CN105102481A - Vegfr1抗体的治疗性用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用VEGFR1抗体治疗慢性肾脏疾病的方法。

Description

VEGFR1抗体的治疗性用途
本发明涉及医学领域。更具体地，本发明涉及可以利用VEGFR1抗体在患者中治疗慢性肾脏疾病(CKD)和/或更具体地糖尿病性肾病(也称作糖尿病性肾脏疾病)的方法。
血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1，也称作Flt-1，SEQIDNO:1)是VEGF家族蛋白的三种酪氨酸激酶受体(VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3)之一。VEGF家族由一组结构上相关的糖蛋白组成，所述糖蛋白包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和胎盘生长因子(PlGF)。VEGF蛋白通过与三种VEGF受体的胞外免疫球蛋白样结构域选择性结合，发挥多种生物学作用及病理作用。VEGF-A对VEGFR1和VEGFR2具有高亲和力，而VEGF-B和PlGF选择性地与VEGFR1结合。VEGF-A/VEGFR2，分别作为配体和受体，在血管-生血管生物途径的信号传导中发挥主要作用。VEGFR1和可溶形式的VEGFR1(也称作sFlt-1)已经由某些小组建议发挥诱饵受体作用，掩蔽VEGF-A，并防止它与其促血管生成作用更强的配偶体VEGFR2结合。
VEGF信号传导是对血管发生、血管生成、血管内稳态、炎症必需的，并且因此已经与几种人类疾病关联，所述人类疾病包括癌症、糖尿病并发症、心血管疾病和慢性炎症。VEGF系统还在维持肾功能方面发挥至关重要的作用。尽管已经在一些研究中显示VEGF-A对肾脏具有保护作用，但是也已经显示肾脏对VEGF-A的作用极端敏感。已经显示肾损伤在人类中用VEGF-A单克隆抗体抑制VEGF-A水平时出现(Eremina等人,(2008)NEJM358:1129)，并且在过量表达VEGF-A的小鼠中肾小球内VEGF-A水平升高时也出现(Veron等人,(2010)KidneyIntl77:989，和Hakroush等人,(2009)AmJPathol175:1883)。
从VEGF-A的生物学研究中，已经提出用VEGF-A治疗可能有害于患有糖尿病、动脉粥样硬化或脓毒症的患者；这些均是作为CKD病因或并发症的情况。升高的VEGF-A水平也已经与糖尿病性肾病相关(Cha等人,(2000)KidneyIntlSupp77:S104和Hovind等人,(2000)KidneyIntlSupp75:S56)。用VEGF-A抗体减少VEGF-A显示在2型糖尿病小鼠模型中改善肾小球肥大和白蛋白尿(糖尿病性肾病的两种标志物)(deVriese等人,(2001)JAMSocNephol12:993和Flyvbjerg等人,(2002)Diabetes51:3090)。
sFlt-1是分泌形式的VEGFR1，其源自VEGFR1基因的剪接变体。sFlt-1具有保留的配体结合活性，并且已经与可用于经VEGFR-2信号传导的VEGF-A的量相关。已经研究了糖尿病性肾病中活性sFlt-1的量，但是结果尚不一致。
CKD以进行性肾功能损失为特征。糖尿病性肾病(也称作糖尿病性肾脏疾病)是一个类型的CKD，并且是糖尿病的慢性并发症。白蛋白尿增加和逐步、进行性肾功能损失是人糖尿病性肾病中的主要表现。减低的肾功能导致血液肌酸酐和血尿素氮(BUN)增加。糖尿病、高血压和肾小球肾炎是CKD的最常见病因。CKD患者随时间推移出现白蛋白尿、蛋白尿、血清肌酸酐和肾组织病理损害的增加。对于许多患者，逐步恶化的CKD演进成终末期肾病(ERSD)，需要透析或肾移植。已经估计约45％的ERSD患者患有作为其CKD病因的2型糖尿病。肾小球滤过率(GFR)用来对患者的CKD严重程度分类，较低GFR对应于更严重的CKD。减低患者中GFR下降的速率预计延迟或阻止ESRD发展。使用血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素II受体拮抗剂作为现行医护标准以减慢CKD进展成ERSD，但是已经显示这些药物不足以终止最终进展至透析。
WO2006/055809公开了VEGFR1抗体在多种癌异体移植模型中的活性。还公开了对抗某些不形成肿瘤的生血管疾病(如胰岛素依赖性糖尿病和自身免疫肾炎)的活性。然而，迄今，尚未教导或提出靶向VEGFR1的抗体用于糖尿病性肾病或其他形式的进行性CKD的治疗用途。
仍需要提供治疗CKD的替代方法。尤其，仍需要提供治疗糖尿病性肾病的方法。
因此，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向该患者施用有效量的VEGFR1抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向该患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病由糖尿病引起。更具体地，将本发明的方法提供给处于慢性肾脏疾病3期或4期的患者。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是肾病综合征。
在一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中蛋白尿由慢性肾脏疾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中白蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。在又一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中白蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中白蛋白尿由慢性肾脏疾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中白蛋白尿的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供一种减少患者中由血清肌酸酐升高反映的肾小球滤过率(GFR)损失的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种在患者中保护免遭肾组织病理损害的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供一种延缓患者中血尿素氮(BUN)升高的速率的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供一种延缓患者中进展成ESRD的速率的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种在患者中延迟进展成ESRD的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中延迟进展成ESRD至少12个月。在一个实施方案中，本发明提供一种在患者中延迟进展成ESRD的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中延迟进展成ESRD至少24个月。在一个实施方案中，本发明提供一种在患者中延缓至血清肌酸酐加倍时间的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种在患者中延长至GFR降低30％时间的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供减少游离(未结合型)sFLt-1的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者患有慢性肾脏疾病。在一个实施方案中，本发明提供了减少sFLt-1发送信号和/或结合其他蛋白质的能力的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者患有慢性肾脏疾病。
在一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体。在又一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病由糖尿病引起。更具体地，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病处于3期或4期。
在一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是肾病综合征。
在一个实施方案中，本发明提供用于减少蛋白尿的VEGFR1抗体。在又一个实施方案中，本发明提供用于减少蛋白尿的VEGFR1抗体，其中蛋白尿由慢性肾脏疾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供用于减少蛋白尿的VEGFR1抗体，其中蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供用于减少白蛋白尿的VEGFR1抗体。在又一个实施方案中，本发明提供用于减少白蛋白尿的VEGFR1抗体，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供用于减少白蛋白尿的VEGFR1抗体，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供用于减少由血清肌酸酐升高反映的肾小球滤过率(GFR)损失的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供用于保护免遭肾组织病理损害的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供用于延缓血尿素氮(BUN)升高速率的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供用于延缓进展成ESRD的速率的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供用于延迟进展成ESRD的VEGFR1抗体，其中延迟进展成ESRD至少12个月。在一个实施方案中，本发明提供用于延迟进展成ESRD的VEGFR1抗体，其中延迟进展成ESRD至少24个月。