CN105121445A - 作为连接蛋白相关激酶1(AAK1)抑制剂的5H-色烯并[3,4-c]吡啶 - Google Patents

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Abstract

本发明内容大体涉及可抑制AAK1(连接蛋白相关激酶1)的化合物，包含上述化合物的组合物和抑制AAK1的方法。

Description

作为连接蛋白相关激酶1(AAK1)抑制剂的5H-色烯并[3,4-c]吡啶
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年2月22日提交的美国临时专利申请61/768051的权益，将其通过引用的方式全部并入本发明。
技术领域
本发明大体涉及可抑制连接蛋白相关激酶1(adaptorassociatedkinase1,AAK1)的化合物、包含上述化合物的组合物和抑制AAK1的方法。
背景技术
连接蛋白相关激酶1(AAK1)为丝氨酸/苏氨酸激酶的Ark1/Prk1家族的成员。AAK1mRNA以被称为短形式和长形式的两种剪切形式存在。长形式占主导且在脑和心脏中高度表达(HendersonandConner,Mol.Biol.Cell.2007,18,2698-2706)。AAK1富集在突触体制备物(synaptosomalpreparation)中且在培养的细胞中与细胞内吞结构共定位。AAK1调节网格蛋白(clatherin)包覆的细胞内吞作用，其为突触小泡循环利用和受体介导的细胞内吞中重要的过程。AAK1与AP2复合物结合，该复合物为使受体运载物(cargo)与网格蛋白包覆物连接的异源四聚体。网格蛋白与AAK1的结合刺激AAK1激酶活性(Conneret.al.,Traffic2003,4,885-890；Jacksonet.al.,J.Cell.Biol.2003,163,231-236)。AAK1磷酸化AP-2的mu-2亚基，其促进mu-2与运载物受体上含酪氨酸的分选模序(sortingmotif)结合(Ricottaet.al.,J.CellBio.2002,156,791-795；ConnerandSchmid,J.CellBio.2002,156,921-929)。Mu2磷酸化对于受体摄入不是必需的，但磷酸化提高了内化的效率(Motelyet.al.,Mol.Biol.Cell.2006,17,5298-5308)。
AAK1已被鉴定为PC12细胞中神经调节蛋白-1/ErbB4信号传导的抑制剂。经由RNA干扰介导的基因沉默或用激酶抑制剂K252a(其抑制AAK1激酶活性)处理使AAK1表达丧失导致神经调节蛋白-1诱导的神经突过度增生(outgrowth)的增强。这些处理导致ErbB4表达增加和ErbB4在质膜中或在质膜附近累积增加(Kuaiet.al.,ChemistryandBiology2011,18,891-906)。NRG1和ErbB4为推定的(putative)精神分裂症敏感基因(susceptibilitygene)(Buonanno,BrainRes.Bull.2010,83,122-131)。两种基因中的SNP与多种精神分裂症内表型有关(Greenwoodet.al.,Am.J.Psychiatry2011,168,930-946)。神经调节蛋白1和ErbB4KO小鼠模型已显示精神分裂症相关的形态变化和行为表型(Jaaro-Peledet.al.,SchizophreniaBulletin2010,36,301-313；Wenet.al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2010,107,1211-1216)。此外，AAK1基因的内含子中单核苷酸多态性(polymorphism)与帕金森病的发作年龄有关(Latourelleet.al.,BMCMed.Genet.2009,10,98)。这些结果表明抑制AAK1活性可用于治疗精神分裂症(schizophrenia)、精神分裂症中的认知缺陷(cognitivedeficit)、帕金森病(Parkinson’sdisease)、神经病理性疼痛(neuropathicpain)、双相型精神障碍(bipolardisorder)和阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease)。
发明内容
在第一方面中，本发明提供了式(I)化合物或其药用盐
其中：
R1和R2独立地选自氢、C3-C6环烷基和C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素和羟基；或
R1和R2一起为氧代；
R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、氨基、任选地取代有C1-C3烷基或氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基、C1-C3烷基-Y和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、芳基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRxRy和C3-C8环烷基，其中所述环烷基进一步任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基和羟基；
R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、C3-C6环烷基氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基和羟基；
R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基和卤素；
Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的3-6元环；且
Y选自
其中R6选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和C1-C6烷基羰基；
n为0、1、2或3；
每个R7独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素和C1-C3卤代烷基；
每个R8独立地选自氢、C1-C3烷氧基和羟基；且
R9和R10各自为氢或一起形成氧代基团。
在第一方面的第一实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其药用盐，其中R9和R10一起形成氧代基团。在第一方面的第二实施方案中，R9和R10各自为氢且R5为氢。在第三实施方案中，R9和R10一起形成氧代基团，R5为氢，且R4选自氢和C1-C3烷基羰基氨基。在第四实施方案中，R9和R10一起形成氧代基团，R5为氢，且R4为氢。
在第一方面的第五实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其药用盐，R9和R10一起形成氧代基团，R1和R2独立地选自氢和C1-C3烷基，或者R1和R2一起为氧代。
在第一方面的第六实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其药用盐，其中R9和R10一起形成氧代基团，R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、任选地取代有氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、羟基和-NRxRy；其中Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的5元环。
在第一方面的第七实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其药用盐，其中：
R1和R2独立地选自氢和C1-C3烷基，或者R1和R2一起为氧代；
R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、任选地取代有氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、羟基和-NRxRy；其中Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的5元环；
R4选自氢和C1-C3烷基羰基氨基；
R5为氢；且
R9和R10一起形成氧代基团。
在第二方面中，本发明提供了组合物，其包含药用量的式(I)化合物或其药用盐，以及药用载体。
在第三方面中，本发明提供了抑制连接蛋白相关激酶1(AAK1)活性的方法，其包括使AAK1与式(I)化合物或其药用盐接触。
在第四方面中，本发明提供了治疗或处置由AAK1活性介导的疾病或病症的方法，所述方法包括对有此需要的患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐。在第四方面的第一实施方案中，所述疾病或病症选自阿尔茨海默病、双相型精神障碍、疼痛、帕金森病和精神分裂症。在第四方面的第二实施方案中，所述疼痛为神经病理性疼痛。在第四方面的第三实施方案中，所述神经病理性疼痛为纤维肌痛(fibromyalgia)或外周神经病变(peripheralneuropathy)。
在另一方面中，本发明提供了式(II)化合物或其药用盐
其中：
R1和R2独立地选自氢、C3-C6环烷基和C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素和羟基；或
R1和R2一起为氧代；
R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、氨基、任选地取代有C1-C3烷基或氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基、C1-C3烷基-Y和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、芳基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRxRy和C3-C8环烷基，其中所述环烷基进一步任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基和羟基；
R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、C3-C6环烷基氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基和羟基；
R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基和卤素；
Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的3-6元环；且
Y选自
其中R6选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和C1-C6烷基羰基；
n为0、1、2或3；
每个R7独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素和C1-C3卤代烷基；且
每个R8独立地选自氢、C1-C3烷氧基和羟基。
本发明的其它方面可包括本申请中所披露的实施方案的合适组合。
其它方面和实施方案可见于本申请所提供的描述中。
具体实施方式
本发明部分基于AAK1基因敲除小鼠对疼痛展现出高抗性的发现。该发现促成最终发现AAK1抑制剂、包含它们的组合物及其使用方法的研究。
在本申请中，本发明的描述应当理解为符合化学成键的规则和原理。在一些情况下，可移除氢原子以在任何给定位置上容纳取代基。
应当理解的是，本发明所涵盖的化合物为适当地稳定而用作药剂的化合物。
规定在分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义与其在该分子中的其它位置处的定义无关。例如，当n为2时，两个R6基团各自可相同或不同。
本说明书中所用的下列术语具有所表明的含义：
将本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献全部引入本申请作为参考。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。
除非上下文另有明确规定，本申请所用单数形式包括复数指代。
在一些情况下，在叙述基团之前示出任何特定基团中的碳原子数。例如，术语“C1-6烷基”表示含一个至六个碳原子的烷基。若存在这些指定，则其代替本申请中所含所有其它定义。
本申请所用的术语“烷氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的烷基。
本申请所用的术语“烷氧基烷基”是指取代有一个、两个或三个烷氧基的烷基。
本申请所用的术语“烷氧基烷基氨基”是指其中R为烷氧基烷基的-NHR。
本申请所用的术语“烷氧基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烷氧基。
本申请所用的术语“烷氧基羰基氨基”是指其中R为烷氧基羰基的-NHR。
本申请所用的术语“烷基”是指衍生自直链或支链饱和烃的基团。
本申请所用的术语“烷基氨基”是指其中R为烷基的-NHR。
本申请所用的术语“烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的烷基。
本申请所用的术语“烷基羰基氨基”是指其中R为烷基羰基的-NHR。
本申请所用的术语“炔基”是指含至少一个碳-碳三键的直链或支链基团。
本申请所用的术语“氨基”是指-NH2。
本申请所用的术语“氨基磺酰基”是指-SO2NH2。
本申请所用的术语“芳基”是指苯基或其中一个或两个环为苯基的双环稠合环系统。双环稠合环系统由与四元至六元芳族或非芳族碳环稠合的苯基构成。本发明的芳基可经由基团中任何可取代的碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。
本申请所用的术语“芳基烷基”是指取代有一个、两个或三个芳基的烷基。
本申请所用的术语“芳基氨基”是指其中R为芳基的-NHR。
本申请所用的术语“芳基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的芳基。
本申请所用的术语“芳基羰基氨基”是指其中R为芳基羰基的-NHR。
本申请所用的术语“羰基”是指-C(O)-。
本申请所用的术语“氰基”是指-CN。
本申请所用的术语“环烷基”是指具有0个杂原子的饱和单环烃环系统。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基和环己基。
本申请所用的术语“环烷基氨基”是指其中R为环烷基的-NHR。
本申请所用的术语“环烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的环烷基。
本申请所用的术语“环烷基羰基氨基”是指其中R为环烷基羰基的-NHR。
本申请所用的术语“环烷基氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的环烷基。
本申请所用的术语“二烷基氨基”是指其中每个R为烷基的-NR2。两个R基团可相同或不同。
本申请所用的术语“卤素”是指Br、Cl、F和/或I。
本申请所用的术语“卤代烷氧基”是指经由氧原子与母体分子部分连接的卤代烷基。
本申请所用的术语“卤代烷基”是指被一个、两个、三个或四个卤素原子所取代的烷基。
本申请所用的术语“卤代烷基氨基”是指其中R为卤代烷基的-NHR。
本申请所用的术语“卤代烷基羰基”是指经由羰基与母体分子部分连接的卤代烷基。
本申请所用的术语“卤代烷基羰基氨基”是指其中R为卤代烷基羰基的-NHR。
本申请所用的术语“羟基”是指-OH。
本发明化合物中可存在不对称中心。应当理解的是，本发明涵盖具有抑制AAK1的能力的所有立体化学异构形式或它们的混合物。化合物的个别立体异构体可由含手性中心的市售原料以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物然后分离(例如转化为非对映异构体的混合物然后分离或重结晶、使用色谱技术或在手性色谱柱上直接分离对映异构体)来制备。特定立体化学的起始化合物为市售的或可通过本领域已知的技术来制备并拆分。
本发明的某些化合物还可以可分离的不同稳定构型形式存在。归因于不对称单键的限制性旋转的扭转不对称性(例如由于位阻或环张力)可允许分离不同构象异构体。本发明包括这些化合物的每种构型异构体或它们的混合物。
术语“本发明化合物”和等效表述意欲涵盖式(I)化合物及其药用对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，若上下文允许，则提及中间体意欲涵盖它们的盐。
本发明意欲包括本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的那些原子。通过一般举例的方式且不加以限制，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。同位素标记的本发明化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述类似的方法，使用适合的同位素标记的试剂替代另外使用的未标记的试剂来制备。上述化合物可具有多种潜在的用途，例如在测定生物学活性中作为标准物和试剂。在稳定同位素的情况下，上述化合物可具有有利地改良生物学、药理学或药物动力学性质的潜能。
本发明化合物可以药用盐形式存在。本申请所用术语的“药用盐”表示可溶解或分散于水或油中的本发明化合物的盐或两性离子形式，其在合理的医学判断范围内适于与患者的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相符且对于其所期望的用途是有效的。所述盐可在最终分离和纯化化合物期间或分别通过使合适的氮原子与合适的酸反应来制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药用加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸。
碱加成盐可在最终分离和化合物纯化期间通过使羧基与合适的碱或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备，所述碱为例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐。药用盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝阳离子以及无毒的季铵阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺和N,N’-二苄基乙二胺。适用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
本发明的一个实施方案涵盖体外和体内抑制连接蛋白相关激酶1(AAK1)的方法，其包括使AAK1与式I化合物或其药用盐接触。
