CN105026386A - 抗病毒化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了式I化合物：

Description

抗病毒化合物
本发明提供可用作丙型肝炎病毒(HCV)抑制剂、HCV感染抑制剂以及用于预防和治疗丙型肝炎感染的式I化合物。
丙型肝炎病毒(HCV)感染是主要健康问题，影响全世界1亿7千万人和3-4百万美国人(Armstrong,G.L.,等人,Ann.Intern.Med.2006,144:705-714；Lauer,G.M.等人,N.Eng.J.Med.2001,345:41-52)。HCV感染在相当数量的感染个体中导致慢性肝疾病如肝硬化和肝细胞癌。慢性HCV感染相关的肝硬化和肝细胞癌也是美国肝移植的主要原因。目前对于HCV感染的治疗包括利用与核苷类似物利巴韦林组合的聚乙二醇干扰素-α的免疫疗法。与利巴韦林和两种最近批准的HCV NS3蛋白酶抑制剂Incivek或Victrelis中之一组合的聚乙二醇干扰素-α是目前用于治疗基因型1HCV感染的患者(最难以治疗的患者群体)的护理标准。然而，目前HCV治疗受次最优的持续病毒学响应率影响并且与严重副作用以及对蛋白酶抑制剂的抵抗相关。因此，对于具有更好的功效、安全性和抵抗特性的改进型抗病毒药物存在明显需求。
HCV对人肝细胞的感染(也称为HCV进入)通过病毒编码的包膜糖蛋白E1和E2与宿主细胞共受体的功能相互作用、接着受体介导的内吞过程而介导的。这种HCV进入步骤是治疗介入的假定靶点。数种病毒编码的酶是治疗介入的公认靶点，包括金属蛋白酶(NS2-3)、丝氨酸蛋白酶(NS3，氨基酸残基1-180)、解旋酶(NS3，全长)、NS3蛋白酶辅因子(NS4A)、膜蛋白(NS4B)、锌金属蛋白酶(NS5A)和RNA依赖性RNA聚合酶(NS5B)。
已开发系统来研究HCV进入宿主细胞的生物学。已开发E1和E2糖蛋白用于功能性替换逆转录病毒的糖蛋白的假型化体系(Bartosch,B.,Dubuisson,J.和Cosset,F.-L.J.Exp.Med.2003,197:633-642；Hsu,M.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2003,100:7271-7276)。这些体系产生结合于并以据信与天然病毒类似的方式进入宿主细胞的HCV假颗粒，由此使它们成为研究病毒进入步骤以及鉴定阻断该过程的抑制剂的便利工具。
对于开发用于治疗HCV感染的有效治疗剂有明确和长期的需求。尤其是，对于开发选择性抑制HCV病毒进入和复制且可用于治疗受HCV感染的患者以及保护肝移植患者免遭HCV再感染的化合物存在需求。本申请公开了在预防HCV感染方面有效的新化合物。此外，公开的化合物提供药学应用如关于它们的作用机制、结合、预防感染、抑制功效和靶点选择性的优势。
发明概述
本申请提供式I化合物或其药学上可接受的盐
其中：
A为不饱和的或部分饱和单环或双环杂芳基，其任选地被一个或多个A’取代；以及
每个A’独立地为卤代、卤代低级烷基、低级烷基或氧代。
本申请提供用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供包含式I化合物和药学上可接受的赋形剂的组合物。
发明详述
定义
如本文所用的短语“一个(a)”或“一种(an)”实体是指一个或多个该实体；例如，化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一个(a)”(或“一种(an)”)、“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中互换使用。
如在本说明书中所用，不管是在过渡性短语中还是在权利要求中，术语“包含”和“包括”应被解释为具有开放式含义。即，该术语应被解释为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当用于一种方法的上下文中时，术语“包括”意指该方法至少包括所列举的步骤，但也可以包括另外的步骤。当用于化合物或组合物的上下文中时，术语“包含”意指该化合物或组合物至少包括所列举的特征或组分，但是也可以包括其他特征或组分。
除非另外清楚说明，否则本文所用的词语“或”以“和/或”的“包含性”含义而非“任一个/或”的“排他性”含义使用。
术语“独立的”在本文中用来指示变量被用于任何一种情况，而不考虑其在相同化合物中的具有相同或不同定义的变量是否存在。因此，在其中R"出现两次并且被定义为“独立为碳或氮”的化合物中，两个R"可以均为碳，两个R"可以均为氮，或者一个R"可以为碳并且另一个为氮。
当任何变量在任何描述和描绘本发明采用的或要求保护的部分或通式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义独立于其在每次其它出现时的定义。同样，只有当在此类化合物产生稳定的化合物时，取代基和/或变量的组合才是允许的。
在键末端的符号“*”或通过键所绘画的“------”各自是指官能团或其它化学部分与作为其中一部分的该分子的其它部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4，其中或
绘画到环系中的键(与连接到明确的顶点的键不同)指示该键可以与任何适合的环原子连接。
如本文所用的术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可以但不是必须发生，该描述包括其中事件或情形发生的情况和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以包括氢原子或取代基。
如果取代基被指定为“不存在”，则该取代基不存在。
术语“约”在本文中用于意指在该范围中近似地、粗略地或附近。当术语“约”与数值范围一起使用时，通过扩展所列出的数值的上下界限可改变该范围。通常，术语“约”在本文中用于使所述值的上下数值改变20％范围。
某些化合物可能表现出互变异构现象。互变异构化合物可以存在两种或更多种可相互转化的类型。质子移变互变异构体由两个原子之间的共价键合的氢原子的迁移而产生。互变异构体通常保持着平衡状态，并且试图分离单一互变异构体的努力通常得到化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在多种脂族醛和酮中，例如在乙醛中，酮形式占优势；而在酚类中，烯醇形式占优势。常见的质子转移互变异构体包括酮/烯醇酰胺/亚氨酸和脒互变异构体。后两个在杂芳基和杂环中特别常见并且本发明涵盖化合物的所有互变异构形式。
除非另外定义，否则本文所用的技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员通常所理解的含义。可以参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。解释药理学基本原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw HillCompanies Inc.,New York(2001)。技术人员公知的任何适当的材料和/或方法均可以用于实施本发明。然而，描述了优选的材料和方法。除非另有注明，否则在下列描述和实施例中涉及的材料、试剂等均可以获自商业来源。
本文所述的定义可以增补以形成化学相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”用作跟随另一个术语的后缀时，例如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，它意图是指如上文定义的烷基被一个或两个选自其它明确命名的基团的取代基取代。因此，例如，“苯基烷基”是指具有一个至两个苯基取代基的烷基，因此包括苄基、苯乙基和联苯基。“烷氨基烷基”是具有一个至两个烷氨基取代基的烷基。“羟基烷基”包括2-羟乙基、2-羟丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟丁基、2,3-二羟基丁基、2-(羟甲基)、3-羟丙基等。因此，如本文所用，术语“羟基烷基”用于定义下面所定义的杂烷基亚组。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂)芳基或(het)芳基是指芳基或杂芳基。
如本文所用的术语“羰基”或“酰基”指示式-C(＝O)R的基团，其中R为氢或如本文所定义的低级烷基。
如本文所用的术语“酯”指示式-C(＝O)OR的基团，其中R为如本文所定义的低级烷基。
如本文所用的术语“烷基”指示含有1至10个碳原子的直链或支链、饱和单价烃基。术语“低级烷基”指示含有1至6个碳原子的直链或支链烃基。如本文所用的“C1-10烷基”是指由1至10个碳组成的烷基。烷基的实例包括但不限于低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”用作另一个术语的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，它意图是指如上文所定义的烷基被一个或两个选自其它明确命名的基团的取代基所取代。因此，例如，“苯基烷基”指示基团R'R"-，其中R'为苯基，且R"是如本文所定义的亚烷基，应理解，苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但不限于苄基、苯乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或“芳烷基”具有类似的意义，但是R'为芳基。术语“(杂)芳基烷基”或“(杂)芳烷基”具有类似的意义，但是R'任选地为芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含有1至6个碳原子的直链或支链烃基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代。
