CN105087826B - 人类免疫缺陷病毒hiv‑1的定量检测试剂盒 - Google Patents

人类免疫缺陷病毒hiv‑1的定量检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种人类免疫缺陷病毒HIV‑1的定量检测试剂盒，包括：样本处理剂，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β‑巯基乙醇和蛋白酶K；用于靶核苷酸扩增的上游引物HIV‑F；用于靶核苷酸扩增的下游引物HIV‑R；用于靶核苷酸检测的Taqman探针HIV‑P，所述Taqman探针HIV‑P的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂；以及RNA一步法反应缓冲液。这种人类免疫缺陷病毒HIV‑1的定量检测试剂盒在进行检测时，直接将检测样本与样本处理剂混合处理后即可用于后续检测。相对于传统的HIV病毒的定量检测试剂盒，这种人类免疫缺陷病毒HIV‑1的定量检测试剂盒省略了从样本中提取纯化的核酸分子的步骤，从而操作上更为省时、简单。

Description

人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒
技术领域
本发明涉及诊断技术领域，特别是涉及一种人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒。
背景技术
HIV感染可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸来确定。目前，常用的检测方法是血清学HIV抗体检测，它是诊断艾滋病病毒感染和艾滋病的主要指标和标准检测项目。
HIV病毒核酸检测原理是利用核酸检测的方法，直接检测HIV病毒的核酸RNA。核酸检测具有快速、高效、敏感和特异等优点，在感染过程中，患者体内首先出现的是病毒RNA，这时可以采用核酸检测的方法检测出来，之后出现的是IgM抗体，采用双抗原夹心法检测出来，然后出现的是IgG抗体，使用间接法检测出来，因此，HIV病毒核酸检测技术的应用使HIV病毒的检测“窗口期”由原来的22天缩短到11天。
传统的HIV病毒的定量检测试剂盒通常需要从样本中提取纯化的核酸分子(HIV-RNA)，而从样本中提取核酸的步骤操作复杂。
发明内容
基于此，有必要提供一种不需要从样本中提取核酸就可以完成检测的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒。
一种人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，包括：
样本处理剂，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β-巯基乙醇和蛋白酶K；
用于靶核苷酸扩增的上游引物HIV-F；
用于靶核苷酸扩增的下游引物HIV-R；
用于靶核苷酸检测的Taqman探针HIV-P，所述Taqman探针HIV-P的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂；以及
RNA一步法反应缓冲液。
在一个实施例中，所述样本处理剂用于与检测样本混合均匀后在55℃～70℃加热10min～15min。
在一个实施例中，所述样本处理剂中，所述异硫氰酸胍的浓度为0.2mol/L～2mol/L，所述柠檬酸钠的浓度为10mmol/L～30mmol/L，所述十二烷基肌酸钠的质量百分含量为0.2％～1％，所述β-巯基乙醇的浓度为0.05mol/L～0.1mol/L，所述蛋白酶K的浓度为1mg/mL～5mg/mL。
在一个实施例中，所述上游引物HIV-F的序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的序列，所述下游引物HIV-R的序列为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ IDNo.6所示的序列。
在一个实施例中，所述Taqman探针HIV-P的序列为SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示的序列。
在一个实施例中，所述Taqman探针HIV-P的5’端结合有FAM，所述Taqman探针HIV-P的3’端结合有BHQ1。
