CN109642247A - 用于检测沙门氏菌疫苗菌株的快速方法 - Google Patents
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Abstract
本说明书公开了检测感兴趣的沙门氏菌(Salmonella)活疫苗细菌的方法和在进行这些方法中有用的组分，包括第一和第二预富集介质、以及富集介质和检测溶液。
Description
沙门氏菌(Salmonella)可在生产、加工和制备期间污染食物或食物动物。同样，沙门氏菌可污染水源或从这样污染的水中捕获的海鲜。人体暴露于沙门氏菌可引起疾病，最经常肠胃炎，但还可能更严重的疾病诸如沙门氏菌疾病和甲型肝炎。暴露于沙门氏菌可通过直接接触或摄入污染的食物或水发生，或基于交叉污染间接发生。尽管美国具有世界上最安全的食品供应之一，每年仍存在数以百万计的食物传染疾病病例。
早期和快速检测沙门氏菌污染对预防疾病的大规模爆发并确保公众全体健康是重要的。在过去的25年中，增加灵敏度和特异性以及减少进行这些测定所牵涉的时间的沙门氏菌测定已由应用微生物和微生物分析方面的专家开发。虽然对于这些所谓的快速测定不存在普遍接受的定义，这些方法比传统方法更简单快速进行，或更容易实现，或更灵敏和特异。用于沙门氏菌检测的目前可用的快速测定尽管有该名称，但仍需要数天才能完成测定并确定食物或水供应是否被沙门氏菌活疫苗细菌污染。
与减少进行沙门氏菌检测测定需要的时间相关的主要障碍是，一方面测定的灵敏度、特异性及较低的检测限之间的平衡，和具有足够的沙门氏菌存在以检测其高于污染微生物和背景噪音的存在。
为了对抗家禽、牲畜或人类中的沙门氏菌感染，已经创建了沙门氏菌活疫苗菌株，以引发产生针对引起感染的致病性沙门氏菌菌株(或沙门氏菌野菌株(Salmonella fieldstrains))的保护性抗体的免疫反应。不像沙门氏菌野菌株，沙门氏菌活疫苗菌株是非致病性的。已经开发了基于平板接种(plating)和基于基因型分型(genotyping)的测定来检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在。然而，这些测定不仅耗时，而且在基于基因型分型的测定的情况下，需要复杂的设备。另外，目前的测定不能快速区分沙门氏菌野菌株和沙门氏菌活疫苗菌株，这产生对于用于鉴定感染性沙门氏菌野菌株的检测测定的问题，即由于非感染性沙门氏菌活疫苗菌株的存在而导致的假阳性。因此，对开发能够鉴定和区分沙门氏菌野菌株和沙门氏菌活疫苗菌株的沙门氏菌检测测定存在需求。
本说明书公开了一种用于检测沙门氏菌活疫苗细菌的快速方法，该方法提供了高灵敏度和特异性、较低的检测限，但可比目前可用的方法更快速进行。
概述
本说明书的方面公开了一种检测样品中沙门氏菌活疫苗菌株的方法。本文公开的方法包括：a)在第一液体预富集介质中孵育样品，所述第一液体预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一生长抑制剂、0.5g/L至4.5g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约40℃持续约5小时至约10小时；b)在液体富集介质中孵育来自步骤(a)的第一预富集介质的等分试样，所述富集介质包含6g/L至10g/L的蛋白胨、3g/L至7g/L胆盐、2g/L至6g/L肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约14小时至约20小时；c)纯化所述液体富集介质或其等分试样以增加沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物；d)在第二液体预富集介质中孵育来自步骤(c)的富集介质的等分试样，所述第二液体预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一生长抑制剂、0.5g/L至4.5g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约1小时至约5小时；以及e)通过分析来自步骤(d)的所述第二液体预富集介质的等分试样检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在或不存在。
本说明书中的其他方面公开了沙门氏菌活疫苗分析试剂盒。在这些方面，分析试剂盒包含如本文公开的预富集介质和富集介质。在其他方面，分析试剂盒还可包含检测溶液。还在其他方面，分析试剂盒还可包含免疫纯化试剂体系。还在其他方面，分析试剂盒还可包含提供对如何使用该试剂盒的说明的标签或插页。
附图简述
图1示出了本文公开的方法的流程图。
图2示出了细菌群体的不同密度和电流-时间曲线(chronoamperometric)获得的信号之间的比例的图。
图3示出了记录的电化学信号和特定细菌负荷增殖中的进展之间的比例的图。
说明
本说明书公开了一种检测样品中沙门氏菌活疫苗的方法。方法包括使用选择性预生长和生长介质的预富集步骤和富集步骤。这些步骤，连同特定时间和温度条件的组合，逐渐增加沙门氏菌活疫苗细菌的群体，以及有效减少不需要的生物体的群体和/或干扰沙门氏菌活疫苗细菌的检测的其他背景噪音。沙门氏菌活疫苗细菌群体的选择性增加以及不需要的生物体和/或其他背景噪音的有效除去允许比目前可用的方法更灵敏和精确地检测沙门氏菌活疫苗细菌。另外，本文公开的方法允许更快速检测沙门氏菌活疫苗细菌，因为它可在约8小时至约30小时内完成；现有的沙门氏菌活疫苗细菌检测方法需要约2天至约5天完成。在一个实施方案中，将本文公开的方法概述于图1中。
本说明书的方面部分地公开了沙门氏菌活疫苗。沙门氏菌细菌菌株可以是沙门氏菌活疫苗细菌菌株或非沙门氏菌活疫苗细菌菌株(也被称为沙门氏菌活疫苗菌株)。沙门氏菌活疫苗细菌的沙门氏菌细菌菌株是引起或促进哺乳动物中的疾病、感染或其他不良反应的菌株。沙门氏菌活疫苗细菌的沙门氏菌细菌菌株被认为是异常菌群。非沙门氏菌活疫苗细菌的沙门氏菌细菌菌株是被认为对哺乳动物无害的菌株，因为哺乳动物中没有明显的与非沙门氏菌活疫苗细菌的沙门氏菌细菌菌株的存在相关的疾病、感染或其他不良反应。沙门氏菌非沙门氏菌活疫苗细菌菌株被认为是正常菌群。非沙门氏菌活疫苗细菌的沙门氏菌细菌菌株或沙门氏菌活疫苗细菌菌株的实例包括，但不限于，VacT沙门氏菌活疫苗细菌菌株和VacE沙门氏菌活疫苗细菌菌株。
沙门氏菌菌株可以是致病性菌株(也被称为野菌株)或非致病性菌株(也被称为活疫苗菌株)。致病性沙门氏菌菌株是引起或促进哺乳动物中的疾病、感染或其他不良反应的菌株。沙门氏菌野菌株被认为是异常或感染的菌群。沙门氏菌活疫苗菌株通常是用于引发在个体，诸如家禽、牲畜或人类中引发产生针对引起感染的致病性沙门氏菌菌株(或沙门氏菌野菌株)的保护性抗体的免疫应答的减毒细菌菌株。沙门氏菌活疫苗菌株是被认为对哺乳动物无害的菌株，因为哺乳动物中没有明显的与沙门氏菌活疫苗菌株的存在相关的疾病、感染或其他不良反应沙门氏菌。沙门氏菌活疫苗菌株被认为是良性或有益的菌群。沙门氏菌非致病性细菌菌株或沙门氏菌活疫苗细菌菌株的实例包括，但不限于，VacT沙门氏菌活疫苗菌株和VacE沙门氏菌活疫苗菌株。
本说明书的方面部分地公开了样品。各种样品在本文公开的方法中是有用的。样品是指包含或可能包含沙门氏菌活疫苗细菌的生物物质。样品包括但不限于，纯化的沙门氏菌活疫苗细菌、部分纯化的沙门氏菌活疫苗细菌、细胞、粗制的细胞裂解物、部分纯化的细胞裂解物、粗制的培养介质、部分纯化的培养介质、生食品、部分熟食品、熟食品、经加工的食品；乳品食料、饮料、动物饲料、粪便样品、植物样品、土壤样品、水样品、池塘沉积物、人类组织样品、粗制的牲畜组织样品、经加工的牲畜组织样品，诸如，例如皮革。
本说明书的方面部分地公开了，预富集步骤。预富集步骤包括在限定的时间和在限定的温度在预富集介质中孵育本文公开的样品。还称为预富集培养介质的预富集介质是提供维持沙门氏菌活疫苗细菌的低生长所必要的营养物质的缓冲的培养介质。另外，预富集介质还可包含减少或抑制污染细菌或其他微生物的生长的组分。预富集介质包含低生长营养组分、表面活性剂、和任选地生长抑制剂和/或生长增强剂。在一些实施方案中，本文公开的方法可以使用第一预富集介质和第二预富集介质。第一和第二预富集介质可包含相同的低生长营养组分、表面活性剂和任选地生长抑制剂和/或生长增强剂，即第一和第二预富集介质将具有相同的组成。在其他实施方案中，第一和第二预富集介质可包含相同的低生长营养组分、表面活性剂和任选地生长抑制剂和/或生长增强剂，但彼此的量不同。在其他实施方案中，第一预富集介质相对于第二预富集介质可包含不同的低生长营养组分、表面活性剂和任选地生长抑制剂和/或生长增强剂。
预富集介质通常包含用作蛋白、氨基酸和氮的来源的低生长营养组分。单种低生长营养组分可构成本文公开的预富集介质，或多于一种(aplurality of)低生长营养组分可构成本文公开的预富集介质。
低生长营养组分的非限制性实例是蛋白胨，诸如，例如，来自动物来源的蛋白胨和来自植物来源的蛋白胨。来自动物来源的蛋白胨包括，但不限于，酸性酪蛋白胨、细菌蛋白胨、牛肉提取物粉末、酪蛋白胨、酪蛋白cc胨、明胶蛋白胨、肉蛋白胨、多聚蛋白胨月示蛋白胨，和月示蛋白胨3号。来自植物来源的蛋白胨包括，但不限于，麦芽提取物、大豆蛋白胨和酵母提取物。
可使用任何浓度的低生长营养组分，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，约1g/L、约2g/L、约3g/L、约4g/L、约5g/L、约6g/L、约7g/L、约8g/L、约9g/L、约10g/L、约11g/L、约12g/L、约13g/L、约14g/L、或约15g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，至少1g/L、至少2g/L、至少3g/L、至少4g/L、至少5g/L、至少6g/L、至少7g/L、至少8g/L、至少9g/L、至少10g/L、至少11g/L、至少12g/L、至少13g/L、至少14g/L、或至少15g/L。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，至多1g/L、至多2g/L、至多3g/L、至多4g/L、至多5g/L、至多6g/L、至多7g/L、至多8g/L、至多9g/L、至多10g/L、至多11g/L、至多12g/L、至多13g/L、至多14g/L、或至多15g/L。
还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用低生长营养组分：例如，介于，约1g/L至2g/L、约1g/L至3g/L、约1g/L至4g/L、约1g/L至5g/L、约1g/L至6g/L、约1g/L至7g/L、约1g/L至8g/L、约1g/L至9g/L、约1g/L至10g/L、约1g/L至11g/L、约1g/L至12g/L、约1g/L至13g/L、约1g/L至14g/L、约1g/L至15g/L、约2g/L至3g/L、约2g/L至4g/L、约2g/L至5g/L、约2g/L至6g/L、约2g/L至7g/L、约2g/L至8g/L、约2g/L至9g/L、约2g/L至10g/L、约2g/L至11g/L、约2g/L至12g/L、约2g/L至13g/L、约2g/L至14g/L、约2g/L至15g/L、约3g/L至4g/L、约3g/L至5g/L、约3g/L至6g/L、约3g/L至7g/L、约3g/L至8g/L、约3g/L至9g/L、约3g/L至10g/L、约3g/L至11g/L、约3g/L至12g/L、约3g/L至13g/L、约3g/L至14g/L、约3g/L至15g/L、约4g/L至5g/L、约4g/L至6g/L、约4g/L至7g/L、约4g/L至8g/L、约4g/L至9g/L、约4g/L至10g/L、约4g/L至11g/L、约4g/L至12g/L、约4g/L至13g/L、约4g/L至14g/L、约4g/L至15g/L、约5g/L至6g/L、约5g/L至7g/L、约5g/L至8g/L、约5g/L至9g/L、约5g/L至10g/L、约5g/L至11g/L、约5g/L至12g/L、约5g/L至13g/L、约5g/L至14g/L、约5g/L至15g/L、约6g/L至7g/L、约6g/L至8g/L、约6g/L至9g/L、约6g/L至10g/L、约6g/L至11g/L、约6g/L至12g/L、约6g/L至13g/L、约6g/L至14g/L、约6g/L至15g/L、约7g/L至8g/L、约7g/L至9g/L、约7g/L至10g/L、约7g/L至11g/L、约7g/L至12g/L、约7g/L至13g/L、约7g/L至14g/L、约7g/L至15g/L、约8g/L至9g/L、约8g/L至10g/L、约8g/L至11g/L、约8g/L至12g/L、约8g/L至13g/L、约8g/L至14g/L、约8g/L至15g/L、约9g/L至10g/L、约9g/L至11g/L、约9g/L至12g/L、约9g/L至13g/L、约9g/L至14g/L、约9g/L至15g/L、约10g/L至11g/L、约10g/L至12g/L、约10g/L至13g/L、约10g/L至14g/L、约10g/L至15g/L、约11g/L至12g/L、约11g/L至13g/L、约11g/L至14g/L、约11g/L至15g/L、约12g/L至13g/L、约12g/L至14g/L、约12g/L至15g/L、约13g/L至14g/L、约13g/L至15g/L、或约14g/L至15g/L。
预富集介质还可包含表面活性剂。表面活性剂是降低液体的表面张力，允许更容易扩散，并降低两种液体之间，或液体和固体之间的界面张力的化合物。单种表面活性剂可构成本文公开的预富集介质，或多于一种表面活性剂可构成本文公开的预富集介质。本文公开的表面活性剂提供了延缓或防止本文公开的样品中包含的不需要的生物体的生长的抑菌和杀菌作用。作为非限制性实例，表面活性剂可通过破坏表面上的吸附作用机制、干扰渗透平衡、防止营养物的摄入、变性蛋白、抑制酶活性，和/或损坏细胞膜，延缓或防止不需要的细菌细胞的生长。
有用的表面活性剂，包括，但不限于，离子表面活性剂、兼性离子(两性的)表面活性剂、非离子表面活性剂，或其中的任何组合。在本文公开的方法中使用的表面活性剂可由本领域技术人员适当地改变，并通常部分地取决于被使用的特定预富集介质、被检测的沙门氏菌活疫苗细菌、和/或被除去的特定不需要的细菌。离子表面活性剂包括基于永久(硫酸盐、磺酸盐、磷酸盐)或pH依赖性(羧酸盐)的阴离子的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂包括，但不限于，烷基硫酸盐，如月桂基硫酸铵和月桂基硫酸钠(SDS)；烷基醚硫酸盐，如月桂醇聚醚硫酸钠和肉豆蔻醇聚醚硫酸钠(sodium myreth sulfate)；多库酯(docusates)，如二辛基磺基琥珀酸钠；十四烷基十二烷基硫酸钠；7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠；十八烷基硫酸盐；磺酸盐含氟表面活性剂，如全氟辛烷磺酸盐(PFOS)和全氟丁烷磺酸盐；烷基苯磺酸盐；烷基芳基醚磷酸盐；烷基醚磷酸盐；烷基羧酸盐，如脂肪酸盐和硬脂酸钠；月桂酰肌氨酸钠；和羧酸盐含氟表面活性剂，如全氟壬酸盐和全氟辛酸盐。
离子表面活性剂还包含基于永久或pH依赖性阳离子的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂包括，但不限于，烷基三甲基铵盐，如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)；西吡氯铵(CPC)；聚乙氧基牛脂胺(POEA)；苯扎氯铵(BAC)；苄索氯铵(BZT)；5-溴代-5-硝基-1,3-二噁烷；双十八烷基二甲基氯化铵(dimethyldioctadecylammonium chloride)；和双十八烷基二甲基溴化铵(dioctadecyldimethylammonium bromide)(DODAB)，以及pH依赖性伯、仲或叔胺样表面活性剂，其中伯胺在pH大于10下变得带正电荷，或仲胺在pH小于4下变得带电荷，如奥替尼啶二盐酸盐(octenidine dihydrochloride)。
兼性离子表面活性剂是基于伯、仲或叔胺或季铵阳离子与磺酸盐、羧酸盐、或磷酸盐。兼性离子表面活性剂包括，但不限于，3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基]-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)；磺基甜菜碱(sultaines)，如椰油酰氨基丙基羟基磺基甜菜碱(cocamidopropylhydroxysultaine)；甜菜碱，如椰油酰氨基丙基甜菜碱(cocamidopropyl betaine)；或卵磷脂。
非离子表面活性剂较少变性，并因此对溶解膜蛋白和脂质，同时保留蛋白-蛋白相互作用是有用的。表面活性剂的非限制性实例包括聚氧化乙烯二醇山梨糖醇酐烷基酯，如聚山梨醇酯20山梨醇单油酸酯(20)、聚山梨醇酯40山梨醇单油酸酯(40)、聚山梨醇酯60山梨醇单油酸酯(60)、聚山梨醇酯61山梨醇单油酸酯(61)、聚山梨醇酯65山梨醇单油酸酯(65)、聚山梨醇酯80山梨醇单油酸酯(80)、和聚山梨醇酯81山梨醇单油酸酯(81)；泊洛沙姆(聚乙烯-聚丙烯共聚物)，如泊洛沙姆124(L44)、泊洛沙姆181(L61)、泊洛沙姆182(L62)、泊洛沙姆184(L64)、泊洛沙姆188(F68)、泊洛沙姆237(F87)、泊洛沙姆338(L108)和泊洛沙姆407(F127)；烷基酚聚乙二醇醚；聚乙二醇烷基芳基醚；聚氧化乙烯二醇烷基醚，如八聚乙二醇单十二烷基醚(octaethylene glycol monododecylether)、五甘醇单十二烷基醚(pentaethylene glycol monododecyl ether)，30，和35；2-十二烷氧基乙醇(-PX)；聚氧化乙烯二醇辛基酚醚，如聚氧化乙烯(4-5)对叔辛基苯酚(X-45)和聚氧乙烯辛基苯基醚(X-100)；壬基酚聚氧乙烯醚，如壬苯醇醚-4(TERGITOLTM NP-4)、壬苯醇醚-6(TERGITOLTM NP-6)、壬苯醇醚-7(TERGITOLTM NP-7)、壬苯醇醚-8(TERGITOLTM NP-8)、壬苯醇醚-9(TERGITOLTM NP-9)、壬苯醇醚-10(TERGITOLTM NP-10)、壬苯醇醚-11(TERGITOLTM NP-11)、壬苯醇醚-12(TERGITOLTM NP-12)、壬苯醇醚-13(TERGITOLTM NP-13)、壬苯醇醚-15(TERGITOLTM NP-15)、壬苯醇醚-30(TERGITOLTM NP-30)、壬苯醇醚-40(TERGITOLTM NP-40)、壬苯醇醚-50(TERGITOLTM NP-50)、壬苯醇醚-55(TERGITOLTM NP-55)、和壬苯醇醚-70(TERGITOLTM NP-70)；苯氧基聚乙氧基乙醇(phenoxypolyethoxylethanol)，如壬基苯氧基聚乙氧基乙醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇；葡萄糖苷烷基醚，如辛基吡喃葡萄糖苷；麦芽糖苷烷基醚，如十二烷基吡喃麦芽糖苷；硫代葡萄糖苷烷基醚，如庚基硫代吡喃葡萄糖苷(heptylthioglucopyranoside)；洋地黄皂苷；丙三醇烷基酯，如月桂酸甘油酯；烷基芳基聚醚硫酸盐；醇磺酸盐；山梨糖醇烷基酯；椰油酰胺乙醇胺，如椰油酰胺单乙醇胺和椰油酰胺二乙醇胺；蔗糖单月桂酸酯；十二烷基二甲胺氧化物，和胆酸钠。在本文公开的方法中有用的表面活性剂的其他非限制性实例，可参见，例如，Winslow，等人，Methods and Compositionsfor Simultaneously Isolating Hemoglobin from Red Blood Cells and InactivatingViruses,U.S.2008/0138790；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(Howard C.Ansel等人，编著，Lippincott Williams&Wilkins Publishers，第7版1999)；Remington:The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R.Gennaro编著，Lippincott,Williams&Wilkins，第20版，2000)；Goodman&Gilman's The PharmacologicalBasis of Therapeutics(Joel G.Hardman等人，编著，McGraw-Hill Professional，第10版，2001)；和Handbook of Pharmaceutical Excipients(Raymond C.Rowe等人，APhAPublications，第4版2003)，其的每个在此通过引用以其整体并入。
可使用任何浓度的表面活性剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，约0.01％(v/v)、约0.05％(v/v)、约0.075％(v/v)、约0.1％(v/v)、约0.2％(v/v)、约0.3％(v/v)、约0.4％(v/v)、约0.5％(v/v)、约0.6％(v/v)、约0.7％(v/v)、约0.8％(v/v)、约0.9％(v/v)、约1.0％(v/v)、约2.0％(v/v)、约3.0％(v/v)、约4.0％(v/v)、约5.0％(v/v)、约6.0％(v/v)、约7.0％(v/v)、约8.0％(v/v)、约9.0％(v/v)、或约10.0％(v/v)。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至少0.01％(v/v)、至少0.05％(v/v)、至少0.075％(v/v)、至少0.1％(v/v)、至少0.25％(v/v)、至少0.5％(v/v)、至少0.75％(v/v)、至少1.0％(v/v)、至少2.5％(v/v)、至少5.0％(v/v)、至少7.5％(v/v)、或至少10.0％(v/v)。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至多0.01％(v/v)、至多0.05％(v/v)、至多0.075％(v/v)、至多0.1％(v/v)、至多0.25％(v/v)、至多0.5％(v/v)、至多0.75％(v/v)、至多1.0％(v/v)、至多2.5％(v/v)、至多5.0％(v/v)、至多7.5％(v/v)、或至多10.0％(v/v)。
