CN105121407A

CN105121407A - 用于治疗癌症的苯甲酸衍生物mdm2抑制剂

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Publication number: CN105121407A
Application number: CN201480011184.XA
Authority: CN
Inventors: Y.鲁
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2013-02-28
Filing date: 2014-02-26
Publication date: 2015-12-02
Anticipated expiration: 2034-02-26
Also published as: US8952036B2; US20140243372A1; UY35353A; AR094970A1; CA2902856C; JP2016510028A; MX368703B; TW201505630A; JP6266659B2; MX2015011245A; WO2014134201A1; CA2902856A1; CN105121407B; AU2014223547A1; AU2014223547B2; EP2961735A1; EP2961735B1

Abstract

本发明提供MDM2抑制剂化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物用作治疗剂，特别是用于治疗癌症。本发明还涉及含有MDM2抑制剂的药物组合物。

Description

用于治疗癌症的苯甲酸衍生物MDM2抑制剂

发明领域

本发明涉及用作治疗剂，特别是用于治疗癌症的MDM2抑制剂。本发明还涉及含有MDM2抑制剂的药物组合物。

发明背景

p53是通过激活细胞周期停滞、凋亡、衰老和DNA修复中所涉及的许多基因的转录而响应于细胞应激的肿瘤抑制剂和转录因子。与p53激活是由不常见原因引起的正常细胞不同，肿瘤细胞处于来自包括缺氧和促凋亡癌基因激活在内的各种损害的恒定细胞应激下。因而，对肿瘤中p53途径的灭活具有强的选择性优势，并且已提出消除p53功能可能是肿瘤存活的前提。为了支持这一观点，三个调查研究组已经使用小鼠模型证明p53功能的缺少是已建立肿瘤的维持的持续要求。当调查研究人员恢复p53灭活的肿瘤的p53功能时，该肿瘤消退。

在50％的实体瘤和10％的液体瘤中，p53通过突变和/或缺失来进行灭活。在癌症中，p53途径的其他主要成员也发生遗传或表观遗传改变。MDM2是一种癌蛋白质，它抑制p53功能并且它以报道高达10％的发生率被基因扩增激活。MDM2继而被另一种肿瘤抑制剂p14ARF抑制。p53下游的改变被认为可能负责至少部分地灭活p53^WT肿瘤(p53野生型)中的p53途径。为了支持这一概念，一些p53^WT肿瘤似乎显示出降低的凋亡功能，但它们经受细胞周期停滞的能力仍然是完整的。一种癌症治疗策略涉及使用结合MDM2并抵消它与p53的相互作用的小分子。MDM2通过三种机制抑制p53活性：1)用作E3泛素连接酶以促进p53降解；2)结合至p53转录激活结构域并阻断p53转录激活结构域；以及3)从细胞核向细胞质输出p53。这三种机制都将通过抵消MDM2-p53相互作用来进行阻断。特别地，这种治疗策略可以应用于p53^WT肿瘤，并且利用小分子MDM2抑制剂进行的研究已经显示出肿瘤生长在体外和体内有希望地减小。进一步地，在患有p53-灭活的肿瘤的患者中，由MDM2抑制引起的正常组织中野生型p53的稳定化可能允许选择性地保护正常组织免受有丝分裂毒物的损害。

本发明涉及能够抑制p53和MDM2之间的相互作用并且能够激活p53下游效应基因的化合物。因此，本发明化合物将可用于治疗癌症、细菌感染、病毒感染、溃疡和炎症。特别地，本发明化合物可用于治疗诸如乳腺肿瘤、结肠肿瘤、肺肿瘤和前列腺肿瘤的实体瘤以及诸如淋巴瘤和白血病的液体瘤。如本文所使用的，MDM2意指人MDM2蛋白，并且p53意指人p53蛋白。应注意，人MDM2也可以称为HDM2或hMDM2。

发明概述

在实施方案1中，本发明提供化合物

或其药学上可接受的盐。

在实施方案2中，本发明提供化合物

在实施方案3中，本发明提供药物组合物，其包含实施方案1或2中任一项所述的化合物，和药学上可接受的赋形剂。

在实施方案4中，本发明提供治疗需要其的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效剂量量的根据实施方案1至2中任一项所述的化合物。

在实施方案5中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkett'slymphoma)、急性或慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤、或骨肉瘤。

在实施方案6中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是膀胱癌。

在实施方案7中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

在实施方案8中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是结肠癌。

在实施方案9中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是直肠癌。

在实施方案10中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是肾癌。

在实施方案11中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是肝癌。

在实施方案12中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是小细胞肺癌。

在实施方案13中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌。

在实施方案14中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是食道癌。

在实施方案15中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是胆囊癌。

在实施方案16中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是卵巢癌。

在实施方案17中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是胰腺癌。

在实施方案18中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是胃癌。

在实施方案19中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是子宫颈癌。

在实施方案20中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是甲状腺癌。

在实施方案21中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是前列腺癌。

在实施方案22中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是皮肤癌。

在实施方案23中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是急性淋巴细胞性白血病。

在实施方案24中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是慢性骨髓性白血病。

在实施方案25中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是急性成淋巴细胞性白血病。

在实施方案26中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是B细胞淋巴瘤。

在实施方案27中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是T细胞淋巴瘤。

在实施方案28中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是霍奇金淋巴瘤。

在实施方案29中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤。

在实施方案30中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是毛细胞淋巴瘤。

在实施方案31中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是伯基特氏淋巴瘤。

在实施方案32中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是急性骨髓性白血病。

在实施方案33中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是慢性骨髓性白血病。

在实施方案34中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是黑色素瘤。

在实施方案35中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是子宫内膜癌。

在实施方案36中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是头颈癌。

在实施方案37中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是成胶质细胞瘤。

在实施方案38中，本发明提供实施方案4的方法，其中所述癌症是骨肉瘤。

在实施方案39中，本发明提供实施方案4或6至38中任一项的方法，其中所述癌症被鉴定为p53野生型。

发明详述

本发明提供用作治疗剂，特别是用于治疗癌症的MDM2抑制剂。本发明还涉及含有MDM2抑制剂的药物组合物。

符号“–”代表共价键并且也可以在基团中用来指示与另一个基团的连接点。在化学结构中，该符号常用于表示分子中的甲基。

术语“包含”是指开放式的，包括指示的组分但不排除其他成分。

术语“治疗有效量”是指改善、减轻或消除特定疾病或病状的一个或多个症状，或者预防或延迟特定疾病或病状的一个或多个症状发作的化合物的量。

术语“患者”和“受试者”可以互换地使用，并且意指动物如狗、猫、牛、马、羊和人。具体的患者是哺乳动物。术语患者包括雄性和雌性患者。

术语“药学上可接受的”意指所提及的物质(诸如本发明化合物、或该化合物的盐、或含有该化合物的制剂、或特定赋形剂)适合于向患者施用。

术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”等包括预防性(例如，防治性)治疗和姑息性治疗。

术语“赋形剂”意指不同于通常包括的用于制剂和/或施用于患者的活性药物成分(API)的任何药学上可接受的添加剂、载体、稀释剂、佐剂，或其他成分。

本发明化合物以治疗有效量向患者施用。该化合物可以单独地施用或作为药学上可接受的组合物或制剂的一部分来施用。另外，该化合物或组合物可以例如通过推注一次性地施用、通过例如系列片剂来多次施用，或者例如使用透皮递送来在一段时间内基本上均一地递送。还要注意，该化合物的剂量可以随时间变化。

另外，本发明化合物可以单独地施用、或者与其他药物活性化合物联合施用。所述其他药物活性化合物可旨在治疗与本发明化合物治疗的疾病或病状相同或不同的疾病或病状。如果患者将接受或正接受多种药物活性化合物，则该化合物可以同时或相继施用。例如，在片剂的情况下，该活性化合物可以存在于一个片剂中或存在于分开的片剂中，所述分开的片剂可以一次性施用或以任何顺序相继施用。另外，应认识到该组合物可以为不同形式。例如，一种或多种化合物可以经由片剂递送，而另一种化合物经由注射施用或作为糖浆口服施用。考虑了所有组合、递送方法和施用顺序。

术语“癌症”意指以不受调节的细胞生长为特征的哺乳动物的生理病状。癌症的一般类别包括癌、淋巴瘤、肉瘤和母细胞瘤。

本发明化合物可用于治疗癌症。治疗癌症的方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的化合物、或其药学上可接受的盐。

本发明化合物可用于治疗肿瘤。治疗肿瘤的方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的化合物、或其药学上可接受的盐。

本发明还涉及本发明化合物在制造用于治疗诸如癌症的病状的药品中的用途。

可用本发明化合物治疗的癌症包括但不限于，癌诸如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴谱系造血系统肿瘤(包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤)；骨髓谱系造血系统肿瘤(包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞白血病)；间充质起源的肿瘤(包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤以及其他肉瘤，例如软组织肉瘤和骨肉瘤)；中枢和外周神经系统的肿瘤(包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和神经鞘瘤)；以及其他肿瘤(包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病(xenoderomapigmentosum)、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡状癌和卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma))。可用本发明化合物治疗的其他癌症包括子宫内膜癌、头颈癌、胶质母细胞瘤、恶性腹水和造血系统癌症。

可通过本发明化合物治疗的具体癌症包括软组织肉瘤、骨癌(如骨肉瘤)、乳腺肿瘤、膀胱癌、李法美尼(Li-Fraumeni)综合征、脑肿瘤、横纹肌肉瘤、肾上腺皮质癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌，和急性骨髓性白血病(AML)。

在涉及癌症治疗的本发明特定实施方案中，该癌症被鉴定为p53野生型(p53^WT)。在另一个特定实施方案中，该癌症被鉴定为p53^WT和CDKN2A突变体。在另一方面，本发明提供了用于确定哪些患者应施用本发明化合物的诊断。例如，可以获取患者癌细胞样品并进行分析以相对于p53和/或CDKN2A确定该癌细胞的状态。在一方面，在患有相对于p53突变的癌症的患者中选出患有p53^WT癌症的患者用于治疗。在另一方面，将患有为p53^WT并且具有突变体CDNK2A蛋白的癌症的患者从不具有这些特征的患者中选出。分析用癌细胞的获取是本领域技术人员熟知的。术语“p53^WT”意指由基因组DNA序列no.NC_000017第9版(7512445..7531642)(GenBank)编码的蛋白质；由cDNA序列no.NM_000546(GenBank)编码的蛋白质；或具有GenBank序列no.NP_000537.3的蛋白质。术语“CDNK2A突变体”意指非野生型的CDNK2A蛋白质。术语“CDKN2A野生型”意指由基因组DNA序列no.9:21957751-21984490(EnsemblID)编码的蛋白质；由cDNA序列no.NM_000077(GenBank)或NM_0581959GenBank)编码的蛋白质或；或具有GenBank序列no.NP_000068或NP_478102的蛋白质。

本发明化合物也可用于治疗过度增殖性病症如甲状腺增生症(尤其是格雷夫斯病(Grave'sdisease))，和囊肿(如卵巢间质血管过多，这是多囊卵巢综合症(Stein-Leventhal综合征)的特征)。

本发明化合物也可用于治疗下列疾病或病状：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺气肿、银屑病、接触性皮炎、结膜炎、变态反应性鼻炎、系统性红斑狼疮(SLE)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn’sdisease)、多发性硬化症、类风湿性关节炎、炎性肠疾病、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease)、动脉粥样硬化和亨廷顿氏病(Huntington’sdisease)。

本发明化合物也可用于治疗炎性疾病、缺氧、溃疡、病毒感染、细菌感染和细菌性败血症。

本发明化合物或其药学上可接受的盐也可以与一种或多种另外的药物活性化合物/药物活性剂联合施用。在特定实施方案中，所述另外的药物活性剂是可用于治疗癌症的药剂。例如，另外的药物活性剂可以选自抗肿瘤剂、抗血管生成剂、化疗剂和肽性癌症治疗剂。在又一个实施方案中，抗肿瘤剂选自抗生素型剂、烷化剂、抗代谢物剂、激素剂、免疫学剂、干扰素型剂、激酶抑制剂、混杂剂(miscellaneousagent)和它们的组合。应注意，另外的药物活性化合物/药物活性剂可以是传统的小有机化学分子或者可以是诸如蛋白质、抗体、肽体、DNA、RNA的大分子或此类大分子的片段。

