CN105120836B - 具有胶原蛋白合成能力的新型的肽及其用途 - Google Patents

具有胶原蛋白合成能力的新型的肽及其用途 Download PDF

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Abstract

提供一种本发明提供具有胶原蛋白合成能力的新型的肽及其用途。本发明提供一种化妆料组合物及创伤治疗用药学的组合物，所述化妆原料组合物含有YIGSR肽或在肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有在皮肤中能够有效地进行胶原蛋白合成的具有序列号1中所记载的氨基酸序列。

Description

具有胶原蛋白合成能力的新型的肽及其用途
技术领域
本发明涉及一种肽及其用途，更详细而言，涉及一种具有胶原蛋白合成能力的新型的肽及其用途。
背景技术
人随着年龄增大会引起皮肤老化，其代表的症状为皱纹(Wrinkle)。皱纹是表示年龄的1个现象，产生皱纹的代表的原因起因于在皮肤的真皮中形成基质的胶原蛋白发生分解。由于发生老化，皮肤胶原蛋白的生成降低。
作为促进胶原蛋白合成的现有的物质，已知有类视黄素(RE36068)、TGF-β(转化生长因子，Transforming growth factor)、桦木酸(JP8-208424)、野生日本薯蓣萃取物(大韩民国公开专利第2009-0055079)等。
发明内容
发明所要解决的问题
这种现有的胶原蛋白合成促进剂存在其效率降低、或作为重组蛋白质成本昂贵、为天然萃取物时再现性降低的缺点。
本发明用于解决包含所述问题点在内的多种问题点，其目的在于：提供一种能够以比较廉价的成本有效地促进胶原蛋白合成的新型肽及其用途，由此，可作为用于减轻皮肤老化或改善皱纹的化妆料组合物或创伤治疗剂等使用。但是，这种要解决的问题为示例，并不由此限定本发明的范围。
用于解决问题的技术方案
根据本发明的一个观点提供一种用于减轻皮肤老化的组合物，其含有具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽作为有效成分。
根据本发明的其它观点提供一种用于改善皱纹的化妆料组合物，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
根据本发明的其它观点提供一种用于创伤治疗的药学的组合物，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
根据本发明的其它观点提供一种皮肤填充剂，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
根据本发明的其它观点提供一种创伤治疗方法，其包括：将在药学上有效的量的YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物给药于遭受创伤的个体的阶段，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
根据本发明的其它观点提供一种YIGSR肽或其衍生物，其用于创伤治疗中，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列，所述衍生物在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成。
根据本发明的其它观点一种YIGSR肽或其衍生物在改善皱纹用化妆料组合物的制造中的应用，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列，所述肽衍生物在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成。
发明的效果
根据如上所述进行的本发明的一个实施例，可以体现具有胶原蛋白合成能力的新型的肽。当然，并不通过这种效果而限定本发明的范围。
附图说明
图1是通过蛋白质印迹分析及实时RT-PCR分析确认了本发明的一个实施例的YIGSR肽处理引起的Hs27细胞中胶原蛋白表达变化的结果，图1A是根据YIGSR肽处理浓度(0、10-2、10-1、1、10、102、103、104、105nM)确认了胶原蛋白I蛋白质表达变化的坐标图，图1B是根据YIGSR肽(103nM)处理时间(0、0.5、6、12及24小时)确认了胶原蛋白I蛋白质表达变化的坐标图，图1C是根据YIGSR肽处理浓度(0、10、102、103、104、105nM)确认了胶原蛋白I mRNA表达变化的坐标图。
图2是通过MTT分析确认了本发明的一个实施例的YIGSR肽处理细胞引起的生存率变化的结果，图2A是根据YIGSR肽处理浓度(0、10、102、103、104、105nM)变化确认了Hs27细胞的生存率的坐标图，图2B是根据YIGSR肽(103nM)处理时间(0、0.1、0.25、0.5、1、3、6、12及24小时)显示Hs27细胞的生存率的坐标图。
图3是通过蛋白质印迹分析确认了本发明的一个实施例的YIGSR肽处理引起的MMP-1水解酶的表达变化的照片。
图4是为了确认参与本发明的一个实施例的YIGSR肽引起的胶原蛋白表达增加的信号机制，使用蛋白质印迹分析确认了作为层粘连蛋白受体的下位信号传递的FAK、Pyk2、及ERK的磷酸化水平的结果，图4A是蛋白质印迹照片，图4B是对蛋白质印迹图像进行了浓度分析的坐标图。
图5是确认了FAK或ERK抑制剂处理引起的对由本发明的一个实施例的YIGSR肽所诱导的胶原蛋白生成产生了抑制的蛋白质印迹分析照片，图5A是作为FAK抑制剂的PF573228处理时的结果，图5B是作为ERK抑制剂的PD98059处理时的结果。
图6是表示本发明的YIGSR肽衍生物(Pal-YIGSR)的浓度依赖性胶原蛋白合成活性的免疫印迹分析结果。