除非另有说明，否则如本文所用的术语“亚烷基”或“亚烷”指示1至10个碳原子的二价饱和线性烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)。除了在亚甲基的情况下，亚烷基的开放价键不连接在相同的原子上。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1,1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文所用的术语“烷氧基”意指-O-烷基，其中烷基如上文定义，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文所用的“低级烷氧基”指示具有如先前所定义的“低级烷基”基团的烷氧基。如本文所用的“C1-10烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基为C1-10。
术语“卤代烷氧基”或“卤代低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代。
如本文所用的术语“羟基烷基”指示如本文所定义的烷基，其中不同碳原子上的一个至三个氢原子被羟基替代。
如本文所用的术语“亚磺酰基”指示-SO-基团。
如本文所用的术语“磺酰基”指示-SO2-基团。
如本文所用的术语“烷基磺酰基”和“芳基磺酰基”是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别为烷基或芳基且烷基和芳基如本文所定义。如本文所用的术语“杂烷基磺酰基”指示式-S(＝O)2R的基团，其中R为如本文所定义的“杂烷基”。
如本文所用的术语“低级烷基磺酰胺基”是指式-S(＝O)2NR2的基团，其中每个R独立地为氢或C1-3烷基，且低级烷基如本文所定义。
如本文所用的术语“三氟甲基磺酰基”是指式-S(＝O)2CF3的基团。
如本文所用的术语“三氟甲基亚磺酰基”是指式-S(＝O)CF3的基团。
如本文所用的术语“三氟甲基硫烷基”是指式-SCF3的基团。
如本文所用的术语“硝基”是指式–N+(＝O)O-的基团。
如本文所用的术语“羧基”是指式-C(＝O)R2的基团，其中每个R独立地为氢或C1-3烷基，且低级烷基如本文所定义。
术语“环烷基”指示3至10个环碳原子的单价饱和单环或双环烃基。在特定实施方案中，环烷基指示3至8个环碳原子的单价饱和单环烃基。双环意指由具有一个或多个共有碳原子的两个饱和碳环组成。特定的环烷基为单环。单环环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。双环环烷基的实例为二环并[2.2.1]庚烷基、或二环并[2.2.2]辛烷基。
如本文所用的术语“氨基”指示式-NR’R”的基团，其中R’和R”独立地为氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。可选地，R’和R”与它们所连接的氮一起，可形成杂环烷基。术语“伯氨基”指示其中R’和R”两者均为氢的基团。术语“仲氨基”指示其中R’为氢且R”不为氢的基团。术语“叔氨基”指示其中R’和R”均不为氢的基团。特定的仲胺和叔胺为甲基胺、乙基胺、丙基胺、异丙基胺、苯基胺、苄基胺二甲胺、二乙胺、二丙胺和二异丙基胺。
如本文所用的术语“酰胺基”指示式–C(＝O)NR’R”或–NR’C(＝O)R”的基团，其中R’和R”独立地为氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。
术语“杂芳基”指示5至12个环原子的单价芳族杂环单环或双环体系，包含1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子，剩余环原子为碳。杂芳基部分的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、氮杂基、二氮杂基、异噁唑基、苯并呋喃基、异噻唑基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、或喹喔啉基。
术语“杂环烷基”指示3至9个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环或双环环体系，包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，剩余环原子碳。在特定的实施方案中，杂环烷基为4至7个环原子的单价饱和单环环体系，包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，剩余环原子为碳。单环饱和杂环烷基的实例为氮丙啶基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢-噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基或氧氮杂环庚烷基。双环饱和杂环烷基的实例为8-氮杂-二环并[3.2.1]辛基、奎宁环基、8-氧杂-3-氮杂-二环并[3.2.1]辛基、9-氮杂-二环并[3.3.1]壬基、3-氧杂-9-氮杂-二环并[3.3.1]壬基、或3-硫杂-9-氮杂-二环并[3.3.1]壬基。部分不饱和的杂环烷基的实例为二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢-噁唑基、四氢-吡啶基、或二氢吡喃基。
HCV进入抑制剂
本申请提供式I化合物或其药学上可接受的盐
其中：
A为不饱和的或部分饱和单环或双环杂芳基，其任选地被一个或多个A’取代；以及
每个A’独立地为卤代、卤代低级烷基、低级烷基或氧代。
本申请提供式I化合物，其中A为任选地被一个或多个A’取代的吡啶基。
本申请提供上述式I化合物，其中A’为卤代低级烷基。
本申请可选地提供上述式I化合物，其中一个A’为卤代或两个A’为卤代。
本申请提供式I化合物，其中A为噻唑基，其任选地被一个或多个A’取代。
本申请提供上述式I化合物，其中A’为低级烷基。
本申请提供式I化合物，其中A为噻吩基，其任选地被一个或多个A’取代。
本申请提供上述式I化合物，其中A’为卤代。
本申请提供式I化合物，其中A为哒嗪酮，其任选地被一个或多个A’取代。
本申请提供上述式I化合物，其中一个A’为低级烷基而另一个为卤代。
本申请提供式I化合物，其中A为酞嗪酮或咪唑并吡啶基，其任选地被一个或多个A’取代。
本申请提供选自下组的化合物：
N3-(2-氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(2,6-二氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(4-叔丁基-噻唑-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(5-氯-噻吩-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮；
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-甲基-2H-酞嗪-1-酮；
N3-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；和
N3-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺。
本申请提供用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供上述方法，所述方法还包括向需要其的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用抑制HCV复制的抗病毒剂的组合。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合。
本申请提供上述方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或用化学方法衍生的干扰素。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合，其中所述抗病毒剂选自下组：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂、或其任何组合。
本申请提供包含式I化合物和药学上可接受的赋形剂的组合物。
本申请提供式I化合物在制备用于预防HCV的药物中的用途。
本申请提供式I化合物在制备用于治疗HCV的药物中的用途。
本申请提供本文所述的任何化合物、组合物、方法或用途。
化合物
本发明所涵盖的且在本发明范围内的代表性化合物的实例提供于下表中。下面所提供的这些实施例和制备能够使得本领域技术人员更清楚地理解和实施本发明。它们不应当被认为是对本发明范围的限定，仅仅是看作示例性的和代表性的。
通常而言，本申请中使用的命名法基于AUTONOMTM v.4.0，它是用于产生IUPAC系统命名法的Beilstein Institute计算机系统。如果绘画的结构和该结构给出的名称不相符时，则以绘画的结构为准。此外，如果一个结构或部分结构的立体化学没有采用例如粗体或虚线标明，则该结构或部分结构应被解释为涵盖其所有立体异构体。
表I描述了根据通式I的化合物的实施例：
表I.