当治疗有效量的式(I)化合物以及它们的药用盐可以化学原料形式给药用于治疗时，可以药物组合物形式提供活性成分。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐和一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂。
除非另有说明，否则化合物的“治疗有效量”为在治疗或处置疾病或病状中足以提供治疗益处或延缓或最小化一种或多种与所述疾病或病状有关的症状的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗、减少或避免疾病或病状的症状或原因或增强另一种治疗剂的治疗功效的量。
本申请所用术语的“治疗有效量”是指在治疗或处置疾病或病状中足以提供治疗益处或延缓或最小化一种或多种与所述疾病或病状有关的症状的一种或多种化合物的量。化合物的“治疗有效量”意指单独或与其它疗法组合在治疗或处置所述疾病或病状中提供治疗益处的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗、减少或避免疾病或病状的症状或原因或增强另一种治疗剂的治疗功效的量。当应用于单独给药的个别活性成分时，所述术语仅指该成分。当应用于组合时，无论是组合、连续或同时给药，所述术语是指产生治疗效果的活性成分的组合量。式(I)化合物及其药用盐如上所述。在与制剂的其它成分相容且对其接受者无害的意义上讲，一种或多种载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了药物制剂的制备方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。本申请所用的术语“药用”是指所述化合物、物质、组合物和/或剂型在合理的医学判断范围内适于与患者的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相符且对于其所期望的用途是有效的。
药物制剂可以每单位剂量含预设量活性成分的单位剂型来提供。剂量水平为约0.01至约250毫克/千克("mg/kg")体重/天，优选为约0.05至约100mg/kg体重/天的本发明化合物是预防和治疗疾病的单一疗法中的典型剂量。通常，本发明的药物组合物将每天给药约1至约5次，或以连续输注方式给药。上述给药可用作长期或短期疗法。可与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的病状、病状的严重度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄率、治疗持续时间及患者的年龄、性别、体重和健康状况而变化。优选的单位剂量制剂为含上述日剂量或亚剂量或它们的适当部分活性成分的制剂。可用基本上小于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗。此后，以小增量增加剂量直至达到该情况下的最佳效果。通常，化合物最适宜以一般提供有效结果而不引起任何不利或有害副作用的浓度水平来给药。
当本发明组合物包含本发明化合物与一种或多种其它治疗性或预防性药剂的组合时，在单一疗法方案中，所述化合物与所述其它药剂通常都以通常所给药剂量的约10％至150％且优选约10％至80％的剂量水平来提供。
本发明化合物可与一种或多种其它治疗性或预防性药剂组合给药。例如，当用于治疗疼痛时，可能的其它药剂包括免疫抑制剂、抗炎剂和/或用于治疗疼痛的其它药剂。
适用于本发明的方法和组合物的免疫抑制剂包括本领域中已知的免疫抑制剂。实例包括氨基蝶呤(aminopterin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、环孢素(cyclosporinA)、D-青霉胺(D-penicillamine)、金盐(goldsalts)、羟氯喹(hydroxychloroquine)、来氟米特(leflunomide)、甲氨蝶呤(methotrexate)、米诺环素(minocycline)、雷帕霉素(rapamycin)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、他克莫司(tacrolimus)(FK506)和它们的药用盐。具体的免疫抑制剂为甲氨蝶呤。
免疫抑制剂的其它实例包括抗-TNF抗体，例如阿达木单抗(adalimumab)、赛妥珠单抗(certolizumabpegol)、依那西普(etanercept)和英利昔单抗(infliximab)。其它免疫抑制剂包括白介素-1阻断剂，例如阿那白滞素(anakinra)。其它免疫抑制剂包括抗-B细胞(CD20)抗体，例如利妥昔单抗(rituximab)。其它免疫抑制剂包括T细胞活化阻断剂，例如阿巴西普(abatacept)。
其它免疫抑制剂包括肌苷单磷酸脱氢酶抑制剂，例如吗替麦考酚酯(mycophenolatemofetil)和霉酚酸(mycophenolicacid)
适用于本发明的方法和组合物的抗炎性药物包括本领域中已知的抗炎性药物。实例包括糖皮质激素(glucocorticoid)和NSAID。糖皮质激素的实例包括醛固酮(aldosterone)、倍氯米松(beclometasone)、倍他米松(betamethasone)、皮质酮(cortisone)、脱氧皮质酮(deoxycorticosterone)、地塞米松(dexamethasone)、氟氢可的松(fludrocortisones)、氢化可的松(hydrocortisone)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、曲安西龙(triamcinolone)和它们的药用盐。
NSAID的实例包括水杨酸盐类(例如，阿司匹林(aspirin)、阿莫西林(amoxiprin)、贝诺酯(benorilate)、水杨酸胆碱镁(cholinemagnesiumsalicylate)、二氟尼柳(diflunisal)、法斯拉胺(faislamine)、水杨酸甲酯(methylsalicylate)、水杨酸镁(magnesiumsalicylate)、双水杨酸酯(salicylsalicylate)和它们的药用盐)、芳基烷酸类(例如，双氯芬酸(diclofenac)、醋氯芬酸(aceclofenac)、阿西美辛(acemetacin)、溴芬酸(bromfenac)、依托度酸(etodolac)、吲哚美辛(indometacin)、萘丁美酮(nabumetone)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)和它们的药用盐)、芳基丙酸类(例如，布洛芬(ibuprofen)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、酮洛酸(ketorolac)、洛索洛芬(loxoprofen)、萘普生(naproxen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、噻洛芬酸(tiaprofenicacid)、舒洛芬(suprofen)和它们的药用盐)、芳基邻氨基苯甲酸类(例如，甲氯芬那酸(meclofenamicacid)、甲芬那酸(mefenamicacid)和它们的药用盐)、吡唑烷衍生物类(例如，阿扎丙宗(azapropazone)、安乃近(metamizole)、羟布宗(oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、磺吡酮(sulfinprazone)和它们的药用盐)、昔康类(oxicam)(例如氯诺昔康(lornoxicam)、美洛昔康(meloxicam)、吡罗昔康(piroxicam)、替诺昔康(tenoxicam)和它们的药用盐)、COX-2抑制剂类(例如，塞来昔布(celecoxib)、依托考昔(etoricoxib)、鲁米考昔(lumiracoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、罗非昔布(rofecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)和它们的药用盐)和磺苯胺类(sulphonanilides)(例如，尼美舒利(nimesulide)及其药用盐)。
用于治疗疼痛(包括但不限于神经病理性疼痛和炎性疼痛)的其它药剂包括但不限于以下药剂，例如普瑞巴林(pregabalin)、利多卡因(lidocaine)、度洛西汀(duloxetine)、加巴喷丁(gabapentin)、卡马西平(carbamazepine)、辣椒碱(capsaicin)和其它5-羟色胺(serotonin)/去甲肾上腺素(norepinephrine)/多巴胺(dopamine)重吸收抑制剂和阿片剂(opiate)(例如奥施康定(oxycontin)、吗啡(morphine)和可待因(codeine))。
在治疗由已知疾病或病状(例如糖尿病、感染(例如带状疱疹或HIV感染)或癌症)引起的疼痛中，本发明化合物可与一种或多种针对潜在疾病或病况的其它治疗性或预防性药剂组合。例如，当用于治疗糖尿病性神经病变(diabeticneuropathy)时，本发明化合物可与一种或多种抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降血脂剂/降脂剂、减肥药、抗高血压剂和食欲抑制剂组合给药。抗糖尿病剂的实例包括双胍类(例如，二甲双胍(metformin)、苯乙双胍(phenformin))、葡萄糖苷酶抑制类(例如，阿卡波糖(acarbose)、米格列醇(miglitol))、胰岛素类(包括胰岛素促泌素类似物和胰岛素增敏剂)、氯茴苯酸类(meglitinides)(例如，瑞格列奈(repaglinide))、磺酰脲类(例如，格列美脲(glimepiride)、格列本脲(glyburide)、格列齐特(gliclazide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)和格列吡嗪(glipizide))、双胍/格列本脲组合(例如，格鲁瓦斯(Glucovance))、噻唑烷二酮类(例如，曲格列酮(troglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)和吡格列酮(pioglitazone))、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPARα/γ双重激动剂、糖原磷酸化酶抑制剂、脂肪酸结合蛋白(aP2)抑制剂、高血糖素样肽-1(GLP-1)或GLP-1受体的其它激动剂、二肽基肽酶IV(DPP4)抑制剂和钠-葡萄糖协同转运蛋白(co-transporter)2(SGLT2)抑制剂(例如，达格列净(dapagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)和LX-4211)。
药物制剂可适于通过任何适当途径给药，例如通过口服(包括含服或舌下)、经直肠、经鼻、局部(包括含服、舌下或经皮)、经阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注)途径给药。上述制剂可通过药学领域已知的任何方法(例如使活性成分与一种或多种载体或赋形剂组合)来制备。优选口服给药或通过注射给药。
适于口服给药的药物制剂可呈离散单元形式，例如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫(foam)或泡沫剂(whip)；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂。
例如，为了以片剂或胶囊剂形式口服给药，所述活性药物组分可与口服、无毒的药用惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)组合。粉末是通过将化合物粉碎至合适细度并与类似地粉碎的药物载体(例如可食用碳水化合物，例如淀粉或甘露醇)混合来制备。还可包含调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊剂通过如上所述制备粉末混合物并填充成型的明胶外壳来制备。在填充操作之前，可将助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇添加至粉末混合物中。还可添加崩解剂或增溶剂例如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善摄取胶囊剂时药物的利用度。
此外，需要时或必要时，还可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米增甜剂、天然胶和合成胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型中的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。通过以下方法配制片剂：例如制备粉末混合物、成粒或击压、加入润滑剂和崩解剂并压制成片剂。通过以下方法制备粉末混合物：将适当粉碎的混合物与上述稀释剂或基质(base)混合并任选地与粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯基吡咯烷酮)、溶解延缓剂(例如石蜡)、再吸收加速剂(例如季铵盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)。通过以下方法使粉末混合物成粒：用粘合剂(例如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚胶浆或纤维素或聚合物质的溶液)润湿并迫使其穿过筛网。作为成粒的替代方法，可使粉末穿过压片机且结果是裂解为颗粒的不完全成形的击压物。可借助于添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒的以防止粘附与片剂成型模具。然后将经润滑的混合物压制成片剂。还可将本发明化合物与自由流动的惰性载体组合且不经成粒或击压步骤直接压制成片剂。可提供由虫胶的密封涂层、糖或聚合物质的涂层和蜡的抛光涂层组成的透明或不透明保护涂层。可向所述涂层中加入染料以区分不同的单位剂量。
可以单位剂型制备口服液(例如溶液剂、糖浆剂和酏剂)，从而使得给定量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于适当矫味的水溶液中来制备，而酏剂则通过使用无毒媒介物来制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然增甜剂或糖精或其它人工增甜剂)等。
适当时，可将用于口服给药的剂量单位制剂微囊化。所述制剂还可例如通过将微粒物质涂布或包埋在聚合物、蜡等中来制备，以延长或持续释放。
式(I)化合物及其药用盐还可以脂质体递送系统例如小单室脂质体、大单室脂质体和多室脂质体的形式给药。脂质体可由多种磷脂例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。
式(I)化合物及其药用盐还可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的个别载体来递送。所述化合物还可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。上述聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺酚、聚羟基乙基天冬酰胺酚或取代有棕榈酰基残基的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，所述化合物可与一类适用于实现药物控制释放的可生物降解聚合物偶联，所述聚合物例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可作为意欲与接受者的表皮保持紧密接触较长时间的离散贴剂来提供。例如，活性成分可通过如PharmaceuticalResearch1986,3(6),318中大体描述的离子电渗疗法由贴剂递送。
适于局部给药的药物制剂可配制为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
适于经直肠给药的药物制剂可作为栓剂或灌肠剂来提供。
适于经鼻给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粒径为例如20至500微米的粗粉末，其以采用从鼻吸入的方式给药，即由贴近鼻的容纳粉末的容器经由鼻道快速吸入来给药。用于以经鼻喷雾剂或滴鼻剂给药的合适制剂(其中载体为液体)包括活性成分的水溶液或油溶液。
适于通过吸入给药的药物制剂包括细粒粉剂或雾状物，其可借助于各种类型的计量剂量的加压气雾剂、雾化器或吹入器而产生。
适于经阴道给药的药物制剂可作为子宫托、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾剂来提供。
适于肠胃外给药的药物制剂包括可含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预定接受者的血液等张的溶质的水性或非水性无菌注射溶液；和可包括助悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。制剂可以单位剂量或多剂量容器(例如密封的安瓿和小瓶)形式来提供且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在临使用前加入无菌液体载体例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备。
应当理解的是，除了上述具体提及的成分之外，考虑到所述制剂的类型，所述制剂还可包括本领域中常见的其它药剂，例如适用于口服给药的制剂可包括矫味剂。
术语“患者”包括人类和其它哺乳动物。
除非另有说明，术语“处置”、“处理”和“控制”涵盖预防已患有疾病或病症的患者中所述具体疾病或病症的复发和/或延长已患有疾病或病症的患者保持缓解的时间。所述术语涵盖调节疾病或病症的阈值、发展和/或持续时间，或改变患者对疾病或病症作出响应的方式。
术语“治疗”是指：(i)在可易患某种疾病、病症和/或病状但尚未被诊断为患有所述疾病、病症和/或病状的患者中防止所述疾病、病症和/或病况的出现；(ii)抑制疾病、病症和/或病状，即，使其发展停滞；和(iii)缓解疾病、病症和/或病状，即，使所述疾病、病症和/或病状消退。
本发明意欲涵盖通过合成方法或通过代谢过程(包括在人类或动物体内(体内)进行的代谢过程或体外进行的代谢过程)制备时具有式(I)的化合物。
