CN105660400A - 一种金线莲组培苗的壮苗增重方法 - Google Patents

一种金线莲组培苗的壮苗增重方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开的金线莲组培苗的壮苗增重方法，包括以下步骤：组培苗的准备，综合培养基的配制，组培苗的无菌接种，组培苗的培养；本发明操作简单，经过一次性诱导综合培养基接种组培苗，并根据金线莲野外生长特性，通过培养温度、光照强度、光照周期的控制培养组培苗，培养得到健壮老练的高品质金线莲组培苗。本发明通过一个综合培养基即可完成对组培苗的诱导、壮苗和生根过程，不需要进行反复的转接，可大幅降低人工成本投入。本发明方法配制的综合培养基以天然抑菌添加物为主，无有害化学成分添加，能够有效降低金线莲组培污染率。本发明方法可显著提高金线莲组培苗的粗壮度，经本发明方法培养得到的金线莲组培苗的平均单株鲜重为1.9克左右。

Description

一种金线莲组培苗的壮苗增重方法
技术领域
本发明属于植物生物工程技术领域，具体涉及一种金线莲组培苗的壮苗增重方法。
背景技术
金线莲为兰科花叶开唇兰属多年生草本植物，别名金线兰、金石松、金线入骨消等。在我国主要分布在福建、中国台湾、广东、广西、浙江、江西等地。金线莲具有养肝护肝、清热解毒、降三高、抗菌抗癌等功效，民间素有“药王”之称。由于其种子构造特殊、种子微小无胚乳，野外自然萌发率极低，加之自然生态环境的破坏和人为疯狂采挖，导致野生金线莲已濒临灭绝。随着生物技术的发展，目前金线莲组培育苗技术已取得一定突破，通过组织培养可以获得金线莲的组培苗，但是目前各生产厂家技术良莠不济，往往需要经过诱导、壮苗、生根等培养基频繁转接，导致成本居高不下，例如中国专利CN101715732A公开了一种通过组织培养生产中国台湾金线莲的方法，通过诱导培养基和大规模培养基进行培养，从工业生产角度看，该方法工序繁琐、成本偏高，不利于大面积产业化生产。并且，现有的金线莲组培育苗技术，因采用的培养基营养成份、培养过程中方法单一等问题，导致生产出的组培苗相对瘦弱、幼嫩，得到的组培苗的平均单株鲜重仅为1.2克左右，影响金线莲组培苗的品质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种操作简单、不需要进行反复转接的金线莲组培苗的壮苗增重方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种金线莲组培苗的壮苗增重方法，包括以下步骤：
（1）组培苗的准备：将以野生金线莲为外植体经脱毒后获得的继代次数在3-6次的无菌母苗作为组培苗；
（2）综合培养基的配制：以MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸0.6-1.2mg/L、活性炭0.5-0.7g/L、6-苄氨基腺嘌呤0.05-0.3mg/L、花宝一号0.5-1.0g/L、花宝三号0.2-0.6g/L、蛋白胨0.3-0.8g/L、去皮香蕉30-50g/L、去皮马铃薯40-60g/L、去皮大蒜10-20g/L、蔗糖25-35g/L和琼脂6.0-6.5g/L，得到综合培养基，并将该综合培养基的pH值调至5.5~6.2，之后将配制的综合培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为2.5-3.5cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌21-24min，冷却后备用；
（3）组培苗的无菌接种：在无菌条件下将步骤（1）中准备的组培苗去叶，切成每段含有1个茎节的茎段，每个组培瓶内接种18-22个茎段；
（4）组培苗的培养：组培苗无菌接种后，先将各个组培瓶于22-24℃下暗处理5-7天，然后在温度为23-24℃且每日光照强度800-1500Lux、光照时间11-12h的培养环境下培养28-32天，之后在温度为26-27℃且每日光照强度1800-3000Lux、光照时间12-13h的培养环境下培养58-62天，最后在温度为20-24℃且每日光照强度3000-5000Lux、光照时间10-11h的培养环境下培养48-52天，生根，即得到健壮的金线莲组培苗。
作为优选，步骤（2）中，将综合培养基的pH值调至5.5~5.8，以确保组培苗的正常生长。
MS基础培养基是目前使用最普遍的培养基，其组成包括大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、肌醇等等，可以自制或者选择市售产品。花宝一号、花宝三号和蛋白胨均可选择市售产品。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明金线莲组培苗的壮苗增重方法，操作简单，经过一次性诱导综合培养基接种组培苗，并根据金线莲野外生长特性，通过培养温度、光照强度、光照周期的控制培养组培苗，培养得到健壮老练的高品质金线莲组培苗。本发明通过一个综合培养基即可完成对组培苗的诱导、壮苗和生根过程，不需要进行反复的转接，可大幅降低人工成本投入。本发明方法配制的综合培养基以天然抑菌添加物为主，无有害化学成分添加，能够有效降低金线莲组培污染率。本发明方法可显著提高金线莲组培苗的粗壮度，经本发明方法培养得到的金线莲组培苗的平均单株鲜重为1.9克左右。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1的金线莲组培苗的壮苗增重方法，包括以下步骤：
（1）组培苗的准备：将以野生金线莲为外植体经脱毒后获得的继代次数在3次的无菌母苗作为组培苗；
（2）综合培养基的配制：以MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸(NAA)0.6mg/L、活性炭0.6g/L、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.05mg/L、花宝一号0.7g/L、花宝三号0.3g/L、蛋白胨0.4g/L、去皮香蕉35g/L、去皮马铃薯40g/L、去皮大蒜12g/L、蔗糖28g/L和琼脂6.0g/L，得到综合培养基，并将该综合培养基的pH值调至5.5，之后将配制的综合培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为2.5cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌21min，冷却后备用；
（3）组培苗的无菌接种：在无菌条件下将步骤（1）中准备的组培苗去叶，切成每段含有1个茎节的茎段，每个组培瓶内接种18个茎段；
（4）组培苗的培养：组培苗无菌接种后，先将各个组培瓶于22-24℃下暗处理5天，然后在温度为23-24℃且每日光照强度800-1100Lux、光照时间11h的培养环境下培养30天，之后在温度为26-27℃且每日光照强度1800-2200Lux、光照时间12h的培养环境下培养60天，最后在温度为20-24℃且每日光照强度3000-3800Lux、光照时间10h的培养环境下培养50天，生根，即得到健壮的金线莲组培苗，组培污染率为0.35%，得到的金线莲组培苗的平均单株鲜重为1.83克。
实施例2的金线莲组培苗的壮苗增重方法，包括以下步骤：
（1）组培苗的准备：将以野生金线莲为外植体经脱毒后获得的继代次数在5次的无菌母苗作为组培苗；
（2）综合培养基的配制：以MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸(NAA)0.8mg/L、活性炭0.7g/L、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.1mg/L、花宝一号0.8g/L、花宝三号0.35g/L、蛋白胨0.5g/L、去皮香蕉40g/L、去皮马铃薯50g/L、去皮大蒜15g/L、蔗糖30g/L和琼脂6.3g/L，得到综合培养基，并将该综合培养基的pH值调至5.8，之后将配制的综合培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为3.0cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌22.5min，冷却后备用；
（3）组培苗的无菌接种：在无菌条件下将步骤（1）中准备的组培苗去叶，切成每段含有1个茎节的茎段，每个组培瓶内接种20个茎段；
（4）组培苗的培养：组培苗的培养：组培苗无菌接种后，先将各个组培瓶于22-24℃下暗处理6天，然后在温度为23-24℃且每日光照强度1100-1300Lux、光照时间11.5h的培养环境下培养28天，之后在温度为26-27℃且每日光照强度2200-2500Lux、光照时间12.5h的培养环境下培养61天，最后在温度为20-24℃且每日光照强度3800-4200Lux、光照时间11h的培养环境下培养52天，生根，即得到健壮的金线莲组培苗，组培污染率为0.30%，得到的金线莲组培苗的平均单株鲜重为1.92克。
实施例3的金线莲组培苗的壮苗增重方法，包括以下步骤：
（1）组培苗的准备：将以野生金线莲为外植体经脱毒后获得的继代次数在6次的无菌母苗作为组培苗；
（2）综合培养基的配制：以MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸(NAA)0.7mg/L、活性炭0.7g/L、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.2mg/L、花宝一号1.0g/L、花宝三号0.45g/L、蛋白胨0.7g/L、去皮香蕉45g/L、去皮马铃薯60g/L、去皮大蒜18g/L、蔗糖32g/L和琼脂6.5g/L，得到综合培养基，并将该综合培养基的pH值调至5.8，之后将配制的综合培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为3.5cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌24min，冷却后备用；
（3）组培苗的无菌接种：在无菌条件下将步骤（1）中准备的组培苗去叶，切成每段含有1个茎节的茎段，每个组培瓶内接种22个茎段；
（4）组培苗的培养：组培苗无菌接种后，先将各个组培瓶于22-24℃下暗处理7天，然后在温度为23-24℃且每日光照强度1300-1500Lux、光照时间12h的培养环境下培养31天，之后在温度为26-27℃且每日光照强度2500-3000Lux、光照时间12h的培养环境下培养62天，最后在温度为20-24℃且每日光照强度4200-5000Lux、光照时间11h的培养环境下培养49天，生根，即得到健壮的金线莲组培苗，组培污染率为0.29%，得到的金线莲组培苗的平均单株鲜重为1.94克。