可用于癌症治疗以及可与本发明的一种或多种化合物联合使用的特定药物活性剂的实例包括：氨甲蝶呤(methotrexate)；他莫昔芬(tamoxifen)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)；羟基脲(hydroxyurea)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；顺铂(cisplatin)；卡铂(carboplatin)；道诺霉素(daunorubicin)；多柔比星(doxorubicin)；依托泊苷(etoposide)；长春碱(vinblastine)；长春新碱(vincristine)；紫杉醇(pacitaxel)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；伊达比星(idarubicin)；更生霉素(dactinomycin)；伊马替尼(imatinib)；吉西他滨(gemcitabine)；六甲蜜胺(altretamine)；天冬酰胺酶；博莱霉素(bleomycin)；卡培他滨(capecitabine)；卡莫司汀(carmustine)；cladisatNaCl水溶液；环磷酰胺(cyclophosphamine)；阿糖胞苷(cytarabine)；达卡巴嗪(decarazine)；多西他赛(docetaxel)；伊达比星(idarubicin)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊立替康(irinotecan)；氟达拉滨(fludarabine)；丝裂霉素(mitosmycin)；米托坦(mitoxane)；米托蒽醌(mitoxantrone)；拓扑替康(topotecan)；长春瑞滨(vinorelbine)；阿霉素(adriamycin)；米拉霉(mithram)；咪喹莫特(imiquimod)；阿仑珠单抗(alemtuzmab)；依西美坦(exemestane)；贝伐珠单抗(bevacizumab)；西妥昔单抗(cetuximab)；阿扎胞苷(azacitidine)；氯法拉滨(clofarabine)；地西他滨(decitabine)；达沙替尼(desatinib)；右丙亚胺(dexrazoxane)；多西他赛(docetaxel)；表柔比星(epirubicin)；奥沙利铂(oxaliplatin)；厄洛替尼(erlotinib)；雷洛昔芬(raloxifene)；氟维司群(fulvestrant)；来曲唑(letrozole)；吉非替尼(gefitinib)；吉妥珠单抗(gemtuzumab)；曲妥珠单抗(trastuzumab)；吉非替尼(gefitinib)；伊沙匹隆(ixabepilone)；拉帕替尼(lapatinib)；来那度胺(lenalidomide)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；替莫唑胺(temozolomide)；奈拉滨(nelarabine)；索拉非尼(sorafenib)；尼洛替尼(nilotinib)；培门冬酶(pegaspargase)；培美曲塞(pemetrexed)；利妥昔单抗(rituximab)；达沙替尼(dasatinib)；萨立多胺(thalidomide)；蓓萨罗丁(bexarotene)；替西罗莫司(temsirolimus)；硼替佐米(bortezomib)；伏立诺他(vorinostat)；卡培他滨(capecitabine)；唑来膦酸(zoledronicacid)；阿那曲唑(anastrozole)；舒尼替尼(sunitinib)；阿瑞吡坦(aprepitant)和奈拉滨，或其药学上可接受的盐。

可用于癌症治疗以及可与本发明化合物联合使用的另外的药物活性剂包括：血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂、肝细胞生长因子/分散因子(scatterfactor)(HGF/SF)抑制剂、血管生成素1和/或2抑制剂、肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)激动剂、重组人apo2配体(TRAIL)、胰岛素样生长因子1类受体(IGFR-1)抑制剂、cFMS抑制剂、HER2抑制剂、c-met抑制剂、极光激酶抑制剂、CDK4和/或6抑制剂，和B-raf抑制剂。

可用于癌症治疗以及可与本发明化合物联合使用的进一步的另外的药物活性剂包括抗体药物缀合物(ADC)，其中结合至蛋白质的抗体(优选在癌细胞上)使用接头与对癌细胞有害的化学化合物缀合。对癌细胞有害的化学化合物的实例包括类美登素衍生物和奥雷司他汀(auristatin)衍生物。

可用于癌症治疗以及可与本发明化合物联合使用的更进一步的另外的药物活性剂包括：阿法依泊汀(epoetinalfa)；阿法达依泊汀(darbepoetinalfa)；帕尼单抗(panitumumab)；聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)；帕利夫明(palifermin)；非格司亭(filgrastim)；德尼单抗(denosumab)；安西司亭(ancestim)；AMG102；AMG319；AMG386；AMG479(盖尼塔单抗(Ganitumab))；AMG511、AMG900、AMG655(可那木单抗(Conatumumab))；AMG745；AMG951；以及AMG706(莫特塞尼(Motesanib))，或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本发明涉及本发明化合物与一种或多种作为磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)途径中的蛋白质的抑制剂的药剂的联合使用。本发明化合物与PI3K途径中的蛋白质的抑制剂的联合已经在癌细胞生长测定中显示出协同作用，包括增强细胞凋亡和细胞杀伤。PI3K途径中的蛋白质的实例包括PI3K、mTOR和PKB(也称为Akt)。PI3K蛋白质以包括α、β、δ或γ在内的数种同工型存在。考虑到可与本发明化合物联合使用的PI3K抑制剂可对一种或多种同工型有选择性。选择性意指该化合物相对于其他同工型更强地抑制一种或多种同工型。选择性是本领域人员熟知的概念，并且可以在体外或基于细胞的测定中测量具有熟知的活性。优选的选择性包括相对于其他同工型而言对一种或多种同工型具有大于2倍(优选10倍，或更优选100倍)的选择性。在一方面，可与本发明化合物联合使用的PI3K抑制剂是PI3Kα选择性抑制剂。在另一方面，该化合物是PI3Kδ选择性抑制剂。

可与本发明的一种或多种化合物联合使用的PI3K抑制剂的实例包括以下文献中公开的那些：PCT公开申请号WO2010/151791、PCT公开申请号WO2010/151737、PCT公开申请号WO2010/151735、PCT公开申请号WO2010151740、PCT公开申请号WO2008/118455、PCT公开申请号WO2008/118454、PCT公开申请号WO2008/118468、美国公开申请号US20100331293、美国公开申请号US20100331306、美国公开申请号US20090023761、美国公开申请号US20090030002、美国公开申请号US20090137581、美国公开申请号US2009/0054405、美国公开申请号U.S.2009/0163489、美国公开申请号US2010/0273764、美国公开申请号U.S.2011/0092504，或PCT公开申请号WO2010/108074。

用于与本发明化合物联合使用的优选PI3K抑制剂包括：

、或其药学上可接受的盐。

还优选下式IIa的化合物、或其药学上可接受的盐，

其中X¹是氟或氢；Y¹是氢或甲基；且Z¹是氢或甲基。

既抑制PI3K又抑制mTOR的化合物(双重抑制剂)是已知的。在又一方面，本发明提供了PI3K和mTOR双重抑制剂在与本发明化合物的联合使用中的应用。

mTOR是PI3K途径中的蛋白质。本发明的另一方面将mTOR抑制剂与本发明化合物联合使用。可与本发明化合物联合使用的mTOR抑制剂包括在以下文献中公开的那些：PCT公开申请号WO2010/132598或PCT公开申请号WO2010/096314。

PKB(Akt)也是PI3K途径中的蛋白质。本发明的另一方面将mTOR抑制剂与本发明化合物联合使用。可与本发明化合物联合使用的PKB抑制剂包括以下文献中公开的那些：美国专利号7,354,944、美国专利号7,700,636、美国专利号7,919,514、美国专利号7,514,566、美国专利申请公开号US2009/0270445A1、美国专利号7,919,504、美国专利号7,897,619，或PCT公开申请号WO2010/083246A1。

本发明化合物可与CDK4和/或6抑制剂联合使用。可与本发明化合物联合使用的CDK4和/或6抑制剂包括以下文献中公开的那些：PCT公开申请号WO2009/085185或美国专利申请公开号US2011/0097305。

本发明化合物也可以与治疗恶心的药物活性剂联合使用。可用于治疗恶心的药剂的实例包括：屈大麻酚(dronabinol)、格拉司琼(granisetron)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、昂丹司琼(ondansetron)，和丙氯拉嗪(prochlorperazine)，或其药学上可接受的盐。

另外，本发明化合物可以与可用于治疗诸如以下的癌症的其他药剂联合使用：乙酰吗喃(acemannan)、阿柔比星(aclarubicin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿利维A酸(alitretinoin)、阿米斯丁(amifostine)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿格拉宾(arglabin)、三氧化二砷、BAM002(Novelos)、比卡鲁胺(bicalutamide)、溴尿苷(broxuridine)、西莫白介素(celmoleukin)、西曲瑞克(cetrorelix)、克拉屈滨(cladribine)、克霉唑(clotrimazole)、DA3030(Dong-A)、达利珠单抗(daclizumab)、地尼白介素(denileukindiftitox)、地洛瑞林(deslorelin)、地拉齐普(dilazep)、二十二烷醇、度骨化醇(doxercalciferol)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、溴隐亭(bromocriptine)、阿糖胞苷(cytarabine)、HIT双氯芬酸(HITdiclofenac)、干扰素α、维甲酸(tretinoin)、依地福新(edelfosine)、依决可单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、乙嘧替氟(emitefur)、表柔比星、倍他依泊汀(epoetinbeta)、磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)、依昔舒林(exisulind)、法倔唑(fadrozole)、非那雄胺(finasteride)、磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)、福美坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、硝酸镓(galliumnitrate)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabzogamicin)、吉美拉西(gimeracil)/奥替拉西(oteracil)/替加氟(tegafur)组合、格尼可品(glycopine)、戈舍瑞林(goserelin)、庚铂(heptaplatin)、人绒毛膜促性腺激素、人胎儿α胎蛋白、伊班膦酸(ibandronicacid)、干扰素α、天然干扰素α、干扰素α-2、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-N1、干扰素αt-n3、复合α(alfacon-1)干扰素、天然干扰素α、干扰素β、干扰素β-1a、干扰素β-1b、天然干扰素γ、干扰素γ-1a、干扰素γ-1b、白介素-1β、碘苄胍(iobenguane)、伊索拉定(irsogladine)、兰瑞肽(lanreotide)、LC9018(Yakult)、来氟米特(leflunomide)、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinansulfate)、来曲唑、白细胞α干扰素、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑+氟尿嘧啶(levamisole+fluorouracil)、利阿唑(liarozole)、洛铂(lobaplatin)、氯尼达明(lonidamine)、洛伐他汀(lovastatin)、马索罗酚(masoprocol)、美拉胂醇(melarsoprol)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、错配双链RNA、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、米托蒽醌、莫拉司亭(molgramostim)、那法瑞林(nafarelin)、钠洛酮+喷他佐辛(naloxone+pentazocine)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、尼鲁米特(nilutamide)、诺斯卡品(noscapine)、新红细胞生成刺激蛋白(novelerythropoiesisstimulatingprotein)、NSC631570奥曲肽(octreotide)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、奥沙特隆(osaterone)、紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸(pamidronicacid)、聚乙二醇干扰素α-2b、戌聚糖聚硫酸钠(pentosanpolysulfatesodium)、喷司他丁(pentostatin)、溶链菌(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、家兔抗胸腺细胞多克隆抗体、聚乙二醇干扰素α-2a、卟吩姆钠(porfimersodium)、雷替曲塞(raltitrexed)、拉布立酶(rasburicase)、依替膦酸铼Re186、RII维甲酰胺(retinamide)、罗莫肽(romurtide)、来昔决南(lexidronam)钐(153Sm)、沙格司亭(sargramostim)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、氯化锶-89、苏拉明(suramin)、他索纳明(tasonermin)、他扎罗汀(tazarotene)、替加氟(tegafur)、替莫泊芬(temoporfin)、替尼泊苷(teniposide)、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、胸腺法新(thymalfasin)、促甲状腺素α、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)-碘131、曲奥舒凡(treosulfan)、维甲酸、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、天然肿瘤坏死因子α、乌苯美司(ubenimex)、膀胱癌疫苗、Maruyama疫苗、黑色素瘤裂解物疫苗、戊柔比星(valrubicin)、维替泊芬(verteporfin)、维鲁利秦(virulizin)、净司他丁斯酯(zinostatinstimalamer)、阿巴瑞克(abarelix)、AE941(Aeterna)、氨莫司汀(ambamustine)、反义寡核苷酸、bcl-2(Genta)、APC8015(Dendreon)、右旋氨格鲁米特(dexaminoglutethimide)、地吖醌(diaziquone)、EL532(Elan)、EM800(Endorecherche)、恩尿嘧啶(eniluracil)、依他硝唑(etanidazole)、维甲酰酚胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)SD01(Amgen)、加洛他滨(galocitabine)、胃泌素17免疫原、HLA-B7基因疗法(Vical)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、二盐酸组胺、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、伊洛马司他(ilomastat)、IM862(Cytran)、白介素-2、伊丙昔芬(iproxifene)、LDI200(Milkhaus)、来立司亭(leridistim)、林妥珠单抗(lintuzumab)、CA125单克隆抗体(MAb)(Biomira)、癌MAb(JapanPharmaceuticalDevelopment)、HER-2和FcMAb(Medarex)、个体基因型105AD7MAb(CRCTechnology)、个体基因型CEAMAb(Trilex)、LYM-1-碘131MAb(Techniclone)、多形态上皮粘蛋白-钇90MAb(Antisoma)、马立马司他(marimastat)、美诺立尔(menogaril)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫特沙芬钆(motexafingadolinium)、MX6(Galderma)、诺拉曲塞(nolatrexed)、P30蛋白、培维索孟(pegvisomant)、泊非霉素(porfiromycin)、普啉司他(prinomastat)、RL0903(Shire)、卢比替康(rubitecan)、沙铂(satraplatin)、苯基乙酸钠、膦门冬酸(sparfosicacid)、SRL172(SRPharma)、SU5416(Pfizer)、TA077(Tanabe)、四硫钼酸盐(tetrathiomolybdate)、噻布拉亭(thaliblastine)、促血小板生成素、本紫红素乙酯锡(tinethyletiopurpurin)、替拉扎明(tirapazamine)、癌症疫苗(Biomira)、黑素瘤疫苗(NewYorkUniversity)、黑素瘤疫苗(SloanKetteringInstitute)、黑素瘤溶癌物(oncolysate)疫苗(NewYorkMedicalCollege)、病毒性黑色素瘤细胞裂解物疫苗(RoyalNewcastleHospital)，或伐司朴达(valspodar)。注意，上面列举的药剂在适当的时候也可以作为药学上可接受的盐施用。