图7是比较本发明的YIGSR肽衍生物(Pal-YIGSR)及比较例的胶原蛋白合成活性的免疫印迹分析结果。
图8是比较了本发明的YIGSR肽衍生物(Pal-YIGSR)及比较例的肽的ERK磷酸化活性的免疫印迹分析结果。
图9是表示本发明的YIGSR肽衍生物(Pal-YIGSR)的浓度依赖性皮肤成纤维细胞增殖活性的坐标图。
图10是比较了由本发明的YIGSR肽衍生物(Pal-YIGSR)及比较例的肽的暴露时间而产生的胶原蛋白合成活性的免疫印迹分析结果。
具体实施方式
以下，对本发明更详细地进行说明。
根据本发明的一个观点，提供一种用于减轻皮肤老化的组合物，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
本发明的一个实施例的具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽在转录水平上调节胶原蛋白的表达，并产生处理量及处理时间依赖性地增加胶原蛋白I的生成的效果。此时，提供以下效果：所述序列号1中所记载的YIGSR肽通过在103～104nM的低浓度下使胶原蛋白I的生成显著地增加，作为所述肽衍生物的Pal-YIGSR，即使在50～100μM的高浓度下也会产生使胶原蛋白I的生成显著地增加。另外，这种增加胶原蛋白生成的效果是作为层粘连蛋白受体的下位信号传递机制的FAK、Pyk2、及ERK的磷酸化引起的，而并不是分解胶原蛋白的MMP-1水解酶表达的抑制而引起的。因此，可以作为减轻由于减少胶原蛋白I的减少含量而促进的皮肤老化的组合物而利用。
所述皮肤老化减轻用组合物可以以化妆料组合物的形态提供。
在化妆料组合物中使用本发明的一个实施例的肽时，在其剂型上没有特别限定，例如，具有柔软化妆水、营养化妆水、按摩霜、营养霜、润肤膏、凝胶或皮肤粘合型化妆料的剂型的化妆料组合物，可以为如化妆水、软膏、凝胶、霜、贴剂(patch)或喷雾剂那样的经皮给药型剂型。
本发明的组合物可以进一步含有在化妆品制造中通常使用的适当的载体、赋形剂及稀释剂。根据化妆品的剂型而适当地剂型选择，可列举：凡士林、液体石蜡、凝胶化烃(别名：Plastibase)等烃类；中链脂肪酸甘油三酯、猪油、加硬PET(hard PET)、可可脂等动植物性油；鲸蜡醇、硬脂醇、硬脂酸、棕榈酸异丙酯等高级脂肪酸醇及脂肪酸、及其酯类；聚乙二醇(聚乙二醇)、1,3-丁二醇、甘油、明胶、白糖、糖醇等水溶性基剂；甘油脂肪酸酯、聚乙二醇硬脂酸酯、聚氧乙烯固化蓖麻油等乳化剂；丙烯酸酯、海藻酸钠等粘合剂；液化石油气体、二氧化碳等喷射剂；对羟基苯甲酸酯类等防腐剂等。
根据本发明的其它观点，提供一种用于改善皱纹的化妆料组合物，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
此时，在具有序列号1所示的氨基酸序列的YIGSR肽产生在103～104nM的低浓度下显著地增加胶原蛋白I的生成的效果。
根据本发明的其它观点，提供一种创伤治疗用药学的组合物，其含有YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而成的肽衍生物作为有效成分，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
原来，YIGSR肽是经常保存在层粘连蛋白(Laminin)等胶原蛋白结合蛋白质中的部位，作为胶原蛋白结合基序已知。报道了：所述YIGSR肽抑制白血病细胞(leukemia)的成长等(Yoshidaet al.，(1999)Br.J.Cancer，80(12)：1898-1904)，可能作为抗癌剂(Graf etal.，(1987)细胞(Cell)，48：989-996)。但是，对于所述YIGSR肽的胶原蛋白合成能力，没有进行报道，本发明人等为了探索促进胶原蛋白合成能力的肽而进行了专心地努力，结果确认，YIGSR肽及作为其棕榈酰化衍生物的YIGSR肽具有被提高的胶原蛋白合成能力，由此完成了本发明。
本发明的组合物中YIGSR肽的有效量根据患者的患部的种类、适用部位、处理次数、处理时间、剂型、患者的状态、辅助剂的种类等而变化。使用量没有特别限定，可以为0.01μg/kg/day～10mg/kg/day。所述1日量既可以1日1次、或一日分成2～3次而隔开适当的间隔给药，也可以间隔数日来分开给药。
本发明的组合物中相对于组合物总重量可以含有0.1～100重量％的具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽或在所述肽的N末端添加了棕榈酰基而得到的肽衍生物。
本发明的组合物可以进一步含有在药学组合物的制造中通常使用的适当的载体、赋形剂及稀释剂。另外，在药学组合物的制造中可以使用固体或液体的制剂用添加物。作为制剂用添加物，可以为任何的有机或无机的物质。
作为药剂学上允许的载体，因其剂型而不同，可列举：凡士林、液体石蜡、凝胶化烃(别名：液体石腊和聚乙烯的复合软膏基质(Plastibase))等烃类；中链脂肪酸甘油三酯、猪油、加硬PET、可可脂等动植物性油；鲸蜡醇、硬脂醇、硬脂酸、棕榈酸异丙酯等高级脂肪酸醇及脂肪酸及其酯类；聚乙二醇(聚乙二醇)、1,3-丁二醇、甘油、明胶、白糖、糖醇等水溶性基剂；甘油脂肪酸酯、聚乙二醇硬脂酸酯、聚氧乙烯固化蓖麻油等乳化剂；丙烯酸酯、海藻酸钠等粘合剂；液化石油气体、二氧化碳等喷射剂；对羟基苯甲酸酯类等防腐剂等，本发明的外用制剂可以使用这些物质利用通常的方法来制造。另外，除这些物质以外，也可以根据需要配合稳定剂、香料、着色剂、pH调节剂、稀释剂、表面活性剂、保存剂、抗氧化剂等。本发明的外用制剂可以利用通常的方法涂布于局部创伤部来使用。
