CN105112319A - 一株假单胞菌属解磷细菌y2及其制备的生物有机肥和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株假单胞菌属解磷细菌Y2及其制备的生物有机肥和应用。该菌株分离于马铃薯根际，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCC？NO.10242。摇瓶实验结果表明，菌株能够有效降低溶液pH并溶解溶液中难溶性磷；灌菌盆栽试验结果表明，该菌株能够有效促进马铃薯、玉米和烟草植株的生长，同时菌株能够在植株根际大量定殖，发挥促生作用。利用该菌株以及腐熟鸡粪和菜粕研制的粒状生物有机肥施用后，能够显著促进玉米植株的生长。

Description

一株假单胞菌属解磷细菌Y2及其制备的生物有机肥和应用

技术领域

本发明属于农业微生物领域，提供一株假单胞菌属高效解磷细菌Y2及其研制的生物有机肥。

背景技术

磷是植物生长必不可少的营养元素，我国耕地缺磷现象普遍，土壤中无效磷形态占到95％，植物几乎不能直接吸收利用。土壤中难溶性磷可分为有机磷和无机磷，其中难溶性有机磷占土壤全磷的20％‐50％。过磷酸钙等磷肥的有效磷含量偏低，而且施用后磷肥当季利用率为5％‐25％，剩余大部分磷与土壤中的Ca²⁺、Fe³⁺以及Al³⁺等结合形成难溶性磷酸盐，因此，如何提高磷利用率是一个急需解决的问题。植物根际的解磷菌数量不足以和其他微生物竞争，难以发挥其活性。固氮、解磷、解钾菌株是微生物肥料的主要菌株，因此，有必要从植物根际自然条件下筛选高效解磷菌株，制成微生物肥料回接到土壤中，确保该类微生物能够有效定殖于植物根际，以促进植物生长。一些研究者提出一个方案：通过开发高效解磷微生物肥料，减少化学肥料的使用来提高土壤中有效磷的含量。同时，一些研究者经过试验证实解磷菌与有机肥料在一起能发挥更好的解磷作用。因此，本发明正好把二者很好地结合起来。

生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸秆等)为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。其本质特征是含有特定功能的、表现出一定肥料效应的微生物，这些功能微生物的生命活动是生物有机肥优于其它肥料的关键因素。生物有机肥发挥作用的关键在于肥料中有益微生物的数量，因此研究不同的配方和二次固体发酵工艺确保肥料中活菌数达到最高变得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一株假单胞菌属解磷细菌Y2及其应用。

本发明的另一目的是提供该细菌制备的生物有机肥及其应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一株假单胞菌属细菌(Pseudomonassp.)Y2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCNO.10242。

菌株Y2在LB平板上的菌落为淡黄色圆形，表面光滑湿润，边缘整齐，具有一定的黏性，易挑起。在显微镜下所观察到的营养体细胞，革兰氏染色阴性，菌体着色均匀，呈杆状。酪氨酸水解反应，酪素水解反应，氧化酶反应，接触酶反应，果糖利用，利用柠檬酸盐反应，从甘油产二羟丙酮反应均呈阳性，甲基红反应，V.P反应，明胶液化反应，赖氨酸脱羧基反应呈阴性10％NaCl生长。菌株16SrDNA序列构建的系统发育树见图1。菌株Y2位于Pseudomonassp.分支上，结合生理生化试验将Y2鉴定为假单胞菌属细菌。

本发明所述的假单胞菌属细菌Y2在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中的应用。

本发明所述的假单胞菌属细菌Y2在制备溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长的生物有机肥中的应用。