在一个实施例中，还包括HIV-1内标的RNA转录物和内标探针HIV-IC，所述HIV-1内标的RNA转录物为HIV-1内标转录得到，所述HIV-1内标为竞争性内标，所述内标探针HIV-IC的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂。
在一个实施例中，所述HIV-1内标的序列为SEQ ID No.9所示的序列。
在一个实施例中，所述内标探针HIV-IC的碱基序列序列为SEQ ID No.10所示的序列，所述内标探针HIV-IC的5’端结合有HEX，所述内标探针HIV-IC的3’端结合有BHQ1。
在一个实施例中，还包括HIV-1定量参考品、HIV-1阳性对照和HIV-1阴性对照。
这种人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒在进行检测时，直接将检测样本与样本处理剂混合处理后即可用于后续检测。相对于传统的HIV病毒的定量检测试剂盒，这种人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒省略了从样本中提取纯化的核酸分子的步骤，从而操作上更为省时、简单。
附图说明
图1a为实施例1优化反应体系和反应条件前的荧光检测结果图；
图1b为实施例1优化反应体系和反应条件后的荧光检测结果图；
图2a为实施例2中的对定量标准品进行梯度稀释后检测线性范围的荧光检测结果图；
图2b为实施例2中的对定量标准品进行梯度稀释后平行检测10管HIV-1载量为100IU/mL模板的荧光检测结果图；
图2c为实施例2中的对定量标准品进行梯度稀释后平行检测10管HIV-1载量为50IU/mL模板的荧光检测结果图；
图2d为实施例2中的对定量标准品进行梯度稀释后平行检测10管HIV-1载量为25IU/mL模板的荧光检测结果图；
图3为实施例3中的对定量标准品进行梯度稀释后的进行精密度检测的荧光检测结果图；
图4a为实施例4中采用10份“HIV-1RNA国家标准品”中的阳性参考品的荧光检测结果图；
图4b为实施例4中采用正常人血清和其他血源性病原微生物的荧光检测结果图。
具体实施方式
下面主要结合附图及具体实施例对人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒做进一步的解释说明。
一实施方式的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，包括：样本处理剂、用于靶核苷酸扩增的上游引物HIV-F、用于靶核苷酸扩增的下游引物HIV-R、用于靶核苷酸检测的Taqman探针HIV-P以及RNA一步法反应缓冲液。
样本处理剂包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β-巯基乙醇和蛋白酶K。
样本处理剂用于与检测样本混合均匀后在55℃～70℃加热10min～15min；其中，样本处理剂与检测样本的体积比可以为2～1：1。
具体的，样本处理剂中，异硫氰酸胍的浓度为0.2mol/L～2mol/L，柠檬酸钠的浓度为10mmol/L～30mmol/L，十二烷基肌酸钠的质量百分含量为0.2％～1％，β-巯基乙醇的浓度为0.05mol/L～0.1mol/L，蛋白酶K的浓度为1mg/mL～5mg/mL。
本实施方式中，上游引物HIV-F、下游引物HIV-R和Taqman探针HIV-P是选取HIV基因gag区的一段保守序列进行设计，由于HIV-1病毒亚型较多，基因序列变异复杂，上游引物HIV-F和下游引物HIV-R均为简并引物。
通常情况下可以将上游引物HIV-F、下游引物HIV-R和Taqman探针HIV-P直接溶解在RNA一步法反应缓冲液中，上游引物HIV-F和下游引物HIV-R在RNA一步法反应缓冲液中的终浓度均为0.2μmol/L～0.4μmol/L，Taqman探针HIV-P在RNA一步法反应缓冲液中的终浓度为0.05μmol/L～0.2μmol/L。
具体的，上游引物HIV-F的序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的序列，下游引物HIV-R的序列为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示的序列。
Taqman探针HIV-P的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂。
