CN105123513A - 一种铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基及制备方法，属于农业生物技术领域。厌氧发酵残留物含有丰富的氮、磷、钾、钙、铜、铁、镁、锰和锌等营养元素以及氨基酸类、水解酶类、B族维生素和激素等，以此配制的培养基非常适合于铁皮石斛的生长，可快速获得优质的铁皮石斛种苗，培养基配方简单、成本低、铁皮石斛种苗生长快，长势好，抗逆性好。不仅提高了沼肥的利用能力，还可以减少组培成本，从而促进铁皮石斛快繁育苗的推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基及制备方法，属于农业生物技术领域。
背景技术
铁皮石斛（DendrobiumcandidumWall.ExLindl.）又称黑节草，是兰科石斛属多年生附生草本植物，茎直立，圆柱形，不分枝；长茎着花时略弯垂，叶生于茎上部节上，二列，矩圆状披针形，花序生于无叶的茎上部节,其属国家2级保护的贵重濒危药材，历代医学经典均奉其为“药中之上品”，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。由于受特殊的生物学及生态学特性限制，其自然繁殖力极低、生长缓慢，不能满足日益增长的市场需求。
目前，很多学者分别从外植体、培养基的选择、激素和添加剂的选择与配比、培养条件的确定等方面对铁皮石斛原球茎诱导、增殖、分化及生根壮苗等做了很多的研究。铁皮石斛组培技术是解决铁皮石斛扩大化生产的有效手段，然而在工厂化育苗中培养基的配制需要大量的化学试剂、有机物、植物激素以及一些添加剂，因此，目前植物组培中还存在着培养基配制的高投入，以及组培苗的抗逆性差、移栽成活率低等问题。因此如何减少组培生产成本、增强组培苗的抗逆性、提高移栽成活率是铁皮石斛进行规模化育苗的关键。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述缺陷，本发明的目的在于针对铁皮石斛组培成本高、组培苗的抗逆性差、移栽成活率低等问题，提供一种铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物5～30%，MS基本培养基10～40%，1/2MS基本培养10～40%，蔗糖2～3%，香蕉5～10%，洋芋5～10%，琼脂粉0.35～0.5%，生长素1.5×10-5～1×10-4%，细胞分裂素2×10-5～2×10-4%，活性炭0.2～0.4%，余量为蒸馏水。
所述厌氧发酵残留物为正常发酵的厌氧发酵池中处于固液层之间絮状活性污泥，除去砂石等杂质。
所述MS基本培养基为已有技术的MS培养基。
所述洋芋和香蕉为正常成熟后采收的普通农产品。
所述蔗糖、琼脂粉和活性炭为普通市售产品。
所述生长素为萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）或吲哚丁酸（IBA）的一种或几种，均为普通市售产品。
所述细胞分裂素为6-苄氨基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）或噻苯隆（TDZ）的一种或几种，均为普通市售产品。
优选的，本发明所述培养基如果用于原球茎增殖培养或者壮苗和生根培养，不加MS基本培养基和洋芋。
优选的，本发明所述培养基用于球茎分化培养，不加不加入1/2MS基本培养、香蕉。
本发明的另一目的在于提供所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.4～6.0；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于原球茎增殖培养，具体包括以下步骤：将生长良好的原球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度22～28℃，光照强度1500～2000lx，日光照时间10小时，培养周期为35～45天；
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于球茎分化培养，具体包括以下步骤：将生长良好的球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度22～28℃，光照强度1500～2000lx，日光照时间10小时，培养45～60天，得到分化苗；
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于壮苗和生根培养，具体包括以下步骤：将生长良好的分化幼苗转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度22～28℃，光照强度1500～2000lx，日光照时间10小时，培养30～45天，得到生根苗，即可出瓶炼苗、移栽。
与现有技术相比，本发明具有下列优点和积极效果：
（1）本发明所用的厌氧发酵残留物含有丰富的氮、磷、钾、钙、铜、铁、镁、锰和锌等营养元素以及氨基酸类、水解酶类、B族维生素和激素，以此配制的培养基非常适合于铁皮石斛的生长，可快速获得优质的铁皮石斛种苗；
（2）本发明的培养基配方简单、成本低、铁皮石斛种苗快，长势好。
具体实施方式
下面结合具体实施对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。
实施例1
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物5%，MS基本培养基10%，1/2MS基本培养40%，蔗糖2%，香蕉5%，洋芋10%，琼脂粉0.35%，生长素1.5×10-5%，细胞分裂素2×10-5，活性炭0.2%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.4；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于原球茎增殖培养，具体包括以下步骤：将生长良好的原球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度24℃，光照强度1600lx，日光照时间10小时，培养周期为35天。
实施例2