本申请中所用的缩写，具体地包括以下说明性方案和实施例中的缩写，是本领域技术人员公知的。一些缩写使用如下：HATU为O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；BOP为苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)膦鎓六氟磷酸盐；EDC为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；TBTU为O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐；THF为四氢呋喃；DMF为N,N-二甲基甲酰胺；RT或rt或r.t.为室温或保留时间(上下文决定)；tR为保留时间；DCM为二氯甲烷；dppf为1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁；LDA为二异丙基氨基锂；Ph为苯基；BOC或Boc为叔丁氧基羰基；OAC或OAc为乙酸酯/盐；Ac为乙酰基；AcCN、ACN或MeCN为乙腈；MeOH为甲醇；EtOH为乙醇；EtOAc或EtOAC为乙酸乙酯；h为小时；min为分钟；TFA为三氟乙酸；BHT为3,5-二叔丁基-4-羟基甲苯；DBU为1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯；DIEA或DIPEA为二异丙基乙基胺；DMSO为二甲基亚砜；DCE为1,2-二氯甲烷；且MeOD为CD3OD。
实施例
现将结合某些实施方案描述本发明，所述实施方案并非意欲限制本发明的范围。相反，本发明涵盖可包括在权利要求范围之内的所有替代方案、修改和等效形式。因此，包括具体实施方案的下列实施例将说明本发明的一种实践，应当理解的是，所述实施例是用于说明某些实施方案并以提供相信为其程序和概念性方面最有用且容易理解的描述来呈现。
本发明化合物可使用该部分中所述的反应和技术及本领域普通技术人员已知的其它合成方法来制备。所述反应在适合于所用试剂和材料且适于进行转化的溶剂中进行。此外，在下述合成方法的描述中，应当理解的是，选择提出的所有反应条件(包括所选溶剂、反应温度、实验持续时间和后处理程序)作为该反应的标准条件，这应当易于为本领域技术人员所认可。本领域技术人员应当理解的是，分子各部分上存在的官能基必须与提出的试剂和反应相容。对于反应条件相容的取代基的上述限制对本领域技术人员而言将是显而易见的且因此必须使用替代方法。
通过方案1概述的方法制备式8化合物，其中R1和R2为H、烷基、环烷基或烯基。将适当的酚盐用合适取代的炔丙基卤化物在环境温度进行烷基化，得到期望的炔丙基醚2。2中的醛官能团与适当的Wittig试剂的Wittig反应可形成期望的酚，其为E,Z混合物的混合物，其中E-异构体为主要产物。通过在溶剂例如二氯甲烷中在脱水剂例如MgSO4存在下与1,1-二甲基肼进行反应，将由此得到的α,β-不饱和醛异构体混合物3转化成腙衍生物4。在2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的自由基清除剂存在下，在溶剂例如均三甲苯中，使由此得到的粗制腙4进行分子内[4+2]环加成反应(Dolle,R.E.et.al.TetrahedronLett.1988,29,6349-6352)，得到环化产物5。使用本领域技术人员熟知的反应条件，在钯催化的偶联反应中与经保护的胺反应可将5中的溴化物进行替换。最终可通过如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Greene,Wuts；3rded.,1999,JohnWiley&Sons,Inc.)中所述的方法将保护基团脱除，得到中间体7。式7化合物可与羧酸(R3C(O)OH)在以下条件进行偶联：使用标准肽偶联试剂例如HATU、BOP、EDC或TBTU，在碱例如N,N-二异丙基乙基胺和溶剂例如THF中，在20℃至80℃温度，形成式8化合物。或者式7化合物可与酰氯(R3C(O)Cl)进行偶联。如果R3含经保护的胺基团或其它官能团，可通过用如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Greene,Wuts；3rded.,1999,JohnWiley&Sons,Inc.)中所述的适当试剂处理底物，得到式(I)化合物，其中R1和R2＝H、烷基、环烷基或烯基。
方案1
可通过方案2中概述的方法制备式17或18化合物，其中R1和R2为H。通过用如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Greene,Wuts；3rded.,1999,JohnWiley&Sons,Inc.)中所述的适当试剂例如(Boc)2O处理底物，保护苯胺9，得到10。在钯催化剂例如PdCl2(dppf)和碱例如乙酸钾或磷酸钾存在下，在溶剂例如二噁烷、THF或甲苯中，在20℃至150℃温度，用二(频哪醇合)二硼可将10中的溴化物转化成硼酸酯11。可用DMF和碱例如LDA进行12的转化，得到醛13。最后12与硼酸酯11在如Zhang,Leiet.al.(JournalofMedicinalChemistry,2011,54,1724–1739)所述的使用碱例如碳酸铯和催化剂例如Pd(PPh3)4的标准铃木(Suzuki)偶联条件下进行偶联，可得到14。使用还原试剂例如硼氢化钠可将醛14还原成醇15。在溶剂例如THF中，在惰性气氛下，在100℃用氢化物源例如氢化钠处理醇15可得到脱保护的受限核16。使用标准肽偶联试剂例如HATU、BOP、EDC或TBTU在碱例如N,N-二异丙基乙基胺和溶剂例如THF存在下，在20℃至80℃温度，将化合物16可与羧酸(R3C(O)OH)偶联，形成式17化合物。或者，式16化合物可与酰氯(R3C(O)Cl)进行偶联，得到式17化合物，或与氯甲酸酯(R3OC(O)Cl)进行偶联，得到式18化合物。如果R3含经保护的胺基团或其它官能团，则可通过用如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Greene,Wuts；3rded.,1999,JohnWiley&Sons,Inc.)中所述的适当试剂处理底物除去保护基团，得到式(I)化合物，其中R1和R2＝H。
方案2
可通过方案3中概述的方法制备式19或20化合物，其中R5为卤素。可通过用卤化剂例如N-溴代琥珀酰亚胺处理制备式19或20化合物。经由钯催化的偶联反应，将卤素进一步转化成21或22，所述反应包括本领域技术人员熟知的反应条件例如铃木反应、施蒂勒(Stille)反应或根岸(Negishi)反应，得到式(I)化合物，其中R5＝CN、烷基、卤代烷基、芳基或杂芳基。
方案3
可通过方案4中概述的方法制备式32化合物，其中R4＝NHAc在钯催化剂例如PdCl2(dppf)和碱例如乙酸钾或磷酸钾存在下，在溶剂例如二噁烷、THF或甲苯中，在20℃至150℃温度，与二(频哪醇合)二硼将2-氟-1-碘-4-硝基苯转化成硼酸酯23。4-氯吡啶-2-胺与卤化剂例如N-溴代琥珀酰亚胺进行卤化可得到化合物24。氨基与试剂例如乙酰氯酰化，接着使用标准条件例如2,4,6-三乙烯基环三硼氧烷在钯催化剂例如Pd(PPh3)4或Pd(OAc)2和碱例如碳酸钠、碳酸铯、碳酸钾或磷酸钾存在下，在溶剂例如DME、DMF、甲苯中，在升高的温度，进行铃木偶联，可得到式26化合物。使用试剂例如四氧化锇和高碘酸钠将乙烯基进行氧化裂解，得到醛27。使用如Zhang,Leiet.al.(JournalofMedicinalChemistry,2011,54,1724–1739)中所述的采用碱例如碳酸铯和催化剂例如Pd(PPh3)4的条件使27和23进行铃木偶联，可得到28。使用还原剂例如硼氢化钠可将醛28还原成醇29。在溶剂例如THF中，在惰性气氛下，在100℃用氢化物源例如氢化钠处理醇29可得到环化的核30。使用标准条件例如用钯/碳进行氢化，将化合物30还原成胺，得到苯胺31。
使用标准肽偶联试剂例如HATU、BOP、EDC或TBTU在碱例如N,N-二异丙基乙基胺和溶剂例如THF存在下，在20℃至80℃温度，化合物31可与羧酸(R3C(O)OH)偶联，形成式32化合物。或者，式31化合物可与酰氯(R3C(O)Cl)进行偶联，得到式32化合物。如果R3含经保护的胺基团或其它官能团，则可通过用如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Greene,Wuts；3rded.,1999,JohnWiley&Sons,Inc.)中所述的适当试剂处理底物除去保护基团，得到式(I)化合物，其中R4＝NHAc。
方案4
使用方案1-4合成的各种类似物列于表1a和1b中。所选化合物的AAK1功能性(AAK1IC50(nM))和细胞性(细胞IC50(nM))效能以如下IC50范围列出：a＝1-10nM；b＝10-100nM；c＝100-1205nM。
表1a
表1b
在下列实施例中，在Bruker400或500MHzNMR光谱仪上记录质子NMR谱。以相对于四甲基甲硅烷的δ值报道化学位移。使用至少一种下列方法在与WatersMicromassZQ偶联的ShimadzuLC上进行液相色谱(LC)/质谱(MS)。使用至少一种下列方法获得HPLC保留时间。
LC-MS方法：
方法A：PhenomenexC182x50mm(3μm),A＝95％H2O/5％MeCN,B＝95％MeCN/5％H2O,Modifier10mMNH4OAc,0.00min＝0％B,4min＝100％B5min＝100％B，流速＝0.8mL/min
方法B：PhenomenexC182x50mm(3μm),A＝95％H2O/5％ACN,B＝95％MeCN/5％H2O,Modifier10mMNH4OAc,0.00min＝30％B,4min＝100％B5min＝100％B,流速＝0.8mL/min
LC/MS方法C＝柱：PUROSPHERstarRP-18(4X55mm),3μm；缓冲液：20mMNH4OAC/水；流动相A：缓冲液+ACN(90+10)；流动相B：缓冲液+MeCN(10+90)；流速：2.5mL/min)
LC/MS方法D＝柱：ZORBAXSBC18(46X50mm),5μm；正模式流动相A：10％MeOH–90％H2O–0.1％TFA；流动相B：90％MeOH–10％H2O–0.1％TFA；流速：5mL/min)
方法E：XbridgeBEHC182x50mm(2.5μm),A＝0.1％HCOOH/H2O，B＝0.07％HCOOH/MeCN，0.00min＝10％B，1.5min＝100％B3min＝100％B，流速＝1.0mL/min
方法F：AcentisExpressC182x50mm(2.7μm)，缓冲液：10mMNH4OAC/水pH＝4.5；流动相A：缓冲液+ACN(98:2)；流动相B：缓冲液+MeCN(2:98)；流速：1.0mL/min)
方法G：Poroshell1203x50mm(2.7μm)，缓冲液：10mMNH4OAC/水，用甲酸调节至pH＝5；流动相A：缓冲液+ACN(90:10)；流动相B：缓冲液+MeCN(10:90)；流速：1.5mL/min)
手性HPLC方法：
方法A：CHIRALCELOJH(250x4.6)mm5微米
流动相：0.2％DEA/正己烷：乙醇(80:20)
实施例1
(R)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
A部分.4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛
将4-溴-2-羟基苯甲醛(3.0g,24.9mmol)在MeOH(150mL)中的溶液用1NNaOH水溶液(15.7mL,1.05当量)进行处理。减压浓缩所得淡黄色溶液。将EtOH(30mL)加至残余物中并减压浓缩溶液。先后用EtOH(30mL)和庚烷(50mL)重复上述步骤。伴随搅拌将所得黄色粉状钠盐溶于DMF(60mL)中并向其中加入炔丙基溴在甲苯中的溶液(80wt％,2.33mL,1.4当量)。将反应混合物在环境温度搅拌22h，此后减压除去挥发物。将残余物在EtOAc(70mL)与水(40mL)之间进行分配。将有机层分离并用炭(～1g)进行处理，然后干燥(Na2SO4)并过滤。减压浓缩滤液。将所得残余物从EtOAc和己烷(3:7)中结晶。产物I为4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(893mg)，其为无色针状物。减压浓缩母液并从EtOAc和己烷(7:93)中在进行结晶，得到另一批产物II4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(1.9g)。将母液再进行浓缩并如前述再进行结晶。产物III，得到另一批4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(344mg)。将全部三批产物合并，得到总计3.14g(87％产率)4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛，其为无色针状物。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm10.43(s,1H),7.74(d,J＝8.2Hz,1H),7.31(d,J＝1.5Hz,1H),7.24-7.28(m,1H),4.85(d,J＝2.4Hz,2H),2.64(t,J＝2.4Hz,1H)；LCMS(ESI)m/e239.0,241.0Br模式[(M+H)+，C10H8BrO2计算值239.0]。
B部分.(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)丙烯醛
将混悬于THF(20mL)中的4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯甲醛(0.852g,3.56mmol)和甲酰基亚甲基三苯基膦(phosphorane)(2.2g,7.12mmol,2当量)的混合物在环境温度搅拌18h，然后在50℃再搅拌24h。将反应混合物通过用EtOAc:己烷(1:4,300mL)洗脱的硅胶床(～25g)进行过滤。减压浓缩滤液并将残余物通过使用EtOAc:己烷(1:19至1:9)的线性梯度的硅胶色谱进行纯化。减压浓缩含标题化合物及其Z-异构体(比例为39:11,通过NMR鉴定)的合并的级分，得到(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)丙烯醛(0.69g,57％产率)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ9.71(d,J＝7.6Hz,1H),7.77(d,J＝16.2Hz,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,1H),7.26-7.17(m,2H),6.77(dd,J＝16.2,7.6Hz,1H),4.82(d,J＝2.4Hz,1H),4.80-4.75(m,1H),2.62(t,J＝2.4Hz,1H)。Z-异构体在δ9.87(d,J＝7.9Hz)显示醛质子并且在δ6.22显示酚质子较小的顺式-偶联(J＝11.4Hz)；LCMS(ESI)m/e265.0,267.0Br模式[(M+H)+,C12H10BrO2计算值265.0]。
C部分.(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼
将含无水MgSO4(16g)的(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)丙烯醛(2.85g,10.8mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液伴随搅拌在冰浴中冷却。向冰冷却的溶液中滴加1,1-二甲基肼(2.45mL,32.4mmol)，然后将反应混合物温热至环境温度并搅拌18h。减压浓缩挥发物并将残余物相继与二氯甲烷(50mL)、二氯乙烷(50mL)和庚烷(50mL)共蒸发。得到(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(2.7g,90％产率,90％纯度)，其为黄色粉末。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.39(d,J＝7.9Hz,1H),7.20-7.10(m,3H),7.00-6.86(m,2H),4.75(d,J＝2.3Hz,2H),2.95(s,6H),2.58(t,J＝2.3Hz,1H)；LCMS(ESI)m/e307.0,309.0Br模式[(M+H)+，C14H16BrN2O计算值307.0]。
D部分.8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
将(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(116mg,374mmol)和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(82mg,374mmol)在均三甲苯(4.5mL)中的溶液在50℃通过鼓泡氩气进行脱气约15min，同时在厚玻璃小瓶中进行超声处理。在氩气下将小瓶盖上，在油浴中伴随搅拌加热至140℃并保持138h。将反应混合物冷却环境温度并减压浓缩溶剂。将暗色残余物通过用EtOAc:二氯甲烷(1:19)作为洗脱剂的硅胶色谱进行纯化。合并含期望产物的级分并减压浓缩，得到8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(27mg，基于89％纯度为25％产率)，其为淡黄色粉末。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.63(d,J＝5.2Hz,1H),8.45(s,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.52(d,J＝5.2Hz,1H),7.27-7.22(m,2H),5.20(s,2H)；LCMS(ESI)m/e262.0,264.0Br模式[(M+H)+，C12H9BrNO计算值262.0]。
E部分.5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸叔丁酯
将8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(2.5g,9.54mmol)、氨基甲酸叔丁酯(6.25g,53.3mmol)、Cs2CO3(16.5g,50.7mmol)、XANTPHOS(1.27g,2.194mmol)和乙酸钯(II)(1.33g,5.91mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液用氮气脱气5min。将管密封，加热至90℃并保持12h。将混合物经由硅藻土过滤并减压浓缩滤液。加入水并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取残余物。将合并的有机物用盐水(1x20mL)洗涤，以硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(40％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，得到5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸叔丁酯(2.0g,6.70mmol,70％产率)；LCMS(ESI)m/e299.2[(M+H)+，C17H19N2O3计算值299.1]。
