CN105037417B

CN105037417B - 一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法

Info

Publication number: CN105037417B
Application number: CN201510439713.2A
Authority: CN
Inventors: 王志强; 王继文; 李津; 鞠加林
Original assignee: SHENYANG TIANFENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHENYANG TIANFENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-07-23
Filing date: 2015-07-23
Publication date: 2017-04-19
Anticipated expiration: 2035-07-23
Also published as: CN105037417A

Abstract

本发明公开了一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，属于蛋黄卵磷脂精制技术领域。包括如下步骤：以蛋黄粉或蛋黄颗粒为原料，用无水乙醇提取，氧化铝静态吸附，再用正己烷‑丙酮混合溶液溶解，低温沉淀析出卵磷脂，沉淀烘干，制得产品。所得产品经薄层层析色谱检测，甘油三脂、胆固醇、棕榈酸残留符合中国药典2015版的限度要求。本发明为蛋黄卵磷脂的除杂质及脱油提供了一种全新的工艺方法，该方法收率高、除杂质及脱油效果好。氧化铝静态吸附所用工时短，操作简便，可以很顺利地去除LPE、PI等杂质；且设备简单、固定资产投资少，溶剂易于回收再利用，大幅度减少了三废的排放。

Description

一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法

技术领域

本发明涉及分离纯化、卵磷脂技术领域，特别是涉及一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法。

背景技术

磷脂普遍存在于人体各组织和器官中，特别是存在于脑、神经系统、心脏、肺、肾、脾、血液、乳液中，是生物膜的组成部分。注射用蛋黄卵磷脂具有很高的营养价值和生理活性，在保护细胞膜、抗衰老、降血脂、防治脂肪肝等方面有显著疗效。除生物学功能和药物应用外，磷脂在食品工业、轻工、化工等领域具有广泛的应用，这是由于磷脂还具有多种功能性特征，如乳化、润湿、改善物料粘度、抗氧化作用等。

国内外对磷脂的提纯进行了很多研究，主要有溶剂萃取法、超临界流体萃取法、吸附法、酶催化精制法及膜分离等方法，其中前两种方法主要用于粗提，得到PC含量低于70％的粗磷脂，精制纯化得到PC含量高于70％的产品主要依靠后三种方法。Lucas Mayer公司公布了超临界CO₂生产去油级卵磷脂的专利技术，该专利技术不仅可以采用连续式或半连续式工艺操作，而且混合器操作条件温和，可以大大缩短萃取时间，萃取剂消耗低，能耗大大降低，生产成本也大为降低。超临界流体萃取提纯磷脂是一种与环境友好的方法，但是设备费用比较昂贵，且只能去除大豆或蛋黄原料中大部分的中性油脂及胆固醇，溶油能力较强而溶解磷脂能力较弱，只适合制备粗磷脂产品。溶剂脱油方法中，常用的是用纯丙酮搅拌浸提脱油，但此方法需用大量的丙酮、并多次浸提才可以使甘油三脂、胆固醇、棕榈酸符合药典质量标准。肖文婷等采用正己烷-丙酮混合溶剂脱油，溶剂用量相对于纯丙酮来说用量减少，但此方法首先用正己烷溶解待脱油磷脂，在低温条件下加入冷丙酮分级沉淀出卵磷脂，在回收溶剂时必须将正己烷-丙酮混合溶剂用精馏塔精馏分离，才能回收重复使用，精馏塔设备昂贵且溶剂回收成本高，不适合工业化生产。

发明内容

为了克服以上现有技术的不足，本发明提供了一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，解决了在卵磷脂精制过程中LPE和PI等杂质难以去除、脱油溶剂用量大、脱油溶剂不易回收再利用等缺点。

本发明所采用的技术方案是：此方法采用蛋黄粉或蛋黄颗粒为初始原料，经过乙醇浸提、氧化铝静态吸附，得乙醇浸提物；然后再通过正己烷-丙酮混合溶剂低温沉淀的方法去除中性油脂，制备供注射用蛋黄卵磷脂。

具体工艺步骤如下：

乙醇浸提：向蛋黄粉或蛋黄颗粒中加入7～15倍量(ml/g)的乙醇，在药液温度为25～40℃条件下搅拌浸提50～120min，过滤，总浸提次数为2～4次，合并浸提液，于50℃减压蒸馏、浓缩，静置至分层完全，去除下层油相。