在一个实施方案中，本发明提供用于延缓至血清肌酸酐加倍时间的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供用于延长至GFR降低30％时间的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供用于减少游离(未结合型)sFLt-1的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供用于减少sFLt-1发送信号和/或结合其他蛋白质的能力的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途，其中慢性肾脏疾病由糖尿病引起。更具体地，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途，其中慢性肾脏疾病处于3期或4期。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病。在另一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化。在另一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于治疗慢性肾脏疾病的药物的用途，其中慢性肾脏疾病是肾病综合征。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少蛋白尿的药物的用途。在又一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少蛋白尿的药物的用途，其中蛋白尿由慢性肾脏疾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少蛋白尿的药物的用途，其中蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少白蛋白尿的药物的用途。在又一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少白蛋白尿的药物的用途，其中白蛋白尿由慢性肾脏疾病引起。在又一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少白蛋白尿的药物的用途，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少由血清肌酸酐升高反映的肾小球滤过率(GFR)损失的药物的用途。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于保护免遭肾组织病理损害的药物的用途。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延缓血尿素氮(BUN)升高速率的药物的用途。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延缓进展成ESRD的速率的药物的用途。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延迟进展成ESRD的药物的用途，其中延迟进展成ESRD至少12个月。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延迟进展成ESRD的药物的用途，其中延迟进展成ESRD至少24个月。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延缓至血清肌酸酐加倍时间的药物的用途。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于延长至GFR降低30％时间的药物的用途。
在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少游离(未结合型)sFLt-1的药物的用途。在一个实施方案中，本发明提供VEGFR1抗体制造用于减少sFLt-1发送信号和/或结合其他蛋白质的能力的药物的用途。
本发明还提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括与护理标准同时或依次组合施用如本文所述的VEGFR1抗体。本发明还提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，包括与护理标准同时或依次组合施用。
本发明还提供一种治疗患者中糖尿病性肾病的方法，所述方法包括与护理标准同时或依次组合施用如本文所述的VEGFR1抗体。本发明还提供用于治疗糖尿病性肾病的VEGFR1抗体，所述治疗包括与护理标准同时或依次组合施用。护理标准包括并且不限于血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体(ARB)拮抗剂。
如所述那样和本文所用的VEGFR1抗体可以与护理标准同时或依次组合施用。护理标准包括并且不限于血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体(ARB)拮抗剂。
在一个实施方案中，本发明的方法和用途包括VEGFR1抗体，其中如在25℃通过表面等离子体共振法所测定，VEGFR1抗体对VEGFR1具有小于80pM的KD。通过在25℃的结合平衡建立Kd值，如实施例2中所述。在一个实施方案中，本发明的方法和用途包括VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和VEGF-A在体外与VEGFR1的结合作用。在一个实施方案中，本发明的方法和用途包括VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和PlGF在体外与VEGFR1的结合作用。如实施例4中所述建立中和值(参见表4b)。在一个实施方案中，本发明的方法和用途包括VEGFR1抗体，其中如在25℃通过表面等离子体共振法所测定，VEGFR1抗体对VEGFR1具有小于80pM的KD，以小于2.0nM的IC50中和VEGF-A在体外与VEGFR1的结合作用，和/或抗体以小于2.0nM的IC50中和PlGF在体外与VEGFR1的结合作用。
在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者的VEGFR2磷酸化增加。在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者具有的PlGF水平增加。在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者具有的VEGF-A水平增加。在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者具有的sFLt-1水平增加。在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中患者具有的VEGF-B水平增加。在实施方案中，本发明提供治疗方法，其中通过ELISA测量PlGF水平、VEGF-A水平、sFLt-1水平和VEGF-B水平。
在一个实施方案中，本发明提供当VEGFR2磷酸化增加时使用的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供当PLGF水平增加时使用的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供当VEGF-A水平增加时使用的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供当sFLt-1水平增加时使用的VEGFR1抗体。在一个实施方案中，本发明提供当VEGF-B水平增加时使用的VEGFR1抗体。在实施方案中，本发明提供其中通过ELISA测量PlGF水平、VEGF-A水平、sFLt-1水平和VEGF-B水平情况下使用的VEGFR1抗体。
本发明提供据信在人类中引起蛋白尿减少、同时引起疾病进展减少的VEGFR1抗体。另外，本发明提供据信有效治疗人类中慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体。另外，本发明提供据信有效治疗人类中糖尿病性肾病的VEGFR1抗体。本发明提供据信在人类中引起白蛋白尿减少、同时引起疾病进展减少的VEGFR1抗体。本发明提供据信在人类中引起血清肌酸酐降低、同时引起疾病进展减少的VEGFR1抗体。
在一个实施方案中，本发明的方法和用途包含优选的VEGFR1抗体其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是GFAFSSYGMH(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
在一个实施方案中，本发明的方法和用途包含优选的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，并且其中LCVR是SEQIDNO:11的多肽，并且HCVR是SEQIDNO:5的多肽。
在一个实施方案中，本发明的方法和用途包含优选的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含轻链(LC)和重链(HC)，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明的方法和用途包含VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含轻链(LC)和重链(HC)，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明的方法和用途包含优选的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明的方法和用途包含优选的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
在一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是局灶性节段性肾小球硬化，并且其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
