CN105102629A - 用于检测病原体的快速方法 - Google Patents

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Abstract

本说明书公开了检测感兴趣的病原体的方法和在进行这些方法中有用的组分，包括预富集介质、和富集介质和检测溶液。

Description

用于检测病原体的快速方法
本专利申请依据35U.S.C.§119(e)要求2014年1月14日提交的美国临时专利申请61/927,401的优先权，并依据35U.S.C.§119(a)要求2013年1月22日提交的西班牙专利申请ES201330064的优先权，其的每个在此通过引用以其整体并入。
病原体可在生产、加工和制备期间污染食物或食物动物。同样，病原体可污染水源或从这样污染的水中捕获的海鲜。人体暴露于病原体可引起疾病，最经常肠胃炎，但还可能更严重的疾病诸如沙门氏菌病和甲型肝炎。暴露于病原体可通过直接接触或摄入污染的食物或水发生，或基于交叉污染间接发生。尽管美国具有世界上最安全的食品供应之一，每年仍存在数以百万计的食物传染疾病病例。
早期和快速检测病原体污染对预防疾病的大规模爆发并确保公众全体健康是重要的。在过去的25年中，增加灵敏度和特异性以及减少进行这些测定牵涉的时间的病原体测定已由应用微生物和微生物分析方面的专家开发。虽然对于这些所谓的快速测定不存在普遍接受的定义，这些方法比传统方法更简单快速进行，或更容易实现，或更灵敏和特异。尽管名称，用于病原体检测的目前可用的快速测定仍需要数天才能完成测定并确定食物或水供应是否被病原体污染。
与减少进行病原体检测测定需要的时间相关的主要障碍是，一方面检测测定的灵敏度、特异性及下限之间的平衡，和具有足够的病原体存在以检测其高于污染微生物和背景噪音的存在。
本说明书公开了用于检测病原体的快速方法，该方法提供了检测的高灵敏度和特异性、较低的下限，但可比目前可用的方法更快速进行。
概述
本说明书的方面公开了检测样品中病原体的方法。在这些方面，本文公开的方法包括以下步骤：a)在预富集中孵育样品，所述预富集包含低生长营养组分、生长抑制剂、和具有抑菌或杀菌作用的表面活性剂，其中所述孵育发生在特定温度下持续特定的时长；b)在富集介质中孵育来自步骤(a)的预富集介质的等分试样，所述富集介质包含高生长营养组分和生长促进剂，其中所述孵育发生在特定温度下持续特定时长；和c)通过分析来自步骤(b)的富集介质的等分试样来检测病原体的存在或不存在。
本说明书中的其他方面公开了病原体分析试剂盒。在这些方面，病原体分析试剂盒，包含预富集介质和富集介质。在其他方面，病原体分析试剂盒还可包含检测溶液。在还其他方面，病原体分析试剂盒还可包含免疫纯化试剂体系。在还其他方面，病原体分析试剂盒还可包含提供对如何使用该试剂盒的说明的标签或插页。
附图简述
图1示出了细菌菌群的不同密度和电流-时间曲线(chronoamperometric)获得的信号之间的比例的图。
图2示出了记录的电化学信号和特定细菌负荷增殖中的进展之间的比例的图。
图3示出了记录的电化学信号和在pH5.7下特定细菌负荷增殖中的进展之间的比例的图。使细菌在37℃下与1mMpAPP，pH5.7接触30分钟。CAE＝0.2Vt＝60sPalmSensPS06333。
图4示出了记录的电化学信号和在pH7.0下特定细菌负荷增殖中的进展之间的比例的图。使细菌在37℃下与1mMpAPP，pH7.0接触30分钟。CAE＝0.2Vt＝60sPalmSensPS06333。
图5示出了记录的电化学信号和在pH9.8下特定细菌负荷增殖中的进展之间的比例的图。使细菌在37℃下与1mMpAPP，pH9.8接触30分钟。CAE＝0.2Vt＝60sPalmSensPS06333。
说明
本说明书公开了检测样品中病原体的方法。所述方法包括使用选择性预生长和生长介质的预富集步骤和富集步骤。这些步骤，连同特定时间和温度条件的组合，逐渐增加病原体的群体，以及有效减少不需要的生物体的群体和/或干扰病原体的检测的其他背景噪音。病原体群体的选择性增加以及有效除去不需要的生物体和/或其他背景噪音允许比目前可用的方法更灵敏和精确地检测病原体。另外，本文公开的方法允许更快速检测病原体，因为它可在约8小时至约30小时内完成；现有的病原体检测方法需要约2天至约5天完成。
本说明书的方面部分地公开了病原体。病原体是指可在其宿主内导致疾病的微生物。病原体的非限制性实例包括朊病毒、病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫和寄生虫。
朊病毒包含错误折叠的形式的蛋白。朊病毒通过劫持活细胞的功能并通过诱导现有的正确折叠的蛋白转化为疾病相关的朊病毒形式来繁殖错误折叠的蛋白状态进行复制。这样，朊病毒充当模板以指导更多的蛋白错误折叠为朊病毒形式。然后这些新形成的朊病毒可继续转化更多蛋白本身，这触发产生大量朊病毒形式的连锁反应。朊病毒通过在中枢神经系统内细胞外聚集以形成破坏正常组织结构的称为淀粉样的斑块来引起神经退行性疾病。朊病毒造成各种哺乳动物中的可传染的海绵状脑病，包括牛中的牛科海绵状脑病(BSE，还称为“疯牛病”)，绵羊和山羊中的痒病，和鹿中的慢性消耗性疾病。在人中，朊病毒引起克雅氏紊乱、格-斯-施综合征(Gerstmann--Scheinkersyndrome)、致死性家族失眠症，和库鲁病。
病毒是仅在其他生物体的活细胞内复制的小致病原(infectiousagent)，通常长度范围在20-300纳米之间。病毒颗粒(称为病毒体)由以下的两个或三个部分组成：ⅰ)由携带遗传信息的DNA或RNA的长分子制成的遗传物质；ⅱ)保护这些基因的蛋白外壳；和在一些情况下ⅲ)当它们在细胞外时围绕蛋白外壳的脂质包膜。病毒的形状范围从简单的螺旋形和二十面体形式至更复杂的结构。平均病毒是平均细菌的约一百分之一的大小。病毒可感染所有类型的生命形式，从动物和植物至细菌和古细菌。病原性病毒的非限制性实例属于以下的科：腺病毒科(Adenoviridae)、小RNA病毒科(Picornaviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、乳多空病毒科(Papovaviridae)、多瘤病毒科(Polyomavirus)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、和披膜病毒科(Togaviridae)。
细菌是单细胞原核微生物，特征为缺乏膜结合的核和膜结合的细胞器并可具有细胞壁(革兰氏阳性)或缺乏细胞壁(革兰氏阴性)。形态学上，细菌可分为棒状(杆菌)、圆形(球菌)、螺旋(螺旋菌)、和不完全螺旋形(弧菌)。病原细菌的非限制性实施例属于以下的属：芽孢杆菌属(Bacillus)、博德特氏菌属(Bordetella)、疏螺旋体属(Borrelia)、布鲁氏菌属(Brucella)、弯曲菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、嗜衣原体属(Chlamydophila)、梭菌属(Clostridium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、肠杆菌属(Enterobacter)、肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、弗朗西斯氏菌属(Francisella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、螺杆菌属(Helicobacter)、军团菌属(Legionella)、钩端螺旋体属(Leptospira)、李斯特菌属(Listeria)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、支原体属(Mycoplasma)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、立克次氏体属(Rickettsia)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shigella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、密螺旋体属(Treponema)、弧菌属(Vibrio)、和耶尔森氏菌属(Yersinia)。具体病原性细菌物种的非限制性实例包括炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)的菌株、百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)的菌株、伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)的菌株、流产布鲁氏菌(Brucellaabortus)的菌株、犬布鲁氏菌(Brucellacanis)的菌株的菌株、羊布鲁氏菌(Brucellamelitensis)的菌株、猪布鲁氏菌(Brucellasuis)的菌株、空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)的菌株、肺炎衣原体(Chlamydiapneumonia)的菌株、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)的菌株、鹦鹉热衣原体(Chlamydophilapsittaci)的菌株、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)的菌株、艰难梭菌(Clostridiumdifficile)的菌株、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)的菌株、破伤风梭菌(Clostridiumtetani)的菌株、白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheria)的菌株、阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)的菌株、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)的菌株、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的菌株、大肠杆菌(Escherichiacoli)的菌株、土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)的菌株、流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza)的菌株、幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)的菌株、嗜肺军团菌(Legionellapneumophila)的菌株、问号钩端螺旋体(Leptospirainterrogans)的菌株、单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的菌株、麻风分枝杆菌(Mycobacteriumleprae)的菌株、结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的菌株、溃疡分枝杆菌(Mycobacteriumulcerans)的菌株、肺炎支原体(Mycoplasmapneumonia)的菌株、淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)的菌株、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitides)的菌株、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的菌株、立克次氏体立克次氏体(Rickettsiarickettsia)的菌株、伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)的菌株、索氏志贺氏菌(Shigellasonnei)的菌株、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的菌株、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的菌株、腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticus)的菌株、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)的菌株、肺炎链球菌(Streptococcuspneumonia)的菌株、酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)的菌株、苍白密螺旋体(Treponemapallidum)的菌株、霍乱弧菌(Vibriocholera)的菌株、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersiniaenterocolitica)的菌株、和鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)的菌株。
真菌是真核微生物，特征为膜结合的核和缺乏叶绿素的细胞器，具有由几丁质组成的细胞壁并通过孢子进行繁殖。病原性真菌的非限制性实例属于以下的属：曲霉菌属(Aspergillus)、念珠菌属(Canidida)、隐球菌属(Cryptococcus)、组织胞浆菌属(Histoplasma)、肺囊虫属(Pneumocystis)、和葡萄穗霉属(Stachybotrys)。具体病原性真菌物种的非限制性实例包括棒曲霉(Aspergillusclavatus)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、黄曲霉(Aspergillusflavus)、白色念珠菌(Canidiaalbicans)、白色隐球菌(Cryptococcusalbidus)、格特隐球菌(Cryptococcusgattii)、罗伦隐球酵母(Cryptococcuslaurentii)、新生隐球菌(Cryptococcusneoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulatum)、耶氏肺囊虫(Pneumocystisjirovecii)、卡氏肺囊虫(Pneumocystiscarinii)、和纸状葡萄穗霉(Stachybotryschartarum)的菌株。
原生动物是真核单细胞微生物，特征为膜结合的核和缺乏叶绿素和细胞壁的细胞器和是能动的。原生动物通常范围从10至52微米，但可成长为大到1mm。病原性原生动物的非限制性实例属于以下的属：棘阿米巴属(Acanthamoeba)、Balamuthia、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、双核阿米巴属(Dientamoeba)、内蜒属(Endolimax)、内阿米巴属(Entamoeba)、贾第虫属(Giardia)、嗜碘阿米巴属(Iodamoeba)、利什曼原虫属(Leishmania)、耐格里属(Naegleria)、疟原虫属(Plasmodium)、Sappinia、弓形虫属(Toxoplasma)、毛滴虫属(Trichomonas)、和锥虫属(Trypanosoma)。具体病原性原生动物物种的非限制性实例包括棘阿米巴属物种、巴氏阿米巴原虫(Balamuthiamandrillaris)、犬隐孢子虫(Cryptosporidiumcanis)、猫隐孢子虫(Cryptosporidiumfelis)、人隐孢子虫(Cryptosporidiumhominis)、火鸡隐孢子虫(Cryptosporidiummeleagridis)、鼠隐孢子虫(Cryptosporidiummuris)、微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、脆弱双核阿米巴(Dientamoebafragilis)、微小内蜒阿米巴(Endolimaxnana)、迪斯帕内阿米巴(Entamoebadispar)、哈氏内阿米巴(Entamoebahartmanni)、溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)、结肠内阿米巴(Entamoebacoli)、莫氏内阿米巴(Entamoebamoshkovskii)、蓝氏贾第虫(Giardialamblia)、布氏嗜碘阿米巴(Iodamoebabutschlii)、埃塞俄比亚利什曼原虫(Leishmaniaaethiopica)、巴西利什曼原虫(Leishmaniabraziliensis)、恰氏利什曼原虫(Leishmaniachagasi)、杜氏利什曼原虫(Leishmaniadonovani)、婴儿利什曼原虫(Leishmaniainfantum)、硕大利什曼原虫(Leishmaniamajor)、墨西哥利什曼原虫(Leishmaniamexicana)、热带利什曼原虫(Leishmaniatropica)、福氏耐格里阿米巴(Naegleriafowleri)、恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、诺氏疟原虫(Plasmodiumknowlesi)、三日疟原虫(Plasmodiummalariae)、卵形疟原虫(Plasmodiumovale)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、Sappiniadiploidea、刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)、阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)和克氏锥虫(Trypanosomacruzi)的菌株。
本说明书的方面部分地公开了样品。各种样品在本文公开的方法中是有用的。样品是指包含或可能包含病原体的生物物质。样品包括但不限于，纯化的病原体、部分纯化的病原体、细胞、粗制的细胞裂解物、部分纯化的细胞裂解物、粗制的培养介质、部分纯化的培养介质、生食品、部分熟食品、熟食品、经加工的食品；乳品食料、饮料、动物饲料、粪便样品、植物样品、土壤样品、水样品、池塘沉积物、人组织样品、粗制的牲畜组织样本、经加工的牲畜组织样本，诸如，例如皮革。
本说明书的方面部分地公开了，预富集步骤。预富集步骤包括在限定的时间和在限定的温度下在预富集介质中孵育本文公开的样品。还称为预富集培养介质的预富集介质是为维持病原体的低生长提供必要的营养物质的缓冲的培养介质。另外，预富集介质还可包含减少或抑制污染细菌或其他微生物的生长的组分。预富集介质包含低生长营养组分、表面活性剂、和任选地生长抑制剂和/或生长增强剂。
预富集介质通常包含用作蛋白、氨基酸和氮的来源的低生长营养组分。单个低生长营养组分可构成本文公开的预富集介质，或多个低生长营养组分可构成本文公开的预富集介质。
低生长营养组分的非限制性实例是蛋白胨，诸如，例如，来自动物来源的蛋白胨和来自植物来源的蛋白胨。来自动物来源的蛋白胨包括，但不限于，酸性酪蛋白胨、细菌蛋白胨、牛肉提取物粉末、酪蛋白胨、酪蛋白cc胨、明胶蛋白胨、肉蛋白胨、多聚蛋白胨月示蛋白胨，和月示蛋白胨3号。来自植物来源的蛋白胨包括，但不限于，麦芽提取物、大豆蛋白胨和酵母提取物。
可使用任何浓度的低生长营养组分，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，约1g/L、约2g/L、约3g/L、约4g/L、约5g/L、约6g/L、约7g/L、约8g/L、约9g/L、约10g/L、约11g/L、约12g/L、约13g/L、约14g/L，或约15g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，至少1g/L、至少2g/L、至少3g/L、至少4g/L、至少5g/L、至少6g/L、至少7g/L、至少8g/L、至少9g/L、至少10g/L、至少11g/L、至少12g/L、至少13g/L、至少14g/L，或至少15g/L。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，至多1g/L、至多2g/L、至多3g/L、至多4g/L、至多5g/L、至多6g/L、至多7g/L、至多8g/L、至多9g/L、至多10g/L、至多11g/L、至多12g/L、至多13g/L、至多14g/L，或至多15g/L。
在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，介于，约1g/L至2g/L、约1g/L至3g/L、约1g/L至4g/L、约1g/L至5g/L、约1g/L至6g/L、约1g/L至7g/L、约1g/L至8g/L、约1g/L至9g/L、约1g/L至10g/L、约1g/L至11g/L、约1g/L至12g/L、约1g/L至13g/L、约1g/L至14g/L、约1g/L至15g/L、约2g/L至3g/L、约2g/L至4g/L、约2g/L至5g/L、约2g/L至6g/L、约2g/L至7g/L、约2g/L至8g/L、约2g/L至9g/L、约2g/L至10g/L、约2g/L至11g/L、约2g/L至12g/L、约2g/L至13g/L、约2g/L至14g/L、约2g/L至15g/L、约3g/L至4g/L、约3g/L至5g/L、约3g/L至6g/L、约3g/L至7g/L、约3g/L至8g/L、约3g/L至9g/L、约3g/L至10g/L、约3g/L至11g/L、约3g/L至12g/L、约3g/L至13g/L、约3g/L至14g/L、约3g/L至15g/L、约4g/L至5g/L、约4g/L至6g/L、约4g/L至7g/L、约4g/L至8g/L、约4g/L至9g/L、约4g/L至10g/L、约4g/L至11g/L、约4g/L至12g/L、约4g/L至13g/L、约4g/L至14g/L、约4g/L至15g/L、约5g/L至6g/L、约5g/L至7g/L、约5g/L至8g/L、约5g/L至9g/L、约5g/L至10g/L、约5g/L至11g/L、约5g/L至12g/L、约5g/L至13g/L、约5g/L至14g/L、约5g/L至15g/L、约6g/L至7g/L、约6g/L至8g/L、约6g/L至9g/L、约6g/L至10g/L、约6g/L至11g/L、约6g/L至12g/L、约6g/L至13g/L、约6g/L至14g/L、约6g/L至15g/L、约7g/L至8g/L、约7g/L至9g/L、约7g/L至10g/L、约7g/L至11g/L、约7g/L至12g/L、约7g/L至13g/L、约7g/L至14g/L、约7g/L至15g/L、约8g/L至9g/L、约8g/L至10g/L、约8g/L至11g/L、约8g/L至12g/L、约8g/L至13g/L、约8g/L至14g/L、约8g/L至15g/L、约9g/L至10g/L、约9g/L至11g/L、约9g/L至12g/L、约9g/L至13g/L、约9g/L至14g/L、约9g/L至15g/L、约10g/L至11g/L、约10g/L至12g/L、约10g/L至13g/L、约10g/L至14g/L、约10g/L至15g/L、约11g/L至12g/L、约11g/L至13g/L、约11g/L至14g/L、约11g/L至15g/L、约12g/L至13g/L、约12g/L至14g/L、约12g/L至15g/L、约13g/L至14g/L、约13g/L至15g/L、或约14g/L至15g/L。