F部分.5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺
将5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸叔丁酯(0.157g,0.526mmol)在TFA(2mL,26.0mmol)中的溶液在室温搅拌2h。减压除去TFA。将残余物小心地用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭并用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1x10mL)洗涤，以硫酸钠干燥，过滤，然后减压浓缩，得到5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(0.03g,0.151mmol,29％粗产率)，其为黄色固体，没有进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS(ESI)m/e199.2[(M+H)+，C12H11N2O计算值199.1]。
G部分.(R)-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在-10℃向5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(0.35g,1.77mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(0.408g,1.77mmol)在吡啶(10mL)中的经搅拌溶液中滴加POCl3(0.21mL,2.30mmol)并将反应混合物在该温度搅拌30min。将混合物减压浓缩，用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(3x15mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1x10mL)洗涤，以硫酸钠干燥，过滤，然后减压浓缩。将残余物通过使用50％乙酸乙酯/己烷的制备型TLC纯化，得到(R)-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.5g,1.22mmol,69％产率)。LCMS(ESI)m/e412.2[(M+H)+，C23H30N3O4计算值412.2]。
H部分.(R)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
将(R)-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,0.729mmol)在TFA(562μl,7.29mmol)中的溶液在室温搅拌10h。减压浓缩溶液并通过制备型HPLC纯化残余物，得到(R)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺(28mg,0.09mmol,12％产率)，其为黄色固体。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.66(d,J＝6.1Hz,1H),8.62(s,1H),8.18(d,J＝6.1Hz,1H),8.05(d,J＝8.9Hz,1H),7.59(d,J＝2.1Hz,1H),7.41(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),5.35(s,2H),4.07(t,J＝7.2Hz,1H),1.88-1.71(m,3H),1.06(d,J＝0.9Hz,3H),1.05(d,J＝0.9Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e312.2[(M+H)+,C18H22N3O2计算值312.2]。
实施例2
(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
遵循与实施例1中所述相同的方案，在G部分中使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸，制备标题化合物，得到(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.69(d,J＝6.1Hz,1H),8.65(s,1H),8.24(d,J＝6.4Hz,1H),8.07(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.43(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),5.37(s,2H),4.09(t,J＝7.2Hz,1H),1.88-1.73(m,3H),1.08-1.06(m,1H),1.06-1.05(m,1H),1.07(s,3H),1.06(s,3H)；LCMS(ESI)m/e312.2[(M+H)+，C18H22N3O2计算值312.2]。
实施例3和4
(S)-2-氨基-4-甲基-N-((R)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺和(S)-2-氨基-4-甲基-N-((S)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
A部分.4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯甲醛
向4-溴-2-羟基苯甲醛(3.0g,14.92mmol)在DMF(60mL)中的溶液中加入K2CO3(2.063g,14.92mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后历时10min滴加3-溴丁-1-炔(2.98g,22.39mmol)。将混合物温热至室温(RT)并搅拌16h。将反应混合物倾入200mL冰冷的水中。经由过滤收集所得固体并进行风干。所得4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯甲醛(3.0g,11.02mmol,74％产率)，其为棕色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝1.6Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),4.95(dq,J＝2.0Hz,J＝2.0Hz,1H),2.62(d,J＝2.0Hz,1H)；1.74(d,J＝2.0Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e253.0,255.0Br模式[(M+H)+，C11H10BrO2计算值253.0]。
B部分.3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)丙烯醛
向4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯甲醛(3.0g,11.85mmol)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中加入2-(三苯基亚膦基)乙醛(4.69g,15.40mmol)。将反应混合物在50℃加热并保持90h。将反应混合物冷却至室温并用盐水(100mL)淬灭。用乙酸乙酯(3x100mL)萃取溶液。将合并的有机物以Na2SO4干燥，过滤，然后减压浓缩。将粗产物通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯)进行纯化，得到3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)丙烯醛(1.3g,4.19mmol,35％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)m/e279.0,281.0Br模式[(M+H)+，C13H12BrO2计算值279.0]。
C部分.2-(3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼
向3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)丙烯醛(1.3g,4.66mmol)在(52mL)中的溶液中加入一水合硫酸镁(7.8g,56.4mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后历时5min滴加1,1-二甲基肼(1.08mL,13.97mmol)。然后将反应混合物温热至室温并搅拌16h。将反应混合物经硫酸镁床过滤，用二氯甲烷(100mL)洗涤，然后减压浓缩，得到2-(3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(1.6g,4.63mmol,99％粗产率)。将物质继续进行，没有进一步纯化。LCMS(ESI)m/e321.0,323.0Br模式[(M+H)+，C15H18BrN2O计算值321.1]。
D部分.8-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
向3-(4-溴-2-(丁-3-炔-2-基氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(1.9g,5.92mmol)在均三甲苯(120mL,9.72mmol)中的溶液中加入BHT(0.026g,0.118mmol)。通过在氮气下进行超声处理将溶液脱气15min，然后在140℃加热96h。将溶液冷却至室温并减压除去均三甲苯。将由此得到的粗产物通过使用线性梯度为5-30％乙酸乙酯/己烷的硅胶色谱进行纯化，得到8-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(1.1g,3.98mmol,历经两步67％产率)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)m/e276.0,278.0Br模式[(M+H)+，C13H11BrNO计算值276.0]。
E部分.(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基甲酸叔丁酯
向15mL压力管中先后加入8-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(275mg,0.996mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的溶液，氨基甲酸叔丁酯(652mg,5.57mmol)和Cs2CO3(1726mg,5.30mmol)。将反应混合物用氮气脱气10min。加入XANTPHOS(133mg,0.229mmol)和乙酸钯(II)(139mg,0.617mmol)。反应物料再脱气10min。将反应混合物在80℃加热12h。将混合物冷却至室温，经硅藻土过滤，然后用乙酸乙酯洗涤。减压浓缩滤液。将粗产物经由硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯)进行纯化，得到(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基甲酸叔丁酯(250mg,0.71mmol,72％产率)。LCMS(ESI)m/e313.2[(M+H)+，C18H21N2O3计算值313.2]。
F部分.5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺
向冷却至0℃的(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基甲酸叔丁酯(250mg,0.800mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入4NHCl/二噁烷(5mL,20.00mmol)。将反应溶液在0℃搅拌5min，然后在室温搅拌2h。减压除去溶剂。将固体用乙酸乙酯洗涤，得到5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺盐酸盐(185mg,0.744mmol,93％产率)。LCMS(ESI)m/e213.0[(M+H)+，C13H13N2O计算值213.1]。
G部分.((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺盐酸盐(250mg,1.178mmol)在吡啶(4mL)中的溶液中加入((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(327mg,1.413mmol)。将反应混合物冷却至-15℃，然后滴加POCl3(0.165mL,1.767mmol)。将反应混合物在-15℃搅拌30min，然后在室温搅拌1h。减压除去吡啶。向残余物中加入25mL水并用乙酸乙酯(x25mL)萃取溶液。将合并的有机层用1.5NHCl(1x25mL)洗涤。将有机物以Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗物质通过制备型TLC(80％乙酸乙酯/己烷)进行纯化，得到((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.19mmol,16％产率)。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.49(d,J＝4.8Hz,1H),8.40(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(dd,J＝2.0Hz,J＝2.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),5.41(d,J＝6.8Hz,1H),4.24(s,1H),1.77-1.68(m,1H),1.64-1.47(m,5H),1.47(s,9H),1.11(d,J＝3.2Hz,3H).0.99(d,J＝3.2Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e426.2[(M+H)+，C24H32N3O4计算值426.2]。
H部分.(S)-2-氨基-4-甲基-N-((R)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺和(S)-2-氨基-4-甲基-N-((S)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
历时2min向冷却至0℃的((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.188mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中慢慢加入4NHCl/二噁烷(2mL,8.00mmol)。将反应混合物在0℃搅拌，然后温热至室温并搅拌2h。减压除去溶剂。将粗产物从甲醇/乙酸乙酯中重结晶，得到非对映异构体的混合物。经由手性制备型HPLC(方法A)分离混合物，得到非对映异构体1(15mg,0.04mmol,21％产率)和非对映异构体2(13mg,0.03mmol,21％产率)。未确定甲基上的绝对立体化学：非对映异构体1(第一个洗脱的非对映异构体)：1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.49(d,J＝5.2Hz,1H),8.38(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝5.2Hz,1H),7.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.30(dd,J＝8.4Hz,J＝2.0Hz,1H),5.41(q,J＝6.8Hz,1H),3.59-3.55(m,1H),1.81-1.77(m,1H),1.70-1.66(m,5H),1.02(d,J＝4.4Hz,3H).1.0(d,J＝4.4Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，C19H24N3O2计算值326.2]；非对映异构体2(第二个洗脱的非对映异构体)：1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.49(d,J＝5.2Hz,1H),8.39(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝5.2Hz,1H),7.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.30(dd,J＝8.4Hz,J＝2.0Hz,1H),5.41(q,J＝6.8Hz,1H),3.59-3.55(m,1H),1.81-1.77(m,1H),1.70-1.66(m,5H),1.02(d,J＝4.4Hz,3H).1.0(d,J＝4.4Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，C19H24N3O2计算值326.2]。
实施例5
(2R)-2-氨基-4-甲基-N-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
遵循与实施例3和4中所述相同的方案，在G部分使用(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸，制备标题化合物，得到(2R)-2-氨基-4-甲基-N-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺，其为非对映异构体的1:1混合物。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.69(d,J＝6.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.28(d,J＝6.1Hz,1H),8.05(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(dd,J＝4.4,2.0Hz,1H),7.39(ddd,J＝8.7,5.0,2.1Hz,1H),5.60-5.50(m,1H),4.11(t,J＝7.2Hz,1H),1.86-1.75(m,3H),1.74(d,J＝3.1Hz,1.5H非对映异构体1甲基),1.72(d,J＝3.4Hz,1.5H非对映异构体2甲 基),1.05(d,J＝6.4Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，计算值C19H24N3O2326.2].