仍在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.01％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.05％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.1％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.2％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约6.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约7.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约8.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约9.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约10.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约2.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约3.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约4.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约5.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约6.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约7.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约8.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约9.0％(v/v)、或约1.0％(v/v)至约10.0％(v/v)。
在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，约0.001g/L、约0.002g/L、约0.003g/L、约0.004g/L、约0.005g/L、约0.006g/L、约0.007g/L、约0.008g/L、约0.009g/L、约0.01g/L、约0.02g/L、约0.03g/L、约0.04g/L、约0.05g/L、约0.06g/L、约0.07g/L、约0.08g/L、约0.09g/L、或约0.1g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至少0.001g/L、至少0.002g/L、至少0.003g/L、至少0.004g/L、至少0.005g/L、至少0.006g/L、至少0.007g/L、至少0.008g/L、至少0.009g/L、至少0.01g/L、至少0.02g/L、至少0.03g/L、至少0.04g/L、至少0.05g/L、至少0.06g/L、至少0.07g/L、至少0.08g/L、至少0.09g/L、或至少0.1g/L。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，至多0.001g/L、至多0.002g/L、至多0.003g/L、至多0.004g/L、至多0.005g/L、至多0.006g/L、至多0.007g/L、至多0.008g/L、至多0.009g/L、至多0.01g/L、至多0.02g/L、至多0.03g/L、至多0.04g/L、至多0.05g/L、至多0.06g/L、至多0.07g/L、至多0.08g/L、至多0.09g/L、或至多0.1g/L。
仍在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用表面活性剂：例如，约0.001g/L至约0.005g/L、约0.001g/L至约0.006g/L、约0.001g/L至约0.007g/L、约0.001g/L至约0.008g/L、约0.001g/L至约0.009g/L、约0.001g/L至约0.01g/L、约0.001g/L至约0.02g/L、约0.001g/L至约0.03g/L、约0.001g/L至约0.04g/L、约0.001g/L至约0.05g/L、约0.001g/L至约0.06g/L、约0.001g/L至约0.07g/L、约0.001g/L至约0.08g/L、约0.001g/L至约0.09g/L、约0.001g/L至约0.1g/L、约0.005g/L至约0.01g/L、约0.005g/L至约0.02g/L、约0.005g/L至约0.03g/L、约0.005g/L至约0.04g/L、约0.005g/L至约0.05g/L、约0.005g/L至约0.06g/L、约0.005g/L至约0.07g/L、约0.005g/L至约0.08g/L、约0.005g/L至约0.09g/L、约0.005g/L至约0.1g/L、约0.01g/L至约0.05g/L、约0.01g/L至约0.06g/L、约0.01g/L至约0.07g/L、约0.01g/L至约0.08g/L、约0.01g/L至约0.09g/L、约0.01g/L至约0.1g/L、或约0.05g/L至约0.1g/L。
预富集介质可任选地包含生长抑制剂。生长抑制剂通常包含减少或抑制污染细菌或其他污染微生物的生长的组分。另外，生长抑制剂可不影响感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的生长或以比污染细菌或其他污染微生物较小的程度影响感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌。单种生长抑制剂可构成本文公开的预富集介质，或多于一种生长抑制剂可构成本文公开的预富集介质。生长抑制剂的非限制性实例包括抗微生物化合物、碘化合物、镁化合物和三芳基甲烷染料。
抗微生物化合物是拮抗微生物的生长的化合物。这些化合物可被分成杀死微生物的杀菌剂和减慢或停止微生物生长的抑菌剂的两大类。抗微生物化合物通常基于其作用机理、化学结构、或活性谱来分类。大多数靶向细菌功能或生长过程。靶向细菌细胞壁(青霉素和头孢菌素)或细胞膜(多粘菌素)，或干扰必需的细菌酶(利福霉素、闰年霉素(lipiarmycins)、喹诺酮类、和磺胺类)的那些具有杀菌活性。靶向蛋白合成(大环内酯类、林可酰胺类和四环素类)的那些通常是抑菌的(除了杀菌的氨基糖苷类)。进一步的分类是基于他们的靶特异性。“窄谱”抗菌抗生素靶向特定类型的细菌，诸如革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌，而广谱抗生素影响宽范围的细菌。抗微生物化合物包括但不限于，氨基香豆素、氨基糖苷类、安沙霉素、碳头孢烯、碳青霉烯类、头孢菌素、环脂肽、糖肽、甘氨酰环素、林可酰胺、闰年霉素、脂肽、大环内酯类、单酰胺菌素、硝基呋喃、噁唑烷酮、青霉素、喹诺酮类、磺酰胺、和四环素。氨基香豆素的非限制性实例包括新生霉素(Novobiocin)、Albamycin、香豆霉素(Coumermycin)、和氯新生霉素(Clorobiocin)。
碘化合物与氨基酸如酪氨酸或组氨酸通过使具有这些氨基酸的蛋白暴露于细胞外环境而变性的简单的化学反应进行结合。碘化合物的非限制性实例包括碘和碘化钾。
已知镁化合物具有抗细菌活性。在该实施方案的方面，镁是氯化镁和硫酸镁。
三芳基甲烷染料是一组包含产生强的、pH依赖性颜色的三苯甲烷骨架的合成的有机化合物。三芳基甲烷染料可根据芳基基团上取代基的性质被归类为家族。甲基紫染料具有在两个芳基基团的对位处的二甲氨基基团，并包括但不限于，甲基紫2B、甲基紫6B、和甲基紫10B。品红染料在每个芳基基团的对位处具有胺(NH2或NHMe)官能团，并包括，但不限于，副品红、品红、新品红、碱性品红紫和酸性品红。酚染料在每个芳基基团的对位处具有羟基，并包括但不限于，酚红、氯酚红、和甲酚红。孔雀石绿染料与甲基紫染料相关，不同的是它们包含一个苯基(C6H5)基团，并包括，但不限于，孔雀绿和亮绿。三芳基甲烷染料包括，但不限于，铝试灵、苯胺蓝WS、金精、金精三羧酸、亮蓝FCF、亮绿、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、溴焦酚红、溴麝香草酚蓝、磺溴酞钠(bromsulphthalein)、氯酚红、考马斯亮蓝、甲酚红、结晶紫、结晶紫内酯、乙基绿、固绿FCF、荧烷、品红、酸性品红、龙胆、格林S(green S)、淡绿SF淡黄、孔雀石绿、甲基蓝、甲基紫、新品红、副品红、专利蓝V、酚红、酚酞、孟加拉红、百里酚酞、维多利亚蓝BO、水蓝色、二甲苯蓝和二甲酚橙。
可使用任何浓度的生长抑制剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，约0.01％(v/v)、约0.05％(v/v)、约0.075％(v/v)、约0.1％(v/v)、约0.2％(v/v)、约0.3％(v/v)、约0.4％(v/v)、约0.5％(v/v)、约0.6％(v/v)、约0.7％(v/v)、约0.8％(v/v)、约0.9％(v/v)、约1.0％(v/v)、约2.0％(v/v)、约3.0％(v/v)、约4.0％(v/v)、约5.0％(v/v)、约6.0％(v/v)、约7.0％(v/v)、约8.0％(v/v)、约9.0％(v/v)、或约10.0％(v/v)。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，至少0.01％(v/v)、至少0.05％(v/v)、至少0.075％(v/v)、至少0.1％(v/v)、至少0.25％(v/v)、至少0.5％(v/v)、至少0.75％(v/v)、至少1.0％(v/v)、至少2.5％(v/v)、至少5.0％(v/v)、至少7.5％(v/v)、或至少10.0％(v/v)。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，至多0.01％(v/v)、至多0.05％(v/v)、至多0.075％(v/v)、至多0.1％(v/v)、至多0.25％(v/v)、至多0.5％(v/v)、至多0.75％(v/v)、至多1.0％(v/v)、至多2.5％(v/v)、至多5.0％(v/v)、至多7.5％(v/v)、或至多10.0％(v/v)。
仍在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长抑制剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.01％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.01％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.1％(v/v)、约0.05％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.05％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.1％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.1％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约0.5％(v/v)、约0.2％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.2％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约1.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约2.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约3.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约4.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约6.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约7.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约8.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约9.0％(v/v)、约0.5％(v/v)至约10.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约2.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约3.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约4.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约5.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约6.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约7.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约8.0％(v/v)、约1.0％(v/v)至约9.0％(v/v)、或约1.0％(v/v)至约10.0％(v/v)。
预富集介质可任选地包含生长增强剂。生长增强剂通过减少在培养介质中的迟滞期，从而重新激活休眠的沙门氏菌活疫苗细菌来促进沙门氏菌活疫苗细菌的快速生长。
生长增强剂的非限制性实例包括铁载体(siderophore)。铁载体是充当隔绝和溶解铁的高亲和力螯合铁的化合物。这些化合物对沙门氏菌活疫苗细菌获得铁以维持细胞呼吸和DNA合成是重要的。这是因为在大多数的培养环境下，游离铁的量(约1×10-9 M)低于大多数细菌沙门氏菌活疫苗细菌生长所需的浓度。铁载体的非限制性实例包括气杆菌素(Aerobactin)、Alcaligin、固氮菌素(Azotobactin)、嗜铁素(Bacillibactin)、去铁胺B、去铁胺E、肠菌素、铁色素(Ferrichrome)、Ferrioxiamina-B、Ferrioxiamina-E、镰孢氨酸C(Fusarinine C)、分支杆菌生长素、Ornibactin、Petrobactin、Pyoverdine、绿脓杆菌螯铁蛋白(Pyochelin)、沙门菌螯铁蛋白(Salmochelin)、Staphyloferring A、弧菌素(Vibriobactin)和耶尔森杆菌素(Yersiniabactin)。
可使用任何浓度的生长增强剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，约0.01μM、约0.05μM、约0.075μM、约0.1μM、约0.2μM、约0.3μM、约0.4μM、约0.5μM、约0.6μM、约0.7μM、约0.8μM、约0.9μM、约1.0μM、约2.0μM、约3.0μM、约4.0μM、约5.0μM、约6.0μM、约7.0μM、约8.0μM、约9.0μM、或约10.0％(v/v)。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，至少0.01μM、至少0.05μM、至少0.075μM、至少0.1μM、至少0.25μM、至少0.5μM、至少0.75μM、至少1.0μM、至少2.5μM、至少5.0μM、至少7.5μM、或至少10.0％(v/v)。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，至多0.01μM、至多0.05μM、至多0.075μM、至多0.1μM、至多0.25μM、至多0.5μM、至多0.75μM、至多1.0μM、至多2.5μM、至多5.0μM、至多7.5μM、或至多10.0μM。
仍在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用生长增强剂：例如，介于，约0.01％(v/v)至约0.05μM、约0.01％(v/v)至约0.1μM、约0.01％(v/v)至约0.5μM、约0.01％(v/v)至约1.0μM、约0.01％(v/v)至约2.0μM、约0.01％(v/v)至约3.0μM、约0.01％(v/v)至约4.0μM、约0.01％(v/v)至约5.0μM、约0.05％(v/v)至约0.1μM、约0.05％(v/v)至约0.5μM、约0.05％(v/v)至约1.0μM、约0.05％(v/v)至约2.0μM、约0.05％(v/v)至约3.0μM、约0.05％(v/v)至约4.0μM、约0.05％(v/v)至约5.0μM、约0.1％(v/v)至约0.5μM、约0.1％(v/v)至约1.0μM、约0.1％(v/v)至约2.0μM、约0.2％(v/v)至约0.5μM、约0.2％(v/v)至约1.0μM、约0.2％(v/v)至约2.0μM、约0.2％(v/v)至约3.0μM、约0.2％(v/v)至约4.0μM、约0.2％(v/v)至约5.0μM、约0.5％(v/v)至约1.0μM、约0.5％(v/v)至约2.0μM、约0.5％(v/v)至约3.0μM、约0.5％(v/v)至约4.0μM、约0.5％(v/v)至约5.0μM、约0.5％(v/v)至约6.0μM、约0.5％(v/v)至约7.0μM、约0.5％(v/v)至约8.0μM、约0.5％(v/v)至约9.0μM、约0.5％(v/v)至约10.0μM、约1.0％(v/v)至约2.0μM、约1.0％(v/v)至约3.0μM、约1.0％(v/v)至约4.0μM、约1.0％(v/v)至约5.0μM、约1.0％(v/v)至约6.0μM、约1.0％(v/v)至约7.0μM、约1.0％(v/v)至约8.0μM、约1.0％(v/v)至约9.0μM、或约1.0％(v/v)至约10.0μM)。
在一个实施方案中，预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一生长抑制剂、0.5g/L至4.5g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含2g/L至6g/L的酪蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L的胆盐、0.5g/L至4.5g/L的肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一碘化合物、0.5g/L至4.5g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，预富集介质包含2g/L至6g/L的酪蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L的胆盐、0.5g/L至4.5g/L的肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的碘、0.5g/L至4.5g/的L碘化钾、0.001g/L至0.008g/L的新生霉素、和0.001g/L至0.008g/L的亮绿。
在一个实施方案中，预富集介质包含3g/L至5g/L的蛋白胨、1.5g/L至3.5g/L胆盐、1g/L至3g/L肉提取物、1g/L至3g/L的第一生长抑制剂、1g/L至3g/L的第二生长抑制剂、0.002g/L至0.006g/L的第三生长抑制剂、和0.002g/L至0.006g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含3g/L至5g/L的酪蛋白胨、1.5g/L至3.5g/L的胆盐、1g/L至3g/L的肉提取物、1g/L至3g/L的第一碘化合物、1g/L至3g/L的第二碘化合物、0.002g/L至0.006g/L的氨基香豆素抗生素、和0.002g/L至0.006g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，预富集介质包含3g/L至5g/L的酪蛋白胨、1.5g/L至3.5g/L的胆盐、1g/L至3g/L的肉提取物、1g/L至3g/L的碘、1g/L至3g/L的碘化钾、0.002g/L至0.006g/L的新生霉素、和0.002g/L至0.006g/L的亮绿。
在一个实施方案中，预富集介质包含4g/L至4.6g/L蛋白胨、2.1g/L至2.7g/L胆盐、1.8g/L至2.4g/L肉提取物、1.7g/L至2.3g/L的第一生长抑制剂、1.7g/L至2.3g/L的第二生长抑制剂、0.003g/L至0.005g/L的第三生长抑制剂、和0.003g/L至0.005g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含4g/L至4.6g/L的酪蛋白胨、2.1g/L至2.7g/L的胆盐、1.8g/L至2.4g/L的肉提取物、1.7g/L至2.3g/L的第一碘化合物、1.7g/L至2.3g/L的第二碘化合物、0.003g/L至0.005g/L的氨基香豆素抗生素、和0.003g/L至0.005g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4g/L至4.6g/L的酪蛋白胨、2.1g/L至2.7g/L的胆盐、1.8g/L至2.4g/L的肉提取物、1.7g/L至2.3g/L的碘、1.7g/L至2.3g/L的碘化钾、0.003g/L至0.005g/L的新生霉素、和0.003g/L至0.005g/L的亮绿。
在一个实施方案中，预富集介质包含4.3g/L的蛋白胨、2.4g/L胆盐、2.1g/L肉提取物、2g/L的第一生长抑制剂、2g/L的第二生长抑制剂、0.004g/L的第三生长抑制剂、和0.004g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含4.3g/L的酪蛋白胨、2.4g/L的胆盐、2.1g/L的肉提取物、2g/L的第一碘化合物、2g/L的第二碘化合物、0.004g/L的氨基香豆素抗生素、和0.004g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，预富集介质包含4.3g/L的酪蛋白胨、2.4g/L的胆盐、2.1g/L的肉提取物、2g/L的碘、2g/L的碘化钾、0.004g/L的新生霉素、和0.004g/L的亮绿。
在另一个实施方案中，预富集介质还包含盐。在该实施方案的方面，预富集介质还包含NaCl、CaCO3和Na2S2O3。在该实施方案的其他方面，预富集介质还包含0.5g/L至2.6g/LNaCl、18.0g/L至20.6g/L CaCO3和13.9g/L至16.5g/L Na2S2O3。还在该实施方案的其他方面，预富集介质还包含1.0g/L至1.6g/L NaCl、19.0g/L至19.6g/L CaCO3和14.9g/L至15.5g/L Na2S2O3。仍在该实施方案的其他方面，预富集介质还包含1.3g/L NaCl、19.3g/LCaCO3和15.2g/L Na2S2O3。
本说明书的方面部分地公开了，在预富集介质中孵育样品。在促进沙门氏菌活疫苗细菌在样品中的生长，延迟不需要的生物体在样品中的生长，和/或建立以其他方式增加沙门氏菌活疫苗细菌在样品中的群体和/或延迟不需要的生物体在样品中的生长的条件的温度和时间参数下进行样品的孵育。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在孵育预富集介质中的样品期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、或约42℃。在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、或至少42℃。还在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、或至多42℃。仍在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、或约40℃至约44℃。仍在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃。