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物15%，MS基本培养基15%，1/2MS基本培养30%，蔗糖2.2%，香蕉6%，洋芋6%，琼脂粉0.5%，生长素2×10-5，细胞分裂素2×10-4%，活性炭0.24%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.5；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于球茎分化培养，具体包括以下步骤：将生长良好的球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度24℃，光照强度1550lx，日光照时间10小时，培养48天，得到分化苗；
实施例3
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物10%，MS基本培养基20%，1/2MS基本培养35%，蔗糖2.4%，香蕉7%，洋芋8%，琼脂粉0.38%，生长素5×10-5，细胞分裂素6×10-5，活性炭0.28%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.6；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于壮苗和生根培养，具体包括以下步骤：将生长良好的分化幼苗转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度24℃，光照强度1700lx，日光照时间10小时，培养35天，得到生根苗，即可出瓶炼苗、移栽。
实施例4
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物25%，1/2MS基本培养25%，蔗糖2.8%，香蕉9%，琼脂粉0.45%，生长素8×10-5，细胞分裂素1×10-4%，活性炭0.35%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.7；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于原球茎增殖培养，具体包括以下步骤：将生长良好的原球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度26℃，光照强度1800lx，日光照时间10小时，培养周期为42天；
实施例5
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物20%，MS基本培养基40%，，蔗糖2.6%，，洋芋7%，琼脂粉0.4%，生长素5×10-5，细胞分裂素6×10-5，活性炭0.28%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.8；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于球茎分化培养，具体包括以下步骤：将生长良好的球茎转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度26℃，光照强度1900lx，日光照时间10小时，培养55天，得到分化苗；
实施例6
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物30%，1/2MS基本培养10%，蔗糖3%，香蕉10%，琼脂粉0.5%，生长素1×10-4%，细胞分裂素2×10-4%，活性炭0.4%，余量为蒸馏水。
本实施例所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.9；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
本发明所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基用于壮苗和生根培养，具体包括以下步骤：将生长良好的分化幼苗转接入厌氧发酵残留物培养基中，放置在培养室中，培养的环境条件为：温度28℃，光照强度82000lx，日光照时间10小时，培养45天，得到生根苗，即可出瓶炼苗、移栽。
Claims (6)
1.一种铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：厌氧发酵残留物5～30%，MS基本培养基10～40%，1/2MS基本培养10～40%，蔗糖2～3%，香蕉5～10%，洋芋5～10%，琼脂粉0.35～0.5%，生长素1.5×10-5～1×10-4%，细胞分裂素2×10-5～2×10-4%，活性炭0.2～0.4%，余量为蒸馏水。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，其特征在于：生长素为萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，其特征在于：所述细胞分裂素为6-苄氨基嘌呤、激动素、噻苯隆中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，其特征在于：所述培养基用于原球茎增殖培养或者壮苗和生根培养，不加MS基本培养基和洋芋。
5.根据权利要求1所述的铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基，其特征在于：所述培养基用于球茎分化培养，不加不加入1/2MS基本培养、香蕉。
6.权利要求1、4或5所述铁皮石斛厌氧发酵残留物培养基的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）取厌氧发酵残留物，除去砂石，备用；
（2）在MS和/或1/2MS基本培养基的母液中依次加入琼脂粉和蔗糖，搅拌均匀后再加入打碎成糊状的香蕉汁和/或洋芋汁，边搅拌边加入厌氧发酵残留物、细胞分裂素、生长素，补加蒸馏水至预定的配制体积，调节pH值为5.4～6.0；然后加入活性炭，搅匀后分装至培养瓶中，进行灭菌处理，得到厌氧发酵残留物培养基。
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