合成
一般方案
下列方案描绘了用于获得式I化合物的一般方法。
方法1
方法2
方法3
在上述一般方案中，每个R可独立地为卤代、卤代低级烷基、低级烷基或氧代。
剂量和施用
本发明化合物可配制于多种口服施用剂型和载体中。口服施用可以为片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或混悬液。当通过其它途径施用时，本发明化合物也是有效的，所述施用尤其包括持续(静脉内滴注)、局部肠胃外施用、肌内施用、静脉内施用、皮下施用、透皮施用(可以含有渗透促进剂)、经颊施用、鼻腔施用、吸入施用和栓剂施用。优选的施用方法通常为采用常规日剂量方案的口服施用，该方案可以根据患病严重程度以及患者对活性成分的响应而调节。
本发明的一种或多种化合物及其可药用的盐以及一或多种常规赋形剂、载体或稀释剂可以制成药物组合物和单位剂量形式。药物组合物和单位剂型可以含有常规比例的常用成分，可以有或无其它活性化合物或成分，并且所述单位剂型可以含有任何适合的有效量的活性成分，其与采用的预期日剂量范围相当。药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊、半固体、粉剂、缓释制剂或液体如溶液剂、混悬液、乳剂、酏剂或填充胶囊的形式口服使用；或以栓剂的形式用于直肠或阴道施用；或者以无菌注射溶液的形式用于胃肠外使用。典型制剂将含有约5％至约95％的一种或多种活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意图包括活性化合物的固体和液体制剂，且本领域技术人员应理解，活性成分可以根据目标器官或组织以及预期的剂量和药动学参数而存在于不同的制剂中。
如本文所用的术语“赋形剂”是指用于制备药物组合物的化合物，通常为安全无毒的并且不是生物学或其它方面所不期望的，包括兽用可接受的以及人类药用可接受的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但通常可以与一或多种适合的药用赋形剂、稀释剂或载体一起混合后施用，所述赋形剂、稀释剂或载体可以根据预期的施用途径和标准制药实践而选择。
“药学上可接受的”意指可以用于制备药用组合物，通常为安全无毒的并且不是生物学或其它方面所不期望的，包括兽用可接受的以及人类药用可接受的。
活性成分的“药学上可接受的盐”形式也可以在最初就赋予活性成分期望的药动学特性，该特性是其非盐形式所不具备的，它甚至可以对该活性成分的体内治疗活性相关的药效学方面产生积极的影响。短语化合物的“药学上可接受的盐”意指其为药学上可接受的盐，它具有母体化合物的期望的药理学性质。此类盐包括：(1)与无机酸形成的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与有机酸形成的酸加成盐，所述酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环并[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘酸等；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子取代时形成的盐，所述离子如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；或与有机碱配合形成的盐，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，它们也可以用作稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或封装材料。在粉剂中，载体通常为细碎的固体，它是与细碎的活性成分的混合物。在片剂中，活性成分通常与具有必需粘合容量的载体以适合的比例混合且压制成期望的形状和大小。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。固体形式制剂除了活性成分外还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
液体制剂也适合于口服施用，包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、水性混悬液的液体制剂。此类制剂包括可以在即将使用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以制备为溶液，例如丙二醇水溶液，或者可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可以通过将活性组分溶于水中并加入适合的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂而制备。水性混悬液可以通过将细碎活性成分分散在含有粘性材料的水中而制备，所述材料例如天然或合成的胶类、树脂类、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的助悬剂。
本发明化合物可以制成胃肠外施用的制剂(例如通过注射施用，例如快速浓注或连续输注)，并且可以以安瓿、预填充注射器、小容量输液或含有添加防腐剂的多剂量容器中的单位剂量形式存在。组合物可以采用例如在油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液形式，例如聚乙二醇水溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和注射用有机酯(例如油酸乙酯)，且可以含有配制剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以为粉末形式，通过无菌固体的无菌离析获得，或者通过溶液的冷冻干燥获得，用于在使用前采用适合的媒介物如无菌、无热原水重构。
本发明化合物可以被配制成软膏、霜剂或洗剂或经皮贴剂局部施用于表皮。软膏和霜剂可以例如采用水性或油性基质制备，可以添加适合的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可以采用水性或油性基质配制，通常也可以含有一或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适合于口腔局部施用的制剂包括：含有活性成分以及矫味基质、通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶的锭剂；含有活性成分以及惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶的糖锭剂；和含有于适合的液体载体中的活性成分的漱口剂。
本发明化合物可以被配制成栓剂施用。首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂熔融，然后将活性组分通过例如搅拌均匀分散。然后将熔融的均匀混合物倾入适当大小的模具中，将其冷却并固化。
本发明化合物可以被配制用于阴道施用。除了含有活性成分外，阴道栓、棉塞、霜剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂中还含有本领域中公知的合适的载体。
本发明化合物可以被配制用于鼻腔施用。将溶液剂或混悬液通过常规方法直接用于鼻腔，例如采用滴管、吸管或喷雾器使用。该制剂可以为单剂量或多剂量形式。在使用滴管或吸管的情况下，可以由患者给予适当的、预定体积的溶液或混悬液完成。在喷雾剂的情况下，可以通过例如定量雾化喷雾泵完成。
本发明化合物可以被配制用于气溶胶施用，特别是施用于呼吸道，包括鼻内施用。化合物通常具有小粒径，例如5微米或更小的量级。此类粒径可以通过本领域中已知的方法获得，例如通过微粉化的方法获得。活性成分可以提供于含有适合的推进剂的加压容器中，所述推进剂例如含氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或二氧化碳或其它适合的气体。气溶胶也可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过定量阀控制。可选地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适合的粉末基质中的粉末混合物，所述基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)。粉末载体可以在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式呈递，例如在如明胶的胶囊或短筒中，或者通过吸入器进行粉末施用的泡罩包装。