本发明化合物也可以与放射治疗、激素治疗、手术治疗和免疫治疗联合使用，所述治疗是本领域技术人员熟知的。

因为本发明的一方面考虑了利用可分开施用的药物活性化合物联合治疗所述疾病/病状，因此本发明还涉及将分开的药物组合物以试剂盒形式组合。该试剂盒包含两种分开的药物组合物：本发明化合物和第二药物化合物。该试剂盒包含用于容纳分开的组合物的容器(如分开的瓶或分开的箔包装)。容器的另外的实例包括注射器、盒和袋。通常，该试剂盒包括分开组分的使用说明书。当所述分开的组分优选以不同剂型施用(例如口服和肠胃外施用)、以不同的给药间隔施用，或者当处方医生或兽医需要滴定组合中的各种组分时，试剂盒形式是特别有利的。

此种试剂盒的实例是所谓的泡罩包装。泡罩包装是包装工业中熟知的，并且被广泛地用于包装药物单位剂型(片剂、胶囊剂等)。泡罩包装一般由覆盖着优选透明的塑料材料箔的相对坚硬的材料的薄片组成。在包装过程中，在塑料箔中形成凹陷。凹陷具有待包装的片剂或胶囊剂的大小和形状。接着，将片剂或胶囊剂置于凹陷中，并在与形成凹陷的方向相反的箔面上用相对坚硬的材料的薄片密封该塑料箔。结果片剂或胶囊剂被密封在塑料箔与薄片之间的凹陷中。优选地，薄片的强度使得通过用手在凹陷上施加压力，由此在薄片的凹陷处形成开口，可将片剂或胶囊剂从泡罩包装中取出。然后可经由所述开口取出片剂或胶囊剂。

可能需要在试剂盒上提供记忆帮助，例如以紧靠片剂或胶囊剂的数字的形式，借此该数字与所指定的片剂或胶囊剂应当被服用的用药方案的天数一致。此种记忆帮助的另一个实例是在卡片上印刷的日历，例如如下“第一周，星期一、星期二......等等......，第二周，星期一、星期二......”等。记忆帮助的其他变型是显而易见的。“日剂量”可以是在给定日需要服用的一个片剂或胶囊剂或几个丸剂或胶囊剂。此外，本发明化合物的日剂量可以由一个片剂或胶囊剂组成，而第二化合物的日剂量可以由数个片剂或胶囊剂组成，反之亦然。记忆帮助应当反映这一点并且帮助纠正活性剂的施用。

在本发明的另一个特定实施方案中，提供了设计用来以其预期使用顺序一次一个地配送日剂量的配送器。优选给配送器装配记忆帮助，以进一步促进对给药方案的顺应性。此种记忆帮助的实例是指明已配送的日剂量数目的机械计数器。此种记忆帮助的另一个实例是电池供电的微芯片存储器，该存储器与液晶读数或声音提醒信号耦接，所述信号(例如)读出上一个日剂量的服用日期和/或在要服用下一个剂量时提醒人们。

需要时，本发明化合物和其他药物活性化合物可以经口服、直肠、肠胃外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(例如粉剂、膏剂或滴剂)，或作为口腔或鼻腔喷雾剂施用给患者。考虑了施用药物活性剂的领域中技术人员使用的所有方法。

适合于肠胃外注射的组合物可以包含生理学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散剂、混悬剂或乳剂，以及用于重构成无菌可注射溶液或分散剂的无菌粉末。适宜的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例包括：水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其适宜的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。(例如)通过使用包衣(如卵磷脂)，在分散剂的情况下通过维持所需粒度，和通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。

这些组合物也可以含有佐剂，诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过添加多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)可防止微生物污染。可能还需要包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用延缓吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)，可延长可注射药物组合物的吸收。

用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、粉剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性常规赋形剂(或载体)(如柠檬酸钠或磷酸二钙)或以下物质混合：(a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇和硅酸；(b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如甘油；(d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐，和碳酸钠；(a)溶液阻滞剂，例如石蜡；(f)吸收促进剂，例如季铵类化合物；(g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如高龄土和膨润土；以及(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠或它们的混合物。在胶囊剂和片剂的情况下，剂型也可以包含缓冲剂。

使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂时，相似类型的固体组合物也可以在软质或硬质填充明胶胶囊中用作填充剂。

固体剂型，如片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可以被制备成带有包衣和外壳，如肠溶衣和本领域熟知的其他包衣。它们还可以含有遮光剂，并且还可以为这样的组合物，其在肠道的一定部位以延缓的方式释放一种或多种活性化合物。可使用的包埋式组合物的实例是聚合物和蜡。在适当的时候，活性化合物也可以呈含有一种或多种上述赋形剂的微包囊形式。

用于口服施用的液体剂型包括药物学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可以含有本领域常用的惰性稀释剂(如水或其他溶剂)、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类，特别是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油，和芝麻籽油、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。

除了此类惰性稀释剂，该组合物还可以包括佐剂，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。除了活性化合物之外，混悬剂还可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂，和黄芪胶，或这些物质的混合物等。

用于直肠施用的组合物优选为栓剂，其可以通过将本发明化合物与适宜的无剌激性的赋形剂或载体(如可可油、聚乙二醇或栓剂用蜡)混合来制备，所述适宜的无剌激性的赋形剂或载体在常温下为固态但在体温下为液态，因此在直肠或阴道腔内融化并且释放活性组分。

用于本发明化合物局部施用的剂型包括膏剂、粉剂、喷雾剂和吸入剂。在无菌条件下将一种或多种活性化合物与生理学上可接受的载体和可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼科制剂、眼用膏剂、粉剂和溶液剂也被考虑为在本发明的范围内。

本发明化合物可以以约0.1mg/天至约3,000mg/天范围内的剂量水平施用给患者。对于体重为约70kg的正常成人，约0.01mg/千克体重至约100mg/千克体重的范围内的剂量通常是充足的。可使用的具体剂量和剂量范围取决于许多因素，包括患者的要求、受治疗的病状或疾病的严重性，和所施用化合物的药理活性。对于特定患者的剂量范围和最优剂量的确定在本领域普通技术人员的能力范围之内。

本发明化合物可以作为药学上可接受的盐、酯、酰胺或前药施用。术语“盐”是指本发明化合物的无机盐和有机盐。该盐可以在化合物的最终的分离和纯化期间原位制得，或者可通过单独地使呈游离碱或酸形式的纯化化合物与适宜的有机或无机碱或酸反应，并分离出由此形成的盐来制得。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐，和月桂基磺酸盐(laurylsulphonatesalt)等。该盐可以包括基于碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠离子、锂离子、钾离子、钙离子、镁离子等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、乙基胺等。参见例如S.M.Berge等人,"PharmaceuticalSalts,"JPharmSci,66:1-19(1977)。

本发明化合物的药学上可接受的酯的实例包括C₁-C₈烷基酯。可接受的酯也包括C₅-C₇环烷基酯，以及芳基烷基酯(如苄基酯)。经常使用C₁-C₄烷基酯。本发明化合物的酯可以根据本领域中熟知的方法制备。

本发明化合物的药学上可接受的酰胺的实例包括衍生自氨、C₁-C₈烷基伯胺，和C₁-C₈二烷基仲胺的酰胺。在仲胺的情况下，该胺也可以呈含有至少一个氮原子的5或6元杂环烷基形式。经常使用衍生自氨、C₁-C₃烷基伯胺和C₁-C₂二烷基仲胺的酰胺。本发明化合物的酰胺可以根据本领域技术人员熟知的方法制备。

术语“前药”意指在体内被转化从而产生本发明化合物的化合物。该转化可以通过多种机制发生，如通过在血液中水解发生。前药的使用的讨论提供在T.Higuchi和W.Stella,"ProdrugsasNovelDeliverySystems",theA.C.S.SymposiumSeries的第14卷，和BioreversibleCarriersinDrugDesign,编者EdwardB.Roche,AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987中。

为了说明这一点，因为本发明化合物含有羧酸官能团，所以前药可以包含通过用诸如以下的基团替代酸基团的氢原子而形成的酯：(C₁-C₈烷基、(C₂-C1₂)烷酰基氧甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰基氧)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧)乙基、具有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基甲基、3-酞基(phthalidyl)、4-巴豆酸内酯基(4-crotonolactonyl)、γ-丁内酯-4-基、二-N,N-(C₁-C₂)烷基氨基(C₂-C₃)烷基(诸如β-二甲氨基乙基)、氨基甲酰基-(C₁-C₂)烷基、N,N-二(C₁-C₂)烷基氨基甲酰基-(C₁-C₂)烷基和哌啶子基(C_2-3)烷基、吡咯烷子基-(C_2-3)烷基或吗啉代(C_2-3)烷基。

本发明化合物可以含有不对称或手性中心，并因此可以以不同的立体异构形式存在。考虑到，该化合物的所有立体异构形式以及它们的混合物(包括外消旋混合物)形成本发明的一部分。另外，本发明考虑了所有几何和位置异构体。例如，如果该化合物含有双键，则考虑顺式和反式形式(分别指定为Z和E)以及混合物。

根据立体异构体混合物的物理化学差异，通过已知的方法(诸如通过色谱法和/或分步结晶法)，可将它们(如非对映异构体混合物)分离为其单独的立体化学组分。对映异构体也可通过如下方式分离：通过与合适的光学活性化合物(例如醇)反应将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离出非对映异构体并将单独的非对映异构体转化(例如水解)成相应的纯对映异构体。此外，一些化合物可以是阻转异构体(例如取代的联芳基)。

本发明化合物可以以未溶剂化形式以及被药学上可接受的溶剂如水(水合物)、乙醇等溶剂化的形式存在。本发明考虑并包括了溶剂化和未溶剂化形式。

本发明化合物也有可能可以不同的互变异构体形式存在。考虑了本发明化合物的所有互变异构体。例如，四唑部分的所有互变异构形式都包括在本发明内。此外，例如，该化合物的所有酮-烯醇或亚胺-烯胺形式都包括在本发明内。

本领域技术人员将会认识到本文包含的化学名称和结构可以基于化合物的特定互变异构体。虽然可能使用了仅针对特定互变异构体的名称或结构，但是意图所有互变异构体都包括在本发明内，除非另外说明。

还意图本发明包括使用实验室技术(诸如合成化学工作者熟知的技术)在体外合成的化合物，或者使用体内技术(诸如通过代谢、发酵、消化等)合成的化合物。还考虑到，本发明化合物可以使用体外和体内技术的组合合成。

本发明还包括同位素标记的化合物，它们与本文列举的化合物相同，但是有一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子替代。可掺入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁶O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。在一方面，本发明涉及其中一个或多个氢原子被氘(²H)原子取代的化合物。

含有前述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明化合物在本发明的范围内。本发明的某些同位素标记的化合物，例如掺入放射性同位素(如³H和¹⁴C)的化合物可用于药物和/或基质组织分布测定。氚化(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素由于其易于制备和检测而是特别优选的。进一步地，用较重的同位素(诸如氘，即²H)取代可获得某些由较强的代谢稳定性所带来的治疗方面的优点，例如增加体内半衰期或降低剂量需求，并因此在某些情况下可能是优选的。本发明的同位素标记的化合物一般可以通过用容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂来制备。