由本发明所述的假单胞菌属细菌Y2制备的解磷促生生物有机肥。。

一种制备所述的生物有机肥的生产方法，将质量比40％菜粕(干重)和60％的腐熟鸡粪(干重)堆肥进行均匀混合，将假单胞菌属细菌Y2发酵液接入上述混合物中进行固体发酵，每吨混合物中加入Y2菌株发酵液50L，固体发酵过程中每天翻堆1次，使固体发酵温度不超过50℃，发酵5‐7天后结束，Y2菌株含量可达到1×10⁸CFU/g(肥料干重)以上；将上述发酵好的生物有机肥在自然条件下将含水量风干至30％以下，得为粉状生物肥料；或者最后在温度不超过60℃的条件下将上述发酵好的生物有机肥用造粒机进行造粒，造粒结束后进行适当风干，让肥料含水量降至25～32％，得粒状生物有机肥料。

所述的生产方中所述的Y2发酵液通过以下方法制备：将保藏号为CGMCCNO10242的假单胞菌Y2接种到LB培养液中，进行液体发酵生产，发酵生产的条件为：pH值自然，发酵温度范围30～35℃，搅拌速度为170～200转/分钟，发酵时间为40h，使发酵液中含菌量≥1×10¹⁰个/mL。

所述的生产方法中所用腐熟后的鸡粪堆肥其发芽指数为98％以上，有机质质量比含量≥45％，有机氮质量比含量为2‐3％，含水量质量比为25‐30％。

所述促生生物有机肥料中Y2活菌数≥1×10⁸CFU/g(肥料干重)，全氮含量为2.5‐3.5％，总氮磷钾养分为6‐8％、有机质含量≥40％。

本发明所述的促生生物有机肥在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中的应用。

有益效果:

本发明主要利用Y2制备的生物有机肥根际有益，高效定殖与植物根际，发挥解磷作用，从而促进作物生长。专利产品应用后，促生效果好，适合蔬菜作物产区大面积使用。

该菌株及其效应验证与其它菌株相比具有如下优点：

1)本专利所获得的解磷菌株Y2为假单胞菌属高效解磷细菌，同时分离于植物根际，因此，应用时，相比于其他菌株能够更加有效的在植物根际大量定殖，从而高效发挥解磷促生功能，具有显而易见的优势。

2)研究结果表明，本专利分离获得的解磷菌，在多季盆栽试验中表现出显而易见的稳定促生能力。

该菌株研制的生物有机肥与目前市场上的产品相比具有如下优点：

1)本发明产品利用鸡粪和菜粕为固体发酵原料，能够有效促进功能菌在肥料堆体中的发酵。

2)肥料产品中含有丰富的有机质、游离氨基酸、氮、磷、钾营养元素，能给作物提供适宜的生长环境。

3)肥料产品中大量的功能菌，能够高效溶解土壤中难溶性无机磷以及肥料和土壤中的有机磷，减少化学肥料的施用，增加土壤肥力，试验结果表明，在蔬菜营养生长期上施用本产品后，能显著促进作物生长。

附图说明

图1基于菌株Y2的16SrDNA基因序列采用邻接法建立的系统发育树

图2第一季马铃薯促生盆栽效果图

图3第二季马铃薯促生盆栽效果图

图4第一季玉米促生盆栽效果图

图5第二季玉米促生盆栽效果图

图6烟草促生盆栽效果图

图7解磷菌Y2根际定殖情况图

图8解磷菌Y2研制的生物有机肥促生效果图

生物材料保藏信息

Y2，分类命名为Pseudomonasfrederlksbergensi，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCNO.10242。

具体实施方式

实施例1、功能菌株的分离及鉴定

剪取5g马铃薯根至盛有45mL无菌水的三角瓶中，170rpm振荡30min制成悬液，然后依次配备浓度为10^-3、10^-4、10^-5、10^-6的土壤稀释液。从10^-4、10^-5、10^-6稀释液中取0.1mL溶液分别涂布于磷酸钙盐无机磷培养基和卵黄培养基上(每个浓度在各培养基上重复3次)。分离解有机磷和无机磷细菌平板分别在30℃下培养3d和5d后，取出观察，选择在固体培养基平板上产生透明圈的菌落初步认定为解磷细菌，划线纯化后，于4℃冰箱保存留待进一步研究。最终分离获得一株菌株命名为Y2，具有优异的解磷效果。