在孵育预富集介质中的样品期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。还在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。还在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的时间可以是，例如，约1小时至约2小时、约1小时至约3小时、约1小时至约4小时、约1小时至约5小时、约1小时至约6小时、约1小时至约7小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时、约2小时至约5小时、约2小时至约6小时、约2小时至约7小时、约3小时至约4小时、约3小时至约5小时、约3小时至约6小时、约3小时至约7小时、约4小时至约11小时、约5小时至约10小时、约6小时至约9小时、约7小时至约8小时、约5小时至约10小时、约6小时至约9小时、约5小时至约11小时、约6小时至约10小时、约7小时至约9小时、约4小时至约10小时、约5小时至约9小时或约6小时至约8小时。
在该实施方案的方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约35℃至约39℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃，持续以下的的一段时间：例如，约1小时至约2小时、约1小时至约3小时、约1小时至约4小时、约1小时至约5小时、约1小时至约6小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约35℃至约39℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃，持续以下的的一段时间：例如，约4小时至约11小时、约5小时至约10小时、约6小时至约9小时、约7小时至约8小时、约5小时至约10小时、约6小时至约9小时、约5小时至约11小时、约6小时至约10小时、约7小时至约9小时、约4小时至约10小时、约5小时至约9小时或约6小时至约8小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、或约42℃，持续以下的一段时间：例如，约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、或至少42℃，持续以下的一段时间：例如，至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
还在该实施方案的其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、或至多42℃，持续以下的一段时间：例如，至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
仍在该实施方案的其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、或约40℃至约44℃，持续以下的一段时间：例如，约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的其他方面，在预富集介质中的样品可以按以下的温度来孵育：例如，约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、或约40℃至约44℃，持续以下的一段时间：例如，约1小时至约2小时、约1小时至约3小时、约1小时至约4小时、约1小时至约5小时、约1小时至约6小时、约1小时至约7小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时、约2小时至约5小时、约2小时至约6小时、约2小时至约7小时、约3小时至约4小时、约3小时至约5小时、约3小时至约6小时或约3小时至约7小时。
用于检测样品中沙门氏菌活疫苗细菌的方法包括在富集介质中孵育样品的步骤。在完成本文公开的预富集步骤后，将预富集介质的等分试样转移至富集介质用于沙门氏菌活疫苗细菌的后续生长。富集步骤包括在限定的时间和在限定的温度在富集介质中孵育预富集介质的等分试样。
在富集介质中孵育预富集介质期间可使用预富集介质的等分试样的任何体积，条件是该体积对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的体积的约1/50、约1/75、约1/100、约1/125、约1/150、约1/175、约1/200、约1/225、约1/250、约1/275、约1/300、约1/325、约1/350、约1/375、约1/400、约1/425、约1/450、约1/475、约1/500、约1/525、约1/550、约1/575、约1/600、约1/625、约1/650、约1/675、约1/700、约1/725、约1/750、约1/775、约1/800、约1/825、约1/850、约1/875、约1/900、约1/925、约1/950、约1/975、或约1/1,000。在该实施方案的其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的体积的至少1/50、至少1/75、至少1/100、至少1/125、至少1/150、至少1/175、至少1/200、至少1/225、至少1/250、至少1/275、至少1/300、至少1/325、至少1/350、至少1/375、至少1/400、至少1/425、至少1/450、至少1/475、至少1/500、至少1/525、至少1/550、至少1/575、至少1/600、至少1/625、至少1/650、至少1/675、至少1/700、至少1/725、至少1/750、至少1/775、至少1/800、至少1/825、至少1/850、至少1/875、至少1/900、至少1/925、至少1/950、至少1/975、或至少1/1,000。还在该实施方案的其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，在富集步骤中使用的富集介质的体积的至多1/50、至多1/75、至多1/100、至多1/125、至多1/150、至多1/175、至多1/200、至多1/225、至多1/250、至多1/275、至多1/300、至多1/325、至多1/350、至多1/375、至多1/400、至多1/425、至多1/450、至多1/475、至多1/500、至多1/525、至多1/550、至多1/575、至多1/600、至多1/625、至多1/650、至多1/675、至多1/700、至多1/725、至多1/750、至多1/775、至多1/800、至多1/825、至多1/850、至多1/875、至多1/900、至多1/925、至多1/950、至多1/975、或至多1/1,000。
还在该实施方案的其他方面，转移至富集介质的预富集介质的等分试样体积可以是，例如，约1/5至约1/100、约1/5至约1/150、约1/5至约1/200、约1/5至约1/250、约1/5至约1/300、约1/5至约1/350、约1/5至约1/400、约1/5至约1/450、约1/5至约1/500、约1/5至约1/550、约1/5至约1/600、约1/5至约1/650、约1/5至约1/700、约1/5至约1/750、约1/5至约1/800、约1/5至约1/850、约1/5至约1/900、约1/5至约1/950、约1/5至约1/1,000、约1/10至约1/100、约1/10至约1/150、约1/10至约1/200、约1/10至约1/250、约1/10至约1/300、约1/10至约1/350、约1/10至约1/400、约1/10至约1/450、约1/10至约1/500、约1/10至约1/550、约1/10至约1/600、约1/10至约1/650、约1/10至约1/700、约1/10至约1/750、约1/10至约1/800、约1/10至约1/850、约1/10至约1/900、约1/10至约1/950、约1/10至约1/1,000、约1/50至约1/100、约1/50至约1/150、约1/50至约1/200、约1/50至约1/250、约1/50至约1/300、约1/50至约1/350、约1/50至约1/400、约1/50至约1/450、约1/50至约1/500、约1/50至约1/550、约1/50至约1/600、约1/50至约1/650、约1/50至约1/700、约1/50至约1/750、约1/50至约1/800、约1/50至约1/850、约1/50至约1/900、约1/50至约1/950、约1/50至约1/1,000、约1/100至约1/150、约1/100至约1/200、约1/100至约1/250、约1/100至约1/300、约1/100至约1/350、约1/100至约1/400、约1/100至约1/450、约1/100至约1/500、约1/100至约1/550、约1/100至约1/600、约1/100至约1/650、约1/100至约1/700、约1/100至约1/750、约1/100至约1/800、约1/100至约1/850、约1/100至约1/900、约1/100至约1/950、约1/100至约1/1,000、约1/200至约1/250、约1/200至约1/300、约1/200至约1/350、约1/200至约1/400、约1/200至约1/450、约1/200至约1/500、约1/200至约1/550、约1/200至约1/600、约1/200至约1/650、约1/200至约1/700、约1/200至约1/750、约1/200至约1/800、约1/200至约1/850、约1/200至约1/900、约1/200至约1/950、约1/200至约1/1,000、约1/300至约1/350、约1/300至约1/400、约1/300至约1/450、约1/300至约1/500、约1/300至约1/550、约1/300至约1/600、约1/300至约1/650、约1/300至约1/700、约1/300至约1/750、约1/300至约1/800、约1/300至约1/850、约1/300至约1/900、约1/300至约1/950、约1/300至约1/1,000、约1/400至约1/450、约1/400至约1/500、约1/400至约1/550、约1/400至约1/600、约1/400至约1/650、约1/400至约1/700、约1/400至约1/750、约1/400至约1/800、约1/400至约1/850、约1/400至约1/900、约1/400至约1/950、约1/400至约1/1,000,约1/500至约1/550、约1/500至约1/600、约1/500至约1/650、约1/500至约1/700、约1/500至约1/750、约1/500至约1/800、约1/500至约1/850、约1/500至约1/900、约1/500至约1/950、或约1/500至约1/1,000。
在该实施方案的方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，约1:5、约1:10、约1:25、约1:50、约1:75、约1:100、约1:125、约1:150、约1:175、约1:200、约1:225、约1:250、约1:275、约1:300、约1:325、约1:350、约1:375、约1:400、约1:425、约1:450、约1:475、约1:500、约1:525、约1:550、约1:575、约1:600、约1:625、约1:650、约1:675、约1:700、约1:725、约1:750、约1:775、约1:800、约1:825、约1:850、约1:875、约1:900、约1:925、约1:950、约1:975、或约1:1,000。在该实施方案的其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，至少1:5、至少1:10、至少1:25、至少1:50、至少1:75、至少1:100、至少1:125、至少1:150、至少1:175、至少1:200、至少1:225、至少1:250、至少1:275、至少1:300、至少1:325、至少1:350、至少1:375、至少1:400、至少1:425、至少1:450、至少1:475、至少1:500、至少1:525、至少1:550、至少1:575、至少1:600、至少1:625、至少1:650、至少1:675、至少1:700、至少1:725、至少1:750、至少1:775、至少1:800、至少1:825、至少1:850、至少1:875、至少1:900、至少1:925、至少1:950、至少1:975、或至少1:1,000。还在该实施方案的其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，至多1:5、至多1:10、至多1:25、至多1:50、至多1:75、至多1:100、至多1:125、至多1:150、至多1:175、至多1:200、至多1:225、至多1:250、至多1:275、至多1:300、至多1:325、至多1:350、至多1:375、至多1:400、至多1:425、至多1:450、至多1:475、至多1:500、至多1:525、至多1:550、至多1:575、至多1:600、至多1:625、至多1:650、至多1:675、至多1:700、至多1:725、至多1:750、至多1:775、至多1:800、至多1:825、至多1:850、至多1:875、至多1:900、至多1:925、至多1:950、至多1:975、或至多1:1,000。
仍在该实施方案的其他方面，可在富集步骤中使用的预富集介质与富集介质的比可以是，例如，约1:5至约1:100、约1:5至约1:150、约1:5至约1:200、约1:5至约1:250、约1:5至约1:300、约1:5至约1:350、约1:5至约1:400、约1:5至约1:450、约1:5至约1:500、约1:5至约1:550、约1:5至约1:600、约1:5至约1:650、约1:5至约1:700、约1:5至约1:750、约1:5至约1:800、约1:5至约1:850、约1:5至约1:900、约1:5至约1:950、约1:5至约1:1,000、约1:10至约1:100、约1:10至约1:150、约1:10至约1:200、约1:10至约1:250、约1:10至约1:300、约1:10至约1:350、约1:10至约1:400、约1:10至约1:450、约1:10至约1:500、约1:10至约1:550、约1:10至约1:600、约1:10至约1:650、约1:10至约1:700、约1:10至约1:750、约1:10至约1:800、约1:10至约1:850、约1:10至约1:900、约1:10至约1:950、约1:10至约1:1,000、约1:50至约1:100、约1:50至约1:150、约1:50至约1:200、约1:50至约1:250、约1:50至约1:300、约1:50至约1:350、约1:50至约1:400、约1:50至约1:450、约1:50至约1:500、约1:50至约1:550、约1:50至约1:600、约1:50至约1:650、约1:50至约1:700、约1:50至约1:750、约1:50至约1:800、约1:50至约1:850、约1:50至约1:900、约1:50至约1:950、约1:50至约1:1,000、约1:100至约1:200、约1:100至约1:250、约1:100至约1:300、约1:100至约1:350,约1:100至约1:400、约1:100至约1:450、约1:100至约1:500、约1:100至约1:550、约1:100至约1:600、约1:100至约1:650,约1:100至约1:700、约1:100至约1:750、约1:100至约1:800、约1:100至约1:850、约1:100至约1:900、约1:100至约1:950、约1:100至约1:1,000、约1:200至约1:250、约1:200至约1:300、约1:200至约1:350,约1:200至约1:400、约1:200至约1:450、约1:200至约1:500、约1:200至约1:550、约1:200至约1:600、约1:200至约1:650、约1:200至约1:700、约1:200至约1:750、约1:200至约1:800、约1:200至约1:850、约1:200至约1:900、约1:200至约1:950、约1:200至约1:1,000、约1:300至约1:350、约1:300至约1:400、约1:300至约1:450、约1:300至约1:500、约1:300至约1:550、约1:300至约1:600、约1:300至约1:650、约1:300至约1:700、约1:300至约1:750、约1:300至约1:800、约1:300至约1:850、约1:300至约1:900、约1:300至约1:950、约1:300至约1:1,000、约1:400至约1:450、约1:400至约1:500、约1:400至约1:550、约1:400至约1:600、约1:400至约1:650、约1:400至约1:700、约1:400至约1:750、约1:400至约1:800、约1:400至约1:850、约1:400至约1:900、约1:400至约1:950、约1:400至约1:1,000、约1:500至约1:550、约1:500至约1:600、约1:500至约1:650、约1:500至约1:700、约1:500至约1:750、约1:500至约1:800、约1:500至约1:850、约1:500至约1:900、约1:500至约1:950、约1:500至约1:1,000、约1:600至约1:650、约1:600至约1:700、约1:600至约1:750、约1:600至约1:800、约1:600至约1:850、约1:600至约1:900、约1:600至约1:950、约1:600至约1:1,000、约1:700至约1:750、约1:700至约1:800、约1:700至约1:850、约1:700至约1:900、约1:700至约1:950、约1:700至约1:1,000、约1:800至约1:850、约1:800至约1:900、约1:800至约1:950、约1:800至约1:1,000、约1:900至约1:950、约1:900至约1:1,000、或约1:950至约1:1,000。
本说明书的方面部分地公开了，富集介质。还称为富集培养介质的富集介质是为提供维持沙门氏菌活疫苗细菌的高生长所必要的营养物质的缓冲的培养介质。这通常通过定制特别有利于沙门氏菌活疫苗细菌的生长的介质来完成，诸如，例如，考虑可存活渗透压范围、可存活pH范围、对选择性化合物的耐受、极小营养需求。富集介质的非限制性实例包括，Rappaport Vassiliadis大豆介质(RVS)、McConkey肉汤、Fraser肉汤、大豆-胰蛋白胨肉汤(TSB)、强化梭菌属肉汤、弯曲杆菌属巯基乙酸盐介质、硝酸盐肉汤、三糖铁肉汤(TripleSugar Iron Broth,TSI)、马尿酸钠肉汤、亚硒酸盐胱氨酸肉汤、GN肉汤、Todd Hewitt肉汤、麦芽提取物肉汤、叠氮钠葡萄糖肉汤(Azide Dextrose Broth)、和Hektoen肉汤。在该实施方案的方面，当沙门氏菌活疫苗细菌是沙门氏菌物种(Salmonella sp.)时，富集介质可以是Rappaport Vassiliadis大豆介质、亚硒酸盐胱氨酸肉汤、或GN肉汤。
富集介质通常包含用作蛋白、氨基酸和氮的来源的高生长营养组分。单种高生长营养组分可构成本文公开的富集介质，或多于一种高生长营养组分可构成本文公开的富集介质。高生长营养组分的非限制性实例是如本文公开的蛋白胨。
可使用任何浓度的高生长营养组分，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，约1g/L、约2g/L、约3g/L、约4g/L、约5g/L、约6g/L、约7g/L、约8g/L、约9g/L、约10g/L、约11g/L、约12g/L、约13g/L、约14g/L、或约15g/L。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，至少1g/L、至少2g/L、至少3g/L、至少4g/L、至少5g/L、至少6g/L、至少7g/L、至少8g/L、至少9g/L、至少10g/L、至少11g/L、至少12g/L、至少13g/L、至少14g/L、或至少15g/L。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，至多1g/L、至多2g/L、至多3g/L、至多4g/L、至多5g/L、至多6g/L、至多7g/L、至多8g/L、至多9g/L、至多10g/L、至多11g/L、至多12g/L、至多13g/L、至多14g/L、或至多15g/L。
还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用高生长营养组分：例如，介于，约1g/L至2g/L、约1g/L至3g/L、约1g/L至4g/L、约1g/L至5g/L、约1g/L至6g/L、约1g/L至7g/L、约1g/L至8g/L、约1g/L至9g/L、约1g/L至10g/L、约1g/L至11g/L、约1g/L至12g/L、约1g/L至13g/L、约1g/L至14g/L、约1g/L至15g/L、约2g/L至3g/L、约2g/L至4g/L、约2g/L至5g/L、约2g/L至6g/L、约2g/L至7g/L、约2g/L至8g/L、约2g/L至9g/L、约2g/L至10g/L、约2g/L至11g/L、约2g/L至12g/L、约2g/L至13g/L、约2g/L至14g/L、约2g/L至15g/L、约3g/L至4g/L、约3g/L至5g/L、约3g/L至6g/L、约3g/L至7g/L、约3g/L至8g/L、约3g/L至9g/L、约3g/L至10g/L、约3g/L至11g/L、约3g/L至12g/L、约3g/L至13g/L、约3g/L至14g/L、约3g/L至15g/L、约4g/L至5g/L、约4g/L至6g/L、约4g/L至7g/L、约4g/L至8g/L、约4g/L至9g/L、约4g/L至10g/L、约4g/L至11g/L、约4g/L至12g/L、约4g/L至13g/L、约4g/L至14g/L、约4g/L至15g/L、约5g/L至6g/L、约5g/L至7g/L、约5g/L至8g/L、约5g/L至9g/L、约5g/L至10g/L、约5g/L至11g/L、约5g/L至12g/L、约5g/L至13g/L、约5g/L至14g/L、约5g/L至15g/L、约6g/L至7g/L、约6g/L至8g/L、约6g/L至9g/L、约6g/L至10g/L、约6g/L至11g/L、约6g/L至12g/L、约6g/L至13g/L、约6g/L至14g/L、约6g/L至15g/L、约7g/L至8g/L、约7g/L至9g/L、约7g/L至10g/L、约7g/L至11g/L、约7g/L至12g/L、约7g/L至13g/L、约7g/L至14g/L、约7g/L至15g/L、约8g/L至9g/L、约8g/L至10g/L、约8g/L至11g/L、约8g/L至12g/L、约8g/L至13g/L、约8g/L至14g/L、约8g/L至15g/L、约9g/L至10g/L、约9g/L至11g/L、约9g/L至12g/L、约9g/L至13g/L、约9g/L至14g/L、约9g/L至15g/L、约10g/L至11g/L、约10g/L至12g/L、约10g/L至13g/L、约10g/L至14g/L、约10g/L至15g/L、约11g/L至12g/L、约11g/L至13g/L、约11g/L至14g/L、约11g/L至15g/L、约12g/L至13g/L、约12g/L至14g/L、约12g/L至15g/L、约13g/L至14g/L、约13g/L至15g/L、或约14g/L至15g/L。