具体的，Taqman探针HIV-P的5’端结合有FAM(羟基荧光素，Carboxyfluorescein)，Taqman探针HIV-P的3’端结合有BHQ1(BLACK HOLE系列非荧光染料)。Taqman探针HIV-P的序列为SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示的序列。
RNA一步法反应缓冲液包括Tris-HCl、硫酸铵、氯化钾、硫酸镁和Tween 20。具体的，RNA一步法反应缓冲液中，Tris-HCl的终浓度为10mmol/L～65mmol/L，硫酸铵的终浓度为10mmol/L～20mmol/L，氯化钾的终浓度为40mmol/L～80mmol/L，硫酸镁的终浓度为2mmol/L～5mmol/L，Tween 20与RNA一步法反应缓冲液的体积比为0.01～2：100。
本实施方式中，人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒还包括反应酶系，反应酶系包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、BSA、逆转录酶和RNasin。
具体地，反应酶系中，Taq DNA聚合酶的终浓度为0.5U/μL～5U/μL，四种核苷酸单体(dNTPs)的终浓度均为0.2mmol/L，BSA的终浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL，逆转录酶的终浓度为2U/μL～20U/μL，RNasin的终浓度为0.2U/μL～1U/μL。其中，Taq DNA聚合酶为改良的可抗抑制剂的Taq DNA聚合酶，逆转录酶为改良的可以提高逆转录效率和特异性的逆转录酶。
在其他的实施方式中，人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒也可以不包括反应酶系，在具体使用时再配制加入即可。
本实施方式中，人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒还包括HIV-1内标的RNA转录物和内标探针HIV-IC，HIV-1内标的RNA转录物为HIV-1内标转录得到，HIV-1内标为竞争性内标，内标探针HIV-IC的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂。
具体的，HIV-1内标的序列为SEQ ID No.9所示的序列。HIV-1内标的序列为一段长为80bp的人工合成DNA序列，将这段人工合成DNA序列插入载体(pUC18T)中得到重组体，表达转录后酶切，得到非传染性的HIV-1内标的RNA转录物。
这里需要说明的是，HIV-1内标的RNA转录物的扩增引物也采用上述的上游引物HIV-F和下游引物HIV-R。
内标探针HIV-IC的碱基序列序列为SEQ ID No.10所示的序列，内标探针HIV-IC的5’端结合有HEX(六氯-6-甲基荧光素，HEXACHLORO FLUORESCEIN)，内标探针HIV-IC的3’端结合有BHQ1(BLACK HOLE系列非荧光染料)。
本实施方式中，人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒还包括HIV-1定量参考品、HIV-1阳性质控品和HIV-1阴性质控品。
具体的，HIV-1定量参考品为采用中检所“HIV-1RNA国家标准品”中的最低检出量定量标准品为标准标定的HIV-1非传染性HIV RNA体外转录物，包括四个梯度，依次为1.0×106IU/mL,1.0×105IU/mL,1.0×104IU/mL,1.0×103IU/mL；HIV-1阳性质控品包括强阳性质控品和临界阳性质控品，强阳性质控品为含有约5×105IU/mL的非传染性HIV RNA体外转录物，临界阳性质控品为含有约5×102IU/mL的非传染性HIV RNA体外转录物；阴性质控品为HIV-1检测为阴性的混合人血清。
非传染性HIV RNA体外转录物可以采用如下方法制备得到：用上述的上游引物HIV-F和下游引物HIV-R扩增HIV RNA的阳性标本，获得序列如SEQ ID No.11的扩增产物；将上述扩增产物克隆到载体(pGEM-T)中，构建HIV-1阳性靶片段质粒；HIV-1阳性靶片段质粒转化到大肠杆菌DH5a中，表达后转录，得到非传染性HIV RNA体外转录物。