实施例6和7
(R)-2-氨基-4-甲基-N-((R)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺和(R)-2-氨基-4-甲基-N-((S)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
通过手性HPLC(方法A)分离来自实施例5的非对映异构体的混合物，得到非对映异构体1(11mg,0.020mmol)和非对映异构体2(12mg,0.024mmol)。未确定甲基上的绝对立体化学：非对映异构体1(第一个洗脱的非对映异构体)：1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.69(d,J＝6.1Hz,1H),8.66(s,1H),8.27(d,J＝6.1Hz,1H),8.07(d,J＝8.9Hz,1H),7.61(d,J＝2.1Hz,1H),7.41(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),4.08(t,J＝7.2Hz,1H),1.85-1.76(m,3H),1.74(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝1.2Hz,3H),1.05(d,J＝1.2Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，C19H24N3O2计算值326.2]；非对映异构体2(第二个洗脱的非对映异构体)：1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.69(d,J＝6.1Hz,1H),8.66(s,1H),8.27(d,J＝6.1Hz,1H),8.07(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.41(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),5.57(q,J＝6.6Hz,1H),4.08(t,J＝7.2Hz,1H),1.86-1.77(m,3H),1.74(d,J＝6.7Hz,3H),1.06(d,J＝0.9Hz,3H),1.05(d,J＝0.9Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，C19H24N3O2计算值326.2]。
实施例8
(R)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
A部分.4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯甲醛
向溴酚醛(2.0g,10.0mmol)和二水合氯化铜(43.0mg,0.32mmol)在乙腈(33.1mL)中的溶液中加入DBU(1.78mL,11.9mmol)并将蓝绿色溶液在盐-冰-水浴中搅拌10min。历时5min从注射器中滴加3-氯-3-甲基-丁-1-炔(1.13mL,10.0mmol)并将反应混合物在盐-冰-水浴中搅拌3.5h。减压除去溶剂。将残余物吸收在EtOAc(350mL)中并用1MHCl(33mL)和水(150mL)和盐水(120mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱(10％DCM/己烷)进行纯化，得到4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯甲醛(1.82g,6.48mmol,65％产率)，其为浅黄色油状物。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ10.38(d,J＝0.6Hz,1H),7.83-7.62(m,2H),7.33-7.29(m,1H),2.71(s,1H),1.77(s,6H)LCMS(ESI)m/e267.0,269.0Br模式[(M+H)+，C12H12BrO2计算值267.0]。
B部分.3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)丙烯醛
向4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯甲醛(1.82g,6.45mmol)在四氢呋喃(35mL)中的溶液中加入2-(三苯基亚膦基)乙醛(2.56g,8.4mmol)。将反应混合物在50℃加热90h。将反应混合物冷却至室温并用盐水(100mL)淬灭。用乙酸乙酯(3x100mL)萃取溶液。将合并的有机物以Na2SO4干燥，过滤，然后减压浓缩。将粗产物经由硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯)进行纯化，得到3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)丙烯醛(1.34g,3.88mmol,60％产率)，其为黄色油状物。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ9.71(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(d,J＝1.8Hz,1H),7.76(d,J＝16.2Hz,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.24(dd,J＝8.9,1.8Hz,1H),6.73(dd,J＝16.2,7.9Hz,1H),2.71(s,1H),1.77(s,6H)；LCMS(ESI)m/e293.0,295.0Br模式[(M+H)+，C13H12BrO2计算值293.0]。
C部分.2-(3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼
向3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)丙烯醛(1.13g,3.85mmol)在DCM(72mL)中的溶液中加入一水合硫酸镁(6.5g,47.0mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后历时5min滴加1,1-二甲基肼(0.97mL,12.78mmol)。然后将反应混合物温热至室温并搅拌16h。将反应混合物经由硫酸镁床过滤，用二氯甲烷(100mL)洗涤，然后减压浓缩，得到2-(3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(1.29g,3.85mmol,99％粗产率)，其为浅橙色固体，没有进一步纯化即可向下进行。LCMS(ESI)m/e335.1.0,337.1Br模式[(M+H)+，C16H20BrN2O计算值335.1.1]。
D部分.8-溴-5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
向2-(3-(4-溴-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(1.13g,3.37mmol)在均三甲苯(40mL)中的溶液中加入BHT(0.74g,3.37mmol)。将溶液在氮气下通过超声处理脱气15min并在140℃加热96h。将溶液冷却至室温并减压除去均三甲苯。将由此得到的粗产物通过硅胶色谱(乙酸乙酯/己烷)进行纯化，得到8-溴-5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.109g,0.38mmol,历经两步11％产率)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)m/e290.0,292.0Br模式[(M+H)+，C14H13BrNO计算值290.0]。
E部分.5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺
向压力管中先后加入8-溴-5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(109mg,0.334mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的溶液、氨基甲酸叔丁酯(219mg,1.87mmol)和Cs2CO3(579mg,1.78mmol)。将反应混合物用氮气脱气10min。加入XANTPHOS(44.5mg,0.077mmol)和乙酸钯(II)(46.5mg,0.207mmol)。将反应物料再脱气10min。将反应混合物在80℃加热12h。将混合物冷却至室温，经硅藻土过滤，然后用乙酸乙酯洗涤。减压浓缩滤液。将粗产物经由硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯)进行纯化，得到5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(7.5mg,0.033mmol,10％产率)和(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基甲酸叔丁酯(35.6mg,0.109mmol,33％产率)。LCMS(ESI)m/e227.1[(M+H)+，C14H15N2O计算值227.1]和LCMS(ESI)m/e327.2[(M+H)+，C19H23N2O3计算值327.2]。
F部分.(R)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
将Fmoc-D-亮氨酸(177mg,0.5mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混悬液用草酰氯(0.263mL,3mmol)和2滴DMF进行处理并搅拌2h。减压除去挥发物。加入二氯乙烷(20mL)和庚烷(30mL)并减压浓缩混合物。再重复两次，除去残余的草酰氯。将残余物吸收在乙腈(0.67mL)中。向第二个烧瓶中加入DIEA(23μL,0.133mmol)和5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(15mg,0.066mmol)，接着加入前述制备的酰氯溶液。将反应混合物在室温搅拌1h。LC/MS显示起始物质完全转化。减压浓缩反应混合物，然后重新溶于乙腈(5mL)中。向其中加入DIEA(500μL,2.86mmol)进行Fmoc脱保护。混合物在室温搅拌2h。将溶液用水(5mL)稀释并用EtOAc(3x10mL)萃取。合并有机层，用盐水(1x10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后在加压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(10％MeOH/DCM)进行纯化，得到(R)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺(20.2mg,0.043mmol,65％产率)。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.73(s,1H),8.69(d,J＝6.4Hz,1H),8.32(d,J＝6.4Hz,1H),8.09(d,J＝8.9Hz,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.41(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),4.10(t,J＝7.2Hz,1H),1.87-1.81(m,3H),1.79(d,J＝1.8Hz,6H),1.07(s,3H),1.06(s,3H)；LCMS(ESI)m/e340.1[(M+H)+，C20H26N3O2计算值340.2]；旋光度：[α]20 D(MeOH)＝-34.71°。
实施例9
(S)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
遵循与实施例8中所述相同的方案，在F部分中使用Fmoc-L-亮氨酸，制备标题化合物，得到(S)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.70(s,1H),8.67(d,J＝6.1Hz,1H),8.25(d,J＝6.4Hz,1H),8.07(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝2.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),4.07(t,J＝7.2Hz,1H),1.87-1.79(m,3H),1.78(d,J＝1.5Hz,6H),1.07(d,J＝1.5Hz,3H),1.06(d,J＝1.8Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e340.1[(M+H)+，C20H26N3O2计算值340.2]；旋光度：[α]20 D(MeOH)＝+28.51°。
实施例10
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-异丙基哌啶-2-甲酰胺
遵循与实施例1中所述相同的方案，在G部分中使用1-(叔丁氧基羰基)-3-异丙基哌啶-2-甲酸，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-异丙基哌啶-2-甲酰胺。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.65(d,J＝6.0Hz,1H),8.60(s,1H),8.12(d,J＝6.0Hz,1H),8.04(d,J＝5.2Hz,1H),7.56(d,J＝2.0Hz,1H),7.40(d,J＝2.0Hz,1H),7.37(d,J＝2.0Hz,1H),5.34(s,2H),3.62–3.58(m,1H),3.18–3.15(m,1H),2.18–2.08(m,2H),1.98–1.91(m,2H),1.90–1.79(m,2H),1.05(s,3H),1.04(s,3H)；LCMS(ESI)m/e352.2[(M+H)+，C21H26N3O2计算值352.2]。
实施例11
(S)-2-氨基-4-甲基-N-(5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
A部分.2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
在室温在氩气下，向1-溴-2-甲氧基-4-硝基苯(20g,86mmol)在DMSO(100mL)中的混悬液加入二(频哪醇合)二硼(32.8g,129mmol)和乙酸钾(25.4g,259mmol)。将反应混合物用氮气脱气10min。加入1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(3.55g,4.31mmol)并将反应混合物在90℃加热12h。将反应混合物经硅藻土过滤。将滤液用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3x500mL)萃取。合并有机层，用盐水(1x100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱(己烷,乙酸乙酯)进行纯化，得到2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(15.28g,54.7mmol,64％产率)，其为棕色固体。在MS中未观察到母体离子。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.79(d,J＝1.0Hz,2H),7.67(s,1H),3.93(s,3H),1.38(s,12H)。
B部分.4-溴烟酸甲酯
在室温在氮气气氛下，向4-溴烟酸(2.81g,13.91mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入草酰氯(3.04mL,34.8mmol)，接着滴加DMF(0.33mL)。观察到冒泡并将反应混合物在室温搅拌45min。将溶液冷却至0℃，历时5min加入甲醇(5.63mL,139mmol)，然后搅拌10min。减压浓缩溶液，将残余物吸收在EtOAc中并用饱和碳酸氢钠水溶液碱化。溶液用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1x20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩，得到4-溴烟酸甲酯(2.7g,11.87mmol,85％产率)，其为棕色油状物，没有进一步纯化即可向下进行。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ9.05(s,1H),8.60(d,J＝5.5Hz,1H),7.55-7.32(m,1H),4.03-3.95(m,3H)；LCMS(ESI)m/e216.1,218.1Br模式[(M+H)+，C7H7BrNO2计算值216.0]。
C部分.4-(2-甲氧基-4-硝基苯基)烟酸甲酯
向可密封的烧瓶中加入4-溴烟酸甲酯(1.35g,6.25mmol)、碳酸铯(4.07g,12.50mmol)、四三苯基膦钯(0)(0.722g,0.625mmol)和2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.744g,6.25mmol)。加入已通过氮气鼓泡通过溶液5min进行脱气的二噁烷(14.7mL)和水(3.68mL)并将小瓶密封。将溶液在冰浴中加热至80℃并保持5h。将混合物冷却至室温，经硅藻土过滤，然后减压浓缩。将残余物经由硅胶色谱(EtOAc:己烷)进行纯化，得到4-(2-甲氧基-4-硝基苯基)烟酸甲酯(1.9g,5.93mmol,95％产率)，其为棕色油状物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ9.15(d,J＝0.5Hz,1H),8.82(d,J＝5.0Hz,1H),7.98(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.79(d,J＝2.0Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.24(dd,J＝5.0,0.5Hz,1H),3.84(s,3H),3.76(s,3H)；LCMS(ESI)m/e289.1[(M+H)+，C14H13N2O5计算值289.1]。
D部分.8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
在0℃向4-(2-甲氧基-4-硝基苯基)烟酸甲酯(1.71g,5.93mmol)在DCM(29.7ml)中的溶液中滴加三溴化硼(2.242ml,23.72mmol)。将溶液温热至室温并搅拌14h。将溶液冷却至0℃并用甲醇(～10mL)淬灭。经由真空过滤收集形成的固体。得到8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(1.43g,5.61mmol,95％产率)，其为浅棕色非晶形固体，没有进一步纯化即可向下进行。LCMS(ESI)m/e243.1,[(M+H)+，C12H7N2O4计算值243.0]。
E部分.8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
向8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮氢溴酸盐(800mg,2.476mmol)和钯/碳(10wt％)(26.3mg,0.248mmol)在EtOH(2.4mL)中的溶液在40psiH2下振摇1.5h。将混合物经硅藻土过滤，然后减压浓缩滤液。得到8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮TFA盐(632mg,1.84mmol,74％产率)，其为橙色非晶形固体。LCMS(ESI)m/e213.2,[(M+H)+，C12H9N2O2计算值213.1]。
F部分.(S)-(4-甲基-1-氧代-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮TFA盐(63mg,0.193mmol)、(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸、水(53.0mg,0.212mmol)和DIEA(169μl,0.966mmol)在DCM(3862μl)中的溶液中加入HATU(110mg,0.290mmol)。将溶液温热至室温并搅拌12h。减压浓缩反应混合物并将残余物通过反相HPLC(10％-100％MeOH/H2O/0.1％TFA)进行纯化。得到(S)-(4-甲基-1-氧代-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯2TFA盐(17mg,0.028mmol,15％产率)，其为淡棕色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.41(br.s.,1H),8.91(br.s.,1H),8.34-8.23(m,2H),7.91(d,J＝2.3Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),4.34-4.22(m,1H),1.88-1.72(m,2H),1.46(d,J＝7.5Hz,9H),1.00(dd,J＝6.7,1.4Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e426.2[(M+H)+，C23H28N3O5计算值426.2]。
G部分.(S)-2-氨基-4-甲基-N-(5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
将(S)-(4-甲基-1-氧代-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯2TFA盐(6mg,0.014mmol)在氯化氢(2N在乙醚中的溶液)(176μl,0.353mmol)中的溶液在室温搅拌2h。减压浓缩混合物并将残余物通过反相HPLC(5％-70％MeOH/H2O/0.1％TFA)进行纯化。得到(S)-2-氨基-4-甲基-N-(5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺(3.4mg,5.84μM,41％产率)，其为黄色薄膜状物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.41(s,1H),8.91(d,J＝5.5Hz,1H),8.33(d,J＝8.8Hz,1H),8.28(d,J＝5.5Hz,1H),7.95(d,J＝2.3Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),4.09(t,J＝7.2Hz,1H),1.87-1.81(m,2H),1.82-1.75(m,1H),1.07(d,J＝2.3Hz,3H),1.06(d,J＝2.5Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e326.2[(M+H)+，C18H20N3O3计算值326.2]。
实施例12
5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸新戊酯
A部分.(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向4-溴-3-甲氧基苯胺(50g,247mmol)在THF(1.5L)中的经搅拌溶液中加入BOC2O(0.069L,297mmol)和三乙胺(0.045L,322mmol)，然后将所得反应混合物加热至回流12h。将反应混合物冷却至室温并减压除去THF。将残余物吸收在乙酸乙酯(500mL)中，用水(250mL)和盐水(250mL)洗涤，然后以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(60g,193mmol,78％产率)，其为浅棕色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(d,J＝2.4Hz,1H),6.96(dd,J＝8.4Hz,J＝2.4Hz,1H),3.79(s,3H),1.48(s,9H)；LCMS(方法E)(ESI)m/e302.0,304.0Br模式[(M+H)+，C12H17BrNO3计算值302.0]。
B部分.(3-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
向(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(25g,83mmol)在DMF(750mL)中的经搅拌溶液用N2进行吹扫10min，然后以一份加入乙酸钾(24.36g,248mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(31.5g,124mmol)。将溶液用氮气吹扫10min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(6.76g,8.27mmol)并将溶液用N2再吹扫5min。然后将反应混合物在100℃加热12h。将混合物冷却至室温并减压除去DMF。将残余物吸收在乙酸乙酯(800mL)中并用水(200mL)、盐水(200mL)、以无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩，得到淡棕色(brownish)油状物。将粗物质通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到(3-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),7.00(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),3.66(s,3H),1.47(s,9H),1.24(s,12H)。