其中所用磷酸钙盐无机磷培养基配制方法为，以配制1L培养基为例：葡萄糖10g，(NH₄)₂SO₄0.5g，NaCl0.3g，KCl0.2g，FeSO₄·7H₂O0.03g，MnSO₄·H₂O0.03g，Ca₃(PO₄)₂5g。

卵黄培养基：葡萄糖10g，(NH₄)₂SO₄0.5g，NaCl0.3g，KCl0.2g，FeSO₄·7H₂O0.03g，MnSO₄·H₂O0.03g，蛋黄液10mL，用去离子水定容至1000mL，pH6.0-6.5，琼脂18-20g，115℃下灭菌30min。蛋黄液的制备：在超净工作台上，先用棉花蘸取适量的酒精把鸡蛋的外壳擦干净，一般进行三次擦洗。接着用已经用酒精擦洗过的镊子在鸡蛋壳的一端敲开小孔，卵清液流入灭菌的小锥形瓶中，剩下的卵黄液让其流入已灭菌的试剂瓶中，再按照蛋黄液：0.9％的灭菌生理盐水等体积混合后放冰箱中备用。

菌株Y2在LB平板上的菌落为淡黄色圆形，表面光滑湿润，边缘整齐，有黏性乳白色，皱褶，边缘不整齐，具有一定的黏性，易挑起。在显微镜下所观察到的营养体细胞，革兰氏染色阴性，菌体着色均匀，呈杆状。酪氨酸水解反应，酪素水解反应，氧化酶反应，接触酶反应，利用柠檬酸盐反应，从甘油产二羟丙酮反应，均呈阳性，果糖利用呈阳性，甲基红反应，V.P反应，明胶液化反应，赖氨酸脱羧基反应呈阴性，10％NaCl生长。

菌株16SrDNA序列构建的系统发育树见图1。菌株Y2位于Pseudomonassp.分支上，结合生理生化试验将Y2鉴定为假单胞菌属细菌(pseudomonassp.)。，将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCNO.10242。

实施例2、Y2发酵液的生产

将菌株Y2(为CGMCCNO.10242)接种至LB培养液中液体发酵生产，发酵生产的条件为：pH6.0，发酵温度范围30～35℃，搅拌速度为200转/分钟，发酵时间为48h，使发酵液中含菌量≥1×10¹⁰个/ml；

其中所用LB培养基配制方法为，以配制1L培养基为例：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g，琼脂18‐20g，定容至1000mL，pH值自然，121℃灭菌20min。

实施例3、温室促生效果试验

3.1Y2菌株在马铃薯(第一季、第二季)上的应用效果

两季马铃薯促生试验均在江苏中宜生物肥料工程中心温室里进行，供试作物：马铃薯品种为克新一号。马铃薯种苗由当地农民提供。共设三个处理：1)添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)；2)添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)；3)添加腐熟鸡粪和过磷酸钙(CK2)。每个处理8盆，每盆装土2kg，肥料添加量为每盆30g，磷酸钙和过磷酸钙的添加量为3g/盆，肥料与土拌匀作为基肥，以降低成本为基准，盆里的接菌量按照3％(ml/100g,下同)进行。本实施例中以下实验处理组和对照组均同本实验。40天测定各处理株高、茎粗、SPAD值、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重、地下部干重，并稀释涂布计数各处理中功能菌Y2在根际的定殖数量。

第一季马铃薯促生效果如图2、生物量情况如表1所示，移苗后40天，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理的马铃薯生长过程中的各项指标除SPAD值和茎粗外，其余指标均显著高于添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)的处理(p<0.05)。同时，地上部鲜重、地上部干重和SPAD值与添加腐熟鸡粪和过磷酸钙(CK2)之间无显著性差异(p<0.05)。与CK1相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)的处理在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重方面，分别增加了87.82％、4.28％、51.95％、82.63％、79.75％和73.21％。