作为赋形剂，可列举例如：乳糖、蔗糖、白糖、葡萄糖、玉米淀粉(corn starch)、淀粉、滑石、山梨糖醇、结晶纤维素、糊精、高岭土、碳酸钙、二氧化硅等。作为粘结剂，可列举例如：聚乙烯醇、聚乙烯醚、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍(tragacanth)、明胶、虫胶(shellac)、羟基甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、柠檬酸钙、糊精、果胶(pectin)等。作为润滑剂，可列举例如：硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇、二氧化硅、固化植物油等。作为着色剂，只要是通常医药品中许可添加的着色剂，均可以使用。在这些片剂、颗粒剂中，可以包衣糖衣、包衣明胶、根据其它需要适当地包衣。另外，可以根据需要添加防腐剂、抗氧化剂等。
本发明的药学的组合物也以本领域技术人员通常所制造的任何的剂型来制造(例：文献[雷明顿医药科学(Remington’s Pharmaceutical Science)、最新版；麦克出版公司(Mack Publishing Company)，伊斯顿(Easton PA)]，制剂的形态没有特别限定，可以优选为外用制剂。本发明的外用制剂中可以包括以下通常的外用制剂的形态：层剂(sheetagent)、液状涂布剂、喷雾剂、洗剂、霜剂、巴布剂、粉剂、浸透剂、喷雾剂、含有水和凝胶的凝胶剂、糊剂、擦剂、软膏剂、烟雾剂、粉末剂、悬浮液剂、经皮吸收剂等。这些剂型记述于所有的制药化学中一般公知的配方文献[雷明顿医药科学(Remington’s PharmaceuticalScience)，第15版(15th Edition)，1975，麦克出版公司(Mack Publishing Company)，伊斯顿(Easton)，宾夕法尼亚州(Pennsylvania)18042(第87章(Chapter 87)：Blaug，Seymour)。
作为本发明的一例，可以将所述组合物直接应用于皮肤或创伤部位。即，可以散布于创伤部位。作为在形成层的形态的情况下，涂布于创伤部位，此时，在对涂布的部位适当地进行绷带包扎而保护创伤，并且防止活性成分的治疗效果减少。使用市售的绷带，或也可以使用任何通常已知能够进行包扎物质。作为被市售的绷带的实例，可列举：Compeel(コムピール)、Duoderm(デュオダーム)、Tagaderm(テガダーム)及Opsite(オブサイト)。另外，除此以外，也可以根据需要配合稳定剂、香料、着色剂、pH调节剂、稀释剂、表面活性剂、保存剂、抗氧化剂等。
另外，本发明的药学的组合物被粘合于通常的橡皮膏药的创伤剥离覆盖物那样的固体支撑体上而使用。作为本发明的实施方式，预先用粘合层包覆固体支撑体，使肽衍生物在固体支撑体上的附着得到提高。作为粘合剂的实例，可以含有聚丙烯酸及氰基丙烯酸。
就这种形态的剂型而言，市售的剂型较多，作为例子，可列举：具有进行了穿孔的塑料膜形态的非附着性创伤剥离覆盖物的橡皮膏药(Smith & Nephew Ltd.)、Johnson &Johnson的薄带(strip)、贴剂(patch)、斑点(spot)、可塑性带状形态的创可贴(BAND-AID)；Colgate-Palmolive Co.(Kendall)的”Curity CURAD(キュリティキュラド)、Ouchless(アウチレス))；及American White Cross Laboratories，Inc.的弹性带STIK-TITE(スティックタイト)等。
作为本发明的一例，可以将所述肽衍生物和生理食盐水以一定的体积比进行混合，以液状涂布剂的形态将本发明的组合物剂型化。作为本发明的一例，可以混合所述本发明的肽衍生物和水溶性软膏基剂，并向其中添加生理食盐水而以软膏剂的形态将本发明的药学组合物剂型化。
但是，本发明的药剂学组合物的所述使用量参照给药经路、患者的年龄、性别、体重、患者的重症度、创伤的种类、适用部位、处理次数、处理时间、剂型、患者的状态、辅助剂的种类等多种关联因素而确定，因此，不能理解为所述有效量在任何侧面都对本发明的范围进行限制。
根据本发明的进一步其它观点，提供一种皮肤填充剂，其含有具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽作为有效成分。
“皮肤填充剂(dermal filler)”或“填料(filler)”是指：与皮肤组织类似的成分，是通过插入于特定部位使软部组织扩张，从而用于改善皱纹或矫正轮廓等使用的物质。在软组织扩张中经常使用胶原蛋白作为可注射的物质。另外，使用多种其它物质作为注射用皮肤填充物，所述多种其他物质包括蛋白质、脂肪、透明质酸(HA)、聚醇及羧基甲基纤维素、葡聚糖那样的其它聚合物。作为以胶原蛋白为主成分的皮肤填充剂，已知有以猪胶原蛋白为主成分的EVOLENCE30(ColBar LifeScience公司的皮肤填充剂的商标名)、以牛胶原蛋白为主成分的Zyderm或Zyplast(以上，Inamed公司的皮肤填充剂的商标名)、以人胶原蛋白为主成分的CosmoDerm或CosmoPlast(以上，Inamed公司的皮肤填充剂的商标名)等。作为以透明质酸为主成分的物质有：Rofilan(Rofil/Philoderm公司的皮肤填充剂的商标名)、Perlane、Restylane(以上，Medicis/Q-Med AB公司的皮肤填充剂的商标名)、Teosyal(Teoxane SA公司的皮肤填充剂的商标名)、Surgiderm(Corneal Laboratoire公司的皮肤填充剂的商标名)等。本发明的一个实施方式的皮肤填充剂可以通过在公知的皮肤填充剂中适量装载本发明的一个实施例的肽，或者利用共价键或非共价键使所述肽与皮肤填充剂骨架的高分子键合而制造。