富集介质通常包含生长促进剂。生长促进剂的非限制性实例是，可被感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌作为铁源使用的含铁化合物。在该实施方案的一个方面，生长促进剂是柠檬酸铁铵。
可使用任何浓度的柠檬酸铁铵，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，约0.01mg/mL、约0.02mg/mL、约0.03mg/mL、约0.04mg/mL、约0.05mg/mL、约0.06mg/mL、约0.07mg/mL、约0.08mg/mL、约0.09mg/mL、约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL、约1.0mg/mL、约2.0mg/mL、约3.0mg/mL、约4.0mg/mL、约5.0mg/mL、约6.0mg/mL、约7.0mg/mL、约8.0mg/mL、约9.0mg/mL、约10mg/mL、约11mg/mL、约12mg/mL、约13mg/mL、约14mg/mL、或约15mg/mL。在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，至少0.01mg/mL、至少0.02mg/mL、至少0.03mg/mL、至少0.04mg/mL、至少0.05mg/mL、至少0.06mg/mL、至少0.07mg/mL、至少0.08mg/mL、至少0.09mg/mL、至少0.1mg/mL、至少0.2mg/mL、至少0.3mg/mL、至少0.4mg/mL、至少0.5mg/mL、至少0.6mg/mL、至少0.7mg/mL、至少0.8mg/mL、至少0.9mg/mL、至少1.0mg/mL、至少2.0mg/mL、至少3.0mg/mL、至少4.0mg/mL、至少5.0mg/mL、至少6.0mg/mL、至少7.0mg/mL、至少8.0mg/mL、至少9.0mg/mL、至少10mg/mL、至少11mg/mL、至少12mg/mL、至少13mg/mL、至少14mg/mL、或至少15mg/mL。还在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，至多0.01mg/mL、至多0.02mg/mL、至多0.03mg/mL、至多0.04mg/mL、至多0.05mg/mL、至多0.06mg/mL、至多0.07mg/mL、至多0.08mg/mL、至多0.09mg/mL、至多0.1mg/mL、至多0.2mg/mL、至多0.3mg/mL、至多0.4mg/mL、至多0.5mg/mL、至多0.6mg/mL、至多0.7mg/mL、至多0.8mg/mL、至多0.9mg/mL、至多1.0mg/mL、至多2.0mg/mL、至多3.0mg/mL、至多4.0mg/mL、至多5.0mg/mL、至多6.0mg/mL、至多7.0mg/mL、至多8.0mg/mL、至多9.0mg/mL、至多10mg/mL、至多11mg/mL、至多12mg/mL、至多13mg/mL、至多14mg/mL、或至多15mg/mL。
仍在该实施方案的其他方面，可以按以下的浓度使用柠檬酸铁铵：例如，约0.01mg/mL至约0.05mg/mL约0.01mg/mL至约0.1mg/mL、约0.01mg/mL至约0.5mg/mL、约0.05mg/mL至约0.1mg/mL、约0.05mg/mL至约0.5mg/mL、约0.05mg/mL至约1.0mg/mL、约0.05mg/mL至约5.0mg/mL、约0.1mg/mL至约0.5mg/mL、约0.1mg/mL至约1.0mg/mL、约0.1mg/mL至约5.0mg/mL、约0.1mg/mL至约10mg/mL、约0.1mg/mL至约15mg/mL、约0.5mg/mL至约1.0mg/mL、约0.5mg/mL至约5.0mg/mL、约0.5mg/mL至约10mg/mL、约0.5mg/mL至约15mg/mL、约1.0mg/mL至约5.0mg/mL、约1.0mg/mL至约10mg/mL、约1.0mg/mL至约15mg/mL、约5.0mg/mL至约10mg/mL、约5.0mg/mL至约15mg/mL、或约10mg/mL至约15mg/mL。
富集介质通常包含在本文公开的浓度范围内的如在本文公开的生长增强剂。
在一个实施方案中，富集介质包含6g/L至10g/L蛋白胨、3g/L至7g/L胆盐、2g/L至6g/L肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，富集介质包含6g/L至10g/L的酪蛋白胨、3g/L至7g/L的胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，富集介质包含6g/L至10g/L的酪蛋白胨、3g/L至7g/L的胆盐、2g/L至6g/L的肉提取物、2g/L至6g/L的碘、2g/L至6 g/的L碘化钾、0.001g/L至0.008g/L的新生霉素、和0.001g/L至0.008g/L的亮绿。
在一个实施方案中，富集介质包含7.5g/L至8.5g/L的蛋白胨、4g/L至6g/L胆盐、3g/L至5g/L肉提取物、3g/L至5g/L的第一生长抑制剂、3g/L至5g/L的第二生长抑制剂、0.002g/L至0.006g/L的第三生长抑制剂、和0.002g/L至0.006g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，富集介质包含7.5g/L至8.5g/L的酪蛋白胨、4g/L至6g/L的胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的第一碘化合物、3g/L至5g/L的第二碘化合物、0.002g/L至0.006g/L的氨基香豆素抗生素、和0.002g/L至0.006g/L的三芳基甲烷染料。还在该实施方案的其他方面，富集介质包含7.5g/L至8.5g/L的酪蛋白胨、4g/L至6g/L的胆盐、3g/L至5g/L的肉提取物、3g/L至5g/L的碘、1g/L至3g/L的碘化钾、0.002g/L至0.006g/L的新生霉素、和0.002g/L至0.006g/L的亮绿。
在一个实施方案中，富集介质包含8.3g/L至8.9g/L的蛋白胨、4.4g/L至5.0g/L胆盐、4.0g/L至4.6g/L肉提取物、3.7g/L至4.3g/L的第一生长抑制剂、3.7g/L至4.3g/L的第二生长抑制剂、0.003g/L至0.005g/L的第三生长抑制剂、和0.003g/L至0.005g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，富集介质包含8.3g/L至8.9g/L的酪蛋白胨、4.4g/L至5.0g/L的胆盐、4.0g/L至4.6g/L的肉提取物、3.7g/L至4.3g/L的第一碘化合物、3.7g/L至4.3g/L的第二碘化合物、0.003g/L至0.005g/L的氨基香豆素抗生素、和0.003g/L至0.005g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，富集介质包含8.3g/L至8.9g/L的酪蛋白胨、4.4g/L至5.0g/L的胆盐、4.0g/L至4.6g/L的肉提取物、3.7g/L至4.3g/L的碘、3.7g/L至4.3g/L的碘化钾、0.003g/L至0.005g/L的新生霉素、和0.003g/L至0.005g/L的亮绿。
在一个实施方案中，预富集介质包含8.6g/L的蛋白胨、4.7g/L胆盐、4.3g/L肉提取物、4g/L的第一生长抑制剂、4g/L的第二生长抑制剂、0.004g/L的第三生长抑制剂、和0.004g/L的第四生长抑制剂。在该实施方案的方面，预富集介质包含8.6g/L的酪蛋白胨、4.7g/L的胆盐、4.3g/L的肉提取物、4g/L的第一碘化合物、4g/L的第二碘化合物、0.004g/L的氨基香豆素抗生素、和0.004g/L的三芳基甲烷染料。仍在该实施方案的其他方面，富集介质包含8.6g/L的酪蛋白胨、4.7g/L的胆盐、4.3g/L的肉提取物、4g/L的碘、4g/L的碘化钾、0.004g/L的新生霉素、和0.004g/L的亮绿。
在另一个实施方案中，预富集介质还包含盐。在该实施方案的方面，富集介质还包含NaCl、CaCO3和Na2S2O3。在该实施方案的其他方面，富集介质还包含1.3g/L至3.9g/LNaCl、37.4g/L至40.0g/L CaCO3和29.2g/L至31.8g/L Na2S2O3。还在该实施方案的其他方面，富集介质还包含2.3g/L至2.9g/L NaCl、38.4g/L至39.0g/L CaCO3和30.2g/L至30.8g/LNa2S2O3。仍在该实施方案的其他方面，富集介质还包含2.6g/L NaCl、38.7g/L CaCO3和30.5g/L Na2S2O3。
本说明书的方面部分地公开了，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样。在促进沙门氏菌活疫苗细菌在样品中的生长，延迟不需要的生物体在样品中的生长，和/或建立以其他方式增加沙门氏菌样品中的沙门氏菌活疫苗细菌的群体和/或延迟不需要的生物体在样品中的生长的条件的温度和时间参数下进行预富集介质的等分试样的孵育。可在等速旋转、反转或搅拌下进行富集介质的孵育。
在富集介质中孵育预富集介质的等分试样期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃。在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃。还在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃。仍在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃。仍在该实施方案的其他方面，在预富集介质中孵育样品使用的温度可以是，例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃。
在富集介质中孵育预富集介质的等分试样期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。还在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。还在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，约2小时至约4小时、约3小时至约5小时、约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。还在该实施方案的其他方面，在富集介质中孵育预富集介质的等分试样使用的时间可以是，例如，约12小时至约20小时、约13小时至约19小时、约14小时至约18小时、约15小时至约17小时、约12小时至约22小时、约13小时至约21小时、约14小时至约20小时、约15小时至约19小时、约16小时至约18小时、约13小时至约23小时、约14小时至约22小时、约15小时至约21小时、约16小时至约20小时或约17小时至约19小时。
在该实施方案的方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约35℃至约39℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃，持续以下的的一段时间：例如，约12小时至约20小时、约13小时至约19小时、约14小时至约18小时、约15小时至约17小时、约12小时至约22小时、约13小时至约21小时、约14小时至约20小时、约15小时至约19小时、约16小时至约18小时、约13小时至约23小时、约14小时至约22小时、约15小时至约21小时、约16小时至约20小时或约17小时至约19小时。可在等速旋转、反转或搅拌下进行预富集介质的孵育。
在该实施方案的方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃，持续以下的一段时间：例如，约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、或约24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
在该实施方案的其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃，持续以下的一段时间：例如，至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、或至少24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
还在该实施方案的其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃，持续以下的一段时间：例如，至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多15小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、或至多24小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
仍在该实施方案的其他方面，在富集介质中的预富集介质的等分试样可以按以下的温度来孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃，持续以下的一段时间：例如，约2小时至约4小时、约3小时至约5小时、约4小时至约6小时、约5小时至约7小时、约6小时至约8小时、约7小时至约9小时、约8小时至约10小时、约9小时至约11小时、约10小时至约12小时、约11小时至约13小时、约12小时至约14小时、约13小时至约15小时、约14小时至约16小时、约15小时至约17小时、约16小时至约18小时、约17小时至约19小时、约18小时至约20小时、约19小时至约21小时、约20小时至约22小时、约21小时至约23小时、约22小时至约24小时、约23小时至约25小时、或约24小时至约26小时。可在等速旋转、反转或搅拌下孵育富集介质。
本说明书的方面部分地公开了，纯化步骤。随后可以在一个或更多个孵育步骤之后纯化沙门氏菌活疫苗细菌。例如，沙门氏菌活疫苗细菌可以在富集介质中孵育之后和/或在第二预富集介质中孵育之后进行纯化。沙门氏菌活疫苗细菌的纯化包括捕获沙门氏菌活疫苗细菌为更浓缩的形式和/或除去污染性微生物、杂质和碎屑。如此，本文公开的纯化步骤通过以下提高沙门氏菌活疫苗细菌的检测：增加沙门氏菌活疫苗细菌的浓度和/或减少污染物，从而增加在随后检测步骤中测量的可检测的信号水平。捕获沙门氏菌活疫苗细菌和/或除去污染性微生物、杂质和碎屑使用的常见的纯化程序包括亲和层析、离子交换层析、尺寸排阻层析、疏水相互作用层析、陶瓷羟磷灰石层析、反相HPLC、凝胶过滤、沉淀、免疫沉淀、透析过滤、层析聚焦。
在一个实施方案中，利用使用用于感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的抗体或适体的免疫沉淀在孵育步骤之后纯化沙门氏菌活疫苗细菌。免疫沉淀是使用特异性结合抗原的抗体或适体从溶液沉淀该抗原的技术。免疫沉淀要求，抗体在程序中的某一时刻被偶联至固体基底。这通常使用本领域已知的标准偶联程序来完成。固体基底的实例包括琼脂糖粒子和磁性粒子。在该实施方案的方面，免疫沉淀方法采用连接至磁性粒子的用于沙门氏菌活疫苗细菌的抗体或适体。
可在纯化步骤期间在它的孵育期间使用任何浓度的与抗体或适体连接的磁性粒子，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，约1×104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、或约1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质。在该实施方案的其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，至少1×104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至少1×105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至少1×106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至少1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、或至少1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质。仍在该实施方案的其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，至多1×104免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至多1×105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至多1×106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、至多1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、或至多1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质。
仍在该实施方案的其他方面，在纯化步骤期间使用的与抗体或适体连接的磁性粒子的浓度可以是，例如，约1×104至约1×105免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×104至约1×106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×104至约1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×104至约1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×105至约1×106免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×105至约1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×105至约1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×106至约1×107免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、约1×106至约1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质、或约1×107至约1×108免疫磁性粒子/mL包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质。
本说明书的方面部分地公开了，免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质的孵育。免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质的孵育在促进沙门氏菌活疫苗细菌与连接了用于感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的抗体或适体的磁性粒子结合的温度和时间参数下进行。免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质的孵育可在搅动/旋转下进行。
在免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质的孵育期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃。在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃。还在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃。仍在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、或约50℃至约54℃。在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的温度可以是，例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃。
在免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质的孵育期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的时间可以是，例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的时间可以是，例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。还在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的时间可以是，例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
还在该实施方案的其他方面，将免疫磁性粒子与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育使用的时间可以是，例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
在该实施方案的方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、约25℃、约26℃、约27℃、约28℃、约29℃、约30℃、约31℃、约32℃、约33℃、约34℃、约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、或约50℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。
在该实施方案的其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、至少25℃、至少26℃、至少27℃、至少28℃、至少29℃、至少30℃、至少31℃、至少32℃、至少33℃、至少34℃、至少35℃、至少36℃、至少37℃、至少38℃、至少39℃、至少40℃、至少41℃、至少42℃、至少43℃、至少44℃、至少45℃、至少46℃、至少47℃、至少48℃、至少49℃、或至少50℃，持续以下的一段时间：例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。
