CN102605039A - 一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺，包括如下重量份的原料配制而成：蛋白胨5-15；乳糖5-15；L-半胱氨酸0.1-1；牛肉粉1-9；氯化钠1-9；柠檬酸钠1-9；胆盐5-15；硫代硫酸钠1-9；结晶紫0.001-0.01；柠檬酸铁铵0.5-1.5；溴麝香草酚蓝0.050-0.070；琼脂11-18。本发明操作简便，能减少检测中所需培养基种类，使检测时间从常规方法的4～7d缩短至2d，且具有检测灵敏度高的特点。

Description

一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺

技术领域

本发明涉及一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺。

 

背景技术

培养基是指由人工配制的适合细菌生长繁殖的营养基质，可供微生物培养、分离、研究和保存用的营养物制品，是疾病预防控制（防疫站），进出口商品检验，畜牧兽医兽药检验，农业微生物组培，工业微生物检验，如食品检验、药品生物检验、化妆品检验、饮用水检验、一次性卫生用品检验等诸多行业检验细菌的途径，具有广泛的应用前进，与人类的生命息息相关。

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人蓄共患病之一，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌，传统培养检测时间需要4-7天才能完成。因此，在需要及时、快速评价食物中微生物的安全时，在48h内检出沙门氏菌，这种方法称为快速检测。但是由于目前检测沙门氏菌的传统培养基选择性和特异性不能达到令人满意的效果，（传统培养基的配方有以下几种:1.缓冲蛋白胨水增菌，配方：蛋白胨10克、氯化钠5克、磷酸氢二钠9克、磷酸二氢钾1.5克；2.转入四硫磺酸盐煌绿增菌液增菌 (TTB) ，配方：硫代硫酸钠25克、蛋白胨14克、牛胆盐1克、碳酸钙7克、煌绿0.01克、0.1mol/L的碘液20ml；和GN增菌液增菌，配方：胰蛋白胨20克、葡萄糖1克、甘露醇2克、柠檬酸钠5克、去氧胆酸钠0.5克、磷酸氢二钾4克、磷酸二氢钾1.5克、氯化钠5克；3，转入HE琼脂平板分离，配方：蛋白胨12克、牛肉膏3克、乳糖12克、蔗糖12克、水杨素2克、胆盐20克、氯化钠5克、琼脂15克、溴麝香草酚蓝0.064克、酸性品红0.1克、硫代硫酸钠6.8克、柠檬酸铁按0.8克、去氧胆酸钠2克。）沙门氏菌检出时间比较长分辨率低，往往只能通过经验来判定，而且对于初学者对于结果的判定则有相当难度。             

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供了一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺，本发明操作简便，能减少检测中所需培养基种类，使检测时间从常规方法的4～7d缩短至2d，且具有检测灵敏度高的特点。