本发明化合物可以以包括结晶状态在内的多种固体状态和作为无定形状态存在。本发明化合物的不同的结晶状态(也称为多晶型)，和无定形状态被考虑为本发明的一部分。

在合成本发明化合物时，可能需要使用某些离去基团。术语“离去基团”(“LG”)一般是指可被亲核试剂取代的基团。此类离去基团是本领域中已知的。离去基团的实例包括但不限于卤化物(例如，I、Br、F、Cl)、磺酸酯基(例如甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基)、硫化物(例如SCH₃)、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基苯并三唑等。亲核试剂的实例包括但不限于胺类、硫醇类、醇类、格氏试剂、阴离子物质(例如，醇盐、酰胺、负碳离子)等。

本文列举的所有专利、公开的专利申请和其他出版物都以引用的方式并入本文。

下面提供的实施例举例说明了本发明的具体实施方案。这些实施例旨在是代表性的，并不意图以任何方式限制权利要求的范围。除非另外说明，否则当本文针对固体使用百分比时，该百分比是针对所提到的固体组合物的重量百分比。当本文针对液体使用百分比时，该百分比是针对所提到的溶液的体积百分比。

通过配备有Bruker5-mmz轴梯度BBI探针的500MHzBrukerAvanceIII光谱仪系统(BrukerBiospin,Billerica,MA)；或通过配备有Bruker5-mmz轴梯度BBO探针的400MHzBrukerAvanceII或AvanceIII光谱仪系统获得¹H-NMR光谱。通常将样品溶解于600μLDMSO-d₆或CD₃OD用于NMR分析。¹H化学位移相对于在DMSO-d₆的d2.50ppm和CD₃OD的d3.30ppm下来自用于分析的氘化溶剂的残留质子信号作为参考。

列出显著峰，且其通常包括：质子数、多重性(s，单峰；d，二重峰；dd，双二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；brs，宽单峰)和以Hertz为单位的耦合常数。

通常在AgilentTechnologies6140QuadrupoleLC/MS质谱仪上记录电子电离(EI)质谱。质谱结果报道为质量与电荷的比率，其后面有时带有每个离子的相对丰度(在圆括号中)。下面实施例中的原料通常从商业来源(如Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)或经由文献程序获得。

本文中可使用以下缩写：

～约

+ve或pos.ion正离子

Δ加热

Ac乙酰基

Ac₂O乙酸酐

aq含水

AcOH乙酸

Bn苄基

Boc叔丁氧基碳基

BSA牛血清白蛋白

Bu丁基

Bz苯甲酰基

Calcd或Calc’d计算值

Conc.浓

CSA樟脑-10-磺酸

d天

DBU1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DCE二氯乙烷

DCM二氯甲烷

DDQ2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌

DEA二乙胺

Dess-Martin

1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氢-1,2-苯

periodinane；

并碘氧杂戊环-3-(1H)-酮

Dess-Martin试剂

DIEA或DIPEA二异丙基乙胺

DMAP4-二甲基氨基吡啶

DME1,2-二甲氧基乙烷

DMFN,N-二甲基甲酰胺

DMSO二甲基亚砜

DPPA叠氮磷酸二苯酯

dr非对映异构体比率

DTT二硫苏糖醇

DVB二乙烯基苯

N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳

EDC

二亚胺

ee或e.e.对映异构体过量

eq当量

ESI或ES电喷雾离子化

Et乙基

Et₂O乙醚

Et₃N三乙胺

EtOAc乙酸乙酯

EtOH乙醇

g克

h小时

O-(7-氮杂苯并三唑-1-基

HATU)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸

酯

O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基-脲

HBTU

鎓-六氟磷酸酯

Hex己烷

HMPA六甲基磷酰胺

HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HOBt羟基苯并三唑

HPLC高压液相色谱

IPA或iPrOH异丙醇

Jones试剂氧化铬(IV)和硫酸在水中的溶液

KHMDS六甲基二硅叠氮化钾

KOAc乙酸钾

LCMS、LC-MS或

液相色谱质谱法

LC/MS

LDA二异丙基氨基锂

LHMDS或LiHMDS六甲基二硅叠氮化锂

三仲丁基硼氢化锂(Sigma-Aldrich,

St.Louis)

M摩尔(molL^-1)

mCPBA间氯过氧苯甲酸

Me甲基

MeCN乙腈

MeI碘甲烷

MeOH甲醇

mg毫克

min分钟

mL毫升

M摩尔

MS质谱法

MsCl甲磺酰氯

MTBE或MtBE甲基叔丁基醚

m/z质荷比

NaHMDS六甲基二硅叠氮化钠

NaOtBu叔丁醇钠

NBSN-溴琥珀酰亚胺

nBuLi正丁基锂

NMON-甲基吗啉-N-氧化物

NMP1-甲基-2-吡咯烷酮

NMR核磁共振

三仲丁基硼氢化钠(Sigma-Aldrich,

St.Louis)

PBS磷酸盐缓冲盐水

PMB对甲氧基苄基

Pr丙基

ppm百万分之

PTFE聚四氟乙烯

p-tol对-甲苯酰基

rac外消旋

RP-HPLC或RPHPLC反相高压液相色谱

RT或rt或r.t.室温

二氯{(S)-(-)-2,2'-双[二(3,5-二甲苯

RuCl₂(S-xylbinap)(S-D基)膦基]-1,1'-联萘}[(2S)

AIPEN)-(+)-1,1-双(4-甲氧基苯基)-3-甲基

-1,2-丁二胺]钌(II)

sat.或sat’d或satd饱和的

SFC超临界流体色谱

TBAF四丁基氟化铵

TBDMS叔丁基二甲基甲硅烷基

TBDMS-Cl叔丁基二甲基氯甲硅烷

TBDPS叔丁基二苯基甲硅烷基

(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧化物

TEMPO

(oxidanyl)

tert或t叔

TFA三氟乙酸

THF四氢呋喃

TIPS三异丙基甲硅烷基

TLC薄层色谱

TMS三甲基甲硅烷基或三甲基硅烷

TPAP四丙基过钌酸铵

t_R保留时间

tBuOH叔丁醇

v/v体积/体积

实施例

本文呈示的化合物一般可以从商购可得的原料开始，并且使用本领域技术人员已知的合成技术来制备。

实施例1

2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(WO2011/153509(AmgenInc.)的实施例351)，于2011年12月8日公开。

步骤A.2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)乙酮

在1小时内将双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1M于四氢呋喃中，117mL)缓慢加入至2-(3-氯苯基)乙酸(10g,58.6mmol)于四氢呋喃(58mL)中的-78℃溶液。在-78℃搅拌40分钟后，在10分钟的时间内加入4-氯苯甲酸甲酯(10g,58.6mmol)于四氢呋喃(35mL)中的溶液。将反应在-78℃搅拌3小时然后升温至25℃。在25℃两小时后，将反应用饱和氯化铵水溶液淬灭，并在减压下去除大多数四氢呋喃。将残余物用乙酸乙酯萃取(2×100mL)。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液。产物从乙醚/戊烷重结晶以提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆,δppm):8.05(m,2H),7.62(m,2H),7.33(m,3H),7.21(brd,J＝7.3Hz,1H),4.45(s,2H).MS(ESI)＝265.1[M+H]⁺.

步骤B:4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯

将甲基丙烯酸甲酯(12.65mL,119mmol)加入至2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)乙酮(30g,113mmol，实施例1，步骤A)于四氢呋喃(283mL)中的溶液。然后加入叔丁醇钾(1.27g,11.3mmol)并将反应在室温搅拌2天。在真空下除去溶剂并替换为300mL乙酸乙酯。将有机相用盐水(50mL)、水(3×50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯，为约1:1的非对映异构体混合物。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.87(m,2H),7.38(m,2H),7.27-7.14(系列m,4H),4.61(m,1H),3.69(s,1.5H),3.60(s,1.5H),2.45(m,1H),2.34(m,1H),2.10(ddd,J＝13.9,9.4,5.5Hz,0.5H),1.96(ddd,J＝13.7,9.0,4.3Hz,0.5H),1.22(d,J＝7.0Hz,1.5H),1.16(d,J＝7.0,1.5H).MS(ESI)＝387.0[M+23]⁺.

步骤C:(3S,5R,6R)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮和(3R,5R,6R)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮

将4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯(40g,104.0mmol，实施例1，步骤B)溶解于200mL无水甲苯中并在真空下浓缩。在使用之前将残余物置于高真空下2小时。将化合物分成2×20g批次并如下处理：在250mL玻璃氢化容器中将于无水2-丙醇(104mL)中的4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯(20g,52.0mmol)用叔丁醇钾(2.33g,20.8mmol)处理。加入含RuCl₂(S-xylbinap)(S-DAIPEN)(0.191g,0.156mmol,StremChemicals,Inc.,Newburyport,MA)的3.8mL甲苯。1.5小时后，将容器加压至50psi(344.7kPa)并用氢气吹扫五次，使其在室温搅拌。反应按需要再装入额外的氢气。3天后，将反应物合并，在50％饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯之间分配。水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗产物(主要为(4R,5R)-4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸异丙酯)溶解于四氢呋喃(450mL)和甲醇(150mL)中。加入氢氧化锂(1.4M,149mL,208mmol)，将溶液在室温搅拌24小时。将混合物在真空下浓缩并将残余物再溶解于乙酸乙酯中。在搅拌下加入1N盐酸水溶液直至水层具有约1的pH。将层分离并将有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将材料溶解于200mL无水甲苯中并用对甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS,0.784g,3.12mmol)处理。将反应在Dean-Stark条件下加热至回流直至耗尽开环酸(seco-acid)(约2小时)。将反应冷却至室温并用饱和碳酸氢钠(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将溶液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗材料通过快速硅胶色谱(120g柱；用100％二氯甲烷洗脱)纯化。获得为白色固体的标题化合物，为约94:6对映异构体比率和7:3的甲基非对映异构体混合物。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.22-6.98(系列m,5H),6.91(dt,J＝7.4,1.2Hz,0.3H),6.81(m,2H),6.73(dt,J＝7.6,1.4Hz,0.7H),5.76(d,J＝4.1Hz,0.3H),5.69(d,J＝4.7Hz,0.7H),3.67(dt,J＝6.6,4.3Hz,0.3H),3.55(td,J＝7.8,4.7Hz,0.7H),2.96(五重d,J＝13.5,6.7Hz,0.7H),2.81(m,0.3H),2.56(dt,J＝14.3,8.0Hz,0.7H),2.32(dt,J＝13.69,7.0Hz,0.3H),2.06(ddd,J＝13.7,8.4,4.1,0.3H),1.85(ddd,J＝14.1,12.5,7.4,0.7H),1.42(d,J＝7.0Hz,0.9H),1.41(d,J＝6.7Hz,2.1H).MS(ESI)＝357.0[M+23]⁺.[α]_D(22℃,c＝1.0,CH₂Cl₂)＝-31.9°；m.p.98–99℃.

步骤D.(3S,5R,6R)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮

在-35℃(乙腈/干冰浴)下将(3S,5R,6R)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮和(3R,5S,6S)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮(4.5g,13.4mmol，实施例1，步骤C)和烯丙基溴(3.48mL,40.3mmol)于四氢呋喃(22mL)中的溶液用双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂于四氢呋喃(1.0M,17.45mL,17.45mmol)中的溶液处理。在1小时内将反应升温至-5℃，然后用50％饱和氯化铵淬灭。将反应用100mL乙酸乙酯稀释并将层分离。有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩，在真空下静置后以提供为白色固体的标题化合物。手性SFC(92％CO₂,8％甲醇(20mM氨),5mL/min,PhenomenexLux-2柱(Phenomenex,Torrance.CA),100巴(10,000kPa),40℃,5分钟方法)用于确定该化合物具有96:4的对映异构体比率。(主要对映异构体：标题化合物，保留时间＝2.45分钟,96％；次要对映异构体(结构未示出，保留时间＝2.12min,4％)。通过在回流下加入至庚烷(4.7g于40mL中浆料化)使标题化合物重结晶并滴加1.5mL甲苯以增溶。将溶液冷却至0℃。将白色固体过滤并用20mL冷庚烷漂洗以提供白色粉末。手性SFC(92％CO₂,8％甲醇,PhenomenexLux-2柱，与上述相同的方法)指示99.2:0.8的对映异构体比率(主要对映异构体,2.45min,99.2％；次要对映异构体：2.12min,0.8％)

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.24(ddd,J＝8.0,2.0,1.2Hz,1H),7.20–7.15(系列m,3H),6.91(t,J＝2.0Hz,1H),6.78(brd,J＝7.6Hz,1H),6.60(m,2H),5.84(ddt,J＝17.6,10.2,7.4Hz,1H),5.70(d,J＝5.3Hz,1H),5.21–5.13(系列m,2H),3.82(dt,J＝11.7,4.5Hz,1H),2.62(ABXJ_AB＝13.7Hz,J_AX＝7.6Hz,1H),2.53(ABX,J_AB＝13.9Hz,J_BX＝7.2Hz,1H).1.99(dd,J＝14.1,11.9Hz,1H),1.92(ddd,J＝13.9,3.9,1.2Hz,1H).¹³CNMR(CDCl₃,100MHz,δppm):175.9,140.2,134.5,134.3,134.0,132.2,129.8,128.6,128.0,127.9,127.8,126.4,119.9,83.9,44.5,42.4,40.7,31.8,26.1.MS(ESI)＝375.2[M+H]⁺.IR＝1730cm^-1.[α]_D(24℃,c＝1.0,CH₂Cl₂)＝-191°.m.p.111–114℃.