本发明还提供一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向该患者施用有效量的VEGFR1拮抗剂。
优选地，VEGFR1拮抗剂是VEGFR1抗体。
“抗体”的一般结构是本领域非常熟知的。对于IgG型抗体，存在通过链内和链间二硫键交联的4条氨基酸链(两条“重链”和两条“轻”链)。对于抗体，一条重链与一条轻链形成链间二硫键，并且另一条重链与另一条轻链形成链间二硫键，并且一条重链与另一条重链形成两个链间二硫键。
某些生物系统中表达时，具有人Fc序列的抗体在Fc区内糖基化。抗体也可以在其他位置糖基化。本领域技术人员将理解本发明的抗体可以含有这类糖基化。一般，糖基化出现在抗体的Fc区内高度保守的N-糖基化位点处。N-聚糖一般与天冬酰胺接合。
抗体I包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链由SEQIDNO:12的多肽组成并且每条重链由SEQIDNO:6的多肽组成。抗体II包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链由SEQIDNO:12的多肽组成并且每条重链由SEQIDNO:7的多肽组成。编码抗体I的每条重链的具体DNA分子是SEQIDNO:13，并且编码抗体I的每条轻链的具体DNA分子是SEQIDNO:15。编码抗体II的每条重链的具体DNA分子是SEQIDNO:14，并且编码抗体II的每条轻链的具体DNA分子是SEQIDNO:15。
抗体I和抗体II是针对人VEGFR1的抗体；抗体I具有IgG1Fc，并且抗体II具有IgG4Fc。抗体III是针对小鼠VEGFR1的大鼠IgG1抗体，并且抗体IV是具有大鼠可变区和小鼠IgG1Fc的针对小鼠VEGFR1的嵌合抗体。
可以使用本领域熟知的技术产生用于本发明方法和用途的抗体，例如，重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或这类技术的组合或本领域容易已知的其他技术。用于产生和纯化抗体的方法是本领域熟知的并且可以在例如Harlow和Lane(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,第5-8章和第15章,ISBN0-87969-314-2中找到。
“”有效量”意指用于本发明方法和用途的抗体的量或包含用于本发明方法和用途的抗体的药物组合物的量，所述量将激发组织、系统、动物、哺乳动物或人的生物学反应或医学反应或在组织、系统、动物、哺乳动物或人上激发想要的治疗效果，其中所述的生物学反应或医学反应或想要的治疗效果是研究者、医学医生或其他临床医生正在寻求的。抗体的有效量可以根据多种因素如疾病状态、个体的年龄、性别和重量和抗体在个体中激发所需反应的能力而变动。有效量也是这样一种量，其中抗体的治疗有益作用超过任何有毒或有害作用。有效量可以包含多次或连续施用的约0.001至20mg/kg每单次(例如，推注)的量。在一些情况下，低于前述范围下限的剂量水平可以超过足量，而在其他情况下仍然可以使用较大剂量。
术语“治疗”及其各种词性形式等在包括延缓或逆转病症的进展。这些术语还包含缓和、改善、减弱、消除或减少病症或病状的一种或多种症状，即便该病症或病状实际上并未消除并且即使该病症或病状的进展本身并未延缓或逆转。患者涉及将从抑制VEGFR1活性获益的患有疾病、病症或病状的哺乳动物，优选地是人类。
已经将3期或4期CKD定义为具有在15ml/分钟/1.73m2和59ml/分钟/1.73m2之间的估算GFR(eGFR)的患者。其他不针对CKD患者使用分期定义，而是通过他们的如下eGFR以下确定患者：正常>80，轻微：50-80，中度：30-50，和重度<30。
用于本发明方法和用途的抗体或包含该抗体的药物组合物可以通过肠胃外途径(例如，皮下、静脉内、腹膜内、肌内或经皮)施用。用于本发明方法和用途的抗体可以按单或多个剂量单独或与可药用载体和/或稀释剂组合施用至患者。用于本发明方法和用途的药物组合物可以通过本领域熟知的方法制备(例如，Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第19版(1995),A.Gennaro等人,MackPublishingCo.)并且包含如本文中公开的抗体，和一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂。
实施例1：抗体表达和纯化
下文在名为“氨基酸和核苷酸序列”章节中列出重链和轻链可变区的多肽、抗体I-IV的完整重链和轻链氨基酸序列和编码它们的核苷酸序列。此外，表1中显示轻链和重链CDR多肽。
用于本发明方法和用途的VEGFR1抗体包括但不限于抗体I和II，可以基本上如下产生并纯化。可以使用预先确定的最佳HC:LC载体比率或同时编码HC和LC的单个载体系统，用分泌抗体的表达系统瞬时或稳定转染适宜的宿主细胞，如HEK293EBNA或CHO。使用许多常用技术中的任一项纯化其中已经分泌有抗体的澄清培养基。例如，可以将培养基便利地施加至用于Fab片段的MabSelect柱(GEHealthcare)或KappaSelect柱(GEHealthcare)，所述柱已经用相容性缓冲液如磷酸缓冲盐溶液(pH7.4)平衡。可以洗涤所述柱以移除非特异性结合的组分。可以洗脱结合的抗体，例如，借助pH梯度洗脱(如20mMTRIS缓冲液pH7至10mM柠檬酸钠缓冲液pH3.0，或磷酸缓冲盐溶液pH7.4至100mM甘氨酸缓冲液pH3.0)。可以检测抗体级分，如通过SDS-PAGE检测，并且随后可以将这些级分汇集。取决于预期用途，进一步纯化是任选的。可以使用常见技术，将抗体浓缩和/或无菌过滤。可以通过常见技术，包括大小排阻、疏水相互作用、离子交换、多元或羟基磷灰石层析有效地移除可溶性聚集物和多聚体。可以将产物立即在-70℃冷冻或可以冻干。
表1:SEQIDNO
抗体 轻链 重链 LCVR HCVR
I 12 6 11 5
II 12 7 11 5
III 17 16
IV 19 18
实施例2：VEGFR1抗体的结合动力学、亲和力和特异性
可以根据本领域已知的方法，通过使用表面等离子体共振(SPR)生物传感器如或(GEHealthCare)确定用于本发明方法和用途的抗体针对人VEGFR1及人VEGFR2和人VEGFR3的结合动力学、亲和力和选择性。结合动力学、亲和力和特异性可以在本分析中用来显示所公开的针对小鼠VEGFR1的抗体在体外类似于所公开的针对人VEGFR1的抗体发挥作用。
可以使用SPR测定法在用HBS-EP运行缓冲液(GEHealthcare#BR-1006-69)所引发的Biacore仪上确定该抗体针对多种物种的VEGF受体的结合亲和力、特异性、动力学和化学计量，并且分析温度可以设定在25℃或37℃。可以在2个或全部4个流动小室(Fc)上使用标准NHS-EDC胺偶联生成含有固定化山羊抗-(人或小鼠)κ(κ链特异性)或蛋白A的CM4芯片(在37℃用于T100的S系列)并且将其用来利用捕获方法。可以通过稀释入运行缓冲液，以1μg/mL和10μg/mL之间的浓度范围制备抗体样品或VEGF-Fc受体。可以按不同浓度(200nM至0.078nM浓度范围，2倍稀释增量)制备VEGFR1-His、抗体II或抗体IV。每个分析循环可以由以下组成：(1)在独立流动小室(Fc2、Fc3和Fc4)的固定化蛋白A或抗(人或小鼠)κ(κ链特异性)上捕获抗体样品，(2)在全部Fc上以50μL/分钟注射250μL(300秒)加His标签的受体、抗体II-Fab或抗体IV，(3)返回缓冲液流20分钟以监测解离相，(4)用25μL(30秒)甘氨酸注射pH1.5再生芯片表面，(5)用25μL(30秒)HBS-EP注射平衡芯片表面。数据可以使用标准双参考法处理并对于Biacore2000使用Biacore评价软件4.1版及对于BiacoreT100使用Biacore评价软件2.0.3版，针对1:1结合模型拟合，以确定结合速率(kon，M-1s-1单位)、解离速率(koff，s-1单位)和Rmax(RU单位)。可以从关系KD＝koff/kon计算平衡解离常数(KD)。
在基本上如实施例2中所述那样进行的实验中，抗体I、II、III和IV以相似高的结合亲和力(KD)结合其相应物种的VEGFR1(参见表2)。通过不与至多200nM的VEGFR2和VEGFR3受体结合，抗体II和IV均对VEGFR1显示良好选择性。抗体II对人和食蟹猴VEGFR1受体具有牢固的皮摩尔亲和力。对于人VEGFR1，抗体II在37℃的KD是740+/-34pM(n＝3)并且对于食蟹猴VEGFR1，抗体II在37℃的KD是554+/-29pM(n＝3)。
表2：使用表面等离子体共振法(SPR)，抗体I、II、III和IV对多个物种的VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3受体的体外结合参数
(a)从每个独立实验计算为KD＝koff/kon并且通过平均化几种独立KD值获得最终值。nd＝因为至多约200nM浓度的受体时未观察到结合作用而未测定
实施例3：在培养的表达嵌合人VEGFR1/EpoR或小鼠VEGFR1/小鼠EpoR受体的细胞中VEGFR1由抗体II和抗体IV内化
可以通过在表达嵌合小鼠VEGFR1/小鼠EPOR或人VEGFR1/小鼠EPOR受体的细胞中测量VEGFR1内化，测定VEGFR1抗体内化并随后降解VEGFR1的能力。VEGFR1内化可以在本分析中用来显示所公开的针对小鼠VEGFR1的抗体在体外类似于所公开的针对人VEGFR1的抗体发挥作用。当表达嵌合VEGFR1/Epo受体时，BaF3细胞在IL-3不存在的情况下存活。通过抗体介导的内化作用减少细胞表面嵌合VEGFR1/EpoR导致细胞死亡。
人和小鼠VEGFR1胞外结构域和跨膜结构域可以与Epo受体的胞内结构域融合。可以将嵌合受体克隆入pMSCVpuro逆转录病毒载体(Clontech，目录号634401)。可以通过逆转录病毒感染，生成BaF3-小鼠VEGFR1-小鼠EpoR细胞和BaF3-人VEGFR1-小鼠EpoR细胞。可以通过分别用小鼠VEGFR1/小鼠EpoR或人VEGFR1/小鼠EpoR转染PhoenixEco逆转录病毒包装细胞(ATCC)，产生逆转录病毒。逆转录病毒粒子可以用来转导BaF3细胞。BaF3-VEGFR1-EpoR细胞可以在RPMI-1640(ThermoScientific，#SH30255.01)、10％(v/v)FBS(Invitrogen，#10082)、1mM丙酮酸钠(ThermoScientific，#SH30239.01)、100U/500mL青霉素G和100μg/500mL链霉素(ThermoScientific，#SV30079.01)、2μg/mL嘌呤霉素(Calbiochem#540411)；5ng/mL鼠IL-3(R&D#403-ML-CF)中培养。