根据本发明的其它观点，提供一种创伤治疗方法，其包含将药学上有效的量的具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽给药于蒙受创伤的个体的阶段。
所述蒙受创伤的个体可以为除人之外的哺乳动物。
根据本发明的其它观点，提供一种用于利用于创伤治疗的、具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽。
根据本发明的其它观点，提供一种用途，其将具有序列号1中所记载的氨基酸序列的YIGSR肽用于皱纹改善用化妆料组合物的制造。
以下，通过实施例、实验例及制造例对本发明详细地进行说明。但是，本发明并不限定于以下所公开的实施例、实验例及制造例，作为相互不同的多种形态而体现，以下的实施例、实验例及制造例为了使本发明的公开完全、使发明的范畴完全被本领域技术人员得知而提供。
实施例1：YIGSR的制造
委托肽制造会社(Anygen，韩国)，制造了YIGSR肽(序列号1)。
实施例2：palmitoyl-YIGSR的制造
使用棕榈酰-酪氨酸(palmitoyl-tyrosine)，用与实施例1的方法相同的方法制造在上述实施例1的YIGSR肽(序列号1)的N末端附着有棕榈酰基的肽衍生物(Pal-YIGSR、分子量：846)(Anygen，韩国)。
比较例1：Pal-RGD的制造
使用棕榈酰-精氨酸(palmitoyl-arginine)，用与上述实施例1相同的方法中制造在N末端附着有棕榈酰基的RGD肽。RGD为具有整合素结合活性的肽，是作为细胞附着剂等使用的物质。
比较例2：oleyl-YIGSR的制造
使用油烯基-酪氨酸(oleyl-tyrosine)，用与上述实施例1相同的方法制造在N末端添加有油基的YIGSR肽来代替棕榈酰基。
实施例3：Hs27细胞的培养
对作为人皮肤成纤维细胞的Hs27细胞(ATCC)，使用添加有10％FBS(Lonza，USA)的DMEM培养基(Lonza、USA)，在湿度95％、5％CO2、37℃的条件下进行培养。所述Hs27细胞使用5～20编号之间继代培养的细胞，对肽进行处理之前，在不含有FBS的DMEM培养基上培养24小时后，进行处理。
实验例1：YIGSR肽引起的胶原蛋白I表达的变化分析
1-1：利用了蛋白质印迹的YIGSR肽引起的胶原蛋白I表达的变化分析
为了确认本发明的一个实施例中YIGSR肽引起的对皮肤成纤维细胞的影响，首先，用不同浓度的上述实施例1的肽对Hs27细胞进行处理后，通过蛋白质印迹分析确认胶原蛋白(collagen)型I蛋白质的表达水平。
将各浓度(0、10-2、10-1、1、10、102、103、104及105nM)的肽对上述实施例3的Hs27皮肤成纤维细胞中处理24小时后，将该进行了处理的细胞在溶解缓冲液[150mM NaCl、1％Triton X-100、10mMTris、1mM EDTA、pH7.4]中进行超声波粉碎后，进行离心分离，并在分离上清液之后，用蛋白浓度测定法(Bradford assay)进行定量。将同量的蛋白质与5×试样缓冲液混合，在95℃下加热5分钟后，以6～15％浓度梯度SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis))进行电泳之后，使其吸附于硝基纤维素(nitrocellulose)膜。使抗-第1型胶原蛋白1次抗体(Rockland，USA)及抗-肌动蛋白1次抗体(Santa Cruz，USA)在含有5％脱脂乳(skimmed milk)的TBST缓冲液(含有0.05％吐温20的Tris缓冲液(Tris buffered saline with 0.05％吐温20)、pH7.6)中稀释并反应16小时后，用TBST 10分钟内清洗6次。其后，对抗-鼠兔过氧化酶-结合2次抗体(KPL、USA)进行处理，在室温下反应1小时后，再用TBST在10分钟内清洗6次，在ECL(增强化学发光(enhancedchemiluminescent))溶液(Amersham，USA)中显色进行确认。另外，将蛋白质印迹分析图像通过浓度分析(densitometric anaylsis)定量地比较，利用图像J程序(Ver1.38，http：//rsbweb.nih.gov/ij/index.html)。
其结果，如图1所示，本发明的一个实施例的YIGSR肽使处理量依赖性地胶原蛋白I蛋白质的表达显著地增加，在YIGSR肽浓度为103nM下最大地生成胶原蛋白。另外，与未处理的Hs27细胞的胶原蛋白I的表达水平比较，进行103nM YIGSR肽处理时增加了6倍以上胶原蛋白I。
接着，本发明人通过蛋白质印迹分析确认基于YIGSR肽处理时间的胶原蛋白生成水平。将1μM YIGSR肽对上述实施例1的Hs27皮肤成纤维细胞处理0、0.5、6、12及24小时后，将该被处理的细胞与上述的结果同样地进行蛋白质印迹分析。另外，将蛋白质印迹分析图像使用图像J程序(Ver1.38，http：//rsbweb.nih.gov/ij/index.html)定量地比较表达量。
其结果，如图1B所示，YIGSR肽的处理时间越延长，在Hs27细胞中胶原蛋白I的表达越增加，处理24小时时，将YIGSR肽与未处理的Hs27细胞相比，胶原蛋白I的表达水平增加约5倍左右。
1-2：利用了定量的RT-PCR的YIGSR肽引起的胶原蛋白I表达的变化分析