转化有HIV-1阳性对照质粒的大肠杆菌DH5a可以储存于-70℃备用。
这种荧光定量PCR检测HIV-1试剂盒，针对待检测样本中的HIV-1基因的序列保守区设计特异性的上游引物HIV-F、下游引物HIV-R和Taqman探针HIV-P，并将待检测样本与样本处理剂混合使得待检测样本中的病毒核酸分子释放，混合样本预热后与PCR反应液混合并置于荧光定量PCR仪中进行PCR反应。该试剂盒不需要以纯化的核酸RNA为模板，待检测样本在样本处理剂的作用下，样本中的HIV-1病毒核酸释放，省去了从待检测样本中提取核酸分子步骤。
此外，这种荧光定量PCR检测HIV-1试剂盒中还加入了HIV-1内标，参与从样本裂解到扩增、检测全过程，实现整个试验流程的过程监控。同时，PCR反应液中含有特异性的上游引物HIV-F、下游引物HIV-R和Taqman探针HIV-P，采用实时荧光定量PCR技术，探针随病毒核酸分子扩增可以实现每轮循环均可检测一次荧光信号，根据荧光信号可实时检测PCR过程。
这种荧光定量PCR检测HIV-1试剂盒可以采用外标准曲线的定量方法，该定量方法是计算每个样品的扩增灵敏度指标Ct值，再根据试剂盒定量参考品的标准曲线获得定量结果，同时设置了强阳、临界阳和阴性对照用于质控试剂盒操作和定量计算。与目前临床实验室普遍使用的检测试剂盒相比，这种荧光定量PCR检测HIV-1试剂盒无需从样本中提取核酸，直接进行荧光定量PCR检测，具有实验操作简单，可缩短检测周期，节约检测成本，易于进行高通量检测的优点。特别是，当检测样本较少时，由于不需要从样本中提取和纯化RNA，该试剂盒也可实现病毒核酸的检测。
下面为具体实施例部分。
以下实施例中，如无特别说明，未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如参见萨姆布鲁克、EF弗里奇、T曼尼阿蒂斯等(金冬雁，黎孟枫等译)所著的的分子克隆实验指南[M](北京：科学出版社，1992)中所述的条件或者试剂盒生产厂家推荐的方法实现。所有操作均采用本领域标准操作过程，所采用的试剂或载体等均为常规试剂或常规载体。
实施例1反应体系及反应条件优化
HIV-1病毒核酸免核酸提取的检测体系优化如下表1所示：
表1HIV-1病毒核酸的样本检测的反应液配置
其中，样本处理剂中各组分优化后的浓度分别为：异硫氰酸胍的浓度为2mol/L、柠檬酸钠(PH 7.0)的浓度为12mmol/L、十二烷基肌酸钠的浓度为0.2％、β-巯基乙醇的浓度为0.05mol/L、蛋白酶K的浓度为1mg/mL、HIV-1内标的浓度为5×102copies/mL；
其中，5×RT-PCR反应缓冲液中各组分优化后的浓度分别为：
Tris-HCl在PCR反应缓冲溶液中的终浓度为5mmol/L；
硫酸铵在PCR反应缓冲溶液中的终浓度为12.5mmol/L；
氯化钾在PCR反应缓冲溶液中的终浓度为55mmol/L；
Tween 20与PCR反应缓冲溶液的体积比为1：100；
硫酸镁在PCR反应缓冲溶液中的终浓度为3mmol/L。
将65℃预热15min后的试剂(1)加入试剂(2)中混合均匀，补水至总反应体积为50μL，在Lightcycler 480II荧光PCR仪上进行热循环反应，反应条件为：
a.50℃，15min；
b.95℃，5min；
c.95℃，15s；
55℃，20s；(本阶段收集荧光)
该步骤须进行50个循环。
优化反应体系和反应条件前后的检测结果比较如图1a和1b所示，其中图1a为优化前检测结果，图1b为优化后检测结果。1a-1和1b-1分别表示高浓度模板检测的2个平行管，1a-2和1b-2分别表示低浓度模板检测的6个平行管。比较1a-1和1b-1、1a-2和1b-2结果显示经优化，在高浓度模板的检测上1b-1较1a-1的曲线更集中，在低浓度模板的检测上1b-2比1a-2的检出率和曲线的荧光值上均明显改善，说明经过优化反应体系和反应条件检测HIV-1有效。
采用将上述优化后的反应体系和反应条件用于后续的试剂盒性能测试中。
实施例2试剂盒的最低检出量
采用中检所“HIV-1RNA国家标准品”中的最低检出量定量标准品为标准标定的HIV-1阳性血清为初始样本，依次向下梯度稀释至1.0×107IU/mL,1.0×106IU/mL,1.0×105IU/mL,1.0×104IU/mL,1.0×103IU/mL，1.0×102IU/mL，再以线性的最低浓度模板(1.0×102IU/mL)作为最低检出量的第一个模板进行对倍稀释至100IU/mL、50IU/mL、25IU/mL，每个浓度的模板检测10个平行管，实验操作与实施例1中描述一致，检测结果以能全部检出的最低模板浓度作为该试剂盒的最低检出限。