氧化铝静态吸附：向磷脂浓缩液中加入中性氧化铝，中性氧化铝加入量为蛋黄粉或蛋黄颗粒原料的8～10％(g/g)，于25～40℃搅拌吸附1～3h，药液过0.45μm或0.22μm滤膜，滤液50℃减压浓缩、真空干燥。

脱油：向乙醇浸提干燥物中加入28～34倍量(ml/g)的正己烷:丙酮＝1:5～1:8(ml/ml)混合溶剂，搅拌下使药液升温至35～45℃，于此温度下继续搅拌50～120min使沉淀完全溶解，使药液降温至-10℃～+10℃，保持此低温并静置1.5～4h，去上清；浸提次数为3～5次。最后，所得沉淀于50℃真空干燥，得终产品。

所述的浸提所用乙醇的总量优选蛋黄粉或蛋黄颗粒原料的9～12倍量(ml/g)，乙醇浸提的药液温度优选30～35℃，乙醇浸提次数优选2～3次，每次乙醇搅拌浸提时间优选80～100min。

所述的氧化铝加入量优选蛋黄粉或蛋黄颗粒的9％(g/g)，氧化铝静态吸附的温度优选30～35℃，氧化铝静态吸附时的搅拌时间优选1.5～2.5h，所用中性氧化铝的目数优选80～160目。

所用正己烷-丙酮混合溶剂的总体积优选乙醇浸提干燥物质量的28～30倍量(ml/g)，正己烷-丙酮混合溶剂低温沉淀脱油次数优选3～4次，正己烷-丙酮混合溶剂中正己烷体积:丙酮体积优选1:6～1:7(ml/ml)，升温搅拌溶解时药液温度优选38～42℃，每次升温搅拌溶解时的搅拌时间优选60～90min，低温沉淀时药液温度优选-5～+5℃，低温沉淀时的静置时间优选3～3.5h。

所用乙醇浓度为95～100％(折算成20℃时所测乙醇度数)。

本发明具有以下优点：

1、工艺简单，操作方便，成本低，适合大规模工业化生产；

2、本方法所用氧化铝静态吸附与其它层析方法相比较，具有易于操作、所用工时少、溶剂用量少、能耗低等优点；

3、与其它文献报道的方法相比，本方法所使用的溶剂回收再利用方便，不需再采购安装昂贵的精馏塔设备，投资成本较低且环保；

4、收率高，至少在7％以上，优选条件下可达到9％以上。且磷脂纯度高(PC和PE总含量)在80％以上，LPE、LPC、PI、甘油三酯、胆固醇、棕榈酸等杂质均符合中国药典2015版的要求。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进一步说明。应该说明的是，本发明的实施例所描述的制备方法仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明所描述思路下，对本发明制备方法的简单改进都属于本发明包含的范围。

实施例1

取600g蛋黄粉置于5000ml锥形瓶中，加入2400ml无水乙醇，于药液温度为40℃时搅拌浸提2h，过滤布；向滤饼中再加入1800ml无水乙醇，于药液温度为40℃时搅拌浸提2h，过滤布，合并2次浸提液，于50℃减压浓缩，得到浓缩液，静置至完全分层，去除下相油相。

向浓缩液中加入48g 200～300目中性氧化铝，药液升温至25℃搅拌吸附1h，过0.45μm滤膜，滤液于50℃减压浓缩、真空干燥，即为乙醇浸提干燥物，质量为230g。

向乙醇浸提干燥物中加入2300ml的正己烷:丙酮＝1:5的混合溶剂，搅拌条件下加热至35℃溶解，于此温度继续搅拌50min，将药液置于-10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液；向沉淀中加入2070ml的正己烷:丙酮＝1:5的混合溶剂，搅拌条件下加热至35℃溶解，于此温度继续搅拌50min，将药液置于-10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液；向沉淀中加入2070ml的正己烷:丙酮＝1:5的混合溶剂，搅拌条件下加热至35℃溶解，于此温度继续搅拌50min，将药液置于-10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液。取出沉淀置于真空干燥箱中，于50℃真空干燥。得样品质量为49.2g，质量总收率为8.2％。

检测结果中PC为77.61％、PE为9.59％、PI为1.3％、LPC为2.9％、LPE为0.8、SM为1.8；酸值为12.1、过氧化值为0.5、碘值为65、皂化值为199；蛋白残留、甘油三酯、胆固醇、棕榈酸均符合中国药典2015版质量标准要求。