接着，本发明人通过mRNA水平确认了YIGSR肽对胶原蛋白I生成带来的影响。用各浓度(0、10、102、103、104及105nM)的肽对上述实施例3的Hs27皮肤成纤维细胞处理24小时后，使用TRIzol试剂(Invitrogen Corp，USA)对该被处理的细胞萃取整体RNA，将所述被萃取的RNA 1μg使用oligo(dT)引物及白血病病毒逆转录酶进行逆转录(reversetranscription)PCR。其后，对所述PCR扩增产物8μl、2xSYBR GreemI Premix ExTaq(TAKARA，Japan)10μl、1μM正方向及逆方向引物混合物2μl进行混合，使用Bio-Rad CFX96实时PCR检测系统(Bio-Rad CFX96实时PCR detection system)进行实时qPCR(实时qPCR)。此时，实时qPCR条件为，在95℃下加热1分钟后、在95℃下15秒(变性)、在60℃下15秒(退火)、在72℃下30秒(扩增)，上述操作重复40个循环而进行扩增。而且，根据由Bio-Rad CFX96实时PCR检测系统(Bio-Rad CFX96实时PCR detection system)提供的结果分析变解链曲线(melting curve)。为了确认胶原蛋白I mRNA而使用的引物如下所述：
正方向引物：5‘-GAACGCGTGTCATCCCTTGT-3’(序列号2)；及
逆方向引物：5‘-GAACGAGGTAGTCTTTCAGCAACA-3’(序列号3)。
其结果，如图1C所示，显示与胶原蛋白I蛋白质的表达水平类似的倾向性，在进行103nM YIGSR肽处理时，胶原蛋白I mRNA水平最高(参照图1C)。上述结果证明本发明的一个实施例的YIGSR肽在转录水平(transcriptional level)调节胶原蛋白I。
实验例2：YIGSR肽引起的细胞生存率的变化分析
为了确认本发明的一个实施例的YIGSR肽对细胞生存带来的影响，基于肽处理浓度及处理时间通过MTT分析确认了细胞生存率。
将上述实施例3的Hs27细胞在96孔板上以1×104细胞/孔的比率植入后，培养24小时，其后，在不含有血清的培养基上进一步培养24小时。而且，在实施例1的YIGSR肽为0、10、102、103、104及105nM的浓度下进行处理，培养24小时。其后，除去培养基，添加溶于PBS的0.5mg/ml MTT(Sigma-Aldrichi，USA)，在37℃下在CO2细胞培养器中反应3小时。其后，除去所述MTT溶液，将100μl的DMSO溶液添加于各自的孔中，使所述板涡旋振荡(vortexing)10分钟，以540nm测定溶液的吸光度。
其结果，如图2A所示，将实施例1的YIGSR肽与未处理的对照组比较时，用YIGSR肽进行了处理的细胞生存率没有显示有意义的差异，也没有观察到YIGSR肽处理量依赖的细胞生存率之差。
接着，对本发明的一个实施例中基于YIGSR肽处理时间的细胞生存率进行了分析。将上述实施例2的Hs27细胞在96孔板上以1×104细胞/孔的比率植入后，培养24小时，然后，在不含有血清的培养基上进一步培养24小时。而且，用103nM浓度的实施例1的YIGSR肽进行了处理，培养0、0.1、0.25、0.5、1、3、6、12及24小时，分析细胞生存率。
其结果，如图2B所示，用1μM的实施例1的YIGSR肽进行了处理时，观察Hs27细胞的生存率24小时，与未处理时相比没有显示有意义的差异(参照图2B)。这种结果证明：本发明的一个实施例的YIGSR肽没有给细胞生存带来影响，在转录水平上调节胶原蛋白I的表达。
实验例3：YIGSR肽引起的MMP-1表达的变化分析
MMP-1作为分解胶原蛋白的蛋白质分解酶众所周知。由此，为了确认由本发明的一个实施例的YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达增加是否由MMP-1的表达减少而引起，通过蛋白质印迹分析基于YIGSR肽处理时间确认了MMP-1表达水平。一边对上述实施例2的Hs27细胞进行培养，一边在不含有血清的培养基上进一步培养24小时后，用实施例1的YIGSR肽以103nM的浓度进行处理，培养0、0.1、0.25、0.5、1、3、6、12及24小时。然后，将所述细胞在与实验例1记载的相同条件下进行蛋白质印迹，此时，利用MMP-1(R & D systems，USA)作为1次抗体。另外，将蛋白质印迹分析图像使用图像J程序(Ver1.38，http：//rsbweb.nih.gov/ij/index.html)定量地比较表达量。
其结果，如图3所示，在不同的YIGSR肽的处理时间下在MMP-1蛋白质的表达水平上没有观察到有意义的差异(参照图3)。
其证明：本发明的一个实施例的YIGSR肽处理引起的细胞内胶原蛋白表达的增加是通过使胶原蛋白I基因表达增加的信号传递过程活化而诱导的，而不是由MMP-1表达减少引起的。
实验例4：YIGSR肽引起的FAK、Pyk2及ERK的磷酸化水平变化的分析
为了查明调节胶原蛋白I表达的信号传递过程，本发明人将在层粘连蛋白受体的下位信号传递机制作为焦点。已知YIGSR肽与层粘连蛋白受体结合并传递细胞内信号，例如，作为这种细胞内信号传递已知有FAK及Pyk2的磷酸化。已知FAK为酪氨酸(tyrosine)磷酸化酶，参与细胞的附着(adhesion)及扩散(spreading)过程(J.T.Parsons et al.，Oncogene，19：5606-5613，2000)。已知FAK参与细胞间的局部附着(focal adhesion)，在细胞移动及生存中进行重要的作用(J.L.Guan et al.，Nature，358：690-692，1992)。已知Pyk2通过过程在进行G蛋白质共轭受体(G-protein-coupled receptor)及MAP磷酸化酶信号机制的细胞扩散及移动(migration)中发挥重要的作用(H.Tang et al.，J.Biol.Chem.，277：5441-5447，2002)。由此，本发明人通过蛋白质印迹分析基于YIGSR肽处理时间观察了FAK、pyK2、及ERK的磷酸化水平。蛋白质印迹分析与上述实验例1的条件同样地进行，作为1次抗体，利用FAK(Cell signaling，USA)、phospho-FAK(Tyr397，Cell signaling，USA)、pyk2(Cell signaling，USA)、phospho-pyk2(Tyr402，Cell signaling，USA)、ERK(SantaCruz Biotechnology，USA)、及phospho-ERK(Thr202/Tyr204，Abcam，USA)。