为了进行内化测定法，可以将转导的BaF3细胞用20mL不含IL-3的培养基洗涤3次以洗去IL-3。可以将100μl在不含IL-3的培养基中的细胞添加至白色/透明96孔组织培养板(BD#353377)的每个孔以实现1-2x104个细胞/孔。VEGFR1和同种型对照抗体可以用不含IL-3的培养基连续稀释以实现待测试的2倍终浓度，并且随后可以将100μl2X抗体溶液添加至每个孔。随后可以将平板在37℃于95％相对湿度和5％(v/v)CO2下温育。在培养6日后，可以通过CellTiter-Glo发光细胞生存力测定法(Promega#G7571)确定活细胞的数目。可以将平板和CellTiter-Glo底物平衡到室温持续30分钟。可以将100μlCellTiter-Glo添加至每个孔。可以将平板在轨道摇床上振摇2分钟以混合内容物并继续在室温温育10分钟以稳定发光信号。发光可以由WallacVictor3TM1420Multilable计数器(PerkinElmerPrecisely)记录。可以通过与无抗体处理的BaF3细胞比较，计算VEGFR1抗体处理组和对照IgG抗体处理组中的细胞变异性百分数。每种剂量的三次重复处理的平均数可以用作均数并用于标准误差计算。t-检验可以用来比较相同剂量时VEGFR1抗体和对照抗体之间的数据。可以将小于0.05的P值视为统计显著。
在基本上如实施例3中所述那样进行的实验中，温育不同剂量的抗体II时，该抗体抑制BaF3-小鼠VEGFR1-小鼠EpoR细胞增殖，如与人IgG4对照抗体相比，由生存力显著减少显示(表3)。类似地，与不同剂量的抗体IV温育6日后，与小鼠IgG1对照抗体相比，BaF3-小鼠VEGFR1-小鼠EPOR细胞显示更多的细胞死亡(表3)。这些结果显示细胞表面VEGFR1受体均由抗体II和IV内化。另外，结果表明抗体II和IV与BaF3细胞上嵌合VEGFR1的结合不刺激受体激活及细胞增殖。
表3:抗体II和IV在表达嵌合小鼠和人VEGFR1/EpoR的BaF3细胞中减少细胞生存力
数据显示三次重复处理的平均数和标准误差并且是两个实验的代表。
实施例4：通过固相ELISA和基于细胞的VEGFR1磷酸化测定法测量的抗体II对与人VEGFR1结合的人VEGF-A和PlGF的中和作用
可以通过固相ELISA并通过基于细胞的VEGFR1磷酸化测定法，测量VEGFR1抗体与VEGFR1结合并中和VEGF-A及PlGF对VEGFR1的结合作用的能力。VEGF-A和PlGF中和作用可以在本分析中用来显示所公开的针对小鼠VEGFR1的抗体在体外类似于所公开的针对人VEGFR1的抗体发挥作用。
对于固相ELISA，96孔板可以用PBS中的1μg/mLhVEGFR1-Fc(R&D321-fl050/cf)以50μl/孔包被，并且随后在4℃温育过夜。随后可以从孔移除溶液，并且随后所述孔可以用100μl1％酪蛋白在室温封闭1小时。抗体(包括对照Ron抗体(R&DMAB691))可以在微量滴定板中相对于PBSt(含有Tween20的PBS)滴定，以50μg/mL开始并且以1:3稀释稀释至0.023μg/mL(参见表4a)。ELISA平板可以用PBSt洗涤3次，并且随后可以添加50μl/孔预先滴定的抗体。在37℃温育1小时后，可以将50μl生物素酰化的配体(2nMhPLGF1(PeproTech#AF-10006)或2nMhVEGFA-165(R&D#293-VE)添加至每个孔，并且继续在37℃温育30分钟。平板可以用PBSt洗涤3次，并且随后可以添加50μl/孔NA-AP(1:1000稀释)，在室温温育15分钟。在洗涤另外三次后，可以添加100μl/孔PMP(水中1:35稀释)。平板随后可以显色30分钟并且在OD560读取。
对于基于细胞的VEGFR1磷酸化测定法，表达人VEGFR1的PAE-R1细胞可以按100,000个细胞/孔接种至24孔组织培养板中并在37℃伴随5％CO2培养过夜。随后可以将培养基更换成500μl饥饿培养基(含有0.1％BSA的DMEM/F12)并且培养过夜。随后可以将抗体加入培养基并将细胞培养30分钟。随后可以添加人VEGF-A165(R&D目录号293-VE)或人PlGF(R&D目录号264-PG)并将细胞温育另外10分钟。可以使用ELISA(R&DDuoSetICELISA显色试剂盒，#DYC4170-2)，确定磷酸化人VEGFR1。
数据可以表示为均数+/-标准误差。JMP8可以用于ANOVA分析，接着进行Dunnett’s比较。可以使用iGraphPadPrism第4版计算IC50。可以将小于0.05的P值视为统计显著。
在基本上在实施例4中如上文所述进行的实验中，抗体II中和人VEGF-A和PlGF与VEGFR1的结合作用，并且还阻抑人VEGF-A和PlGF刺激的VEGFR1磷酸化。抗体II分别以0.43nM和0.14nM的IC50中和PlGF和VEGF-A与VEGFR1的结合作用(表4a)。
需要在低抗体浓度时的数据点以精确计算IC50。因此，实验在始于5μg/mL处并按1:3稀释度稀释至0.0023μg/mL的抗体浓度重复。实验流程可以如下文描述。
对于固相ELISA，96孔板可以用PBS中的1μg/mLhVEGFR1-Fc(R&D321-fl050/cf)以50μl/孔包被，并且随后在4℃温育过夜。随后可以从孔移除溶液，并且随后所述孔可以用100μl1％酪蛋白在室温封闭1小时。抗体(包括对照Ron抗体(R&DMAB691))可以在微量滴定板中相对于PBSt(含有Tween20的PBS)滴定，以5μg/mL开始并且以1:3稀释稀释至0.0023μg/mL(参见表4b)。ELISA平板可以用PBSt洗涤3次，并且随后可以添加50μl/孔预先滴定的抗体。在37℃温育1小时后，可以将50μl生物素酰化的配体(4nMhPLGF1(R&DCat#264-PG-010)或2nMhVEGFA-165(R&D#293-VE)添加至每个孔，并且继续在37℃温育30分钟。平板可以用PBSt洗涤3次，并且随后可以添加50μl/孔NA-AP(1:1000稀释)，在室温温育15分钟。在洗涤另外三次后，可以添加100μl/孔PMP(水中1:35稀释)。平板随后可以显色30分钟并且在OD560读取。
数据可以表述为均数+/-标准误差。JMP8可以用于ANOVA分析，接着进行Dunnett’s比较。可以使用GraphPadPrism第6版计算IC50。可以将小于0.05的P值视为统计显著。
在基本上如上文所述进行的重复实验中，抗体II中和人VEGF-A和PlGF与VEGFR1的结合作用，并且还阻抑人VEGF-A和PlGF刺激的VEGFR1磷酸化。抗体II分别以0.31nM和1.02nM的IC50中和PlGF和VEGF-A与VEGFR1的结合作用(表4b)。
抗体II在体外阻断VEGF刺激的和PlGF刺激的VEGFR1磷酸化，如表5中所见。
表4a：中和人VEGF-A和PlGF结合作用
表4b：中和人VEGF-A和PlGF结合作用
表5：在培养的表达人VEGFR1的PAE-R1细胞中的磷酸化
pVEGFR1(OD)
SFM 0.2590+/-0.0090
人IgG4 0.2390+/-0.0090
抗体II 0.2445+/-0.0075
VEGF-A 0.5430+/-0.0270
抗体II+VEGF-A 0.3150+/-0.0040
PlGF 0.5330+/-0.0240
抗体II+PlGF 0.2735+/-0.0015
P<0.001。使用Dunnett法，与对照(SFM)比较。
实施例5：抗体II和IV减弱sFlt1对VEGF-A介导的ERK磷酸化的抑制效应
可以在培养的hUVEC细胞和bEnd3细胞中测量VEGFR1抗体减弱VEGF-A介导的ERK磷酸化受sFlt1抑制的能力。对VEGF-A介导的ERK磷酸化的抑制可以在本分析中用来显示所公开的针对小鼠VEGFR1的抗体在体外类似于所公开的针对人VEGFR1的抗体发挥作用。
对于bEnd3细胞中的测量，bEnd3细胞可以购自ATCC(#CRL-2299)。bEnd3细胞可以在含有抗/抗(Thermo#SV30079.01)和10％胎牛血清(Invitrogen#10082-147)的DMEM/高葡萄糖培养基(HyClone#SH30243.01)中重悬至3x105个细胞/mL。可以将0.5mL重悬的bEnd.3细胞(含有大约1.5x105个细胞)添加至24孔微量滴定板(Costar#3524)的每个孔并在37℃，5％CO2温育24小时。随后可以吸出培养基，并且随后可以使细胞在500μl/孔的含有抗/抗和0.1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma#A7979)的DMEM/高葡萄糖培养基中于37℃，5％CO2饥饿15小时。在添加VEGF-A、sFlt1和/或VEGFR1抗体之前，可以将培养基更换成新鲜的含0.1％BSA的饥饿培养基。
对于VEGF-A处理，可以将50μL10X浓度的小鼠VEGF164(8ng/mL终浓度)(R&D#493-MV/CF)添加至每个孔并将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。对于VEGF-A加sFlt1处理，30μL20X浓度的小鼠VEGF164(8ng/mL终浓度)可以在37℃与30μL小鼠sFlt1(40ng/mL终浓度，R&D#471-F1)预混合30分钟，随后可以将50μL混合物添加至每个孔并且将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。对于VEGF-A加sFlt1和抗体IV，20μL30X浓度的抗体IV(500ng/mL终浓度)可以在37℃与小鼠sFlt1(40ng/mL终浓度，R&D471-F1)预混合30分钟。接下来，可以将40μL30X浓度的小鼠VEGF164(8ng/mL终浓度)添加至抗体IV和sFlt1的混合物。可以将50μL最终混合物添加至每个孔并将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。对于无血清培养基对照组，可以将50μL含0.1％BSA的饥饿培养基添加至每个孔并且将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。