当需要时，制剂可以采用肠包衣制备，以便于活性成分的缓释或控释施用。例如，本发明化合物可以配制于经皮或皮下药物递送装置。当化合物的缓释是必须的或者当患者对治疗方案的依从性是至关重要的情况下，这些递送系统是有利的。经皮递送系统中的化合物通常附着于皮肤-粘附固体支撑物上。所关注的化合物也可以与渗透增强剂组合，例如氮酮(1-十二烷氮杂-环庚-2-酮)。缓释递送系统通过手术或注射皮下植入皮下层。皮下植入物将化合物封装在脂溶性膜例如硅酮橡胶(Azone)或生物可降解的聚合物如聚乳酸中。
适当的制剂以及药用载体、稀释剂和赋形剂描述于Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，1995，由E.W.Martin编著，MackPublishing Company，第19版，Easton,Pennsylvania。有经验的制剂科学家可以在说明书的教导下改进所述制剂以获得适合于特定施用途径的多种制剂而不会使得本发明的组合物不稳定或降低其治疗活性。
通过较少的修饰(盐配制、酯化等)可以容易地完成对本发明化合物的修饰，使其在水中或其它媒介物中更易溶解，这是本领域技术人员众所周知的。本领域技术人员同样公知的是，通过改变特定化合物的施用途径和剂量方案从而可以对本发明化合物的药动学进行调节以便于患者获得最佳有益作用。
如本文所用的术语“治疗有效量”意指为了减轻个体疾病症状所需要的量。在每个具体病例中，剂量可以根据个体的要求进行调节。该剂量可以根据多种因素在较大的范围内变化，如待治疗疾病的严重程度、患者的年龄和一般健康情况、患者治疗所采用的其它药物、施用的途径和形式以及相关执业医师的偏好和经验。对于口服施用而言，在单一治疗和/或组合治疗中，日剂量在约0.01至约1000mg/kg体重之间应当是适当的。优选的日剂量在约0.1至约500mg/kg体重，更优选0.1至约100mg/kg体重/天，最优选1.0至约10mg/kg体重。因此，对于70kg的人的施用而言，剂量范围在每天约7mg至0.7g。该日剂量可以以单剂量或分剂量施用，通常在约每天1至5个剂量/天之间。通常，起始治疗采用小于化合物最佳剂量的较小的剂量。此后，剂量以较小的增量逐渐增加直到达到个体患者的最佳疗效。技术人员在治疗本文所述的疾病时无需过度实验并根据自己的知识、经验和本申请公开即能够确定对于给定疾病和患者而言的本发明化合物的治疗有效量。
药物制剂优选呈单位剂量形式。在此类剂型中，该制剂被细分为含有适当量的活性组分的单位剂量。单位剂量形式可以为包装的制剂、含有独立的量的制剂的包装，例如包装在片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的散剂。同样，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂自身，或者它可以是适当数量的任何这些包装形式。
适应症和治疗方法
适应症
本申请提供用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供上述方法，还包括向需要其的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合。
本申请提供上述方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或用化学方法衍生的干扰素。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合，其中抗病毒剂选自下组：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCVNS5A抑制剂、或其任何组合。
组合疗法
本发明化合物及其同分异构形式和药学上可接受的盐可以单独地或者与其它靶向与HCV生命周期相关的病毒或细胞成分或功能的化合物组合用于治疗和预防HCV感染。本发明中可使用的化合物种类包括但不限于所有种类的HCV抗病毒药物。
对于组合疗法而言，与本发明化合物组合可使用的药物的机理类别包括例如：HCV聚合酶的核苷和非核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、解旋酶抑制剂、NS4B抑制剂、NS5A抑制剂以及功能性抑制核糖体进入位点(IRES)的药学活性剂和具有下列作用的其它药物：抑制HCV细胞附着或病毒进入、HCV RNA翻译、HCV RNA转录、复制或HCV成熟、装配或病毒释放。这些类别中的本发明中使用的特定化合物包括但不限于大环、杂环和线性HCV蛋白酶抑制剂如特拉匹韦(VX-950)、波西匹韦(SCH-503034)、那拉匹韦(SCH-900518)、ITMN-191(R-7227)、TMC-435350(也称为TMC-435)、MK-7009、BI-201335、BI-2061(西鲁瑞韦(ciluprevir))、BMS-650032、ACH-1625、ACH-1095(HCV NS4A蛋白酶辅助因子抑制剂)、VX-500、VX-813、PHX-1766、PHX2054、IDX-136、IDX-316、ABT-450EP-013420(及同类物(congener))和VBY-376；可用于本发明的核苷HCV聚合酶(复制酶)抑制剂包括但不限于R7128、PSI-7851、IDX-184、IDX-102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938和PSI-879以及各种其他核苷和核苷酸类似物以及HCV抑制剂包括(但不限于)衍生为2'-C-甲基修饰的核苷(酸)的那些、4'-氮杂修饰的核苷(酸)、和7'-去氮杂修饰的核苷(酸)。可用于本发明的非核苷HCV聚合酶(复制酶)抑制剂包括但不限于HCV-796、HCV-371、VCH-759、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、GL-59728和GL-60667。
此外，本发明化合物可以与下列药物组合使用：环菲林(cyclophyllin)和免疫菲林拮抗剂(例如但不限于DEBIO化合物、NM-811以及环孢霉素和其衍生物)、激酶抑制剂、热激蛋白(例如HSP90和HSP70)的抑制剂、其他免疫调节剂，所述调节剂可包括但不限于干扰素(-α、-β、-Ω、-γ、-λ或合成的)如Intron A、Roferon-A、Canferon-A300、Advaferon、Infergen、Humoferon、Sumiferon MP、Alfaferone、IFN-β、Feron等；聚乙二醇衍生的(聚二乙醇化的)干扰素化合物，如PEG干扰素-α-2a(Pegasys)、PEG干扰素-α-2b(PEGIntron)、聚二乙醇化的IFN-α-con1等；干扰素化合物的长效制剂和衍生化物如白蛋白融合的干扰素、Albuferon、Locteron等；采用各种类型的控释递送系统的干扰素(例如ITCA-638、通过DUROS皮下递送系统递送的Ω-干扰素)；刺激细胞中干扰素合成的化合物，如雷西莫特(resiquimod)等；白介素；增强1型辅助T细胞响应发展的化合物，如SCV-07等；TOLL样受体激动剂如CpG-10101(actilon)、艾托立宾(isotorabine)、ANA773等；胸腺素α-1；ANA-245和ANA-246；组胺二盐酸盐；丙帕锗(propagermanium)；四氯癸烷氧化物(tetrachlorodecaoxide)；安普利近(ampligen)；IMP-321；KRN-7000；抗体如civacir、XTL-6865等；预防性和治疗性疫苗如InnoVac C、HCVE1E2/MF59等。此外，与施用NS5A抑制剂、I型干扰素受体激动剂(例如IFN-α)和II型干扰素受体激动剂(例如IFN-γ)有关的任何上述方法可以通过施用有效量的TNF-α拮抗剂来增强。适合用于此类组合疗法的示例性非限制性TNF-α拮抗剂包括ENBREL、REMICADE和HUMIRA。