本发明为达到上述的目的，本发明采用如下技术方案：

一种结晶紫沙门菌培养基，包括如下重量份的原料配制而成：

蛋白胨          5-15； （厂商:三门峡高山生物制品有限公司）                     

乳糖            5-15； （厂商：常州朗生生物药业有限公司）

L-半胱氨酸      0.1-1；（厂商：广州金华大化学试剂有限公司）                     

牛肉粉          1-9； （厂商：三门峡高山生物制品有限公司）

氯化钠          1-9； （厂商：浙江省盐业总公司）                   

柠檬酸钠        1-9； （厂商：广州金华大化学试剂有限公司）

胆盐            5-15；  （厂商：常德云港生物科技有限公司）

硫代硫酸钠      1-9； （厂商：广州金华大化学试剂有限公司）

结晶紫         0.001-0.01；（厂商:天津光复精细化工研究所）                    

柠檬酸铁铵      0.5-1.5；（厂商: 国药集团化学试剂有公司）

溴麝香草酚蓝    0.050-0.070； （厂商：国药集团化学试剂）                    

琼脂            11-18。 （厂商：洞头金源藻类制品有限公司）

所述的原料的重量份优选为：

蛋白胨           10；                       

乳糖             10；

L-半胱氨酸      0.5；                      

牛肉粉           5；

氯化钠           5；                        

柠檬酸钠         5；

胆盐            10；         

硫代硫酸钠       5；

结晶紫          0.005；                    

柠檬酸铁铵       1；

溴麝香草酚蓝    0.064；                    

琼脂             12。

一种结晶紫沙门菌培养基的生产工艺，包括如下步骤：首先按上述配比称量除琼脂外的各原料，混合均匀，置蒸馏水中,用电炉加热至溶解，并不断搅拌；待完全溶解后自然冷却至25-30℃，用碳酸钠调节pH值到7.2-7.4，然后加入上述配比的琼脂进行三次煮沸灭菌，灭菌后pH值达到7.2-7.4；待冷至55℃左右倾注90mm的洁净平皿，15-20ml/平皿，待其凝固备用；完成整个结晶紫沙门菌培养基的生产工艺。

本发明的有益效果是：本发明制备的结晶紫沙门菌培养基对沙门氏菌的检出率及对于结果的判定与现行培养基有较为明显的优势：其成分除了必要的胨，牛肉粉等碳源、氮源外，其它则为选择性抑制剂和缓冲剂。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及结晶紫共同抑制肠道非病原性菌及大部分大肠埃希氏菌生长，对沙门菌及志贺氏菌相对抑制性较弱，硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，柠檬酸铁铵可缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应使其菌落呈黑色，溴麝香草酚蓝指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌以区别，前者为黄色菌落，后者为无色菌落。可实现对沙门氏菌的分离与鉴定工作同步进行，使沙门氏菌检测所需时间从常规方法的4～7d缩短至2d；采用SC增菌液进行增菌后，在结晶紫沙门菌培养基培养基上进行分离培养，对沙门菌的快速检测，大大减少了检测中所需培养基种类，同时培养过程全部在36℃下进行，操作简便；采用SC增菌液，对沙门菌及志贺菌可同时恢复，比常规检测方法中采用缓冲蛋白胨水和四硫磺酸盐煌绿增菌液更好，使检测灵敏度得到较大的提高。

 

具体实施方式

实施例1

本实施例的一种结晶紫沙门菌培养基，所述的原料的重量份为：

蛋白胨10g；乳糖10 g；L-半胱氨酸0.5 g；牛肉粉5 g；氯化钠5 g；柠檬酸钠5 g；胆盐10 g；硫代硫酸钠5 g；结晶紫0.005 g；柠檬酸铁铵 1 g；溴麝香草酚蓝0.064 g；琼脂12 g。本实施例培养基的生产工艺，包括如下步骤：首先按上述配比称量除琼脂外的各原料，混合均匀，置蒸馏水中,用电炉加热至溶解，并不断搅拌；待完全溶解后自然冷却至25-30℃，用碳酸钠调节pH值达到7.2-7.4，然后加入上述配比的琼脂进行三次煮沸灭菌，灭菌后pH值达到7.2-7.4；待冷至55℃左右倾注90mm的洁净平皿，15-20ml/平皿，待其凝固备用；完成整个结晶紫沙门菌培养基的生产工艺。 