第二季马铃薯促生效果如图3、生物量情况如表2所示，移苗后40天，添加添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理的马铃薯生长过程中的各项指标除茎粗外，其余指标均显著高于添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)的处理(p<0.05)。与CK1相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)的处理在株高、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重及地下部干重方面，分别增加了76.45％、76.43％、58.91％、38.46％和45.19％。

综上两季盆栽结果表明，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理与添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)处理的各项指标之间都达到了显著性差异。说明功能菌Y2很好的发挥了解磷促生的功能。

表1、第一季马铃薯促生盆栽试验生物量情况

表2、第二季马铃薯促生盆栽试验生物量情况

3.2Y2菌株在玉米(第一、二季)上的应用效果

玉米品种为鲁单981，玉米种子用60℃温水浸泡，搅拌至室温，取沉淀种子，5％次氯酸钠消毒处理3min，无菌水清洗3‐4次后，于30℃培养箱中遮光催芽至露白后埋入基质中，培育出适时、量足、苗壮、苗齐的玉米苗。盆栽设计及处理如马铃薯盆栽试验，Y2发酵液的接种量同样以降低成本为基准，按照3％进行。

第一季玉米促生效果如图4、生物量情况如表3所示，移苗后40天，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理的玉米生长过程中的各项指标除茎粗和地上部干重外，其余指标均显著高于添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)的处理(p<0.05)。同时，株高、茎粗与添加腐熟鸡粪和过磷酸钙(CK2)之间无显著性差异，地下部鲜重和干重显著高于CK2。与CK1相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)的处理在株高、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重及地下部干重方面，分别增加了25.90％、5.15％、18.51％、50％和50％。

第二季玉米促生效果如图5、生物量情况如表4所示，移苗后40天，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理的玉米生长过程中的各项指标均显著高于添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)的处理(p<0.05)。同时，茎粗、株高和SPAD值与CK2间无显著性差异(p<0.05)。与CK1相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)的处理在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重及地下部干重方面，分别增加了15.71％、34.41％、1.40％、2.51％、9.72％和23.77％。

综上两季盆栽结果表明，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)与添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)处理的各项指标之间都达到了显著性差异(p<0.05)。说明功能菌Y2很好的发挥了解磷促生的功能。

表3、第一季玉米促生盆栽试验生物量情况

表4、第二季玉米促生盆栽试验生物量情况

3.3Y2菌株在烤烟上的应用效果

烟草品种为红花大金元；烟草每盆装土5kg，肥料添加量为每盆100g。由于季节及烟草育苗时间较长，所以烟草种植一季。盆栽采用上述盆栽试验同样的处理以及相同的Y2菌株接种量进行。

烟草促生效果如图6、生物量情况如表5所示，移苗后40天，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)处理的烤烟生长过程中的各项指标除SPAD值外，其余指标均显著高于添加腐熟鸡粪和磷酸钙(CK1)的处理(p<0.05)。同时，除茎粗外，其余指标与添加腐熟鸡粪和过磷酸钙(CK2)之间达到了显著性差异(p<0.05)。与CK1相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y2发酵液(Y2)的处理在株高、茎粗、叶面积、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重及地下部干重方面，分别增加了20.74％、3.67％、18.88％、29.73％、24.98％、21.75％和31.30％。说明功能菌Y2很好的发挥了解磷促生的功能。