还在该实施方案的其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、至多25℃、至多26℃、至多27℃、至多28℃、至多29℃、至多30℃、至多31℃、至多32℃、至多33℃、至多34℃、至多35℃、至多36℃、至多37℃、至多38℃、至多39℃、至多40℃、至多41℃、至多42℃、至多43℃、至多44℃、至多45℃、至多46℃、至多47℃、至多48℃、至多49℃、或至多50℃，持续以下的一段时间：例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
仍在该实施方案的其他方面，免疫磁性粒子可在以下的温度与包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、约25℃至约29℃、约26℃至约30℃、约27℃至约31℃、约28℃至约32℃、约29℃至约33℃、约30℃至约34℃、约31℃至约35℃、约32℃至约36℃、约33℃至约37℃、约34℃至约38℃、约35℃至约39℃、约36℃至约40℃、约37℃至约41℃、约38℃至约42℃、约39℃至约43℃、约40℃至约44℃、约41℃至约45℃、约42℃至约46℃、约43℃至约47℃、约44℃至约48℃、约45℃至约49℃、约46℃至约50℃、约47℃至约51℃、约48℃至约52℃、约49℃至约53℃、约50℃至约54℃、约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
培养结束之后，结合沙门氏菌活疫苗细菌的免疫粒子(immunoparticles)可从介质中分离。在该实施方案的方面，可使用磁力分离器从介质分离免疫粒子，所述磁力分离器在特定位置集中免疫粒子，允许除去介质。可选地，可通过离心集中免疫粒子由此允许除去介质来从介质分离免疫粒子。除去介质后，分离的结合沙门氏菌活疫苗细菌的免疫粒子可使用缓冲溶液洗涤一次或更多次。免疫粒子的随后分离可使用磁力分离器或离心分离并除去缓冲溶液来完成。
然而，本文公开的纯化步骤是任选的。因此，在一个实施方案中，本文公开的检测沙门氏菌活疫苗细菌的方法不包括从预富集介质、富集介质，或预富集介质和富集介质两者纯化沙门氏菌活疫苗细菌。在另一个实施方案中，本文公开的检测沙门氏菌活疫苗细菌的方法不包括从富集介质、第二预富集介质，或富集介质和第二预富集介质两者纯化沙门氏菌活疫苗细菌。在另一个实施方案中，本文公开的检测沙门氏菌活疫苗细菌的方法不包括从第一预富集介质纯化沙门氏菌活疫苗细菌。
本说明书的方面部分地公开了，检测步骤。富集后，感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在可通过定性或定量地测量包含在介质中的沙门氏菌活疫苗细菌的量来确定。在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在发生在不需要本文公开的纯化步骤的情况下。在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在发生在完成本文公开的纯化步骤之后。然而，包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质可被加工以除去碎屑和其他污染物而没有任何沙门氏菌活疫苗细菌纯化。在一个实施方案中，离心包含感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的介质以除去碎屑。在另一个实施方案中，不需要这样的离心步骤。另外，使用第二抗体以放大(boast)检测信号是任选的。因此，在一个实施方案中，检测沙门氏菌活疫苗细菌的方法不包括使用第二抗体以放大检测信号。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL、约1×10-4cfu/mL、约1×10- 3cfu/mL、约1×10-2cfu/mL、约1×10-1cfu/mL、约1×100cfu/mL、约1×101cfu/mL、约1×102cfu/mL、约1×103cfu/mL、约1×104cfu/mL、约1×105cfu/mL、约1×106cfu/mL、约1×107cfu/mL、约1×108cfu/mL、约1×109cfu/mL、或约1×1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至少1×10-5cfu/mL、至少1×10-4cfu/mL、至少1×10-3cfu/mL、至少1×10- 2cfu/mL、至少1×10-1cfu/mL、至少1×100cfu/mL、至少1×101cfu/mL、至少1×102cfu/mL、至少1×103cfu/mL、至少1×104cfu/mL、至少1×105cfu/mL、至少1×106cfu/mL、至少1×107cfu/mL、至少1×108cfu/mL、至少1×109cfu/mL、或至少1×1010cfu/mL。还在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至多1×10-5cfu/mL、至多1×10-4cfu/mL、至多1×10-3cfu/mL、至多1×10-2cfu/mL、至多1×10-1cfu/mL、至多1×100cfu/mL、至多1×101cfu/mL、至多1×102cfu/mL、至多1×103cfu/mL、至多1×104cfu/mL、至多1×105cfu/mL、至多1×106cfu/mL、至多1×107cfu/mL、至多1×108cfu/mL、至多1×109cfu/mL、或至多1×1010cfu/mL。
仍在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可定性或定量地检测在本文公开的样品中具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL至约1×10-4cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-3cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-3cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10- 2cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×1010cfu/mL,约1×100cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×109cfu/mL、或约1×104cfu/mL至约1×1010cfu/mL。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL、约1×10-4cfu/mL、约1×10- 3cfu/mL、约1×10-2cfu/mL、约1×10-1cfu/mL、约1×100cfu/mL、约1×101cfu/mL、约1×102cfu/mL、约1×103cfu/mL、约1×104cfu/mL、约1×105cfu/mL、约1×106cfu/mL、约1×107cfu/mL、约1×108cfu/mL、约1×109cfu/mL、或约1×1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至少1×10-5cfu/mL、至少1×10-4cfu/mL、至少1×10-3cfu/mL、至少1×10- 2cfu/mL、至少1×10-1cfu/mL、至少1×100cfu/mL、至少1×101cfu/mL、至少1×102cfu/mL、至少1×103cfu/mL、至少1×104cfu/mL、至少1×105cfu/mL、至少1×106cfu/mL、至少1×107cfu/mL、至少1×108cfu/mL、至少1×109cfu/mL、或至少1×1010cfu/mL。还在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至多1×10-5cfu/mL、至多1×10-4cfu/mL、至多1×10-3cfu/mL、至多1×10-2cfu/mL、至多1×10-1cfu/mL、至多1×100cfu/mL、至多1×101cfu/mL、至多1×102cfu/mL、至多1×103cfu/mL、至多1×104cfu/mL、至多1×105cfu/mL、至多1×106cfu/mL、至多1×107cfu/mL、至多1×108cfu/mL、至多1×109cfu/mL、或至多1×1010cfu/mL。
仍在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在预富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL至约1×10-4cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-3cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10- 3cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×1010cfu/mL,约1×100cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×109cfu/mL、或约1×104cfu/mL至约1×1010cfu/mL。
在该实施方案的方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL、约1×10-4cfu/mL、约1×10-3cfu/mL、约1×10-2cfu/mL、约1×10-1cfu/mL、约1×100cfu/mL、约1×101cfu/mL、约1×102cfu/mL、约1×103cfu/mL、约1×104cfu/mL、约1×105cfu/mL、约1×106cfu/mL、约1×107cfu/mL、约1×108cfu/mL、约1×109cfu/mL、或约1×1010cfu/mL。在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至少1×10-5cfu/mL、至少1×10-4cfu/mL、至少1×10-3cfu/mL、至少1×10-2cfu/mL、至少1×10-1cfu/mL、至少1×100cfu/mL、至少1×101cfu/mL、至少1×102cfu/mL、至少1×103cfu/mL、至少1×104cfu/mL、至少1×105cfu/mL、至少1×106cfu/mL、至少1×107cfu/mL、至少1×108cfu/mL、至少1×109cfu/mL、或至少1×1010cfu/mL。还在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，至多1×10-5cfu/mL、至多1×10-4cfu/mL、至多1×10-3cfu/mL、至多1×10-2cfu/mL、至多1×10-1cfu/mL、至多1×100cfu/mL、至多1×101cfu/mL、至多1×102cfu/mL、至多1×103cfu/mL、至多1×104cfu/mL、至多1×105cfu/mL、至多1×106cfu/mL、至多1×107cfu/mL、至多1×108cfu/mL、至多1×109cfu/mL、或至多1×1010cfu/mL。
仍在该实施方案的其他方面，本文公开的方法可在富集步骤之后定性或定量地检测具有以下浓度的沙门氏菌活疫苗细菌：例如，约1×10-5cfu/mL至约1×10-4cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-3cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-5cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-3cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10- 4cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-4cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-2cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×10-1cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-3cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×10- 1cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-2cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×100cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×10-1cfu/mL至约1×1010cfu/mL,约1×100cfu/mL至约1×101cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×100cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×102cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×101cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×103cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×102cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×104cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×109cfu/mL、约1×103cfu/mL至约1×1010cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×105cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×106cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×107cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×108cfu/mL、约1×104cfu/mL至约1×109cfu/mL、或约1×104cfu/mL至约1×1010cfu/mL。
用于确定沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存的常见检测程序，包括基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、基于生长的检测方法、和基于传感器的检测方法。
在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在使用基于核酸的检测方法发生。基于核酸的检测方法的非限制性实例包括基于DNA的检测方法和基于RNA的检测方法。基于DNA的检测方法包括，但不限于，如DNA印迹分析、基于PCR的测定、序列分析、基于免疫的检测测定，和使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测方法的杂交测定。基于RNA的检测方法包括，但不限于，如RNA印迹分析、基于RT-PCR的测定、RNA序列分析、基于免疫的检测测定，和使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测方法的杂交测定。
在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在使用基于蛋白的检测方法发生。基于蛋白的检测方法的非限制性实例包括基于凝胶的检测方法、基于免疫的检测方法和基于蛋白相互作用的方法。基于凝胶的检测方法包括，但不限于聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE。基于免疫的检测方法包括，但不限于，蛋白印迹分析、ELISA和免疫沉淀。基于蛋白相互作用的方法包括，但不限于，基于蛋白-蛋白相互作用的测定、基于蛋白-DNA相互作用的测定、和基于蛋白-RNA相互作用的测定。
在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在使用基于活性的检测方法发生。基于活性的检测方法的非限制性实例包括酶活性测定和基于蛋白功能的测定。酶活性测定通常包括在包含合适底物的缓冲溶液中孵育包含或可能包含沙门氏菌活疫苗细菌的介质的等分试样。如果期望的酶存在于等分试样中，则将催化底物转化成产物。然后测量底物的损失或产物的形成可定性或定量地与存在的酶的量相关，并因此与沙门氏菌活疫苗细菌的量相关。同样地，基于蛋白功能的测定测量样品中存在的功能的量，并基于该测量推断沙门氏菌活疫苗细菌的量。
在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在使用基于生长的检测方法发生。基于生长的检测方法的非限制性实例包括用或不用生长选择剂测量菌落形成的平板接种测定(plating assay)和测量细胞密度的分光光度计测定。平板接种测定通常包括将介质的等分试样平板接种在包含维持感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的生长的营养物质的琼脂板上。然后，接种的琼脂板在指定的温度和时间下孵育并对沙门氏菌活疫苗细菌菌落的生长进行评价。在一些实施方案中，琼脂板在约25℃至约42℃孵育约12小时至约48小时。在该实施方案的方面，琼脂板在约37℃下孵育约14小时至约16小时。这种评价可通过简单地评价沙门氏菌活疫苗细菌菌落的存在或不存在是定性的，或当计数沙门氏菌活疫苗细菌菌落的数目时是定量的。除了营养物之外，琼脂板可包含着色或以其他方式提供识别菌落作为沙门氏菌活疫苗细菌菌落的可视信号的生色化合物。另外，琼脂板可包含通过供应促进沙门氏菌活疫苗细菌生长或沙门氏菌活疫苗细菌生长需要的化合物或抑制污染性微生物的生长的化合物来选择沙门氏菌活疫苗细菌菌落生长的化合物。测量细胞密度的分光光度计测定通常包括使用分光光度计在特定波长测量从介质采集的等分试样的细胞密度。
在一个实施方案中，检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的存在或不存在使用基于传感器的检测方法发生。传感器可根据被传递的能量的类型，诸如，例如，热、电磁、机械、和电化学进行分类。
在该实施方案的一个方面，基于传感器的检测方法是基于生物传感器的检测方法。生物传感器，是一种掺入生物材料、生物来源的材料或与物理化学传感器或传感系统紧密相关或整合在物理化学传感器或传感系统内的生物模拟的分析设备。生物传感器将生物基质(例如，酶、抗体、受体、细胞器、微生物)的物理或化学性质的改变转化为电信号或其他类型的信号，其幅度取决于溶液中指定分析物的浓度。
生物传感器的非限制性实例包括酶生物传感器、DNA传感器和免疫传感器。基于酶的生物传感器需要将酶固定化在电极表面上用于定量分析物。基于DNA的生物传感器需要将靶序列的非互补DNA链固定在电极表面上用于定量分析物。基于免疫的生物传感器需要将抗体固定在电极表面上用于定量分析物。
生物传感器包含生物识别元件、信号转换器、和检测器。生物识别元件包括抗体、肽、核酸、或酶，且生物识别元件是传感器的最初结合分析物(例如，沙门氏菌活疫苗细菌)或与分析物(例如，沙门氏菌活疫苗细菌)相互作用的部分。在许多情况下，这与将生物识别事件转换为可经由若干方式被检测的信号的构象改变、底物裂解、或酶促反应相关。生物传感器包含两个电极(参比电极和工作电极)或三个电极(参比电极、工作电极和反电极)。
参比电极包括液态和固态参比电极，并且是具有所有其他电极电势参考的已知稳定的电势的电极。参比电极可通过薄膜沉积、电镀和丝网印刷来制造。参比电极的非限制性实例包括银-氯化银电极、甘汞电极、氢电极、汞-氧化汞电极、汞-硫酸亚汞电极、铜-硫酸铜电极、和氢化钯电极。
生物传感器通常使用用于生物过程的电化学技术的功率，通过定量产生与生物分析物的浓度有关的电信号。这样的电化学生物传感器可基于分析的工作原理被分类为电位式、安培计、伏安和阻抗测定(impedimetric)/电导测定。电位式电化学传感器以零位电流流测量工作电极和参比电极之间的平衡电势差。伏安电化学传感器以在工作电极和参比电极之间应用的变化的电势的函数测量电流。安培计电化学传感器以在工作电极和参比电极之间应用恒定电势的函数测量电流。阻抗测定/电导测定的电化学传感器测量工作电极和参比电极之间的电特性的变化。使用生物传感器的电化学检测可以是电特性变化的直接测量，或使用包括用于信号产生的标志(氧化还原活性)化合物的辅助反应的间接测量。
本说明书的方面部分地公开了，检测溶液。当生物传感器是基于葡萄糖的生物传感器时，本文公开的检测溶液通常包括缓冲溶液，所述缓冲溶液包含氯化镁，对氨基苯基磷酸盐、和葡萄糖。任选地，这样的检测溶液可包含如本文公开的表面活性剂。
可使用任何缓冲液，条件是所得的缓冲溶液对实践本文公开的方法有用。缓冲溶液可被本领域技术人员适当地改变，并通常部分地取决于对流动相期望的pH值、被洗脱的蛋白、和被采用的电导率值。因此，该实施方案的方面可任选地包括，例如，2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸(ADA)、二甲基胂酸(甲次砷酸盐)、哌嗪-N,N'-双(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、胆胺氯化物、N,N'-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、2-{[三(羟甲基)甲基]氨基}乙磺酸(TES)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)、哌嗪-N,N'-双(2-羟基丙磺酸)(POPSO)、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、三(羟甲基)甲胺(Tris)、乙酰胺基甘氨酸、N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸(AMPSO)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)、和3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)；乙酸盐缓冲液，诸如，例如，乙酸镁、乙酸钾、和Tris乙酸盐；硼酸盐缓冲液；柠檬酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液，诸如，例如，磷酸钾缓冲液和磷酸钠缓冲液；盐水缓冲液，诸如，例如，磷酸盐缓冲的盐水(PBS)、HEPES缓冲的盐水(HBS)、及Tris缓冲的盐水(TBS)、盐水柠檬酸钠(SSC)；通用缓冲剂，诸如，例如，包含柠檬酸和磷酸钾的缓冲液、Britton-Robinson缓冲液、Carmody缓冲液等、或其任何组合。如何制造和使用特定缓冲液的非限制性实例被描述于，例如，MOLECULAR CLONING、A LABORATORYMANUAL(Joseph Sambrook&David W.Russell编著，Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第3版，2001)和CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(Frederick M.Ausubel等人，编著John Wiley&Sons,2004)中。