进行物理性状检验：上述配方配制而成的培养基倾注90mm平皿可透视五号字体；颜色应为草绿色。细菌学检测：所调配方检验结果经35℃～37℃培养18～24h，经培养后大肠埃希氏菌25922抑制性生长，黄色菌落，鼠伤寒沙门氏菌14028生长良好，黑色菌落，F2a生长良好，无色菌落。本实施例制备的结晶紫沙门菌培养基对沙门氏菌的检出率及对于结果的判定与现行培养基有较为明显的优势：其成分除了必要的胨，牛肉粉等碳源、氮源外，其它则为选择性抑制剂和缓冲剂。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及结晶紫共同抑制肠道非病原性菌及大部分大肠埃希氏菌生长，对沙门菌及志贺氏菌相对抑制性较弱，硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，柠檬酸铁铵可缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应使其菌落呈黑色，溴麝香草酚蓝指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌以区别，前者为黄色菌落，后者为无色菌落。可实现对沙门氏菌的分离与鉴定工作同步进行，使沙门氏菌检测所需时间从常规方法的4～7d缩短至2d；采用SC增菌液进行增菌后，在结晶紫沙门菌培养基培养基上进行分离培养，对沙门菌的快速检测，大大减少了检测中所需培养基种类，同时培养过程全部在36℃下进行，操作简便；采用SC增菌液（购于广东环凯微生物科技有限公司），对沙门菌及志贺菌可同时恢复，比常规检测方法中采用缓冲蛋白胨水和四硫磺酸盐煌绿增菌液更好，使检测灵敏度得到较大的提高。

实施例2

本实施例的一种结晶紫沙门菌培养基，所述的原料的重量份为：

蛋白胨5 g；乳糖5 g；L-半胱氨酸0.1 g；牛肉粉1 g；氯化钠1 g；柠檬酸钠1 g；胆盐5 g；硫代硫酸钠1 g；结晶紫0.001 g；柠檬酸铁铵0.5 g；溴麝香草酚蓝0.050 g；琼脂11 g。本实施例培养基的生产工艺，包括如下步骤：首先按上述配比称量除琼脂外的各原料，混合均匀，置蒸馏水中,用电炉加热至溶解，并不断搅拌；待完全溶解后自然冷却至25-30℃，用碳酸钠调节pH值达到7.2-7.4，然后加入上述配比的琼脂进行三次煮沸灭菌，灭菌后pH值达到7.2-7.4；待冷至55℃左右倾注90mm的洁净平皿，15-20ml/平皿，待其凝固备用；完成整个结晶紫沙门菌培养基的生产工艺。  

进行物理性状检验：上述配方配制而成的培养基倾注90mm平皿可透视五号字体；颜色应为草绿色。细菌学检测：所调配方检验结果经35℃～37℃培养18～24h，经培养后大肠埃希氏菌25922抑制性生长，黄色菌落，鼠伤寒沙门氏菌14028生长良好，黑色菌落，F2a生长良好，无色菌落。本实施例制备的结晶紫沙门菌培养基对沙门氏菌的检出率及对于结果的判定与现行培养基有较为明显的优势：其成分除了必要的胨，牛肉粉等碳源、氮源外，其它则为选择性抑制剂和缓冲剂。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及结晶紫共同抑制肠道非病原性菌及大部分大肠埃希氏菌生长，对沙门菌及志贺氏菌相对抑制性较弱，硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，柠檬酸铁铵可缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应使其菌落呈黑色，溴麝香草酚蓝指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌以区别，前者为黄色菌落，后者为无色菌落。可实现对沙门氏菌的分离与鉴定工作同步进行，使沙门氏菌检测所需时间从常规方法的4～7d缩短至2d；采用SC增菌液进行增菌后，在结晶紫沙门菌培养基培养基上进行分离培养，对沙门菌的快速检测，大大减少了检测中所需培养基种类，同时培养过程全部在36℃下进行，操作简便；采用SC增菌液（购于广东环凯微生物科技有限公司），对沙门菌及志贺菌可同时恢复，比常规检测方法中采用缓冲蛋白胨水和四硫磺酸盐煌绿增菌液更好，使检测灵敏度得到较大的提高。

 