对于hUVE细胞中的测量，hUVE细胞可以在含补充物(Lonza#CC-4176)的EGM-2培养基(Lonza#CC-3156)中重悬成3x105个细胞/mL。可以将0.5mL重悬的hUVE添加至24孔微量滴定板(Costar#3524)的每个孔(1.5x105个细胞/孔)并在37℃，5％CO2温育24小时。培养基随后可以更换成含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma#A7979)的500μl/孔EGM-2培养基以在37℃，5％CO2饥饿15小时。在添加处理化合物之前，可以将培养基更换成新鲜的含0.1％BSA的饥饿培养基。对于VEGF-A处理，可以添加50μL10X浓度的人VEGF165(1.5ng/mL终浓度)(R&D293-VE)并且将细胞37℃，5％CO2温育10分钟。对于VEGF-A加sFlt1，30μL20X浓度的人VEGF165(1.5ng/mL终浓度)可以与人sFlt1(40ng/mL终浓度，R&D321-FL/CF)在37℃混合30分钟。随后可以将50μl混合物添加至板孔并且将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。对于VEGF-A加sFlt1和抗体II，20μL30X浓度的抗体II(73μg/ml最终的)可以在37℃与人sFlt1(40ng/mL终浓度)预混合30分钟，并且随后可以将40μL30X浓度的人VEGF165(1.5ng/mL终浓度)添加至VEGF-A和sFlt1的混合物。可以将50μL最终混合物添加至所述孔并将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。对于无血清培养基对照组，可以将50μL含0.1％BSA的饥饿培养基添加至每个孔并且将细胞在37℃，5％CO2温育10分钟。
为了制备细胞裂解物，10mLTris裂解缓冲液(MSD)可以与200μL蛋白酶抑制剂溶液(50x母液)、100μL磷酸酶抑制剂I(100x母液)、100μL磷酸酶抑制剂II(100x母液)、40μLDMSO中的苯基甲磺酰氟化物(PMSF)(250x母液)和100μLSDS(10％母液)混合。PMSF和SDS可以紧邻使用之前添加。在移除处理培养基后，可以将50μL细胞裂解缓冲液体添加至每个孔。细胞可以与裂解缓冲液在冰上温育10分钟并且随后在4℃振摇30分钟。可以使用PierceBCA蛋白质分析试剂盒，目录号23227，确定裂解物的蛋白质浓度。
对于ERK1/2磷酸化测定法，可以遵循MSD开发的夹心免疫测定方案(Phospho-ERK1/2(Thr202/Tyr204；Thr185/Tyr187)测定法全细胞裂解物试剂盒；MSD#K151DWD-1)，确定磷酸化的ERK1/2。该测定法可以使用以磷酸化ERK1/2(Thr202/Tyr204；Thr185/Tyr187)的捕获抗体预包被的平板。在添加样品后，可以添加含有检测抗体(与电化学发光化合物(MSD磺基标签标记物)缀合的抗总ERK1/2)的溶液。MSDSECTOR成像仪可以用于测量与样品中磷酸化ERK1/2水平相关的发射光强度。捕获抗体和检测抗体均与人和小鼠全细胞裂解物交叉反应。
数据可以表述为均数+/-标准误差。JMP8可以用于ANOVA分析，接着进行Dunnett’s比较。
在基本上如实施例5中所述那样进行的实验中，抗体II和抗体IV分别在培养的HUVEC和bEnd3细胞中减弱sFlt1活性(表6)。与小鼠VEGF-A164混合之前sFlt1与抗体IV的预温育明显阻止sFlt1对bEnd3细胞中VEGF-A刺激的ERK1/2磷酸化的抑制作用。在本研究中抗体IV的终浓度是500ng/mL。与抗体IV相似，与人VEGF-A165混合之前sFlt与抗体II的预温育明显减少hUVE细胞中VEGF-A165刺激的ERK1/2磷酸化。在本研究中抗体II的终浓度是73μg/ml。这些结果显示抗体II和抗体IV均阻断Flt1对VEGF-A的截获作用，这可以导致VEGF-A对VEGFR2的可及性增加。
表6：抗体II和IV减弱bEnd3和hUVE细胞中的sFlt1活性
*p<0.01，**p<0.001。使用Dunnett法，与对照(SFM)比较。
实施例6：抗体III和IV在残余肾小鼠模型中减少白蛋白尿并改善肾组织病理损害
可以在残余肾小鼠模型中体内测量VEGFR1抗体改善白蛋白尿和肾组织病理损害(二种CKD指标)的潜力(Leelahavanichkul等人,(2010)KidneyInt.78(11):1136–1153)。
可以通过在大约8周龄手术摘除四分之三的小鼠肾实体，生成残余肾模型。该模型类似于形成白蛋白尿、高血压和肾损害(包括肾小球膜扩张、肾小球硬化和间质纤维化)的人慢性肾脏疾病(CKD)。残余物肾手术可以在8-9周龄的129S6/SvEvTac雄性小鼠中实施。可以使用缩减四分之三总肾实体的改良单程手术，其中可以利用烧灼法切除一只肾脏的两极，随后进行第二只肾的肾切除术。外科钉(surgicalstaple)可以手术后1周取出。小鼠可以在维持于75°F按照12小时光照/黑暗循环和湿度50％的房间中，在高密度支架上的微型隔离笼、用于富集的锯末垫料巢穴中单独圈养。小鼠可以自由获得瓶装水和Purina5008膳食。圈养水可以是经反渗透过滤和氯化的自来水，pH6.5-7。残余肾小鼠可以按手术后2周基线尿ACR和体重随机分配。
对于尿采集和尿白蛋白及肌酸酐测量，可以通过在96孔Corning#3359聚丙烯微量滴定板上放置单只动物，采集随机尿。可以将有机玻璃容纳室固定在小鼠和平板上方。可以使用微量移液器，将尿转移至冰上的1.5mL微量离心管中，并以10,000转/分钟离心5分钟。尿白蛋白可以使用内部验证的测定法测量，并且尿肌酸酐可以使用酶促法测量。
对于肾病理学，可以在研究结束时采集肾，在福尔马林中固定，并根据标准方法加工成石蜡切片。可以由病理学家评价肾切片的肾损害。可以使用以下量度半定量评定肾小球膜基质、肾小球纤维化和间质纤维化：无(0)，最少(1)，轻微(2)，中等(3)，明显(4)和严重(5)。可以使用H&E和PAS染色的切片评定肾小球膜基质扩张和基底膜增厚。可以评价Masson三色染色的肾切片以确定(间质和肾小球)纤维化程度。
为了测量收缩血压，可以使用尾套法(CodaSystem,KentScientific)测量血压，其中可以通过在实际测量之前3-5天，将小鼠每天在连接尾套的情况下置于小鼠固定器中5分钟，使小鼠适应于束缚。设备室温可以增加至75°F以在血压采集过程期间提供额外的温暖。可以选择并随机分配小鼠。可以将小鼠置于固定器/束缚器中并固定在在Coda暖垫装置顶部(31-33℃)。可以穿过尾套放置尾部并可以将每只小鼠束缚大约30分钟。可以将尾套充气，足够紧密地压迫尾部以短时暂停动脉血流动，并且随后通过放气逐渐松开以观察动脉脉搏恢复。在动脉脉搏恢复时，可以将尾套完全放气。来自一个小鼠的重复测量的平均数可以用作该小鼠的收缩血压水平。
数据可以展示为均数+/-SE。GraphPadPrism或JMP可以用于ANOVA或非配对t-检验分析。为了分析，尿ACR数据可以转化成对数值。GraphpadPrism或JMP可以用于ANOVA分析，随后用于Dunnett多重比较检验。可以将小于0.05的P值视为统计显著。
在基本上如实施例6中所述那样进行的实验中，进行了三项研究。对于研究1，包括六个组：(1)PBS，每周三次(tiw)，n＝12；(2)小鼠IgG1，10mg/kg，每周三次，n＝12；(3)抗体IV，10mg/kg，每周三次，n＝12；(4)抗体IV，3mg/kg，每周三次，n＝12；(5)抗体IV，3mg/kg，每周一次，(n＝86)；和(6)抗体IV，1mg/kg，每周三次，n＝12。将0.2mL试验化合物或对照化合物按以上所示的剂量和间隔时间皮下注射(sc)16周。在基线处(在治疗之前)采集随机尿和体重并且在给药的第3、6、10、12和16周再次采集。在给药的第16周采集收缩血压。在8周研究结束时采集的样品包括EDTA抗凝全血和肾。EDTA血浆用来测量BUN、肌酸酐和其他参数。将一半沿冠状面切片的残余肾在10％nBF(中性缓冲的福尔马林)中固定以便组织病理学检验，另一半残余肾在-80℃急冻用于将来分析。
对于研究2，这项研究中包括5个组：(1)假性对照(n＝4，无处理)；(2)PBS对照(n＝10)；(3)大鼠IgG1，10mg/kg(n＝10)；(4)抗体III，10mg/kg(n＝10)；以及(5)抗体III，3mg/kg(n＝10)。全部组每周3次(tiw)按体积0.2mL/小鼠腹腔内给药8周。在随机化(基线)时采集随机尿并测量体重并且在给药第4、6和8周时再次采集随机尿及测量体重。在给药的第4和第8周采集收缩血压。使用尾套测定血压。终点样品采集与研究1中所述相同。
对于研究3，包括9个组：(1)假性操作组，无处理，n＝4；(2)PBS对照，每周三次，n＝6；(3)大鼠IgG1，30mg/kg，每周二次，n＝10；(4)抗体III，30mg/kg，每周二次，n＝10；(5)抗体III，10mg/kg，每周三次，n＝10；(6)抗体III，10mg/kg，每周一次，n＝10；(7)抗体III，3mg/kg，每周三次，n＝10；(8)抗体III，3mg/kg，每周一次，n＝10；和(9)抗体III，1mg/kg，每周一次，n＝10。将化合物按在体积0.2mL/小鼠皮下注射(sc)六周。在基线处(在处理之前)并且在给药的第2、4和6周采集随机尿和体重。使用尾套法在给药的第6周采集收缩血压。终点样品采集与研究1中所述相同。
研究1、2和3显示在残余肾小鼠中，与相应时间点处的对照相比，抗体III(3mg/kg和10mg/kg)和抗体IV(1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg)显著地减少白蛋白尿，如通过尿白蛋白/肌酸酐(ACR)所测量(表7-9)。抗体III和抗体IV在10mg/kg、30mg/kg和3mg/kg(tiw)给药组中还改善残余肾小鼠中的肾组织病理学评分，如通过肾小球纤维化、间质纤维化和Masson评分所测量(表10-11)。
表7：抗体IV减少残余肾小鼠中的ACR(研究1)
数据展示为均数+/-SE
表8：抗体III减少残余肾小鼠中的ACR(研究2)
数据展示为均数+/-SE
表9：抗体III减少残余肾小鼠中的ACR(研究3)
数据展示为均数+/-SE
表10：残余肾小鼠中的肾组织病理学评分(研究2)
表11：残余肾小鼠中的肾组织病理学评分(研究3)
实施例7：抗体III在糖尿病db/db小鼠和单侧肾切除db/db小鼠中减少白蛋白尿并改善肾组织损害
