菌,取出,冷却,备用;
C、加入原料,在无菌条件下,将步骤A中的透皮EGF过滤除菌;
D、用去离子水溶解溶菌酶,并过滤除菌;
E、将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中,加去离子水,采用灭菌玻璃棒搅拌均匀,分装至灭菌的喷雾瓶中,15ml/瓶。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤B中的高温高压灭菌时间为20min。
6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤C和步骤D均采用0.22um针头过滤器过滤除菌。
7.权利要求1-3任一项所述的外用溶液制剂在皮肤创伤修复与愈合中的应用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151209 |
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |