CN1051180A

CN1051180A - 用于治疗的核苷

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Publication number: CN1051180A
Application number: CN90108846A
Authority: CN
Inventors: 珍妮特·利斯特·赖德奥特; 乔治·安德鲁·弗里曼; 史蒂文·安德逊·肖特; 梅里克·里查德·阿尔蒙德; 乔恩·洛伦·柯林斯
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1989-10-03
Filing date: 1990-10-02
Publication date: 1991-05-08
Anticipated expiration: 2005-10-02
Also published as: HU208702B; AU632369B2; FI904854A0; IE903519A1; JPH03167197A; IL95870A0; CA2026730A1; PT95489A; HUT55407A; HU906302D0; NZ235534A; AU6371690A; KR910007655A; US5153318A; EP0421739A1; CN1027373C

Abstract

本发明涉及3′-叠氮基嘌呤核苷以及它们在医疗中的应用，特别是用于治疗或预防人体免疫缺损病毒和乙型肝炎病毒传染病，还涉及它们的制备方法以及含有它们的组合物。

Description

本发明涉及3′-叠氮基嘌呤核苷及其药物上可接受的衍生物，以及它们在治疗中的应用，特别是用于治疗某些病毒性传染病。

近来已经显示出特别重要性的一组病毒是反录病毒。反录病毒形成一小组RNA病毒，为了复制，它们必须首先将它们的基团组的RNA“逆转录”为DNA（“转录”通常描述的是由DNA合成RNA）。一旦处于DNA状态，病毒的基团组则可结合到宿主细胞基团组中，使它能充分利用宿主细胞的转录/转译机构以便于复制。一旦被结合，病毒的DNA实际上与宿主的DNA难以区分，在这种状态下，只要该细胞生存，病毒则可持续存在。由于在这种形式下，进攻实际上不会使其受到伤害，因此，任何治疗必须针对病毒生命周期的另一阶段。

一种反录病毒即人体免疫缺损病毒（HIV）已经可重复地被从患有获得性免疫缺损综合征（AIDS）或具有AIDS前期经常出现的症状的病人体中分离出来。

AIDS是一种抑制免疫的或破坏免疫的疾病，它使患者易感染致命的随机传染病。特性上，AIDS与T-细胞的进行性排除有关，特别是与具有OKT₄表面标记的辅助物-诱导物子集有关。HIV是细胞病的，并且显示出优先传染以及破坏具有OKT₄标记的T-细胞，目前一般认为HIV为AIDS的病原体。

由于发现了HIV是AIDS的病原体，因此，对于可有效地用于治疗AIDS的抗-HIV化学治疗剂已经提出了许多建议，例如：美国专利4，724，232描述了3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（它有一个被认可的名称zidovudine），它的药物上可接受的衍生物以及它们用于治疗人体反录病毒传染病包括AIDS和有关的临床疾病。另外的3′-叠氮基核苷类似物被描述于欧洲专利说明书217580中。

在世界范围内有较大影响的另一组病毒性病原体是肝炎病毒，特别是乙型肝炎病毒（HBV）。

HBV在亚洲国家是非常普遍的，并且也流行于接近撒哈拉沙漠的非洲地区。该病毒与最初的肝细胞癌在病原上是相关的，并且被认为是该病毒引起世界80%的肝癌。在美国每年有1万多人住院治疗HBV病，平均250人死于暴发性疾病。美国目前估计共有500，000-1百万传染性携带者。慢性活动型肝炎将出现在超过25%的携带者中，并且常常会发展成肝硬变。在美国估计每年有5000人死于与HBV有关的肝硬变，大约1000人死于与HBV有关的肝癌。即使已经有了一种通用的HBV疫苗，但仍然继续需要有效的抗-HBV化合物。大量的持续被传染的携带者贮主，估计全世界有2.2亿，他们接受接种是无益的，由于HBV引起肝病，因而他们将继续处于非常危险的状态中。这些携带者人群充当了使该疾病永久存在于易感染的个人的传染源，特别是在地方病流行的地区或高危人群如Ⅳ药滥用者和同性恋者。因此，大量需要有效的抗病毒药剂，用来控制慢性传染病和减少向肝细胞癌的发展。

具有HBV的传染病的临床症状包括头痛、发热、不适、恶心、呕吐、厌食和腹痛。该病毒的复制通常受免疫反应控制，并且人体的恢复期要持续数周或数月，但该传染病可能更严重地导致如上所述的持久的慢性肝病。在“人的病毒性传染病（Viral Infections of Humans）”（第二版，Ed.，Evans，A.S.（1982）Plenum Publishing Corporation，New York）一书中，第12章详细地描述了病毒性肝炎传染病的病因学。

现在我们已经发现如下所述的某些3′-叠氮基嘌呤核苷可用于治疗病毒性传染病，特别是反录病毒传染病，尤其是HIV，或肝炎病毒传染病，特别是HBV。

因此，根据本发明，我们提供通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物：

其中R代表卤素（如氯）;C_1-6烷氧基（如甲氧基或异丙氧基）;C_3-6环烷氧基（如环丁氧基，环丙氧基）;芳氧基（如苯氧基）或芳基烷氧基（如苄氧基），其中芳基可任意地被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基或羟基取代;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基（如甲基）、芳基（如苯基）、包括芳环烷基在内的芳烷基（如苄基、苯乙基、苯基环丙基）、以及C_3-6环烷基（如环丙基）;或含有至少一个氮原子的4-至6-节杂环（如氮杂环丁基、吡咯烷基或哌啶基），该环通过一个/该氮原子与嘌呤碱键合。

上述的通式（Ⅰ）化合物及其药物上可接受的衍生物包括通式（ⅠA）化合物或其药物上可接受的衍生物：

其中R代表C_1-6直链、支链或环烷基（如甲基）。

上述的通式（Ⅰ）化合物及其药物上可接受的衍生物包括通式（ⅠB）化合物或其药物上可接受的衍生物：

其中R代表卤素（如氯）;C_1-6烷氧基（如甲氧基或异丙氧基）;C_3-6环烷氧基（如环丙氧基）;芳氧基（如苯氧基）或芳烷氧基（如苄氧基），其中芳基可任意地被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基或羟基取代;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基（如甲基）、芳基（如苯基）、芳烷基（如苄基）以及C_3-6环烷基（如环丙基）。

优选的通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物包括R代表下述基团的通式（Ⅰ）化合物，即R代表卤素（如氯）;C_1-6烷氧基（如甲氧基，异丙氧基）;C_3-6环烷氧基（如环丁氧基）;芳氧基（如苯氧基）;芳烷氧基（如苄氧基）;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基（如甲基、丙基）、包括芳环烷基在内的芳烷基（如苄基、苯乙基、苯基环丙基）;或含有一个氮原子的4-或5-节杂环（如氮杂环丁基、吡咯烷基），该环通过该氮原子与嘌呤碱键合。

特别优选的通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物包括R代表下述基团的通式（Ⅰ）化合物，即R代表C_1-6烷氧基（如甲氧基、异丙氧基）;芳氧基（如苯氧基）、芳烷氧基（如苄氧基）;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基（如甲基或丙基）和C_3-6环烷基（如环丙基）;或含有一个氮原子的4-或5-节杂环（如氮杂环丁基、吡咯烷基），该环通过该氮原子与嘌呤碱键合。

特别优选的通式（Ⅰ）化合物的例子为：

1.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

2.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苄氧基-9H-嘌呤，

3.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-二甲基氨基-9H-嘌呤，

4.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-丙基氨基-9H-嘌呤，

5.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丙基甲基氨基）-9H-嘌呤，

6.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苯氧基-9H-嘌呤，

7.2-氨基-6-（1-氮杂环丁基）-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-9H-嘌呤，

8.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-吡咯烷基-9H-嘌呤。

编号为1至6的化合物特别用于治疗HBV传染病。编号为2，3和5的化合物特别用于治疗HIV传染病。

上述的通式（Ⅰ）化合物及其药物上可接受的衍生物在下文中称为本发明的化合物。

本发明的一个方面是提供了本发明的化合物在医疗中的应用，特别是用于治疗反录病毒的或肝炎传染病。

根据本发明可被治疗或预防的反录病毒传染病的例子包括人体反录病毒传染病如人体免疫缺损病毒（HIV）例如HIV-1或HIV-2传染病，以及人体T-细胞淋巴营性病毒（HLTV）例如HTLV-Ⅰ或HTLV-Ⅱ传染病。本发明的化合物特别用于治疗AIDS和有关的临床疾病如与AIDS有关的综合症（ARC），进行性的扩散淋巴结病（PGL），与AIDS有关的神经病，如多发性硬化或热带轻截瘫，还有抗-HIV抗体-阳性和HIV-阳性疾病，它包括无症状患者患有的这类疾病，卡波济肉瘤和血小板减少性紫癜。

根据本发明可被治疗或预防的肝炎传染病的例子是乙型肝炎传染病。

本发明的化合物也可用于治疗牛皮癣。

本发明的另一方面包括：

a）.一种治疗或预防患者例如哺乳动物如人体内的病毒性传染病，特别是肝炎或反录病毒传染病的方法，它包括用治疗有效量的本发明化合物治疗患者。

b）.在制备治疗或预防上述任何传染病或疾病的药剂中，使用本发明的化合物。

“一种药物上可接受的衍生物”是指通式（Ⅰ）化合物或可给受体服用的任何其它化合物的任何药物上可接受的盐、酯，或这些酯的盐，它们能够提供（直接或间接）所述的化合物或抗病毒活性代谢产物或其残余物。

优选的酯包括羧酸酯，其中该酯类的羧酸部分的非羰基部分选自直链或支链的烷基如甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、烷氧烷基（如甲氧甲基），芳烷基（如苄基），芳氧烷基（如苯氧甲基），芳基（如被卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基任意取代的苯基）;磺酸酯如烷基-或芳烷基磺酰基（如甲磺酰基）;氨基酸酯（如L-缬氨酰或L-异亮氨酰）;以及5′-一、二或三磷酸酯，该磷酸酯可进一步被酯化，例如被C_1-20醇或其反应衍生物，或被2，3-二（C_6-24′）酰基甘油酯化。

关于上述的酯，除非另有说明，存在于酯中的任何烷基部分优选含有1至18个碳原子，特别是1至4个碳原子。存在于这些酯中的任何芳基部分优选包括苯基。

任何有关的任何上述化合物也包括有关的其药物上可接受的盐。

本发明的药物上可接受的盐和其药物上可接受的衍生物的例子包括碱盐，例如由一种合适的碱衍生的碱盐，如碱金属（如钠）、碱土金属（如镁）盐，铵和NX+₄（其中X为C_1-4烷基）。药物上可接受的酸加成盐包括下列酸的盐，有机羧酸如乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、羟乙磺酸、乳糖酸和琥珀酸;有机磺酸如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸，以及无机酸如盐酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸。

上述的本发明化合物及其药物上可接受的衍生物可与其他治疗剂结合使用，用于治疗上述传染病或疾病。这些其他治疗剂的例子包括能有效地治疗HIV传染病、HBV传染病或有关的疾病的药剂如3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（zidovudine），其他的2′，3′-二脱氧核苷如2′，3′-二脱氧胞苷，2′，3′-二脱氧腺苷以及2′，3′-二脱氧肌苷，羰鸟苷，无环的核苷（如无环鸟苷），3′-脱氧-2′，3′-二脱氢胸苷（D₄T），3′-硫代-2′，3′-二脱氧胞苷，干扰素如α-干扰素，肾分泌抑制剂如羟苯磺胺，核苷转移抑制剂如双嘧啶氨醇，以及免疫抑扬调节剂如间白细胞杀菌素Ⅱ和粒细胞巨噬细胞菌落促进因子，可溶的CD₄或其遗传工程的衍生物，影响细胞膜的化合物如钙通道抑制剂例如维拉帕米，TIBO，以及膦酰基甲酸。这种组合治疗的组分化合物可以以分离的或组合的制剂形式同时给药或在不同时间给药，例如按次序给药，以便达到组合的效果。

本发明进一步提供了本发明的组合物的药物制剂，这些化合物在此也称为活性成分。这些药物制剂可通过任何合适的途径进行给药治疗，这些途径包括经口的、直肠的、鼻的、局部的（包括颊的和舌下的）、阴道的和肠胃外的（包括皮下的、肌内的、静脉内的和真皮内的）。还应认识到优选的途径将随受体的病情和年龄、传染病的性质和所选择的活性成分而变化。

一般地，合适的剂量范围为每千克受体的体重每天3.0至120mg，优选范围为每千克体重每天6至90mg，最优选范围为每千克体重每天15至60mg。所需的剂量优选以二、三、四、五、六或更多的亚剂量在全天以合适的时间间隔进行给药。这些亚剂量可以单位剂量形式给药，例如每单位剂量形式含有10至1500mg，优选20至1000mg，以及最优选50至700mg的活性成分。

理想地，应当服用活性成分以达到活性化合物的最高血浆浓度，该浓度为约1至约75μM，优选约2至50μM，最优选约3至约30μM。这可以被达到，例如通过静脉内注射含活性成分0.1至5%的溶液，可以是盐水溶液，或口服含约1至约100mg/Kg活性成分的药丸。所需的血液含量可通过连续的输注约0.01至约5.0mg/Kg/小时的活性成分或通过间歇的输注含有约0.4至约15mg/Kg的活性成分来维持。

虽然可以单独服用活性成分，但优选以其药物制剂给药。本发明的制剂包括至少一种上述的活性成分，以及一种或多种其可接受的载体和任意其他治疗剂。每种载体必须是“可接受的”，其意义是与制剂的其他成分是相容的，并且对病人是无害的。

制剂包括那些适于口服、直肠的、鼻的、局部的（包括颊的和舌下的）、阴道的或肠胃外的（包括皮下的、肌内的、静脉内的和真皮内的）给药的制剂。这些制剂通常可以是单位剂量形式，并且可通过制药领域内已知的任何方法制备。这些方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合在一起的步骤。一般地，这些制剂可通过将活性成分与液体载体或精细粉末固体载体或两者均匀地紧密地结合在一起来制备，然后如果必要的话，将产品加工成型。

适合于口服给药的本发明的制剂可以是分散单元，如胶囊、扁囊剂或片剂，每一个中含有预先确定量的活性成分;也可以是粉剂或粒剂;是水的或非水的液体的溶液或悬浮液;或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。该活性成分也可以是团块、药糖剂或糊剂。

片剂可通过任意地与一种或多种辅助成分压制或模制而制得。压制的片剂可通过在合适的机器中压制自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分而制备，其中可任意地混有粘合剂（如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟丙甲基纤维素），润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，崩解剂（如羟基乙酸淀粉钠、交联的聚乙烯吡咯烷酮、交联的羧甲基纤维素钠），表面活性剂或分散剂。模制的片剂可通过在合适的机器中模制用一种隋性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物而制备。这些片剂可任意地被包衣或刻痕并进行配制以便能缓慢或可控地释放其中使用的活性成分，例如不同比例的羟丙甲基纤维素可提供所需的释放曲线。可任意地对片剂进行肠包衣，以便达到在肠的几部分中释放，而不是在胃中释放。对于嘌呤核苷衍生物来说特别优选的是那些易于酸性水解的化合物。

如上所述的适于口服使用的制剂还可包括用于中和胃酸的缓冲剂。这些缓冲剂可选自各种有机或无机试剂如混有其共轭盐的弱酸或弱碱。

适于口腔内局部给药的制剂包括：含有处于调味基中的活性成分的锭剂，这种调味基通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶;含有处于惰性基中的活性成分的软锭剂，这种惰性基如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶;以及含有处于合适的液体载体中的活性成分的含漱剂。

用于直肠给药的制剂可以是含有合适的基料的栓剂，如含有可可脂或水杨酸盐。

适用于阴道给药的制剂可制成阴道栓剂、塞子、乳油、凝胶糊剂、泡沫或喷雾制剂，这些制剂除含有活性成分外还含有本领域已知的并且合适的载体。

适用于非肠道给药的制剂包括：含水的和非水的等渗无菌的注射溶液，该溶液可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使该制剂变成与所给定的受体的血液等渗的溶质;以及含水的和非水的无菌悬浮体，它可包括悬浮剂和增稠剂如脂质体或其它用于使这些化合物以血液成分或一种或多种器官为目标的微粒体系。这些制剂可存在于单位剂量或多剂量的密封容器例如安瓿和小瓶中，并且可被贮存在冷冻干燥条件下，在使用之前，只需即刻加入无菌的液体载体如注射用水。由上述种类的无菌粉末、颗粒和片剂可配制临时的注射溶液和悬浮液。

优选的单位剂量制剂是那些含有如上所述的日剂量或单位的，日亚剂量的，或其合适的份数的活性成分的制剂。

本发明的化合物也可以兽医制剂的形式提供使用，其可通过该领域常规方法制备。

应该认识到关于上述类型的制剂，除了上面特别提到的成分外，本发明的制剂还可含有本领域常用的其他试剂，例如适用于口服给药的制剂可含有其他的试剂如增甜剂、增稠剂和调味剂。

本发明还包括通式（Ⅰ）化合物及其药物上可接受的衍生物的制备方法，它包括：

A）.脱去通式（Ⅱ）化合物中的羟基保护基Y;

（其中R如上所定义，Y代表羟基保护基）;或

B）.使通式（ⅡA）化合物

（其中R如上所定义，R²是氨基保护基）或其官能等价物，例如其甲硅烷基化衍生物，与通式（ⅡB）化合物

（其中Y如上所定义，A是一离去基团）进行反应生成通式（ⅡC）化合物：

其中R、R²和Y如上所定义，然后使氨基和羟基脱保护;或

C）.使通式（ⅡD）化合物：

（其中R如上所定义）与通式（ⅡE）化合物在有合适的转移酶存在下进行反应：

（其中B代表嘧啶或嘌呤碱）;

D）.令R代表卤素的通式（Ⅰ）化合物与合适的试剂反应，使所述的卤素转化为通式（Ⅰ）中R所代表的另一基团;此后或与此同时进行一种或多种的下列任意的转化：

（ⅰ）.脱去任何剩余的保护基;

（ⅱ）.当生成通式（Ⅰ）化合物时，将所述的化合物转化为其药物上可接受的衍生物;以及

（ⅲ）.当生成通式（Ⅰ）化合物的药物上可接受的衍生物时，将所述的衍生物转化为通式（Ⅰ）的母体化合物，或转化为通式（Ⅰ）化合物的另一种药物上可接受的衍生物。

关于方法A），通式（Ⅱ）中的5′-位可用常规的保护基保护，该保护基如酰基，例如链烷酰基、取代的链烷酰基（如烷氧链烷酰基）或芳酰基如乙酰基，甲氧乙酰基或苯甲酰基;或醚基例如三烷基甲硅烷基如叔丁基二甲基甲硅烷基;或其它基团如三苯甲基或苄基。

保护基团可依次通过酸性水解或碱性水解脱去，优选地，酰基通过碱性水解脱去而甲硅烷基通过酸性水解或氟离子脱去。

在方法A）中，起始的通式（Ⅱ）化合物可通过通式（Ⅲ）化合物的反应很方便地制备：

其中Y和R如上所定义，以及X是一离去基团如有机磺酸酯（如甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯）基团，该反应是用合适的叠氮化物如碱金属叠氮化物（如叠氮化锂）处理，并在极性非质子溶剂如二甲基甲酰胺（DMF）或二甲亚砜（DMSO）中，在高温如70至100℃下进行。

通式（Ⅲ）化合物可通过通式（Ⅳ）化合物的2′-脱氧合作用很方便地制备：

（其中X、R和Y如上所定义），例如，通过与三氟甲基苯甲酰卤如间三氟甲基苯甲酰氯，在有碱如三乙胺或4-二甲基氨基吡啶（DMAP）存在下，在惰性溶剂如二氯甲烷（DCM）中进行反应，接着通过光解除去所得的三氟甲基苯甲酸酯的三氟甲基苯甲酰氧基，优选的是在有光敏剂如9-甲基咔唑存在下进行，得到所需的通式（Ⅲ）化合物。

另外，通式（Ⅲ）化合物可通过通式（Ⅳ）化合物的脱氧合作用很方便地制备，例如，一般方法是与硫代碳酸酯如邻苯基氯硫羰甲酸酯，在有碱如DMAP存在下，在惰性溶剂如DCM中进行反应得到相应的硫代苯甲酸酯，接着通过还原除去硫代苯甲酸酯，该还原使用如三正丁基锡氢化物，并在有偶氮异丁腈存在下，在高温下进行。

通式（Ⅳ）化合物可通过处理通式（Ⅴ）化合物很方便地制备：

其中X和Y如上所定义，R³为OR^3a、NHR^3b、卤素，具有两个选自C_1-6烷基、芳基、包括芳环烷基在内的芳烷基和C_3-6环烷基的取代基的氨基，或含有至少一个氮原子的4-至6-节杂环，该环通过该氮原子与嘌呤碱键合，R²和R^3b是胺保护基如酰基，优选乙酰基，R^3a是羟基保护基如氨基甲酰基（如二苯基氨基甲酰基），以及R⁴是羟基保护基，如C_1-4链烷酰基（如乙酰基）或芳酰基（如苯甲酰基），一般是用酸如盐酸处理得到所需的通式（Ⅳ）化合物，对于R是C_1-6烷氧基;C_3-6环烷氧基;芳氧基或芳烷氧基;或单取代的氨基（如上所定义）的通式（Ⅳ）化合物的制备，所述的处理是在有合适的烷基化剂或胺的存在下进行的。

通式（Ⅴ）化合物可通过通式（Ⅵ）化合物

（其中R²和R³如上所定义，以及R⁵是一离去基团如三甲基甲硅烷基）与通式（Ⅶ）的糖进行反应而方便地制备：

（其中Y、R⁴和X如上所定义，R⁶是一离去基团如酯（如乙酸酯或苯甲酸酯）或卤化物基团），该反应在惰性溶剂如甲苯中，在有路易斯酸如三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯或四氯化锡的存在下进行。

R³为OR^3a的通式（Ⅵ）化合物可通过相应的鸟嘌呤衍生物的反应很方便地制备，例如，根据Zou和Robins的方法（Can.J.Chem.，65（6）1436-7（1987））从鸟嘌呤开始，令其与合适的酰基化剂如乙酸酐反应生成2N，9-二酰基鸟嘌呤化合物，然后用如二苯基氨基甲酰氯处理。在N-9乙酰基被除去后，生成2N-酰基-6-O-二苯基氨基甲酰基鸟嘌呤化合物，接着将此产物与甲硅烷基化剂如N-O-双（三甲基甲硅烷基）乙酰胺，在惰性溶剂中反应得到所需的通式（Ⅵ）化合物。其他的通式（Ⅵ）化合物可用常规方法如根据Zou和Robins的方法进行制备。

1-取代基是离去基团R⁶（如上所定义）和2-取代基是羟基保护基R⁴（如上所定义）的通式（Ⅶ）化合物由相应的3-X，5-OY（X和Y如上所定义）1，2-环缩酮很方便地制备，例如当需要R⁶和R⁴是乙酰基时，用乙酸酐/乙酸和硫酸进行处理。

上述的3-X，5-OY1，2-环缩酮可由相应的3-OH，5-OY1，2-环缩酮化合物制备，例如，在X是甲磺酰基的情况下，用甲磺酰氯和一种有机碱（如三乙胺）进行处理。

上述的3-OH，5-OY化合物可由1，2-O-异亚丙基-D-呋喃木糖（Aldrich）制备，例如，在Y是甲氧羰基的情况下，用氯甲酸甲酯和一种有机碱（如吡啶）进行处理。该1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃木糖也可由D-木糖制备，如在美国专利4，916，218中描述的。

为了制备R是氯的通式（Ⅰ）化合物，用市场上可买到的腺苷脱氨基酶处理，从而将R是C_1-3烷氧基的通式（Ⅰ）化合物酶催化转化为3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧鸟苷（AZG）。在保护了AZG的5′-羟基之后，例如通过乙酰化作用，接着氯化，例如用POCl₃，根据方法（A），用常规方法可除去5′-乙酰基保护基。

关于方法（B），通式（ⅡC）化合物的保护基R²和Y可是常用的氨基和羟基保护基，如酰基例如链烷酰基如乙酰基或异丁酰基，或芳酰基如苯甲酰基;芳烷基如苄基;或三烷基甲硅烷基如叔丁基二甲基甲硅烷基。使用特殊类型的保护基取决于被保护的基团的性质。这些保护基团可用常规方法，例如通过酸性水解或碱性水解依次除去。一般地，通过碱性水解除去酰基，通过酸性水解或氟离子除去甲硅烷基。

通式（ⅡA）化合物，其中R²如上所定义，可以盐的形式如碱金属盐的形式例如N9-钠盐，或以完全甲硅烷基化的衍生物的形式与通式（ⅡB）化合物反应，通式（ⅡB）中的Y如上所定义，A是一离去基团，例如卤原子如氯，酰氧基如乙酰氧基，烷氧基如甲氧基，该反应是在有一种催化剂如四氯化锡或三甲基甲硅烷基三氟甲磺酰酯存在下，在合适的溶剂如甲苯中进行。

通式（ⅡA）的嘌呤碱可由市场上可买到的2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma Chemical Co.）制备，2-氨基-6-O-取代的嘌呤可通过用钠和合适的醇处理2-氨基-6-氯嘌呤而制备。2-氨基-6-N-取代的嘌呤可通过用合适的胺或通式（Ⅷ）化合物处理2-氨基-6-氯嘌呤制备，该制备在有机溶剂如含有有机碱如三乙胺的乙腈中进行，接着用本领域已知的方法保护2-氨基，得到所需的通式（ⅡA）化合物。

通式（ⅡB）化合物可用技术人员公知的方法或很容易从化学文献中得知的方法制备，例如，根据G.W.J.Fleet和Jong Chan Son的方法，（1987）Tetrahedron，Lett.Vol.28No.31 pp3615-3618。

根据方法C，通式（Ⅰ）化合物可通过将通式（ⅡD）的嘌呤碱，其中R如上所定义，与通式（ⅡE）化合物，其中B如上所定义，在有转移酶如N-脱氧核糖基转移酶的存在下进行反应而酶催化制备。后述的酶可用标准的生化技术，从表示为乳酸杆菌酶的大肠杆菌SS6030/14中分离出来，该大肠杆菌可从美国典型培养物收集中心（ATCC）（Rockville，MD 20852-1776）获得。

通式（ⅡE）化合物，例如3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷，可用包括Rideout等，美国专利4，724，232的方法在内的常规方法制备，而3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-鸟苷可用Imazawa和Eckstein的方法，（（1978），J.Org.Chem.，Vol.43，P3044-）制备。通式（ⅡD）化合物可由市场上可买到的2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO 63178）制备。2-氨基-6-O-取代的嘌呤可通过用钠和合适的醇处理来制备。2-氨基-6-N-取代的嘌呤可通过用合适的胺或通式（Ⅷ）化合物，在有机溶剂如含有有机碱如三乙胺的乙腈中，处理2-氨基-6-氯嘌呤来制备。

根据方法（D），R为氯的通式（Ⅰ）化合物可用于制备R是如下基团的通式（Ⅰ）化合物：C_1-6烷氧基;C_3-6环烷氧基;芳氧基;芳烷氧基，其中的芳基可任意地被C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基或羟基取代;氨基，它可被一或两个分别选自C_1-6烷基、芳基、芳烷基和C_3-6环烷基的取代基取代;或含有至少一个氮原子的4-至6-节杂环，该环通过该氮原子与嘌呤碱键合。这种制备可用本领域已知的方法，例如，在6-O-取代的嘌呤的情况下，用钠和合适的醇处理，而在6-N-取代的嘌呤的情况下，用合适的胺或通式（Ⅷ）化合物：

（其中n为3-5）在有有机溶剂如乙腈或醇如甲醇的存在下进行处理。

通过与一种合适的酯化剂如酰基卤或酸酐反应，通式（Ⅰ）化合物可被转化为药物上可接受的酯。通式（Ⅰ）化合物包括其酯，可用常规方法如用合适的碱处理，被转化为其药物上可接受的盐。通式（Ⅰ）化合物的酯或盐可被转化为母体化合物，如通过水解。

本发明还包括在上述方法中使用的下列新的中间体。

1）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-5-O-（甲氧羰基）-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

2）.2-氨基-9-（2-脱氧-3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-β-D-苏式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

3）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

4）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-2-O-[（3-三氟甲基）苯甲酰基]-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

5）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-2-O-（苯氧基硫代羰基）-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤，

6）.2-乙酰氨基-9-（2-O-乙酰基-3-O-（甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-β-D-呋喃木糖基）-6-[（二苯基氨基甲酰基）氧基]-9H-嘌呤，

7）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯嘌呤，

8）.9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-鸟嘌呤，

9）.9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-2-氨基-6-氯-9H-嘌呤。

下列实施例说明本发明，但不构成对本发明的限制。

实施例1

a）.5-甲酯基-1，2-O-异亚丙基-β-D-呋喃木糖

将1，2-O-异亚丙基-β-D-呋喃木糖（Aldrich，30.0g，0.1578mol），无水吡啶（130ml）和无水氯仿（60ml）的溶液在氮气氛下冷却至0℃，在45分钟时间内滴加入氯甲酸甲酯（20.1ml，0.26mol），使温度不超过+10℃。将反应物在氮气氛下塞好并置于冷室中42.5小时。经这段时间后，将反应物升至室温并用H₂O（630ml）稀释。摇荡反应器，分出有机层。水层用氯仿（4×100ml）萃取。合并有机部分并用硫酸镁（MgSO₄）干燥。滤出MgSO₄，真空浓缩滤液，该粗产物在真空下干燥2.5h。产物用甲苯己烷1∶1（V/V）重结晶。

产率69%，mp132-133.5℃

135.5-136.5℃（Lit）

b）.1，2-O-异亚丙基-3-O-甲磺酰基-5-O-甲氧羰基-β-D-呋喃木糖

将步骤a）的产物（29.51g，0.119mol），无水二氯甲烷（DCM）（215ml）和无水三乙胺（20.7ml）在N₂下冷却至0℃，滴加入甲磺酰氯（1.25当量，11.5ml），使温度不超过25℃。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。然后将反应混合物在冷室中搅拌过夜。过了这段时间后，用盐水（100ml）停止反应，并用DCM（100ml）稀释。分出有机层，水层用DCM（100ml）反萃取。合并有机层，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。产物通过快速硅胶柱色谱提纯，用己烷∶乙酸乙酯（EtOAC）2∶1（V/V）洗脱。合并适当的馏分，浓缩并用DCM（2×100ml）反萃取。产物在真空下干燥过夜得到标题化合物，产率为98%，mp56-61℃。

元素分析：

计算值：C，40.46;H，5.6;S，9.80

实测值：C，40.57;H，5.62;S，9.87

c）.1，2-二-O-乙酰基-3-O-甲磺酰基-5-O-甲氧羰基-D-呋喃木糖

将步骤b）的产物（37.92g，0.116mol）溶于Ac₂O（66ml）中，在冰浴中冷却并加入乙酸（480ml）。在30分钟内加入浓H₂SO₄（26.66ml），并在室温下搅拌该溶液过夜。将此溶液倾入900ml冰-水中，用氯仿（4×850ml）萃取水层，合并有机层并用10%碳酸氢钠（NaHCO₃）水溶液（3×300ml）萃取。用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。产物用快速硅胶柱色谱提纯，用己烷∶乙酸乙酯2∶1（V/V）洗脱。合并适当的馏分，浓缩得到标题化合物，产率为76%（油液）。

d）.2-N，9-二乙酰基鸟嘌呤

根据Zou和Robins的方法（Can，J.Chem.，65（6），1436-7（1987））合成该产物。将鸟嘌呤（Aldrich，60.44g，0.4mol），二甲基乙酰胺（480ml）和乙酸酐（100ml）的溶液在氮气下于160℃的油浴中加热过液。将该溶液冷却至室温并在冷室中放置6天。将从溶液中沉淀出的产物滤出，用己烷（3×50ml）洗涤烧瓶。产物用己烷（3×200ml）冲洗，并在真空下干燥过夜，得到标题化合物（产率为111%）。

e）.2-N-乙酰基-6-O-二苯基氨基甲酰基鸟嘌呤（2-乙酰氨基-6-二苯基氨基甲酰氧基嘌呤）

将步骤d）的产物（5.88g，25mmol）和无水吡啶（120ml）、二苯基氨基甲酰氯（6.37g，27.5mmol）和无水二异丙基乙胺（8.7ml）在氮气氛下于室温搅拌1.5小时。用H₂O（10ml）稀释该溶液并继续搅拌10分钟。将该溶液真空浓缩并用甲苯（3×20ml）反萃取。在粗的反应物中加入50%乙醇（EtOH）∶H₂O（V∶V）（300ml），并将该混合物在蒸汽浴中加热1.5小时。将该混合物冷却至室温并在冷室中放置过夜。将产物过滤，用冷的乙醇洗涤并真空干燥过夜得到标题化合物（产率为73%）。本方法是根据Zou和Robins（1987）的方法。NMR谱与文献报道的NMR谱一致。

f）.2-乙酰氨基-9-（2-O-乙酰基-3-O-甲磺酰基-5-O-甲氧羰基-β-D-呋喃木糖基）-6-（（二苯基氨基甲酰基）氧基）-9H-嘌呤

使用Zou和Robins（1987）的一般偶合方法。将2-N-乙酰基-6-O-二苯基氨基甲酰基鸟嘌呤（步骤e，7.44g，17.71mmol），无水1，2-二氯乙烷（192ml）和N，O-双（三甲基甲硅烷基）乙酰胺〔9.60ml）的混合物在N₂下于80℃加热，直至生成清亮的紫红色溶液。在N₂下蒸馏除去1，2-二氯乙烷。将混合物冷却至室温并用无水甲苯（92ml）稀释。加入含有三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯（4.80ml）和呋喃糖衍生物（步骤C）9.11g，24.41mmol的无水甲苯（92ml）溶液。将反应混合物在N₂下于80℃加热2小时，然后在室温下搅拌过液。将反应混合物在冰浴中冷却并用饱和的NaHCO₃（12.9ml）稀释。分层水层用EtOAc（3×20ml）萃取，合并有机部分，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。产物用制备型500硅胶柱提纯得到标题化合物6.07g（产率为49%），为淡黄色泡沫状物。

g）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤f）的产物（5.96g，8.54mmol）与90ml甲醇氯化氢（通过将乙酰氯（4ml）滴加到甲醇（125ml）中制备）混合。将该混合物在氮气下于室温搅拌18小时。该反应混合物用固体NaHCO₃中和，过滤并浓缩。产物用快速色谱柱（硅胶）提纯，用CHCl₃∶MeOH 98∶2（V/V），97∶3（V/V）以及最后用96∶4（V/V）洗脱，得到标题化合物（产率为80%），为灰白色泡沫状物。

h）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-2-O-（苯氧基硫代羰基）-β-D-呋喃木糖）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤g）的产物（2.98g，6.865mmol），无水CH₃CN（51.5ml），无水DCM（51.5ml），DMAP（1.72g，14.04mmol）和邻苯基氯硫代甲酸酯（1.42g，8.238mmol）在室温下搅拌15分钟，然后用饱和的NaHCO₃（10ml）稀释。将混合物搅拌10分钟并分层。水层用DCM（3×20ml）萃取。合并有机部分，用碳酸钾（K₂CO₃）干燥，过滤并浓缩。产物用快速硅胶柱色谱提纯，用氯仿接着用98∶2（V/V）CHCl₃∶MeOH洗脱得到标题化合物1.57g（产率为40%）。

i）.2-氨基-9-（2-脱氧-3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基-β-D-苏式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤h）的产物（1.57g，2.75mmol）溶于无水甲苯（29ml）中，用氮气吹洗该溶液10分钟。加入偶氮异丁腈（AIBN）（96.5mg，0.59mmol）和三正丁基锡氢化物（0.97ml），并将反应混合物在80℃加热40分钟。然后将反应混合物冷却并浓缩。

将上述粗产物溶于CH₃CN（50ml）中，并用己烷（4×30ml）萃取该层。产物用快速硅胶柱色谱提纯;用98∶2（V/V）CHCl₃∶MeOH洗脱，得到标题化合物（产率为39%），为白色泡沫状物。

将2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基）-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤转化为2-氨基-9-（2′-脱氧-3′-O-甲磺酰基-5′-O-（甲氧羰基-β-D-苏式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤的另一方法包括下列步骤h′）和i′）：

h′）.2-氨基-9-（3-O-甲磺酰基-5-O-（甲氧羰基-2-O-[（3-三氟甲基）苯甲酰基]-β-D-呋喃木糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤g的产物（2.2g，5mmol）溶于20ml的无水二氯甲烷中，然后将其放入氮气下的烧瓶中。将混合物在冰浴中冷却，并加入1.06ml（7.6mmol）新蒸过的三乙胺。然后向反应混合物中滴加3-（三氟甲基）苯甲酰氯（1.15ml，7.6mmol）。加毕，再加入279mg（2.28mmol）4-二甲氨基吡啶。将反应混合物在冰浴中搅拌30分钟，然后在室温下搅拌2小时。用20mlDCM稀释反应混合物，然后用10ml饱和的碳酸氢钠溶液萃取，再用10ml盐水萃取。有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。试样用硅胶柱色谱分离，用2%MeOH/CHCl₃洗脱，得到2.1g标题化合物，为黄色泡沫状物。

¹H NMR（200MHz DMSO-d₆）：3.72（OCOCH₃，3H）;3.99（6-OCH₃，3H）;6.48（NH₂，2H）。

i′）.2-氨基-9-（2-脱氧-3-O-甲磺酰基）-5-O-（甲氧羰基）-β-D-苏式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

在光反应器中，将步骤h′的产物（900mg，1.5mmol）和9-甲基咔唑（489mg，2.6mmol）溶于550ml的异丙醇一水（V/V，10∶1）中。用N₂吹洗反应器15分钟，然后光照4.4小时。将试样真空浓缩。使用1.2g（1.98mmol）的实施例h′的产物和652mg（3.6mmol）的9-甲基咔唑进行另一反应。将反应混合物光照3.8小时。合并两次反应的混合物，并吸附在12g硅胶上，然后用快速硅胶柱色谱分离，用1%MeOH/CHCl₃，再用2%MeOH/CHCl₃洗脱，得到430mg标题化合物，为黄色泡沫状物。NMR分析证实了产物的结构。

¹H NMR（200MHz，DMSO-d₆）：3.95（6-OCH₃，3H）;3.69（OCOCH₃，3H）;6.20（H₁，1H，dd）;6.49（NH₂，2H）;7.89（H8，1H）。

j）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-5-O-（甲氧羰基）-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤i）的产物（174mg）溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）（3.3ml）中，并加入叠氮化锂（LiN₃）（51.95mg，1.066mmol）。将反应混合物在80-85℃下加热1小时35分钟，然后在100℃下加热50分钟。将反应混合物浓缩，产物用快速硅胶柱色谱提纯，用氯仿接着用98∶2（V/V）CHCl₃∶MeOH洗脱，得到标题化合物（产率为74%），为似油的清亮玻璃状物。

k）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

将步骤j）的产物（92.5mg，0.254mmol）溶于MeOH（1.9ml）中，并加入含有MeOH（1.7ml）和NaOMe（16.6mg，0.304mmol）的溶液。将该溶液在室温下搅拌1小时，然后用1N HCl中和并浓缩。产物用快速硅胶柱色谱提纯，用CHCl₃接着用98∶2（V/V）CHCl₃∶MeOH洗脱，得到标题化合物，产量为59.4mg。将43.9mg试样溶于0.6ml50∶50（V/V）H₂O∶MeOH中，并用IBMC-18 1cm×25cm柱（HPLC制备型柱）提纯。用50∶50 MeOH∶H₂O（V/V）洗脱该柱，得到标题化合物，产量为37.5mg，用HPLC分析纯度为99.7%。

高分辨的EI质谱：

计算值C₁₁H₁₄N₈O₃306.1189

实测值C₁₁H₁₄N₈O₃306.1181

实施例2

a）.2-氨基-6-甲氧基嘌呤

将钠（4.7g，206.5mmol，Aldrich lot＃9621C 1）分批加到无水甲醇（125ml）中。完全溶解后，加入2-氨基-6-氯嘌呤（7.0g，41.3mmol;Sigma Lot ＃69F4064），并将反应混合物在室温下搅拌72小时。反应混合物用Dowex 50W×12（H⁺型）（BioRad 140-270目）这种酸性离子交换树脂中和。滤出该树脂，减少滤液的体积得到沉淀，收集固体产物得到4.2g（23.9mmol;57.8%）;mp＞250℃。

UV：pH 1 λmax＝285（ε＝11200），λmin＝252（ε＝1900），pH 13 λmax＝282（ε＝8100），λmin＝257（ε＝3500），λsh＝244（ε＝4500）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ7.9（s，1H，H8），6.4（br s，2H，NH₂），3.9（s，3H，CH₃）

计算值 C₆H₇N₅O和0.3HCl：C，40.93;H，4.18;N，39.77;Cl，6.04。

实测值：C，41.08;H，4.10;N，39.84;Cl，5.75。

b）.由大肠杆菌制备反式-N-脱氧核糖酶

将大肠杆菌菌株SS6030/14在富培养基，如含150g/ml盘必西林的Luria液体培养基中生长一夜（15-20小时）。在4℃下，通过离心从生长培养基中收集细菌，并用冷的pH为6.0的100mM磷酸钠缓冲液洗涤细胞球。用0.6-0.8体积的100mM凉的磷酸钠缓冲液洗涤后的细胞球再悬浮，然后将细胞悬浮液通过压力为12-14Kpsi的French压制，得细胞提取物。在50Krpm，旋度为70Ti条件下离心90分钟，移去所有细胞和细胞碎片。离心后得到的上清液称为高速上清液（HSS）。加入冷的100mM磷酸钠缓冲液，调节HSS的A₂₆₀值到180。将稀释的HSS调至0.2%PEI（聚乙烯亚胺），在4℃培养15-30分钟，然后离心。PEI沉淀后得到的上清液用（NH₄）₂SO₄调至30%饱和度，在4℃培养60-90分钟，然后离心得到球状蛋白质。用30%（NH₄）₂SO₄沉淀的蛋白质缓慢溶解在100mM磷酸钠缓冲液中（pH6.0），渗透到2至6升相同缓冲液中。

渗透之后，离心移去所生成的沉淀，将含酶的上清液在60℃水浴中加热5-10分钟，然后在冰/水浆液中培养20分钟。离心移去加热处理步骤中形成的沉淀。得到含有用于核苷合成的反式-N-脱氧核糖酶的上清液。

用脱氧肌苷和胞嘧啶作底物，在黄嘌呤氧化酶偶合试验系统中测定所制备的各种反式-N-脱氧核糖酶的活性，见1978年《酶学方法》（Methods Enzymol），51：446-455，Cardinaud，R.所述的乳杆菌属（Lactoba cillus）helveticus中核苷脱氧核糖转移酶活性的方法。

大肠杆菌菌株SS6030/14，1990年7月18日保藏于Rockville，MD20852-1776，的美国类型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）（ATCC），保藏号：ATCC 68367。

c）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤

向700ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，（其制备是通过将8.41g柠檬酸加到800ml蒸馏过的去离子水中，用氢氧化钠调节，最终pH值为6.0），加入2-氨基-6-甲氧基嘌呤（0.116g，0.7mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（0.935g，3.5mmol）。在50℃加热混合物，并用声波处理形成溶液。移去做对照试样，加入25ml活性为429单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液，将反应在50℃加热。四天后，再加入25ml酶。反应开始九天后，将0.109g，0.66mmol的2-氨基-6-甲氧基嘌呤溶于5ml柠檬酸缓冲液加到反应中。21天后反应结束，将反应物加热至80℃，沉淀出酶。将混合物离心，收集含有产物的上清液。真空除去大部分水。用乙酸乙酯萃取水溶液（3次）移去产物。合并乙酸乙酯馏份用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。将泡沫体在180g硅胶（230-400目）柱上色谱分析，淋洗剂为氯仿/甲醇（99∶1，V/V）。合并含有馏份产物，真空除去溶剂，得到泡沫体产物（产率41%）。

UV：pH 1 λmax＝287（ε＝10300），λmin＝260（ε＝4100）

λmax＝243（ε＝7800），λmin＝230（ε＝6400）

pH 13 λmax＝279（ε＝9400），λmin＝260（ε＝5300），

λmax＝247（ε＝9600），λmin＝225（ε＝4400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ8.08（s，1H，8H），6.49（s，2H，2NH₂），6.14（t，J＝6.5Hz，1H，1′H），5.13（t，J＝5.5Hz，1H，5′OH），4.60-4.57（m，1H，3′H），3.93（s，1H，6-OH₃），3.90-3.83（m，1H，4′H），3.58-3.47（m，2H，5′H），2.86-2.76and2.46-2.39（m，2H，2′H）

元素分析（C₁₁H₁₄N₈O₃用0.1CHCl₃和0.3H₂O）：

C H N

计算值：41.20 4.68 34.62

实测值：41.02 4.40 34.65

实例3

a）.3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧鸟苷

将2-氨基-9-（3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-呋喃核糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤（实例2C）（1.42g，4.64mmol）溶于150ml水中。加入腺苷脱氨酶（Boeh-ringer-Mannheim，Lot ＃ 11416025-38，10mg/ml，3.5ml），室温搅拌反应3.5小时。过滤所形成悬浮液。沉淀用水洗涤，然后高真空干燥，得到1.168g（4mmol，86.2%）;mp＞250℃。

UV：pH 1 λmax＝255（ε＝13000），λmin＝239（ε＝9100），

pH 13 λmax＝265（ε＝12700），λmin＝240（ε＝8600）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ10.67（s，1H，NH），7.92（s，1H，H8），6.51（br s，2H，NH₂），6.05（t，J＝6.49Hz，1H，H1′），5.11（t，J＝5.27Hz，1H，5′OH），4.59-4.51（m，1H，H3′），3.89-3.82（m，1H，H4′），3.60-3.46（m，2H，H5′），2.82-2.68（m，1H，H2′），2.50-2.37（m，1H，H2′）

元素分析（C₁₀H₁₂N₈O₃·0.25H₂O）：

C H N

计算值：40.47 4.25 37.76

实测值：40.50 4.31 37.65

b）.9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-鸟嘌呤

在氮气保护下，在100ml3-口圆底烧瓶（烘干）中加入633mg3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧鸟苷（2.2mmol）的10ml干燥二氯甲烷溶液。再加入三乙胺（0.34ml，2.4mmol），4-二甲基氨基吡啶（27mg，0.22mmol）和乙酸酐（0.23ml，2.4mmol）。所得到的混合物室温搅拌4小时。TLC（20%，MeOH/CHCl₃）表明没有起始原料存在。将反应真空浓缩，然后用硅胶柱快速柱层析，淋洗剂为10%MeOH/CHCl₃，得到347mg（47%产率）9-（5′-O-乙酰基-3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）鸟嘌呤。

分析数据：

MS M+334 （EI）

NMR（200mHz）DMSO-d₆δ 10.68（br s，NH）7.8（s，H8），6.5（br s，NH₂），6.0（dd），2.0（s，CH₃CO）

c）.9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-2-氨基-6-氯-9H-嘌呤

在氮气保护下，向配有冷凝管的干燥的25ml圆底烧瓶中，加入含50mg9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）鸟嘌呤的70μlN，N-二乙基苯胺（自CaH₂新蒸馏）和0.2ml POCl₃（新蒸馏的）。混合物在115℃油浴中浸3分钟。溶液颜色先变绿，然后变黄，最后为橙色。抽真空立即除去过量的POCl₃。残余的物质用冰处理，并用NaHCO₃中和。混合液用二氯甲烷（2×10ml）萃取，并用MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩。所得到的油状体用碱性氧化铝柱色谱纯化（CHCl₃），得到9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-2-氨基-6-氯-9H-嘌呤，产率8%。

MS M+352 （EI）

NMR（300mHz）CHCl₃7.8（S，H8），6.2（dd），5.2（br s，NH₂），1.57（s，CH₃CO）

d）.2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤

在10ml圆底烧瓶中加入含12mg9-（5-O-乙酰基-3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-2-氨基-6-氯-9H-嘌呤的2ml新制备的甲醇氨溶液（甲醇-氨）。室温下将混合物搅拌1小时。TLC（90∶10CHCl₃/MeOH）表明反应完全。真空浓缩样品，然后用氧化铝柱色谱纯化，淋洗剂为CHCl₃/MeOH（98∶2），得到定量产率的2-氨基-9-（3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤;mp＝134-136℃。

MS （M+1）311 （EI）

NMR（300mHz）CHCl₃7.81（s，H8），6.14（dd，J＝9.5，5.8Hz，H1′），5.68（d，J＝10.7Hz，OH），5.18（br S，NH₂），4.58（dt，J＝6.3，1.9，1.9Hz，H3′），4.22（app.q，J＝2.0Hz，H4′），4.0（d，J＝12.8Hz，H5B），3.79（dd，J＝12.8，10.7Hz，H5A），3.09（ddd，J＝13.7，8.9，6.4Hz，H2α），2.33（ddd，J＝13.9，5.6，1.7Hz，H2β）

¹H NMR DMSO-D₆δ 8.36（s，H8），6.19（t，J＝6.3Hz，H1′），5.12（t，J＝5.2Hz，OH），7.00（br s，NH₂），4.62（dd，J＝5.3Hz，H3′），3.90（dd，J＝4.8Hz，H4′），3.58（AB，H5B），2.88（ddd，J＝13.0，5.9，5.9Hz，H2α），2.49（部分被DMSO遮蔽）。

实例4

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤

向500ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-氯嘌呤（0.0848g，0.5mmol，Sigma Lot ＃ 69F4064）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（0.668g，2.5mmol）。在50℃加热并用声波处理混合物生成溶液。移去做对照样品。加入24ml活性为1400单位/ml的反式-N-脱氧核糖酶（实例2b）。反应在50℃加热七天之后，向反应中加入0.0848g，0.5mmol2-氨基-6-氯嘌呤。十四天后，反应停止。将反应在80℃加热沉淀出酶，然后过滤。用乙酸乙酯从水溶液中萃取出产物。合并乙酸乙酯馏份用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到泡沫体。泡沫体在90g硅胶（230-400目）柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（96∶4，V/V）。合并含馏份产物，真空除去溶剂，得到固体产物。固体用水重结晶，得到含0.25水合物产物（46%产率）。m.p.＝113-115℃

UV：pH 1 λmax＝310（ε＝8000），λmin＝266（ε＝1300），

λmax＝246（ε＝7100），λmin＝235（ε＝5900）

pH 13 λmax＝306（ε＝8800），λmin＝265（ε＝2100），

λmax＝246（ε＝8200），λmin＝225（ε＝6800），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.34（s，1H，8H），6.98（s，2H，2NH₂），6.17（t，J＝6.3Hz，1H，1′H），5.09（t，J＝5.6Hz，1H，5′OH），4.64-4.56（m，1H，3′H），3.92-3.85（m，1H，4′H），3.65-3.47（m，2H，5′H），2.93-2.80和2.53-2.40（m，2H，2′H）

元素分析（C₁₀H₁₁ClN₈O₂·0.25H₂O）：

C H N Cl

计算值：38.11 3.68 35.55 11.25

实测值：37.97 3.67 35.51 11.28

实例5

a）2-氨基-6-丙氧基嘌呤

将钠（0.68g，29.5mmol，Aldrich lot ＃ 9621CL）分批加到无水丙醇（25ml）中。溶解完全之后，再加入2-氨基-6-氯嘌呤（1g，5.9mmol，Sigma lot ＃69F4064），在氮气气氛中，用85℃油浴加热反应20小时。待溶液冷却后，用Dowex50W×12（H⁺型）BioRad，140-270目）一种酸性离子交换树脂中和。将树脂滤掉，滤液用硅胶柱收集和吸收，用CHCl₃/MeOH（9∶1，V。V）淋洗。合并并蒸发需要馏份，得到0.89g含有少量杂质产物。该产物再被硅胶吸收，然后用EtOAc/MeOH（10∶1，V/V）淋洗，合并产物部分，蒸发，得到0.76g产物（3.9mmol;67%）。mp＝198-200℃。

UV：pH 1 λmax＝285（ε＝11900），λmin 252（ε＝2000），

pH 13 λmax＝283（ε＝8400），λmin 257（ε＝3500），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ12.4（br s，1H，H9），7.77（s，1H，H8），6.19（s，2H，NH₂），4.32（t，J＝6.8Hz，2H，OCH₂），1.83-1.65（m，2H，CH₂），0.95（t，J＝7.3Hz，3H，CH₃）

元素分析（C₈H₁₁N₅O）

C H N

计算值：49.73 5.74 36.25

实测值：49.78 5.78 36.20

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-丙氧基-9H-嘌呤

向500ml pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-丙氧基嘌呤（0.0985g，0.5mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（0.668g，2.5mmol）。将混合物在50℃加热并用声波处理得到溶液。移去对照试样。加入25ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶（实例2b.）溶液。将反应在50℃加热。七天之后，再向反应中加入0.0985g，0.5mmol2-氨基-6-丙氧基嘌呤。反应开始十一天后，向反应中再加入0.0985g，0.5mmol2-氨基-6-丙氧基嘌呤。二十三天后反应停止。将反应加热至80℃沉淀出酶，并过滤。用乙酸乙酯从水溶液中萃取出产物。合并乙酸乙酯馏份用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。泡沫体在180g硅胶（230-400目）柱进行色谱层析，先用氯仿/甲醇（99∶1，V/V）淋洗，再用氯仿/甲醇（98∶2，V/V）淋洗。合并含有馏份产物，真空除去溶剂得到一油状产物。将油状体溶于水中，冷冻干燥得到固体（56%产率）。mp＝145-147℃。

UV：pH 1 λmax＝287（ε＝9800），λmin＝260（ε＝3400），

λmax＝243（ε＝7000），λmin＝232（ε＝5800）

pH 13（nm）λmax＝280（ε＝9900），λmin＝261（ε＝5500），

λmax＝247（ε＝9900），λmin＝231（ε＝6400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ8.09（s，1H，8H），6.46（s，2H，2NH₂），6.16（t，J＝6.2Hz，1H，1′H），5.15（t，J＝5.3Hz，1H，5′OH），4.63-4.58（m，1H，3′H），4.35（t，J＝6.7Hz，2H，6-OCH₂），3.91-3.87（m，1H，4′H），3.65-3.53（m，2H，5′H），2.89-2.80和2.51-2.40（m，2H，2′H），1.82-1.70（m，2H，-CH₂CH₂CH₃），0.97（t，J＝7.3Hz，3H，-CH₂CH₃）

元素分析（C₁₃H₁₈N₈O₃）：

C H N

计算值：46.70 5.43 33.52

实测值：46.78 5.47 33.57

实例6

a）2-氨基-6-苄氧基嘌呤

在氮气保护下，将苄醇（6.4g，59mmol，Eastman lot＃C4B）用无水乙腈（5ml）稀释，随之再加入钠（1.36g，59mmol，Aldrich lot ＃9621CL）。待钠完全溶解之后，加入2-氨基-6-氯嘌呤（1g，5.9mmol Sigma lot ＃69F4064），反应室温搅拌7天。将反应物过滤，收集沉淀用冷却乙腈洗涤。然后将固体溶于甲醇，并用硅胶（230-400目）吸附。用EtOAc/MeOH（9∶1，V/V）淋洗，合并需要馏份蒸发，得0.96g（4mmol;67%）产物，mp＝203-205℃

UV：pH 1 λmax＝287（ε＝12400），λmin＝253（ε＝2200），

λmax＝284（ε＝9100），λmin＝257（ε＝3800）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.4（br s，1H，H9），7.80（s，1H，H8），7.51-7.28（m，5H，苯基）6.28（br s，2H，NH₂），5.46（s，2H，OCH₂）

元素分析（C₁₂H₁₁N₅O·1.0摩尔CH₃OH）：

C H N

计算值：57.13 5.53 25.63

实测值：57.13 5.54 25.70

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苄氧基-9H-嘌呤

向800ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-苄氧基-嘌呤（0.193g，0.8mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（1.069g，34.0mmol）。将混合物在50℃加热并用声波处理生成溶液。移去对照试样。再加入40ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液。将反应在50℃加热。四天后，向反应液中加入0.193g，0.8mmol2-氨基-6-苄氧基嘌呤。留心沉淀。反应开始十二天之后，向反应液中再加入0.193g，0.58mmol2-氨基-6-苄氧基嘌呤和0.428g，1.6mmol3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷。反应开始十九天之后，向反应物中加入0.193g，0.58mmol2-氨基-6-苄氧基嘌呤。二十六天后停止反应。将反应在0℃冷冻几小时，然后过滤。滤饼中发现含有产物。用热的乙醇萃取滤饼，然后过滤。真空除去溶剂，得到粗产物固体。将固体先经150g硅胶（230-400目）柱层色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（98∶2，V/V），然后经90g碱性氧化铝柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（98∶2，V/V）。合并含馏份产物，真空除去溶剂，得到一泡沫体产物（26%产率）。

UV：pH 1 λmax＝289（ε＝9810），λmin＝261（ε＝3300），

λmax＝243（ε＝7100），

pH 13 λmax＝281（ε＝11200）λmin＝261（ε＝5800），

λmax＝247（ε＝10800）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.08（s，1H，8H），7.50-7.30（m，5H，Ph），6.52（s，2H，2NH₂），6.15（t，J＝6.3Hz，1H，1′H），5.48（s，2H，-OCH₂Ph），5.11（t，J＝5.5Hz，1H，5′OH），4.63-4.54（m，1H，3′H），3.91-3.84（m，1H，4′H），3.58-3.45（m，2H，5′H），2.89-2.76 and 2.47-2.36（m，2H，2′H）

元素分析（C₁₇H₁₈N₈O₃·0.2H₂O）：

C H N

计算值：52.90 4.80 29.03

实测值：53.24 4.88 28.74

实例7

a）2-氨基-6-二甲基氨基嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（15g，88.4mmol，Sigma，lot E69F4064）溶于二甲胺（195ml，25%水溶液，Eastmanlot EB6B）中，加热回流90分钟。将反应冷却，过滤所生成的沉淀。沉淀在500ml MeOH中重结晶，得到11.2g（63mmol;71%）产物;mp＝254-256℃。