表5、烟草促生盆栽试验生物量情况

3.4解磷菌Y2在作物根际的定殖情况

根际定殖功能菌株Y2采用固体卵黄培养基计数配方见实施例1)，功能菌Y2菌落数以每克根干重计算。由图7可以看出：解磷菌Y2在两季马铃薯、两季玉米以及烟草上的定殖都达到了相当水平，解磷菌Y2在第一和第二季马铃薯上的定殖能力分别达到4.5×10⁷CFU/g和5.4×10⁷CFU/g，在第一季和第二季玉米上的定殖能力分别达到4.5×10⁷CFU/g和4.3×10⁷CFU/g，烟草上的定殖能力达到4.29×10⁷CFU/g。由根际定殖情况大概可以得出解磷菌Y2在马铃薯、玉米和烟草根际上有很强的定殖能力。

实施例4、固体发酵生成促生有机肥

将质量比为60％鸡粪和40％菜粕(干重)堆肥进行均匀混合；将解磷菌Y2发酵液接种入菜粕和腐熟后的鸡粪堆肥混合物中进行固体发酵，每吨固体有机物料中加入Y2促生菌液50L，固体发酵过程中每天翻堆1次，使固体发酵温度不超过60℃，发酵6‐7天后结束，促生菌含量可达到2×10⁸CFU/g肥料干重以上。

实施例5、粉状及粒状促生有机肥料的制备

将上述发酵好的促生有机肥在自然条件下将含水量风干至30％以下，包装出厂即为粉状生物肥料。再将上述发酵好的促生有机肥在不超过60℃的条件下用圆盘造粒机进行造粒，取2kg生物有机肥(干重)放入造粒机中，然后开取造粒机电源，再造粒过程中需要用喷壶加适量的水，保证肥料含水量40％‐60％之间，整个造粒过程需要90min左右，成粒后在温度不超过50℃的条件下将微生物有机肥的含水量风干至30％以下，包装出厂即为粒状生物肥料。

实施例6、粉状及粒状生物有机肥料的养分测定

将实施例5制备的生物有机肥用磨土棒磨碎，过100目筛。用元素分析仪测定全N。

硫酸-过氧化氢消煮：将部分鲜样风干后，研磨，过100目的筛，称取过筛样0.2g左右(精确到0.0001g)至消煮管底部。设空白对照，3个重复，消煮管不加样品，其余步骤一样。每个处理3个重复。每个消煮管内加8mL的浓硫酸和3mL的过氧化氢，混匀，瓶口放置一个小弯颈漏斗，放置过夜。次日，消煮管放置在电驴上加热至冒烟，加一滴管的过氧化氢，混匀，继续加热，15min后，再加一滴管的过氧化氢，重复滴加过氧化氢直至消煮管内溶液由浑浊变澄清。冷却样品后，蒸馏水冲洗消煮管瓶口上的小弯颈漏斗，并定容，摇匀。将消煮管内液体过滤到白色塑料瓶中。

全磷的测定：

(1)准溶液系列的制备：吸取磷标准溶液0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，15.0mL分别置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至30mL，加2滴2，4‐(或2，6‐)二硝基酚指示剂溶液，用氢氧化钠溶液和硫酸溶液调节溶液刚呈微黄色，加5mL钒钼酸铵试剂，摇匀，用水定容。此溶液为1mL含磷(P)0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，15.0μg的标准溶液系列。在室温下放置20min后，在分光光度计波长440nm处用1cm光径比色皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度。根据磷浓度和吸光度绘制标准曲线或求出直线回归方程。

(2)试样溶液制备:用5mL移液枪吸取10mL消煮液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至30mL左右，与标准溶液同条件下显色、读取吸光度。

全钾的测定：

标准溶液系列的制备：吸取钾标准溶液0，2.50，5.00，7.50，7.5，10.00ml分别置于5个50mL容量瓶中，用水定容，此溶液为1mL含钾(K)0，5.00，10.00，15.00，20.00μg的标准溶液系列。将过滤的消煮液用K‐Na火焰光度计测定。