其结果，如图4A所示，FAK的磷酸化(Tyr397)显示随YIGSR肽处理时间的增加而显著地增加的倾向，FAK的磷酸化水平在0.1小时(6分钟)处开始增加，持续进行磷酸化至24小时。另外，通过浓度分析定量地比较这种蛋白质表达水平时，实施YIGSR肽处理与未处理时相比，增加约2倍左右，这种磷酸化水平被保持直到处理24小时为止(参照图4B)。
另外，就Pyk2磷酸化(Tyr402)而言，从比FAK发生磷酸化慢的时刻即YIGSR肽处理开始6后观察到增加，比较浓度分析的结果，在进行了12小时处理时，与未处理时相比，磷酸化增加约1.5倍左右(参照图4A及图4B)。
另外，MAPK/ERK的情况下，进行YIGSR肽处理时的磷酸化水平与未处理时相比，急剧地增加约2.5倍，这种磷酸化增加持续了24小时(参照图4A及图4B)。
上述结果证明：本发明的一个实施例的YIGSR肽通过在Hs27人皮肤成纤维细胞中含有FAK、Pyk2及ERK的下位信号传递机制而诱导层粘连蛋白受体的磷酸化。
实验例5：由FAK及MEK抑制剂引起的由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I表达变化的分 析
为了确认由本发明的一个实施例的YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达是否由FAK及MAPK介导，利用了FAK及MEK抑制剂。
一边将上述实施例3的Hs27细胞在24孔板上培养，一边将所述细胞在没有血清的状态下进行培养24小时。然后，在所述细胞中用作为1μM FAK特异的抑制剂的PF573228(Tocris Bioscience，United Kingdom)处理24小时。此时，为了确认本发明的一个实施例的YIGSR肽引起的胶原蛋白I的表达诱导是否由FAK介导，用1μM YIGSR肽进行处理或不进行处理，使用蛋白质印迹分析对胶原蛋白I的表达进行分析。
其结果，如图5A所示，在使用作为FAK抑制剂的PF573228进行处理时，由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达显著地被抑制，这种结果证明：由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达基于FAK活性而介导(参照图5A)。
另外，为了确认MAPK/ERK信号机制是否与由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达关联，对Hs27细胞用YIGSR肽和作为MAPK/ERK特异抑制剂的PD98059(Tocris Bioscience，United Kingdom)进行处理，在与所述FAK抑制剂处理的实验相同的条件下进行实验。
其结果，如图5B所示，在作为MEK抑制剂的PD98059进行处理时，由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达显著地被抑制(参照图5B)。即，上述结果证明：由YIGSR肽所诱导的胶原蛋白I的表达基于MAPK/ERK信号机制而被介导(参照图5B)。
实验例6：Pal-YIGSR肽引起的胶原蛋白合成及ERK磷酸化分析
用上述实施例1及实施例2、及比较例2中制造的肽衍生物对培养中的Hs27皮肤成纤维细胞中进行处理，然后，用免疫印迹分析法对所述细胞中的第1型胶原蛋白表达量进行测定。对所述Hs27皮肤成纤维细胞使用添加有10％FBS(Lonza，USA)的DMEM培养基(Lonza，USA)、在湿度95％、5％CO2、37℃的条件下进行培养。用各种浓度(0、2、25、50及100μM)的肽处理24小时，或用100μM的肽按照各种时间(0、0.5、6、12及24小时)对所述Hs27皮肤成纤维细胞进行处理，然后，对该进行了处理的细胞在溶解缓冲液(150mM NaCl、1％Triton X-100、10mM Tris、1mM EDTA、pH7.4)中进行超声波粉碎之后，进行离心分离而分离上清液后，用考马斯亮蓝法进行定量。使等量的蛋白质混合于5×试样缓冲液中，在95℃下加热5分钟后，以6～15％浓度梯度SDS-PAGE进行电泳之后，使其吸附于硝基纤维素膜。使抗-第1型胶原蛋白1次抗体(Rockland，USA)、抗-磷酸化-ERK 1次抗体(Cell Signaling，USA)、及抗-肌动蛋白1次抗体(Santa Cruz，USA)在含有5％脱脂乳的TBST缓冲液(含有0.05％吐温20的Tris缓冲液(Tris buffered saline with 0.05％吐温20)、pH7.6)中稀释，使其反应16小时后，用TBST在10分钟内清洗6次。其后，对抗-鼠兔过氧化酶-结合2次抗体(KPL，USA)进行处理，在室温下反应1小时后，再用TBST在10分钟内清洗6次，在ECL溶液(Amersham，USA)中进行显色而确认。
其结果看到如下状态：在皮肤成纤维细胞中Pal-YIGSR对胶原蛋白的形成带来影响，浓度越增加，胶原蛋白合成量越增加，暴露时间越增加，胶原蛋白质合成量越增加(图6)。YIGSR与Pal-YIGSR相比，其程度弱，但使胶原蛋白合成增加。但是，在oleyl-YIGSR的情况下，在胶原蛋白合成程度上，与对照组没有大的差异(图7)。
不仅如此，也可以观察到Pal-YIGSR在皮肤成纤维细胞中引起ERK磷酸化诱导(图8)。但是，YIGSR及oleyl-YIGSR的情况下，对ERK磷酸化带来的影响微小。