预富集介质还可包含表面活性剂。表面活性剂是降低液体的表面张力，允许更容易扩散，并降低两种液体之间，或液体和固体之间的界面张力的化合物。单个表面活性剂可构成本文公开的预富集介质，或多个表面活性剂可构成本文公开的预富集介质。本文公开的表面活性剂提供了延缓或防止本文公开的样品中包含的不需要的生物体的生长的抑菌和杀菌作用。作为非限制性实例，面活性剂可通过破坏表面上的吸附作用机制、干扰渗透平衡、防止营养物的摄入、变性蛋白、抑制酶活性，和/或损坏细胞膜，表延缓或防止不需要的细菌细胞的生长。
有用的表面活性剂，包括，但不限于，离子表面活性剂、两性离子(两性)表面活性剂、非离子表面活性剂，或其中的任何组合。在本文公开的方法中使用的表面活性剂可由本领域技术人员适当地改变，并通常部分地取决于被使用的特定预富集介质、被检测的病原体、和/或被除去的特定不需要的细菌。离子表面活性剂包括基于永久(硫酸盐、磺酸盐、磷酸盐)或pH依赖性(羧酸盐)的阴离子的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂包括，但不限于，烷基硫酸盐，如月桂基硫酸铵和月桂基硫酸钠(SDS)；烷基醚硫酸盐，如月桂醇聚醚硫酸钠和肉豆蔻醇聚醚硫酸钠(sodiummyrethsulfate)；多库酯(docusates)，如二辛基磺基琥珀酸钠；十四烷基十二烷基硫酸钠；7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠；十八烷基硫酸盐；磺酸盐含氟表面活性剂，如全氟辛烷磺酸盐(PFOS)和全氟丁烷磺酸盐；烷基苯磺酸盐；烷基芳基醚磷酸盐；烷基醚磷酸盐；烷基羧酸盐，如脂肪酸盐和硬脂酸钠；月桂酰肌氨酸钠；和羧酸盐含氟表面活性剂，如全氟壬酸盐和全氟辛酸盐。
离子表面活性剂还包含基于永久或pH依赖性阳离子的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂包括，但不限于，烷基三甲基铵盐，如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)；西吡氯铵(CPC)；聚乙氧基牛脂胺(POEA)；苯扎氯铵(BAC)；苄索氯铵(BZT)；5-溴代-5-硝基-1,3-二噁烷；双十八烷基二甲基氯化铵(dimethyldioctadecylammoniumchloride)；和双十八烷基二甲基溴化铵(dioctadecyldimethylammoniumbromide)(DODAB)，以及pH依赖性伯、仲或叔胺样表面活性剂，其中伯胺在pH大于10下变得带正电荷，或仲胺在pH小于4下变得带电荷，如奥替尼啶二盐酸盐(octenidinedihydrochloride)。
两性离子表面活性剂是基于伯、仲或叔胺或季铵阳离子与磺酸盐、羧酸盐、或磷酸盐。两性离子表面活性剂包括，但不限于，3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基氨基]-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)；磺基甜菜碱(sultaines)，如椰油酰氨基丙基羟基磺基甜菜碱(cocamidopropylhydroxysultaine)；甜菜碱，如椰油酰氨基丙基甜菜碱(cocamidopropylbetaine)；或卵磷脂。
非离子表面活性剂较少变性，并因此对溶解膜蛋白和脂质，同时保留蛋白-蛋白相互作用是有用的。表面活性剂的非限制性实例包括聚氧化乙烯二醇山梨糖醇酐烷基酯，如聚山梨醇酯20山梨醇单油酸酯聚山梨醇酯40山梨醇单油酸酯聚山梨醇酯60山梨醇单油酸酯聚山梨醇酯61山梨醇单油酸酯聚山梨醇酯65山梨醇单油酸酯聚山梨醇酯80山梨醇单油酸酯和聚山梨醇酯81山梨醇单油酸酯泊洛沙姆(聚乙烯-聚丙烯共聚物)，如泊洛沙姆124泊洛沙姆181泊洛沙姆182泊洛沙姆184泊洛沙姆188泊洛沙姆237泊洛沙姆338和泊洛沙姆407烷基酚聚乙二醇醚；聚乙二醇烷基芳基醚；聚氧化乙烯二醇烷基醚，如八聚乙二醇单十二烷基醚(octaethyleneglycolmonododecylether)、五甘醇单十二烷基醚(pentaethyleneglycolmonododecylether)，和2-十二烷氧基乙醇聚氧化乙烯二醇辛基酚醚，如聚氧化乙烯(4-5)对叔辛基苯酚和聚氧乙烯辛基苯基醚壬基酚聚氧乙烯醚，如壬苯醇醚-4(TERGITOLTMNP-4)、壬苯醇醚-6(TERGITOLTMNP-6)、壬苯醇醚-7(TERGITOLTMNP-7)、壬苯醇醚-8(TERGITOLTMNP-8)、壬苯醇醚-9(TERGITOLTMNP-9)、壬苯醇醚-10(TERGITOLTMNP-10)、壬苯醇醚-11(TERGITOLTMNP-11)、壬苯醇醚-12(TERGITOLTMNP-12)、壬苯醇醚-13(TERGITOLTMNP-13)、壬苯醇醚-15(TERGITOLTMNP-15)、壬苯醇醚-30(TERGITOLTMNP-30)、壬苯醇醚-40(TERGITOLTMNP-40)、壬苯醇醚-50(TERGITOLTMNP-50)、壬苯醇醚-55(TERGITOLTMNP-55)、和壬苯醇醚-70(TERGITOLTMNP-70)；苯氧基聚乙氧基乙醇(phenoxypolyethoxylethanol)，如壬基苯氧基聚乙氧基乙醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇；葡萄糖苷烷基醚，如辛基吡喃葡萄糖苷；麦芽糖苷烷基醚，如十二烷基吡喃麦芽糖苷；硫代葡萄糖苷烷基醚，如庚基硫代吡喃葡萄糖苷(heptylthioglucopyranoside)；洋地黄皂苷；丙三醇烷基酯，如月桂酸甘油酯；烷基芳基聚醚硫酸盐；醇磺酸盐；山梨糖醇烷基酯；椰油酰胺乙醇胺，如椰油酰胺单乙醇胺和椰油酰胺二乙醇胺；蔗糖单月桂酸酯；十二烷基二甲胺氧化物，和胆酸钠。在本文公开的方法中有用的表面活性剂的其他非限制性实例，可参见，例如，Winslow，等人，MethodsandCompositionsforSimultaneouslyIsolatingHemoglobinfromRedBloodCellsandInactivatingViruses,U.S.2008/0138790；PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems(HowardC.Ansel等人，编著，LippincottWilliams&WilkinsPublishers，第7版1999)；Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(AlfonsoR.Gennaro编著，Lippincott,Williams&Wilkins，第20版，2000)；Goodman&Gilman'sThePharmacologicalBasisofTherapeutics(JoelG.Hardman等人，编著，McGraw-HillProfessional，第10版，2001)；和HandbookofPharmaceuticalExcipients(RaymondC.Rowe等人，APhAPublications，第4版2003)，其的每个在此通过引用以其整体并入。
可使用任何浓度的表面活性剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如约0.01％(v/v)、约0.05％(v/v)、约0.075％(v/v)、约0.1％(v/v)、约0.2％(v/v)、约0.3％(v/v)、约0.4％(v/v)、约0.5％(v/v)、约0.6％(v/v)、约0.7％(v/v)、约0.8％(v/v)、约0.9％(v/v)、约1.0％(v/v)、约2.0％(v/v)、约3.0％(v/v)、约4.0％(v/v)、约5.0％(v/v)、约6.0％(v/v)、约7.0％(v/v)、约8.0％(v/v)、约9.0％(v/v)、或约10.0％(v/v)。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至少0.01％(v/v)、至少0.05％(v/v)、至少0.075％(v/v)、至少0.1％(v/v)、至少0.25％(v/v)、至少0.5％(v/v)、至少0.75％(v/v)、至少1.0％(v/v)、至少2.5％(v/v)、至少5.0％(v/v)、至少7.5％(v/v)、或至少10.0％(v/v)。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至多0.01％(v/v)、至多0.05％(v/v)、至多0.075％(v/v)、至多0.1％(v/v)、至多0.25％(v/v)、至多0.5％(v/v)、至多0.75％(v/v)、至多1.0％(v/v)、至多2.5％(v/v)、至多5.0％(v/v)、至多7.5％(v/v)、或至多10.0％(v/v)。
在该实施方案的仍其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.01％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.05％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.1％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.2％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约6.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约7.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约8.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约9.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约10.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约2.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约3.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约4.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约5.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约6.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约7.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约8.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约9.0％(v/v)、或约1.0％(v/v)至约10.0％(v/v)。
在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，约0.001g/L、约0.002g/L、约0.003g/L、约0.004g/L、约0.005g/L、约0.006g/L、约0.007g/L、约0.008g/L、约0.009g/L、约0.01g/L、约0.02g/L、约0.03g/L、约0.04g/L、约0.05g/L、约0.06g/L、约0.07g/L、约0.08g/L、约0.09g/L，或约0.1g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至少0.001g/L、至少0.002g/L、至少0.003g/L、至少0.004g/L、至少0.005g/L、至少0.006g/L、至少0.007g/L、至少0.008g/L、至少0.009g/L、至少0.01g/L、至少0.02g/L、至少0.03g/L、至少0.04g/L、至少0.05g/L、至少0.06g/L、至少0.07g/L、至少0.08g/L、至少0.09g/L，或至少0.1g/L。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至多0.001g/L、至多0.002g/L、至多0.003g/L、至多0.004g/L、至多0.005g/L、至多0.006g/L、至多0.007g/L、至多0.008g/L、至多0.009g/L、至多0.01g/L、至多0.02g/L、至多0.03g/L、至多0.04g/L、至多0.05g/L、至多0.06g/L、至多0.07g/L、至多0.08g/L、至多0.09g/L、或至多0.1g/L。
在该实施方案的仍其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，约0.001g/L至约0.005g/L、约0.001g/L至约0.006g/L、约0.001g/L至约0.007g/L、约0.001g/L至约0.008g/L、约0.001g/L至约0.009g/L、约0.001g/L至约0.01g/L、约0.001g/L至约0.02g/L、约0.001g/L至约0.03g/L、约0.001g/L至约0.04g/L、约0.001g/L至约0.05g/L、约0.001g/L至约0.06g/L、约0.001g/L至约0.07g/L、约0.001g/L至约0.08g/L、约0.001g/L至约0.09g/L、约0.001g/L至约0.1g/L、约0.005g/L至约0.01g/L、约0.005g/L至约0.02g/L、约0.005g/L至约0.03g/L、约0.005g/L至约0.04g/L、约0.005g/L至约0.05g/L、约0.005g/L至约0.06g/L、约0.005g/L至约0.07g/L、约0.005g/L至约0.08g/L、约0.005g/L至约0.09g/L、约0.005g/L至约0.1g/L、约0.01g/L至约0.05g/L、约0.01g/L至约0.06g/L、约0.01g/L至约0.07g/L、约0.01g/L至约0.08g/L、约0.01g/L至约0.09g/L、约0.01g/L至约0.1g/L、或约0.05g/L至约0.1g/L。
预富集介质可任选地包含生长抑制剂。生长抑制剂通常包含减少或抑制污染细菌或其他污染微生物的生长的组分。另外，生长抑制剂可不影响感兴趣的病原体的生长或以比污染细菌或其他污染微生物较小的程度影响感兴趣的病原体。单个生长抑制剂可构成本文公开的预富集介质，或多个生长抑制剂可构成本文公开的预富集介质。生长抑制剂的非限制性实例包括抗微生物化合物、碘、镁和三芳基甲烷染料。
抗微生物化合物是拮抗微生物的生长的化合物。这些化合物可被分成杀死微生物的杀菌剂和减慢或停止微生物生长的抑菌剂的两大类。抗微生物化合物通常基于其作用机理、化学结构、或活性谱来分类。大多数靶向细菌功能或生长过程。靶向细菌细胞壁(青霉素和头孢菌素)或细胞膜(多粘菌素)，或干扰必需的细菌酶(利福霉素、闰年霉素(lipiarmycins)、喹诺酮类、和磺胺类)的那些具有杀菌活性。靶向蛋白合成(大环内酯类、林可酰胺类和四环素类)的那些通常是抑菌的(除了杀菌的氨基糖苷类)。进一步的分类是基于他们的靶特异性。“窄谱”抗菌抗生素靶向特定类型的细菌，诸如革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌，而广谱抗生素影响宽范围的细菌。抗微生物化合物包括但不限于，氨基糖苷类、安沙霉素、碳头孢烯、碳青霉烯类、头孢菌素、环脂肽、糖肽、甘氨酰环素、林可酰胺、闰年霉素、脂肽、大环内酯类、单酰胺菌素、硝基呋喃、噁唑烷酮、青霉素、喹诺酮类、磺酰胺、和四环素。
碘与氨基酸如酪氨酸或组氨酸通过使具有这些氨基酸的蛋白暴露于细胞外环境而变性的简单的化学反应进行结合。
已知镁具有抗菌活性。在该实施方案的方面，镁是氯化镁和硫酸镁。
三芳基甲烷染料是一组包含产生强的、pH依赖性颜色的三苯甲烷骨架的合成的有机化合物。三芳基甲烷染料可根据芳基基团上取代基的性质被归类为家族。甲基紫染料具有在两个芳基基团的对位处的二甲氨基基团，并包括但不限于，甲基紫2B、甲基紫6B、和甲基紫10B。品红染料在每个芳基基团的对位处具有胺(NH2或NHMe)官能团，并包括，但不限于，副品红、品红、新品红、碱性品红紫和酸性品红。酚染料在每个芳基基团的对位处具有羟基，并包括但不限于，酚红、氯酚红、和甲酚红。孔雀石绿染料与甲基紫染料相关，不同的是它们包含一个苯基(C6H5)基团，并包括，但不限于，孔雀绿和亮绿。三芳基甲烷染料包括，但不限于，铝试灵、苯胺蓝WS、金精、金精三羧酸、亮蓝FCF、亮绿、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、溴焦酚红、溴麝香草酚蓝、磺溴酞钠(bromsulphthalein)、氯酚红、考马斯亮蓝、甲酚红、结晶紫、结晶紫内酯、乙基绿、固绿FCF、荧烷、品红、酸性品红、龙胆、格林S(greenS)、淡绿SF淡黄、孔雀石绿、甲基蓝、甲基紫、新品红、副品红、专利蓝V、酚红、酚酞、孟加拉红、百里酚酞、维多利亚蓝BO、水蓝色、二甲苯蓝和二甲酚橙。
可使用任何浓度的生长抑制剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如约0.01％(v/v)、约0.05％(v/v)、约0.075％(v/v)、约0.1％(v/v)、约0.2％(v/v)、约0.3％(v/v)、约0.4％(v/v)、约0.5％(v/v)、约0.6％(v/v)、约0.7％(v/v)、约0.8％(v/v)、约0.9％(v/v)、约1.0％(v/v)、约2.0％(v/v)、约3.0％(v/v)、约4.0％(v/v)、约5.0％(v/v)、约6.0％(v/v)、约7.0％(v/v)、约8.0％(v/v)、约9.0％(v/v)、或约10.0％(v/v)。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，至少0.01％(v/v)、至少0.05％(v/v)、至少0.075％(v/v)、至少0.1％(v/v)、至少0.25％(v/v)、至少0.5％(v/v)、至少0.75％(v/v)、至少1.0％(v/v)、至少2.5％(v/v)、至少5.0％(v/v)、至少7.5％(v/v)、或至少10.0％(v/v)。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，至多0.01％(v/v)、至多0.05％(v/v)、至多0.075％(v/v)、至多0.1％(v/v)、至多0.25％(v/v)、至多0.5％(v/v)、至多0.75％(v/v)、至多1.0％(v/v)、至多2.5％(v/v)、至多5.0％(v/v)、至多7.5％(v/v)、或至多10.0％(v/v)。
在该实施方案的仍其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.01％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.05％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.1％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.2％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约6.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约7.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约8.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约9.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约10.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约2.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约3.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约4.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约5.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约6.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约7.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约8.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约9.0％(v/v)、或约1.0％(v/v)至约10.0％(v/v)。
预富集介质可任选地包含生长增强剂。生长增强剂通过减少在培养介质中的迟滞期，从而重新激活休眠的病原体来促进病原体的快速生长。
生长增强剂的非限制性实例包括铁载体(siderophore)。铁载体是充当隔绝和溶解铁的高亲和力螯合铁的化合物。这些化合物对病原体的铁获得以维持细胞呼吸和DNA合成是重要的。这是因为在大多数的培养环境下，游离铁的量(约1×10-9M)低于大多数细菌病原体用于生长所需的浓度。铁载体的非限制性实例包括气杆菌素(Aerobactin)、Alcaligin、固氮菌素(Azotobactin)、嗜铁素(Bacillibactin)、去铁胺B、去铁胺E、肠菌素、铁色素(Ferrichrome)、Ferrioxiamina-B、Ferrioxiamina-E、镰孢氨酸C(FusarinineC)、分支杆菌生长素、Ornibactin、Petrobactin、Pyoverdine、绿脓杆菌螯铁蛋白(Pyochelin)、沙门菌螯铁蛋白(Salmochelin)、StaphyloferringA、弧菌素(Vibriobactin)和耶尔森杆菌素(Yersiniabactin)。
可使用任何浓度的生长增强剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，约0.01μM、约0.05μM、约0.075μM、约0.1μM、约0.2μM、约0.3μM、约0.4μM、约0.5μM、约0.6μM、约0.7μM、约0.8μM、约0.9μM、约1.0μM、约2.0μM、约3.0μM、约4.0μM、约5.0μM、约6.0μM、约7.0μM、约8.0μM、约9.0μM、或约10.0％(v/v)。在本实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，至少0.01μM、至少0.05μM、至少0.075μM、至少0.1μM、至少0.25μM、至少0.5μM、至少0.75μM、至少1.0μM、至少2.5μM、至少5.0μM、至少7.5μM、或至少10.0％(v/v)。在本实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，至多0.01μM、至多0.05μM、至多0.075μM、至多0.1μM、至多0.25μM、至多0.5μM、至多0.75μM、至多1.0μM、至多2.5μM、至多5.0μM、至多7.5μM、或至多10.0μM。