所得促生生物有机肥料中Y2活菌数≥1×10⁸CFU/g(肥料干重)，全氮含量为2.5‐3.5％，总氮磷钾养分为6‐8％、有机质含量≥40％。

实施例7、粉状及粒状促生生物有机肥料的促生盆栽试验

粉状及粒状促生生物有机肥料的促生盆栽试验在江苏中宜生物肥料工程中心温室里进行，供试作物：玉米品种为鲁单981。共设三个处理：1)添加腐熟鸡粪和菜粕研制的有机肥(有机肥)；2)添加腐熟鸡粪、菜粕及Y2研制的粉状生物有机肥(Y2f)；3)添加腐熟鸡粪、菜粕及Y2研制的粒状生物有机肥(Y2z，制备方法见实施例5)。盆栽试验采用1.5kg的盆钵，每个处理8个重复，、肥料添加量为每盆15g。，常规管理。种植45d左右时分别测定其株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重、地上部干重、地下部鲜重及干重等指标。

玉米促生效果如图8、生物量情况如表6所示，移苗后45天，添加腐熟鸡粪和菜粕研制的粉状生物有机肥(Y2f)和添加腐熟鸡粪和菜粕研制的粒状生物有机肥(Y2z)处理的玉米生长过程中的各项指标均与添加腐熟鸡粪和菜粕研制的有机肥(有机肥)处理的各项指标之间差异显著(p<0.05)。与有机肥处理相比，添加腐熟鸡粪和菜粕研制的粉状生物有机肥(Y2f)的处理在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、和地下部干重方面，分别增加了2.81％、4.04％、0.45％、0.54％和0.78％；添加腐熟鸡粪和菜粕研制的粒状生物有机肥(Y2z)的处理在株高、茎粗、地上部鲜重和地下部鲜重方面，分别增加了3.42％、4.61％、0.33％和0.22％。说明功能菌Y2很好的发挥了解磷促生的功能，且生物有机肥对玉米具有很好的促生效果。

表6、生物有机肥促生盆栽试验生物量情况

Claims (9)

1.一株假单胞菌属细菌(Pseudomonassp.)Y2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCNO.10242。

2.权利要求1所述的假单胞菌属细菌Y2在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中的应用。

3.权利要求1所述的假单胞菌属细菌Y2在制备溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长的生物有机肥中的应用。

4.由权利要求1所述的假单胞菌属细菌Y2制备的解磷促生生物有机肥。

5.一种制备权利要求4所述的促生生物有机肥的生产方法，其特征在于：将质量比40％菜粕(干重)和60％的腐熟鸡粪(干重)堆肥进行均匀混合，将假单胞菌属细菌Y2发酵液接入上述混合物中进行固体发酵，每吨混合物中加入Y2菌株发酵液50L，固体发酵过程中每天翻堆1次，使固体发酵温度不超过50℃，发酵5‐7天后结束，Y2菌株含量可达到1×10⁸CFU/g(肥料干重)以上；将上述发酵好的生物有机肥在自然条件下将含水量风干至30％以下，得为粉状生物肥料；或者最后在温度不超过60℃的条件下将上述发酵好的生物有机肥用造粒机进行造粒，造粒结束后进行适当风干，让肥料含水量降至25～32％，得粒状生物有机肥料。

6.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于所述的Y2发酵液通过以下方法制备：将保藏号为CGMCCNO10242的假单胞菌Y2接种到LB培养液中，进行液体发酵生产，发酵生产的条件为：pH值自然，发酵温度范围30～35℃，搅拌速度为170～200转/分钟，发酵时间为40h，使发酵液中含菌量≥1×10¹⁰个/mL。

7.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于所用腐熟后的鸡粪堆肥其发芽指数为98％以上，有机质质量比含量≥45％，有机氮质量比含量为2‐3％，含水量质量比为25‐30％。

8.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于权利要求5所述促生生物有机肥料中Y2活菌数≥1×10⁸CFU/g(肥料干重)，全氮含量为2.5‐3.5％，总氮磷钾养分为6‐8％、有机质含量≥40％。

9.权利要求4所述的生物有机肥在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中的应用。