C部分.4-氯吡啶-3-甲醛
在-78℃向二异丙胺(18.83mL,132mmol)在无水THF(150mL)中的经搅拌溶液中滴加N-丁基锂(7.33g,114mmol)。完成加入后将反应温度升至0℃并将溶液搅拌1h。使反应混合物再回至-78℃并历时15min加入4-氯吡啶(10g,88mmol)在THF(100ml)中的溶液。完成加入后将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后加入DMF(20mL)并将反应混合物在室温搅拌30min。将反应混合物小心地由水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。将合并的有机物用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到4-氯吡啶-3-甲醛(8.0g,56.5mmol,64％产率)，其为无色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.51(s,1H),9.05(s,1H),8.68(d,J＝5.6Hz,1H),7.44(d,J＝5.6Hz,1H)；LCMS(ESI)m/e142.2[(M+H)+，C6H5ClNO计算值142.0]。
D部分.(4-(3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将(3-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(12.95g,37.1mmol)在1,4-二噁烷(300mL)和水(50mL)中的经搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入4-氯吡啶-3-甲醛(5g,35.3mmol)和磷酸三钾(30.0g,141mmol)并将溶液用N2再脱气5min。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(2.308g,2.83mmol)并将溶液用N2再脱气5min。在氮气气氛下将反应混合物在100℃加热1h。将混合物冷却至室温，用水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩。将粗物质通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，得到(4-(3-甲酰基吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(9.0g,27.4mmol,78％产率)，其为无色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),9.63(s,1H),8.89(s,1H),8.79(d,J＝5.1Hz,1H),7.41(dd,J＝7.2Hz,J＝2.1Hz,1H),7.29(d,J＝8.4Hz,1H),7.18(dd,J＝8.4Hz,J＝2.1Hz,1H),3.67(s,3H),1.50(s,9H)；LCMS(ESI)m/e329.2[(M+H)+，C18H21N2O4计算值329.2]。
E部分.(4-(3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃在N2下，向(4-(3-甲酰基吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(8.0g,24.36mmol)在甲醇(140mL)中的经搅拌溶液中加入硼氢化钠(1.11g,29.2mmol)。完成加入后，将所得混合物在室温搅拌1h。将反应混合物用水(150mL)淬灭，减压除去甲醇，然后将溶液用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，以硫酸钠干燥，然后减压浓缩。将粗制固体用热的50％乙酸乙酯/石油醚(50mL)洗涤，然后经由真空过滤收集固体，得到(4-(3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(6.0g,17.8mmol,73％产率)，其为灰白色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.67(s,1H),8.42(d,J＝4.8Hz,1H),7.37(d,J＝1.2Hz,1H),7.11–7.02(m,3H),5.13(d,J＝5.4Hz,1H),4.32(d,J＝5.4Hz,2H),3.67(s,3H),1.49(s,9H)。
F部分.5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺
向(4-(3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.0g,15.13mmol)在水(0.822ml,15.13mmol)中的溶液中加入氢溴酸(63％)，然后将溶液在100℃加热14h。减压浓缩反应混合物。将残余物吸收在DCM(100mL)和水(100mL)中，然后用1N氢氧化钠碱化。溶液用DCM(2x300mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，以硫酸钠干燥，然后减压浓缩。将粗固体用20％乙酸乙酯/石油醚洗涤，然后在减压下干燥，得到5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(2.0g,9.99mmol,66％产率)，其为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(s,1H),7.57(d,J＝6.3Hz,1H),7.51(d,J＝5.2Hz,1H),6.33(dd,J＝8.4Hz,J＝2.0Hz,1H),6.15(d,J＝2.0Hz,1H),5.06(s,2H)。
G部分.5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸新戊酯
向5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-胺(13.8mg,0.069mmol)在DCE(1mL)中的溶液中加入DIEA(48μL,0.277mmol)和氯甲酸新戊酯(21μL,1.39mmol)。将混合物在室温搅拌12h。减压浓缩混合物并经由反相HPLC(乙腈:具有20-mM氢氧化铵的水)纯化。得到5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸新戊酯(16.5mg,0.053mmol,77％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.51(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(d,J＝5.2Hz,1H),7.23(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),5.17(s,2H),3.81(s,2H),0.94(s,9H)；LCMS(ESI)m/e313.3[(M+H)+，C18H21N3O3计算值313.2]。
实施例13
1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-环己基脲
遵循与实施例12中所述相同的方案，在G部分中使用环己基氨基甲酰氯，制备标题化合物，得到1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-环己基脲(2.7mg,8.35μmol,12％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),8.48(d,J＝5.5Hz,1H),8.39(s,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.22(s,1H),7.00(d,J＝8.5Hz,1H),6.19(d,J＝7.9Hz,1H),5.14(s,2H),3.48–3.30(m,1H),1.85-1.42(m,4H),1.36-0.95(m,6H)；LCMS(ESI)m/e324.3[(M+H)+，C19H22N3O2计算值324.2]。
实施例14
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊-4-炔酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用戊-4-炔酸(9.81mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊-4-炔酰胺(9.6mg,0.034mmol,69％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),8.53(d,J＝4.9Hz,1H),8.44(s,1H),7.89(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝4.9Hz,1H),7.42(s,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(s,2H),2.80(s,1H),2.62-2.40(m,4H)；LCMS(ESI)m/e279.2[(M+H)+，C17H15N2O2计算值279.1]。
实施例15
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用戊酸(10.21mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺(13.0mg,0.046mmol,92％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.18(br.s.,1H),8.48(br.s.,1H),8.39(br.s.,1H),7.83(d,J＝8.2Hz,1H),7.68(br.s.,1H),7.38(br.s.,1H),7.24(d,J＝7.3Hz,1H),5.15(br.s.,2H),2.29(d,J＝6.4Hz,2H),1.53(d,J＝6.4Hz,2H),1.28(d,J＝6.7Hz,2H),0.86(dt,J＝7.1,3.6Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e283.2[(M+H)+，C17H19N2O2计算值283.1]。
实施例16
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-氰基丙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3-氰基丙酸(9.91mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-氰基丙酰胺(4.1mg,0.015mmol,29％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.53(d,J＝4.9Hz,1H),8.44(s,1H),7.90(d,J＝8.2Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.27(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(s,2H),2.73(s,4H)；LCMS(ESI)m/e280.1[(M+H)+，C16H14N3O2计算值280.1]。
实施例17
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)乙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用乙酸(6.00mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)乙酰胺(9.4mg,0.039mmol,78％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.16(br.s.,1H),8.52(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.91-7.83(m,1H),7.70(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.8Hz,1H),7.25(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.28-5.03(m,2H),2.19-1.92(m,3H)；LCMS(ESI)m/e241.2[(M+H)+，C14H13N2O2计算值241.1]。
实施例18
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲氧基丙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3-甲氧基丙酸(10.41mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲氧基丙酰胺(11.3mg,0.040mmol,79％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝4.9Hz,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.28(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),5.19(s,2H),3.62(t,J＝6.1Hz,2H),3.25(s,3H),2.57(t,J＝6.1Hz,2H)；LCMS(ESI)m/e285.3[(M+H)+，C16H17N2O3计算值285.1]。
实施例19
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-羟基丙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3-羟基丙酸(9.01mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-羟基丙酰胺(2.3mg,8.51μmol,17％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.45(s,1H),7.29(d,J＝8.5Hz,1H),5.19(s,2H),4.74(br.s.,1H),3.72(t,J＝5.6Hz,2H),2.49-2.45(m,2H)；LCMS(ESI)m/e271.2[(M+H)+，C15H15N2O3计算值271.1]。
实施例20
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-1-氰基环丙烷甲酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用1-氰基环丙烷甲酸(11.11mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-1-氰基环丙烷甲酰胺(6.3mg,0.022mmol,43％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.20(br.s.,1H),8.55(d,J＝4.9Hz,1H),8.46(s,1H),7.92(d,J＝7.9Hz,1H),7.74(d,J＝4.9Hz,1H),7.41-7.34(m,2H),5.21(s,2H),1.70(s,4H)；LCMS(ESI)m/e292.2[(M+H)+，C17H14N3O2计算值292.1]。
实施例21
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-氨磺酰基丁酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用4-氨磺酰基丁酸(16.72mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-氨磺酰基丁酰胺(2.7mg,7.77μmol,16％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.20(br.s.,1H),8.53(d,J＝4.9Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(s,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(br.s.,2H),5.19(s,2H),3.10-2.99(m,2H),2.54–2.52(m,2H),2.06-1.95(m,2H)；LCMS(ESI)m/e348.2[(M+H)+，C16H18N3O4S计算值348.1]。
实施例22
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙酸(15.72mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺(11.9mg,0.035mmol,71％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.45(s,1H),7.89(d,J＝8.2Hz,1H),7.71(d,J＝5.5Hz,1H),7.41(d,J＝1.8Hz,1H),7.26(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.19(s,2H),3.48(t,J＝6.9Hz,2H),3.35-3.31(m,2H),2.55(t,J＝7.0Hz,2H),2.23-2.17(m,2H),1.90(五重峰,J＝7.6Hz,2H)；LCMS(ESI)m/e338.3[(M+H)+，C19H20N3O3计算值338.2]。
实施例23
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)环己烷甲酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用环己烷甲酸(12.82mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)环己烷甲酰胺(13.7mg,0.044mmol,89％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝4.9Hz,1H),7.44(s,1H),7.30(d,J＝7.9Hz,1H),5.18(s,2H),2.33(t,J＝11.7Hz,1H),1.88-1.72(m,4H),1.66(d,J＝11.3Hz,1H),1.48-1.35(m,2H),1.32-1.13(m,3H)；LCMS(ESI)m/e309.3[(M+H)+，C19H21N2O2计算值309.2]。
实施例24
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)异丁酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用异丁酸(8.81mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)异丁酰胺(11.5mg,0.043mmol,86％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.44(d,J＝1.5Hz,1H),7.36-7.23(m,1H),5.19(s,2H),2.60(五重峰,J＝6.9Hz,1H),1.11(d,J＝6.7Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e269.2[(M+H)+，C16H17N2O2计算值269.1]。
实施例25
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氰基乙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用2-氰基乙酸(8.51mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氰基乙酰胺(10.7mg,0.040mmol,81％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.52(br.s.,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.46(s,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.73(d,J＝4.9Hz,1H),7.35(s,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,1H),5.21(s,2H),3.94(s,2H)；LCMS(ESI)m/e266.2[(M+H)+，C15H12N3O2计算值266.1]。
实施例26
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3,3-二甲基丁酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3,3-二甲基丁酸(11.61mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3,3-二甲基丁酰胺(11.4mg,0.038mmol,77％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝4.9Hz,1H),7.44(s,1H),7.28(d,J＝8.5Hz,1H),5.19(s,2H),2.21(s,2H)1.03(s,9H)；LCMS(ESI)m/e297.9[(M+H)+，C18H21N2O2计算值297.1]。
实施例27
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲基丁酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用3-甲基丁酸(10.21mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲基丁酰胺(11.3mg,0.040mmol,80％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝5.2Hz,1H),7.44(s,1H),7.28(d,J＝8.9Hz,1H),5.19(s,2H),2.21(d,J＝7.0Hz,2H),2.08(dt,J＝13.6,6.6Hz,1H),1.00-0.82(m,6H)；LCMS(ESI)m/e283.2[(M+H)+，C17H19N2O2计算值283.1]。
实施例28
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用丙酸(7.41mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丙酰胺(10.0mg,0.039mmol,79％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.08(br.s.,1H),8.53(d,J＝4.9Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(br.s.,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(s,2H),2.51(br.s.,3H),2.40-2.28(m,2H)；LCMS(ESI)m/e255.2[(M+H)+，C15H15N2O2计算值255.1]。
实施例29
4-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用4-甲氧基-4-氧代丁酸(13.21mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到4-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(9.7mg,0.031mmol,62％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.27(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(s,2H),3.61(s,3H),2.68-2.58(m,4H)；LCMS(ESI)m/e313.2[(M+H)+，C17H17N2O4计算值313.1]。
实施例30
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用4-甲基戊酸(11.61mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺(7.2mg,0.024mmol,49％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.10(br.s.,1H),8.52(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.87(dd,J＝8.5,3.1Hz,1H),7.73-7.67(m,1H),7.42(d,J＝2.1Hz,1H),7.27(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.19(d,J＝3.1Hz,2H),2.38-2.27(m,2H),1.56(dt,J＝13.3,6.5Hz,1H),1.53-1.44(m,2H),0.90(dd,J＝6.4,3.1Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e297.3[(M+H)+，计算值C18H21N2O2297.2].