可在检测溶液中使用任何浓度的氯化镁，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约55mM、约60mM、约65mM、约70mM、约75mM、约80mM、约85mM、约90mM、约95mM、或约100mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM、至少50mM、至少55mM、至少60mM、至少65mM、至少70mM、至少75mM、至少80mM、至少85mM、至少90mM、至少95mM、或至少100mM。还在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，至多5mM、至多10mM、至多15mM、至多20mM、至多25mM、至多30mM、至多35mM、至多40mM、至多45mM、至多50mM、至多55mM、至多60mM、至多65mM、至多70mM、至多75mM、至多80mM、至多85mM、至多90mM、至多95mM、或至多100mM。仍在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的氯化镁的浓度可以是，例如，约5mM至约10mM、约5mM至约20mM、约5mM至约30mM、约5mM至约40mM、约5mM至约50mM、约5mM至约60mM、约5mM至约70mM、约5mM至约80mM、约5mM至约90mM、约5mM至约100mM、约10mM至约20mM、约10mM至约30mM、约10mM至约40mM、约10mM至约50mM、约10mM至约60mM、约10mM至约70mM、约10mM至约80mM、约10mM至约90mM、约10mM至约100mM、约20mM至约30mM、约20mM至约40mM、约20mM至约50mM、约20mM至约60mM、约20mM至约70mM、约20mM至约80mM、约20mM至约90mM、或约20mM至约100mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的对氨基苯基磷酸盐，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，约0.1mM、约0.2mM、约0.3mM、约0.4mM、约0.5mM、约0.6mM、约0.7mM、约0.8mM、约0.9mM、约1.0mM、约1.1mM、约1.2mM、约1.3mM、约1.4mM、约1.5mM、约1.6mM、约1.7mM、约1.8mM、约1.9mM、约2.0mM、约2.1mM、约2.2mM、约2.3mM、约2.4mM、或约2.5mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，至少0.1mM、至少0.2mM、至少0.3mM、至少0.4mM、至少0.5mM、至少0.6mM、至少0.7mM、至少0.8mM、至少0.9mM、至少1.0mM、至少1.1mM、至少1.2mM、至少1.3mM、至少1.4mM、至少1.5mM、至少1.6mM、至少1.7mM、至少1.8mM、至少1.9mM、至少2.0mM、至少2.1mM、至少2.2mM、至少2.3mM、至少2.4mM、或至少2.5mM。还在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，至多0.1mM、至多0.2mM、至多0.3mM、至多0.4mM、至多0.5mM、至多0.6mM、至多0.7mM、至多0.8mM、至多0.9mM、至多1.0mM、至多1.1mM、至多1.2mM、至多1.3mM、至多1.4mM、至多1.5mM、至多1.6mM、至多1.7mM、至多1.8mM、至多1.9mM、至多2.0mM、至多2.1mM、至多2.2mM、至多2.3mM、至多2.4mM、或至多2.5mM。仍在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的对氨基苯基磷酸盐的浓度可以是，例如，约0.1mM至约0.5mM、约0.1mM至约1.0mM、约0.1mM至约1.5mM、约0.1mM至约2.0mM、约0.1mM至约2.5mM、约0.3mM至约0.5mM、约0.3mM至约1.0mM、约0.3mM至约1.5mM、约0.3mM至约2.0mM、约0.3mM至约2.5mM、约0.5mM至约1.0mM、约0.5mM至约1.5mM、约0.5mM至约2.0mM、约0.5mM至约2.5mM、约0.7mM至约1.0mM、约0.7mM至约1.5mM、约0.7mM至约2.0mM、约0.7mM至约2.5mM、约1.0mM至约1.5mM、约1.0mM至约2.0mM、约1.0mM至约2.5mM、约1.5mM至约2.0mM、约1.5mM至约2.5mM、或约2.0mM至约2.5mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的葡萄糖，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、或约50mM。在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，至少1mM、至少2mM、至少3mM、至少4mM、至少5mM、至少6mM、至少7mM、至少8mM、至少9mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM、或至少50mM。还在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，至多1mM、至多2mM、至多3mM、至多4mM、至多5mM、至多6mM、至多7mM、至多8mM、至多9mM、至多10mM、至多15mM、至多20mM、至多25mM、至多30mM、至多35mM、至多40mM、至多45mM、或至多50mM。仍在该实施方案的其他方面，在检测溶液中使用的葡萄糖的浓度可以是，例如，约1mM至约10mM、约1mM至约15mM、约1mM至约20mM、约1mM至约30mM、约1mM至约40mM、约1mM至约50mM、约5mM至约10mM、约5mM至约15mM、约5mM至约20mM、约5mM至约30mM、约5mM至约40mM、约5mM至约50mM、约10mM至约15mM、约10mM至约20mM、约10mM至约30mM、约10mM至约40mM、或约10mM至约50mM。
可在检测溶液中使用任何浓度的表面活性剂，条件是该浓度对实践本文公开的方法有用。可在制备检测溶液中以本文公开的浓度使用本文公开的表面活性剂。在该实施方案的方面，检测溶液包含介于0.1％(v/v)和10％(v/v)之间的去垢剂B-Per，或表面活性剂聚乙二醇山梨糖醇酐烷基酯家族(家族)或聚乙二醇辛基酚醚家族(家族)。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH 5.5)检测溶液可包含0.0021g/mL磷酸氢二钠、0.0289g/mL磷酸二氢钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH 5.7)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH 5.7)检测溶液可包含0.0174g/mL磷酸氢二钾、0.0204g/mL磷酸钾(邻苯二甲酸酯)、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)检测溶液可包含0.0156g/mL磷酸氢二钠、0.0142g/mL磷酸二氢钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是160mM磷酸盐柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)检测溶液。在该实施方案的一个方面，160mM磷酸盐柠檬酸盐缓冲液(pH 5.5)检测溶液可包含0.0161g/mL磷酸氢二钠、0.0090g/mL柠檬酸、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM乙酸盐缓冲液(pH 5.7)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM乙酸盐缓冲液(pH 5.7)检测溶液可包含1.15μL乙酸、0.0015g/mL乙酸钠、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
在该实施方案的一个方面，检测溶液可以是200mM Tris缓冲液(pH 9.8)检测溶液。在该实施方案的一个方面，200mM Tris缓冲液(pH 9.8)检测溶液可包含0.0243g/mLTRIS、0.0020g/mL氯化镁、0.0018g/mL葡萄糖、和0.0002g/mL对氨基苯基磷酸盐。
本说明书的方面部分地公开了，检测溶液的孵育。检测溶液的孵育在促进信号的检测的温度和时间参数下来进行。可在搅拌/旋转下进行检测溶液的孵育。
在检测溶液的孵育期间可使用任何温度，条件是该温度对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、或约25℃。在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、或至少25℃。还在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、或至多25℃。仍在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、或约25℃至约29℃。在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的温度可以是，例如，约34℃至约39℃、约34℃至约40℃、约35℃至约45℃、约36℃至约44℃、约36℃至约43℃、约37℃至约42℃、约34℃至约45℃或约39℃至约45℃。
在检测溶液的孵育期间可使用任何时间，条件是该时间对实践本文公开的方法有用。在该实施方案的方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。还在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
还在该实施方案的其他方面，孵育检测溶液使用的时间可以是，例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
在该实施方案的方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，约15℃、约16℃、约17℃、约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃、约24℃、或约25℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、或约150分钟。
在该实施方案的其他方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，至少15℃、至少16℃、至少17℃、至少18℃、至少19℃、至少20℃、至少21℃、至少22℃、至少23℃、至少24℃、或至少25℃，持续以下的一段时间：例如，至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少70分钟、至少80分钟、至少90分钟、至少100分钟、至少110分钟、至少120分钟、至少130分钟、至少140分钟、或至少150分钟。
还在该实施方案的其他方面，检测溶液可以在以下的温度被孵育：例如，至多15℃、至多16℃、至多17℃、至多18℃、至多19℃、至多20℃、至多21℃、至多22℃、至多23℃、至多24℃、或至多25℃，持续以下的一段时间：例如，至多5分钟、至多10分钟、至多15分钟、至多20分钟、至多30分钟、至多40分钟、至多50分钟、至多60分钟、至多70分钟、至多80分钟、至多90分钟、至多100分钟、至多110分钟、至多120分钟、至多130分钟、至多140分钟、或至多150分钟。
仍在该实施方案的其他方面，检测溶液可在以下的温度被孵育：例如，约15℃至约19℃、约16℃至约20℃、约17℃至约21℃、约18℃至约22℃、约19℃至约23℃、约20℃至约24℃、约21℃至约25℃、约22℃至约26℃、约23℃至约27℃、约24℃至约28℃、或约25℃至约29℃，持续以下的一段时间：例如，约5分钟至约20分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约40分钟、约5分钟至约50分钟、约5分钟至约60分钟、约5分钟至约70分钟、约5分钟至约80分钟、约5分钟至约90分钟、约5分钟至约100分钟、约5分钟至约110分钟、约5分钟至约120分钟、约5分钟至约130分钟、约5分钟至约140分钟、约5分钟至约150分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约60分钟、约10分钟至约70分钟、约10分钟至约80分钟、约10分钟至约90分钟、约10分钟至约100分钟、约10分钟至约110分钟、约10分钟至约120分钟、约10分钟至约130分钟、约10分钟至约140分钟、约10分钟至约150分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约60分钟、约20分钟至约70分钟、约20分钟至约80分钟、约20分钟至约90分钟、约20分钟至约100分钟、约20分钟至约110分钟、约20分钟至约120分钟、约20分钟至约130分钟、约20分钟至约140分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约60分钟、约30分钟至约70分钟、约30分钟至约80分钟、约30分钟至约90分钟、约30分钟至约100分钟、约30分钟至约110分钟、约30分钟至约120分钟、约30分钟至约130分钟、约30分钟至约140分钟、约30分钟至约150分钟、约60分钟至约70分钟、约60分钟至约80分钟、约60分钟至约90分钟、约60分钟至约100分钟、约60分钟至约110分钟、约60分钟至约120分钟、约60分钟至约130分钟、约60分钟至约140分钟、约60分钟至约150分钟、约90分钟至约100分钟、约90分钟至约110分钟、约90分钟至约120分钟、约90分钟至约130分钟、约90分钟至约140分钟、约90分钟至约150分钟、约120分钟至约130分钟、约120分钟至约140分钟、或约120分钟至约150分钟。
孵育检测溶液之后，等分试样被取出用于分析可检测的电化学信号。在该实施方案的方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，约1μL、约2μL、约3μL、约4μL、约5μL、约6μL、约7μL、约8μL、约9μL、约10μL、约11μL、约12μL、约13μL、约14μL、约15μL、约16μL、约17μL、约18μL、约19μL、或约20μL。在该实施方案的其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，至少1μL、至少2μL、至少3μL、至少4μL、至少5μL、至少6μL、至少7μL、至少8μL、至少9μL、至少10μL、至少11μL、至少12μL、至少13μL、至少14μL、至少15μL、至少16μL、至少17μL、至少18μL、至少19μL、或至少20μL。还在该实施方案的其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，至多1μL、至多2μL、至多3μL、至多4μL、至多5μL、至多6μL、至多7μL、至多8μL、至多9μL、至多10μL、至多11μL、至多12μL、至多13μL、至多14μL、至多15μL、至多16μL、至多17μL、至多18μL、至多19μL、或至多20μL。还在该实施方案的其他方面，被用于分析可检测的电化学信号的等分试样的体积可以是，例如，约1μL至约5μL、约1μL至约10μL、约1μL至约15μL、约1μL至约20μL、2μL至约5μL、约2μL至约10μL、约2μL至约15μL、约2μL至约20μL、约5μL至约10μL、约5μL至约15μL、约5μL至约20μL、约10μL至约15μL、约10μL至约20μL、或约15μL至约20μL。
电化学信号可使用能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器来分析。通常，这样的仪器使用电脑控制的软件进行操作。非限制性实例是PalmSens3，一种恒电位仪、恒流器和阻抗分析仪和PSTrace，与之配套的软件(PalmSens BV,Utrecht,Netherlands)。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。还在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤和本文公开的富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。仍在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。还在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤和本文公开的富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。仍在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的第二预富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。仍在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的第二预富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约26小时、约28小时、约30小时、约32小时、约34小时、或约36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的第二预富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。仍在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的第二预富集步骤、和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤、和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，少于18小时、少于20小时、少于22小时、少于24小时、少于26小时、少于28小时、少于30小时、少于32小时、少于34小时、或少于36小时。
在其他实施方案中，本文公开的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
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在其他实施方案中，包含本文公开的预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤和本文公开的第二预富集步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
仍在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的第二预富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
在其他实施方案中，包含本文公开的第一预富集步骤、本文公开的富集步骤、本文公开的纯化步骤、本文公开的第二预富集步骤、本文公开的纯化步骤和本文公开的检测步骤的方法可被进行以在以下内完成：例如，约18小时至约20小时、约18小时至约22小时、约18小时至约24小时、约18小时至约26小时、约18小时至约28小时、约18小时至约30小时、约18小时至约32小时、约18小时至约34小时、约18小时至约36小时、约20小时至约22小时、约20小时至约24小时、约20小时至约26小时、约20小时至约28小时、约20小时至约30小时、约20小时至约32小时、约20小时至约34小时、约20小时至约36小时、约22小时至约24小时、约22小时至约26小时、约22小时至约28小时、约22小时至约30小时、约22小时至约32小时、约22小时至约34小时、约22小时至约36小时、约24小时至约26小时、约24小时至约28小时、约24小时至约30小时、约24小时至约32小时、约24小时至约34小时、约24小时至约36小时、约26小时至约28小时、约26小时至约30小时、约26小时至约32小时、约26小时至约34小时、约26小时至约36小时、约28小时至约30小时、约28小时至约32小时、约28小时至约34小时、约28小时至约36小时、约30小时至约32小时、约30小时至约34小时、约30小时至约36小时、约32小时至约34小时、约32小时至约36小时、或约34小时至约36小时。
本说明书的方面部分地公开了，进行本文公开的检测沙门氏菌活疫苗细菌的方法的沙门氏菌活疫苗细菌分析试剂盒。本文公开的分析试剂盒包含检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌必需的组分。在一些方面，本文公开的分析试剂盒包含检测感兴趣的单个沙门氏菌活疫苗细菌必需的组分。在一些方面，本文公开的分析试剂盒包含检测感兴趣的多于一个沙门氏菌活疫苗细菌必需的组分。
在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质和富集介质。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、检测溶液和电化学生物传感器。
在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质和富集介质。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、检测溶液和电化学生物传感器。
在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、和能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、和用于捕获免疫粒子的磁源。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、用于捕获免疫粒子的磁源、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、检测溶液、和电化学生物传感器。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、检测溶液、用于捕获免疫粒子的磁源、和电化学生物传感器。