在该实施方案的仍其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05μM、约0.01％(v/v)至约0.1μM、约0.01％(v/v)至约0.5μM、约0.01％(v/v)至约1.0μM、约0.01％(v/v)至约2.0μM、约0.01％(v/v)至约3.0μM、约0.01％(v/v)至约4.0μM、约0.01％(v/v)至约5.0μM、约0.05％(v/v)至约0.1μM、约0.05％(v/v)至约0.5μM、约0.05％(v/v)至约1.0μM、约0.05％(v/v)至约2.0μM、约0.05％(v/v)至约3.0μM、约0.05％(v/v)至约4.0μM、约0.05％(v/v)至约5.0μM、约0.1％(v/v)至约0.5μM、约0.1％(v/v)至约1.0μM、约0.1％(v/v)至约2.0μM、约0.2％(v/v)至约0.5μM、约0.2％(v/v)至约1.0μM、约0.2％(v/v)至约2.0μM、约0.2％(v/v)至约3.0μM、约0.2％(v/v)至约4.0μM、约0.2％(v/v)至约5.0μM、约0.5％(v/v)至约1.0μM、约0.5％(v/v)至约2.0μM、约0.5％(v/v)至约3.0μM、约0.5％(v/v)至约4.0μM、约0.5％(v/v)至约5.0μM、约0.5％(v/v)至约6.0μM、约0.5％(v/v)至约7.0μM、约0.5％(v/v)至约8.0μM、约0.5％(v/v)至约9.0μM、约0.5％(v/v)至约10.0μM、约1.0％(v/v)至约2.0μM、约1.0％(v/v)至约3.0μM、约1.0％(v/v)至约4.0μM、约1.0％(v/v)至约5.0μM、约1.0％(v/v)至约6.0μM、约1.0％(v/v)至约7.0μM、约1.0％(v/v)至约8.0μM、约1.0％(v/v)至约9.0μM、或约1.0％(v/v)至约10.0μM)。
在一个实施方案中，预富集介质包含2g/L至12g/L的蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的生长抑制剂和0.05％至5％(v/v)的表面活性剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的抗微生物化合物和0.05％至5％(v/v)的表面活性剂。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的抗微生物化合物和0.05％至5％(v/v)的非离子表面活性剂。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的抗微生物化合物和0.05％至5％(v/v)的离子表面活性剂。
在该实施方案的方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的三芳基甲烷染料和0.05％至5％(v/v)的非离子表面活性剂。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的三芳基甲烷染料和0.05％至5％(v/v)的离子表面活性剂。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含2g/L至12g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的三芳基甲烷染料和0.05％至5％(v/v)的壬基酚聚氧乙烯醚。
在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的孔雀石绿染料和0.05％至5％(v/v)的壬基酚聚氧乙烯醚。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的亮绿和0.05％至5％(v/v)的壬基酚聚氧乙烯醚。在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的孔雀石绿染料和0.05％至5％(v/v)的十八烷基硫酸盐。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的亮绿和0.05％至5％(v/v)的十八烷基硫酸盐。
在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的孔雀石绿染料和0.05％至5％(v/v)的壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的亮绿和0.05％至5％(v/v)的壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的孔雀石绿染料和0.05％至5％(v/v)的十四烷基十二烷基硫酸钠。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的亮绿和0.05％至5％(v/v)的十四烷基十二烷基硫酸钠。在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的孔雀石绿染料和0.05％至5％(v/v)的7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠(7-ethyl-2-methyl-4-undecyllsodiumsulphate)。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至8g/L的大豆蛋白胨、0.05％至3％(v/v)的亮绿和0.05％至5％(v/v)的7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠。
在一个实施方案中，预富集介质包含5g/L至15g/L的蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的生长抑制剂和0.05mL/L至6mL/L的表面活性剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物和0.05mL/L至6mL/L的表面活性剂。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物和0.05mL/L至6mL/L的非离子表面活性剂。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物和0.05mL/L至6mL/L的离子表面活性剂。
在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料和0.05mL/L至6mL/L的表面活性剂。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料和0.05mL/L至6mL/L的非离子表面活性剂。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料和0.05mL/L至6mL/L的离子表面活性剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料和0.05mL/L至6mL/L的壬基酚聚氧乙烯醚。
在该实施方案的方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、0.004g/L至0.0008g/L的孔雀石绿染料和1.0mL/L至3mL/L的壬基酚聚氧乙烯醚。在该实施方案的方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、0.004g/L至0.0008g/L的亮绿和1.0mL/L至3mL/L的壬基酚聚氧乙烯醚。
在该实施方案的方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、0.004g/L至0.0008g/L的孔雀石绿染料和1.0mL/L至3mL/L的壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、0.004g/L至0.0008g/L的亮绿和1.0mL/L至3mL/L的壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。
在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含10g/L酪蛋白胨、4g/L胆盐、3.5g/L磷酸二钠、1.5g/L磷酸钾、0.006g/L亮绿，和2mL/L壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含10g/L酪蛋白胨、4g/L胆盐、3.5g/L磷酸二钠、1.5g/L磷酸钾、0.002g/L亮绿，和2mL/L壬苯醇醚-4(Tergitol-4)。
在一个实施方案中，预富集介质包含5g/L至15g/L的蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂和0.001g/L至0.0012g/L的第二生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的碘化合物和0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的碘化合物和0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料。
在一个实施方案中，预富集介质包含5g/L至15g/L的蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂和0.001g/L至0.0012g/L的第三生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物和0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物和0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料。
在一个实施方案中，预富集介质包含5g/L至15g/L的蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.0012g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.0012g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.0012g/L抗微生物化合物、和0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料。
在该实施方案的方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的第一碘化合物、3g/L至5g/L的第二碘化合物、0.006g/L至0.0010g/L抗微生物化合物、和0.006g/L至0.0010g/L的三芳基甲烷染料。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、0.006g/L至0.0010g/L氨基香豆素抗生素、和0.006g/L至0.0010g/L的孔雀石绿染料。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、0.006g/L至0.0010g/新生霉素、和0.006g/L至0.0010g/L的亮绿。
在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含4.7g/L胆盐、4.3g/L肉提取物、8.6g/L酪蛋白胨、2.6g/LNaCl、38.7g/LCaCO3、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、0.008g/L新生霉素、和0.008g/L亮绿。
在该实施方案的方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的第一碘化合物、3g/L至5g/L的第二碘化合物、0.002g/L至0.006g/L抗微生物化合物、和0.002g/L至0.006g/L的三芳基甲烷染料。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、0.002g/L至0.006g/L氨基香豆素抗生素、和0.002g/L至0.006g/L的孔雀石绿染料。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含7g/L至11g/L的酪蛋白胨、3.5g/L至5.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、0.002g/L至0.006g/新生霉素、和0.002g/L至0.006g/L的亮绿。
在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含4.7g/L胆盐、4.3g/L肉提取物、8.6g/L酪蛋白胨、2.6g/LNaCl、38.7g/LCaCO3、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、0.008g/L新生霉素、和0.008g/L亮绿。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含4.7g/L胆盐、4.3g/L肉提取物、8.6g/L酪蛋白胨、2.6g/LNaCl、38.7g/LCaCO3、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、0.004g/L新生霉素、和0.004g/L亮绿。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含2.4g/L胆盐、2.1g/L肉提取物、4.3g/L酪蛋白胨、1.3g/LNaCl、19.3g/LCaCO3、15.2g/LNa2S2O3、2g/L碘、2g/L碘化钾、0.004g/L新生霉素、和0.004g/L亮绿。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含2.4g/L胆盐、4.3g/L大豆蛋白胨、1.3g/LNaCl、19.3g/LCaCO3、15.2g/LNa2S2O3、2g/L碘、2g/L碘化钾、0.004g/L新生霉素、和0.004g/L亮绿。
在一个实施方案中，预富集介质包含5g/L至15g/L的蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂和0.001g/L至0.0012g/L的第三生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、和0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含5g/L至15g/L的酪蛋白胨、2g/L至6g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、和0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料。
在该实施方案的方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、3g/L至5g/L的第一碘化合物、3g/L至5g/L的第二碘化合物、和0.002g/L至0.006g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、和0.002g/L至0.006g/L的氨基香豆素抗生素。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含8g/L至12g/L的酪蛋白胨、3g/L至5g/L胆盐、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、和0.002g/L至0.006g/L的新生霉素。
在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含10g/L酪蛋白胨、4g/L胆盐、3.5g/L磷酸二钠、1.5g/L磷酸钾、7.6g/LNaCl、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、和0.004g/L新生霉素。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含10g/L酪蛋白胨、2.4g/L胆盐、3.5g/L磷酸二钠、1.5g/L磷酸钾、6.3g/LNaCl、15.2g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、和0.004g/L新生霉素。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含10g/L酪蛋白胨、2.4g/L胆盐、3.5g/L磷酸二钠、1.5g/L磷酸钾、6.3g/LNaCl、19.3g/LCaCO3、15.2g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、和0.004g/L新生霉素。
在一个实施方案中，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨和0.5g/L至3g/L的生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨和0.5g/L至3g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨和0.5g/L至3g/L的硒化合物。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨和0.5g/L至3g/L的亚硒酸氢钠。在该实施方案的仍其他方面，预富集介质包含4g/L至6g/L的胰蛋白胨和1g/L至2g/L的亚硒酸氢钠。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含5g/L胰蛋白胨、4g/L乳糖、10g/L磷酸二钠、0.01g/LL-胱氨酸、和1.51g/L的亚硒酸氢钠。
在一个实施方案中，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨、1g/L至3g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂和0.001g/L至0.0012g/L的第三生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨、1g/L至3g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、和0.001g/L至0.0012g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含3g/L至7g/L的胰蛋白胨、1g/L至3g/L胆盐、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、和0.001g/L至0.0012g/L的三芳基甲烷染料。
在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至6g/L的胰蛋白胨、1.5g/L至3.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的第一碘化合物、3g/L至5g/L的第二碘化合物、和0.002g/L至0.006g/L的抗微生物化合物。在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至6g/L的胰蛋白胨、15g/L至35g/L胆盐、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、和0.002g/L至0.006g/L的氨基香豆素抗生素。在该实施方案的还其他方面，预富集介质包含4g/L至6g/L的胰蛋白胨、1.5g/L至3.5g/L胆盐、3g/L至5g/L的碘、3g/L至5g/L的碘化钾、和0.002g/L至0.006g/L的新生霉素。
在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含5g/L胰蛋白胨、4g/L乳糖、2.4g/L胆盐、10g/L磷酸二钠、0.01g/LL-胱氨酸、19.3g/LCaCO3、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、和0.004g/L新生霉素。在该实施方案的另一个方面，预富集介质包含5g/L胰蛋白胨、4g/L乳糖、2.4g/L胆盐、10g/L磷酸二钠、0.01g/LL-胱氨酸、30.5g/LNa2S2O3、4g/L碘、4g/L碘化钾、和0.004g/L新生霉素。
本说明书的方面部分地公开了，在预富集介质中孵育样品。在促进病原体在样品中的生长，延迟不需要的生物体在样品中的生长，和/或建立以其他方式增加病原体在样品中的群体和/或延迟不需要的生物体在样品中的生长的条件的温度和时间参数下进行样品的孵育。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在孵育预富集介质中的样品期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、或约42℃。在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、或至少42℃。在该实施方案的还其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、或至多42℃。在该实施方案的仍其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、或约40℃至约44℃。
在孵育预富集介质中的样品期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。在该实施方案的还其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。在该实施方案的还其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。
在该实施方案的方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、或约42℃，持续以下的的一段时间：例如，约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、或至少42℃，持续以下的一段时间：例如，至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的还其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、或至多42℃，持续以下的一段时间：例如，至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的仍其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、或约40℃至约44℃，持续以下的一段时间：例如，约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