此外，本发明化合物可以与抗原生动物药物和其它可以据信有效治疗HCV感染的抗病毒药物如但不限于前药硝唑尼特组合使用。硝唑尼特可以用作与本发明公开的化合物组合的药物，也可以用作与用于治疗HCV感染的其它药物如聚乙二醇干扰素α-2a和利巴韦林组合的药物。
本发明化合物也可以与干扰素的替代形式和聚乙二醇干扰素、利巴韦林或其类似物(例如他立韦林(tarabavarin)、左旋韦林(levoviron))、微RNA、干扰RNA小化合物(例如SIRPLEX-140-N等)、核苷酸或核苷类似物、免疫球蛋白、保肝药(hepatoprotectants)、抗炎药和其它NS5A抑制剂一起使用。HCV生命周期中其它靶点的抑制剂包括NS3解旋酶抑制剂；NS4A辅助因子抑制剂；反义寡核苷酸抑制剂，如ISIS-14803、AVI-4065等；载体编码的小发夹RNA(shRNA)；HCV特异性核酶，如heptazyme、RPI、13919等；进入抑制剂如HepeX-C、HuMax-HepC等；α葡糖苷酶抑制剂如celgosivir、UT-231B等；KPE-02003002和BIVN 401以及IMPDH抑制剂。其他示例性HCV抑制剂化合物包括公开于下列专利公布中的化合物：美国专利No.5,807,876；6,498,178；6,344,465；和6,054,472；PCT专利申请公布No.WO97/40028；WO98/40381；WO00/56331,WO02/04425；WO03/007945；WO03/010141；WO03/000254；WO01/32153；WO00/06529；WO00/18231；WO00/10573；WO00/13708；WO01/85172；WO03/037893；WO03/037894；WO03/037895；WO02/100851；WO02/100846；WO99/01582；WO00/09543；WO02/18369；WO98/17679,WO00/056331；WO98/22496；WO99/07734；WO05/073216、WO05/073195和WO08/021927。
此外，例如利巴韦林和干扰素的组合可以与至少一种本发明化合物一起作为多重组合疗法施用。本发明不限于前述种类或化合物，且包括已知的和新的化合物以及生物学活性剂的组合。本发明的组合疗法意图包括本发明组的化合物与本发明组的其它化合物以及本发明组之外的其它化合物的任何化学上可相容的组合，前提是所述组合不会消除本发明组的化合物的抗病毒活性或其药物组合物的抗病毒活性。
组合疗法可以是依次的，即首先用一个药物治疗然后用第二个药物治疗(例如其中每种治疗均包括不同的本发明化合物，或者其中一种治疗包括本发明化合物，另一种治疗包括一种或多种生物学活性剂)，或者其可以是采用两种药物同时(并行)进行治疗。依次治疗可以在完成第一次治疗之后开始第二次治疗之前包括一段合理的时间。在相同时间采用两种药物的治疗可以是相同的日剂量或者不同的剂量。组合疗法无需限定两种药物，且可以包括三种或更多种药物。同时和依次的组合疗法的剂量取决于组合疗法的组分的吸收、分布、代谢和排泄速度以及本领域技术人员公知的其它因素。剂量值随待缓和的疾病的严重程度而变化。还应理解，对于任何特定患者而言，具体的剂量方案和时间安排可以根据个体的需要和施用或监督组合疗法施用的本领域技术人员的判断而依时间调整。
本申请提供用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供上述方法，其还包括向需要其的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合。
本申请提供上述方法，其中免疫系统调节剂是干扰素或用化学方法衍生的干扰素。
本申请提供任何上述方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合，其中所述抗病毒剂选自下组：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCVNS5A抑制剂、或其任何组合。
实施例
缩写
常用缩写包括：乙酰基(Ac)、偶氮-双-异丁酰腈(AIBN)、大气压(Atm)、9-硼杂二环并[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(BINAP)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或boc酸酐(BOC2O)、苄基(Bn)、丁基(Bu)、化学文摘登记号(CASRN)、苄基氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)、二乙基氨基三氟化硫(DAST)、二亚苄基丙酮(dba)、1,5-二氮杂二环并[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)、二异丁基氢化铝(DIBAL或DIBAL-H)、二异丙基乙胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、1,1'-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、乙基(Et)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-羧酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et2O)、乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基六氟磷酸脲鎓乙酸(HATU)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高效液相色谱(HPLC)、异丙醇(IPA)、异丙基氯化镁(iPrMgCl)、六甲基二硅氮烷(HMDS)、液相色谱质谱法(LCMS)、六甲基二硅烷氨基锂(LiHMDS)、间-氯代过氧苯甲酸(m-CPBA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO2-(mesyl或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)、正丁基锂(nBuLi)、N-羧酸酐(NCA)、N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、氯铬酸吡啶鎓(PCC)、二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)、乙酸钯(II)(Pd(OAc)2)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)、重铬酸吡啶鎓(PDC)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅/平方英寸(psi)、吡啶(pyr)、1,2,3,4,5-五苯基-1'-(二叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)、室温(环境温度、rt或RT)、仲丁基锂(sBuLi)、叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS)、四正丁基氟化铵(TBAF)、三乙胺(TEA或Et3N)、2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧化物(TEMPO)、三氟甲磺酸酯盐或CF3SO2-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、1,1'-双-2,2,6,6-四甲基庚烷-2,6-二酮(TMHD)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基四氟硼酸脲鎓(TBTU)、薄层色谱(TLC)、四氢呋喃(THF)、三甲基甲硅烷基或Me3Si(TMS)、对甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)和N-尿烷-N-羧酸酐(UNCA)。当与烷基部分使用时，常规命名包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新具有其常规意义。(J.Rigaudy和D.P.Klesney,Nomenclature in Organic Chemistry,IUPAC 1979Pergamon Press,Oxford.)。