在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、和能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、和用于捕获免疫粒子的磁源。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、用于捕获免疫粒子的磁源、和检测溶液。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、检测溶液、和电化学生物传感器。在一些实施方案中，本文公开的分析试剂盒通常包含第一和第二预富集介质、富集介质、能够结合感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的免疫磁性粒子、检测溶液、用于捕获免疫粒子的磁源、和电化学生物传感器。
本文公开的分析试剂盒还可包含能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器。
本文公开的分析试剂盒还可包括合适的容器，例如，器皿(vessel)、小瓶、管、微型管或微量离心管、试管、烧瓶、瓶、注射器或其他容器。当提供另外的组分或剂时，试剂盒可包含在其中可放置该剂或组分的一种或更多种另外的容器。本文公开的分析试剂盒将通常还包含用于容纳剂、组合物的装置(例如器皿)和处于用于商业销售的封闭限制中的任何其他试剂容器。这样的容器可包括在其中保存期望的小瓶的注射或吹塑模制的塑料容器。
本文公开的分析试剂盒还可包含标签或插页。标签或插页包括“印刷品”，例如，纸或纸板，或单独的或贴在组件上、试剂盒或包装材料(例如，箱子)，或附着至容纳试剂盒组分的安瓿、管或小瓶。标签或插页可另外包含计算机可读介质，诸如磁盘(例如，硬盘，闪速存储器)，光盘诸如CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁带、或电存储介质诸如RAM和ROM或这些的混合物诸如磁/光存储介质、FLASH介质或存储器类型卡。标签或插页可包含在其中的一种或更多种组分的识别信息、用于在其中的一种或更多种组分的使用的量、如何进行检测感兴趣的沙门氏菌活疫苗细菌的方法的逐步的说明。标签或插页可包含标识制造商信息、批号、制造商位置和日期和专利信息的信息
本说明书的方面还可被描述如下：
1.一种检测样品中沙门氏菌活疫苗菌株的方法，所述方法包括以下步骤：a)在第一液体预富集介质中孵育样品，所述第一液体预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一生长抑制剂、0.5g/L至4.5g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约40℃持续约5小时至约10小时；b)在液体富集介质中孵育来自步骤(a)的第一预富集介质的等分试样，所述富集介质包含6g/L至10g/L的蛋白胨、3g/L至7g/L胆盐、2g/L至6g/L肉提取物、2g/L至6g/L的第一生长抑制剂、2g/L至6g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约14小时至约20小时；c)纯化所述液体富集介质或其等分试样以增加沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物；d)在第二液体预富集介质中孵育来自步骤(c)的富集介质的等分试样，所述第二液体预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一生长抑制剂、0.5g/L至4.5g/L的第二生长抑制剂、0.001g/L至0.008g/L的第三生长抑制剂、和0.001g/L至0.008g/L的第四生长抑制剂，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约1小时至约7小时；以及e)通过分析来自步骤(d)的所述第二液体预富集介质的等分试样检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在或不存在。
2.根据实施方案1所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述蛋白胨是来自动物来源的蛋白胨或来自植物来源的蛋白胨。
3.根据实施方案2所述的方法，其中来自动物来源的所述蛋白胨是酸性酪蛋白胨、细菌蛋白胨、牛肉提取物粉末、酪蛋白胨、酪蛋白cc胨、明胶蛋白胨、肉蛋白胨、多聚蛋白胨、月示蛋白胨，和月示蛋白胨3号。
4.根据实施方案3所述的方法，其中来自植物来源的所述蛋白胨是麦芽提取物、大豆蛋白胨、或酵母提取物。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第一生长抑制剂是第一碘化合物。
6.根据实施方案5所述的方法，其中所述第一碘化合物是碘或碘化钾。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第二生长抑制剂是第二碘化合物。
8.根据实施方案7所述的方法，其中所述第二碘化合物是碘或碘化钾。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第二生长抑制剂是氨基香豆素抗生素。
10.根据实施方案9所述的方法，其中所述氨基香豆素抗生素是新生霉素、Albamycin、香豆霉素、或氯新生霉素。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第四生长抑制剂是三芳基甲烷染料。
12.根据实施方案11所述的方法，其中所述三芳基甲烷染料是甲基紫染料、品红染料、酚染料或孔雀石绿染料。
13.根据实施方案12所述的方法，其中所述甲基紫染料是甲基紫2B、甲基紫6B、或甲基紫10B。
14.根据实施方案12所述的方法，其中所述品红染料是副品红、品红、新品红、碱性品红紫、或酸性品红。
15.根据实施方案12所述的方法，其中所述酚染料是酚红、氯酚红、或甲酚红。
16.根据实施方案12所述的方法，其中所述孔雀石绿染料是孔雀石绿或亮绿。
17.根据实施方案11所述的方法，其中所述三芳基甲烷染料是铝试灵、苯胺蓝WS、金精、金精三羧酸、亮蓝FCF、亮绿、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、溴焦酚红、溴麝香草酚蓝、磺溴酞钠(bromsulphthalein)、氯酚红、考马斯亮蓝、甲酚红、结晶紫、结晶紫内酯、乙基绿、固绿FCF、荧烷、品红、酸性品红、碱性品红紫、龙胆、格林S、淡绿SF淡黄、孔雀石绿、甲基蓝、甲基紫、新品红、副品红、专利蓝V、酚红、酚酞、孟加拉红、百里酚酞、维多利亚蓝BO、水蓝色、二甲苯蓝、或二甲酚橙。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的蛋白胨的量是3g/L至5g/L、4g/L至4.6g/L、4.2g/L至4.4g/L或4.3g/L。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的胆盐的量是.5g/L至3.5g/L、2.1g/L至2.7g/L、2.3g/L至2.5g/L或2.4g/L。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的肉提取物的量是1g/L至3g/L、1.8g/L至2.4g/L、2.0g/L至2.2g/L或2.1g/L。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的第一生长抑制剂的量是1g/L至3g/L、1.7g/L至2.3g/L、1.9g/L至2.1g/L或2g/L。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的第二生长抑制剂的量是1g/L至3g/L、1.7g/L至2.3g/L、1.9g/L至2.1g/L或2g/L。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的第三生长抑制剂的量是0.002g/L至0.006g/L、0.003g/L至0.005g/L或0.004g/L。
24.根据实施方案1-23中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)中的第四生长抑制剂的量是0.002g/L至0.006g/L、0.003g/L至0.005g/L或0.004g/L。
25.根据实施方案1-24中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(d)的所述预富集介质还包含盐。
26.根据实施方案25所述的方法，其中所述盐包含NaCl、CaCO3和/或Na2S2O3。
27.根据实施方案26所述的方法，其中NaCl是在0.5g/L至2.6g/L、1.0g/L至1.6g/L、1.2g/L至1.4g/L或1.3g/L的量。
28.根据实施方案26或27所述的方法，其中CaCO3是在18.0g/L至20.6g/L、19.0g/L至19.6g/L、19.2g/L至19.4g/L或19.3g/L的量。
29.根据实施方案26-28中任一项所述的方法，其中Na2S2是在13.9g/L至16.5g/L、14.9g/L至15.5g/L、14.9g/L至15.5g/L或15.2g/L的量。
30.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的蛋白胨的量是7.5g/L至8.5g/L、8.3g/L至8.9g/L、8.5g/L至8.7g/L或8.6g/L。
31.根据实施方案1-30中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的胆盐的量是4g/L至6g/L、4.4g/L至5.0g/L、4.6g/L至4.8g/L或4.7g/L。
32.根据实施方案1-31中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的肉提取物的量是3g/L至5g/L、4.0g/L至4.6g/L、4.2g/L至4.4g/L或4.3g/L。
33.根据实施方案1-32中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第一生长抑制剂的量是3g/L至5g/L、3.7g/L至4.3g/L、3.9g/L至4.1g/L或4g/L。
34.根据实施方案1-33中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第二生长抑制剂的量是3g/L至5g/L、3.7g/L至4.3g/L、3.9g/L至4.1g/L或4g/L。
35.根据实施方案1-34中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第三生长抑制剂的量是0.002g/L至0.006g/L、0.003g/L至0.005g/L或0.004g/L。
36.根据实施方案1-35中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第四生长抑制剂的量是0.002g/L至0.006g/L、0.003g/L至0.005g/L或0.004g/L。
37.根据实施方案1-36中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述富集介质还包含盐。
38.根据实施方案37所述的方法，其中所述盐包含NaCl、CaCO3和/或Na2S2O3。
39.根据实施方案38所述的方法，其中NaCl是在.3g/L至3.9g/L、2.3g/L至2.9g/L、2.5g/L至2.7g/L或2.6g/L的量。
40.根据实施方案38或39所述的方法，其中CaCO3是在37.4g/L至40.0g/L、38.4g/L至39.0g/L、38.6g/L至38.8g/L或38.7g/L的量。
41.根据实施方案38-40中任一项所述的方法，其中Na2S2O3是在29.2g/L至31.8g/L、30.2g/L至30.8g/L、30.4g/L至30.6g/L或30.5g/L的量。
42.根据实施方案1-41中任一项所述的方法，其中步骤(a)中的所述第一预富集介质、步骤(b)中的所述富集介质和/或步骤(d)中的所述第二预富集介质还包含生长增强剂。
43.根据实施方案42所述的方法，其中所述生长增强剂是铁载体。
44.根据实施方案43所述的方法，其中所述铁载体是气杆菌素(Aerobactin)、Alcaligin、固氮菌素(Azotobactin)、嗜铁素(Bacillibactin)、去铁胺B、去铁胺E、肠菌素、铁色素(Ferrichrome)、Ferrioxiamina-B、Ferrioxiamina-E、镰孢氨酸C(Fusarinine C)、分支杆菌生长素、Ornibactin、Petrobactin、Pyoverdine、绿脓杆菌螯铁蛋白(Pyochelin)、沙门菌螯铁蛋白、Staphyloferring A、弧菌素(Vibriobactin)或耶尔森杆菌素(Yersiniabactin)。
45.根据实施方案1-44中任一项所述的方法，其中步骤(a)中的所述孵育在约35℃至约39℃。
46.根据实施方案45所述的方法，其中步骤(a)中的所述孵育在约36℃至约38℃。
47.根据实施方案1-46中任一项所述的方法，其中步骤(a)中的所述孵育持续约6小时至约9小时。
48.根据实施方案47所述的方法，其中步骤(a)中的所述孵育持续约7小时至约8小时。
49.根据实施方案1-48中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第一预富集介质的所述等分试样是步骤(b)中使用的富集介质的约1/5至约1/500体积。
50.根据实施方案1-49中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述孵育在约35℃至约44℃。
51.根据实施方案50所述的方法，其中步骤(b)中的所述孵育在约36℃至约43℃。
52.根据实施方案51所述的方法，其中步骤(b)中的所述孵育在约37℃至约42℃。
53.根据实施方案1-52中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述孵育持续约15小时至约19小时。
54.根据实施方案53所述的方法，其中步骤(b)中的所述孵育持续约16小时至约18小时。
55.根据实施方案1-54中任一项所述的方法，其中步骤(c)的所述液体富集介质或其等分试样使用免疫沉淀程序来纯化。
56.根据实施方案55所述的方法，其中所述免疫沉淀程序采用免疫磁性粒子，所述免疫磁性粒子包含连接至磁性粒子的沙门氏菌活疫苗菌株的抗体或适体。
57.根据实施方案1-56中任一项所述的方法，其中步骤(d)中的所述孵育在约35℃至约44℃。
58.根据实施方案57所述的方法，其中步骤(d)中的所述孵育在约36℃至约43℃。
59.根据实施方案58所述的方法，其中步骤(d)中的所述孵育在约37℃至约42℃。
60.根据实施方案1-59中任一项所述的方法，其中步骤(d)中的所述孵育持续约2小时至约6小时。
61.根据实施方案60所述的方法，其中步骤(d)中的所述孵育持续约3小时至约5小时。
62.根据实施方案1-61中任一项所述的方法，其中检测步骤(e)使用基于传感器的检测方法、基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、或基于生长的检测方法来进行。
63.根据实施方案62所述的方法，其中所述基于传感器的检测方法是电化学检测方法。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述电化学检测方法包括酶生物传感器、DNA传感器、或免疫传感器。
65.根据实施方案63或64所述的方法，其中所述电化学检测方法测量电位式参数、安培计参数、伏安参数、阻抗测定(impedimetric)/电导测定参数，或其任何组合。
66.根据实施方案62所述的方法，其中所述基于核酸的检测方法包括基于DNA的检测方法或基于RNA的检测方法。
67.根据实施方案66所述的方法，其中所述基于DNA的检测方法包括DNA印迹分析、基于PCR的测定、序列分析、基于免疫的检测测定，或使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测的杂交测定。
68.根据实施方案67所述的方法，其中所述基于PCR的测定包括基于实时PCR的测定。
69.根据实施方案66所述的方法，其中所述基于RNA的检测方法包括RNA印迹分析、基于RT-PCR的测定、RNA序列分析、基于免疫的检测测定，或使用FRET、极化或其他荧光、化学发光或生物发光检测的杂交测定。
70.根据实施方案62所述的方法，其中所述基于蛋白的检测方法是基于凝胶的检测方法、基于免疫的检测方法或基于蛋白相互作用的方法。
71.根据实施方案70所述的方法，其中所述基于免疫的检测方法包括蛋白印迹分析、ELISA或免疫沉淀测定。
72.根据实施方案62所述的方法，其中所述基于活性的检测方法包括酶活性测定或基于蛋白功能的测定。
73.根据实施方案72所述的方法，其中所述酶活性测定使用测量底物的消失或产物的形成的分光光度法检测方法。
74.根据实施方案62所述的方法，其中所述基于生长的检测方法包括测量菌落形成的平板接种测定或测量细胞密度的分光光度计测定。
75.根据实施方案1-74中任一项所述的方法，所述方法还包括在步骤(e)之前纯化步骤(d)的所述第二液体预富集介质或其等分试样，以增加沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物。
76.根据实施方案75所述的方法，其中所述第二液体预富集介质或其等分试样使用免疫沉淀程序来纯化。
77.根据实施方案76所述的方法，其中所述免疫沉淀程序采用包含连接至磁性粒子的用于沙门氏菌活疫苗菌株的抗体或适体的免疫磁性粒子。
78.一种沙门氏菌活疫苗菌株分析试剂盒，所述沙门氏菌活疫苗菌株分析试剂盒包含预富集介质和富集介质。
79.一种沙门氏菌活疫苗菌株分析试剂盒，所述沙门氏菌活疫苗菌株分析试剂盒包含如实施方案1-29或42-44中任一项中定义的预富集介质和如实施方案1-17或30-44中任一项中定义的富集培介质。
80.根据实施方案78或79所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含检测溶液。
81.根据实施方案78-80中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含电化学生物传感器。
82.根据实施方案78-81中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含能够与感兴趣的沙门氏菌活疫苗菌株结合的免疫磁性粒子。
83.根据实施方案78-82中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含用于捕获所述免疫粒子的磁源。
84.根据实施方案78-83中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器。
85.根据实施方案78-84中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含合适的容器。
86.根据实施方案78-85中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含标签或插页。
87.根据实施方案78-86中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含描述如实施方案1-77中任一项中定义的方法的标签或插页。
实施例
仅为了说明性的目的提供以下非限制性实施例，以促进更完整理解所公开的主题。这些实施例不应该被解释为限制本说明书中描述的任何实施方案，包括与公开的方法、采用的检测类型、或可使用本文公开的方法检测的沙门氏菌活疫苗细菌的类型有关的那些。
实施例1
传感器的制备和电化学读数
基于酶的电化学传感器使用丝网印刷方法通过在基底材料上沉积一系列不同材料的层来制造。最初，包含银的化合物糊剂的层直接沉积在聚酯基底(A(500gauge)；DuPont E.I.De Nemours&Co.,Wilmington,DE)上。然后，起反电极和参比电极两者的作用的银/氯化银的层，沉积在一侧上的化合物糊剂上以形成壁。将起工作电极的作用的包含碳石墨(Gwent Electronic Materials Ltd.，Pontypool,UK)的第三层沉积在另一侧以形成相对壁。因此，通道在银/氯化银壁和碳石墨壁中间形成。然后，将绝缘糊剂(GwentElectronic Materials Ltd.，Pontypool,UK)的层沉积在银/氯化银和碳石墨层上，且然后将压敏粘合剂(KIWO,Inc.，Seabrook,TX)沉积在该绝缘糊剂层上。然后传感器通过在通道内添加生物层来改进，在通道内添加生物层通过在包含葡萄糖脱氢酶(GDH)的酶溶液的存在下在室温在用5％戊二醛饱和的大气中孵育传感器5分钟，然后在37℃干燥其30分钟来进行。最后，聚酯(DuPont E.I.De Nemours&Co.,Wilmington,DE)的层被放置在绝缘糊剂层的顶部上以覆盖传感器并包围通道。然后，在60℃加热传感器，并使用压力辊施加压力以设置聚酯层。将传感器在4℃存储在干燥的地方直到需要。
沙门氏菌细菌的存在通过测量作为与葡萄糖向葡萄糖酸的转化相关的氧化还原反应的结果产生的电化学信号来检测。在该检测程序中，将富集的细菌培养物的等分试样添加至包含对氨基苯基磷酸盐(PAPH)和葡萄糖的检测溶液。可选地，α萘基磷酸盐(alfanaphtylphosphate)可代替PAPH被使用。如以上所述，将传感器插入进该溶液中，且在约200mV的施加电势下使用PalmSens3(一种恒电位仪、恒流器、和阻抗分析仪)和与之配套的软件PSTrace(PalmSens BV,Utrecht,Netherlands)以安培计(amperometrically)方式检测电化学信号。
简单地说，电化学信号的产生的基础机理如下。使用该程序检测的沙门氏菌细菌合成酶碱性磷酸酶(ALP)，酶碱性磷酸酶(ALP)随后被释放进培养介质中。包含ALP的富集的细菌培养物的添加导致将PAPH水解为PAP。在传感器的生物层上固定的GDH催化葡萄糖转化为葡萄糖酸，葡萄糖酸与氧化PAP为PIQ的氧化还原反应相关。通过传感器检测的电化学信号在它测量当PIQ被还原回PAP时产生的电子时发生。
实施例2
测量的电化学信号、细菌群体和孵育时间之间的关系
电化学信号的产生和它与细菌的群体大小的关系通过测量由包含不同浓度的细菌的群体产生的电流来确定。建立一系列50μL检测溶液，每个包含500mM乙酸盐缓冲液(pH5.7)、10mM氯化镁、1.0mM PAPH和10mM葡萄糖。然后，每个检测溶液与1mL磷酸缓冲的盐水的溶液混合，所述溶液以以下浓度之一包含细菌(鼠伤寒沙门氏菌)(Salmonellatyphimurium)：1×102cfu/mL、1×103cfu/mL、1×104cfu/mL、1×105cfu/mL、1×106cfu/mL、1×107cfu/mL、或1×108cfu/mL。然后检测溶液在37℃孵育30分钟。在约200mV的施加电势下使用如以上所述的PalmSens3以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。如图2中所示，约1×104cfu/mL的细菌浓度产生约0.5μA的可检测信号。另外，在约1×105cfu/mL至约1×107cfu/mL的范围内观察到线性浓度-响应曲线。这些结果表明，约1×104cfu/mL的平均细菌浓度可使用本文公开的电化学检测方法进行检测。