UV：pH 1 λmax＝283，255，228（ε＝13800，12700，11000）

λmin＝267，240，216（ε＝10400，9400，9500），

pH 13 λmax＝291（ε＝12500），λmin＝261（ε＝4000），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.08（s，1H，NH），7.62（s，1H，H8），5.63-5.58（m，2H，NH₂），3.34（s，6H，2CH₃）

元素分析（C₇H₁₀N₆·0.3H₂O）：

C H N

计算值：45.79 5.82 45.77

实测值：45.83 5.84 45.75

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-二甲基氨基-9H-嘌呤

向500ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-二甲基氨基嘌呤（0.0891g，0.5mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（0.668g，2.5mmol）。将混合物在50℃用声波加热生成溶液。移去对照试样。加入24ml活性为1400单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液（实例2b）。将反应在50℃加热。七天后，向反应物中加入0.0891g，0.5mmol2-氨基-6-二甲基氨基嘌呤。十四天后反应停止。将反应物加热至80℃，沉淀出酶，然后过滤。用乙酸乙酯从水溶液中萃取得产物。合并乙酸乙酯馏份，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。泡沫体经90g硅胶柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（97∶3，V/V）。再一次通过硅胶（230-400目）柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（98∶2，V/V），得到纯化产物。合并含馏份产物，真空除去溶剂得到固体产物（41%产率）。

UV：pH 1 λmax＝293（ε＝8900），λmin＝274（ε＝6200），

λmax＝257（ε＝9300），λmin＝240（ε＝6000）

pH 13（nm）λmax＝284（ε＝12700），λmin＝248（ε＝6400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.93（s，1H，8H），6.13（t，J＝6.5Hz，1H 1′H），5.84（br s，2H，2NH₂），5.26（t，J＝5.6Hz，1H，5′OH），4.61-4.53（m，1H，3′H），3.91-3.84（m，1H，4′H），3.59-3.53（m，2H，5′H），3.33（br s，6H，N（CH₃）₂），2.45-2.36（m 2H，2′H）

元素分析（C₁₂H₁₇N₉O₂）：

C H N

计算值：45.14 5.37 39.48

实测值：44.91 5.46 39.28

实例8

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲基氨基-9H-嘌呤

将2-氨基-9-（3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯嘌呤（0.35g，1.13mmol）在88ml甲胺（40%水溶液;Kodak lot ＃B17A）回流15分钟。待反应冷却后，蒸发溶剂，得到一泡沫体。将泡沫体溶于CHCl₃∶MeOH（99∶1，V/V）中，经碱性氧化铝（Grade 1;Type WB-2）柱层析。淋洗，蒸发所要馏份，得到非晶形固体。将固体溶于水中，冷冻干燥得到0.211g（0.69mmol;61.2%）产物;

UV：pH 1 λmax＝290，255（ε＝12000，12300），

λmin＝272，235（ε＝8600，6200），

pH 13 λmax＝280（ε＝14400，λmin＝241（ε＝5900），

λsh＝264（ε＝11200）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.88（s，1H，H6），7.22（s，1H，NH），6.14-6.07（m，1H，H1′），5.81（s，2H，NH₂），5.3-5.2（m，1H，5′OH），4.61-4.53（m，1H，H3′），3.90-3.88（m，1H，H4′），3.6-3.5（m，2H，H5′），2.9-2.7（m，4H，H2′和CH₃），2.46-2.31（m，1H，H2′）

元素分析（C₁₁H₁₅N₉O₂）：

C H N

计算值：43.27 4.95 41.29

实测值：43.15 4.99 41.16

实例9

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基氨基-9H-嘌呤

在105ml不锈钢高压弹中加入含2-氨基-9-（3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯嘌呤（0.35g;1.13mmol）的88ml无水甲醇溶液和环丙胺（0.78g;21.5mmol;Aldrich lot ＃8119TK）。将高压弹密封，并放入75℃烘箱中24小时。蒸发溶剂，剩余物吸收在硅胶（230-400目）上。用EtOAc/MeOH（98∶2 V/V）作淋洗剂进行柱色谱，合并并蒸发需要馏份，得到一胶粘状泡沫体。将泡沫体溶于水中，冷冻干燥得到0.25g（0.76mmol;66.8%）含0.25水合物产物。

UV：pH 1 λmax＝295，255（ε＝14000，11000），

λmin＝273，236（ε＝6600，5800），

pH 13 λmax＝283（ε＝14900，10000），

λmin＝263，244（ε＝10000，7200），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.89（S，1H，H6），7.36（d，J＝4.34Hz，1H，NH），6.1（t，1H，H1′），5.85（s，2H，NH₂），5.29（t，1H，5′OH），4.65-4.50（m，1H，H3′），3.90-3.82（m，1H，H4′），3.68-3.50（m，2H，H5′），2.99（s，1H，CH），2.9-2.8（m，1H，H2′），2.46-2.30（m.1H，H2′），0.7-0.6（m，4H，（CH₂）₂）

元素分析（C₁₃H₁₇N₉O₂·0.25H₂O）：

C H N

计算值：46.49 5.25 37.54

实测值：46.54 5.26 37.47

实例10

a）2-氨基-6-乙氧基嘌呤

将钠（0.68g，29.5mmol，Aldrich lot ＃9621CL）分批加到无水乙醇（50ml）中。完全溶解之后，再加入2-氨基-6-氯嘌呤（1g，5.9mmol，Sigma lot ＃69F 4064），将反应加热回流96小时。反应冷却后，加20ml水稀释，用1N HCl中和。蒸去溶剂，剩余物在100ml水中形成浆液。将产物过滤，空气干燥得到0.95g（5.3mmol;89.9%）;mp＝252-253℃

UV：pH 1 λmax＝285（ε＝14100），λmin＝251（ε＝2300），

λsh＝231（ε＝7300），

pH 13 λmax＝283（ε＝9600），λmin＝257（ε＝4000），

λsh＝244（ε＝5100），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.42（br s，1H，NH），7.82（s，1H，H8），6.20（s，2H，NH₂），4.44（q，J＝7.01Hz，2H，CH₂），1.36（t J＝7.01Hz，3H，CH₃）

元素分析（C₇H₉N₅O）

C H N

计算值：46.92 5.06 39.09

实测值：47.00 5.10 39.04

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-乙氧基-9H-嘌呤

向500ml，pH为6.0的50mM柠檬酸中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-乙氧基嘌呤（0.0895g，0.5mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（0.668g，2.5mmol）。在50℃加热混合物，并用声波处理得到溶液。移去对照试样，加入24ml活性为1400单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶（实例2b）溶液。将反应在50℃加热。四天后，向反应中再加入0.089g，0.5mmol2-氨基-6-乙氧基嘌呤。十一天后反应停止。将反应加热至80℃沉淀出酶，过滤。用乙酸乙酯萃取水溶液出产物。合并乙酸乙酯馏份，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。泡沫体经180g硅胶（230-400目）柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（98∶2，V/V）。合并含馏份产物，并真空除去溶剂，得到油状产物。将油溶于水中，冰冻干燥得到一固体（55%产率）。

UV：pH 1 λmax＝287（ε＝9500），λmin＝260（ε＝3200），

λmax＝243（ε＝6700），λmin＝231（ε＝5500）

pH 13 λmax＝280（ε＝9400），λmin＝260（ε＝5300），

λmax＝247（ε＝9400），λmin＝227（ε＝5000），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.09（s，1H，8H），6.45（s，2H，2NH₂），6.14（t，J＝6.5Hz，1H，1′H），4.63-4.54（m，1H，3′H），4.43（q，J＝7.0Hz，2H，6-OCH₂-），3.91-3.83（m，1H，4′H），3.57-3.48（m，2H，5′H），2.86-2.76和2.47-2.39（m，2H，2′H），1.34（t，J＝7.0Hz，3H，6-OcH₂CH₃）

元素分析（C₁₂H₁₆N₈O₃）：

C H N

计算值：45.00 5.03 34.98

实测值：44.94 5.06 34.89

实例11

a）2-氨基-6-异丙氧基-9H-嘌呤

将钠（Aldrich，lot ＃9621CL，4.1g，176.9mmol）与150ml异丙醇反应。加入2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot＃69F4064，6.0g，35.4mmol），并将反应在50℃搅拌24小时。溶液冷却后，用1N HCl调节pH到7。将溶剂蒸发掉一半。将沉淀过滤，用水洗涤，干燥得到5.9g（30.5mmol，87%）产物;mp＝204-206℃。

UV：pH 1 λmax＝285（ε＝11400），λmin＝251（ε＝1600），

λsh＝232（ε＝5600）

pH 13 λmax＝284（ε＝7600），λmin＝258（ε＝3100），

λsh＝245（＝4100）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ12.35（s，1H，NH），7.77（s，1H，H8），6.13（s，2H，NH₂），5.52-5.39（m，1H，OCH），1.32（d，J＝6.25Hz，6H，2CH₃）

元素分析（C₈H₁₁N₅O·0.15HCl）：

C H N

计算值：48.36 5.66 35.25

实测值：48.25 5.45 35.39

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-异丙氧基-9H-嘌呤

向800ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-异丙氧基嘌呤（0.159g，0.8mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（1.069g，4.0mmol）。将混合物在50℃加热并用声波处理，得到溶液。移去对照试样。加入40ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液（实例2b）。将反应在50℃加热。六天后，再向反应中加入0.159g，0.8mmol2-氨基-6-异丙氧基-嘌呤。反应开始十五天之后，向反应液中再加入0.159g，0.8mmol2-氨基-6-异丙氧基嘌呤和0.428g，1.6mmol3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷。反应开始二十七天后，再向反应中加入0.159g，0.58mmol2-氨基-6-异丙氧基嘌呤。三十三天后停止反应。将反应加热至80℃沉淀出酶，并过滤。用乙酸乙酯萃取水溶液出产物。合并乙酸乙酯馏份，硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。泡沫体经一级碱性氧化铝柱色谱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（95∶5，V/V）。合并含馏份产物，真空除去溶剂，得到泡沫体产物（28%产率）。mp＝195-197℃

UV：pH 1 λmax＝287（ε＝17700），λmin＝261（ε＝6500），

λsh＝244（ε＝12700）

pH 13 λmax＝280（ε＝17600），λmin＝261（ε＝10000）λsh＝248（ε＝17500）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.06（s，1H，8H），6.4（br s，2H，2NH₂），6.14（t，J＝6.44Hz，1H，1′H），5.5-5.4（m，1H，CH），5.14（t，J＝5.6Hz，1H，5′OH），4.6-4.5（m，1H，3′H），3.9-3.8（m，1H，4′H），3.6-3.47（m，2H，5′H），2.89-2.76和2.5-2.4（m，2H，2′H），1.3（d，J＝6.25Hz，6H，（CH₃）₂）

元素分析（C₁₃H₁₈N₈O₃）：

C H N

计算值：46.70 5.43 33.52

实测值：46.97 5.52 33.28

实例12

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-呋喃戊糖基）-6-丙基氨基-9H-嘌呤

将2-氨基-9-（3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧-β-D-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤（0.24g，0.87mmol）与丙胺（Aldrich，0.257g，4.36mmol）在10ml无水乙腈中，于70℃下，反应8小时。蒸去溶剂，残余物先附载在硅胶上，用CHCl₃/MeOH（98∶2，V/V）淋洗硅胶柱，然后合并需要馏份，并蒸发得到一油状体。将油状体与EtOAc共蒸发，得到0.22g（0.66mmol，76%）泡沫体产物。mp＝138-140℃。

UV：pH 1 λmax＝293，255（ε＝13000，13100），

λmin＝272，237（ε＝8900，7600），

pH 13 λmax＝281（ε＝15200），λmin＝242（ε＝6700），

λsh＝267（ε＝11600）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.9（s，1H，H8），7.3（s，1H，NH），6.1（t，J＝6.49Hz，1H，H1′），5.8（s，2H，NH₂），5.3（t，J＝6.04Hz，1H，5′OH），4.6-4.55（m，1H，H3′），3.9-3.85（m，1H，H4′），3.6-3.54（m，2H，H5′），2.9-2.76（m，1H，H2′），2.5-2.3（m，1H，H2′），1.6-1.5（m，2H，CH₂），0.8（t，3H，CH₃）

元素分析（C₁₃H₁₉N₉O₂·0.2C₄H₈O₂）：

C H N

计算值：47.23 5.92 35.92

实测值：47.24 5.92 35.84

实例13

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-乙基氨基-9H-嘌呤

在一个密封管中，将2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤（0.23g，0.74mmol）溶于20ml无水乙腈中。将溶液冷至0℃，用乙胺（Aldrich，lot ＃ 00115JV）饱和，将管口密封。在70℃加热16小时后，将混合物过滤，滤液蒸干。残余物先附载在硅胶上，用CHCl₃/MeOH（95∶5，V/V）淋洗硅胶柱。合并并蒸发需要馏份，得到0.140g（0.44mmol，59%）产物。mp＝199-201℃。

UV：pH 1 λmax＝291，255（ε＝11500，11600），

λmin＝272，238（ε＝7700，7300），

pH 13 λmax＝281（ε＝13800），λmin＝243（ε＝6300），

λsh＝267（ε＝10600）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.91（s，1H，H8），6.12（t，J＝6.61Hz，1H，H1′），5.85（br s，2H，NH₂），5.35（t，J＝5.77Hz，1H，5′OH），4.61-4.57（m，1H，H3′），3.92-3.87（m，1H，H4′），3.613.38（m，4H，H5′，NCH₂），2.89-2.79（m，1H，H2′），2.44-2.36（m，1H，H2′），1.13（t，3H，CH₃）

元素分析（C₁₂H₁₇N₉O₂）：

C H N

计算值：45.14 5.37 39.48

实测值：45.20 5.40 39.43

实例14

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丁基氨基）-9H-嘌呤

将2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤（0.24g，0.77mmol）与环丁基胺（Aldrich，lot ＃0 0 112Kv，0.55g，7.7mmol）的50ml无水乙腈中，于75℃下反应16小时。真空除去溶剂，残余物先附载于硅胶上，用CHCl₃/MeOH（95∶5，V/V）淋洗硅胶柱，然后合并并蒸发含馏份产物，得到0.17g含有杂质的产物。将该产物经碱性氧化铝硅胶柱层析，淋洗剂为CHCl₃/MeOH（19∶1，V/V）。蒸发产物馏份，得到一油状体;与EtOAc共同蒸发，得到0.058g（0.15mmol，19%）泡沫体。mp＝139-142℃。