可以在糖尿病db/db和单侧肾切除db/db小鼠中体内测量VEGFR1抗体改善白蛋白尿和肾组织学损害(二种CKD指标)的潜力。db/db小鼠代表一种形成与人糖尿病性肾病相似的白蛋白尿和肾组织病理损害的2型糖尿病小鼠模型(Sharma等人,(2003)AmJPhysiolRenalPhysiol284:F1138)。单侧肾切除的db/db小鼠比未接受单侧肾切除术的db/db小鼠形成更多白蛋白尿和更严重的肾结构损害(Ninichuk等人,(2007)EurJMedRes12：351)。
对于尿采集和尿白蛋白及肌酸酐测量，可以通过在96孔Corning#3359聚丙烯微量滴定板上放置单只动物，采集随机尿。可以将有机玻璃容纳室固定在小鼠和平板上方。可以使用微量移液器，将尿转移至冰上的1.5mL微量离心管中，并以10,000转/分钟离心5分钟。尿白蛋白可以使用内部验证的测定法测量，并且尿肌酸酐可以使用酶促法测量。
对于肾病理学，可以在研究结束时采集肾，在福尔马林中固定，并根据标准方法加工成石蜡切片。可以由病理学家评价肾切片的肾损害。可以使用以下量度半定量评定肾小球膜基质、肾小球纤维化和间质纤维化：无(0)，最少(1)，轻微(2)，中等(3)，明显(4)和严重(5)。可以使用H&E和PAS染色的切片评定肾小球膜基质扩张和基底膜增厚。可以评价Masson三色染色的肾切片以确定(间质和肾小球)纤维化程度。
数据可以展示为均数+/-SE。GraphPadPrism或JMP可以用于ANOVA分析，随后用于Dunnett多重比较检验。可以将小于0.05的P值视为统计显著。
在基本上如实施例7中所述那样进行的实验中，进行了2项研究。在研究4中，雄性db/db雄性小鼠(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd)购自Harlan实验室(印第安纳波利斯，IN)，并且在7周龄随机分配以每周三次(tiw)分别接受PBS、10mg/kg对照大鼠IgG1、10mg/kg抗体III和3mg/kg抗体III，持续六周。每个组中的小鼠数是10，例外是具有8只小鼠的PBS组。在处理的第4和第6周采集的随机尿中测定白蛋白/肌酸酐(ACR)。在六周研究结束时检查血液参数和肾组织学。
在研究5中，根据IACUC及其机构指南在4周龄的db/db小鼠(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd)中实施单侧肾切除术。小鼠在大约8-9周龄随机分配。本研究中包括7个组：(1)PBS对照，n＝6；(2)大鼠IgG1，30mg/kg，每周二次，n＝10；(3)抗体III，30mg/kg，每周二次，n＝10；(4)抗体III，10mg/kg，每周三次，n＝10；(5)抗体III，10mg/kg，每周一次，n＝10；(6)抗体III，3mg/kg，每周一次，n＝10；和(7)抗体III，1mg/kg，每周一次，n＝10。动物按0.2mL/注射皮下(sc)给药6周。如表13和表15中所示定期检查血糖、体重、随机尿ACR。在六周研究结束时检查血液肌酸酐、BUN和肾组织学。
在研究4和5中，对于db/db小鼠中10mg/kg每周三次和3mg/kg每周三次的剂量和单侧肾切除db/db小鼠中全部测试的剂量(30mg/kg，每周三次；10mg/kg，每周三次；10mg/kg，每周一次；3mg/kg每周三次；3mg/kg，每周一次，和1mg/kg，每周一次)，与对照抗体相比，抗体III显著减少尿白蛋白/肌酸酐(ACR)(表12-13)。在单侧肾切除db/db小鼠中，抗体III还改善肾组织病理学评分，如通过肾小球膜基质评分所测量，并减少血尿素氮(BUN)(表14和表15)。
表12：抗体III减少db/db小鼠中的ACR(研究4)
表13：抗体III减少单侧肾切除db/db小鼠中的ACR(研究5)
表14:抗体III改善单侧肾切除db/db小鼠中的肾组织学损害
表15：抗体III对单侧肾切除db/db小鼠上的体重、葡萄糖、胆固醇、BUN和FFA的影响
实施例8：抗体IV在糖尿病db/db-eNOS缺陷小鼠中减少白蛋白尿、阻止血清肌酸酐增加并降低死亡率
可以在糖尿病db/db-eNOS缺陷小鼠中体内测量VEGFR1抗体改善白蛋白尿和肾功能(二种CKD指标)的潜力。db/db-eNOS敲除小鼠代表一种与更晚期阶段的人糖尿病性肾病相似的糖尿病肾损伤模型。这些小鼠形成高血糖、白蛋白尿、小动脉玻璃样变性、GBM变厚、肾小球膜扩张、肾小球膜溶解、局灶性节段性和早期结节性肾小球硬化、以及肾小球滤过率(GFR)下降(Zhao等人,(2006)JAmSocNephrol17:2664)。不作处理情况下，小鼠在16-20周龄后显示高死亡率。
对于尿采集和尿白蛋白及肌酸酐测量，可以通过在96孔Corning#3359聚丙烯微量滴定板上放置单只动物，采集随机尿。可以将有机玻璃容纳室固定在小鼠和平板上方。可以使用微量移液器，将尿转移至冰上的1.5mL微量离心管中，并以10,000转/分钟离心5分钟。尿白蛋白可以使用内部验证的测定法测量，并且尿肌酸酐可以使用酶促法测量。
在基本上如实施例8中所述那样进行的实验中，检验抗体IV功效的两项研究在糖尿病db/db-eNOS敲除小鼠中实施(研究6和研究7)。
对于研究6，db/db-eNOS敲除小鼠(BKS.Cg-Lepr<db>-Nos3<tm1Unc/Rhrs>)在8至22周龄随机分配至两个组中：由接受10mg/kg小鼠IgG1的6只雄性和5只雌性小鼠组成的对照组和由接受10mg/kg抗体IV的6只雄性和4只雌性小鼠组成的处理组。将抗体按体积0.2mL/注射每周三次(tiw)皮下(sc)施用12周。在研究结束时测量血清肌酸酐。
对于研究7，将db/db-eNOS敲除小鼠随机分配入三个组以分别接受PBS、10mg/kg的对照小鼠IgG1和10mg/kg的抗体IV。PBS组由11只小鼠(包括5只雄性小鼠和6只雌性小鼠)组成。对照IgG1组由11只小鼠(包括6只雄性小鼠和5只雌性小鼠)组成。处理开始时，抗体IV组由7只雄性小鼠和5只雌性小鼠组成。将抗体IV试剂和对照试剂每周三次(tiw)皮下施用12周。在基线和处理的第2、4、6、6、10，和12周测量随机尿ACR水平。在基线和处理的第6周和第12周检查血清肌酸酐。
在db/db-eNOS敲除小鼠中，与相应时间点处的对照相比，抗体IV显著减少白蛋白尿，如通过尿白蛋白/肌酸酐(ACR)所测量(表16)。抗体IV还改善糖尿病db/db-eNOS敲除小鼠中的肾功能，如通过阻止血清肌酸酐升高所测量(表16)。在研究终点时存活的小鼠当中，对照组(PBS+IgG1，n＝13)中的69％血清肌酸酐升高大于50％，相比之下抗体IV组(n＝10；卡方检验中P＝0.016)10％血清肌酸酐升高大于50％。另外，对照组中30％小鼠的血清肌酸酐加倍，而抗体IV组中小鼠的血清肌酸酐均不加倍。抗体IV处理在db/db-eNOS敲除小鼠中降低了死亡率(表17)。
表16：抗体IV减少糖尿病db/db-eNOS缺陷小鼠中的ACR
表17：抗体IV处理和对照抗体处理的糖尿病db/db-eNOS敲除小鼠中的存活率(％)(研究6和7)
实施例9：抗体II和III对猴和小鼠中的血液PlGF水平的作用
可以在猴和小鼠中测量VEGFR1抗体影响体内血液PlGF水平的能力。为了测量猴血浆中的PlGF，可以使用PlGFELISA测定(R&DSystems#DPG00)。为了测量小鼠血液中的PlGF，可以使用PlGFELISA测定(R&DSystems，Quantikine小鼠PlGF-2免疫测定法；目录号MP200)。在分析之前，可以将血清和血浆样品按2-20倍稀释入校准物稀释剂(R&DSystems#RD5-17)。对于小鼠PlGF，标准曲线可以是23.4pg/ml至1500pg/ml，并且对于猴PlGF，是15.6pg/ml至1000pg/ml。数据可以表示为均数+/-SE；并且GraphPadPrism4可以用于数据分析。
在食蟹猴研究中，可以使用从4组在2.5-4.5岁的猴(每个组由4只雄性和4只雌性猴组成)采集的血浆测量血液PlGF对抗体II的体内反应。这些猴可以按0、3、20或65mg/kg的剂量每周一次(qw)接受抗体II持续13周。血液样品可以在研究结束时采集。
在小鼠研究中，可以使用从残余物小鼠或单侧肾切除db/db小鼠中采集的血液测量血液PlGF对抗体III的体内反应。在残余肾小鼠研究中，抗体III可以按10mg/kg和3mg/kg，1周3次(tiw)给药8周。在单侧肾切除db/db研究中，抗体III可以30mg/kg每周二次、10mg/kg每周二次、10mg/kg每周一次、3mg/kg每周一次和1mg/kg每周一次施用6周。血浆样品可以在研究结束时采集。
在基本上如实施例9中所述那样进行的实验中，在3、20和65mg/kg的剂量每周一次持续13周时，抗体II显著地升高食蟹猴中的血浆PlGF水平(表18)。抗体III在残余肾小鼠和单侧肾切除小鼠中均剂量依赖地升高血液PlGF(表19)。
表18：在抗体II处理13周的食蟹猴中的血液PlGF
血浆PlGF(pg/mL)
溶媒 4.3+/-1.7
抗体II 3mg/kg，每周一次 527.6+/-94.9
抗体II 20mg/kg，每周一次 805.4+/-56.9
抗体II 65mg/kg，每周一次 807.5+/-129.4
P<0.01vs.溶媒组
表19：在抗体III处理的小鼠中的血液PlGF
P<0.01
实施例10：小鼠和猴肾中的肾VEGFR2磷酸化
可以在猴和小鼠的肾中测量VEGFR1抗体影响肾VEGFR2磷酸化的能力。
猴肾可以从食蟹猴研究采集，其中4组在2.5-4.5岁的猴(每个组由4只雄性和4只雌性猴组成)可以每周一次(qw)用抗体II分别按0、3、20和65mg/kg的剂量处理13周。剂量0组中的猴可以接受溶媒(PBS，pH7.4)注射。可以在研究结束时采集和冷冻肾脏样品。
可以使用QIAGENTissueLyser制备猴肾匀浆，其中可以将大约150μg猴肾组织置于冰上的2mlQIAGEN管中并且随后添加500μL样品缓冲液(MSDphosphor-VEGFR2，目录号K151DJD-1)。该管可以在QIAGENTissueLyser上随不锈钢珠(5mm，QIAGEN#69989)一起以6.5速度振摇60秒。该管可以在冰上温育5分钟，随后在4℃转动该管30分钟。随后可以将该管在4℃和8,000转/分钟离心10分钟。可以将上清液移出到一个新的微量离心管。可以使用BCA测定法(PierceBCA蛋白质测定试剂盒，目录号23227)确定1:100稀释的匀浆中的蛋白质浓度。样品可以贮存在-80℃.