检测结果如图2a、图2b、图2c和图2d所示，其中2a表示该试剂盒可以检测到的线性范围为1.0E+07-1.0E+02；图2b表示用该试剂盒平行检测10管HIV-1的100IU/mL的模板，检出率为10/10；图2c表示用该试剂盒平行检测10管HIV-1的50IU/mL的模板，检出率为10/10；图2d表示用该试剂盒平行检测10管HIV-1的25IU/mL的模板，检出率为5/10。
由图2a、图2b、图2c和图2d可以看出，该试剂盒的最低检出限为50IU/mL，或者说在检测50IU/mL的低浓度模板时该试剂盒的检出率至少可以达到95％。
实施例3试剂盒的精密度
采用中检所“HIV-1RNA国家标准品”中的最低检出量定量标准品为标准标定的HIV-1阳性血清为初始样本，依次向下梯度稀释至1.0×107IU/mL,1.0×105IU/mL,1.0×103IU/mL，三个浓度的模板各检测8个平行管，实验操作与实施例1中描述一致，检测结果以计算每个浓度检测Ct值的变异系数均＜5％作为检测该试剂盒精密度的指标。
检测结果如图3所示，在1.0×107IU/mL,1.0×105IU/mL,1.0×103IU/mL分别检测8个平行管得到的Ct值分别计算变异系数，依次为0.7％(CP22.59)、0.76(CP29.27)、0.88％(CP35.34)，变异系数均＜5％，说明该试剂盒的精密度检测符合要求。
实施例4试剂盒的准确性及特异性
采用中检所“HIV-1RNA国家标准品”中的阳性参考品为待检测样本，实验操作与实施例1中描述一致，检测结果以每个“HIV-1RNA国家标准品”中的阳性参考品均可检出作为检测该试剂盒准确性的指标，得到图4a。
选取正常人血清(N)和其他血源性病原微生物，包括乙型肝炎病毒(HBV)，丙型肝炎病毒(HCV)，丁型肝炎病毒(HDV)，戊型肝炎病毒(HEV)，EB病毒(EBV)，人巨细胞病毒(HCMV)，梅毒螺旋体(TP)，经相应的试剂盒检测均呈阳性，并经测序验证为相应微生物。以上述特异性标本作为待检样本，实验操作与实施例1中描述一致，检测结果以待检样本检测均为阴性作为检测该试剂盒特异性的指标，得到图4b。
检测结果如图4a和4b所示，图4a中显示检测的10份“HIV-1RNA国家标准品”中的阳性参考品结果均为阳性，图4b中显示检测的8份HIV-1特异性样本检测均为阴性。
由图4a和4b可以看出，该试剂盒具有较好的准确性和特异性。
实施例5试剂盒的干扰实验
为考察血浆或血清样本中可能存在的内源性物质对检测结果的影响，选取含高浓度的胆红素(浓度超过20mg/mL)、甘油三酯(浓度超过3000mg/dL)、血红蛋白(浓度超过6g/dL)和白蛋白(浓度超过1.0g/dL)的临床血浆样本和血清样本，但经检测均为HIV-1阴性，使用正常人血浆和血清作为对照。在以上10份样本中分别加入相应的HIV-1阳性血浆和血清，使其终浓度一致，未经处理的样本作为对照。采用实施例1中的反应体系和反应条件同时检测以上的样品，检测结果用定量值对数的变异系数＜5％作为检测该试剂盒内源性干扰实验的指标。
恩曲他滨、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷、替诺福韦、依非韦仑、奈韦拉平、茚地那韦目前被认为是治疗HIV-1感染疗效较肯定的药物，因此，在血清/血浆样本中存在以上药物的可能性很大。为考察血清/血浆样本中可能存在的以上外源性物质对检测结果的影响，依据药物的药峰浓度添加上述药物分别至确诊为的HIV-1阳性标本和HIV-1阴性标本中进行检测，实验操作与实施例1中描述一致，检测结果以HIV-1阳性标本检测为阳性，HIV-1阴性标本检测为阴性作为检测该试剂盒外源性干扰的指标。
内源性干扰试验的检测结果如表2中所示，在10份空白样本(其中含高浓度的胆红素、甘油三酯、血红蛋白和白蛋白的血浆为一组，以正常的血浆为对照，共5份；含高浓度的胆红素、甘油三酯、血红蛋白和白蛋白的血清为一组，以正常的血清为对照，共5份)中加入相同浓度的HIV-1样本(病毒载量定量为1.0×103IU/mL)，分别计算两组检测结果的定量值对数的变异系数，分别为3.50％和1.97％，均＜5％，说明该试剂盒检测HIV-1血清或血浆样本时，如其中含有高浓度的胆红素、甘油三酯、血红蛋白和白蛋白等物质不干扰检测结果。
表2内源性干扰实验检测结果