一般条件
本发明化合物可以通过下面实施例部分所述的示例性合成反应中描述的各种方法制备。
制备这些化合物中使用的原料和试剂通常可以得自商业供应商，如Aldrich Chemical Co.，或可以根据下面参考文献中列示的步骤、按照本领域技术人员已知的方法制备：如Fieser和Fieser的Reagents for OrganicSynthes；Wiley&Sons:New York,1991,第1-15卷；Rodd的Chemistry ofCarbon Compounds,Elsevier Science Publishers,1989,第1-5卷和增补卷；以及Organic Reactions,Wiley&Sons:New York,1991,第1-40卷。应理解，实施例部分中所示的合成反应方案仅仅是可合成本发明化合物的某些方法的说明，且可以对这些合成反应方案进行各种修改，本领域技术人员参考本申请中所包含的公开内容可以想到进行所述修改。
如果需要，合成反应方案中的原料和中间体可以采用常规技术分离并纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等。此类材料可以采用常规方法表征，包括物理参数和光谱数据。
除非相反指明，否则本文所述的反应通常在惰性氛围、在大气压力下、于约-78℃至约150℃的温度范围进行，通常于约0℃至约125℃进行，更通常并方便地于室温(环境温度)、例如约20℃进行。
本发明化合物上的各种取代基可以直接存在于起始化合物中、添加至任何中间体或者通过已知的取代或转化反应方法形成终产物后添加。如果取代基自身为反应性的，则取代基自身可以通过本领域已知的技术加以保护。各种保护基团在本领域中是已知的并可以采用。多种此类基团的示例可以记载于Green等人的“Protective Groups in Organic Synthesis”,JohnWiley and Sons,1999。例如，硝基可以通过硝化反应添加并且硝基可以转化为其它基团，如通过还原反应形成氨基、通过氨基的重氮化反应以及采用卤素置换重氮基形成卤素。酰基可以通过Friedel-Crafts酰化反应加成。然后酰基可以通过各种方法、包括Wolff-Kishner还原反应和Clemmenson还原反应转化为相应的烷基。氨基可以被烷基化形成单-和二-烷基氨基；且巯基和羟基可以被烷基化形成相应的醚。伯醇可以通过本领域已知的氧化剂氧化以形成羧酸或醛，且仲醇可以被氧化形成酮。因此，可以采用取代或转化反应(alteration reactions)以提供原料、中间体或终产物、包括分离的产物分子中的多种取代基。
制备实施例
实施例1
N*3*-(2-氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物1)
2-氯-4-异硫氰基吡啶
在0℃向碳酸钙(1.53g，15.3mmol，Eq:2.5)和硫光气(775mg，517μl，6.74mmol，Eq:1.1)于二氯甲烷(10.0ml)/水(10.0ml)中的悬液加入2-氯吡啶-4-胺(788mg，6.13mmol，Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温，搅拌过夜。分离有机层，经硫酸钠干燥。色谱处理(40g Analogix，0至10％乙酸乙酯/己烷)得到638mg(61％)期望产物，为黄色固体。
(Z)-N-2-氯吡啶-4-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将甲醇钠溶液(4.2ml，2.1mmol，Eq:1.19)加入至2-氯-4-异硫氰基吡啶(81.3mg，1.93mmol，Eq:1.1)，在室温搅拌15分钟。将2-氯-4-异硫氰基吡啶(300mg，1.76mmol，Eq:1.00)加入至反应混合物，搅拌1小时。加入碘甲烷(568mg，250μl，4.00mmol，Eq:2.27)，将淡黄色溶液在室温搅拌过夜。过滤所得悬液以得到166mg(42％)期望产物，为灰白色固体。
N*3*-(2-氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物1)
将(Z)-N-2-氯吡啶-4-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯(166mg，732μmol，Eq:1.00)和肼(235mg，230μL，7.32mmol，Eq:10)于乙醇(5mL)中的溶液在65℃加热2.5小时，然后在室温过夜。过滤所得悬液以得到40mg(28％)期望产物，为白色固体。MS m/z 211[M+H]。
实施例2
N*3*-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物2)
5-异硫氰基-2-(三氟甲基)
在0℃向碳酸钙(1.44g，14.4mmol，Eq:2.5)和硫光气(720mg，480μl，6.26mmol，Eq:1.08)于二氯甲烷(10.0ml)/水(10.0ml)中的悬液加入6-(三氟甲基)吡啶-3-胺(936mg，5.77mmol，Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温。分离有机层，经硫酸钠干燥以得到1.0g粗物质。色谱处理(40g Analogix，0至10％乙酸乙酯/己烷)得到982mg(83％)期望产物，为白色固体。
(Z)-N'-氰基-N-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将甲醇钠溶液(3.53ml，1.76mmol，Eq:1.2)加入至氨腈(67.9mg，1.62mmol，Eq:1.1)，在室温搅拌15分钟。将5-异硫氰基-2-(三氟甲基)吡啶(300mg，1.47mmol，Eq:1.00)加入至反应混合物，搅拌1小时。加入碘甲烷(459mg，202μl，3.23mmol，Eq:2.2)，将淡黄色溶液在室温搅拌过夜。浓缩溶液并进行色谱分析(50至75％EtOAc/己烷,40g Analogix)以得到227mg(59％)期望产物，为白色固体。
N*3*-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物2)
将(Z)-N'-氰基-N-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯(227mg，872μmol，Eq:1.00)和肼(281mg，275μL，8.76mmol，Eq:10.0)于乙醇(5mL)中的溶液在65℃加热5小时，然后冷却至室温，搅拌过夜。过滤所得悬液，用冷甲醇漂洗以得到44mg(21％)期望产物，为白色固体。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ:11.43(s,1H),9.51(s,1H),8.72(d,J＝2Hz,1H),8.17(dd,J＝9Hz,2Hz,1H),7.70(d,J＝9Hz,1H),6.04(s,2H)ppm。
实施例3
N*3*-(2,6-二氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物3)
2,6-二氯-4-异硫氰基吡啶
将2,6-二氯吡啶-4-胺(1g，6.13mmol，Eq:1.00)、硫光气(2.82g，1.88mL,24.5mmol，Eq:4)、三乙胺(145mg，200μL，1.43mmol，Eq:0.234)于苯(20mL)的悬液在回流下加热4小时。将橙色浆料过滤，用己烷洗涤。浓缩滤液并进行色谱分析(40g Redisep，0至10％乙酸乙酯/己烷)以得到827mg(66％)期望产物，为无色油状物。