步骤E.(2S)-2-((2R)-2-(3-氯苯基)-3-(4-氯苯基)-3-羟丙基)-N-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-2-甲基戊-4-烯酰胺

将(3S,5R,6R)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮(125.0g,333mmol，实施例1，步骤D)加入至(S)-2-氨基-2-环丙基乙醇(101g,999mmol)并将反应混合物在110℃在氩气下加热25小时。将反应混合物用乙酸异丙酯稀释，冷却至室温，并缓慢加入3M盐酸(400mL)。将混合物在室温搅拌20分钟，并将层分离。将有机层用1M盐酸(200mL)和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供为褐色油状物的期望产物(159g)。

步骤F.(3S,5S,6R,8S)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-环丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑并[3,2-a]吡啶-4-鎓4-甲基苯磺酸盐

将配备有磁力搅拌棒、加料漏斗、隔垫和内部温度传感器的2L4颈圆底烧瓶装载对甲苯磺酸酐(240g,734mmol)和无水二氯甲烷(600mL)。将内部温度调节至14℃并将混合物搅拌10分钟。将(S)-2-((2R,3R)-2-(3-氯苯基)-3-(4-氯苯基)-3-羟丙基)-N-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-2-甲基戊-4-烯酰胺(159.0g,334mmol，实施例1，步骤E)在无水二氯甲烷(400mL)中的溶液加入至反应混合物。温度增至17℃，然后回到14℃。将反应混合物冷却至7℃并经由加料漏斗将2,6-二甲基吡啶(160mL,1372mmol)(经活化的分子筛干燥)滴加至反应混合物。在1小时后添加结束。将反应混合物从水浴去除并在室温搅拌1小时。将反应混合物在回流下加热16小时。LCMS指示剩下一些中间体。加入额外的对甲苯磺酸酐(0.25当量)和二甲基吡啶(0.5当量)并将反应混合物在回流下加热8小时。LCMS指示反应结束。将反应混合物冷却至室温并在搅拌下经由加料漏斗加入至1M硫酸水溶液(764mL,764mmol)。添加历时30分钟，之后将溶液在室温搅拌30分钟。将层分离并将有机层经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供褐色糖浆。为了从糖浆除去任何二氯甲烷，将其溶于乙酸乙酯中并在真空下浓缩两次以提供粘稠的褐色糖浆。加入乙酸乙酯(2L)并将混合物在60℃加热直至所有糖浆溶解(约45分钟)。将溶液搅拌同时冷却至室温。晶体在2小时后形成并将混合物冷却至10℃达1小时，然后通过真空过滤收集固体并用冷(10℃)乙酸乙酯洗涤。这提供70g为灰白色结晶固体的期望产物。将滤液在在真空下浓缩至1.5L并将混合物在10℃搅拌1.5小时。将混合物在真空下过滤以提供浅褐色结晶固体，其通过NMR显示为甲苯磺酸二甲基吡啶鎓。将滤液在真空下浓缩以提供褐色糖浆(161g)。将庚烷加入至糖浆并加热混合物。加入最少量的乙酸乙酯直至材料溶解。将溶液冷却至室温，然后置于冰箱中。通过真空过滤来收集所得固体并用冷(0℃)乙酸乙酯洗涤以提供为灰白色结晶固体的期望产物(34g)。将滤液浓缩以提供深褐色油状物并通过快速硅胶色谱(1.5kgSiO₂柱，用含20％至100％丙酮的己烷梯度洗脱)纯化以提供为浅褐色糖浆的期望产物(73g)。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-0.3至-0.2(m,2H),0.06–0.11(m,1H),0.31–0.36(m,1H),0.38–0.43(m,1H),1.57(s,3H),1.91(dd,J＝3.7和13.9Hz,1H),2.36(s,3H),2.64(dd,J＝7.3和13.7Hz,1H),2.72(dd,J＝7.6和13.7Hz,1H),2.95(t,J＝13.9Hz,1H),3.32(dt,J＝3.7和10.8Hz,1H),4.47(t,J＝8.6Hz,1H),4.57–4.62(m,1H),5.32(d,J＝16.9Hz,1H),5.35(d,J＝10.3Hz,1H),5.46(t,J＝9.5Hz,1H),5.82(d,J＝10.5Hz,1H),5.84–5.93(m,1H),6.94(brs,1H),7.04(s,1H),7.14–7.20(m,5H),7.28–7.40(m,3H),7.88(d,J＝8.1Hz,2H)).MS(ESI)440.1[M+H]⁺.

步骤G.(3S,5R,6S)-3-烯丙基-1-((S)-2-(叔丁基硫基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基哌啶-2-酮

在室温将2-甲基-2-丙硫醇(0.195mL,1.796mmol，经活化的分子筛干燥)加入至双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1.0M,1.8mL,1.8mmol)于无水四氢呋喃(4mL)中的溶液。将反应混合物在60℃加热。在60℃进行15分钟后，加入为固体的(3S,5S,6R,8S)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-环丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑并[3,2-a]吡啶-4-鎓4-甲基苯磺酸盐(1.00g,1.632mmol，实施例1，步骤F)。将反应混合物在60℃加热12小时，然后冷却至室温并用水稀释。将溶液用乙酸乙酯萃取三次并将有机液汇集，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，滗析并在真空下浓缩以提供褐色油状物。通过快速色谱(80gSiO₂柱，用含10至60％乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)纯化提供为无色糖浆的期望产物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-0.88至-0.85(m,1H),-0.16至-0.13(m,1H),0.22–0.27(m,1H),0.39–0.44(m,1H),1.28(s,3H),1.35(s,9H),1.66–1.71(m,1H),1.86(dd,J＝3.2和13.5Hz,1H),2.16(t,J＝13.7,1H),2.21–2.27(m,1H),2.60(dd,J＝4.4和12.0Hz,1H),2.65(d,J＝7.6Hz,2H),3.12(dt,J＝3.2和10.3Hz,1H),3.60(t,J＝11.3Hz,1H),4.68(d,J＝10.3Hz,1H),5.16–5.19(m,2H),5.83–5.92(m,1H),6.79(d,J＝7.6Hz,1H),6.93–7.04(m,3H),7.09–7.16(m,2H),7.19–7.24(m,2H).MS(ESI)530.2[M+H]⁺.

步骤H.2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸

在18℃将氯化钌(III)水合物(30.0mg,0.135mmol)加入至(3S,5R,6S)-3-烯丙基-1-((S)-2-(叔丁基硫基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基哌啶-2-酮(3.25g,6.13mmol，实施例1，步骤H)和过碘酸钠(1.33g)在乙酸乙酯(12mL)、乙腈(12mL)和水(18mL)中的溶液。在添加后将温度升至25℃。在30分钟内以五个1.33g部分加入额外的过碘酸钠同时保持温度低于22℃。在1.5小时后LCMS指示反应不完全，并加入过碘酸钠(1当量)。在1.5小时后真空过滤反应混合物，用乙酸乙酯洗涤，并将层分离。水层用乙酸乙酯萃取并将有机液合并，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供绿色油状物。通过快速色谱(330gSiO₂柱，用含0％至20％异丙醇的己烷梯度洗脱)纯化提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-1.15至-1.05(m,1H),-0.35至-0.25(m,1H),0.18–0.28(m,1H),0.33–0.40(m,1H),1.45(s,9H),1.51(s,3H),1.86(dd,J＝2.7和13.7Hz,1H),1.87–1.93(m,1H),2.47(t,J＝13.9,1H),2.72–2.76(m,1H),2.76(d,J＝15.5Hz,1H),2.93(d,J＝13.7Hz,1H),3.12(d,J＝15.1Hz,1H),3.12(dt,J＝2.7和12.5Hz,1H),4.29(t,J＝11.5Hz,1H),4.95(d,J＝10.8Hz,1H),6.86–6.89(m,1H),6.96(brs,1H),7.08–7.14(m,3H),7.15–7.35(m,3H).MS(ESI)580.2[M+H]⁺.

实施例2

2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺

在室温将草酰氯(0.033mL,0.379mmol)加入至2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(0.200g,0.344mmol，实施例1，步骤H)于无水二氯甲烷(1.5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后在真空下浓缩以提供为白色泡沫的酰基氯(206mg)。在室温加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1.0M于四氢呋喃中，0.516mL,0.516mmol)和无水四氢呋喃(0.5mL)。将反应混合物在室温搅拌5.5小时，然后用1N盐酸稀释并用乙酸乙酯萃取三次。将有机液汇集，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，滗析并在真空下浓缩以提供黄色泡沫。通过快速色谱(12gSiO₂柱；用35％至100％乙酸乙酯梯度洗脱)纯化提供为灰白色泡沫的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-1.10至-1.00(m,1H),-0.38至-0.325(m,1H),0.17–0.26(m,1H),0.30–0.38(m,1H),1.43(s,3H),1.44(s,9H),1.85–1.92(m,1H),2.00(dd,J＝2.7和13.5Hz,1H),2.39(t,J＝13.7,1H),2.65–2.75(m,1H),2.73–2.80(m,2H),2.90–2.96(m,1H),3.31(dt,J＝2.9和10.8Hz,1H),4.30–4.38(m,1H),4.96(d,J＝10.8Hz,1H),5.63(brs,1H),6.64(brs,1H),6.90–6.91(m,1H),7.00(s,2H),7.06–7.11(m,3H),7.12–7.29(m,2H).MS(ESI)579.2[M+H]⁺.

实施例3

2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)-N-苯基乙酰胺

在0℃将N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC,0.117g,0.612mmol)加入至2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(0.118g,0.204mmol，实施例1，步骤H)和苯胺(0.020mL,0.225mmol)的溶液。添加结束后，将反应混合物从冰浴去除并在室温搅拌19小时。将反应混合物用冰冷的1M盐酸稀释以将pH调节至1并将溶液用乙醚萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，滗析并在真空下浓缩以提供橙色油状物。通过快速色谱(12gSiO₂柱，用含15％至100％乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)纯化提供为白色泡沫的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-1.32至-1.20(m,1H),-0.40至-0.28(m,1H),-0.28至-0.10(m,1H),0.30–0.40(m,1H),1.45(s,9H),1.47(s,3H),1.94(brs,1H),2.07(dd,J＝2.7和13.7Hz,1H),2.39(t,J＝13.7,1H),2.67–2.73(m,2H),2.95(t,J＝13.5Hz,2H),3.30(dt,J＝2.7和11.0Hz,1H),4.31(brt,J＝11.7Hz,1H),4.94(d,J＝10.8Hz,1H),6.86–6.89(m,1H),6.99(s,1H),7.02–7.09(m,6H),7.17(t,J＝7.3Hz,1H),7.38(t,J＝8.3Hz,2H),7.66(d,J＝7.8Hz,2H).MS(ESI)655.3[M+H]⁺.

实施例4

2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸

步骤A.甲基-4-氯-3-氟苯甲酸酯

将4-氯-3-氟苯甲酸(450.0g,2.586mol,Fluororochem,Derbyshire,UK)于甲醇(4.5L)中的溶液冷却至0℃，在30分钟内加入亚硫酰氯(450.0mL)。将反应混合物在室温搅拌12小时。通过TLC监测反应。结束后，在减压下除去溶剂并将残余物用1.0M碳酸氢钠溶液(500mL)淬灭。水层用二氯甲烷萃取(2×5.0L)。将合并的有机层用盐水(2.5L)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到为浅褐色固体的标题化合物。粗化合物不经进一步纯化即可用于下一步骤。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.82–7.74(m,2H),7.46(dd,J＝8.2,7.5Hz,1H),3.92(s,3H).