实验例7：棕榈酰基的影响分析
本发明人等为了确认Pal-YIGSR引起的胶原蛋白合成增加是否纯粹地为棕榈酰基带来的影响，使用已知具有细胞附着能力的RGD肽进行了实验。
具体而言，使用比较例1中制造的Pal-RGD肽和没有附着棕榈酰基的RGD肽，与上述实验例1同样地进行实验。
其结果，RGD肽和Pal-RGD肽均在胶原蛋白合成程度上与对照组没有大的差异(图10)。其教导了：本发明的肽衍生物引起的胶原蛋白合成增加并不单单是棕榈酰基自身的功能引起的。
实验例8：Pal-YIGSR肽引起的细胞增殖的测定
将所述Hs27皮肤成纤维细胞在24孔培养容器中散布各40,000个之后，在5％的CO2、37℃下培养24小时，细胞可附着于培养容器的底部。第二天，换成含有FBS的培养基，然后，再培养24小时后，将上述实施例1及实施例2、而且用浓度不同的比较例1及比较例2的肽衍生物地进行处理，再培养72小时，用结晶紫法(crystal violet assay)测定细胞的增殖。
具体而言，首先，除去各自的孔的培养基之后，每1孔添加500ml的0.1％结晶紫溶液并染色5分钟之后，除去结晶紫溶液，用蒸馏水清洗3次并重复进行4次，至孔成为清澈。如果用于清洗的蒸馏水变得清澈，则除去蒸馏水，一边添加95％乙醇1ml并搅拌20分钟，一边使细胞所染色的结晶紫溶解。将该溶液以各孔200ml分配到96孔容器中，使用ELISA判读器以590nm测定吸光度，但后，将未进行试验物质处理的组作为对照组，计算相对的细胞增殖。
其结果，Pal-YIGSR在0.5～50μM的浓度范围显示细胞增殖，特别是在100及500μM浓度范围分别显示13％及23％的细胞增殖(图9)。
如上所述，本发明的一个实施例的Pal-YIGSR肽衍生物在培养的皮肤成纤维细胞中使第1型胶原蛋白生成增加，促进纤维芽细胞的增殖，其证明：在今后开发抗老化及伤口再生制剂时，本发明的肽衍生物可以作为有效物质使用。
制造例
制造例1：注射液剂
含有YIGSR肽衍生物10mg的注射液剂用如下的方法制造。
使YIGSR肽衍生物10mg、氯化钠0.6g溶解于纯水，制备100ml溶液。将该溶液用0.2μm过滤器进行过滤灭菌。
所述注射液剂的构成成分如下所述。
制造例2：柔软化妆水(皮肤化妆水)
如下所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的柔软化妆水。
制造例3：营养化妆水(乳液化妆水)
如下所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的营养化妆水。
制造例4：营养霜
如下所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的营养霜。
制造例5：按摩霜
如下所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的按摩霜。
制造例6：润肤膏
如下所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的润肤膏。
制造例7：皮肤填充剂
如下记的表所述，利用通常的方法制造含有YIGSR肽的皮肤填充剂。
参考上述实施例、实验例及制造例对本发明进行了说明，但其只不过为例示的内容，如果是本领域技术人员，则能够理解：可以由此进行多种变形及均等的其它实施例这一点。因此，本发明的真的技术的保护范围应该通过专利权利要求的技术思想而确定。
工业上实用性
本发明的一个实施例的YIGSR肽通过确认在转录水平上使胶原蛋白I的生成增加、未对细胞的生存率带来影响、不会使胶原蛋白I蛋白质分解的MMP-1蛋白质水解酶的表达减少，证明了可以诱导胶原蛋白生成。因此，将本发明的一个实施例的YIGSR肽可有用地用作通过胶原蛋白减少而诱发的皮肤老化及皱纹改善用化妆料组合物及创伤治疗用药学的组合物。
序列表文本
序列号1是指本发明的一个实施例的具有胶原蛋白合成能力的序列。
序列号2是指用于扩增胶原蛋白I的mRNA的正方向引物。
序列号3是指用于扩增胶原蛋白I的mRNA的逆方向引物。

Claims (3)

1.一种皮肤填充剂，其含有在YIGSR肽的N末端添加了棕榈酰基而成的YIGSR肽衍生物和选自胶原蛋白和透明质酸的可注射的物质，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
2.一种在YIGSR肽的N末端添加了棕榈酰基而成的YIGSR肽衍生物在制备用于治疗个体创伤的药物组合物中的用途，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
3.一种在YIGSR肽的N末端添加了棕榈酰基而成的YIGSR肽衍生物在制备用于改善皱纹的化妆料组合物中的用途，所述YIGSR肽具有序列号1中所记载的氨基酸序列。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10995117B2 (en) 2016-03-23 2021-05-04 Kine Sciences Co., Ltd. Peptide for skin regeneration or wound treatment and use thereof
US10188694B2 (en) 2016-03-23 2019-01-29 Bio Pep Co., Ltd. Peptide for skin regeneration or wound treatment and use thereof