可以使用Phospho-VEGFR-2(Tyr1054)测定全细胞裂解物试剂盒(MSD#K151DJD-1)，确定磷酸化的VEGFR2水平。可以将含有400μg总蛋白的猴肾匀浆上样到每个孔。
可以从如实施例6中所述的残余肾研究、如实施例7中所述的单侧肾切除db/db小鼠研究或在129只正常小鼠中采集小鼠肾。在129只小鼠研究中，来自TaconicFarm的129只雄性S6/SvEvTac小鼠可以在大约10周龄随机分配入两个组，以接受抗体III或对照大鼠IgG1抗体。抗体III和对照IgG1抗体可以按10mg/kg每周三次(tiw)皮下施用16周。可以在16周研究结束时采集肾脏。
可以通过添加大约50μg小鼠肾至300μL样品缓冲液(MSD小鼠phospho-KDR(Tyr1175)，制备小鼠肾匀浆。可以将管置于冰上并在FastPrep上以6.5速度振摇40秒。在冰上温育5分钟后，可以使用FastPrep破碎组织。可以将管在4℃转动30分钟，随后在4℃和8,000转/分钟离心10分钟。可以将上清液移出到一个新的微量离心管。可以使用BCA法(PierceBCA蛋白质测定试剂盒，目录号23227)确定1:100稀释的匀浆中的蛋白质浓度。样品可以贮存在-80℃.
可以使用小鼠phospho-KDR(Tyr1175)测定全细胞裂解物试剂盒(MSD订购号N45CA-1)，确定磷酸化的小鼠VEGFR2。可以将含有400μg总蛋白的小鼠肾匀浆上样到每个孔。可以使用SECTOR成像仪读取OD。
在基本上如实施例10中所述那样进行的实验中，抗体II在每周一次接受20mg/kg剂量持续13周的食蟹猴中增加肾VEGFR2磷酸化(表20)。类似地，在接受六周抗体III处理的残余肾小鼠中(表21)、在接受6周抗体III处理的单侧肾切除db/db小鼠中(表22)以及在接受16周抗体III处理的129只小鼠中(表23)，抗体III增加肾VEGFR2磷酸化。
表20：在抗体II处理后的猴肾中的VEGFR2磷酸化
pVEGFR2(OD)
溶媒 93.38+/-8.702
抗体II 177.88+/-25.423
P<0.05
表21:抗体III增加残余物小鼠肾中的肾VEGFR2磷酸化。
P<0.003，vs.rIgG1对照组，通过ANOVA和Dunnett比较
表22：抗体III增加单侧肾切除db/db小鼠肾中的VEGFR2磷酸化。
P<0.0005，vs.对照IgG1组，通过ANOVA和Dunnett比较
表23：抗体III增加129只S6/SvEvTac小鼠肾中的肾VEGFR2磷酸化。
pVEGFR2(OD)
rIgG，10mg/kg每周三次 484.25+/-95.33
抗体III，10mg/kg每周三次 1039.00+/-60.29
P<0.001，vs.对照IgG1组。
氨基酸和核苷酸序列
SEQIDNO：1(hVEGFR1)
MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSKLKDPELSLKGTQHIMQAGQTLHLQCRGEAAHKWSLPEMVSKESERLSITKSACGRNGKQFCSTLTLNTAQANHTGFYSCKYLAVPTSKKKETESAIYIFISDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVQISTPRPVKLLRGHTLVLNCTATTPLNTRVQMTWSYPDEKNKRASVRRRIDQSNSHANIFYSVLTIDKMQNKDKGLYTCRVRSGPSFKSVNTSVHIYDKAFITVKHRKQQVLETVAGKRSYRLSMKVKAFPSPEVVWLKDGLPATEKSARYLTRGYSLIIKDVTEEDAGNYTILLSIKQSNVFKNLTATLIVNVKPQIYEKAVSSFPDPALYPLGSRQILTCTAYGIPQPTIKWFWHPCNHNHSEARCDFCSNNEESFILDADSNMGNRIESITQRMAIIEGKNKMASTLVVADSRISGIYICIASNKVGTVGRNISFYITDVPNGFHVNLEKMPTEGEDLKLSCTVNKFLYRDVTWILLRTVNNRTMHYSISKQKMAITKEHSITLNLTIMNVSLQDSGTYACRARNVYTGEEILQKKEITIRDQEAPYLLRNLSDHTVAISSSTTLDCHANGVPEPQITWFKNNHKIQQEPGIILGPGSSTLFIERVTEEDEGVYHCKATNQKGSVESSAYLTVQGTSDKSNLELTTLTCTCVAATLFWLLLTLFIRKMKRSSSEIKTDYLSIIMDPDEVPLDEQCERLPYDASKWEFARERLKLGKSLGRGAFGKVVQASAFGIKKSPTCRTVAVKMLKEGATASEYKALMTELKILTHIGHHLNVVNLLGACTKQGGPLMVIVEYCKYGNLSNYLKSKRDLFFLNKDAALHMEPKKEKMEPGLEQGKKPRLDSVTSSESFASSGFQEDKSLSDVEEEEDSDGFYKEPITMEDLISYSFQVARGMEFLSSRKCIHRDLAARNILLSENNVVKICDFGLARDIYKNPDYVRKGDTRLPLKWMAPESIFDKIYSTKSDVWSYGVLLWEIFSLGGSPYPGVQMDEDFCSRLREGMRMRAPEYSTPEIYQIMLDCWHRDPKERPRFAELVEKLGDLLQANVQQDGKDYIPINAILTGNSGFTYSTPAFSEDFFKESISAPKFNSGSSDDVRYVNAFKFMSLERIKTFEELLPNATSMFDDYQGDSSTLLASPMLKRFTWTDSKPKASLKIDLRVTSKSKESGLSDVSRPSFCHSSCGHVSEGKRRFTYDHAELERKIACCSPPPDYNSVVLYSTPPI
SEQIDNO：2(HCDR1-抗体1和2)
GFAFSSYGMH
SEQIDNO：3(HCDR2-抗体1和2)
VIWYDGSNKYYADSVRG
SEQIDNO：4(HCDR3-抗体1和2)
DHYGSGVHHYFYYGLDV
SEQIDNO：5(HCVR-抗体1和2)
QAQVVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFAFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHYGSGVHHYFYYGLDVWGQGTTVTVSS
SEQIDNO：6(HC-抗体1)
QAQVVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFAFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYGARDHYGSGVHHYFYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVHVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQIDNO：7(HC-抗体2)
QAQVVESGGGVVQSGRSLRLSCAASGFAFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHYGSGVHHYFYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
SEQIDNO：8(LCDR1-抗体1和2)
RASQSVSSSYLA
SEQIDNO：9(LCDR2-抗体1和2)
GASSRAT
SEQIDNO：10(LCDR3-抗体1和2)
QQYGSSPLT
SEQIDNO：11(LCVR-抗体1和2)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIK
SEQIDNO：12(LC-抗体1和2)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQIDNO：13(HCDNA-抗体1)
CAGGCGCAGGTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGTCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCGCCTTCAGTAGCTACGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCGAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGATCACTATGGTTCGGGGGTGCACCACTATTTCTACTACGGTCTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAGAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA
SEQIDNO：14(HCDNA-抗体2)
CAGGCGCAGGTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGTCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCGCCTTCAGTAGCTACGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCGAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGATCACTATGGTTCGGGGGTGCACCACTATTTCTACTACGGTCTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
SEQIDNO：15(LCDNA-抗体1和2)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQIDNO：16(HC-抗体3)