步骤B.1-(4-氯-3-氟苯基)-2-(3-氯苯基)乙酮

在-78℃在氮气下将双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1M于四氢呋喃中，4L,4000mmol)在1小时内加入至3-氯苯基乙酸(250.0g,1465mmol)于无水四氢呋喃(1.75L)中的溶液。将所得反应混合物在-78℃再搅拌1小时。然后，在-78℃在1小时内加入甲基-4-氯-3-氟苯甲酸酯(221.0g,1175mmol，实施例4，步骤A)于四氢呋喃(500mL)中的溶液，并将所得反应混合物在相同温度下搅拌2小时。通过TLC监测反应。结束后，将反应混合物用2N盐酸(2.5L)淬灭，水相用乙酸乙酯萃取(2×2.5L)。将合并的有机层用盐水(2.5L)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以提供粗材料，其通过快速柱色谱(硅胶：100至200目，产物于含2％乙酸乙酯的己烷中洗脱)纯化以提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.74(ddd,J＝10.1,8.9,1.8Hz,2H),7.56–7.48(m,1H),7.26(t,J＝6.4Hz,3H),7.12(d,J＝5.7Hz,1H),4.22(s,2H).MS(ESI)282.9[M+H]⁺.

步骤C.5-(4-氯-3-氟苯基)-4-(3-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯

在0℃将甲基丙烯酸甲酯(125.0g,1097mmol)和叔丁醇钾(1M于四氢呋喃中，115mL,115mmol)相继加入至1-(4-氯-3-氟苯基)-2-(3-氯苯基)乙酮(327.0g,1160mmol，实施例4，步骤B)于无水四氢呋喃(2.61L)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后升温至室温并搅拌12小时。结束后，将反应物用水(1.0L)淬灭并用乙酸乙酯萃取(2×2.5L)。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗材料，其通过快速柱色谱(硅胶：60至120目，产物于含4％乙酸乙酯的己烷中洗脱)纯化，提供为浅黄色液体的标题化合物(非对映异构体混合物)。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.74–7.61(m,4H),7.47–7.40(m,2H),7.28–7.18(m,6H),7.16–7.10(m,2H),4.56(m,2H),3.68(s,3H),3.60(s,3H),2.50–2.39(m,2H),2.37–2.25(m,2H),2.10–2.02(m,1H),1.94(ddd,J＝13.6,9.1,4.2Hz,1H),1.21(d,J＝7.0Hz,3H),1.15(d,J＝7.0Hz,3H).MS(ESI)383.0[M+H]⁺.

步骤D.(3S,5R,6R)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮和(3R,5R,6R)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮

在装载有5-(4-氯-3-氟苯基)-4-(3-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯(138.0g,360mmol，实施例4，步骤C)(其于冰上冷却10分钟，然后转移至手套袋)的2000mL反应容器中，相继加入无水2-丙醇(500mL)和叔丁醇钾(16.16g,144mmol)同时在氩气下在密封的手套袋中。使该混合物搅拌30分钟。加入于30.0mL甲苯中的RuCl₂(S-xylbinap)(S-DAIPEN)(1.759g,1.440mmol,StremChemicals,Inc.,Newburyport,MA，于手套袋中称重)。将反应在室温剧烈搅拌2小时。将容器置于氢化装置上，用氢气吹扫3次，并加压至50psi(344.7kPa)。将反应在室温搅拌过夜。结束后，将反应物用水(1.5L)淬灭并用乙酸乙酯萃取(2×2.5L)。将有机层用盐水洗涤(1.5L)，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗材料，其通过快速柱色谱(硅胶；60-120目；产物于含12％乙酸乙酯的己烷中洗脱)纯化以提供深色液体，为非对映异构体混合物。

将产物(240.0g,581mmol)溶解于四氢呋喃(1.9L)和甲醇(480mL)中，并加入一水合氢氧化锂(2.5M水溶液,480.0mL)。将反应混合物在室温搅拌12小时。结束后，在减压下除去溶剂并将残余物用2N盐酸酸化至pH为5至6之间。水相用乙酸乙酯萃取(2×1.0L)。将合并的有机层用盐水洗涤(750mL)，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供深色液体，其不经进一步纯化即可使用。

将粗中间体的部分(25.4g,主要为开环酸)加入至配备有Dean-Stark装置的500mL圆底烧瓶中。加入对甲苯磺酸吡啶鎓(0.516g,2.053mmol)和甲苯(274mL)，并将混合物回流1小时(油浴温度为约150℃)。将反应冷却至室温并在减压下浓缩。将反应物用饱和碳酸氢钠水溶液(150mL)稀释，用乙醚萃取(2×150mL)，并用盐水洗涤(150mL)。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速柱色谱(分成3份，330gSiO₂/每份，用含0％至30％丙酮的己烷梯度洗脱，35分钟)纯化提供为淡黄色固体的标题化合物和1:1.6在C2处的非对映异构体的混合物。MS(ESI)353.05[M+H]⁺.

步骤E.(3S,5R,6R)-3-烯丙基-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮

将(3S,5R,6R)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮和(3R,5R,6R)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮(18g,51.0mmol，实施例4，步骤D)加入至经烘箱干燥的500mL圆底烧瓶。将固体溶解于无水甲苯中并浓缩以除去外来水。加入含3-溴丙-1-烯(11.02mL,127mmol，在添加之前通过碱性氧化铝除去水分)的四氢呋喃(200mL)并将反应容器排空，用氩气再填充三次。在-40℃(干冰/乙腈浴)下滴加双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1.0M,56.1mL,56.1mmol)并在氩气下搅拌。将反应逐渐升温至-10℃并在-10℃搅拌3小时。将反应用饱和氯化铵(10mL)淬灭，浓缩，将粗产物稀释于水(150mL)和乙醚(200mL)中。将层分离并将水层用乙醚洗涤两次以上(200mL/每次)。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩至残余物。残余物通过快速色谱(2×330g硅胶柱，用含0％至30％丙酮的己烷梯度洗脱)纯化以提供为白色固体的标题化合物。将产物可选地从含最少量己烷的二氯甲烷中结晶。对映异构体过量通过手性SFC(90％CO₂,10％甲醇(20mM氨),5.0mL/min,100巴(10,000kPa),40℃,5分钟方法，PhenomenexLux-2(Phenomenex,Torrance,CA)(100mm×4.6mm,5μm柱)，保留时间：1.62min.(次要)和2.17min.(主要))被确定为87％。通过于己烷和二氯甲烷中重结晶，纯度可被升级为>98％。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):7.24–7.17(m,3H),6.94(s,1H),6.80(d,J＝7.5Hz,1H),6.48(dd,J＝10.0,1.9Hz,1H),6.40(d,J＝8.3Hz,1H),5.90–5.76(m,1H),5.69(d,J＝5.2Hz,1H),5.20–5.13(m,2H),3.81(dd,J＝13.9,6.9Hz,1H),2.62(dd,J＝13.8,7.6Hz,1H),2.50(dd,J＝13.8,7.3Hz,1H),1.96(d,J＝8.4Hz,2H),1.40(s,3H).MS(ESI)393.1[M+H]⁺.

步骤F.(2S)-2-((2R)-3-(4-氯-3-氟苯基)-2-(3-氯苯基)-3-羟丙基)-N-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-2-甲基戊-4-烯酰胺

在0℃将甲醇钠(25％于甲醇中，60.7ml,265mmol)加入至(S)-2-氨基-2-环丙基乙醇盐酸盐(36.5g,265mmol,NetChemInc.,Ontario,Canada)于甲醇(177mL)中的溶液。沉淀在添加期间形成。添加结束后，将反应混合物从冰浴去除并升温至室温。将反应混合物在真空下过滤并用二氯甲烷洗涤固体。将滤液在真空下浓缩以提供混浊的褐色油状物。将油状物溶于二氯甲烷(150mL)中，在真空下过滤并将固相用二氯甲烷洗涤以提供滤液，为澄清的橙色溶液。将溶液在真空下浓缩以提供为浅褐色液体的(S)-2-氨基-2-环丙基乙醇。

将(3S,5R,6R)-3-烯丙基-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-2-酮(32g,81mmol，实施例4，步骤E)与(S)-2-氨基-2-环丙基乙醇(26.7g,265mmol)合并，将悬浮液在100℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用1N盐酸(2X)、水和盐水洗涤。将有机层经硫酸镁干燥并在真空下浓缩以提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):0.23–0.30(m,2H),0.45–0.56(m,2H),0.81(m,1H),1.12(s,3H),1.92–2.09(m,3H),2.39(dd,J＝13.6,7.2Hz,1H),2.86(brs,1H),2.95(dtd,J＝9.5,6.3,6.3,2.9Hz,1H),3.44(dd,J＝11.0,5.6Hz,1H),3.49(m,1H),3.61(dd,J＝11.0,2.9Hz,1H),4.78(d,J＝5.6Hz,1H),4.95–5.13(m,2H),5.63(m,1H),5.99(d,J＝6.4Hz,1H),6.94–7.16(m,3H),7.16–7.32(m,4H).MS(ESI)494[M+H]⁺.

步骤G.(3S,5R,6S)-3-烯丙基-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-1-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-3-甲基哌啶-2-酮

在0℃将(2S)-2-((2R)-3-(4-氯-3-氟苯基)-2-(3-氯苯基)-3-羟丙基)-N-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-2-甲基戊-4-烯酰胺(40.2g,81mmol，实施例4，步骤F)于二氯甲烷(80mL)中的溶液加入含对甲苯磺酸酐(66.3g,203mmol)的二氯甲烷(220mL)，并将反应混合物在相同的温度下搅拌10分钟。经由加料漏斗在0℃滴加2,6-二甲基吡啶(43.6mL,374mmol,Aldrich,St.Louis,MO)。将反应混合物缓慢升温至室温，然后将其在回流下搅拌。在24小时后，相继加入含碳酸氢钠(68.3g,814mmol)的水(600mL)和1,2-二氯乙烷(300mL)。将反应混合物在回流下加热1小时，然后冷却至室温。将层分离并将水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用1N盐酸、水和盐水洗涤然后在减压下浓缩。残余物通过快速色谱(1.5kgSiO₂柱，用含10％至50％乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)纯化以提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):0.06(m,1H),0.26(m,1H),0.57–0.67(m,2H),0.85(m,1H),1.25(s,3H),1.85–2.20(m,2H),2.57–2.65(m,2H),3.09(ddd,J＝11.8,9.8,4.8Hz,1H),3.19(t,J＝10.0Hz,1H),3.36(td,J＝10.3,4.6Hz,1H),3.63(dd,J＝11.0,4.6Hz,1H),4.86(d,J＝10.0Hz,1H),5.16–5.19(m,2H),5.87(m,1H),6.77(dd,J＝7.7,1.6Hz,1H),6.80–6.90(m,2H),7.02(t,J＝2.0Hz,1H),7,16(dd,J＝10.0,7.7Hz,1H),7.21(dd,J＝10.0,1.6Hz,1H),7.29(t,J＝10.0Hz,1H).MS(ESI)476[M+H]⁺.

步骤H.(3S,5S,6R,8S)-8-烯丙基-5-(4-氯-3-氟苯基)-6-(3-氯苯基)-3-环丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑并[3,2-a]吡啶-4-鎓4-甲基苯磺酸盐

将一水合对甲苯磺酸(30.3g,159mmol,Aldrich,St.Louis,MO)加入至(3S,5R,6S)-3-烯丙基-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-1-((S)-1-环丙基-2-羟乙基)-3-甲基哌啶-2-酮(73.6g,154mmol)于甲苯(386mL)中的溶液。使用Dean-Stark装置将反应混合物在回流下加热。在4小时后，将反应冷却并在减压下浓缩以提供为淡黄色糖浆的标题化合物。粗产物不经进一步纯化即可用于下一步骤。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-0.25至-0.10(m,2H),0.08–0.18(m,1H),0.33–0.50(m,2H),1.57(s,3H),1.92(dd,J＝3.7和13.9Hz,1H),2.37(s,3H),2.63(dd,J＝7.3和13.7Hz,1H),2.72(dd,J＝7.6和13.7Hz,1H),2.93(t,J＝13.7Hz,1H),3.29(m,1H),4.51(t,J＝8.6Hz,1H),4.57–4.63(m,1H),5.33(d,J＝17.1Hz,1H),5.37(d,J＝10.5Hz,1H),5.47(dd,J＝9.1和10.0Hz,1H),5.75–5.93(m,2H),6.80(brs,1H),7.08(s,1H),7.16–7.20(m,5H),7.25–7.32(m,2H),7.87(d,J＝8.3Hz,2H).MS(ESI)458[M+H]⁺.