实施例2

取600g蛋黄粉置于5000ml锥形瓶中，加入3000ml 95％乙醇，于药液温度为25℃时搅拌浸提50min，过滤布；向滤饼中再加入2400ml 95％乙醇，于药液温度为25℃时搅拌浸提50min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 95％乙醇，于药液温度为25℃时搅拌浸提50min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 95％乙醇，于药液温度为25℃时搅拌浸提50min，过滤布。合并4次浸提液，于50℃减压浓缩，得到浓缩液，静置至完全分层，去除下相油相。

向浓缩液中加入60g 200～300目中性氧化铝，药液升温至40℃搅拌吸附3h，过0.45μm滤膜，滤液于50℃减压浓缩、真空干燥，即为乙醇浸提干燥物，质量为249g。

向乙醇浸提干燥物中加入2241ml的正己烷:丙酮＝1:8的混合溶剂，搅拌条件下加热至45℃溶解，于此温度继续搅拌120min，将药液置于+10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液；向沉淀中加入2241ml的正己烷:丙酮＝1:8的混合溶剂，搅拌条件下加热至45℃溶解，于此温度继续搅拌120min，将药液置于+10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液；向沉淀中加入1992ml的正己烷:丙酮＝1:8的混合溶剂，搅拌条件下加热至45℃溶解，于此温度继续搅拌120min，将药液置于+10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液；向沉淀中加入1992ml的正己烷:丙酮＝1:8的混合溶剂，搅拌条件下加热至45℃溶解，于此温度继续搅拌120min，将药液置于+10℃冷阱中沉淀4h，去除上清液。取出沉淀置于真空干燥箱中，于50℃真空干燥。得样品质量为42.0g，质量总收率为7.0％。

检测结果中PC为81.95％、PE为8.03％、PI为1.0％、LPC为3.2％、LPE为0.7、SM为1.9；酸值为12.3、过氧化值为0.3、碘值为63、皂化值为201；蛋白残留、甘油三酯、胆固醇、棕榈酸均符合中国药典2015版质量标准要求。

实施例3

取600g蛋黄粉置于5000ml锥形瓶中，加入2400ml 99％乙醇，于药液温度为30℃时搅拌浸提90min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 99％乙醇，于药液温度为30℃时搅拌浸提90min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 99％乙醇，于药液温度为30℃时搅拌浸提90min，过滤布。合并3次浸提液，于50℃减压浓缩，得到浓缩液，静置至完全分层，去除下相油相。

向浓缩液中加入54g 60～180目中性氧化铝，药液升温至33℃搅拌吸附1.5h，过0.22μm滤膜，滤液于50℃减压浓缩、真空干燥，即为乙醇浸提干燥物，质量为234g。

向乙醇浸提干燥物中加入2574ml的正己烷:丙酮＝1:7的混合溶剂，搅拌条件下加热至41℃溶解，于此温度继续搅拌90min，将药液置于+4℃冷阱中沉淀3.5h，去除上清液；向沉淀中加入2340ml的正己烷:丙酮＝1:7的混合溶剂，搅拌条件下加热至41℃溶解，于此温度继续搅拌90min，将药液置于+4℃冷阱中沉淀3.5h，去除上清液；向沉淀中加入2103ml的正己烷:丙酮＝1:7的混合溶剂，搅拌条件下加热至41℃溶解，于此温度继续搅拌90min，将药液置于+4℃冷阱中沉淀3.5h，去除上清液。取出沉淀置于真空干燥箱中，于50℃真空干燥。得样品质量为55.8g，质量总收率为9.3％。

检测结果中PC为75.33％、PE为9.56％、PI为1.1％、LPC为3.0％、LPE为0.8、SM为1.8；酸值为12.0、过氧化值为0.5、碘值为66、皂化值为199；蛋白残留、甘油三酯、胆固醇、棕榈酸均符合中国药典2015版质量标准要求。

实施例4

取600g蛋黄粉置于5000ml锥形瓶中，加入3000ml 99％乙醇，于药液温度为33℃时搅拌浸提70min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 99％乙醇，于药液温度为33℃时搅拌浸提70min，过滤布；向滤饼中再加入1800ml 99％乙醇，于药液温度为33℃时搅拌浸提70min，过滤布。合并3次浸提液，于50℃减压浓缩，得到浓缩液，静置至完全分层，去除下相油相。