实施例31
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丁酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用丁酸(8.81mg,0.100mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丁酰胺(10.9mg,0.041mmol,81％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(s,1H),7.28(d,J＝7.6Hz,1H),5.18(s,2H),2.51(br.s.,4H),2.31(t,J＝7.3Hz,2H),1.72-1.44(m,2H)；LCMS(ESI)m/e269.2[(M+H)+，C16H17N2O2计算值269.1]。
实施例32
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)特戊酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用特戊酸(5.11mg,0.050mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)特戊酰胺(8.2mg,0.029mmol,58％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.37(s,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.72(d,J＝4.9Hz,1H),7.49(s,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),5.19(s,2H),1.24(s,9H)；LCMS(ESI)m/e283.0[(M+H)+，C17H19N2O2计算值283.1]。
实施例33
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，使用2-(二甲基氨基)乙酸(5.16mg,0.050mmol)，制备标题化合物，得到N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺(8.3mg,0.029mmol,59％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.96(br.s.,1H),8.52(d,J＝4.9Hz,1H),8.43(s,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.48(d,J＝1.8Hz,1H),7.37(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),5.18(s,2H),3.08(s,2H),2.26(s,6H)；LCMS(ESI)m/e284.2[(M+H)+，C16H18N3O2计算值284.1]。
实施例34
N-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺
将N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺(10mg,0.035mmol)和1-溴吡咯烷-2,5-二酮(6.93mg,0.039mmol)在乙腈(708μl)中的混合物加热至90℃并保持1h。将混合物冷却至室温并经由硅胶色谱(EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺(6mg,0.016mmol,45.5％产率)，其为无色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.51(d,J＝5.5Hz,1H),8.41(s,1H),8.15(s,1H),7.74(d,J＝5.5Hz,1H),7.57(s,1H),5.22(s,2H),4.63(s,1H),2.49(t,J＝7.5Hz,2H),1.78-1.66(m,2H),1.45(dq,J＝7.5,7.3Hz,2H),0.99(t,J＝7.3Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e361.1,363.1Br模式[(M+H)+，C17H18BrN2O2计算值361.1]。
实施例35
(S)-N-(2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氨基-4-甲基戊酰胺
A部分.2-(2-氟-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
将2-氟-1-碘-4-硝基苯(2g,7.49mmol)、乙酸钾(2.205g,22.47mmol)和二(频哪醇合)二硼(2.283g,8.99mmol)在二噁烷(21.10ml)中的溶液用N2吹扫5min。加入1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)、甲苯(0.616g,0.749mmol)并将溶液用N2再吹扫5min。将混合物在油浴中在80℃加热2h。将棕色混合物冷却室温并经由用EtOAc洗脱的硅藻土过滤。将残余物经由硅胶色谱(10％-20％EtOAc/己烷)进行纯化。得到2-(2-氟-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.3g,4.87mmol,65％产率)，其为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.07–8.04(m,1H),7.97-7.91(m,1H),7.78-7.70(m,1H),1.21(s,12H).
B部分.5-溴-4-氯吡啶-2-胺
将4-氯吡啶-2-胺(2.268g,17.64mmol)和NBS(3.14g,17.64mmol)在乙腈(176ml)中的溶液在室温搅拌12h。将溶液用水稀释并用EtOAc(3X100mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1X100mL)洗涤；干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩，得到5-溴-4-氯吡啶-2-胺(4.28g,13.62mmol,77％产率)，其为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.04(s,1H),6.74(s,1H)；LCMS(ESI)m/e207.0,209.0Br模式[(M+H)+，C5H5BrClN2计算值206.9]。
C部分.N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺
在0℃向5-溴-4-氯吡啶-2-胺(2.83g,13.62mmol)在吡啶(34.1ml)中的溶液中加入乙酰氯(1.07ml,14.98mmol)。完成加入后，将溶液温热至室温并搅拌2h。减压除去过量吡啶。将残余物用EtOAc(75mL)稀释并用水(2X25mL)洗涤。将合并的水层用EtOAc(2X25mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1X20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩。将残余物经由硅胶色谱(5％-70％EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺(3.6g,12.99mmol,95％产率)，其为淡黄-粉色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.43(s,1H),8.38(s,1H),7.98(br.s.,1H),2.23(s,3H)；LCMS(ESI)m/e248.9,250.9Br模式[(M+H)+，C7H7BrClN2O计算值248.9]。
D部分.N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺
向可密封的小瓶中加入N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺(0.72g,2.89mmol)、2,4,6-三乙烯基环三硼氧烷吡啶络合物(0.903g,3.75mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.100g,0.087mmol)和碳酸钠(0.612g,5.77mmol)，接着加入甲苯(5.18mL)和EtOH(0.829mL)。将溶液用N2脱气5min，然后将小瓶加热至85℃并保持16h。将混合物冷却至室温并经用EtOAc洗脱的硅藻土过滤。减压浓缩溶液。将残余物经由硅胶色谱(10％-40％EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺(0.6g,1.83mmol,60％产率)，其为淡黄-粉色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.41(s,1H),8.30(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.01-6.87(m,1H),5.77(dd,J＝17.8,0.8Hz,1H),5.42(dd,J＝11.2,0.9Hz,1H),2.23(s,3H)；LCMS(ESI)m/e197.1[(M+H)+，C9H10ClN2O计算值197.1]。
E部分.N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
向冷却至0℃的N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺(568mg,2.89mmol)和2,6-卢剔啶(673μL,5.78mmol)在二噁烷(10.2mL)和水(2.3mL)中的溶液中先后加入四氧化锇(2.5％在2-甲基-2-丙醇中的溶液)(588mg,0.058mmol)和高碘酸钠(2.47g,11.56mmol)。将所得混合物在0℃搅拌3h。将反应混合物用水(3mL)淬灭并用EtOAc(3X10mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1X10mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩。将残余物经由硅胶色谱(5％-70％EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(430mg,2.057mmol,71％产率)，其为灰白色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ10.38(s,1H),8.76(s,1H),8.40(s,1H),8.33(br.s.,1H),2.28(s,3H)；LCMS(ESI)m/e199.1[(M+H)+，C8H8ClN2O2计算值199.1]。
F部分.N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
将N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(0.3g,1.51mmol),2-(2-氟-4-硝基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.576g,1.36mmol)和碳酸铯(0.984g,3.02mmol)在二噁烷(4.83mL)和水(1.21mL)中的混合物用N2吹扫10min。加入四(三苯基膦)钯(0)(0.349g,0.302mmol)，将混合物加热至95℃并保持12h。将残余物经由硅胶色谱(20％-80％EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(250mg,0.742mmol,49％产率)，其为黄色固体。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ9.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.87(s,1H),8.59(br.s.,1H),8.31(s,1H),8.20(ddd,J＝8.4,2.1,0.6Hz,1H),8.08(dd,J＝9.0,2.1Hz,1H),7.58(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),2.30(s,3H)；LCMS(ESI)m/e304.1[(M+H)+，C14H11FN3O4计算值304.1]。
G部分.N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺
向冷却至0℃的N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(0.225g,0.742mmol)在四氢呋喃(4.57mL)和甲醇(1.14mL)中的溶液中加入硼氢化钠(0.028g,0.742mmol)。将溶液温热至室温并搅拌1h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)淬灭并用EtOAc(3X10mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1X10mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩。没有进一步纯化可将由此得到的N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺向下进行。LCMS(ESI)m/e306.1[(M+H)+，C14H13FN3O4计算值306.1]。
H部分.N-(8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
向N-(4-(2-氟-4-硝基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(0.227g,0.742mmol)在THF(7.42mL)中的溶液中加入氢化钠(60wt％于油中的分散物)(0.030g,0.742mmol)。将混合物在室温搅拌10h。将混合物用水(5mL)淬灭并用EtOAc(3X10mL)萃取。将合并的有机物用盐水(1X10mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后减压浓缩。将残余物经由硅胶色谱(5％-100％EtOAc/己烷)进行纯化，得到N-(8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(117mg,0.390mmol,历经两步53％产率)，其为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.61(m,1H),8.17(br.s.,1H),7.98(m,3H),7.87(m,1H),5.23(s,2H),2.27(s,3H)；LCMS(ESI)m/e286.1[(M+H)+，C14H12N3O4计算值286.1]。
部分I.N-(8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
将N-(8-硝基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(17mg,0.060mmol)和10％钯/碳(6.34mg,0.060mmol)在EtOH中的溶液在40psi氢气下振摇2h。将混合物经用EtOAc洗脱的硅藻土过滤并减压浓缩。没有进一步纯化即可将物质向下进行。得到N-(8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(14mg,0.044mmol,74％产率)，其为黄色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.97(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.28(s,1H),6.47(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),6.21(d,J＝2.3Hz,1H),5.07(s,2H),2.29(s,3H)；LCMS(ESI)m/e256.1[(M+H)+，C14H14N3O2计算值256.1].
部分J.(S)-(1-氯-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯
向(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酸(200mg,0.566mmol)在DCM(1132μL)中的溶液中先后滴加亚硫酰氯(2M在DCM中的溶液)(2830μL,5.66mmol)和DMF(55.0μL,0.71mmol)。然后经混合物加热至回流并保持1h。然后将溶液冷却至室温并减压浓缩。将DCM(10mL)加至残余物中并减压浓缩(3X)，除去过量的亚硫酰氯。没有进一步纯化即可将酰氯向下进行。将小份酰氯用甲醇淬灭：LC/MS符合经由酰氯形成甲酯(甲酯：LCMS(ESI)m/e368.8[(M+H)+，C22H26NO4计算值368.2])。
部分K.(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-((2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向N-(8-氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(21.44mg,0.084mmol)和DIEA(44.0μL,0.252mmol)在DMF(840μL)中的溶液中加入(S)-(1-氯-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(31.2mg,0.084mmol)在DMF(0.2mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌12h。将粗物质通过反相HPLC(AcCN/H2O/0.1％TFA)进行纯化，得到(S)-(1-((2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(25mg,0.038mmol,历经两步45％产率)，其为黄色固体。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ12.78(br.s.,1H),8.78(s,1H),8.65(br.s.,1H),7.89(s,1H),7.81-7.72(m,3H),7.58(d,J＝7.8Hz,2H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.44-7.39(m,2H),7.37-7.28(m,3H),7.15(d,J＝7.5Hz,1H),5.25(d,J＝6.0Hz,1H),5.09(s,2H),4.52(d,J＝6.3Hz,2H),4.23(t,J＝6.3Hz,1H),2.37(s,3H),1.83-1.56(m,3H),0.99(d,J＝6.3Hz,3H),0.96(d,J＝5.5Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e591.9[(M+H)+，C35H35N4O5计算值591.3]。
部分L.(S)-N-(2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氨基-4-甲基戊酰胺
将(S)-(1-((2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(8.2mg,0.014mmol)和二乙胺(72.5μL,0.694mmol)在乙腈(139μL)中的溶液在室温搅拌1.5h。减压浓缩溶液。将粗物质通过反相HPLC(AcCN/H2O/0.1％TFA)进行纯化，得到(S)-N-(2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氨基-4-甲基戊酰胺2TFA盐(3.5mg,5.28μmol,38％产率)，其为淡黄色薄膜状物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.18(br.s.,1H),8.04(br.s.,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.52(d,J＝1.8Hz,1H),7.35(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),5.20(s,2H),4.04(t,J＝7.2Hz,1H),2.28(br.s.,3H),1.85-1.73(m,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e369.8[(M+H)+，C20H25N4O3计算值369.2]。
实施例36
(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙酰胺
遵循与实施例12中所述相同的方案，在G部分中使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-苯基乙酸(38.0mg,0.151mmol)，制备标题化合物，得到(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙酰胺2TFA盐(31.7mg,0.056mmol,56％产率)，脱保护后其为黄色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.80-8.60(m,2H),8.25(d,J＝6.3Hz,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),7.68-7.56(m,3H),7.55-7.45(m,3H),7.36(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),5.35(s,2H),5.17(s,1H)；LCMS(ESI)m/e332.1[(M+H)+，C20H18N3O2计算值332.1]。
实施例37
(S)-N1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙烷-1,2-二胺
向如实施例36中所述制备的(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙酰胺(20mg,0.060mmol)在THF中溶液中滴加硼烷四氢呋喃络合物(1M在THF中的溶液)(72.4μl,0.072mmol)。将溶液加热至50℃并保持3h。将反应混合物冷却至室温，用MeOH(～1mL)淬灭并搅拌30min。减压浓缩溶液。将残余物通过反相HPLC(10％-60％AcCN在H2O/0.1％TFA中的溶液，历时25min)进行纯化，得到(S)-N1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙烷-1,2-二胺TFA盐(6mg,0.014mmol,23％产率)，其为黄色油状物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)d8.46(d,J＝6.3Hz,1H),8.44(s,1H),8.00(d,J＝6.3Hz,1H),7.81(d,J＝9.0Hz,1H),7.57-7.41(m,5H),6.54(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.31(d,J＝2.3Hz,1H),5.24(s,2H),4.53(t,J＝7.2Hz,1H),3.89-3.77(m,1H),3.75-3.65(m,1H)；LCMS(ESI)m/e318.1[(M+H)+，C20H20N3O计算值318.2]。
方法
AAK1激酶测定
在U型底384孔板中进行测定。最终测定体积为30μl，其如下制备：在测定缓冲液(10mMTris-HCLpH7.4、10mMMgCl2、0.01％Tween-20和1.0mMDTT)中加入15μl酶和底物(荧光化肽(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2和ATP)和测试化合物。通过组合在细菌中表达的GST-Xa-hAAK1与底物和测试化合物来引发反应。将反应混合物在室温温育3小时并通过向各样品中加入60μ135mMEDTA缓冲液来终止反应。在CaliperLabChip3000(Caliper,Hopkinton,MA)上通过电泳分离荧光底物与磷酸化产物来分析反应混合物。通过与经EDTA淬灭的对照反应(100％抑制)和仅含媒介物的反应(0％抑制)比较来计算抑制数据。测定中试剂的终浓度为：ATP22μM；(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH21.5μM；GST-Xa-hAAKl3.5nM；及DMSO1.6％。得到剂量响应曲线以确定抑制50％激酶活性所需的浓度(IC50)。将化合物以10mM溶于二甲基亚砜(DMSO)中并在11个浓度进行评价。通过非线性回归分析得出IC50值。