QVQLKESGPGLVRPSETLSLTCTVSGFSLSDYSLSWVRRPSGKGPEWLCRLWFDGDTTYNSAFKSRLTISRDTSKDQVFLKMNSLQTDDTGTYYCTRDDRDFDYWGQGVMVTVSSAETTAPSVYPLAPGTALKSNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGALSSGVHTFPAVLQSGLYTLTSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRNCGGDCKPCICTGSEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISQDDPEVHFSWFVDDVEVHTAQTRPPEEQFNSTFRSVSELPILHQDWLNGRTFRCKVTSAAFPSPIEKTISKPEGRTQVPHVYTMSPTKEEMTQNEVSITCMVKGFYPPDIYVEWQMNGQPQENYKNTPPTMDTDGSYFLYSKLNVKKEKWQQGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQIDNO：17(LC-抗体3)
DIVMTQTPVSMSVSLGGQVSISCRSSQSLVNNNGNTYLSWYIQKPSQSPQLLIYKVSNRVSGISDRFSGSGSGTDFTLKINKIEPDDLGVYYCGQNTQYPLTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSTEQLATGGASVVCLMNNFYPRDISVKWKIDGTERRDGVLDSVTDQDSKDSTYSMSSTLSLTKADYESHNLYTCEVVHKTSSSPVVKSFNRNEC
SEQIDNO：18(HC-抗体4)
QVQLKESGPGLVRPSETLSLTCTVSGFSLSDYSLSWVRRPSGKGPEWLGRLWFDGDTTYNSAFKSRLTISRDTSKDQVFLKMNSLQTDDTGTYYCTRDDRDFDYWGQGVMVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTTTLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG
SEQIDNO：19(LC-抗体4)
DIVMTQTPVSMSVSLGGQVSISCRSSQSLVNNNGNTYLSWYIQKPSQSPQLLIYKVSNRVSGISDRFSGSGSGTDFTLKINKIEPDDLGVYYCGQNTQYPLTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

Claims (36)

1.一种治疗患者中慢性肾脏疾病的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是GFAFSSYGMH(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其中慢性肾脏疾病由糖尿病引起。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中患者处于慢性肾脏疾病的3期或4期。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病或局灶性节段性肾小球硬化。
5.一种减少患者中蛋白尿的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是GFAFSSYGMH(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
6.根据权利要求5所述的方法，其中蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
7.一种减少患者中白蛋白尿的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
8.根据权利要求7所述的方法，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
9.一种减少患者中由血清肌酸酐升高所反映的肾小球滤过率损失的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
10.一种在患者中保护免遭肾组织病理损害的方法，包括向有需要的患者施用有效量的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体对VEGFR1具有通过表面等离子体共振所测定的小于80pM的KD。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和VEGF-A在体外与VEGFR1的结合作用。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和PlGF在体外与VEGFR1的结合作用。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体包含作为SEQIDNO:11的多肽的LCVR，和作为SEQIDNO:5的多肽的HCVR。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体包含轻链(LC)和重链(HC)，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:6的多肽。
16.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体包含轻链(LC)和重链(HC)，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:7的多肽。
17.根据权利要1-15中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。
18.根据权利要1-14或16中任一项所述的方法，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
19.用于治疗慢性肾脏疾病的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
20.用于根据权利要求19所述用途的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病由糖尿病引起。
21.用于根据权利要求19或20所述用途的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病处于3期或4期。
22.用于根据权利要求19或21中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中慢性肾脏疾病是糖尿病性肾病或局灶性节段性肾小球硬化。
23.用于减少蛋白尿的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
24.用于根据权利要求23所述用途的VEGFR1抗体，其中蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
25.用于减少白蛋白尿的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
26.用于根据权利要求25所述用途的VEGFR1抗体，其中白蛋白尿由糖尿病性肾病引起。
27.用于减少由血清肌酸酐升高所反映的肾小球滤过率损失的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
28.一种用于保护免遭肾组织病理损害的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体，其中LCVR包含互补决定区(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包含CDRHCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSVSSSYLA(SEQIDNO:8)的多肽，LCDR2是GASSRAT(SEQIDNO:9)的多肽，LCDR3是QQYGSSPLT(SEQIDNO:10)的多肽，HCDR1是gfafssygmh(SEQIDNO:2)的多肽，HCDR2是VIWYDGSNKYYADSVRG(SEQIDNO:3)的多肽，并且HCDR3是DHYGSGVHHYFYYGLDV(SEQIDNO:4)的多肽。
29.用于根据权利要求19-28中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体对VEGFR1具有通过表面等离子体共振所测定的小于80pM的KD。
30.用于根据权利要求19-29中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和VEGF-A在体外与VEGFR1的结合作用。
31.用于根据权利要求19-30中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体以小于2.0nM的IC50中和PlGF在体外与VEGFR1的结合作用。
32.用于根据权利要求19-31中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是这样的抗体，所述抗体包含作为SEQIDNO:11的多肽的LCVR和作为SEQIDNO:5的多肽的HCVR。
33.用于根据权利要求19-32中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链(LC)和重链(HC)的抗体，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:6的多肽。
34.用于根据权利要求19-32中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体是包含轻链(LC)和重链(HC)的抗体，其中LC是SEQIDNO:12的多肽，并且HC是SEQIDNO:7的多肽。
35.用于根据权利要求19-33中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:6的多肽。
36.用于根据权利要求19-32或34中任一项所述用途的VEGFR1抗体，其中VEGFR1抗体包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是SEQIDNO:12的多肽，并且每条重链是SEQIDNO:7的多肽。
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