(Z)-N'-氰基-N-(2,6-二氯吡啶-4-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将甲醇钠溶液(3.5mL,1.75mmol，Eq:1.2)加入至氨腈(67.7mg，1.61mmol，Eq:1.1)，在室温搅拌15分钟。将含2,6-二氯-4-异硫氰基吡啶(300mg，1.46mmol，Eq:1.00)的MeOH(3.5mL)加入至反应混合物，搅拌1小时。加入碘甲烷(454mg，200μL，3.2mmol，Eq:2.19)，将反应在室温搅拌过夜。浓缩反应，悬浮于二氯甲烷中，将所得悬液过滤以得到371mg(97％)期望产物，为白色固体。
N*3*-(2,6-二氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物3)
将(Z)-N'-氰基-N-(2,6-二氯吡啶-4-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯(371mg，1.42mmol，Eq:1.00)和肼(455mg，446μL，14.2mmol，Eq:10)于乙醇(10mL)中的溶液在65℃加热过夜。浓缩反应，将粗物质进行色谱分析(23g Supelco，0至10％MeOH/CH2Cl2)以得到70mg(10％)期望产物，为白色固体。
MS m/z 245[M+H]。
实施例4
N*3*-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物4)
异硫氰基-6-(三氟甲基)吡啶
在0℃向碳酸钙(1.56g，15.6mmol，Eq:2.57)和硫光气(780mg，520μl，6.78mmol，Eq:1.12)于二氯甲烷(10ml)/水(10ml)中的悬液加入6-(三氟甲基)吡啶-2-胺(985mg，6.08mmol，Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温，搅拌过夜。分离有机层，经硫酸钠干燥。色谱处理(40g Analogix，0至10％乙酸乙酯/己烷)得到965mg(78％)期望产物，为无色油状物。
(Z)-N'-氰基-N-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将甲醇钠溶液(3.5ml，1.75mmol，Eq:1.19)加入至氨腈(67mg，1.59mmol，Eq:1.08)，在室温搅拌15分钟。将含2-异硫氰基-6-(三氟甲基)吡啶(300mg，1.47mmol，Eq:1.00)的甲醇(3mL)加入至反应混合物，搅拌1小时。加入碘甲烷(454mg，200μl，3.2mmol，Eq:2.18)，将淡黄色溶液在室温搅拌过夜。过滤所得悬液以得到72mg白色固体期望产物。浓缩滤液并进行色谱分析(24g Analogix,0至50％乙酸乙酯/己烷)以得到110mg白色固体期望产物。合并产物以得到182mg(48％)白色固体。
N*3*-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物4)
将(Z)-N'-氰基-N-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲亚氨酸硫代甲酯(182mg，699μmol，Eq:1.00)和肼(224mg，220μl，6.99mmol，Eq:10)于乙醇(5mL)中的溶液在65℃加热过夜。过滤所得悬液以得到88mg(52％)期望产物，为白色固体。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ:11.46(1H,s),9.73(1H,s),8.14(d,J＝9Hz,1H),7.86(t,J＝8Hz,1H),7.20(d,J＝7Hz,1H),6.04(s,2H)ppm。
实施例5
N*3*-(4-叔丁基-噻唑-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物5)
4-叔丁基-2-异硫氰基噻唑
在0℃向碳酸钙(861mg，8.6mmol，Eq:2)和硫光气(555mg，370μl，4.83mmol，Eq:1.12)于二氯甲烷(10.0ml)/水(10.0ml)中的悬液加入4-叔丁基噻唑-2-胺(672mg，4.3mmol，Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温，搅拌过夜。加入9mL 1N HCl。分离有机层，经硫酸钠干燥，进行色谱分析(40gAnalogix,100％己烷至5％EtOAc/己烷)以得到727mg(85％)期望产物，为黄色油状物。
(Z)-N-4-叔丁基噻唑-2-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将甲醇钠(0.5M于甲醇中)(4.25ml，2.12mmol，Eq:1.2)加入至氨腈(84mg，2.00mmol，Eq:1.13)。15分钟后，将4-叔丁基-2-异硫氰基噻唑(350mg，1.76mmol，Eq:1.00)于甲醇(5mL)中的溶液加入至反应。1小时后，加入甲基碘(511mg，225μl，3.6mmol，Eq:2.04)，将反应在室温搅拌过夜。浓缩反应混合物，进行色谱分析(40g Analogix,20％EtOAc/己烷至50％EtOAc/己烷)以得到142mg(32％)期望产物，为白色固体。
N*3*-(4-叔丁基-噻唑-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物5)
将(Z)-N-4-叔丁基噻唑-2-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯(140mg，550μmol，Eq:1.00)和肼(176mg，173μl，5.5mmol，Eq:10)于乙醇(5mL)中的溶液在70℃加热过夜。浓缩反应混合物，进行色谱分析(11g Supelco,100％DCM至10％MeOH/DCM)以得到61mg(47％)期望产物，为白色固体。MS m/z 239[M+H]。
实施例6
N*3*-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物6)
2-异硫氰基-4-(三氟甲基)吡啶
在0℃向碳酸钙(869mg，8.68mmol，Eq:2.5)和硫光气(450mg，300μl，3.91mmol，Eq:1.13)于二氯甲烷(10.0ml)/水(10.0ml)中的悬液加入4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(563mg，3.47mmol，Eq:1.00)，将反应逐渐升温至室温，搅拌过夜。加入10mL 1N HCl。分离有机层，经硫酸钠干燥，进行色谱分析(60g Analogix,100％己烷至10％EtOAc.己烷)以得到337mg(48％)期望产物，为橙色油。
N-(甲基硫基(4-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基)甲基)氨腈
将甲醇钠(0.5M于甲醇中)(4ml，2.00mmol，Eq:1.21)加入至氨腈(78mg，1.86mmol，Eq:1.12)。15分钟后，加入2-异硫氰基-4-(三氟甲基)吡啶(338mg，1.66mmol，Eq:1.00)于甲醇(5mL)中的溶液。1小时后，加入甲基碘(568mg，250μl，4.00mmol，Eq:2.42)，将反应在室温搅拌过夜。浓缩反应混合物，进行色谱分析(40g Analogix,10％至50％EtOAc/己烷)以得到155mg(36％)期望产物，为橙色固体。
N*3*-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物6)
向N-(甲基硫基(4-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基)甲基)氰胺(155mg，0.591mmol，Eq:1)于甲醇(5mL)中的溶液加入肼(189mg，186μl，5.91mmol，Eq:10)。将反应混合物在60℃加热过夜。浓缩反应混合物，进行色谱分析(11g Supelco,10％MeOH/DCM)以得到34mg黄色固体，其含有产物和杂质。进一步纯化(SFC)得到15mg(10％)期望产物，为淡黄色固体。MS m/z245[M+H]。