基于HEK281细胞的测定
将HEK293F细胞在含DMEM(Gibco,目录号11965)、10％FBS(SAFCBiosciences,目录号12103C)和1×GPS(谷氨酸、青霉素和链霉素)的培养基中培养。在第一天，将细胞涂布于10cm培养皿上以使其在转染时为～80％融合。在转染时在10cm培养皿中有约1200万个细胞。在第二天，用48μgDNA和144μlLipofectamine2000(Invitrogen,目录号11668-019)转染各培养皿。DNA由含有3μgAAK1/HA/pIRES(全长人类,NCBI保存号NP_055726.2)、45μgFlag/AP2MI/pcDNA(全长人类)和1.5mlOPTI-MEM的混合物组成(每10cm培养皿)。Lipofectamine2000由含144μlLipofectamine2000和1.5mlOPTI-MEM的混合物构成(每10cm培养皿)。将各混合物转移至单独的15ml管中并在室温温育5分钟，然后合并两种混合物并在室温温育20分钟。然后从各10cm培养板中吸出生长培养基并替换为10mlDMEM+10％FBS(无GPS)。最后，向各10cm培养皿中加入3mlDNA/Lipofectamine混合物并轻柔地混合，接着将培养板在37℃和5％CO2温育过夜。
在第三天，用100％DMSO以1000×终浓度稀释化合物，然后进行3倍连续稀释以获得总共5个测试浓度。每10cm培养皿测试四种化合物。然后将1μl各化合物稀释液吸移至深孔96孔板中，接着向各孔中加入500μ1DMEM+0.5％FBS以获得2×终浓度的各化合物。通过简单吸取(此时HEK293细胞易于脱离培养板)将细胞重新悬浮于10cm培养皿中，然后转移至50ml锥形管中并通过在1000rpm离心5分钟来沉降。然后将细胞团块重新悬浮于2.75mlDMEM+0.5％FBS中(每10cm培养皿)且将100μl细胞悬浮液转移至96孔TC板的各孔中。最后将100μl用DMEM+0.5％FBS稀释的2×化合物添加至含细胞悬浮液的孔中以获得1×终浓度。然后将培养板在37℃和5％CO2温育3小时，接着将细胞悬浮液自各孔转移至12管PCR条中。将PCR条在吸头置放架中以1000rpm旋转5分钟以使细胞结块，然后通过吸取但不扰动细胞团块来移除培养基。
为了准备免疫印迹分析(WesternBlotanalysis)，将细胞团块重新悬浮于40μl1×LDS-PAGE样品缓冲液(Invitrogen,目录号NP0008)+2×Halt磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物(ThermoScientific,目录号1861284)中，接着分别用设定在第5档的微量管超声波仪(microtipsonicator)进行超声处理8-10秒。向各样品中加入5μ110×NuPage样品还原剂(含50mMDTT)，接着在PCR仪上在70℃热变性10分钟。每种样品总共取10μl加载于4-20％Tris-甘氨酸Criterion26孔凝胶(Biorad,目录号345-0034)的各泳道中以获得磷酸化mu2印迹且在4-12％Bis-Tris(+MES缓冲液)NuPAGE26孔凝胶(Invitrogen,目录号WG1403BX10)的每泳道中加载10μl以获得mu2印迹。为了进行对照，将2ng磷酸化mu2或20ngmu2/Flag蛋白加载于各凝胶的最末孔中。SDS-PAGE后，使用iBlot将各凝胶上的样品转移至PVDF膜上并将膜在TBST+5％牛奶中阻断1小时，接着用TBST洗涤3次历时5-10分钟。用含兔抗磷酸化mu2(1:5000；由NewEnglandPeptide制造且在Lexicon上进行亲和性纯化的兔多克隆抗体)的TBST+5％BSA探测Criterion凝胶，而用含小鼠抗Flag(1:500；Sigma,目录号F1804)的TBST+5％牛奶探测NuPAGE凝胶并在4℃在振荡器上将这些初级抗体温育过夜。
在第四天，用TBST洗涤免疫印迹3次历时5-10分钟，在室温用含抗兔-HRP(1:2000；BioRad,目录号170-6515)或抗小鼠-HRP(1:2000；Biorad,目录号170-6516)的TBST+5％牛奶探测1小时，用TBST洗涤3次历时10分钟并用ECL试剂(GEHealthcare,目录号RPN2132)在Versadoc上显影。最后，安设照相机以每30秒进行拍照持续10分钟且保存各印迹的无饱和信号的最佳影像(当信号饱和时，条带将为高亮红色)。对各条带进行体积分析以获得密度值。各样品的抑制百分比如下计算：首先以总Mu2表达水平进行归一化，然后与0％和100％对照比较。然后使用Excel拟合软件计算IC50值。

Claims (15)

1.式(I)化合物或其药用盐
其中：
R1和R2独立地选自氢、C3-C6环烷基和C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素和羟基；或
R1和R2一起为氧代；
R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、氨基、任选地取代有C1-C3烷基或氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基、C1-C3烷基-Y和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、芳基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRxRy和C3-C8环烷基，其中所述环烷基进一步任选地取代有一个、两个或三个独立地选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基和羟基；
R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、C3-C6环烷基氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3卤代烷基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基和羟基；
R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基和卤素；
Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的3-6元环；且
Y选自
其中R6选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和C1-C6烷基羰基；
n为0、1、2或3；
每个R7独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素和C1-C3卤代烷基；
每个R8独立地选自氢、C1-C3烷氧基和羟基；且
R9和R10各自为氢或一起形成氧代基团。
2.权利要求1的化合物或其药用盐,其中R9和R10一起形成氧代基团。
3.权利要求2的化合物或其药用盐,其中R5为氢。
4.权利要求3的化合物或其药用盐,其中R4选自氢和C1-C3烷基羰基氨基。
5.权利要求4的化合物或其药用盐,其中R4为氢。
6.权利要求2的化合物或其药用盐,其中R1和R2独立地选自氢和C1-C3烷基，或者R1和R2一起为氧代。
7.权利要求2的化合物或其药用盐,其中R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、任选地取代有氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、羟基和-NRxRy；其中Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的5元环。
8.权利要求2的化合物或其药用盐，其中：
R1和R2独立地选自氢和C1-C3烷基，或者R1和R2一起为氧代；
R3选自C1-C6烷氧基、C2-C6炔基、任选地取代有氰基的C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氨基、任选地取代有C1-C6烷基的哌啶基和C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基任选地取代有一个选自以下的基团：C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基、氨基磺酰基、氰基、二(C1-C3烷基)氨基、羟基和-NRxRy；其中Rx和Ry与连接它们的氮原子一起形成任选地取代有氧代的5元环；
R4选自氢和C1-C3烷基羰基氨基；且
R5为氢。
9.化合物或其药用盐，所述化合物其选自
(R)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺；
(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺；
(S)-2-氨基-4-甲基-N-((R)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(S)-2-氨基-4-甲基-N-((S)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(2R)-2-氨基-4-甲基-N-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(R)-2-氨基-4-甲基-N-((R)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(R)-2-氨基-4-甲基-N-((S)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(R)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺；
(S)-2-氨基-N-(5,5-二甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-异丙基哌啶-2-甲酰胺；
(S)-2-氨基-4-甲基-N-(5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氨基甲酸新戊酯；
1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-环己基脲；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊-4-炔酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-氰基丙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)乙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲氧基丙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-羟基丙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-1-氰基环丙烷甲酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-氨磺酰基丁酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)环己烷甲酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)异丁酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氰基乙酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3,3-二甲基丁酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-3-甲基丁酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丙酰胺；
4-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-4-甲基戊酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)丁酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)棕榈酰胺；
N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺；
N-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)戊酰胺；
(R)-N-(2-乙酰氨基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-氨基-4-甲基戊酰胺；
(S)-2-氨基-N-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙酰胺；和
(S)-N1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)-2-苯基乙烷-1,2-二胺。
10.组合物，其包含药用量的权利要求1的化合物或其药用盐和药用载体。
11.抑制连接蛋白相关激酶1(AAK1)活性的方法，其包括使AAK1与权利要求1的化合物或其药用盐接触。
12.治疗或处置由AAK1活性介导的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物或其药用盐。
13.权利要求12的方法，其中所述疾病或病症选自阿尔茨海默病、双相型精神障碍、疼痛、帕金森病和精神分裂症。
14.权利要求13的方法，其中所述疼痛为神经病理性疼痛。
15.权利要求14的方法，其中所述神经病理性疼痛为纤维肌痛或外周神经病变。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109400524A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 河南师范大学 一种3-醛基-4-氯吡啶的绿色制备方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015006100A1 (en) 2013-07-08 2015-01-15 Bristol-Myers Squibb Company Aryl amide kinase inhibitors
WO2015054358A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolotriazine kinase inhibitors
RS58062B1 (sr) 2014-04-02 2019-02-28 Bristol Myers Squibb Co Biaril inhibitori kinaze
US10174044B2 (en) 2015-04-10 2019-01-08 Bristol-Myers Squibb Company Fused pyridines as kinase inhibitors
KR20180056765A (ko) 2015-10-01 2018-05-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 비아릴 키나제 억제제
JP6864674B2 (ja) 2015-10-01 2021-04-28 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ビアリールキナーゼ阻害剤
CN110283119A (zh) * 2018-04-20 2019-09-27 长沙理工大学 一种合成全碳基取代吡啶衍生物的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3396165A (en) * 1965-06-14 1968-08-06 Rexall Drug Chemical 9-aminomethyl-3, 8-diloweralkyl-10-hydroxy-5-oxo-1, 2, 3, 4-tetrahydrobenzopyrano [3,4-c] pyridines
CN1381456A (zh) * 2001-04-18 2002-11-27 瑟维尔实验室 新型嘧啶－4－酮化合物、其制备方法和含有它们的药物组合物
CN102702212A (zh) * 2012-06-14 2012-10-03 湖南大学 N-(2-取代酰基）吡唑鱼藤酚及其作为药物的应用
CN105518005A (zh) * 2013-07-02 2016-04-20 百时美施贵宝公司 作为rock抑制剂的三环吡啶-甲酰胺衍生物

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE234270T1 (de) 1992-12-02 2003-03-15 Pfizer Cathecoldiether als selektive pde iv hemmungsmittel
US5709861A (en) 1993-04-22 1998-01-20 Emisphere Technologies, Inc. Compositions for the delivery of antigens
US5760050A (en) * 1996-03-07 1998-06-02 Warner-Lambert Company Antipsychotic method utilizing certain tetrahydrochromeno 3,4-c!pyridin-5-ones
DE60319686T2 (de) 2002-04-05 2009-04-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield Cyanamide als reversible hemmer von cystein proteasen
US20070155701A1 (en) * 2002-08-23 2007-07-05 Alexandros Makriyannis Keto cannabinoids with therapeutic indications
WO2004056744A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Janssen Pharmaceutica N.V. Adamantyl acetamides as hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
WO2004072018A1 (ja) 2003-02-12 2004-08-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited アミン誘導体
WO2005000309A2 (en) 2003-06-27 2005-01-06 Ionix Pharmaceuticals Limited Chemical compounds
CA2570694A1 (en) 2004-06-24 2006-02-02 Incyte Corporation Amido compounds and their use as pharmaceuticals
CN100494167C (zh) 2005-08-02 2009-06-03 天津大学 抗乙肝病毒的叔胺氧化物及制备方法和制备药物的应用
DE102005062098A1 (de) * 2005-12-22 2007-06-28 Merck Patent Gmbh Oxaphenanthren-Derivate
JP2007217408A (ja) 2006-01-19 2007-08-30 Tanabe Seiyaku Co Ltd 医薬組成物
HUE036165T2 (hu) 2006-04-07 2018-06-28 Vertex Pharma ATP-kötõ kazetta transzportereinek modulátorai
WO2008022155A2 (en) 2006-08-14 2008-02-21 Wyeth Methods of identifying agents for treating neurological disorders
WO2009010824A1 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Glenmark Pharmaceuticals, S.A. Dihydrochromenopyrazole derivatives as vanilloid receptor ligands
WO2012110860A1 (en) * 2011-02-17 2012-08-23 Glenmark Pharmaceuticals S.A. TRICYCLIC COMPOUNDS AS mPGES-1 INHIBITORS
EP2834243B1 (en) 2012-03-09 2018-04-25 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. PYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE-BASED COMPOUNDS, COMPOSITIONS COMPRISING THEM, AND METHODS OF THEIR USE
MX347917B (es) 2012-03-09 2017-05-17 Lexicon Pharmaceuticals Inc Compuestos a base de imidazo[1,2-b]piridazina, composiciones que los comprenden, y metodos para su uso.
DK2822555T3 (en) 2012-03-09 2018-02-05 Lexicon Pharmaceuticals Inc Inhibition of adapter-associated kinase 1 for the treatment of pain
US8703953B2 (en) 2012-03-09 2014-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Aryl ether-base kinase inhibitors
US8901305B2 (en) 2012-07-31 2014-12-02 Bristol-Myers Squibb Company Aryl lactam kinase inhibitors
TW201506024A (zh) 2013-07-02 2015-02-16 必治妥美雅史谷比公司 作為有效ｒｏｃｋ抑制劑的三環甲醯胺衍生物
EP3044226B1 (en) 2013-09-11 2017-09-06 Bristol-Myers Squibb Company Aryl ether-base kinase inhibitors
CA2937529A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Aryl lactam kinase inhibitors

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3396165A (en) * 1965-06-14 1968-08-06 Rexall Drug Chemical 9-aminomethyl-3, 8-diloweralkyl-10-hydroxy-5-oxo-1, 2, 3, 4-tetrahydrobenzopyrano [3,4-c] pyridines
CN1381456A (zh) * 2001-04-18 2002-11-27 瑟维尔实验室 新型嘧啶－4－酮化合物、其制备方法和含有它们的药物组合物
CN102702212A (zh) * 2012-06-14 2012-10-03 湖南大学 N-(2-取代酰基）吡唑鱼藤酚及其作为药物的应用
CN105518005A (zh) * 2013-07-02 2016-04-20 百时美施贵宝公司 作为rock抑制剂的三环吡啶-甲酰胺衍生物

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109400524A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 河南师范大学 一种3-醛基-4-氯吡啶的绿色制备方法

Also Published As

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