UV：pH 1 λmax＝295，256（ε＝12300，11000），

λmin＝273，239（ε＝7000，6900），

pH 13 λmax＝283（ε＝14500），λmin＝245（ε＝6900），

λsh＝262（ε＝9700）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.92（s，1H，H8），7.53（br s，1H NH），6.10（t，J＝6.49Hz，1H，H1′），5.84（br s，2H，NH₂），5.31（t，J＝5.51Hz，1H，5′OH），4.80-4.54（m，2H，H3′，NCH），3.89-3.84（m，1H，H4′），3.60-3.50（m，2H，H5′），2.85-2.75（m，1H，H2′），2.48-2.34（m，1H，H2′），2.30-1.95（m，4H，2CH₂），1.70-1.50（m，2H，CH₂）

元素分析（C₁₄H₁₉N₉O₂·0.35C₄H₈O₂·0.35HCl）：

C H N

计算值：47.55 5.74 32.41

实测值：47.51 5.51 32.46

实例15

a）2-氨基-6-（环丙基甲基胺）-9H-嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃ 69F4064，11.2g，66.0mmol）悬浮在含有三乙胺（9.2ml;66.0mmol）的100ml无水乙腈中。加入N-甲基环丙基胺（Aldrich，7.0g，98.4mmol），将反应在70℃搅拌24小时，然后在85℃搅拌16小时。将反应过滤，并将滤液蒸干。残余物先附载在硅胶上，用EtOAc/MeOH（4∶1，V/V）淋洗硅胶柱。合并并蒸发含有产物馏份。残余物在水中形成浆状，过滤，干燥，得到2.36g（10.9mmol，17%）产物。mp＝199℃

UV：pH 1 λmax＝286，257（ε＝13600，12900），

λmin＝270，241（ε＝10100，8400），

pH 13 λmax＝293（ε＝12900），λmin＝264（ε＝4000），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.07（br s，1H，NH），7.64（s，1H，H8），5.63（s，2H，NH₂），3.25-3.17（m，4H，NCH₃，NCH），0.84-0.61（m，4H，2CH₂）

元素分析（C₉H₁₂N₆·0.25HCl·0.15H₂O）

C H N

计算值：50.03 5.85 38.90

实测值：50.28 5.71 38.72

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丙基甲基氨基）-9H-嘌呤

向800ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-（环丙基甲基氨基）-9H-嘌呤（0.204g，0.8mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（1.069g，4.0mmol）。将混合物在50℃加热并用声波处理得到溶液。移去对照试样。再加入40ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液（实例2b）。将反应在50℃加热。六天后，向反应中加入0.204g，0.8mmol2-氨基-6-环丙基甲基嘌呤。反应开始二十一天后，向反应中再加入0.204g，0.8mmol2-氨基-6-环丙基甲基嘌呤和0.428g，1.6mmol3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷。三十三天后停止反应，将反应加热至80℃沉淀出酶。用乙酸乙酯萃取水溶液出产物。合并乙酸乙酯馏份，硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到一泡沫体。泡沫体经一级碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（97∶3，V/V）。合并含馏份产物并真空除去溶剂，得到0.237g泡沫体产物，29%产率。mp＝104-106℃。

UV：pH 1 λmax＝303，256（ε＝16600，13100），

λmin＝275，239（ε＝5800，8200），

pH 13 λmax＝287，264，299（ε＝23100，14400，28700）

λmin＝268，250（ε＝14200，12400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.96（s，1H，H8），6.16（t，J＝6.58Hz，1H，H1′），5.89（s，2H，NH₂），5.28（s，1H，5′OH），4.63-4.58（m，1H，H3′），3.92-3.88（m，1H，H4′），3.62-3.58（m，2H，H5′），3.24-3.21（m，4H，NH，NCH₃），2.88-2.80（m，1H，H2′），2.46-2.38（m，1H，H2′），0.85-0.65（m，4H，2CH₂）

元素分析（C₁₄H₁₉N₉O₂）

C H N

计算值：48.69 5.55 36.50

实测值：48.82 5.56 36.39

实例16

a）2-氨基-6-丁氧基-9H-嘌呤

标题化合物的制备与实例11a化合物的制备方法相似，使用2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4064，4.4g，25.9mmol）和钠（Aldrich，lot ＃9621CL，3g，129.5mmol）在250ml正丁醇中，得到4.4g（21.2mmol，82%）产物。mp＝165℃。

UV：pH 1 λmax＝286（ε＝11700），λmin＝252（ε＝2100）

pH 13 λmax＝283（ε＝8100），λmin＝258（ε＝3400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.36（br s，1H，H9），7.77（s，1H，H8），6.19（s，2H，NH₂），4.37（t，J＝6.64Hz，2H，OCH₂），1.79-1.65（m，2H，CH₂），1.50-1.32（m，2H，CH₂），0.92（t，J＝7.22Hz，3H，CH₃）

元素分析（C₉H₁₃N₅O·0.3H₂O）：

C H N

计算值：50.84 6.45 32.94

实测值：50.88 6.23 32.93

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-丁氧基-9H-嘌呤

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-丁氧基-9H-嘌呤的制备与2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丁氧基）-9H-嘌呤（实例18b）的制备方法相似。产物经一级（grade 1）碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（95∶5，V/V）。合并含产物馏份，真空除去溶剂，得到泡沫体产物0.53g，48%产率。

UV：pH 1 λmax＝285（ε＝11900），λmin＝253（ε＝3200）

pH 13 λmax＝279（ε＝8300），λmin＝261（ε＝4500），

λmax＝246（ε＝8600）

¹H NMR（DMSO-d₆）8.07（s，1H，8H），6.44（s，2H，2NH₂），6.14（t，J＝6.29Hz，1H，1′H），5.13（t，J＝5.47Hz，1H，5′OH），4.63-4.55（m，1H，3′H），4.38（t，2H，OCH₂），3.90-3.84（m，1H，4′H），3.58-3.53（m，2H，5′H），2.89-2.76和2.49-2.36（m，2H，2′H），1.79-1.64（m，2H，CH₂），1.49-1.31（m，2H，CH₂），0.92（t，3H，CH₃）

元素分析（C₁₄H₂₀N₈O₃）：

C H N

计算值：48.27 5.79 32.17

实测值：48.26 5.79 32.11

实例17

a）2-氨基-6-苯氧基-9H-嘌呤

将叔丁醇钾（J.T.Baker，7.3g，64.8mmol）加到含苯酚（Mallinckrodt，15.2g，162mmol）的50ml无水DMSO溶液中。搅拌30分钟后，加入2-氨基-6-氯-嘌呤（Sigma，lot＃69F4064，5.5g，32.4mmol），然后将混合物在100℃搅拌6天。将反应物倾入冰中，用EtOAc萃取。真空除去溶剂，所得的油状体通过硅胶柱。淋洗剂为CHCl₃/MeOH（95∶5，V/V）合并蒸发需要馏份，得到1.6g（7.0mmol，22%）产物，mp＝228℃

UV：pH 1 λmax＝292（ε＝11900），λmin＝256（ε＝2400）

pH 13 λmax＝289（ε＝8700），λmin＝260（ε＝3500），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.93（s，1H，H8），7.46-7.19（m，5H，苯基），6.22（s，2H，NH₂）

元素分析（C₁₁H₉N₅O）：

C H N

计算值：58.14 3.99 30.82

实测值：58.04 4.01 30.77

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苯氧基-9H-嘌呤

向800ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-苯氧基-9H-嘌呤（0.181g，0.8mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（1.069g，4.0mmol）。将混合物在50℃加热并用声波处理得到溶液。移去对照试样。加入40ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液（实例2b）。将反应在50℃加热。六天后，向反应中加入0.181g，0.8mmol2-氨基-6-苯氧基嘌呤。反应开始十五天后，向反应中再加入0.181g，0.8mmol2-氨基-6-苯氧基嘌呤和0.428g，1.6mmol 3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷。三十三天后停止反应，将反应加热至80℃沉淀出酶，过滤。用乙酸乙酯萃取水溶液出产物。合并乙酸乙酯馏份，硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂得到泡沫体。泡沫体经一级碱性氧化铝柱色谱层析，用氯仿/甲醇（99∶1，V/V）淋洗，合并含有产物馏份，真空除去溶剂，得到0.48g泡沫体产物，54%产率。

UV：pH 1 λmax＝293（ε＝10300），λmin＝263（ε＝3830）

λmax＝243（ε＝8880），

pH 13 λmax＝286（ε＝13500），λmin＝263（ε＝5850），

λmax＝246（ε＝12900），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.22（s，1H，8H），7.5-7.2（m，5H，苯基），6.5（s，2H，2NH₂），6.20（t，J＝6.34Hz，1H，1′H），5.15（s，1H，5′OH），4.7-4.6（m，1H，3′H），3.95-3.85（m，1H，4′H），3.65-3.50（m，2H，5′H），2.9-2.8（m，1H，2′H），2.5-2.4（m，1H，2′H，被DMSO遮蔽）

元素分析（C₁₆H₁₆N₈O₃）：

C H N

计算值：52.17 4.38 30.42

实测值：52.22 4.39 30.35

实例18

a）2-氨基-6-环丁氧基-9H-嘌呤

将钠（Aldrich，lot ＃9621CL，4.1g，176.9mmol）加到含环丁醇（Aldrich，4.6g，63.7mmol）的250ml乙腈中，在钠与环丁醇反应之后，加入2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4046，6.0g，35.4mmol），将混合物在70℃加热18小时。将溶剂倾去，加水到残余物中。用1N HCl调节pH值到7得到沉淀。将沉淀过滤，并用水洗涤，干燥得到4.5g（21.7mmol，62%）产物。mp＝218℃（分解）。

UV：pH 1 λmax＝284（ε＝7800），λmin＝258（ε＝3500）

pH 13 λmax＝285（ε＝10300），λmin＝252（ε＝2400），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.36（s，1H，NH），7.78（s，1H，H8），6.14（s，2H，NH₂），5.4-5.2（m，1H，OCH），2.45-1.50（m，6H，环丁基）

元素分析（C₉H₁₁N₅O·0.1H₂O）：

C H N

计算值：52.22 5.45 33.83

实测值：52.13 5.48 33.55

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丁氧基）-9H-嘌呤

向800ml，pH为6.0的50mM柠檬酸缓冲液中，其制备见实例2C所述，加入2-氨基-6-（环丁氧基）-9H-嘌呤（0.164g，0.8mmol）和3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（1.069g，4.0mmol）。将混合物在50℃加热，并用声波处理得到溶液。移去对照试样。加入40ml活性为1500单位/毫升的反式-N-脱氧核糖酶溶液。将反应在50℃加热。五天后，向反应中加入0.164g，0.8mmol2-氨基-6-环丁氧基嘌呤。反应开始十天后，再向反应液中加入0.164g，0.8mmol2-氨基-6-环丁氧基嘌呤和0.428g，1.6mmol3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷。反应二十一天后，向反应中再加入0.164g，0.8mmol2-氨基-6-环丁氧基嘌呤。二十六天后反应停止，并加热至80℃沉淀出酶。将混合物冷却至0℃，过滤。用乙酸乙酯萃取水溶液出产物（3次）。合并乙酸乙酯馏份，硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到泡沫体。泡沫体经一级（grade 1）碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为氯仿/甲醇（95∶5，V/V）。合并含有馏份产物，真空除去溶剂，得到0.334g泡沫体产物，产率32%。

UV：pH 1 λmax＝288（ε＝10000），λmin＝261（ε＝3500）

λsh＝243（ε＝7100），

pH 13 λmax＝281（ε＝11000），λmin＝261（ε＝6500），

λsh＝247（ε＝10600），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 8.06（s，1H，8H），6.4（br s，2H，2NH₂），6.14（t，J＝6.44Hz，1H，1′H），5.35-5.2（m，1H，CH），5.14（t，J＝5.6Hz，1H，5′OH），4.6-4.5（m，1H，3′H），3.9-3.8（m，1H，4′H），3.6-3.50（m，2H，5′H），2.89-2.76和2.5-2.34（m，2H，2′H），2.20-2.00（m，2H，CH2），1.9-1.6（m，2H，CH2）

元素分析（C₁₃H₁₈N₈O₃）：

C H N

计算值：48.55 5.24 32.35

实测值：48.75 5.25 32.20

实例19

a）2-氨基-6-甲基丙基氨基-9H-嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4064，6.0g，35.4mmol）悬浮在75ml乙腈中。加入N-甲基丙基胺（Aldrich，lot＃00923AW。10.0g，136.7mmol），并将反应在75℃搅拌24小时。蒸去溶剂得到一油状体。将油与水混搅，得到固体，过滤，干燥得到5.9g（28.6mmol，81%）产物;mp＝181℃;

UV：pH 1 λmax＝283（ε＝14300），λmin＝270（ε＝10800），

λsh＝256（ε＝12800），

pH 13 λmax＝290（ε＝13500），λmin＝261（ε＝4700），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.0（s，1H，NH），7.6（s，1H，H8），5.6（s，2H，NH₂），4.0（br s，2H，NCH₂），3.2（s，3H，NCH₃），1.7-1.5（m，2H，CH₂），0.9（t，J＝7.3Hz，3H，CH₃）;

元素分析（C₉H₁₄N₆0.15CH₃CN）：

C H N

计算值：52.59 6.86 40.55

实测值：52.55 6.88 40.57

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲基丙基氨基-9H-嘌呤

标题化合物按类似于2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基甲基氨基-9H-嘌呤（实例15b）的制备方法。除在柱色谱之前，先用150ml1M碳酸钾洗涤两次合并后的乙酸乙酯馏份外，反应按类似方法进行。分离得到0.347g产物，产率50%。mp＝101-104℃

UV：pH 1 λmax＝295（ε＝12600），λmin＝274（ε＝8100），

λmax＝257（ε＝12300），λmin＝241（ε＝8100），

pH 13 λmax＝284（ε＝16200），λmin＝249（ε＝7700），

NMR（DMSO-d₆）δ 7.93（s，1H，H8），6.13（t，J＝6.64Hz，1H，H1′），5.81（s，2H，2NH₂），5.27（t，J＝5.37Hz，1H，5′OH），4.61-4.53（m，1H，H3′），4.00-3.80（m，3H，H4′，NCH₂），3.59-3.53（m，2H，H5′），3.23（br s，3H，CH₃）2.87-2.73（m，1H，H2′），2.45-2.32（m，1H，H2′），1.64-1.53（m，2H，CH2），0.84（t，J＝7.37Hz，3H，CH3）