用于检测样品中病原体的方法包括在富集介质中孵育样品的步骤。在完成本文公开的预富集步骤后，将预富集介质的等分试样转移至富集介质用于病原体的后续生长。富集步骤包括在限定的时间和在限定的温度下在富集介质中孵育预富集介质的等分试样。
在富集介质中孵育预富集介质期间可使用预富集介质的等分试样的任何体积，条件是该体积对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的体积的约1/50、约1/75、约1/100、约1/125、约1/150、约1/175、约1/200、约1/225、约1/250、约1/275、约1/300、约1/325、约1/350、约1/375、约1/400、约1/425、约1/450、约1/475、约1/500、约1/525、约1/550、约1/575、约1/600、约1/625、约1/650、约1/675、约1/700、约1/725、约1/750、约1/775、约1/800、约1/825、约1/850、约1/875、约1/900、约1/925、约1/950、约1/975、或约1/1,000。在该实施方案的其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的体积的至少1/50、至少1/75、至少1/100、至少1/125、至少1/150、至少1/175、至少1/200、至少1/225、至少1/250、至少1/275、至少1/300、至少1/325、至少1/350、至少1/375、至少1/400、至少1/425、至少1/450、至少1/475、至少1/500、至少1/525、至少1/550、至少1/575、至少1/600、至少1/625、至少1/650、至少1/675、至少1/700、至少1/725、至少1/750、至少1/775、至少1/800、至少1/825、至少1/850、至少1/875、至少1/900、至少1/925、至少1/950、至少1/975、或至少1/1,000。在该实施方案的还其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的在富集步骤中使用的富集介质的体积的至多1/50、至多1/75、至多1/100、至多1/125、至多1/150、至多1/175、至多1/200、至多1/225、至多1/250、至多1/275、至多1/300、至多1/325、至多1/350、至多1/375、至多1/400、至多1/425、至多1/450、至多1/475、至多1/500、至多1/525、至多1/550、至多1/575、至多1/600、至多1/625、至多1/650、至多1/675、至多1/700、至多1/725、至多1/750、至多1/775、至多1/800、至多1/825、至多1/850、至多1/875、至多1/900、至多1/925、至多1/950、至多1/975、或至多1/1,000。
在该实施方案的还其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，约1/50至约1/100、约1/50至约1/150、约1/50至约1/200、约1/50至约1/250、约1/50至约1/300、约1/50至约1/350、约1/50至约1/400、约1/50至约1/450、约1/50至约1/500、约1/550至约1/600、约1/50至约1/650、约1/50至约1/700、约1/50至约1/750、约1/50至约1/800、约1/50至约1/850、约1/50至约1/900、约1/50至约1/950、约1/50至约1/1,000、约1/100至约1/150、约1/100至约1/200、约1/100至约1/250、约1/100至约1/300、约1/100至约1/350、约1/100至约1/400、约1/100至约1/450、约1/100至约1/500、约1/100至约1/550、约1/100至约1/600、约1/100至约1/650、约1/100至约1/700、约1/100至约1/750、约1/100至约1/800、约1/100至约1/850、约1/100至约1/900、约1/100至约1/950、约1/100至约1/1,000、约1/200至约1/250、约1/200至约1/300、约1/200至约1/350、约1/200至约1/400、约1/200至约1/450、约1/200至约1/500、约1/200至约1/550、约1/200至约1/600、约1/200至约1/650、约1/200至约1/700、约1/200至约1/750、约1/200至约1/800、约1/200至约1/850、约1/200至约1/900、约1/200至约1/950、约1/200至约1/1,000、约1/300至约1/350、约1/300至约1/400、约1/300至约1/450、约1/300至约1/500、约1/300至约1/550、约1/300至约1/600、约1/300至约1/650、约1/300至约1/700、约1/300至约1/750、约1/300至约1/800、约1/300至约1/850、约1/300至约1/900、约1/300至约1/950、约1/300至约1/1,000、约1/400至约1/450、约1/400至约1/500、约1/400至约1/550、约1/400至约1/600、约1/400至约1/650、约1/400至约1/700、约1/400至约1/750、约1/400至约1/800、约1/400至约1/850、约1/400至约1/900、约1/400至约1/950、约1/400至约1/1,000、约1/500至约1/550、约1/500至约1/600、约1/500至约1/650、约1/500至约1/700、约1/500至约1/750、约1/500至约1/800、约1/500至约1/850、约1/500至约1/900、约1/500至约1/950、或约1/500至约1/1,000。
在该实施方案的方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，约1:50、约1:75、约1:100、约1:125、约1:150、约1:175、约1:200、约1:225、约1:250、约1:275、约1:300、约1:325、约1:350、约1:375、约1:400、约1:425、约1:450、约1:475、约1:500、约1:525、约1:550、约1:575、约1:600、约1:625、约1:650、约1:675、约1:700、约1:725、约1:750、约1:775、约1:800、约1:825、约1:850、约1:875、约1:900、约1:925、约1:950、约1:975、或约1:1,000。在该实施方案的其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，至少1:50、至少1:75、至少1:100、至少1:125、至少1:150、至少1:175、至少1:200、至少1:225、至少1:250、至少1:275、至少1:300、至少1:325、至少1:350、至少1:375、至少1:400、至少1:425、至少1:450、至少1:475、至少1:500、至少1:525、至少1:550、至少1:575、至少1:600、至少1:625、至少1:650、至少1:675、至少1:700、至少1:725、至少1:750、至少1:775、至少1:800、至少1:825、至少1:850、至少1:875、至少1:900、至少1:925、至少1:950、至少1:975、或至少1:1,000。在该实施方案的还其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，至多1:50、至多1:75、至多1:100、至多1:125、至多1:150、至多1:175、至多1:200、至多1:225、至多1:250、至多1:275、至多1:300、至多1:325、至多1:350、至多1:375、至多1:400、至多1:425、至多1:450、至多1:475、至多1:500、至多1:525、至多1:550、至多1:575、至多1:600、至多1:625、至多1:650、至多1:675、至多1:700、至多1:725、至多1:750、至多1:775、至多1:800、至多1:825、至多1:850、至多1:875、至多1:900、至多1:925、至多1:950、至多1:975、或至多1:1,000。
在该实施方案的仍其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，约1:50至约1:100、约1:50至约1:150、约1:50至约1:200、约1:50至约1:250、约1:50至约1:300、约1:50至约1:350、约1:50至约1:400、约1:50至约1:450、约1:50至约1:500、约1:50至约1:550、约1:50至约1:600、约1:50至约1:650、约1:50至约1:700、约1:50至约1:750、约1:50至约1:800、约1:50至约1:850、约1:50至约1:900、约1:50至约1:950、约1:50至约1:1,000、约1:100至约1:200、约1:100至约1:250、约1:100至约1:300、约1:100至约1:350、约1:100至约1:400、约1:100至约1:450、约1:100至约1:500、约1:100至约1:550、约1:100至约1:600、约1:100至约1:650、约1:100至约1:700、约1:100至约1:750、约1:100至约1:800、约1:100至约1:850、约1:100至约1:900、约1:100至约1:950、约1:100至约1:1,000、约1:200至约1:250、约1:200至约1:300、约1:200至约1:350、约1:200至约1:400、约1:200至约1:450、约1:200至约1:500、约1:200至约1:550、约1:200至约1:600、约1:200至约1:650、约1:200至约1:700、约1:200至约1:750、约1:200至约1:800、约1:200至约1:850、约1:200至约1:900、约1:200至约1:950、约1:200至约1:1,000、约1:300至约1:350、约1:300至约1:400、约1:300至约1:450、约1:300至约1:500、约1:300至约1:550、约1:300至约1:600、约1:300至约1:650、约1:300至约1:700、约1:300至约1:750、约1:300至约1:800、约1:300至约1:850、约1:300至约1:900、约1:300至约1:950、约1:300至约1:1,000、约1:400至约1:450、约1:400至约1:500、约1:400至约1:550、约1:400至约1:600、约1:400至约1:650、约1:400至约1:700、约1:400至约1:750、约1:400至约1:800、约1:400至约1:850、约1:400至约1:900、约1:400至约1:950、约1:400至约1:1,000、约1:500至约1:550、约1:500至约1:600、约1:500至约1:650、约1:500至约1:700、约1:500至约1:750、约1:500至约1:800、约1:500至约1:850、约1:500至约1:900、约1:500至约1:950、约1:500至约1:1,000、约1:600至约1:650、约1:600至约1:700、约1:600至约1:750、约1:600至约1:800、约1:600至约1:850、约1:600至约1:900、约1:600至约1:950、约1:600至约1:1,000、约1:700至约1:750、约1:700至约1:800、约1:700至约1:850、约1:700至约1:900、约1:700至约1:950、约1:700至约1:1,000,约1:800至约1:850、约1:800至约1:900、约1:800至约1:950、约1:800至约1:1,000、约1:900至约1:950、约1:900至约1:1,000、或约1:950至约1:1,000。
本说明书的方面部分地公开了，富集介质。还称为富集培养介质的富集介质是为维持病原体的高生长提供必要的营养物质的缓冲的培养介质。这通常通过定制特别有利于病原体的生长的介质来完成，诸如，例如，考虑可存活渗透压范围、可存活pH范围、对选择性化合物的耐受、极小营养需求。富集介质的非限制性实例包括，RappaportVassiliadis大豆介质(RVS)、McConkey肉汤、Fraser肉汤、大豆-胰蛋白胨肉汤(TSB)、强化梭菌属肉汤、弯曲杆菌属巯基乙酸盐介质、硝酸盐肉汤、三糖铁肉汤(TripleSugarIronBroth,TSI)、马尿酸钠肉汤、亚硒酸盐胱氨酸肉汤、GN肉汤、ToddHewitt肉汤、麦芽提取物肉汤、叠氮钠葡萄糖肉汤(AzideDextroseBroth)、和Hektoen肉汤。
在该实施方案的方面，当病原体是沙门氏菌属物种(Salmonellasp.)时，富集介质可以是RappaportVassiliadis大豆介质、亚硒酸盐胱氨酸肉汤、或GN肉汤。在该实施方案的另一个方面，当病原体是大肠杆菌(Escherichiacoli)时，富集介质可以是McConkey肉汤。在该实施方案的还另一个方面，当病原体是单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)时，富集介质可以是Fraser肉汤。在该实施方案的仍另一个方面，当病原体是金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)时，富集介质可以是大豆-胰蛋白胨肉汤(TSB)。在该实施方案的另一个方面，当病原体是梭菌属物种(Clostridiumsp.)时，富集介质可以是强化梭菌属肉汤。在该实施方案的还另一个方面，当病原体是弯曲杆菌属物种(Campylobactersp.)时，富集介质可以是弯曲杆菌属巯基乙酸盐介质。
在该实施方案的另一个方面，当病原体是假单胞菌属物种(Pseudomonassp.)时，富集介质可以是硝酸盐肉汤或三糖铁肉汤(TSI)。在该实施方案的还另一个方面，当病原体是不动杆菌属物种(Acinetobactersp.)时，富集介质可以是硝酸盐肉汤或三糖铁肉汤(TSI)。在该实施方案的仍另一个方面，当病原体是军团菌属物种(Legionellasp.)时，富集介质可以是马尿酸钠肉汤。在该实施方案的另一个方面，当病原体是志贺氏菌属物种(Shigellasp.)时，富集介质可以是亚硒酸盐胱氨酸肉汤、或GN肉汤。在该实施方案的还另一个方面，当病原体是链球菌属物种(Streptococcussp.)时，富集介质可以是ToddHewitt肉汤。在该实施方案的另一个方面，当病原体是肠球菌属物种(Enterococcussp.)时，富集介质可以是叠氮钠葡萄糖肉汤。
在该实施方案的另一个方面，当病原体是真菌时，富集介质可以是麦芽提取物肉汤。在该实施方案的还另一个方面，当病原体是酵母时，富集介质可以是麦芽提取物肉汤。在该实施方案的仍另一个方面，当病原体是霉菌时，富集介质可以是麦芽提取物肉汤。在该实施方案的另一个方面，当病原体是变形杆菌属(Proteus)时，富集介质可以是Hektoen肉汤。
富集介质通常包含用作蛋白、氨基酸和氮的来源的高生长营养组分。单个高生长营养组分可构成本文公开的富集介质，或多个高生长营养组分可构成本文公开的富集介质。高生长营养组分的非限制性实例是如本文公开的蛋白胨。
可使用任何浓度的高生长营养组分，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，约1g/L、约2g/L、约3g/L、约4g/L、约5g/L、约6g/L、约7g/L、约8g/L、约9g/L、约10g/L、约11g/L、约12g/L、约13g/L、约14g/L，或约15g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，至少1g/L、至少2g/L、至少3g/L、至少4g/L、至少5g/L、至少6g/L、至少7g/L、至少8g/L、至少9g/L、至少10g/L、至少11g/L、至少12g/L、至少13g/L、至少14g/L，或至少15g/L。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，至多1g/L、至多2g/L、至多3g/L、至多4g/L、至多5g/L、至多6g/L、至多7g/L、至多8g/L、至多9g/L、至多10g/L、至多11g/L、至多12g/L、至多13g/L、至多14g/L，或至多15g/L。
在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，介于，约1g/L至2g/L、约1g/L至3g/L、约1g/L至4g/L、约1g/L至5g/L、约1g/L至6g/L、约1g/L至7g/L、约1g/L至8g/L、约1g/L至9g/L、约1g/L至10g/L、约1g/L至11g/L、约1g/L至12g/L、约1g/L至13g/L、约1g/L至14g/L、约1g/L至15g/L、约2g/L至3g/L、约2g/L至4g/L、约2g/L至5g/L、约2g/L至6g/L、约2g/L至7g/L、约2g/L至8g/L、约2g/L至9g/L、约2g/L至10g/L、约2g/L至11g/L、约2g/L至12g/L、约2g/L至13g/L、约2g/L至14g/L、约2g/L至15g/L、约3g/L至4g/L、约3g/L至5g/L、约3g/L至6g/L、约3g/L至7g/L、约3g/L至8g/L、约3g/L至9g/L、约3g/L至10g/L、约3g/L至11g/L、约3g/L至12g/L、约3g/L至13g/L、约3g/L至14g/L、约3g/L至15g/L、约4g/L至5g/L、约4g/L至6g/L、约4g/L至7g/L、约4g/L至8g/L、约4g/L至9g/L、约4g/L至10g/L、约4g/L至11g/L、约4g/L至12g/L、约4g/L至13g/L、约4g/L至14g/L、约4g/L至15g/L、约5g/L至6g/L、约5g/L至7g/L、约5g/L至8g/L、约5g/L至9g/L、约5g/L至10g/L、约5g/L至11g/L、约5g/L至12g/L、约5g/L至13g/L、约5g/L至14g/L、约5g/L至15g/L、约6g/L至7g/L、约6g/L至8g/L、约6g/L至9g/L、约6g/L至10g/L、约6g/L至11g/L、约6g/L至12g/L、约6g/L至13g/L、约6g/L至14g/L、约6g/L至15g/L、约7g/L至8g/L、约7g/L至9g/L、约7g/L至10g/L、约7g/L至11g/L、约7g/L至12g/L、约7g/L至13g/L、约7g/L至14g/L、约7g/L至15g/L、约8g/L至9g/L、约8g/L至10g/L、约8g/L至11g/L、约8g/L至12g/L、约8g/L至13g/L、约8g/L至14g/L、约8g/L至15g/L、约9g/L至10g/L、约9g/L至11g/L、约9g/L至12g/L、约9g/L至13g/L、约9g/L至14g/L、约9g/L至15g/L、约10g/L至11g/L、约10g/L至12g/L、约10g/L至13g/L、约10g/L至14g/L、约10g/L至15g/L、约11g/L至12g/L、约11g/L至13g/L、约11g/L至14g/L、约11g/L至15g/L、约12g/L至13g/L、约12g/L至14g/L、约12g/L至15g/L、约13g/L至14g/L、约13g/L至15g/L、或约14g/L至15g/L。
富集介质通常包含生长促进剂。生长促进剂的非限制性实例是，可被感兴趣的病原体使用作为铁源的含铁化合物。在该实施方案的一个方面，生长促进剂是柠檬酸铁铵。
可使用任何浓度的柠檬酸铁铵，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，约0.01mg/mL、约0.02mg/mL、约0.03mg/mL、约0.04mg/mL、约0.05mg/mL、约0.06mg/mL、约0.07mg/mL、约0.08mg/mL、约0.09mg/mL、约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL、约1.0mg/mL、约2.0mg/mL、约3.0mg/mL、约4.0mg/mL、约5.0mg/mL、约6.0mg/mL、约7.0mg/mL、约8.0mg/mL、约9.0mg/mL、约10mg/mL、约11mg/mL、约12mg/mL、约13mg/mL、约14mg/mL、或约15mg/mL。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，至少0.01mg/mL、至少0.02mg/mL、至少0.03mg/mL、至少0.04mg/mL、至少0.05mg/mL、至少0.06mg/mL、至少0.07mg/mL、至少0.08mg/mL、至少0.09mg/mL、至少0.1mg/mL、至少0.2mg/mL、至少0.3mg/mL、至少0.4mg/mL、至少0.5mg/mL、至少0.6mg/mL、至少0.7mg/mL、至少0.8mg/mL、至少0.9mg/mL、至少1.0mg/mL、至少2.0mg/mL、至少3.0mg/mL、至少4.0mg/mL、至少5.0mg/mL、至少6.0mg/mL、至少7.0mg/mL、至少8.0mg/mL、至少9.0mg/mL、至少10mg/mL、至少11mg/mL、至少12mg/mL、至少13mg/mL、至少14mg/mL、或至少15mg/mL。在该实施方案的还其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，至多0.01mg/mL、至多0.02mg/mL、至多0.03mg/mL、至多0.04mg/mL、至多0.05mg/mL、至多0.06mg/mL、至多0.07mg/mL、至多0.08mg/mL、至多0.09mg/mL、至多0.1mg/mL、至多0.2mg/mL、至多0.3mg/mL、至多0.4mg/mL、至多0.5mg/mL、至多0.6mg/mL、至多0.7mg/mL、至多0.8mg/mL、至多0.9mg/mL、至多1.0mg/mL、至多2.0mg/mL、至多3.0mg/mL、至多4.0mg/mL、至多5.0mg/mL、至多6.0mg/mL、至多7.0mg/mL、至多8.0mg/mL、至多9.0mg/mL、至多10mg/mL、至多11mg/mL、至多12mg/mL、至多13mg/mL、至多14mg/mL、或至多15mg/mL。
在该实施方案的仍其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，约0.01mg/mL至约0.05mg/mL约0.01mg/mL至约0.1mg/mL、约0.01mg/mL至约0.5mg/mL、约0.05mg/mL至约0.1mg/mL、约0.05mg/mL至约0.5mg/mL、约0.05mg/mL至约1.0mg/mL、约0.05mg/mL至约5.0mg/mL、约0.1mg/mL至约0.5mg/mL、约0.1mg/mL至约1.0mg/mL、约0.1mg/mL至约5.0mg/mL、约0.1mg/mL至约10mg/mL、约0.1mg/mL至约15mg/mL、约0.5mg/mL至约1.0mg/mL、约0.5mg/mL至约5.0mg/mL、约0.5mg/mL至约10mg/mL、约0.5mg/mL至约15mg/mL、约1.0mg/mL至约5.0mg/mL、约1.0mg/mL至约10mg/mL、约1.0mg/mL至约15mg/mL、约5.0mg/mL至约10mg/mL、约5.0mg/mL至约15mg/mL、或约10mg/mL至约15mg/mL。