Claims (2)

1.一种金线莲组培苗的壮苗增重方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）组培苗的准备：将以野生金线莲为外植体经脱毒后获得的继代次数在3-6次的无菌母苗作为组培苗；
（2）综合培养基的配制：以MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸0.6-1.2mg/L、活性炭0.5-0.7g/L、6-苄氨基腺嘌呤0.05-0.3mg/L、花宝一号0.5-1.0g/L、花宝三号0.2-0.6g/L、蛋白胨0.3-0.8g/L、去皮香蕉30-50g/L、去皮马铃薯40-60g/L、去皮大蒜10-20g/L、蔗糖25-35g/L和琼脂6.0-6.5g/L，得到综合培养基，并将该综合培养基的pH值调至5.5~6.2，之后将配制的综合培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为2.5-3.5cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌21-24min，冷却后备用；
（3）组培苗的无菌接种：在无菌条件下将步骤（1）中准备的组培苗去叶，切成每段含有1个茎节的茎段，每个组培瓶内接种18-22个茎段；
（4）组培苗的培养：组培苗无菌接种后，先将各个组培瓶于22-24℃下暗处理5-7天，然后在温度为23-24℃且每日光照强度800-1500Lux、光照时间11-12h的培养环境下培养28-32天，之后在温度为26-27℃且每日光照强度1800-3000Lux、光照时间12-13h的培养环境下培养58-62天，最后在温度为20-24℃且每日光照强度3000-5000Lux、光照时间10-11h的培养环境下培养48-52天，生根，即得到健壮的金线莲组培苗。
2.根据权利要求1所述的一种金线莲组培苗的壮苗增重方法，其特征在于步骤（2）中，将综合培养基的pH值调至5.5~5.8。
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