元素分析（C₁₄H₂₁N₉O₂）：

C H N

计算值：48.41 6.09 36.29

实测值：48.65 6.14 36.37

实例20

a）2-氨基-6-氮杂环丁烷基-9H-嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4064，1.0g，5.8mmol）悬浮在50ml乙腈中。加氮杂环丁烷（Aldrich lot ＃05606HV，1.0g，17.5mmol）。将反应在62℃搅拌24小时。蒸掉溶剂，得到一白色固体，用甲醇重结晶，得到0.71g（3.7mmol，65%）产物;mp＝280℃

UV：pH 1 λmax＝283，253（ε＝13300，12300），

λmin＝267，241（ε＝8900，10000）

λsh＝293（ε＝12300），

pH 13 λmax＝292（ε＝13400），λmin＝261（ε＝4300），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.07（br s，1H，NH）7.62（s，1H，H8），5.74（s，2H，NH₂），4.36-4.09（br m，4H，N（CH₂）₂），2.42-2.27（m，2H，CH₂）

元素分析（C₈H₁₀N₆·0.55H₂O）：

C H N

计算值：48.02 5.59 42.00

实测值：47.77 5.25 42.19

b）2-氨基-6-（1-氮杂环丁烷基）-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-9H-嘌呤

标题化合物按类似于2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基甲基氨基-9H-嘌呤（实例15b）的制备方法。除在柱色谱之前，用150ml1M碳酸钾洗涤两次合并后的乙酸乙酯馏份外，反应按相似方法进行。分离，得到0.373g产物，产率56%。mp＝141-143℃。

UV：pH 1 λmax＝298（ε＝15900），λmin＝274（ε＝8800）

λmax＝257（ε＝14000），λmin＝238（ε＝7700）

pH 13 λmax＝285（ε＝17400），λmin＝247（ε＝8600），

NMR（DMSO-d₆）δ 7.89（s，1H，H8），6.10（t，J＝6.64Hz，1H，H1′），5.93（s，2H，2NH₂），5.26（t，J＝5.62Hz，1H，5′OH），4.61-4.53（m，1H，H3′），4.23（br s，4H，2CH2），3.90-3.84（m，1H，H4′），3.61-3.52（m，2H，H5′），δ 2.87-2.74（m，1H，H2′），2.44-2.28（m，1H，H2′）

元素分析（C₁₃H₁₇N₉O₂）：

C H N

计算值：47.13 5.17 38.05

实测值：47.24 5.21 37.96

实例21

a）2-氨基-6-乙甲基氨基-9H-嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4064，6.5g，38.3mmol）悬浮在75ml乙腈中。加入N-乙基甲胺（6.8g，115.0mmol），并将反应在75℃搅拌24小时。蒸发溶剂，得到一固体，并淤浆于水中，过滤，空气干燥，得到4.86g（25.3mmol，66%）产物;mp＝206℃;

UV：pH 1 λmax＝283（ε＝14800），λmin＝266（ε＝10900）

λsh＝255（ε＝13400），

pH 13 λmax＝290（ε＝13700），λmin＝261（ε＝4900），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.1（br s，1H，H9），7.6（s，1H，H8），5.6（s，2H，NH₂），4.0-3.9（br d，2H，NCH₂），3.4-3.2（m，3H，NcH₃），1.1-1.0（m，3H，CH₃）;

元素分析（C₈H₁₂N₆）：

C H N

计算值：49.98 6.59 43.72

实测值：50.04 6.57 43.64

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-乙基甲基氨基-9H-嘌呤

标题化合物按类似于2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基甲基氨基-9H-嘌呤（实例15b）的制备方法。除在柱色谱之前，用150ml 1M碳酸钾洗涤两次合并的乙酸乙酯外，反应按相似方法进行。分离，得到0.362g产物，产率54%;mp＝38-43℃

UV（nm）pH 1 λmax＝295（ε＝13200），λmin＝274（ε＝8600）

λmax＝257（ε＝13100），λmin＝240（ε＝8300）

pH 13 λmax＝284（ε＝16600），λmin＝248（ε＝7900），

NMR（DMSO-d₆）δ 7.93（s，1H，H8），6.13（t，J＝6.59Hz，1H，H1′），5.82（s，2H，2NH₂），5.27（t，J＝5.37Hz，1H，5′OH），4.61-4.53（m，1H，H3′），4.05-3.84（m，3H，H4′，NCH₂），δ 3.59-3.53（m，2H，H5′），δ 3.25（br s，CH₃）2.87-2.74（m，1H，H2′），2.47-2.33（m，1H，H2′），1.11（t，J＝7.04Hz，3H，CH₃）

元素分析（C₁₃H₂₁N₉O₂）：

C H N

计算值：46.84 5.74 37.82

实测值：46.57 5.79 37.65

实例22

a）2-氨基-6-吡咯烷基-9H-嘌呤

将2-氨基-6-氯嘌呤（Sigma，lot ＃69F4064，5.0g，29.5mmol）在吡咯烷（Kodak，lot ＃B161，30ml）中，于80℃下搅拌24小时。蒸发溶剂，得到金色固体，用甲醇重结晶，得到3.41g（16.7mmol，58%）产物;mp＝265℃;

UV：pH 1 λmax＝283，255（ε＝13000，11900），

λmin＝267，241（ε＝9100，9300），

λsh＝290（ε＝12100），

pH 13 λmax＝291（ε＝14200），λmin＝258（ε＝5000），

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 12.08（s，1H，NH），7.62（s，1H，H8），5.63（s，2H，NH₂），4.1-3.4（br m，4H，N（CH₂）₂）;

元素分析（C₉H₁₂N₆·0.35H₂O·0.5CH₃OH）：

C H N

计算值：50.36 6.54 37.09

实测值：50.32 6.54 37.09

b）2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-吡咯烷基-9H-嘌呤

标题化合物按类似于2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基甲基氨基-9H-嘌呤（实例15b）的制备方法。除在柱色谱之前，先用150ml 1M碳酸钾洗涤两次合并的乙酸乙酯馏份外，反应按相似方法进行。分离得到0.360g产物，产率52%。mp＝180-183℃。

UV：pH 1 λmax＝298（ε＝17800），λmin＝275（ε＝9600）

λmax＝257（ε＝15500），λmin＝237（ε＝8100）

pH 13 λmax＝284（ε＝20000），λmin＝247（ε＝9000），

NMR（DMSO-d₆）δ 7.90（s，1H，H8），6.12（t，J＝6.64Hz，1H，H1′），5.81（s，2H，2NH₂），5.30（t，J＝5.63Hz，1H，5′OH），4.60-4.52（m，1H，H3′），4.00-3.45（m，7H，H4′，H5′2CH2），δ 2.90-2.73（m，1H，H2′），2.44-2.35（m，1H，H2′），1.88（br s，4H，2CH₂）

元素分析（C₁₄H₁₉N₉O₂）：

C H N

计算值：48.69 5.54 36.50

实测值：48.95 5.59 36.31

实例23

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（正-丁基氨基）-9H-嘌呤

将2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤（实例3d）（0.40g，1.29mmol）和正-丁胺（Aldrich，lot ＃ 06221JP，1.28ml，12.9mmol）合并溶于25ml甲醇中，并倒在密封管中。将反应在60℃加热18小时，然后蒸发溶剂。残余物在碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为含2%甲醇的CHCl₃，合并并蒸发所要馏份，得到0.279g（0.8mmol，62.3%）产物;mp＝44-47℃;

UV pH 1 λmax＝295，253（ε＝14500，13600），

λmin＝272，237（ε＝8200，9000），

pH 13 λmax＝281（ε＝14300），λmin＝242（ε＝6200），

λsh＝264（ε＝10500）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.89（s，1H，H8），7.20（br s，1H，NH），6.10（t，J＝6.44Hz，1H，H1′），5.80（s，2H，NH₂），5.32（t，J＝5.47Hz，1H，5′OH），4.61-4.52（m，1H，H3′），3.90-3.85（m，1H，H4′），3.60-3.30（m，4H，H5′，CH₂），2.90-2.75（m，1H，H2′），2.47-2.30（m，1H，H2′），1.60-1.20（m，4H，2CH₂），0.87（t，J＝7.23Hz，3H，CH₃）;

元素分析（C₁₄H₂₁N₉O₂）：

C H N

计算值：48.41 6.09 36.29

实测值：48.16 6.07 36.05

实例24

反式-2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（（2-苯基环丙基）氨基-9H-嘌呤

将反式-2-苯基环丙胺盐酸盐（Aldrich，lot ＃ 01903MK，2.5g，14.7mmol）溶于5ml水中，并调节pH值为12。用10ml EtOAc萃取水溶液。将EtOAc蒸发至干，再溶于25ml EtOH中。向该乙醇溶液中加入2-氨基-9-（3-叠氮-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H嘌呤（实例3d）（0.4g，1.29mmol），然后置于密封管中，在50℃加热18小时。真空除去溶剂，得到黑色油状体。油状体经碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为含1%甲醇的三氯甲烷。将含有杂质的产物馏份合并，蒸发，再经过硅胶柱层析，淋洗剂为含5%甲醇的CHCl₃。收集不纯产物，再用碱性氧化铝柱层析，用含1%MeOH的CHCl₃淋洗，合并并蒸发所要馏份，得到0.0802g（0.2mmol，15.5%）产物;mp＝65-70℃;

UV pH 1 λmax＝297，253（ε＝15500，13000），

λmin＝273，247（ε＝7800，12600）

pH 13 λmax＝285，260（ε＝21700，14000）

λmin＝265，254（ε＝13800，13600）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.92（s，1H，H8），7.62（br d，J＝5.47Hz，1H，NH），7.30-7.10（m，5H，苯基），6.11（t，J＝6.53Hz，1H，H1′），5.82（s，2H，NH₂），5.28（t，J＝5.70Hz，1H，5′OH），4.60-4.50（m，1H，H3′），3.89-3.82（m，1H，H4′），3.59-3.53（m，2H，H5′），2.90-2.79（m，1H，H2′），2.50-2.36（m，1H，H2′），2.20-2.08（m，1H，CH），1.40-1.15（m，2H，CH₂）;

元素分析（C₁₉H₂₁N₉O₂·0.75MeOH）：

C H N

计算值：54.98 5.61 29.22

实测值：55.34 5.30 28.82

实例25

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（2-苯乙基氨基）-9H-嘌呤

将2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-氯-9H-嘌呤（实例3d）（0.40g，1.3mmol）和苯乙胺（Aldrich，lot ＃ 06410LP，0.79g，6.5mmol）在15ml MeOH中回流18小时。蒸发溶剂，残余物经碱性氧化铝柱层析，淋洗剂为含5%甲醇的CHCl₃。将产物馏份合并，蒸发，得到0.49g（1.15mmol，96%）产物，mp＝89-92℃。

UV（nm）pH 1 λmax＝292（ε＝14400），λmin＝272（ε＝10200）

λsh＝254（ε＝14700）

pH 13 λmax＝282（ε＝18800），λmin＝244（ε＝9400），

λsh＝263（ε＝13500）

¹H NMR（DMSO-d₆）δ 7.9（s，1H，H8），7.4-7.1（m，6H，NH，苯基），6.1（t，J＝6.6Hz，1H，H1′），5.8（br S，2H，NH₂），5.3（t，J＝5.8Hz，1H，5′OH），4.6-4.5（m，1H，H3′），3.9-3.8（m，1H，H4′），3.6-3.5（m，4H，H5′，CH₂），2.9-2.7（m，3H，H2′，CH₂），2.4-2.3（m，1H，H2′）;

元素分析（C₁₈H₂₁N₉O₂·0.3EtOAc·0.2H₂O）：

C H N

计算值：54.20 5.64 29.63

实测值：54.23 5.60 29.63

实例26

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丙基甲基氨基）-9H-嘌呤-5′-磷酸酯

将2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-环丙基甲基氨基-9H-嘌呤（实例15b）（0.050g，0.14mmol）溶于1.25ml1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2（1H）-嘧啶酮（Aldrich lot ＃01812AX）中。溶剂用氢化钙干燥二十四小时。将溶液在-20℃的冰/甲醇浴中冷却。加入磷酰氯（0.054ml，0.58mmol，4当量，Aldrich lot ＃00421TW）。搅拌三分钟后，再加入5ml水，然后将反应在0℃冰水浴中搅拌30分钟。加1N氢氧化钠中和，至pH值为7。水溶液用5ml氯仿萃取三次。碳酸氢铵型Sephadex-DEAE（A-25）离子交换柱通过用200ml50mmol碳酸氢铵淋洗35ml树脂而制得。将反应水溶液装入柱中。用400ml50mmol碳酸氢铵洗柱以除去无机盐。离子交换柱先用100ml 100mmol碳酸氢铵淋洗，随后用300ml200mmol碳酸氢铵淋洗。产物在200mmol碳酸氢铵的第二个100ml部分淋洗时流出。真空旋转蒸发除去水和部分碳酸氢铵。残余物溶于10ml蒸馏水中，旋转蒸发两次。将最终的残余物溶于20ml蒸馏水中，冷冻干燥，得到0.042g白色固体产物，产率68%。

UV（nm）pH 1 λmax＝302（ε＝15200），λmin＝275（ε＝5400）

λmax＝256（ε＝12200），λmin＝238（ε＝7600）

pH 13 λmax＝286（ε＝16800），λmin＝249（ε＝8900），

¹³C-NMR（DMSO-d₆）

NMR：δ 82.9（4′C），δ 82.2（1′C），64.3（5′C），61.8（3′C）35.9（2′C），35.2（6-NCH3），32.6（6-NcPrCH），8.2（6-NcPrCH2）