富集介质通常包含以在本文公开的浓度范围内的如在本文公开的生长增强剂。
在该实施方案的方面，富集介质包含4.5g/L大豆蛋白胨、7.2g/L氯化钠、1.26g/L磷酸二氢钾、0.18g/L磷酸氢二钾、13.58g/L氯化镁(无水)、0.036g/L孔雀石绿、和0.62g/L柠檬酸铁铵。在该实施方案的方面，富集介质包含4.5g/L大豆蛋白胨、7.2g/L氯化钠、1.26g/L磷酸二氢钾、0.18g/L磷酸氢二钾、29.0g/L氯化镁(六水合物)、0.036g/L孔雀石绿、和0.62g/L柠檬酸铁铵。
本说明书的方面部分地公开了，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样。在促进病原体在样品中的生长，延迟不需要的生物体在样品中的生长，和/或建立以其他方式增加病原体在样品中的群体和/或延迟不需要的生物体在样品中的生长的条件的温度和时间参数下进行预富集介质的等分试样的孵育。可在等速旋转、反转或搅拌下进行富集介质的孵育。
在富集介质中孵育预富集介质的等分试样期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃。在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃。在该实施方案的还其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃。在该实施方案的仍其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃。
在富集介质中孵育预富集介质的等分试样期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。在该实施方案的还其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。在该实施方案的还其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，约2小时至约4小时、约3小时至约5小时、约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。
在该实施方案的方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃，持续以下的一段时间：例如，约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
在该实施方案的其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃，持续以下的一段时间：例如，至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
在该实施方案的还其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃，持续以下的一段时间：例如，至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
在该实施方案的仍其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃，持续以下的一段时间：例如，约2小时至约4小时、约3小时至约5小时、约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
本说明书的方面部分地公开了，纯化步骤。被富集后，随后可从富集介质中纯化病原体。病原体的纯化包括捕获病原体为更浓缩的形式和/或除去污染性微生物、杂质和碎屑。如此，本文公开的纯化步骤通过以下提高病原体的检测：增加病原体的浓度和/或减少污染物，从而增加在随后检测步骤中测量的可检测的信号水平。捕获病原体和/或除去污染性微生物、杂质和碎屑使用的常见的纯化步骤包括亲和层析、离子交换层析、排阻层析、疏水相互作用层析、陶瓷羟磷灰石层析、反相HPLC、凝胶过滤、沉淀、免疫沉淀、透析过滤、层析聚焦。
在一个实施方案中，使用使用用于感兴趣的病原体的抗体或适体的免疫沉淀来从富集介质纯化病原体。免疫沉淀是使用特异性结合该抗原的抗体或适体从溶液沉淀抗原的技术。免疫沉淀要求，抗体在过程中的某一时刻被偶联至固体基底。这通常使用本领域已知的标准偶联过程来完成。固体基底的实例包括琼脂糖粒子和磁性粒子。在该实施方案的方面，免疫沉淀方法采用连接至磁性粒子的用于病原体的抗体或适体。
可在纯化步骤期间在它的孵育期间使用与抗体或适体连接的任何浓度的磁性粒子，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，约1x104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、或约1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质。在该实施方案的其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，至少1x104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至少1x105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至少1x106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至少1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、或至少1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质。在该实施方案的还其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，至多1x104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至多1x105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至多1x106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、至多1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、或至多1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质。
在该实施方案的仍其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，约1x104至约1x105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x104至约1x106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x104至约1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x104至约1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x105至约1x106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x105至约1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x105至约1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x106至约1x107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、约1x106至约1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质、或约1x107至约1x108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的病原体的富集介质。
本说明书的方面部分地公开了，与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育免疫磁性粒子。免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质的孵育在促进病原体与连接了用于感兴趣的病原体的抗体或适体的磁性粒子的结合的温度和时间参数下进行。免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质的孵育可在搅动/旋转下进行。
在免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质的孵育期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃。在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃。在该实施方案的还其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃。在该实施方案的仍其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃。
在免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质的孵育期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的时间可以是，例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的时间可以是，例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。在该实施方案的还其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的时间可以是，例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
在该实施方案的还其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的时间可以是，例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
在该实施方案的方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。
在该实施方案的其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃，持续以下的一段时间：例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。
在该实施方案的还其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃，持续以下的一段时间：例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
在该实施方案的仍其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
培养结束后，结合病原体的免疫粒子(immunoparticles)可从富集介质中分离。在该实施方案的方面，可使用磁力分离器从富集介质分离免疫粒子，所述磁力分离器在特定位置集中免疫粒子，允许除去富集介质。可选地，可通过离心集中免疫粒子由此允许除去富集介质来从富集介质分离免疫粒子。除去富集介质后，分离的结合病原体的免疫粒子可使用缓冲溶液洗涤一次或更多次。免疫粒子的随后分离可使用磁力分离器或离心分离并除去缓冲的溶液来完成。
然而，本文公开的纯化步骤是任选的。因此，在一个实施方案中，本文公开的检测病原体的方法不包括从预富集介质、富集介质，或预富集介质和富集介质两者纯化病原体。
本说明书的方面部分地公开了，检测步骤。富集后，感兴趣的病原体的存在或不存在可通过定性或定量地测量包含在富集介质中的病原体的量来确定。在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在发生在完成本文公开的富集步骤之后并且无需本文公开的纯化步骤。在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在发生在完成本文公开的纯化步骤之后。然而，包含感兴趣的病原体的富集介质可被加工以除去碎屑和其他污染物而没有任何病原体纯化。在一个实施方案中，离心包含感兴趣的病原体的富集介质以除去碎屑。在另一个实施方案中，不需要这样的离心步骤。另外，使用第二抗体以放大(boast)检测信号是任选的。因此，在一个实施方案中，检测病原体的方法不包括使用第二抗体以放大检测信号。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL、约1x10-4cfu/mL、约1x10-3cfu/mL、约1x10-2cfu/mL、约1x10-1cfu/mL、约1x100cfu/mL、约1x101cfu/mL、约1x102cfu/mL、约1x103cfu/mL、约1x104cfu/mL、约1x105cfu/mL、约1x106cfu/mL、约1x107cfu/mL、约1x108cfu/mL、约1x109cfu/mL、或约1x1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的病原体：例如，至少1x10-5cfu/mL、至少1x10-4cfu/mL、至少1x10-3cfu/mL、至少1x10-2cfu/mL、至少1x10-1cfu/mL、至少1x100cfu/mL、至少1x101cfu/mL、至少1x102cfu/mL、至少1x103cfu/mL、至少1x104cfu/mL、至少1x105cfu/mL、至少1x106cfu/mL、至少1x107cfu/mL、至少1x108cfu/mL、至少1x109cfu/mL、或至少1x1010cfu/mL。在该实施方案的还其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的病原体：例如，至多1x10-5cfu/mL、至多1x10-4cfu/mL、至多1x10-3cfu/mL、至多1x10-2cfu/mL、至多1x10-1cfu/mL、至多1x100cfu/mL、至多1x101cfu/mL、至多1x102cfu/mL、至多1x103cfu/mL、至多1x104cfu/mL、至多1x105cfu/mL、至多1x106cfu/mL、至多1x107cfu/mL、至多1x108cfu/mL、至多1x109cfu/mL、或至多1x1010cfu/mL。
在该实施方案的仍其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL至约1x10-4cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x1010cfu/mL,约1x100cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x109cfu/mL、或约1x104cfu/mL至约1x1010cfu/mL。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL、约1x10-4cfu/mL、约1x10-3cfu/mL、约1x10-2cfu/mL、约1x10-1cfu/mL、约1x100cfu/mL、约1x101cfu/mL、约1x102cfu/mL、约1x103cfu/mL、约1x104cfu/mL、约1x105cfu/mL、约1x106cfu/mL、约1x107cfu/mL、约1x108cfu/mL、约1x109cfu/mL、或约1x1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，至少1x10-5cfu/mL、至少1x10-4cfu/mL、至少1x10-3cfu/mL、至少1x10-2cfu/mL、至少1x10-1cfu/mL、至少1x100cfu/mL、至少1x101cfu/mL、至少1x102cfu/mL、至少1x103cfu/mL、至少1x104cfu/mL、至少1x105cfu/mL、至少1x106cfu/mL、至少1x107cfu/mL、至少1x108cfu/mL、至少1x109cfu/mL、或至少1x1010cfu/mL。在该实施方案的还其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，至多1x10-5cfu/mL、至多1x10-4cfu/mL、至多1x10-3cfu/mL、至多1x10-2cfu/mL、至多1x10-1cfu/mL、至多1x100cfu/mL、至多1x101cfu/mL、至多1x102cfu/mL、至多1x103cfu/mL、至多1x104cfu/mL、至多1x105cfu/mL、至多1x106cfu/mL、至多1x107cfu/mL、至多1x108cfu/mL、至多1x109cfu/mL、或至多1x1010cfu/mL。
在该实施方案的仍其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL至约1x10-4cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x109cfu/mL、或约1x104cfu/mL至约1x1010cfu/mL。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL、约1x10-4cfu/mL、约1x10-3cfu/mL、约1x10-2cfu/mL、约1x10-1cfu/mL、约1x100cfu/mL、约1x101cfu/mL、约1x102cfu/mL、约1x103cfu/mL、约1x104cfu/mL、约1x105cfu/mL、约1x106cfu/mL、约1x107cfu/mL、约1x108cfu/mL、约1x109cfu/mL、或约1x1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，至少1x10-5cfu/mL、至少1x10-4cfu/mL、至少1x10-3cfu/mL、至少1x10-2cfu/mL、至少1x10-1cfu/mL、至少1x100cfu/mL、至少1x101cfu/mL、至少1x102cfu/mL、至少1x103cfu/mL、至少1x104cfu/mL、至少1x105cfu/mL、至少1x106cfu/mL、至少1x107cfu/mL、至少1x108cfu/mL、至少1x109cfu/mL、或至少1x1010cfu/mL。在该实施方案的还其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，至多1x10-5cfu/mL、至多1x10-4cfu/mL、至多1x10-3cfu/mL、至多1x10-2cfu/mL至多1x10-1cfu/mL、至多1x100cfu/mL、至多1x101cfu/mL、至多1x102cfu/mL、至多1x103cfu/mL、至多1x104cfu/mL、至多1x105cfu/mL、至多1x106cfu/mL、至多1x107cfu/mL、至多1x108cfu/mL、至多1x109cfu/mL、或至多1x1010cfu/mL。
在该实施方案的仍其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的病原体：例如，约1x10-5cfu/mL至约1x10-4cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-5cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-3cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-4cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-2cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-3cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x10-1cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-2cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x100cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x10-1cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x101cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x100cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x102cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x101cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x103cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x102cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x104cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x109cfu/mL、约1x103cfu/mL至约1x1010cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x105cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x106cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x107cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x108cfu/mL、约1x104cfu/mL至约1x109cfu/mL、或约1x104cfu/mL至约1x1010cfu/mL。
用于确定病原体的存在或不存的常见检测过程，包括基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、基于生长的检测方法、和基于传感器的检测方法。