实施例3

本实施例的一种结晶紫沙门菌培养基，所述的原料的重量份为：

蛋白胨15 g；乳糖15 g；L-半胱氨酸1 g；牛肉粉9 g；氯化钠9 g；柠檬酸钠9 g；胆盐15 g；硫代硫酸钠9 g；结晶紫0.01 g；柠檬酸铁铵 1.5 g；溴麝香草酚蓝0.070 g；琼脂18 g。本实施例培养基的生产工艺，包括如下步骤：首先按上述配比称量除琼脂外的各原料，混合均匀，置蒸馏水中,用电炉加热至溶解，并不断搅拌；待完全溶解后自然冷却至25-30℃，用碳酸钠调节pH值达到7.2-7.4，然后加入上述配比的琼脂进行三次煮沸灭菌，灭菌后pH值达到7.2-7.4；待冷至55℃左右倾注90mm的洁净平皿，15-20ml/平皿，待其凝固备用；完成整个结晶紫沙门菌培养基的生产工艺。

进行物理性状检验：上述配方配制而成的培养基倾注90mm平皿可透视五号字体；颜色应为草绿色。细菌学检测：所调配方检验结果经35℃～37℃培养18～24h，经培养后大肠埃希氏菌25922抑制性生长，黄色菌落，鼠伤寒沙门氏菌14028生长良好，黑色菌落，F2a生长良好，无色菌落。本实施例制备的结晶紫沙门菌培养基对沙门氏菌的检出率及对于结果的判定与现行培养基有较为明显的优势：其成分除了必要的胨，牛肉粉等碳源、氮源外，其它则为选择性抑制剂和缓冲剂。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及结晶紫共同抑制肠道非病原性菌及大部分大肠埃希氏菌生长，对沙门菌及志贺氏菌相对抑制性较弱，硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，柠檬酸铁铵可缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应使其菌落呈黑色，溴麝香草酚蓝指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌以区别，前者为黄色菌落，后者为无色菌落。可实现对沙门氏菌的分离与鉴定工作同步进行，使沙门氏菌检测所需时间从常规方法的4～7d缩短至2d；采用SC增菌液进行增菌后，在结晶紫沙门菌培养基培养基上进行分离培养，对沙门菌的快速检测，大大减少了检测中所需培养基种类，同时培养过程全部在36℃下进行，操作简便；采用SC增菌液（购于广东环凯微生物科技有限公司），对沙门菌及志贺菌可同时恢复，比常规检测方法中采用缓冲蛋白胨水和四硫磺酸盐煌绿增菌液更好，使检测灵敏度得到较大的提高。

Claims (3)

1.一种结晶紫沙门菌培养基，其特征在于包括如下重量份的原料配制而成：

蛋白胨          5-15；                       

乳糖            5-15；

L-半胱氨酸      0.1-1；                      

牛肉粉          1-9；

氯化钠          1-9；                       

柠檬酸钠        1-9； 

胆盐            5-15；      

硫代硫酸钠      1-9；

结晶紫          0.001-0.01；                    

柠檬酸铁铵      0.5-1.5；

溴麝香草酚蓝    0.050-0.070；                    

琼脂            11-18。

2.如权利要求1所述的一种结晶紫沙门菌培养基，其特征在于：所述的原料的重量份为：

蛋白胨           10；                       

乳糖             10；

L-半胱氨酸      0.5；                      

牛肉粉           5；

氯化钠           5；                        

柠檬酸钠         5；

胆盐            10；  

硫代硫酸钠       5；

结晶紫          0.005；                    

柠檬酸铁铵       1；

溴麝香草酚蓝    0.064；                    

琼脂             12。

3.一种如权利要求1所述的结晶紫沙门菌培养基的生产工艺，其特征在于包括如下步骤：首先按上述配比称量除琼脂外的各原料，混合均匀，置蒸馏水中,用电炉加热至溶解，并不断搅拌；待完全溶解后自然冷却至25-30℃，用碳酸钠调节pH值达到7.2-7.4，然后加入上述配比的琼脂进行三次煮沸灭菌，灭菌后pH值达到7.2-7.4；待冷至55℃左右倾注90mm的洁净平皿，15-20ml/平皿，待其凝固备用；完成整个结晶紫沙门菌培养基的生产工艺。