³¹P-NMR（在DMSO-d₆中测量）：0.6（5′PO₄）

元素分析（C₁₄H₂₀N₉O₅P·0.5NH₃·1.45H₂O）：

C H N

计算值：36.56 5.35 28.93

实测值：36.66 5.22 29.02

实例27

片剂

下述制剂A、B和C通过将各种成分与聚烯吡酮溶液湿法成粒，再加入硬脂酸镁，压制而制得。

制剂A

毫克/片毫克/片

（a）活性成分 250 250

（b）乳糖B.P. 210 26

（c）聚烯吡酮B.P. 15 9

（d）羟基乙酸淀粉钠 20 12

（e）硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂B

毫克/片毫克/片

（a）活性成分 250 250

（b）乳糖 150 -

（c）微晶纤维素pH101 60 26

（d）聚烯吡酮B.P. 15 9

（e）羟基乙酸淀粉钠 20 12

（f）硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂C

毫克/片

活性成分 100

乳糖 200

淀粉 50

聚烯吡酮 5

硬脂酸镁 4

359

直接压缩混合好的各种成份制得下述制剂D和E。制剂E中的乳糖为直接压缩形式（Dairy Crest-“Zeparox”）

制剂D

毫克/片

活性成分 250

予胶凝淀粉NF15 150

400

制剂E

毫克/片

活性成分 250

乳糖 150

微晶纤维素 100

500

制剂F（控制释放剂）

将成分（如下）与聚烯吡酮溶液湿法成粒，再加入硬脂酸镁，压缩制得制剂

毫克/片

（a）活性成分 500

（b）羟丙基甲基纤维素 112

（Methocel K4M Premium）

（c）乳糖B.P. 53

（d）聚烯吡酮B.P. 28

（e）硬脂酸镁 7

700

约6-8小时后，药物开始释出，12小时后释放完全。

实例28

胶囊

制剂A

混合上述实施2中制剂D的各种成分，然后填充在两个硬明胶胶囊中，制得制剂A。制剂B（见下）按类似方法制备。

制剂B

毫克/胶囊

（a）活性成分 250

（b）乳糖B.P. 143

（c）羟基乙酸淀粉钠 25

（d）硬脂酸镁 2

420

制剂C

毫克/胶囊

（a）活性成分 250

（b）聚乙二醇4000B.P. 350

600

制剂D

毫克/胶囊

活性成分 250

卵磷脂 100

花生油 100

450

制剂D胶囊是通过将活性成份分散在卵磷脂和花生油中，再填充到柔软且有弹性的明胶胶囊中而制得。

制剂E（控制释放胶囊）

下述控制释放胶囊的制备是通过在挤压机中挤压成分a，b和c，然后将挤出物团成球状，干燥。再在干燥球体外裹上一层释放控制膜（d），填充到二片硬明胶胶囊中。

毫克/胶囊

（a）活性成分 250

（b）微晶纤维素 125

（c）乳糖B.P. 125

（d）乙基纤维素 13

513

实例29

针剂

制剂A

活性成分

0.200g

0.1M盐酸溶液，或

氢氧化钠溶液，0.1M，调节（q.s）pH到4.0至7.0

无菌水 q.s.至

10ml

将活性成分溶解在大量水中（35℃-40℃）中，用盐酸或，如果需要，用氢氧化钠调节pH在4.0至7.0之间。加水至每批量所需要的体积，通过无菌微孔滤器过滤到10ml无菌琥珀色玻璃小瓶中（型号1）通过无菌封闭和超密封进行密封。

制剂B

活性成分 0.125

无菌，无热原，pH为7的磷酸盐

缓冲液加（q.s.）至25ml

实例29

肌内注射

活性成分 0.20g

苄醇 0.10g

甘油糖醛75（Glycofurol 75） 1.45g

注射用水加（q.s.）至3.00ml

将活性成分溶在甘油糖醛中（Glycofurol）。然后加入苄醇，溶解，加水至3ml。然后将混合物通过无菌微孔滤器过滤，并密封在无菌的3ml琥珀色玻璃小瓶中（型号1）。

实例30

糖浆

活性成分 0.25g

山梨糖醇溶液 1.50g

甘油 2.00g

苯甲酸钠 0.005g

调料剂Peach 17.42.3169 0.0125ml

净化水加水（q.s.）至5.00ml

将活性成分溶在甘油和大量净化水的混合液中。然后向溶液中加入苯甲酸钠水溶液，再加入山梨糖醇溶液，最后加调料剂。补加净化水到所需量，混合均匀。

制剂B

活性成分 0.125g

无菌，无热原，pH为7的磷酸盐

缓冲剂加（q.s.）至25ml

实例31

栓剂

毫克/栓剂

活性成分 250

硬脂肪（Hard Fat），B.P.（Witepsol H15-Dynamit NoBel）1770

2020

将五分之一的Witepsol H15在最高温度45℃下熔化在蒸汽夹套锅中。将活性成分经过200M筛进行筛选，然后加到熔化基质中，使用配有切割头的Silverson进行混合，至形成均匀分散为止。将混合物维持在45℃，把剩余的Witepsol H15加到悬浮液中，搅拌以保证均相混合。将全部悬浮物不断搅拌通过250M不锈钢筛，可以冷却至40℃。在38℃到40℃温度内，将2.02g混合物填充到合适的2ml塑料模具中。将栓剂冷却到室温。

实例32

阴道栓剂

毫克/阴道栓剂

活性成分 250

脱水葡萄糖（Anhydrate Dextrose） 380

马铃薯淀粉 363

硬脂酸镁 7

1000

将上述成分直接混合，并直接压缩所形成的混合物来制备阴道栓剂。

实例33

抗病毒试验

a）抗人体免疫缺损病毒（HIV）的抗病毒活性

ⅰ）抗-HIV活性由测定化合物逆转HIV感染的细胞病效应的能力决定。在细胞感染后第五天，用propidium iodide染料吸收试验监测细胞生长的定量计数决定抗-HIV活性。在加入2至200μM六种不同浓度化合物之前，用HIV-1（菌株3B）或HIV-2（Zagury菌株）的100XTCID₅₀培养MT₄细胞一小时。然后将细胞在37℃培养5天。第五天，在分析之前，迅速向最终浓度为0.5%中加入NP-40除垢剂。用测量结合在DNA上的染料（propidium iodide）荧光的方法决定细胞数目。由于DNA的量直接与细胞数量成正比，因此这个荧光试验表明了细胞生长情况。当在试验持续的五天内，未感染细胞增加几倍细胞数，则HIV-感染细胞生长如果有，也很小。逆转HIV细胞病效应的化合物将允许细胞迅速生长，接近于模拟感染（mock-infected）细胞生长。

药物的抗病毒效应用IC₅₀表示，IC₅₀代表保护50%细胞避免细胞杀死的抑制浓度，抑制浓度的测量用未感染MT₄细胞对照样决定50%细胞生长。

表1

实例抗-HIV IC₅₀

HIV-1 HIV-2

2-氨基-9-（3-叠氮基- 5.6μM 5.5μM

2，3-二脱氧-β-D-赤式 6.9μM

-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-

9H-嘌呤（实例2C）

2-氨基-9-（3-叠氮基- 8.9μM

2，3-二脱氧-β-D-赤式

-呋喃戊糖基）-6-苄氧基-

9H-嘌呤（实例6b）

2-氨基-9-（3-叠氮基- 2.5μM

2，3-二脱氧-β-D-赤式 20.9μM

-呋喃戊糖基）-6-二甲基-

-氨基-9H-嘌呤（实例7b）

ⅱ）抗-HIV活性也可以在培养基中通过逆转录酶（RT）存在测定。由于无细胞上清液中RT的量直接与通过感染细胞释放的病毒微粒的数量成正比，因此RT的降低表示病毒产生的降低。在加入上述2到200μM六种不同浓度化合物前，用HIV-1或HIV-2感染MT₄细胞。

将被HIV感染的MT₄细胞培养5天后，通过无细胞上清液试验测定逆转录酶（RT）。50μl上清液试样破裂是通过加入10μl下列混合物：

0.5M KCl

0.5mM DTT

0.5% Triton X-100

培养五分钟使病毒破裂后，向试样中加入下列试剂：

10μl pH为7.8的5mM EGTA的0.5M缓血酸铵（Tris）盐酸溶液

1μl 0.5M MgCl₂

3μl 3H-dTTP

10μl 聚γA-ODT（2.5OD/ml）

16μl 水

将试样培养二小时后，加到DEAE纸上。用5%磷酸钠（二碱价）洗涤DEAE纸四次（每次+分钟），再用95%EtOH洗涤两次，然后用闪烁计数器计数。药物的抗病毒效应用IC₅₀表示，IC₅₀即抑制浓度，这种浓度导致与感染对照细胞相比的RT50%减少。

实例2C的2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤化合物按上述方法进行试验

IC₅₀

逆转录酶的抑制浓度

HIV-1 HIV-2

9.5μM 3.2μM

b）抗乙型肝炎病毒（HBV）的抗病毒活性

ⅰ）体外测定抗乙型肝炎病毒（HBV）活性是采用Tuttleman，Pugh和Summers所述的方法（见J.Virol.，58∶17-25，1986），通过测定化合物防止鸭HBV重复试验能力进行。得到鸭肝细胞，并置于培养基中，用鸭HBV感染。感染三天后，将已感染细胞暴露在不同浓度的试验化合物中再放置八天。这样暴露后，从每个培养物的感染细胞和化合物中萃取DNA，尤其决定病毒DNA数量，并与从缺少试验化合物的类似培养物中得到的病毒DNA数量比较。

实例2C化合物，2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤按上述方法试验。

浓度（μM）总单丝条

病毒DNA含量（微微克）

0.01 175

0.1 100

1.0 75

10 25

100 9

ⅱ）Sells等人叙述特征的HepG2，2.2.15，人体HBV生长细胞系，见PNAS84∶1005，1987和J.Virol.62∶2836，1988，说明了具有许多共同的HBV长期感染肝细胞特性。并通过在黑猩猩上引起疾病的能力证明感染性。在体外，这种细胞系被用于识别带有抗HBV活性的化合物。

对试验化合物抗病毒活性，用50-200M浓度的化合物处理单层培养基十天。收集第三天，第六天和第十天所得含细胞外病毒粒子DNA（Dane颗粒）的上清液培养基，用蛋白酶K（1mg/ml）和十二烷基硫酸钠（1%）处理，并在50℃培养1小时。先用等体积的苯酚，再用氯仿萃取DNA，然后用乙酸铵和丙醇沉淀。采用Schleicher和Schuell（S & S，10 Optical Ave.，Keene，NH 03431，Publication ＃ 700，1987）的程序，将DNA沉淀溶解并收集在硝化纤维素上，并根据Southern所述的方法处理，见J.Mol.Biol.，98∶503，1975。收集细胞，用异硫氰酸胍溶解细胞，得到细胞内DNA。细胞内DNA按与细胞外DNA的相同方法处理。在用乙酸铵和丙醇沉淀后，将细胞内DNA沉淀溶解，用限制性核酸内切酶，Hind Ⅲ切割，并附于琼脂糖胶上，用Southern所述的方法，决定复制中间形式的量进行处理。药物抗病毒效应的测定，是通过测量丹尼（Dane）微粒量挤压入培养基介质至少100倍的降低和细胞内复制中间物类似的降低。

化合物7b说明对人体乙型肝炎病毒具有强烈抑制效应。

Claims

1、一种制备通式(Ⅰ)化合物或其药物上可接受的衍生物的方法：

其中R代表卤素；C_1-6烷氧基；C_3-6环烷氧基；芳氧基或芳烷氧基，其中芳基可任意地被C_1-5烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基或羟基取代；氨基，它可被一个或两个取代基取代，该取代基分别选自C_1-6烷基、芳基、包括芳环烷基在内的芳烷基、以及C_3-6环烷基；或含有至少一个氮原子的4-至6-节杂环，该环通过一个/该氮原子与嘌呤碱键合；

该方法包括：

(A).脱去通式(Ⅱ)化合物中的羟基保护基Y，

(其中R如上所定义，Y代表羟基保护基)；或

B).使通式(ⅡA)化合物

(其中R如上所定义，R²是氨基保护基)或其官能等价物，例如其甲硅烷基化衍生物，与通式(ⅡB)化合物

(其中Y如上所定义，A是一离去基团)进行反应生成通式(ⅡC)化合物：

(其中R、R²和Y如上所定义)，然后使氨基和羟基脱保护；或

C).使通式(ⅡD)化合物：

(其中R如上所定义)与通式(ⅡE)化合物在有适当的转移酶存在下进行反应：

(其中B代表嘧啶或嘌呤碱)；

D).将R代表卤素的通式(Ⅰ)化合物与适当的试剂反应，使所述的卤素转化为通式(Ⅰ)中R所代表的另一基团；此后或与此同时进行一种或多种的下列任意的转化：

(ⅰ).脱去任何剩余的保护基；

(ⅱ).当生成通式(Ⅰ)化合物时，将所述的化合物转化为其药物上可接受的衍生物；以及

(ⅲ).当生成通式(Ⅰ)化合物的药物上可接受的衍生物时，将所述的衍生物转化为通式(Ⅰ)的母体化合物，或转化为通式(Ⅰ)化合物的另一种药物上可接受的衍生物。

2、根据权利要求1的制备通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物的方法，其特征在于R代表卤素;C_1-6烷氧基;C_3-6环烷氧基;芳氧基;芳烷氧基;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基，包括芳环烷基在内的芳烷基;或含有一个氮原子的4-或5-节杂环，该环通过该氮原子与嘌呤碱键合。

3、根据权利要求1的制备通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物的方法，其特征在于R代表C_1-6烷氧基;芳氧基;芳烷氧基;氨基，它可被一个或两个取代基所取代，该取代基分别选自C_1-6烷基和C_3-6环烷基;或含有一个氮原子的4-或5-节杂环（如氮杂环丁基、吡咯烷基），该环通过该氮原子与嘌呤碱键合。

4、根据权利要求1的制备通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物的方法，其中化合物选自：

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-甲氧基-9H-嘌呤;

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苄氧基-9H-嘌呤;

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-丙氨基-9H-嘌呤;

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-（环丙基甲基-氨基）-9H-嘌呤;

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-苯氧基-9H-嘌呤;

2-氨基-6-（1-氮杂环丁基）-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-9H-嘌呤;或

2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-吡咯烷基-9H-嘌呤。

5、一种制备化合物2-氨基-9-（3-叠氮基-2，3-二脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖基）-6-二甲氨基-9H-嘌呤或其药物上可接受的衍生物的方法。

6、一种制备含有通式（Ⅰ）化合物或其药物上可接受的衍生物的药物制剂的方法：

（其中R如上所定义）

该方法包括通过下面所包括的一种方法制备所述的化合物，并将所得的通式（Ⅰ）化合物与一种或多种药物上可接受的载体混合形成所述的药物制剂：

（A）.脱去通式（Ⅱ）化合物中的羟基保护基Y，

（其中R如上所定义，Y代表羟基保护基）;或

B）.使通式（ⅡA）化合物：

（其中R、R²和Y如上所定义），然后使氨基和羟基脱保护;或

C）.使通式（ⅡD）化合物：

（其中R如上所定义）与通式（ⅡE）化合物在有适当的转移酶存在下进行反应：

（其中B代表嘧啶或嘌呤碱）;

（D）.将R代表卤素的通式（Ⅰ）化合物与适当的试剂反应，使所述的卤素转化为通式（Ⅰ）中R所代表的另一基团;此后或与此同时进行一种或多种下列任意的转化：

ⅰ）.脱去任何剩余的保护基;

ⅱ）.当生成通式（Ⅰ）化合物时，将所述的化合物转化为其药物上可接受的衍生物;以及

ⅲ）.当生成通式（Ⅰ）化合物的药物上可接受的衍生物时，将所述的衍生物转化为通式（Ⅰ）的母体化合物，或转化为通式（Ⅰ）化合物的另一种药物上可接受的衍生物。