CN105052749A - 一种青天葵组织培养育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明针对青天葵人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种青天葵组织培养育苗方法，属于中药材栽培技术领域，本方法具体包括培养无菌苗、诱导培养基、诱导丛生芽、丛生芽继代增殖、诱导生根、试管苗的移栽六个具体步骤，有效解决了现有技术中青天葵人工繁育难度大，成苗率低的问题，其有益效果是：取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且经过薄层色谱技术鉴定，本方法培养出的试管苗与野生青天葵的有效成分一致。
Description
技术领域
本发明涉及中草药材栽培技术，具体涉及一种青天葵育苗的方法，尤其是青天葵的组织培养育苗方法，属于中药材栽培技术领域。
背景技术
青天葵，别名独脚天葵、珍珠草、假天麻，属兰科芋兰属毛唇芋兰，学名：Nerviliafordii(Hance)Schltr。主产于广西、广东、云南等地，广西北部、西部和西南部有分布。青天葵性寒，味甘，有润肺止咳，清热解毒，散瘀消肿的功效，用于肺结核、咯血、肺热咳嗽、胃脘痛、跌打损伤、疮疖等症，含有生物碱、黄酮类、有机酸、酚类、糖、多糖、蛋白质、香豆精及内酯类等类化合物。药理试验证明青天葵还可抑制菌环直径为17mm的幽门螺杆菌生长，可用以治疗慢性胃炎和消化溃疡。
青天葵有类似西洋参的滋补强壮功能，是长期以来较为紧缺和经济价值较高的名贵中草药品种，历年来，除供应国内需要外，还远销香港、澳门和东南亚国家，由于野生分布零星，不易采集，加上群众的乱采滥挖，野生资源急剧减少，生产上供不应求，发展人工种植研究刻不容缓，势在必行。
开展青天葵人工栽培，首先要解决青天葵种苗问题。青天葵种子纤细无胚乳，直接播种很难萌发，不能用作繁殖材料，只能用球茎作繁殖材料，而青天葵球茎非常有限，用球茎作繁殖材料进行常规育苗难度也很大，成苗率不到20%，几乎失败。
发明内容
发明目的：本发明的目的是针对现有技术中青天葵人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种组织培养育苗方法，提高青天葵育苗成苗率，而且能保持青天葵药用成分，移栽后生长快，可大面积进行青天葵人工栽培。
技术方案：本发明所述的一种青天葵组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：
1.无菌苗的培养：将青天葵球茎置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15～18分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5～7次，每次浸洗3～5分钟，然后将球茎播种于培养基，在室内自然散射光照下培养。
2.诱导培养基：以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，调节PH值为6.0～6.5。
3.丛生芽诱导：当步骤1培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.5～3.0厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28～30天后即有丛生芽形成。
4.丛生芽继代增殖：丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽。
5.诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根。
6.试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，10～12天后，揭去薄膜，可移栽大田。
有益效果：本发明与现有技术相比，其有益效果是：
本发明的青天葵组织育苗方法，取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且经过薄层色谱技术鉴定，本方法培养出的试管苗与野生青天葵的有效成分一致。
具体实施方式
下面结合具体实施事例对本发明技术方案进行详细说明。
实施例1：一种青天葵组织培养育苗，其具体步骤如下：
1.无菌苗的培养：将青天葵球茎置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将球茎播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
2.诱导培养基：以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃，调节PH值为6.0；
3.丛生芽诱导：当步骤1培养的无菌苗长至5厘米后，切取上部2.5厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成；
4.丛生芽继代增殖：丛生芽诱导50天后，平均高达3.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
5.诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70%长至3厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
6.试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，10天后，揭去薄膜，可移栽大田。
实施例2：一种青天葵组织培养育苗，包括收下具体步骤：
1.无菌苗的培养：将青天葵球茎置于0.2%升汞溶液浸泡消毒16分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗6次，每次浸洗4分钟，然后将球茎播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
2.诱导培养基：以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.2mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持25℃，调节PH值为6.3；
3.丛生芽诱导：当步骤1培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.8厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养29天后即有丛生芽形成；
4.丛生芽继代增殖：丛生芽诱导50天后，平均高达4.0厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，28天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
5.诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
6.试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，11天后，揭去薄膜，可移栽大田。
实施例3：一种青天葵组织培养育苗，其具体步骤如下：
1.无菌苗的培养：将青天葵球茎置于0.2%升汞溶液浸泡消毒18分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗7次，每次浸洗5分钟，然后将球茎播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
2.诱导培养基：以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.3mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持26℃，调节PH值为6.5；
3.丛生芽诱导：当步骤1培养的无菌苗长至6厘米后，切取上部3.0厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养30天后即有丛生芽形成；
4.丛生芽继代增殖：丛生芽诱导50天后，平均高达4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
5.诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70%长至4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
6.试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，12天后，揭去薄膜，可移栽大田。
Claims (2)
1.一种青天葵组织培养育苗方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）无菌苗的培养：将青天葵球茎置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15～18分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5～7次，每次浸洗3～5分钟，然后将球茎播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
（2）诱导培养基：以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，调节PH值为6.0～6.5；
（3）丛生芽诱导：当步骤（1）培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.5～3.0厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28～30天；
（4）丛生芽继代增殖：丛生芽平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基；
（5）诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根；
（6）试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，10～12天后，揭去薄膜，可移栽大田。
2.根据权利要求1所述的青天葵组织培养育苗方法，其特征在于所述步骤（2）的植物激素为苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），其中苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L。
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