CN107383163B (zh) * 2017-07-03 2019-10-11 择天生物科技（大连）有限公司 一类促胶原分泌超短肽及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101906140A (zh) * 2009-06-02 2010-12-08 首都医科大学 脂肪链和yigsr五肽缀合物及其合成方法和应用

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5529769A (en) 1994-12-20 1996-06-25 Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. Cosmetic compositions containing betulinic acid
US5668119A (en) * 1996-02-22 1997-09-16 Medenica; Rajko D. Topical pharmaceutical containing heparin and method of treatment
JP4705319B2 (ja) * 2002-07-19 2011-06-22 三洋化成工業株式会社 創傷被覆材
WO2004106359A2 (en) * 2002-09-23 2004-12-09 Northwestern University Self-assembled peptide-amphiphiles & self-assembled peptide nanofiber networks presenting multiple signals
FR2854897B1 (fr) * 2003-05-12 2007-05-04 Sederma Sa Compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques pour reduire les signes du vieillissement cutane.
US20050063937A1 (en) * 2003-09-16 2005-03-24 Cheng Li Multiple-arm peptide compounds, methods of manufacture and use in therapy
US8791073B2 (en) * 2004-05-14 2014-07-29 William Marsh Rice University Peptide-modified polyurethane compositions and associated methods
KR20070100948A (ko) * 2005-01-21 2007-10-15 노오쓰웨스턴 유니버시티 세포의 캡슐화 방법 및 조성물
JP4439510B2 (ja) * 2005-03-22 2010-03-24 ロート製薬株式会社 新規ペプチド
JP4033877B2 (ja) * 2005-09-29 2008-01-16 株式会社ファンケル Ｉ型コラーゲン産生促進用組成物
KR20090055079A (ko) 2007-11-28 2009-06-02 (주)더페이스샵코리아 야생 참마 추출물을 함유하는 피부노화 방지용 화장료조성물
JP5123683B2 (ja) * 2008-02-07 2013-01-23 ロート製薬株式会社 新規ペプチド
KR20090132815A (ko) * 2008-06-23 2009-12-31 (주)케어젠 형질전환 성장인자의 활성을 가지는 펩타이드 및 그의 용도
TW201028171A (en) * 2008-12-15 2010-08-01 Calpis Co Ltd Peptides for inhibiting skin aging
CN102498128B (zh) * 2009-04-14 2015-02-18 凯尔格恩有限公司 具有转化生长因子的活性的肽及其用途
US20110189292A1 (en) * 2009-04-20 2011-08-04 Allergan, Inc. Dermal fillers comprising silk fibroin hydrogels and uses thereof
WO2012121695A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-13 Al-Qahtani Ahmed H Skin cream
KR101472476B1 (ko) * 2011-11-14 2014-12-15 (주)노바셀테크놀로지 콜라겐 합성능이 있는 신규 펩타이드 유도체 및 그의 용도
KR102123972B1 (ko) * 2012-12-21 2020-06-18 타슬리 파마슈티컬 그룹 컴퍼니 리미티드 두통을 치료하기 위한 약학적 조성물 및 그의 제조방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101906140A (zh) * 2009-06-02 2010-12-08 首都医科大学 脂肪链和yigsr五肽缀合物及其合成方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Laminin peptide YIGSR induces collagen synthesis in Hs27 human dermal fibroblasts;Jong Hyuk Yoon, et al;《Biochemical and Biophysical Research Communications》;20121027;第428卷;第416-421页 *

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