在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在使用基于核酸的检测方法发生。基于核酸的检测方法的非限制性实例包括基于DNA的检测方法和基于RNA的检测方法。基于DNA的检测方法包括，但不限于，如DNA印迹分析、基于PCR的测定、序列分析、基于免疫的检测测定，和使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测方法的杂交测定。基于RNA的检测方法包括，但不限于，如RNA印迹分析、基于RT-PCR的测定、RNA序列分析、基于免疫的检测方法，和使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测方法的杂交测定。
在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在使用基于蛋白的检测方法发生。基于蛋白的检测方法的非限制性实例包括基于凝胶的检测方法、基于免疫的检测方法和基于蛋白相互作用的方法。基于凝胶的检测方法包括，但不限于聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE。基于免疫的检测方法包括，但不限于，蛋白印迹分析、ELISA和免疫沉淀。基于蛋白相互作用的方法包括，但不限于，基于蛋白-蛋白相互作用的测定、基于蛋白-DNA相互作用的测定、和基于蛋白-RNA相互作用的测定。
在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在使用基于活性的检测方法发生。基于活性的检测方法的非限制性实例包括酶活性测定和基于蛋白功能的测定。酶活性测定通常包括在包含合适底物的缓冲的溶液中孵育来自富集介质或来自在免疫纯化步骤后采集的上清液的等分试样。如果期望的酶存在于等分试样中，则将催化底物转化成产物。然后测量底物的损失或产物的形成可定性或定量地与存在的酶的量相关，并因此与富集介质中的病原体的量相关。同样地，基于蛋白功能的测定测量样品中存在的功能的量，并基于该测量推断病原体在富集介质中的量。
在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在使用基于生长的检测方法发生。基于生长的检测方法的非限制性实例包括用或不用生长选择剂测量菌落形成的平板接种测定(platingassay)和测量细胞密度的分光光度计测定。平板接种测定通常包括将富集介质的等分试样平板接种在包含维持感兴趣的病原体的生长的营养物质的琼脂板上。然后，接种的琼脂板在指定的温度和时间下孵育并对病原体菌落的生长进行评估。在一些实施方案中，琼脂板在约25℃至约42℃下孵育约12小时至约48小时。在该实施方案的方面，琼脂板在约37℃下孵育约14小时至约16小时。这种评估可通过简单地评估病原体菌落的存在或不存在是定性的，或当计数病原体菌落的数目时是定量的。除了营养物之外，琼脂板可包含着色或以其他方式提供识别菌落作为病原体菌落的可视信号的生色化合物。另外，琼脂板可包含通过或供应促进病原体生长或病原体生长需要或抑制污染性微生物的生长的化合物来选择病原体菌落生长的化合物。测量细胞密度的分光光度计测定通常包括使用分光光度计在特定波长下测量从富集介质采集的等分试样的细胞密度。
在一个实施方案中，检测感兴趣的病原体的存在或不存在使用基于传感器的检测方法发生。传感器可根据被传递的能量的类型，诸如，例如，热、电磁、机械、和电化学进行分类。
在该实施方案的一个方面，基于传感器的检测方法是基于生物传感器的检测方法。生物传感器，是一种掺入生物材料、生物来源的材料或与物理化学传感器或传感系统紧密相关或整合在物理化学传感器或传感系统内的生物模拟的分析设备。生物传感器将生物基质(例如，酶、抗体、受体、细胞器、微生物)的物理或化学性质的改变转化为电信号或其他类型的信号，其幅度取决于溶液中定义的分析物的浓度。
生物传感器的非限制性实例包括酶生物传感器、DNA传感器和免疫传感器。基于酶的生物传感器需要将酶固定化在电极表面上用于定量分析物。基于DNA的生物传感器需要将靶序列的非互补DNA链固定化在电极表面上用于定量分析物。基于免疫的生物传感器需要将抗体固定化在电极表面上用于定量分析物。
生物传感器包含生物识别元件、信号转换器、和检测器。生物识别元件包括抗体、肽、核酸、或酶，且生物识别元件是传感器的最初结合分析物(例如，病原体)或与分析物(例如，病原体)相互作用的部分。在许多情况下，这与将生物识别事件转换为可经由若干方式被检测的信号的构象改变、底物裂解、或酶促反应相关。生物传感器包含两个电极(参比电极和工作电极)或三个电极(参比电极、工作电极和反电极)。
参比电极包括液态和固态参比电极，并且是具有所有其他电极电势参考的已知稳定的电势的电极。参比电极可通过薄膜沉积、电镀和丝网印刷来制造。参比电极的非限制性实例包括银-氯化银电极、甘汞电极、氢电极、汞-氧化汞电极、汞-硫酸亚汞电极、铜-硫酸铜电极、和氢化钯电极。
生物传感器通常使用用于生物过程的电化学技术的功率，通过定量产生与生物分析物的浓度有关的电信号。这样的电化学生物传感器可基于分析的工作原理被分类为电位式、安培计、伏安和阻抗测定(impedimetric)/电导测定。电位式电化学传感器以零位电流流测量工作电极和参比电极之间的平衡电势差。伏安电化学传感器以在工作电极和参比电极之间应用的变化的电势的函数测量电流。安培计电化学传感器以在工作电极和参比电极之间应用恒定电势的函数测量电流。阻抗测定/电导测定的电化学传感器测量工作电极和参比电极之间的电特性的变化。使用生物传感器的电化学检测可以是电特性中变化的直接测量，或使用包括用于信号产生的标志(氧化还原活性)化合物的辅助反应的间接测量。
本说明书的方面部分地公开了，检测溶液。当生物传感器是基于葡萄糖的生物传感器时，本文公开的检测溶液通常包括缓冲的溶液，所述缓冲的溶液包含氯化镁，对氨基苯基磷酸盐(p-aminofenilphosphate)、和葡萄糖。任选地，这样的检测溶液可包含如本文公开的表面活性剂。
可使用任何缓冲液，条件是所得的缓冲的溶液对实践本文公开的方法有用。缓冲的溶液可被本领域技术人员适当地改变，并通常部分地取决于对流动相期望的pH值、被洗脱的蛋白、和被采用的电导率值。因此，该实施方案的方面可任选地包括，例如，2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸(ADA)、二甲基胂酸(甲次砷酸盐)、哌嗪-N,N'-双(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、胆胺氯化物、N,N'-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、2-{[三(羟甲基)甲基]氨基}乙磺酸(TES)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)、哌嗪-N,N'-双(2-羟基丙磺酸)(POPSO)、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、三(羟甲基)甲胺(Tris)、乙酰胺基甘氨酸、N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸(AMPSO)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)、和3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)；乙酸盐缓冲液，诸如，例如，乙酸镁、乙酸钾、和Tris乙酸盐；硼酸盐缓冲液；柠檬酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液，诸如，例如，磷酸钾缓冲液和磷酸钠缓冲液；盐水缓冲液，诸如，例如，磷酸盐缓冲的盐水(PBS)、HEPES缓冲的盐水(HBS)、及Tris缓冲的盐水(TBS)、盐水柠檬酸钠(SSC)；通用缓冲剂，诸如，例如，包含柠檬酸和磷酸钾的缓冲液、Britton-Robinson缓冲液、Carmody缓冲液等、或其任何组合。如何制造和使用特定缓冲液的非限制性实例被描述于，例如，MOLECULARCLONING、ALABORATORYMANUAL(JosephSambrook&DavidW.Russell编著，ColdSpringHarborLaboratoryPress,第3版，2001)和CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY(FrederickM.Ausubel等人，编著JohnWiley&Sons,2004)中。
可在检测溶液中使用任何浓度的氯化镁，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约55mM、约60mM、约65mM、约70mM、约75mM、约80mM、约85mM、约90mM、约95mM、或约100mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM、至少50mM、至少55mM、至少60mM、至少65mM、至少70mM、至少75mM、至少80mM、至少85mM、至少90mM、至少95mM、或至少100mM。在该实施方案的还其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，至多5mM、至多10mM、至多15mM、至多20mM、至多25mM、至多30mM、至多35mM、至多40mM、至多45mM、至多50mM、至多55mM、至多60mM、至多65mM、至多70mM、至多75mM、至多80mM、至多85mM、至多90mM、至多95mM、或至多100mM。在该实施方案的仍其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，约5mM至约10mM、约5mM至约20mM、约5mM至约30mM、约5mM至约40mM、约5mM至约50mM、约5mM至约60mM、约5mM至约70mM、约5mM至约80mM、约5mM至约90mM、约5mM至约100mM、约10mM至约20mM、约10mM至约30mM、约10mM至约40mM、约10mM至约50mM、约10mM至约60mM、约10mM至约70mM、约10mM至约80mM、约10mM至约90mM、约10mM至约100mM、约20mM至约30mM、约20mM至约40mM、约20mM至约50mM、约20mM至约60mM、约20mM至约70mM、约20mM至约80mM、约20mM至约90mM、或约20mM至约100mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的对氨基苯基磷酸盐，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，约0.1mM、约0.2mM、约0.3mM、约0.4mM、约0.5mM、约0.6mM、约0.7mM、约0.8mM、约0.9mM、约1.0mM、约1.1mM、约1.2mM、约1.3mM、约1.4mM、约1.5mM、约1.6mM、约1.7mM、约1.8mM、约1.9mM、约2.0mM、约2.1mM、约2.2mM、约2.3mM、约2.4mM、或约2.5mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，至少0.1mM、至少0.2mM、至少0.3mM、至少0.4mM、至少0.5mM、至少0.6mM、至少0.7mM、至少0.8mM、至少0.9mM、至少1.0mM、至少1.1mM、至少1.2mM、至少1.3mM、至少1.4mM、至少1.5mM、至少1.6mM、至少1.7mM、至少1.8mM、至少1.9mM、至少2.0mM、至少2.1mM、至少2.2mM、至少2.3mM、至少2.4mM、或至少2.5mM。在该实施方案的还其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，至多0.1mM、至多0.2mM、至多0.3mM、至多0.4mM、至多0.5mM、至多0.6mM、至多0.7mM、至多0.8mM、至多0.9mM、至多1.0mM、至多1.1mM、至多1.2mM、至多1.3mM、至多1.4mM、至多1.5mM、至多1.6mM、至多1.7mM、至多1.8mM、至多1.9mM、至多2.0mM、至多2.1mM、至多2.2mM、至多2.3mM、至多2.4mM、或至多2.5mM。在该实施方案的仍其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，约0.1mM至约0.5mM、约0.1mM至约1.0mM、约0.1mM至约1.5mM、约0.1mM至约2.0mM、约0.1mM至约2.5mM、约0.3mM至约0.5mM、约0.3mM至约1.0mM、约0.3mM至约1.5mM、约0.3mM至约2.0mM、约0.3mM至约2.5mM、约0.5mM至约1.0mM、约0.5mM至约1.5mM、约0.5mM至约2.0mM、约0.5mM至约2.5mM、约0.7mM至约1.0mM、约0.7mM至约1.5mM、约0.7mM至约2.0mM、约0.7mM至约2.5mM、约1.0mM至约1.5mM、约1.0mM至约2.0mM、约1.0mM至约2.5mM、约1.5mM至约2.0mM、约1.5mM至约2.5mM、或约2.0mM至约2.5mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的葡萄糖，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、或约50mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，至少1mM、至少2mM、至少3mM、至少4mM、至少5mM、至少6mM、至少7mM、至少8mM、至少9mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM、或至少50mM。在该实施方案的还其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，至多1mM、至多2mM、至多3mM、至多4mM、至多5mM、至多6mM、至多7mM、至多8mM、至多9mM、至多10mM、至多15mM、至多20mM、至多25mM、至多30mM、至多35mM、至多40mM、至多45mM、或至多50mM。在该实施方案的仍其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，约1mM至约10mM、约1mM至约15mM、约1mM至约20mM、约1mM至约30mM、约1mM至约40mM、约1mM至约50mM、约5mM至约10mM、约5mM至约15mM、约5mM至约20mM、约5mM至约30mM、约5mM至约40mM、约5mM至约50mM、约10mM至约15mM、约10mM至约20mM、约10mM至约30mM、约10mM至约40mM、或约10mM至约50mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的表面活性剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。可在制备检测溶液中以本文公开的浓度使用本文公开的表面活性剂。在该实施方案的方面，检测溶液包含介于0.1％(v/v)和10％(v/v)的清洁剂B-Per，或表面活性剂聚乙二醇山梨糖醇酐烷基酯家族(家族)或聚乙二醇辛基酚醚家族(家族)。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液可包含0.0021g/mL磷酸氢二钠、0.0289g/mL磷酸二氢钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH5.7)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH5.7)检测溶液可包含0.0174g/mL磷酸氢二钾、0.0204g/mL磷酸钾(邻苯二甲酸酯)、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)检测溶液可包含0.0156g/mL磷酸氢二钠、0.0142g/mL磷酸二氢钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是160mM磷酸盐柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液。在该实施方案的一个方面，160mM磷酸盐柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液可包含0.0161g/mL磷酸氢二钠、0.0090g/mL柠檬酸、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)检测溶液可包含1.15μL乙酸、0.0015g/mL乙酸钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mMTris缓冲液(pH9.8)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mMTris缓冲液(pH9.8)检测溶液可包含0.0243g/mLTRIS、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
本说明书的方面部分地公开了，检测溶液的孵育。检测溶液的孵育在促进信号的检测的温度和时间参数下来进行。可在搅拌/旋转下进行检测溶液的孵育。
在检测溶液的孵育期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、或约25℃。在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、或至少25℃。在该实施方案的还其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、或至多25℃。在该实施方案的仍其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的病原体的富集介质孵育使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、或约25℃至约29℃。
在检测溶液的孵育期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。在该实施方案的还其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
在该实施方案的还其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
在该实施方案的方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、或约25℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。
在该实施方案的其他方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、或至少25℃，持续以下的一段时间：例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。
在该实施方案的还其他方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、或至多25℃，持续以下的一段时间：例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
在该实施方案的仍其他方面，检测溶液可在以下的温度被孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、或约25℃至约29℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
孵育检测溶液后，等分试样被取出用于分析可检测的电化学信号。在该实施方案的方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，约1μL、约2μL、约3μL、约4μL、约5μL、约6μL、约7μL、约8μL、约9μL、约10μL、约11μL、约12μL、约13μL、约14μL、约15μL、约16μL、约17μL、约18μL、约19μL、或约20μL。在该实施方案的其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，至少1μL、至少2μL、至少3μL、至少4μL、至少5μL、至少6μL、至少7μL、至少8μL、至少9μL、至少10μL、至少11μL、至少12μL、至少13μL、至少14μL、至少15μL、至少16μL、至少17μL、至少18μL、至少19μL、或至少20μL。在该实施方案的还其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，至多1μL、至多2μL、至多3μL、至多4μL、至多5μL、至多6μL、至多7μL、至多8μL、至多9μL、至多10μL、至多11μL、至多12μL、至多13μL、至多14μL、至多15μL、至多16μL、至多17μL、至多18μL、至多19μL、或至多20μL。在该实施方案的还其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，约1μL至约5μL、约1μL至约10μL、约1μL至约15μL、约1μL至约20μL、2μL至约5μL、约2μL至约10μL、约2μL至约15μL、约2μL至约20μL、约5μL至约10μL、约5μL至约15μL、约5μL至约20μL、约10μL至约15μL、约10μL至约20μL、或约15μL至约20μL。
电化学信号可使用能够测量和/或分析电位式、伏安、安培计和/或阻抗/电导参数的仪器进行分析。通常，这样的仪器使用电脑控制的软件进行操作。非限制性实例是PalmSens3，一种恒电位仪、恒流器和阻抗分析仪和PSTrace，与之配套的软件(PalmSensBV,Utrecht,Netherlands)。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在还其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤和本文公开的富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在还其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在还其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤和本文公开的富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在仍其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在还其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤和本文公开的富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在仍其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
本说明书的方面部分地公开了，进行本文公开的检测病原体的方法的病原体分析试剂盒。本文公开的病原体分析试剂盒包含检测感兴趣的病原体必需的组分。在一些方面，本文公开的病原体分析试剂盒包含检测感兴趣的单个病原体必需的组分。在一些方面，本文公开的病原体分析试剂盒包含检测感兴趣的多个病原体必需的组分。