步骤I.(3S,5R,6S)-3-烯丙基-1-((S)-2-(叔丁基硫基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基哌啶-2-酮

于500mL圆底烧瓶中，在室温在氩气下将2-甲基-2-丙硫醇(15.25mL,135mmol，经活化的分子筛干燥)加入至双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂于四氢呋喃(1.0M,135mL,135mmol)中的溶液。将反应混合物加热至60℃。30分钟后，经由插管加入(3S,5S,6R,8S)-8-烯丙基-5-(4-氯-3-氟苯基)-6-(3-氯苯基)-3-环丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑并[3,2-a]吡啶-4-鎓4-甲基苯磺酸盐(78g,123mmol，实施例4，步骤H)于无水四氢呋喃(100mL)中的溶液。将反应混合物在60℃加热3小时，然后冷却至室温。将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次。将有机液汇集，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供黄色泡沫。通过快速柱色谱(1.5kgSiO₂柱，用含5％至30％乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)纯化提供为灰白色泡沫的标题化合物。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):-0.89至-0.80(m,1H),-0.15至-0.09(m,1H),0.27–0.34(m,1H),0.41–0.48(m,1H),1.28(s,3H),1.35(s,9H),1.70–1.77(m,1H),1.86(dd,J＝3.1和13.5Hz,1H),2.16(t,J＝13.7,1H),2.17–2.23(m,1H),2.60–2.63(m,3H),3.09(dt,J＝3.1和10.4Hz,1H),3.62(t,J＝11.1Hz,1H),4.70(d,J＝10.1Hz,1H),5.16(s,1H),5.19–5.21(m,1H),5.82–5.93(m,1H),6.65–6.80(m,1H),6.80–6.83(m,1H),6.84–6.98(m,1H),7.05–7.07(m,1H),7.12–7.18(m,2H),7.19–7.26(m,1H).MS(ESI)548.2[M+H]⁺.

步骤J.2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸

在20℃将氯化钌(III)水合物(0.562mg,2.493mmol)加入至(3S,5R,6S)-3-烯丙基-1-((S)-2-(叔丁基硫基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基哌啶-2-酮(62.17g,113mmol，实施例4，步骤I)和过碘酸钠(24.67g)于乙酸乙酯(216mL)、乙腈(216mL)和水(324mL)中的混合物。温度快速升至29℃。将反应混合物冷却至20℃并在2小时内以五个24.67g份加入剩余当量的过碘酸钠，小心保持内部反应温度低于25℃。反应不完全，于是加入额外的过碘酸钠(13g)。将温度从22℃增至25℃。再搅拌1.5小时后，将反应混合物在真空下过滤并用乙酸乙酯洗涤。将层分离并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机液汇集，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供暗绿色泡沫。通过快速柱色谱(1.5kgSiO₂柱，用含0％至20％异丙醇的己烷梯度洗脱)纯化提供灰白色泡沫。将含15％乙酸乙酯的庚烷(970mL)加入至泡沫，将混合物在80℃加热直至泡沫溶解。然后缓慢地冷却溶液，在60℃，用先前获得的结晶物质对溶液种晶。将混合物冷却至室温，接着在室温静置2小时，然后通过真空过滤收集固体以提供具有极浅粉红色调的白色固体(57.1g)。将母液在真空下浓缩以提供粉红色泡沫(8.7g)。将含15％乙酸乙酯的庚烷(130mL)加入至泡沫，将其在80℃加热以完全溶解该物质。冷却溶液，并且在50℃，用结晶物质对其种晶。在冷却至室温后，通过真空过滤收集固体以提供具有极浅粉红色调的白色结晶固体。

¹HNMR(500MHz,CDCl₃,δppm):-1.10至-1.00(m,1H),-0.30至-0.22(m,1H),0.27–0.37(m,1H),0.38–0.43(m,1H),1.45(s,9H),1.50(s,3H),1.87(dd,J＝2.7和13.7Hz,1H),1.89–1.95(m,1H),2.46(t,J＝13.7,1H),2.69–2.73(m,1H),2.78(d,J＝14.9Hz,1H),2.93(dd,J＝2.0和13.7Hz,1H),3.07(d,J＝14.9Hz,1H),3.11(dt,J＝2.7和11.0Hz,1H),4.30(t,J＝13.5Hz,1H),4.98(d,J＝10.8Hz,1H),6.75–6.87(m,1H),6.88–6.90(m,1H),6.98(brs,1H),7.02–7.09(m,1H),7.11–7.16(m,2H),7.16–7.25(m,1H).MS(ESI)598.1[M+H]⁺.

实施例5

4-(2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸

步骤A.4-(2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯

在3℃将N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC,76g,398mmol)加入至2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(79.4g,133mmol，实施例4，步骤J)和4-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯(26.4g,146mmol)于吡啶(332mL)中的混合物。将混合物升温至室温并在室温搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃并加入至冰冷的1M盐酸(1L)溶液。加入乙醚(1L)并搅动各层，然后分离。将有机层用1M盐酸(6×500mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)、盐水(500mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩以提供灰白色泡沫。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃,δppm):-1.20至-1.12(m,1H),-0.35至-0.20(m,1H),0.05–0.20(m,1H),0.32–0.45(m,1H),1.45(s,9H),1.48(s,3H),1.86–1.98(m,1H),2.03(dd,J＝2.7和13.7Hz,1H),2.43(t,J＝13.7,1H),2.64–2.75(m,1H),2.80(d,J＝14.3Hz,1H),2.89–2.96(m,2H),3.24(dt,J＝2.5和10.8Hz,1H),3.89(s,3H),3.96(s,3H),4.28–4.36(m,1H),4.98(d,J＝10.8Hz,1H),6.85–6.93(m,3H),6.99(brs,1H),7.06–7.18(m,4H),7.82(brs,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),8.81(brs,1H).MS(ESI)761.2[M+H]⁺.

步骤B.4-(2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸

在室温将一水合氢氧化锂(18.2g,433mmol)于水(295mL)中的溶液加入至4-(2-((3R,5R,6S)-1-((S)-2-(叔丁基磺酰基)-1-环丙基乙基)-6-(4-氯-3-氟苯基)-5-(3-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(164.9g,217mmol，实施例5，步骤A)于四氢呋喃(591mL)和甲醇(197mL)中的溶液。在室温搅拌15小时后，剩下痕量的酯，于是将反应混合物在50℃加热1小时。当反应结束时，将混合物在真空下浓缩以去除四氢呋喃和甲醇。将粘稠的混合物用水(1L)稀释并加入1M盐酸(1L)。将所得白色固体通过真空过滤收集于布氏漏斗(Büchnerfunnel)中。去除真空，并将水(1L)加入至滤饼。用刮铲搅拌材料以使其均匀悬浮于水中。然后通过真空过滤去除液体。该洗涤循环再重复三次以提供白色固体。将固体在真空下于45℃干燥3天以提供为白色固体的标题化合物。

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm-1.30至-1.12(m,1H),-0.30至-0.13(m,1H),0.14–0.25(m,1H),0.25–0.38(m,1H),1.30(s,3H),1.34(s,9H),1.75–1.86(m,1H),2.08–2.18(m,2H),2.50–2.60(m,1H),2.66(d,J＝13.7,1H),3.02–3.16(m,2H),3.40–3.50(m,1H),3.77(s,3H),4.05–4.20(m,1H),4.89(d,J＝10.5Hz,1H),6.90–6.93(m,3H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.22–7.26(m,3H),7.40–7.50(m,1H),7.54(brs,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,1H)10.44(s,1H),12.29(brs,1H).MS(ESI)747.2[M+H]⁺.

生物学测定

均相时间分辨荧光测定(HTRF1和HTRF2测定)

体外HTRF测定的标准测定条件由以下组成：50μl总反应体积的在黑色的384孔Costar聚丙烯板中在1XPBS缓冲液pH7.4中的1mMDTT、0.1％BSA、2.5nMGST-hMDM2(aa1-188)、5nM生物素化-p53(aa1-83)、1.8nMSA-XLent(Cisbio；Bedford,MA)、0.6nM抗-GST穴状化合物单克隆抗体(Cisbio；Bedford,MA)和200mMKF。人MDM2的氨基酸残基1-188在大肠杆菌(Escherichiacoli)中被表达为氨基末端的谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白(GST-hMDM2)。人p53的残基1-83在大肠杆菌(E.coli.)中被表达为氨基末端的AviTag^TM-TrxA-6xHis融合蛋白(生物素化p53)。每种蛋白质均通过亲和色谱从细胞糊浆纯化。

具体地，将10μLGST-hMDM2与10ul于10％DMSO中的稀释的化合物(各种浓度，连续稀释)一起在室温下温育20分钟。将20μL生物素化-p53加入至GST-hMDM2+化合物混合物中，然后在室温温育60分钟。将10μL由SA-XLent、抗-GST穴状化合物抗体和KF组成的检测缓冲液加入至GST-hMDM2、生物素化-p53和化合物反应物中，并放置在室温下以达到平衡，历时>4小时。反应物中的DMSO的最终浓度为2％。在微板多标记读取器上测量时间分辨荧光读数。计算相对于nutlin-3的抑制百分比。

对于HTRF2测定，所有测定条件保持与上述条件相同，除了下列试剂浓度的改变：0.2nMGST-hMDM2(1-188)、0.5nM生物素化-p53(1-83)、0.18nMSA-XLent和100mMKF。

EdU测定

将SJSA-1细胞以2.8×10³个细胞/孔的密度涂板于384孔细胞培养板中的40μL生长培养基中并在37℃和5％CO₂下温育24小时。生长培养基由补充有10mMHEPES、1mM丙酮酸钠、1X青霉素-链霉素、2mM谷氨酰胺和10％FBS的RPMI1640培养基(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)组成。

第二天，生长培养基被去除并替换为由补充有10mMHEPES、1mM丙酮酸钠、1X青霉素-链霉素、2mM谷氨酰胺和10％人血清的RPMI1640组成的化合物培养基。将溶解于DMSO中的试验化合物稀释于化合物培养基中并加入至细胞以达到33μM至3pM的浓度范围。将细胞在37℃和5％CO₂下(16小时)用化合物处理16小时。第3天，Click-ItEdUHCS测定用于确定在化合物处理后的细胞增殖状态。将溶解于化合物培养基中的EdU加入至细胞以达到10μM的最终浓度。然后将细胞在37℃和5％CO₂下温育1小时。在EdU标记后，根据制造商的使用说明书执行Click-ItEdUHCS测定程序，其中测定体积减至25μL以调节用于384孔格式。简言之，细胞通过4％甲醛固定并用0.1％于PBS中的Triton-X100透化。用PBS洗涤后，将细胞相继用Click-It反应缓冲液和NuclearMask^TMBlue染色剂处理。然后洗涤细胞并使用OperaHighContent筛选系统(PerkinElmerLifeandAnalyticalSciences)对细胞成像。计算EdU并入细胞的百分比并将其用于IC₅₀计算。

Click-ItEdUHCS测定试剂盒获自LifeTechnolagies(GrandIsland,NY)，RPMI1640、L-谷氨酰胺、HEPES和丙酮酸钠获自Cellgro(Manassas,VA)。384孔细胞培养板获自PerkinElmerLifeandAnalyticalSciences(Waltham,MA)。FBS获自HyClone/ThermoFisherScientific(Logan,UT)，并且人血清获自Bioreclamation(Hicksville,NY)。SJSA-1细胞系获自ATCC(Manassas,VA)。

将来自经DMSO处理的孔的值针对POC(对照百分比)＝100进行标准化，以及将非EdU标记的细胞针对POC＝0进行标准化。IC₅₀值通过使用GenedataScreenerV9.0.1来确定。在GenedataScreener中用于剂量响应数据分析的曲线拟合算法是一种称为ROUT(具有异常值检测的稳健回归)的稳健曲线拟合算法的常规实现方式并且使用四参数对数(4PL)Hill模型。该算法执行稳健的非线性回归，分析数据点的残差以检测异常值，然后执行简单的曲线拟合(忽视先前定义为异常值的数据点)。

模型：

y = S_{\inf} + \frac{S_{0} - S_{\inf}}{1 + 10^{(\log {AC}_{50} - \log x) nHill}}

ROUT实现方式拟合并返回四拟合参数(So、Sinf、AC50IP、nHill)和拟合结果(最大活性，AC50跃迁)以及其95％置信区间：

拟合参数	描述
		S0	在不存在化合物时的信号
Sinf	在无限化合物浓度时的信号
		AC50 IP	在拐点处的浓度(相对AC50)
nHill	Hill参数；在拐点处的斜率

结果	描述
		最大活性	在测试的最大(无掩蔽)浓度(cmax)时的值
AC50跃迁	拟合曲线跨越50％活性的浓度(绝对AC50)