向浓缩液中加入54g 60～180目中性氧化铝，药液升温至30℃搅拌吸附2h，过0.22μm滤膜，滤液于50℃减压浓缩、真空干燥，即为乙醇浸提干燥物，质量为240g。

向乙醇浸提干燥物中加入2400ml的正己烷:丙酮＝1:6的混合溶剂，搅拌条件下加热至39℃溶解，于此温度继续搅拌60min，将药液置于0℃冷阱中沉淀3h，去除上清液；向沉淀中加入2160ml的正己烷:丙酮＝1:6的混合溶剂，搅拌条件下加热至39℃溶解，于此温度继续搅拌60min，将药液置于0℃冷阱中沉淀3h，去除上清液；向沉淀中加入2160ml的正己烷:丙酮＝1:6的混合溶剂，搅拌条件下加热至39℃溶解，于此温度继续搅拌60min，将药液置于0℃冷阱中沉淀3h，去除上清液。取出沉淀置于真空干燥箱中，于50℃真空干燥。得样品质量为58.2g，质量总收率为9.7％。

检测结果中PC为76.61％、PE为10.05％、PI为1.2％、LPC为2.9％、LPE为0.8、SM为1.9；酸值为12.1、过氧化值为0.4、碘值为65、皂化值为203；蛋白残留、甘油三酯、胆固醇、棕榈酸均符合中国药典2015版质量标准要求。

由四个实施例得出，四个实施例所得样品的各项检测指标都符合中国药典2015版注射用蛋黄卵磷脂的质量标准要求。因注射用蛋黄卵磷脂主要应用于注射用营养脂肪乳注射剂的辅料，且此辅料的PC和PE在制备乳剂时对乳剂的稳定性均具有重要作用，又因工业化生产时，产品的质量收率直接影响产品的生产成本。根据以上四个实施例所得数据，优先选择实施例3和实施例4的方法进行工业化生产。

Claims

1.一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)蛋黄粉或蛋黄颗粒添加乙醇搅拌提取，过滤得滤液，滤液浓缩，静置去除油相；

(2)取含磷脂的浓缩乙醇溶液进行氧化铝静态吸附，过滤膜，滤液浓缩、真空干燥，制得乙醇浸提干燥物；

(3)向乙醇浸提干燥物中加入正己烷-丙酮混合溶剂升温搅拌溶解，降温并低温静置沉淀，去除上清液，沉淀真空干燥，制得高纯度注射用蛋黄卵磷脂，

步骤(1)中所述的浸提所用乙醇的总量为蛋黄粉或蛋黄颗粒原料的7～15倍量(ml/g)，乙醇浸提的药液温度为25～40℃，乙醇浸提次数为2～4次，每次乙醇搅拌浸提时间为50～120min；

步骤(2)中所述的氧化铝的加入量为蛋黄粉或蛋黄颗粒的8～10％(g/g)，氧化铝静态吸附的温度为25～40℃，氧化铝静态吸附时的搅拌时间为1～3h；

步骤(1)和(2)中所用乙醇浓度为95～100％。

2.根据权利要求1所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(2)中所用中性氧化铝的目数为80～160目或200～300目。

3.根据权利要求1或2所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(3)中所用正己烷-丙酮混合溶剂的总体积为乙醇浸提干燥物质量的28～34倍量(ml/g)，正己烷-丙酮混合溶剂低温沉淀脱油次数为3～5次，正己烷-丙酮混合溶剂中正己烷体积:丙酮体积为1:5～1:8(ml/ml)。

4.根据权利要求1所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(3)中升温搅拌溶解时药液温度为35～45℃，低温沉淀时药液温度为-10～+10℃。

5.根据权利要求1所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(3)中每次升温搅拌溶解时的搅拌时间为50～120min。

6.根据权利要求1所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(3)中低温沉淀时的静置时间为1.5～4h。

7.根据权利要求1所述的一种氧化铝静态吸附除杂质及低温沉淀脱油制备注射用蛋黄卵磷脂的方法，其特征在于，步骤(3)中所用正己烷-丙酮混合溶剂的总体积为乙醇浸提干燥物质量的28～30倍量(ml/g)，正己烷-丙酮混合溶剂低温沉淀脱油次数为3～4次，正己烷-丙酮混合溶剂中正己烷体积:丙酮体积1:6～1:7(ml/ml)，升温搅拌溶解时药液温度38～42℃，每次升温搅拌溶解时的搅拌时间60～90min，低温沉淀时药液温度-5～+5℃，低温沉淀时的静置时间3～3.5h。