电化学信号的产生和它与孵育时间的关系通过测量由孵育的细菌群体随时间产生的电流来确定。对225mL包含缓冲的蛋白胨和水的培养介质接种10cfu/mL的细菌(鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium))，并在37℃随时间孵育。每两小时采集该接种的介质的100μL等分试样并添加至50μL检测溶液，所述检测溶液包含500mM乙酸盐缓冲液(pH 5.7)、10mM氯化镁、1.0mM PAPH和10mM葡萄糖。然后检测溶液在37℃孵育30分钟。如以上所述，在约200mV的施加电势下使用PalmSens3以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。如图3中所示，在孵育4小时后检测到约0.5μA的可检测信号。在约6小时至约8小时的范围内观察到线性时间-响应曲线。该结果表明，>0.5μA的平均阳极电流指示细菌的存在。
实施例3
沙门氏菌在纯培养物中的存在的确定
由来自纯样品的细菌产生的电化学信号通过测量两种不同浓度的限定的细菌群体产生的电流来确定。对225mL包含缓冲的蛋白胨和0.4％(w/v)Tergitol-4的预富集培养介质接种20cfu或200cfu的细菌(鼠伤寒沙门菌)，剧烈混合10秒，并在37℃下孵育约14至约17小时。
在该预富集步骤之后，对每个细菌浓度采集1mL预富集培养物，并且将10μL等分试样添加至990μL富集培养介质，所述富集培养介质包含2.72％(w/v)Rappaport-Vassiliadis大豆(pH 5.2)，所述Rappaport-Vassiliadis大豆包含4.5g/L大豆蛋白胨、7.2g/L氯化钠、1.26g/L磷酸二氢钾、0.18mg/L磷酸氢二钾、13.6mg/L氯化镁和0.036g/L孔雀石绿(Cultimed)，补充有0.62mg/mL的柠檬酸铁铵(Sigma-Aldrich Corp.,St.Louis,MO)。用于两种浓度的富集培养物在41.5℃伴随圆周搅拌孵育约5至约7小时。在该富集步骤之后，将20μL的溶液3.0×108抗沙门氏菌免疫磁性粒子/mL(Anti-Salmonella,Life Technologies，Inc.，Carlsbad,CA)添加至富集培养物并在室温伴随圆周搅拌孵育30分钟。在该孵育时间之后，将富集培养物与磁体接触3分钟以将抗沙门氏菌免疫磁性粒子集中在容器管内，并使用1mL微量吸液管提取上清液。然后，将上清液添加至1mL的100mM磷酸盐缓冲液，混合10秒，与磁体接触3分钟，并使用1mL微量吸液管提取洗涤的上清液。然后，测试所处理的上清液，以使用以下两种不同的测定检测细菌的存在：本文公开的1)平板接种测定；和2)电化学检测测定。
为使用平板接种测定检测细菌的存在，将处理的上清液的100μL等分试样混入500μL的100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，并将该混合物平板接种在包含选择性显色剂(Laboratorios MICROKIT,S.L.)的琼脂上。然后在37℃孵育琼脂板约15小时，并鉴定确定的有色细菌菌落。如表1中所示，从来源于20cfu和200cfu两者的纯接种物培养物的上清液样品中观察到显色细菌菌落的生长。这些结果表明，本文公开的生长方法与平板接种测定联合可有效检测细菌的存在。
为使用电化学检测测定检测细菌的存在，将处理的上清液的100μL等分试样添加至50μL检测溶液，所述检测溶液包含500mM乙酸盐缓冲液(pH 5.7)、10mM氯化镁、1.0mMPAPH和10mM葡萄糖。然后检测溶液在37℃孵育30分钟。在利用Ag/AgCl持续30秒测量为约200mV的施加电势下使用如以上所述的PalmSens3以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。如表1中所示，从来源于20cfu和200cfu两者的纯接种物培养物的上清液样品检测到高于2μA的电流。这些结果表明，本文公开的生长方法与本文公开的电化学检测测定联合可有效检测沙门氏菌细菌的存在。
实施例4
沙门氏菌活疫苗菌株的存在的确定
由来自样品材料的沙门氏菌活疫苗菌株产生的电化学信号通过测量从粪便材料生成的电流来确定。将25克粪便材料样品掺入约1×104CFU/mL沙门氏菌活疫苗菌株Vac E或VacT，并且将这些样品添加至225mL预富集培养介质(表2)，并在约36℃至约38℃孵育约7至约8小时。还测试了被掺入并证明不包含寒沙门氏菌的粪便材料样品作为阴性对照。
在该预富集步骤之后，将预富集培养物的10μL等分试样添加至1.0mL富集介质中(表2)。然后将富集介质在约41℃至约43℃伴随或不伴随圆周搅拌孵育约16小时至约18小时。在该富集步骤之后，将50μL的溶液3.0×108抗沙门氏菌免疫磁性粒子/mL(Anti-Salmonella,Life Technologies，Inc.，Carlsbad,CA)添加至富集培养物并在约36℃至约38℃伴随圆周搅拌孵育约20分钟至约40分钟。在该孵育时间之后，将富集培养物与磁体接触约1分钟至约3分钟以将抗沙门氏菌免疫磁性粒子集中在容器管内。在弃去上清液之后，将1.0mL预富集介质(表2)添加至抗沙门氏菌免疫磁性粒子中，并且在约36℃至约38℃伴随或不伴随圆周搅拌孵育约2小时至约3小时。在该孵育时间之后，将预富集培养物与磁体接触约1分钟至约3分钟以将抗沙门氏菌免疫磁性粒子集中在容器管内。在弃去上清液之后，向容器管内的抗沙门氏菌免疫磁性粒子中添加1mL的100mM磷酸盐缓冲液，并且然后测试所处理的粒子以检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在。然后，测试所处理的上清液，以使用以下两种不同的测定检测细菌的存在：本文公开的1)平板接种测定；和2)电化学检测测定。
为使用平板接种测定检测细菌的存在，将处理的上清液的100μL等分试样混入500μL的100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，并将该混合物平板接种在包含选择性显色试剂(Laboratorios MICROKIT,S.L.)的琼脂上。然后在37℃孵育琼脂板约15小时，并鉴定确定的有色细菌菌落。如表1中所示，从来源于20cfu和200cfu两者的纯接种物培养物的上清液样品中观察到显色细菌菌落的生长。这些结果表明，本文公开的生长方法与平板接种测定联合可有效检测沙门氏菌活疫苗细菌的存在。
使用电化学检测测定检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在，将包含185mM磷酸钠缓冲液(pH 5.7)、10mM氯化镁、1.0mM 4-氨基苯基磷酸盐和10mM葡萄糖的50μL检测溶液添加至包含抗沙门氏菌免疫磁性粒子的1.0mL的100mM磷酸盐缓冲液中。然后将检测溶液在37℃孵育约30分钟至约75分钟。在利用Ag/AgCl持续30秒测量为约200mV的施加电势下使用PalmSens3(一种恒电位仪、恒流器和阻抗分析仪)和与之配套的软件PSTrace(PalmSensBV,Utrecht,Netherlands)以安培计方式检测每个溶液的电化学信号。
如表3中所示，关于平板接种测定，从来源于污染了VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品的上清液样品观察到显色细菌菌落的生长，而没有污染VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品不显示任何显色细菌菌落。另外，关于电化学检测测定，从来源于污染了VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品的上清液样品检测到高于2μA的电流(表3)。然而，如表3中所示，从没有污染VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品测量到低于0.5μA的电流。这些结果表明，污染了沙门氏菌活疫苗细菌菌株的粪便样品可使用本文公开的方法被鉴定，并与没有污染沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品区分开。
实施例5
沙门氏菌活疫苗菌株的存在的确定
由来自样品材料的沙门氏菌活疫苗菌株产生的电化学信号通过测量从粪便材料生成的电流来确定。通过允许鸟饮用包含约1×106CFU/mL至约1×107CFU/mL沙门氏菌活疫苗菌株Vac E或VacT的水来使鸟针对沙门氏菌进行疫苗接种。在4天之后，通过从五只不同的鸟泄殖腔拭子获得样品并且连同如实施例4中描述的225mL预富集介质一起接种进行处理，并且在约36℃至约38℃孵育约7小时至约8个小时。还测试了被证明不包含沙门氏菌的样品作为阴性对照。
将孵育的预富集培养介质如实施例4中描述的在富集介质中孵育、纯化，在预富集介质中孵育、纯化。另外，使用本文公开的平板接种测定和电化学检测测定检测细菌的存在如以上实施例4中所述进行。
如表4中所示，关于平板接种测定，从来源于从包含VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的泄殖腔拭子获得的粪便样品的上清液样品观察到显色细菌菌落的生长，而没有污染VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品不显示任何显色细菌菌落。另外，关于电化学检测测定，从来源于污染了VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品的上清液样品检测到高于2μA的电流(表4)。然而，如表4中所示，从没有污染VacT或VacE沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品测量到低于0.5μA的电流。这些结果表明，使用污染了沙门氏菌活疫苗细菌菌株的泄殖腔拭子获得的粪便样品可使用本文公开的方法被鉴定，并与没有污染沙门氏菌活疫苗细菌的粪便样品区分开。
最后，应当理解，尽管本说明书的方面通过参考特定的实施方案被强调，本领域的技术人员将容易理解这些公开的实施方案仅是对本文公开的主题的原理的说明。因此，应该理解，除非另外明确说明，公开的主题决不限于本文描述的特定化合物、组合物、制品、装置、方法学、方案和/或试剂等。另外，本领域普通技术人员将认识到，可根据本文的教导进行某些变化、修改、排列、改变、添加、减少及其亚组合，而不偏离本说明书的精神。因此预期，以下所附的权利要求和今后引入的权利要求被解释为包括所有此类变化、修改、排列、改变、添加、减少及其亚组合在其真正的精神和范围内。
本文描述了本发明的某些实施方案，包括本发明人已知用于进行本发明的最佳的模式。当然，在阅读了前述说明书后，对这些描述的实施方案的变化对于本领域的普通技术人员将变得明显。本发明人计划了技术人员酌情采用此类变化，并且本发明人计划了本发明另外以不同于本文具体描述的方式被实施。因此，本发明包括被适用法律许可的所附权利要求书中描述的主题的所有修改和等同物。此外，在其所有可能的变化中上述实施方案的任何组合被本发明所涵盖，除非本文另有说明或另外与上下文明显矛盾。
本发明的替代性实施方案、要素或步骤的分组不应被解释为限制。每个组成员可被单独地或与本文公开的其他组成员组合来提及和要求保护。预期，为了方便和/或专利性的原因，组的一个或更多个成员可被包括于组或从组中删除。当任何此类包括或删除发生时，本说明书被认为包含作为修改的组，从而实现在所附权利要求书中使用的所有马库什组(Markush group)的书面描述。
除非另外指明，在本说明书和权利要求书中使用的表示特征、项目、数量、参数、性质、术语等的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。如本文所用，术语“约”意指如此限定的特征、项目、数量、参数、性质、或术语包含规定的特征、项目、数量、参数、性质或术语的值的以上和以下正或负10％的范围。因此，除非相反指示，本说明书和所附权利要求书中所示的数字参数为可变化的近似值。例如，在确定给定分析物的质量时，质谱设备可以略有不同，在离子的质量或离子的质荷比的上下文中，术语“约”指+/-0.50原子质量单位。至少，而非试图限制对权利要求书的范围的等同原则的应用，每个数字指示应至少根据所报告的有效数字的数目和通过应用通常的约数技术来解释。
关于一个实施方案或一个实施方案的一个方面使用的术语“可以(may)”或“可(can)”也用它携带“可能不(may not)”或“不能(cannot)”的代替含义。这样，如果本说明书公开了一个实施方案或一个实施方案的一个方面可以或可作为本发明的主题的部分被包括，那么也明确地表示了否定限定或排除条件，意味着一个实施方案或一个实施方案的一个方面不可以或不能作为本发明的主题的部分被包括。以相似的方式，关于一个实施方案或一个实施方案的一个方面使用的术语“任选地”意指该实施方案或实施方案的方面可以作为本发明的主题的部分被包括，或不可以作为本发明的主题的部分被包括。这样的否定限制或排除条件是否使用将基于该否定限制或排除条件是否在所请求保护的主题中列举。
尽管列出本发明的广泛范围的数值范围和值为近似值，但在具体实施例中所示的数值范围和值则尽可能精确地来报告。然而，任何数值范围或值固有地包含一定的误差，该误差是由其各自的试验测量中发现的标准偏差必然产生的。本文中值的数值范围的列举仅仅意图用作单独地提及落入所述范围的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指明，数值范围的各单独值被并入到本说明书中，如同其在本文被单独描述。
术语“一(a)”、“一(an)”、“该(the)”和描述本发明的上下文中使用的类似指代物(尤其在以下权利要求书的上下文中)应被解释为既覆盖单数形式又覆盖复数形式，除非本文另外指明或上下文明显矛盾。此外，用于标识的元件的序数指示符-诸如“第一”、“第二”、“第三”等-用于区分所述元件，并不指示或暗示这样的元件的必须的或限定的个数，并且不指示这样的元件的特定位置或顺序，除非另有明确说明。可按任何合适顺序进行本文中描述的所有方法，除非本文另外指明或另外与上下文明显矛盾。本文提供的任何和全部实施例，或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意图更好地说明本发明而不是对另外要求保护的本发明的范围施加限制。本说明书中的语言不应解释为表明任何未要求保护的要素对实施本发明必不可少。
当在权利要求书中使用时，无论作为已提交或每次修改增加的，开放式过渡术语“包含(comprising)”(及其等同的开放式过渡措辞，如包括(including)、含有(containing)和具有(having))包括单独的或与未列举的主题相结合的所有明确列举的要素、限制、步骤和/或特征；命名的要素、限制和/或特征是必要的，但是可以添加其他未命名的要素、限制和/或特征，并且仍然形成权利要求范围内的构造。本文公开的具体实施方案可使用封闭式过渡措辞“由...组成(consisting of)”或“基本上由...组成(consistingessentially of)”替代或作为“包含(comprising)”的修改在权利要求中进一步限制。当在权利要求书中使用时，无论作为已提交或每次修改增加的，封闭式过渡措辞“由...组成”不包括在权利要求中未明确列举的任何要素、限制、步骤或特征。封闭式过渡措辞“基本上由...组成”将权利要求的范围限制为明确列举的要素、限制、步骤和/或特征以及不实质影响所要求保护的主题的基本和新颖特征的任何其他要素、限制、步骤和/或特征。因此，开放式过渡措辞“包含”的含义被定义为包括所有具体列举的要素、限制、步骤和/或特征以及任何任选的、另外的未指定的要素、限制、步骤和/或特征。封闭式过渡措辞“由...组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体列举的那些要素、限制、步骤和/或特征，而封闭式过渡措辞“基本上由...组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体列举的那些要素、限制、步骤和/或特征，以及那些不实质影响所要求保护的主题的基本和新颖特征的要素、限制、步骤和/或特征。因此，在限制性情况下，开放式过渡措辞“包含”(及其等同的开放式过渡措辞)在其含义内包括由封闭式过渡措辞“由...组成”或“基本上由...组成”所指定的要求保护的主题。因此，本文描述的或使用措辞“包含”要求保护的实施方案在本文中明确地或固有地明确地描述、启用和支持措辞“基本上由...组成”和“由...组成”。
本说明书中引用和标识的所有专利、专利出版物、和其他出版物通过引用以其整体出于描述和公开，例如，在这样的出版物中描述的可以与本发明一起使用的组合物和方法论的目的被单独地和清楚地并入本文。这些出版物仅以其先于本申请的申请日期的公开内容被单独地提供。就这一点而言，任何内容不应该被解释为本发明人没有资格借助在先发明或出于任何其他原因先于这样的公开内容的承认。关于日期或陈述，关于这些文件的内容的所有表述是基于对本申请人可用的信息，并不构成关于这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。
最后，本文使用的术语仅为了描述特定实施方案的目的，并不旨在限制仅仅地由权利要求书限定的本发明的范围。因此，本发明不限于如所显示和所描述的精确内容。
Claims (22)
1.一种检测样品中沙门氏菌(Salmonella)活疫苗菌株的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在第一液体预富集介质中孵育所述样品，所述第一预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一碘化合物、0.5g/L至4.5g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约40℃持续约5小时至约10小时；
b)在液体富集介质中孵育来自步骤(a)的第一预富集介质的等分试样，所述富集介质包含6g/L至10g/L的蛋白胨、3g/L至7g/L胆盐、2g/L至6g/L肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约14小时至约20小时；以及
c)纯化所述液体富集介质或其等分试样以增加所述沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物；
d)在第二液体预富集介质中孵育来自步骤(c)的富集介质的等分试样，所述第二预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一碘化合物、0.5g/L至4.5g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约1小时至约7小时；以及
e)通过分析来自步骤(d)的所述第二液体预富集介质的等分试样检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在或不存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述蛋白胨是酪蛋白胨。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第一碘化合物是碘。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第二碘化合物是碘化钾。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述氨基香豆素抗生素是新生霉素。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述三芳基甲烷染料是亮绿。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(a)中的所述第一预富集介质、来自步骤(c)的所述富集介质和/或步骤(d)中的所述第二预富集介质还包含生长增强剂。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第一预富集介质的所述等分试样是步骤(b)中使用的富集介质的约1/5至约1/500体积。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中步骤(c)的所述液体富集介质或其等分试样使用免疫沉淀程序来纯化。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中检测步骤(e)使用基于传感器的检测方法、基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、或基于生长的检测方法来进行。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述基于传感器的检测方法是电化学检测方法。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述电化学检测方法包括酶生物传感器、DNA传感器、或免疫传感器。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述基于核酸的检测方法包括基于DNA的检测方法或基于RNA的检测方法。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，所述方法还包括在步骤(e)之前纯化步骤(d)的所述第二液体预富集介质或其等分试样，以增加所述沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二液体预富集介质或其等分试样使用免疫沉淀程序来纯化。
16.一种沙门氏菌活疫苗分析试剂盒，所述沙门氏菌活疫苗分析试剂盒包含如权利要求1-7中任一项中定义的预富集介质和如权利要求1-7中任一项中定义的富集介质。
17.根据权利要求16所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含检测溶液。
18.根据权利要求16或权利要求17所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含电化学生物传感器。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的分析试剂盒，所述析试剂盒还包含能够与感兴趣的沙门氏菌活疫苗菌株结合的免疫磁性粒子。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含用于捕获所述免疫粒子的磁源。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含能够测量和/或分析电位式参数、伏安参数、安培计参数和/或阻抗参数/电导参数的仪器。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的分析试剂盒，所述分析试剂盒还包含描述如权利要求1-15中任一项中定义的方法的标签或插页。
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