人肝细胞内在清除率测定

由20个供体汇集的冷冻保存的人肝细胞(Celsis-InVitroTechnologies,Baltimore,MD)用于确定实施例化合物的内在清除率。温育中肝细胞的活力为70-75％。将每种实施例化合物以500nM于细胞温育培养基(Celsis-InVitroTechnologies,Baltimore,MD)中的浓度温育，所述细胞温育培养基含有密度为1百万个细胞/mL的肝细胞。对于每个时间点制备温育混合物的1个等分试样(100μL)。在37℃温育箱中在95％空气和5％CO₂的气氛下在100％相对湿度下在以1400rpm振摇下进行温育。在0、5、15、30、60和90分钟时，从温育箱去除温育混合物的等分试样，并用含有0.1％(v/v)甲酸和内标(7-羟基-4-三氟甲基香豆素)的乙腈淬灭。然后将样品以5700rpm(6100g)在4℃离心10分钟。将上清液转移至样品板，与含有0.1％甲酸的等体积的水混合，并使用LC-MS/MS进行分析。

用于样品分析的LC-MS/MS系统由与以负离子模式操作的API4000三重四级杆质谱仪(AppliedBiosystems,Inc.,FosterCity,CA)接口连接的反相UHPLC(ShimadzuModelNexeraLC-30AD,ShimadzuScientificInstruments,Inc,Columbia,MD)组成。以1.2mL/min的流动相流速使用保持在55℃的PhenomenexKinetexLunaC₁₈柱(Phenomenex,Torrance,CA)(2×50mm,2.6μm)实现色谱分离。流动相由含0.1％甲酸的水(A)和含0.1％甲酸的乙腈(B)组成。梯度洗脱程序如下应用：在0.8分钟内起始从95％A/5％B线性增至5％A/95％B并且在5％A/95％B保持0.2min，然后在0.1分钟内返回至95％A/5％B并且在下一次注射之前以该组成再平衡另外的0.5分钟。适当的多反应监测(MRM)跃迁用于检测每种实施例化合物，并且MRM跃迁m/z229.2→201.2用于检测内标(7-羟基-4-三氟甲基香豆素)。

基于下列方程(Obach,1997和1999)由肝细胞温育中实施例化合物的体外t_1/2计算内在清除率(CL_int)：

{CL}_{int} = \frac{0.693}{t_{1 / 2}}

人肝细胞内在清除率测定和计算的参考文献

YeQ.，JiangB.M.，ChanH.，LixiaJ(准备公开)OptimizationofHepatocyteIntrinsicClearanceAssayforHumanMetabolicClearancePrediction：ImpactofAssayConditionsonPredictionAccuracy.

ObachRS(1997)Nonspecificbindingtomicrosomes：impactonscale-upofinvitrointrinsicclearancetohepaticclearanceasassessedthroughexaminationofwarfarin，imipramine，andpropranolol.DrugMetabDispos25：1359-1369.

ObaehRS(1999)Predictionofhumanclearanceoftwenty-ninedrugsfromhepatiemicrosomalintrinsicclearancedata.Anexaminationofinvitrohalf-liveapproachandnonspecificbindingtomicrosomes.DrugMetabDispos27：1350-1359.

人肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4诱导测定

材料。奥美拉唑、苯巴比妥、利福平、地塞米松、二甲基亚砜(DMSO)、KrebsHenseleit缓冲液(KHB)(KHB＝0.30g/L七水合硫酸镁、0.16g/L磷酸二氢钾、0.36g/L氯化钾、6.95g/L氯化钠、2.1g/L碳酸氢钠、0.38g/L二水合氯化钙、12.6mM4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)于组织培养水中的成分)、非那西汀(phenacetin)、对乙酰氨基酚、盐酸安非他酮(bupropionhydrochloride)、睾酮、6β-羟基睾酮、盐酸哌唑嗪、细胞培养级水、达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco’sModifiedEagle’sMedium)(DMEM)和威廉姆氏培养基(William’sMedium)E(WME)均购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。胰岛素-转铁蛋白-硒补充剂(ITS)、青霉素-链霉素-L-谷氨酰胺补充剂(PSG)、胎牛血清(FBS)、磷酸盐-缓冲盐水(PBS)、冷冻保存的肝细胞恢复培养基(CHRM)和三个个别供体批次的冷冻保存的成人肝细胞获自LifeTechnologies(GrandIsland,NY)。胶原I预涂敷的24-孔板和羟基丁氨苯丙酮从BectonDickinsonLabware(Bedford,MA)获得。人CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4和18SrRNA的分支DNA(b-DNA)探针组和PanomicsDiscoveryXL试剂盒购自AffymetrixInc.(SantaClara,CA)。

体外方法。第1天，通过补充DMEM以达到1XPSG、1XITS、0.1μM地塞米松和10％FBS的最终浓度来制备肝细胞涂板培养基(HPM)。通过补充WME以达到1XPSG、1XITS和0.1μM地塞米松的最终浓度来完成肝细胞维持培养基(HMM)的配制。通过在37℃水浴中轻轻涡旋，立即将每个个别肝细胞批次放入CHRM小瓶，并且在25℃以100g离心10分钟来将冷冻保存的人肝细胞的小瓶解冻1.5至2分钟。从沉淀的肝细胞中去除CHRM培养基，并且将每个个别批次轻轻地再悬浮于HPM中。使用血细胞计数器计数每个批次的肝细胞并用HPM稀释以达到0.75×10⁶个总细胞/mL的最终浓度。每个制备物的活力大于或等于90％。将个别批次以约0.38×10⁶个细胞/孔涂板于经胶原涂敷的24-孔板中。将肝细胞放置于在95％空气/5％CO₂的气氛和90％相对湿度下的37℃温育箱(Steri-CultCO₂温育箱，3310型，ThermoFisherScientific,Waltham,MA)中，使细胞经历3至6小时附着期。在附着期后，通过抽吸去除涂板培养基和未附着的细胞并将37℃HMM加入至各孔(0.5mL/孔)，并将细胞温育过夜。第2天，抽吸培养基并将新鲜的37℃HMM再施加至细胞，历时过夜适应期。第3天和第4天，抽吸培养基并将含有DMSO(0.1％，媒介物对照)的新鲜的37℃HMM、奥美拉唑(50μM,CYP1A2阳性对照诱导物)、苯巴比妥(1000μM,CYP2B6阳性对照诱导物)、利福平(10μM,CYP3A4阳性对照诱导物)、实施例1至5施加至各孔(0.5mL/孔,N＝3个孔/处理/CYP同工型)。将待测试的实施例化合物于DMSO储备溶液中制备，导致0.1％DMSO的最终温育浓度。将实施例化合物处理保持共计48小时。第5天，抽吸培养基，并将肝细胞轻轻地用KHB(37℃,pH7.4)洗涤一次。去除KHB，并施用KHB的第二次施加(0.5mL/孔)。将肝细胞放回到温育箱中并使其适应KHB10分钟。随后通过添加溶解于KHB(37℃,pH7.4,0.5mL/孔)中的标记底物非那西汀(100μM,CYP1A2探针底物,30分钟温育)盐酸安非他酮(100μM,CYP2B6探针底物,20分钟温育)和睾酮(200μM,CYP3A4探针底物,14分钟温育)来确定P450酶活性。在底物温育期后，收集缓冲液并储存在-80℃直至分析。将用于mRNA分析的肝细胞于PBS(0.5mL/孔,25℃，含有钙和镁)中洗涤一次并将按方案制备的b-DNA裂解缓冲液加入至各孔(0.5mL/孔)。通过轻轻地上下吸取裂解缓冲液五次使肝细胞裂解，并且将板储存在-80℃直至分析。

P450活性分析。通过在包含反相高效液相色谱(Shimadzu,Kyoto,Japan)和使用TurboIonSpray(AppliedBiosystems)的三重四级杆质谱仪(API5000,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)的系统上经由多反应监测进行液相色谱-串联质谱法，来进行对乙酰氨基酚、羟基丁氨苯丙酮和6β-羟基睾酮(分别为非那西汀的CYP1A2代谢、盐酸安非他酮的CYP2B6代谢，和睾酮的CYP3A4代谢的代谢物)的分析和定量。将样本(25μL)装载于C18柱(OnyxMonolithicC18,100x3.0m；Phenomenex,Torrance,CA)上，并且将分析物用流动相A(含有0.1％乙酸的水和5％甲醇)至B(含有0.1％乙酸的水和95％甲醇)的线性梯度洗脱4.6分钟。流速为1mL/min。通过将代谢物与内标(哌唑嗪)的峰面积比率与使用可靠的对乙酰氨基酚、羟基丁氨苯丙酮和6β-羟基睾酮制备的标准曲线比较来定量代谢物。

P450mRNA分析。CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4mRNA含量用分支DNA(b-DNA)信号扩增技术使用PanomicsDiscoverXL试剂盒和根据制造商的使用说明书进行的测定来确定。用于人CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4和18SrRNA的含有捕获延伸物、标记延伸物以及阻断探针的b-DNA探针组购自AffymetrixInc。在Elx405自动化微板洗涤器(BioTekInsturmentsInc.,Winooski,VT)上进行板洗涤步骤，并且在LuminoskanAscent微板光度计(ThermoLabSystems,Helsinki,Finland)上分析发光。将P450mRNA水平针对管家基因18SrRNA的mRNA水平进行标准化。

数据报告.对于用于mRNA分析的每个P450同工型，计算阳性对照和每个实施例化合物处理组相比于媒介物对照(其中媒介物对照设置为1.0)的倍数增加。另外，根据方程针对所有处理组的mRNA水平计算阳性对照百分比：

％阳性对照＝[(经实施例化合物处理的细胞的活性-仅用媒介物处理的细胞的活性)/(经阳性对照处理的细胞的活性-仅用媒介物处理的细胞的活性)]×100

评估标准

无＝<20％PC(阳性对照)

适度＝20-39％PC

有效＝≥40％PC

mRNA转录物诱导测定数据

CYP1A2或CYP2B6数据

实施例1至5的化合物均未显示诱导CYP1A2或CYP2B6。

CYP3A4数据

“无”意指所测试的化合物不诱导CYP1A2、CYP2B6或CYP3A4的表达。

CYP3A4意指该化合物诱导CYP3A4的表达。

相比于实施例1的化合物，向实施例1的化合物添加氟基团以制备实施例4导致更高的人肝细胞清除率。鉴于该数据，令人惊讶和意料不到的是，也含有氟基团的实施例5的化合物与实施例1或4的化合物任一种相比显示较低的人肝细胞清除率。

另外，当实施例1的羧酸官能团被转化成酰胺(实施例2)时，肝细胞清除率增加并且当制备苯基酰胺衍生物(实施例3)时进一步增加。此外，实施例2和3两者展现出CYP3A4mRNA诱导。进一步令人惊讶和意料不到的是，含有氟基团和衍生的苯基酰胺官能团两者的实施例5的化合物未显示CYP3A4mRNA诱导并且进一步显示比实施例1至4中的任一种更低的人肝细胞清除率。应注意，通过本领域技术人员使用人肝细胞清除率数据和CYP3A4mRNA诱导数据以有助于选择适合用于人治疗的化合物。

Claims

1.化合物

，

或其药学上可接受的盐。

2.化合物

。

3.一种药物组合物，其包含权利要求1或2中任一项所述的化合物，和药学上可接受的赋形剂。

4.一种治疗需要其的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效剂量量的根据权利要求1至2中任一项所述的化合物。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、急性或慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤、或骨肉瘤。

6.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌。

7.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

8.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是结肠癌。

9.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是直肠癌。

10.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是肾癌。

11.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是肝癌。

12.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是小细胞肺癌。

13.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌。

14.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是食道癌。

15.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是胆囊癌。

16.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是卵巢癌。

17.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。

18.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是胃癌。

19.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是子宫颈癌。

20.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是甲状腺癌。

21.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌。

22.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是皮肤癌。

23.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是急性淋巴细胞性白血病。

24.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是慢性骨髓性白血病。

25.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是急性成淋巴细胞性白血病。

26.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是B细胞淋巴瘤。

27.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是T细胞淋巴瘤。

28.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是霍奇金淋巴瘤。

29.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤。

30.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是毛细胞淋巴瘤。

31.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是伯基特氏淋巴瘤。

32.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是急性骨髓性白血病。

33.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是慢性骨髓性白血病。

34.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症被鉴定为p53野生型。

35.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是子宫内膜癌。

36.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是头颈癌。

37.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是成胶质细胞瘤。

38.如权利要求4所述的方法，其中所述癌症是骨肉瘤。

39.如权利要求4或6至38中任一项所述的方法，其中所述癌症被鉴定为p53野生型。