在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质和富集介质。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、检测溶液和电化学生物传感器。
在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、和能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子、和用于捕获免疫粒子的磁源。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子、用于捕获免疫粒子的磁源、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子、检测溶液、和电化学生物传感器。在一些实施方案中，本文公开的病原体分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子、检测溶液、用于捕获免疫粒子的磁源、和电化学传感器。
本文公开的病原体分析试剂盒还可包含能够测量和/或分析电位式、伏安、安培计和/或阻抗/电导参数的仪器。
本文公开的病原体分析试剂盒还可包括合适的容器，例如，器皿(vessel)、小瓶、管、微型管或微量离心管、试管、烧瓶、瓶、注射器或其他容器。当提供另外的组分或试剂时，试剂盒可包含在其中可放置该试剂或组分的一种或更多种另外的容器。本文中的试剂盒将通常还包含用于容纳试剂(例如器皿)、组合物的装置和处于用于商业销售的封闭限制中的任何其他试剂容器。这样的容器可包括在其中保存期望的小瓶的注射或吹塑模制的塑料容器。
本文公开的病原体分析试剂盒还可包含标签或插入物。标签或插入物包括“印刷品”，例如，纸或纸板，或单独的或贴在组件上、试剂盒或包装材料(例如，箱子)，或附着至容纳试剂盒组分的安瓿、管或小瓶。标签或插入物可另外包含计算机可读介质，诸如磁盘(例如，硬盘，闪速存储器)，光盘诸如CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁带、或电存储介质诸如RAM和ROM或这些的混合物诸如磁/光存储介质、FLASH介质或存储器类型卡。标签或插入物可包含在其中的一种或更多种组分的识别信息、用于在其中的一种或更多种组分的使用的量、如何进行检测感兴趣的病原体的方法的逐步的说明。标签或插入物可包含标识制造商信息、批号、制造商位置和日期和专利信息的信息。
本说明书的各方面还可被如下描述：
1.一种检测样品中病原体的方法，所述方法包括以下步骤：a)在预富集中孵育所述样品，所述预富集包含低生长营养组分、生长抑制剂、和具有抑菌或杀菌作用的表面活性剂，其中所述孵育在37℃下持续约6小时至约24小时；b)在富集介质中孵育来自步骤(a)的预富集介质的等分试样，所述富集介质包含高生长营养组分和柠檬酸铁铵，其中所述孵育在约15℃至约50℃下持续约2小时至约24小时；和c)通过分析来自步骤(b)的富集介质的等分试样来检测病原体的存在或不存在。
2.根据实施方案1所述的方法，其中所述低生长营养组分是蛋白胨。
3.根据实施方案2所述的方法，其中所述蛋白胨是来自动物来源的蛋白胨或来自植物来源的蛋白胨。
4.根据实施方案3所述的方法，其中来自动物来源的所述蛋白胨是酸性酪蛋白胨、细菌蛋白胨、牛肉提取物粉末、酪蛋白胨、酪蛋白cc胨、明胶蛋白胨、肉蛋白胨、多聚蛋白胨、月示蛋白胨，或月示蛋白胨3号。
5.根据实施方案3所述的方法，其中来自植物来源的所述蛋白胨是麦芽提取物、大豆蛋白胨、或酵母提取物。
6.根据实施方案1-5的任何一项所述的方法，其中所述表面活性剂是在约0.001(v/v)至约10.0％(v/v)的浓度。
7.根据实施方案1-6的任何一项所述的方法，其中所述表面活性剂是离子表面活性剂、两性离子(两性)表面活性剂、或者非离子表面活性剂。
8.根据实施方案7所述的方法，其中所述离子表面活性剂是阴离子表面活性剂或阳离子表面活性剂。
9.根据实施方案8所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂是烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、多库酯、磺酸盐含氟表面活性剂、烷基苯磺酸盐、烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基羧酸盐、月桂酰肌氨酸钠、或羧酸盐含氟表面活性剂。
10.根据实施方案8所述的方法，其中所述阳离子表面活性剂是烷基三甲基铵盐、西吡氯铵(CPC)、聚乙氧基牛脂胺(POEA)、苯扎氯铵(BAC)、苄索氯铵(BZT)、5-溴代-5-硝基-1,3-二噁烷、双十八烷基二甲基氯化铵、双十八烷基二甲基溴化铵(DODAB)、pH依赖性伯胺、pH依赖性仲胺、或pH依赖性叔胺。
11.根据实施方案7所述的方法，其中所述两性离子表面活性剂是3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲铵基]-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)、磺基甜菜碱(sultaine)、甜菜碱、或卵磷脂。
12.根据实施方案7所述的方法，其中所述非离子表面活性剂是聚氧化乙烯二醇山梨糖醇酐烷基酯、泊洛沙姆、烷基苯酚聚乙二醇醚、聚乙二醇烷基芳基醚、聚氧化乙烯二醇烷基醚、2-十二烷氧基乙醇(2-dodecoxyethanol)、聚氧化乙烯二醇辛基酚醚、壬基酚聚氧乙烯醚、聚氧化乙烯二醇烷基酚醚、苯氧基聚乙氧基乙醇(phenoxypolyethoxylethanol)、葡萄糖苷烷基醚、麦芽糖苷烷基醚、硫代葡萄糖苷烷基醚、洋地黄皂苷、丙三醇烷基酯、烷基芳基聚醚硫酸盐、醇磺酸盐、山梨糖醇烷基酯、椰油酰胺乙醇胺、蔗糖单月桂酸酯、十二烷基二甲胺氧化物、或胆酸钠。
13.根据实施方案1-6的任何一项所述的方法，其中所述表面活性剂是十四烷基十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸盐、或7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠。
14.根据实施方案1-13的任何一项所述的方法，其中所述生长抑制剂是在约0.001(v/v)至约10.0％(v/v)的浓度。
15.根据实施方案1-14的任何一项所述的方法，其中所述生长抑制剂是三芳基甲烷染料。
16.根据实施方案15所述的方法，其中所述三芳基甲烷染料是甲基紫染料、品红染料、酚染料或孔雀石绿染料。
17.根据实施方案16所述的方法，其中所述甲基紫染料是甲基紫2B、甲基紫6B、或甲基紫10B。
18.根据实施方案16所述的方法，其中所述品红染料是副品红、品红、新品红、碱性品红紫、或酸性品红。
19.根据实施方案16所述的方法，其中所述酚染料是酚红、氯酚红、或甲酚红。
20.根据实施方案16所述的方法，其中所述孔雀石绿染料是孔雀石绿或亮绿。
21.根据实施方案15所述的方法，其中所述三芳基甲烷染料是铝试灵、苯胺蓝WS、金精、金精三羧酸、亮蓝FCF、亮绿、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、溴焦酚红、溴麝香草酚蓝、磺溴酞钠(bromsulphthalein)、氯酚红、考马斯亮蓝、甲酚红、结晶紫、结晶紫内酯、乙基绿、固绿FCF、荧烷、品红、酸性品红、碱性品红紫、龙胆、格林S、淡绿SF淡黄、孔雀石绿、甲基蓝、甲基紫、新品红、副品红、专利蓝V、酚红、酚酞、孟加拉红、百里酚酞、维多利亚蓝BO、水蓝色、二甲苯蓝、或二甲酚橙。
22.根据实施方案1-22的任何一项所述的方法，其中所述预富集介质还包含生长增强剂。
23.根据实施方案22所述的方法，其中所述生长增强剂是铁载体。
24.根据实施方案23所述的方法，其中所述铁载体是气杆菌素(Aerobactin)、Alcaligin、固氮菌素(Azotobactin)、铁载体(Bacillibactin)、去铁胺B、去铁胺E、肠菌素、铁色素(Ferrichrome)、Ferrioxiamina-B、Ferrioxiamina-E、镰孢氨酸C(FusarinineC)、分支杆菌生长素、Ornibactin、Petrobactin、Pyoverdine、绿脓杆菌螯铁蛋白(Pyochelin)、沙门菌螯铁蛋白、StaphyloferringA、弧菌素(Vibriobactin)或耶尔森杆菌素(Yersiniabactin)。
25.根据实施方案1-24的任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的预富集介质的所述等分试样是步骤(b)中使用的富集介质的约1/50至约1/500体积。
26.根据实施方案1-25的任何一项所述的方法，其中所述高生长营养组分是蛋白胨。
27.根据实施方案26所述的方法，其中所述蛋白胨是来自动物来源的蛋白胨或来自植物来源的蛋白胨。
28.根据实施方案27所述的方法，其中来自动物来源的所述蛋白胨是酸性酪蛋白胨、细菌蛋白胨、牛肉提取物粉末、酪蛋白胨、酪蛋白cc胨、明胶蛋白胨、肉蛋白胨、多聚蛋白胨、月示蛋白胨，和月示蛋白胨3号。
29.根据实施方案27所述的方法，其中来自植物来源的所述蛋白胨是麦芽提取物、大豆蛋白胨、或酵母提取物。
30.根据实施方案1-29的任何一项所述的方法，其中所述高生长营养组分是在约1.0(v/v)至约4.0％(v/v)的浓度。
31.根据实施方案1-29的任何一项所述的方法，其中所述柠檬酸铁铵是在约0.1mg/mL至约15mg/mL的浓度。
32.根据实施方案1-31的任何一项所述的方法，其中所述富集介质还包含生长增强剂。
33.根据实施方案32所述的方法，其中所述生长增强剂是铁载体。
34.根据实施方案33所述的方法，其中所述铁载体是气杆菌素(Aerobactin)、Alcaligin、固氮菌素(Azotobactin)、铁载体(Bacillibactin)、去铁胺B、去铁胺E、肠菌素、铁色素(Ferrichrome)、Ferrioxiamina-B、Ferrioxiamina-E、镰孢氨酸C(FusarinineC)、分支杆菌生长素、Ornibactin、Petrobactin、Pyoverdine、绿脓杆菌螯铁蛋白(Pyochelin)、沙门菌螯铁蛋白、StaphyloferringA、弧菌素(Vibriobactin)或耶尔森杆菌素(Yersiniabactin)。
35.根据实施方案1-34的任何一项所述的方法，其中检测步骤(c)使用基于传感器的检测方法、基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、或基于生长的检测方法来进行。
36.根据实施方案35所述的方法，其中所述基于传感器的检测方法是电化学检测方法。
37.根据实施方案36所述的方法，其中所述电化学检测方法包括酶生物传感器、DNA传感器、或免疫传感器。
38.根据实施方案36所述的方法，其中所述电化学检测方法测量电位式参数、安培计参数、伏安参数、阻抗测定(impedimetric)/电导测定参数，或其任何组合。
39.根据实施方案35所述的方法，其中所述基于核酸的检测方法包括基于DNA的检测方法或基于RNA的检测方法。
40.根据实施方案39所述的方法，其中所述基于DNA的检测方法包括DNA印迹分析、基于PCR的测定、序列分析、基于免疫的检测测定，或使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测的杂交测定。
41.根据实施方案40所述的方法，其中所述基于PCR的测定包括基于实时PCR的测定。
42.根据实施方案39所述的方法，其中所述基于RNA的检测方法包括RNA印迹分析、基于RT-PCR的测定、RNA序列分析、基于免疫的检测测定，或使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测的杂交测定。
43.根据实施方案35所述的方法，其中所述基于蛋白的检测方法是基于凝胶的检测方法、基于免疫的检测方法或基于蛋白相互作用的方法。
44.根据实施方案43所述的方法，其中所述基于免疫的检测方法包括蛋白印迹分析、ELISA或免疫沉淀测定。
45.根据实施方案35所述的方法，其中所述基于活性的检测方法包括酶活性测定或基于蛋白功能的测定。
46.根据实施方案45所述的方法，其中所述酶活性测定使用测量底物的消失或产物的形成的分光光度法检测方法。
47.根据实施方案35所述的方法，其中所述基于生长的检测方法包括测量菌落形成的平板接种测定或测量细胞密度的分光光度计测定。
48.根据实施方案1-47的任何一项所述的方法，其中所述病原体是朊病毒、病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫、或寄生虫。
49.根据实施方案48所述的方法，其中所述病毒属于科腺病毒科、小RNA病毒科、疱疹病毒科、肝DNA病毒科、黄病毒科、逆转录病毒科、正粘病毒科、副粘病毒科、乳多空病毒科、多瘤病毒科、弹状病毒科、或披膜病毒科。
50.根据实施方案48所述的方法，其中所述细菌属于以下的属：芽孢杆菌属、博德特氏菌属、疏螺旋体属、布鲁氏菌属、弯曲菌属、衣原体属、嗜衣原体属、梭菌属、棒状杆菌属、肠杆菌属、肠球菌属、埃希氏菌属、弗朗西斯氏菌属、嗜血杆菌属、螺杆菌属、军团菌属、钩端螺旋体属、李斯特菌属、分枝杆菌属、支原体属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、立克次氏体属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、葡萄球菌属、链球菌属、密螺旋体属、弧菌属、或耶尔森氏菌属。
51.根据实施方案48所述的方法，其中所述真菌属于属曲霉菌属、念珠菌属、隐球菌属、组织胞浆菌属、肺囊虫属、或葡萄穗霉属。
52.根据实施方案48所述的方法，其中所述原生动物属于属棘阿米巴属、Balamuthia、隐孢子虫属、双核阿米巴属(Dientamoeba)、内蜒属、内阿米巴属、贾第虫属、嗜碘阿米巴属(Iodamoeba)、利什曼原虫属、耐格里属、疟原虫属、Sappinia、弓形虫属、毛滴虫属、或锥虫属。
53.一种病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒包含预富集介质和富集介质。
54.根据实施方案53所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含检测溶液。
55.根据实施方案53或实施方案54所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包括电化学生物传感器。
56.根据实施方案53-55的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子。
57.根据实施方案53-56的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含用于捕获所述免疫粒子的磁源。
58.根据实施方案53-57的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器。
59.根据实施方案53-58的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含合适的容器。
60.根据实施方案53-59的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含标签或插页。
实施例
仅为了说明性的目的提供以下非限制性实施例，以促进更完整理解所公开的主题。这些实施例不应该被解释为限制本说明书中描述的任何实施方案，包括与公开的方法、采用的检测类型、或可使用本文公开的方法检测的病原体的类型有关的那些。
实施例1
传感器和电化学读数的制备
基于酶的电化学传感器使用丝网印刷方法通过在基底材料上沉积一系列不同材料的层来制造。最初，包含银的化合物糊剂的层直接沉积在聚酯基底(A(500gauge)；DuPontE.I.DeNemours&Co.,Wilmington,DE)上。然后，起反电极和参比电极两者的作用的银/氯化银的层，沉积在一侧上的化合物糊剂上以形成壁。将起工作电极的作用的包含碳石墨(GwentElectronicMaterialsLtd.，Pontypool,UK)的第三层沉积在另一侧以形成相对壁。因此，通道在银/氯化银壁和碳石墨壁中间形成。然后，将绝缘糊剂(GwentElectronicMaterialsLtd.，Pontypool,UK)的层沉积在银/氯化银和碳石墨层上，且然后将压敏粘合剂(KIWO,Inc.，Seabrook,TX)沉积在该绝缘糊剂层上。然后传感器通过在通道内加入生物层来改进，在通道内加入生物层通过在包含葡萄糖脱氢酶(GDH)的酶溶液的存在下在室温下在用5％戊二醛饱和的大气中孵育传感器5分钟，然后其在37℃下干燥30分钟来进行。最后，聚酯(DuPontE.I.DeNemours&Co.,Wilmington,DE)的层被放置在绝缘糊剂层的顶部上以覆盖传感器并包围通道。然后，传感器在60℃下加热，并使用压力辊施加压力以设置聚酯层。将传感器在4℃下存储在干燥的地方直到需要。
期望的病原体的存在通过测量作为与葡萄糖向葡萄糖酸的转化相关的氧化还原反应的结果产生的电化学信号来检测。在该检测过程中，将富集的病原体培养物的等分试样加入至包含对氨基苯基磷酸盐(PAPH)和葡萄糖的检测溶液。可选地，α萘基磷酸盐(alfanaphtylphosphate)可代替PAPH被使用。将如以上描述的传感器插入进该溶液中，且在约200mV的施加电势下使用PalmSens3(一种恒电位仪、恒流器、和阻抗分析仪)和与之配套的软件PSTrace(PalmSensBV,Utrecht,Netherlands)以安培计(amperometrically)方式检测电化学信号。
简单地说，电化学信号的产生的基础机理如下。使用该过程检测的病原体合成酶碱性磷酸酶(ALP)，其随后被释放进培养介质中。包含ALP的富集的病原体培养物的添加导致将PAPH水解为PAP。在传感器的生物层上固定的GDH催化葡萄糖转化为葡萄糖酸，其与氧化PAP为PIQ的氧化还原反应相关。通过传感器检测的电化学信号在它测量当PIQ被还原回PAP时产生的电子时发生。
实施例2
测量的电化学信号、细菌群体和孵育时间之间的关系
电化学信号的产生和它与细菌的群体大小的关系通过测量由包含不同浓度的细菌的群体产生的电流来确定。建立一系列50μL检测溶液，每个包含500mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖。然后，每个检测溶液与1mL磷酸缓冲的盐水的溶液混合，所述溶液以以下浓度之一包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)(Salmonellatyphimurium)：1x102cfu/mL、1x103cfu/mL、1x104cfu/mL、1x105cfu/mL、1x106cfu/mL、1x107cfu/mL、或1x108cfu/mL。然后检测溶液在37℃下孵育30分钟。在约200mV的施加电势下使用如以上所述的PalmSens3以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。如图1中所示，约1x104cfu/mL的细菌浓度产生约0.5μA的可检测信号。另外，在约1x105cfu/mL至约1x107cfu/mL的范围内观察到线性浓度-响应曲线。这些结果表明，约1x104cfu/mL的平均细菌浓度可使用本文公开的电化学检测方法进行检测。
电化学信号的产生和它与孵育时间的关系通过测量由孵育的细菌群体随时间产生的电流来确定。对225mL包含缓冲的蛋白胨和水的培养介质接种10cfu/mL的细菌(鼠伤寒沙门氏菌)，并在37℃下随时间孵育。100μL该接种的介质的等分试样每两小时被采集并加入至50μL检测溶液，所述检测溶液包含500mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖。然后检测溶液在37℃下孵育30分钟。如以上所述，在约200mV的施加电势下使用PalmSens3以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。如图2中所示，在孵育4小时后检测到约0.5μA的可检测信号。在约6小时至约8小时的范围内观察到线性时间-响应曲线。该结果表明，>0.5μA的平均阳极电流指示细菌的存在。
实施例3
沙门氏菌在纯培养物中的存在的确定
由来自纯样品的细菌产生的电化学信号通过测量两种不同浓度的限定的细菌群体产生的电流来确定。对225mL包含缓冲的蛋白胨和0.4％(w/v)Tergitol-4的预富集培养介质接种20cfu或200cfu的细菌(鼠伤寒沙门菌)，剧烈混合10秒，并在37℃下孵育约14至约17小时。
在该预富集步骤之后，对每个细菌浓度采集1mL预富集培养物，并且将10μL等分试样加入至990μL富集培养介质，所述富集培养介质包含2.72％(w/v)Rappaport-Vassiliadis大豆(pH5.2)，所述Rappaport-Vassiliadis大豆包含4.5g/L大豆蛋白胨、7.2g/L氯化钠、1.26g/L磷酸二氢钾、0.18mg/L磷酸氢二钾、13.6mg/L氯化镁和0.036g/L孔雀石绿(Cultimed)，补充有0.62mg/mL的柠檬酸铁铵(Sigma-AldrichCorp.,St.Louis,MO)。用于两种浓度的富集培养物在41.5℃下循环搅拌孵育约5至约7小时。在该富集步骤之后，将20μL的溶液3.0x108抗沙门氏菌免疫磁性粒子/mL(Anti-Salmonella,LifeTechnologies，Inc.，Carlsbad,CA)加入至富集培养物并在室温下循环搅拌孵育30分钟。在该孵育时间后，将富集培养物与磁体接触3分钟以将抗沙门氏菌免疫磁性粒子集中在容器管内，并使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将上清液加入至1mL的100mM磷酸盐缓冲液，混合10秒，与磁体接触3分钟，并使用1mL微量吸液管提取洗涤的上清液。然后，测试所处理的上清液，以使用以下两种不同的测定检测细菌的存在：本文公开的1)平板接种测定；和2)电化学检测测定。
为使用平板接种测定检测细菌的存在，将100μL处理的上清液的等分试样混入500μL的100mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)，并将该混合物平板接种在包含选择性显色试剂(LaboratoriosMICROKIT,S.L.)的琼脂上。然后在37℃下孵育琼脂板约15小时，并鉴定确定的有色细菌菌落。如表1中所示，从来源于20cfu和200cfu两者的纯接种物培养物的上清液样品中观察到显色细菌菌落的生长。这些结果表明，本文公开的生长方法与平板接种测定联合可有效检测病原体的存在。
为使用电化学检测测定检测细菌的存在，将100μL处理的上清液的等分试样加入至50μL检测溶液，所述检测溶液包含500mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖。然后检测溶液在37℃下孵育30分钟。每个溶液的电化学信号在利用Ag/AgCl持续30秒测量为约200mV的施加电势下使用如以上所述的PalmSens3以安培计方式检测。如表1中所示，从来源于20cfu和200cfu两者的纯接种物培养物的上清液样品检测到高于2μA的电流。这些结果表明，本文公开的生长方法与本文公开的电化学检测测定联合可有效检测病原体的存在。