注：1、含胆红素(浓度超过20mg/mL)的血浆；2、含甘油三酯(浓度超过3000mg/dL)的血浆；3、含血红蛋白(浓度超过6g/dL)的血浆；4、含白蛋白(浓度超过1.0g/dL)的血浆；5、正常人血浆；6、含胆红素(浓度超过20mg/mL)的血清；7、含甘油三酯(浓度超过3000mg/dL)的血清；8、含血红蛋白(浓度超过6g/dL)的血清；9、含白蛋白(浓度超过1.0g/dL)的血清；10、正常人血清。
外源性干扰试验的检测结果如表3中所示，在确诊为HIV-1阳性的8份标本和确诊为HIV-1阴性的8份标本中分别加入药峰浓度的恩曲他滨、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷、替诺福韦、依非韦仑、奈韦拉平、茚地那韦进行检测，结果8份HIV-1阳性标本检测为阳性，8份HIV-1阴性标本检测为阴性，说明该试剂盒检测HIV-1血清或血浆样本时，如其中含有恩曲他滨、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷、替诺福韦、依非韦仑、奈韦拉平、茚地那韦等药物时不干扰检测结果。
表3外源性干扰实验检测结果
以上所述实施例仅表达了本发明的一种或几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，包括：
样本处理剂，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β-巯基乙醇和蛋白酶K；
用于靶核苷酸扩增的上游引物HIV-F；
用于靶核苷酸扩增的下游引物HIV-R；
用于靶核苷酸检测的Taqman探针HIV-P，所述Taqman探针HIV-P的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂；以及
RNA一步法反应缓冲液；
所述样本处理剂用于与检测样本混合均匀后在55℃～70℃加热10min～15min；
所述检测样本为未经过提取核酸分子处理的样本；
所述样本处理剂中，所述异硫氰酸胍的浓度为0.2mol/L～2mol/L，所述柠檬酸钠的浓度为10mmol/L～30mmol/L，所述十二烷基肌酸钠的质量百分含量为0.2％～1％，所述β-巯基乙醇的浓度为0.05mol/L～0.1mol/L，所述蛋白酶K的浓度为1mg/mL～5mg/mL；
所述上游引物HIV-F的序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的序列，所述下游引物HIV-R的序列为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示的序列；
所述Taqman探针HIV-P的序列为SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示的序列。
2.根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，所述Taqman探针HIV-P的5’端结合有FAM，所述Taqman探针HIV-P的3’端结合有BHQ1。
3.根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，还包括HIV-1内标的RNA转录物和内标探针HIV-IC，所述HIV-1内标的RNA转录物为HIV-1内标转录得到，所述HIV-1内标为竞争性内标，所述内标探针HIV-IC的两端分别结合有荧光基团和荧光猝灭剂。
4.根据权利要求3所述的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，所述HIV-1内标的序列为SEQ ID No.9所示的序列。
5.根据权利要求3所述的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，所述内标探针HIV-IC的碱基序列序列为SEQ ID No.10所示的序列，所述内标探针HIV-IC的5’端结合有HEX，所述内标探针HIV-IC的3’端结合有BHQ1。
6.根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒HIV-1的定量检测试剂盒，其特征在于，还包括HIV-1定量参考品、HIV-1阳性对照和HIV-1阴性对照。
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