实施例4
沙门氏菌在粪便样品中的存在的确定
由来自样品材料的细菌产生的电化学信号通过测量从粪便材料生成的电流来确定。将每个疑似包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料的二十五克样品加入进225mL预富集培养介质，所述预富集培养介质包含缓冲的蛋白胨和0.4％Tergitol-4，并在37℃下孵育约14至约15小时。还测试了被证明不包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料样品作为阴性对照。关于表2中用于实验1的预富集、富集和免疫分离的过程全部如以上实施例3中所述来进行。另外，使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在如以上实施例3中所述来进行。对于表1中的实验2和3，不进行免疫分离步骤。在这些实验中，在该富集步骤之后，1mL富集的培养介质的等分试样被离心分离，并且使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将上清液加入至1mL的100mM磷酸盐缓冲液，混合10秒，离心分离，并使用1mL微量吸液管提取洗涤的上清液。然后，测试处理的上清液，以如以上实施例3中所述使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在。
如表2中所示，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便样品的上清液样品观察到显色细菌菌落的生长，而没有污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便样品不显示任何显色细菌菌落。另外，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便样品的上清液样品检测到了高于2μA的电流(表2)。然而，如表2中所示，从没有污染细菌鼠伤寒沙门氏菌)的粪便样品测量到低于0.5μA的电流。这些结果表明，污染了病原体的粪便样品可使用本文公开的方法被鉴定，并与没有污染病原体的粪便样品区分开。
实施例5
沙门氏菌在鸡皮肤样品中的存在的确定
由来自样品材料的细菌产生的电化学信号通过测量从来自鸡的皮肤样品生成的电流来确定。将每个疑似包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤的二十五克样品加入进225mL预富集培养介质，所述预富集培养介质包含缓冲的蛋白胨、0.4％(v/v)亮绿、0.4％(w/v)Tergitol-4，剧烈混合10秒，并然后在37℃下孵育约14至约15小时。还测试了被证明不包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤样品作为阴性对照。关于表2中用于实验1的预富集、富集和免疫分离的过程全部如以上实施例3中所述来进行。另外，使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在如以上实施例3中所述来进行。对于表1中的实验2，不进行免疫分离步骤。在该实验中，在该富集步骤之后，1mL富集的培养介质的等分试样被离心分离，并且使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将上清液加入至1mL的100mM磷酸盐缓冲液，混合10秒，离心分离，并使用1mL微量吸液管提取洗涤的上清液。然后，测试处理的上清液，以如以上实施例3中所述使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在。
如表3中所示，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤的上清液样品观察到显色细菌菌落的生长，而没有污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤样品不显示任何显色细菌菌落。另外，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤样品的上清液样品检测到了高于2μA的电流(表2)。然而，如表3中所示，从没有污染细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤样品测量到低于0.5μA的电流。这些结果表明，污染了病原体的鸡皮肤样品可使用本文公开的方法被鉴定，并与没有污染病原体的鸡皮肤样品区分开。
实施例6
沙门氏菌在食物样品中的存在的确定
由来自样品材料的细菌产生的电化学信号通过测量从谷物的食物样品生成的电流来确定。将每个疑似包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的鸡皮肤的二十五克样品加入进225mL预富集培养介质，所述预富集培养介质包含缓冲的蛋白胨、0.4％(v/v)亮绿、0.4％(w/v)Tergitol-4，剧烈混合10秒，并然后在37℃下孵育约14至约15小时。还测试了被证明不包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的食物样品作为阴性对照。关于预富集和富集的过程全部如以上实施例3所述来进行，然而，不进行免疫分离步骤。在该实验中，在该富集步骤之后，1mL富集的培养介质的等分试样被离心分离，并且使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将上清液加入至1mL的100mM磷酸盐缓冲液，混合10秒，离心分离，并使用1mL微量吸液管提取洗涤的上清液。然后，测试处理的上清液，以如以上实施例3中所述使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在。
如表4中所示，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的食物样品的上清液样品观察到显色细菌菌落的生长，而没有污染细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的食物样品不显示任何显色细菌菌落。另外，从来源于污染了细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的食物样品的上清液样品检测到了高于2μA的电流(表2)。然而，如表4中所示，从没有污染细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的食物样品测量到低于0.5μA的电流。这些结果表明，污染了病原体的食物样品可使用本文公开的方法被鉴定，并与没有污染病原体的食物样品区分开。
实施例7
使用分光光度计测定确定沙门氏菌的存在
由来自样品材料的细菌产生的电化学信号通过使用分光光度计测量酶活性来确定。将每个疑似包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料的二十五克样品加入进225mL预富集培养介质，所述预富集培养介质包含缓冲的蛋白胨和0.4％Tergitol-4，并在37℃下孵育约16小时。还测试了被证明不包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料样品作为阴性对照。关于富集和免疫纯化的过程如以上实施例3中所述来进行，不同之处是：接种后前八小时在每个小时从富集培养物取出培养介质的等分试样，并然后在接种后24小时重复。将免疫磁性粒子重悬在50μL的200mM磷酸盐缓冲液(pH5.7)中并在室温下孵育过夜。然后，将孵育的样品与磁体接触3分钟以将免疫磁性粒子集中在容器管内，并使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将50μL上清液的等分试样加入至来自96孔板的孔，所述孔包含50μL底物溶液，所述底物溶液包含5.4mM对硝基苯酚磷酸盐。标准溶液还被制备并包含在0.5N氢氧化钠中的0.05mM对硝基苯酚。还建立了对照孔。阴性对照孔包含50μL的200mM磷酸盐缓冲液(pH5.7)和50μL的底物溶液。阳性对照孔包含2μL的0.5-3单位/mg的酸性磷酸酶、48μL的200mM磷酸盐缓冲液(pH5.7)和50μL的底物溶液。将板在37℃下孵育30分钟，并然后200μL0.5N氢氧化钠的停止溶液。在碱性磷酸酶存在下，对硝基苯酚磷酸盐将被转化为对硝基苯酚，导致颜色变化。使用分光光度计测量每个孔在405nm下的吸收。基于从标准溶液产生的标准曲线，确定每个等分试样的碱性磷酸酶活性的量。
如图3中所示，对于受污染的粪便样品，用该信号在前6小时观察到线性时间-响应曲线，然后，在时间过程的剩余部分达到平稳(plateauing)。在整个时间过程期间，空白和阴性对照未显示酶活性。这些结果表明，细菌的存在可使用分光光度测量来检测。
实施例8
使用PCR测定确定沙门氏菌的存在
由来自样品材料的细菌产生的电化学信号通过使用分光光度计测量酶活性来确定。将每个疑似包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料的二十五克样品加入进225mL预富集培养介质，所述预富集培养介质包含缓冲的蛋白胨和0.4％Tergitol-4，并在37℃下孵育约16小时。还测试了被证明不包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)的粪便材料样品作为阴性对照。关于富集和免疫纯化的过程如以上实施例3中所述来进行。将免疫磁性粒子重悬在200μL无DNA酶的水中，并然后在98℃下加热30分钟以裂解细胞。在4℃下以6000rpm离心分离10分钟后，将上清液转移至新管。将5μL等分试样加入至15μLPCR反应混合物，所述反应混合物包含10μM特异于并诊断鼠伤寒沙门氏菌的正向引物和反向引物。如下进行PCR：在95℃下持续10分钟的1个循环和95℃持续30秒和60℃持续1分钟的多达40个循环。在每个循环期间扩增的靶DNA的水平通过检测荧光并记录RFU来测量。可选地，进行测定而无免疫纯化步骤。在这种情况下，在完成富集步骤的孵育周期后，培养物在4℃下以6000rpm离心分离10分钟，将上清液转移至新管，并使用5μL等分试样用于PCR反应。
如图4A-C中所示，在扩增的20个循环后最初观察到靶DNA的检测。靶DNA的扩增显示S形曲线，其通常在第30个循环开始达到稳定。在整个时间过程期间，阴性对照未显示靶DNA扩增的可检测的水平。这些结果表明，细菌的存在可使用基于PCR的测定来检测。
实施例9
其他生物体的存在的确定
由不同的细菌产生的电化学信号使用三种不同的检测溶液以各种细菌浓度来确定。对于三种不同的pH值，如下建立一系列50μL检测溶液：1)200mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖；2)200mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖；或3)200mMTRIS缓冲液(pH9.8)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖。然后，每个检测溶液与1mL磷酸缓冲的盐水的溶液混合，所述溶液以以下浓度之一包含细菌：1x102cfu/mL、1x103cfu/mL、1x104cfu/mL、1x105cfu/mL、1x106cfu/mL、1x107cfu/mL、或1x108cfu/mL。测试了如下的细菌：空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)集群1、空肠弯曲菌ST45、大肠弯曲菌(Campylobactercoli)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、鼠伤寒沙门氏菌、假单胞菌属物种、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaureginosa)、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)、MRSA、变形杆菌属物种(Proteussp.)、苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、柠檬酸杆菌属物种(Citrobactersp.)，志贺氏菌属物种、金黄色葡萄球菌(Staphylococccusaureus)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、和粪肠球菌。加入细菌后，混合这些检测溶液10秒，并然后在37℃下孵育30分钟。使用本文公开的电化学检测测定检测细菌的存在如以上实施例3中所述来进行。
如图5-7中所示，对于所有测试的细菌，约1x104cfu/mL的细菌浓度产生约0.5μA的可检测的信号，尽管检测溶液的pH对某些细菌物种的检测的灵敏度有影响。另外，在约1x105cfu/mL至约1x107cfu/mL的范围内观察到线性浓度-响应曲线。这些结果表明，约1x104cfu/mL的平均细菌浓度可使用本文公开的电化学检测方法进行检测。
最后，应当理解，尽管本说明书的方面通过参考特定的实施方案被强调，本领域的技术人员将容易理解这些公开的实施方案仅是对本文公开的主题的原理的说明。因此，应该理解，公开的主题决不限于本文描述的特定方法学、方案和/或试剂等。因此，对公开的主题的各种修改或改变，或公开的主题的替代性配置可根据本文的教导作出，而不偏离本说明书的精神。最后，本文使用的术语仅为了描述特定实施方案的目的，并不旨在限制唯一地由权利要求书限定的本发明的范围。因此，本发明不限于如所显示和所描述的精确内容。
本文描述了本发明的某些实施方案，包括本发明人已知用于进行本发明的最佳的模式。当然，在阅读了前述说明书后，对这些描述的实施方案的变化对于本领域的普通技术人员将变得明显。本发明人预期了技术人员酌情采用此类变化，并且本发明人设想了本发明另外以不同于本文具体描述的方式被实施。因此，本发明包括被适用法律许可的所附权利要求书中描述的主题的所有修改和等同物。此外，在其所有可能的变化中上述实施方案的任何组合由本发明所涵盖，除非本文另有说明或另外与上下文明显矛盾。
本发明的替代性实施方案、要素或步骤的分组不应被解释为限制。每个组成员可被单独地或与本文公开的其他组成员组合来提及和要求保护。预期，为了方便和/或专利性的原因，组的一个或更多个成员可被包括于组或从组中删除。当任何此类包括或删除发生时，本说明书被认为包含作为修改的组，从而实现在所附权利要求书中使用的所有马库什组(Markushgroup)的书面描述。
除非另外指明，在本说明书和权利要求书中使用的表示特征、项目、数量、参数、性质、术语等的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。如本文所用，术语“约”意指如此合格的特征、项目、数量、参数、性质、或术语包含规定的特征、项目、数量、参数、性质或术语的值的以上和以下正或负10％的范围。因此，除非相反指示，本说明书和所附权利要求书中所示的数字参数为可变化的近似值。至少，而非试图限制对权利要求书的范围的等同原则的应用，每个数字指示应至少根据所报告的有效数字的数目和通过应用通常的约数技术来解释。尽管列出本发明的广泛范围的数值范围和值为近似值，但在具体实施例中所示的数值范围和值则尽可能精确地来报告。然而，任何数值范围或值固有地包含一定的误差，该误差是由其各自的试验测量中发现的标准偏差必然产生的。本文中值的数值范围的列举仅仅意图用作单独地提及落入所述范围的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指明，将数值范围的各单独值并入到本说明书中，如同其在本文被单独描述。
术语“一个(a)”、“一个(an)”、“该(the)”和描述本发明的上下文中使用的类似指代物(尤其在以下权利要求书的上下文中)应被解释为既覆盖单数形式又覆盖复数形式，除非本文另外指明或上下文明显矛盾。可按任何合适顺序进行本文中描述的所有方法，除非本文另外指明或另外与上下文明显矛盾。本文提供的任何和全部实施例，或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意图更好地说明本发明而不是对另外要求保护的本发明的范围施加限制。本说明书中的语言不应解释为表明任何未要求保护的要素对实施本发明必不可少。
本文公开的具体实施方案可使用语言的由...组成或基本上由...组成在权利要求书中进一步限制。当在权利要求书中使用时，无论作为已提交或每次修改增加的，过渡术语“由...组成”不包括在权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。过渡术语“基本由...组成”将权利要求书的范围限制为指定的材料或步骤和不实质影响基本和新颖特征的那些。所要求保护的本发明的实施方案在本文中被内在地或明确地描述并启用。
本说明书中引用和标识的所有专利、专利出版物、和其他出版物通过引用以其整体出于描述和公开的目的被单独地和清楚地并入本文，例如，与本发明有关可被使用的在这样的出版物中描述的组合物和方法论。这些出版物以其先于本申请的申请日期的公开内容被单独地提供。就这一点而言，任何内容不应该被解释为本发明人没有资格借助在先发明或出于任何其他原因先于这样的公开内容的承认。关于日期或陈述，关于这些文件的内容的所有表述是基于对本申请人可用的信息，并不构成关于这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。

Claims (32)

1.一种检测样品中病原体的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在预富集中孵育所述样品，所述预富集包含低生长营养组分、生长抑制剂、和具有抑菌或杀菌作用的表面活性剂，其中所述孵育在37℃下持续约6小时至约24小时；
b)在富集介质中孵育来自步骤(a)的预富集介质的等分试样，所述富集介质包含高生长营养组分和柠檬酸铁铵，其中所述孵育在约15℃至约50℃下持续约2小时至约24小时；和
c)通过分析来自步骤(b)的富集介质的等分试样来检测病原体的存在或不存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述低生长营养组分是蛋白胨。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述蛋白胨是来自动物来源的蛋白胨或来自植物来源的蛋白胨。
4.根据权利要求1-3的任何一项所述的方法，其中所述表面活性剂是在约0.001(v/v)至约10.0％(v/v)的浓度。
5.根据权利要求1-4的任何一项所述的方法，其中所述表面活性剂是离子表面活性剂、两性离子(两性)表面活性剂、或者非离子表面活性剂。
6.根据权利要求1-5的任何一项所述的方法，其中所述生长抑制剂是在约0.001(v/v)至约10.0％(v/v)的浓度。
7.根据权利要求1-6的任何一项所述的方法，其中所述生长抑制剂是三芳基甲烷染料。
8.根据权利要求1-7的任何一项所述的方法，其中所述预富集介质还包含生长增强剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述生长增强剂是铁载体。
10.根据权利要求1-9的任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的预富集介质的所述等分试样是步骤(b)中使用的富集介质的约1/50至约1/500体积。
11.根据权利要求1-10的任何一项所述的方法，其中所述高生长营养组分是蛋白胨。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述蛋白胨是来自动物来源的蛋白胨或来自植物来源的蛋白胨。
13.根据权利要求1-12的任何一项所述的方法，其中所述高生长营养组分是在约1.0(v/v)至约4.0％(v/v)的浓度。
14.根据权利要求1-13的任何一项所述的方法，其中所述柠檬酸铁铵是在约0.1mg/mL至约15mg/mL的浓度。
15.根据权利要求1-14的任何一项所述的方法，其中所述预富集介质还包含生长增强剂。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述生长增强剂是铁载体。
17.根据权利要求1-16的任何一项所述的方法，其中检测步骤(c)使用基于传感器的检测方法、基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、或基于生长的检测方法来进行。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述基于传感器的检测方法是电化学检测方法。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述电化学检测方法包括酶生物传感器、DNA传感器、或免疫传感器。
20.根据权利要求17所述的方法，其中所述基于核酸的检测方法包括基于DNA的检测方法或基于RNA的检测方法。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述基于DNA的检测方法包括DNA印迹分析、基于PCR的测定、序列分析、基于免疫的检测测定、或使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测的杂交测定。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述基于PCR的测定包括基于实时PCR的测定。
23.根据权利要求17所述的方法，其中所述基于蛋白的检测方法是基于凝胶的检测方法、基于免疫的检测方法或基于蛋白相互作用的方法。
24.根据权利要求17所述的方法，其中所述基于活性的检测方法包括酶活性测定或基于蛋白功能的测定。
25.根据权利要求17所述的方法，其中所述基于生长的检测方法包括测量菌落形成的平板接种测定或测量细胞密度的分光光度计测定。
26.根据权利要求1-25的任何一项所述的方法，其中所述病原体是朊病毒、病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫、或寄生虫。
27.一种病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒包含预富集介质和富集介质。
28.根据权利要求27所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含检测溶液。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包括电化学生物传感器。
30.根据权利要求27-29的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含能够结合感兴趣的病原体的免疫磁性粒子。
31.根据权利要求27-30的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含用于捕获免疫粒子的磁源。
32.根据权利要求27-31的任何一项所述的病原体分析试剂盒，所述病原体分析试剂盒还包含能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器。
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