实施例7
N3-(5-氯噻吩-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物7)
5-氯噻吩-3-羧酸
在1L圆底烧瓶中，将N-氯琥珀酰亚胺(23.5g，176mmol，Eq:1.00)和噻吩-3-羧酸(17.5g，137mmol，Eq:0.776)与乙酸(200mL)合并以得到白色悬液。将反应混合物回流4小时。该时间后，将反应混合物冷却至室温。将反应混合物与冰水组合。将所得混合物用二氯甲烷萃取数次。将合并的有机萃取液然后用等体积的1.0N氢氧化钠水溶液处理。该水性混合物用二氯甲烷洗涤一次。将水相用浓HCl酸化以沉淀白色固体。过滤该沉淀，然后在65℃加热下在真空彻底干燥以提供5-氯噻吩-3-羧酸(14g，49％)，为奶油色粉末。
5-氯噻吩-3-基氨基甲酸叔丁酯
在500mL圆底烧瓶中，将5-氯噻吩-3-羧酸(5.0g，30.8mmol，Eq:1.00)和三乙胺(4.71mL,33.8mmol，Eq:1.1)与DMF(50mL)合并以得到浅褐色溶液。将反应混合物在冰水浴中冷却至0℃，经由注射器滴加叠氮磷酸二苯酯(9.31g，7.29ml，33.8mmol，Eq:1.1)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟，然后升温至40℃。将反应混合物在40℃搅拌4小时。该时间后，TLC指示原料完全消耗成非极性中间体。向反应混合物加入叔丁醇(14.7mL,154mmol，Eq:5)，将混合物在90℃加热过夜。早上，将反应混合物返回至65℃，然后在旋转蒸发仪上于该温度浓缩。通过快速色谱(300gAnalogix柱，10％-35％乙酸乙酯-己烷)纯化粗产物，提供5-氯噻吩-3-基氨基甲酸叔丁酯。最终产品含有显著性非极性杂质，如通过1H NMR分析所指示。
5-氯噻吩-3-胺
在250mL圆底烧瓶中，将5-氯噻吩-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.0g，4.28mmol，Eq:1.00)和4.0M HCl于二噁烷中的溶液(9mL,4.5mmol，Eq:1.05)与二噁烷(5mL)合并以得到无色溶液。仅15分钟后，反应混合物由于沉淀而变得浑浊。将反应混合物在室温搅拌4小时。该时间后，反应混合物为粘稠的奶油色浆料。过滤反应混合物，将所收集的固体在真空下彻底干燥。然后将粗产物与二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液合并。干燥有机相，过滤并浓缩，得到5-氯噻吩-3-胺，为棕褐色油(270mg，47％)。
2-氯-4-异硫氰基噻吩
在250mL圆底烧瓶中，将5-氯噻吩-3-胺(0.5g，3.74mmol，Eq:1.00)和1,1’-硫代羰基二咪唑(1.33g，7.49mmol，Eq:2.0)与二氯甲烷(23.4mL)组合以得到浅褐色悬液。将该悬液在室温搅拌10分钟。在这段时间期间，原料未溶解。将咪唑(225mg，3.74mmol)加入至反应混合物，在30秒内反应混合物快速变为均质浅褐色溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。早上，过滤反应混合物，然后经硅胶浓缩。将硅胶承载的粗产物上样至120克SiliCycle柱上。使用快速色谱(100％己烷)分离2-氯-4-异硫氰基噻吩(430mg，65％)。
(Z)-N-5-氯噻吩-3-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯
将50mL圆底烧瓶装载有氨腈(52.7mg，1.25mmol，Eq:1.1)和0.5M甲醇钠于MeOH中的溶液(2.5mL,1.25mmol，Eq:1.2)。将所得混合物在室温搅拌15分钟。分别地，在搅拌下将2-氯-4-异硫氰基噻吩(200mg，1.14mmol，Eq:1.00)与甲醇(4.55mL)组合。将氨腈混合物经由注射器转移至原料混合物。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后在室温加入碘甲烷(0.162g，0.070mL,1.14mmol，Eq:1.0)。将反应混合物在室温搅拌两小时。该时间后，大量白色固体沉淀。滤出产物，然后用2mL甲醇洗涤以提供(Z)-N-5-氯噻吩-3-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯(52mg，20％)。
N3-(5-氯噻吩-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物7)
在50mL圆底烧瓶中，将(Z)-N-5-氯噻吩-3-基-N'-氰基氨基甲亚氨酸硫代甲酯(52mg，224μmol，Eq:1.00)与乙醇(2.99mL)组合以得到无色溶液。加入肼(80μL，2.55mmol，Eq:11.4)。将反应混合物回流两小时，然后冷却至室温。将反应混合物在室温再搅拌14小时。蒸发溶剂，将粗产物与含10％甲醇的氯仿合并。过滤溶液，将滤液浓缩以提供N3-(5-氯噻吩-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(51mg，98％)，为浅黄色固体。C6H6ClN5S的MS计算值[(M+H)+]:216，观测值216.0。
实施例8
4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮(化合物8)
1-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺
在500mL圆底烧瓶中，将1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(1.5g，15.1mmol，Eq:1.00)和1M甲醇钠(33.3ml，16.7mmol，Eq:1.1)与MeOH(100ml)组合以得到无色混浊溶液。将反应混合物搅拌4小时，蒸发得到灰色固体。使固体悬浮于30ml DMF中，加入1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(2.42g，2.1ml，15.4mmol，Eq:1.02)。将深棕色悬液在氩气下在25℃搅拌60小时。将反应用水(35ml)稀释，用EtOAc(3x 50ml)萃取。将有机层合并，用H2O(1x 25mL)、饱和NaCl(1x 50ml)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩以得到白色糊状固体。在真空下干燥同时轻微加热以除去残余DMF和PMB-Cl。粗物质通过快速色谱(硅胶，80g，0％至10％于DCM中的MeOH)纯化，得到457mg期望产物，为黄色固体(14％)。MS(m+1)＝220。
4-[5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基]-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮
向10mL微波小瓶加入NMP(1ml)中的1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(49mg，223μmol，Eq:1.00)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(59.9mg，268μmol，Eq:1.2)和K2CO3(92.7mg，670μmol，Eq:3)。将小瓶盖上塞子，在微波中于130℃加热30min。将反应混合物用25mL H2O稀释，用二氯甲烷萃取(3x 50mL)。将有机层合并，用H2O(1x 25mL)、盐水(1x20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。粗物质通过快速色谱(硅胶，12g，0％至10％于二氯甲烷中的甲醇)纯化，提供72mg(89％)期望产物，为白色固体。MS+m/z:362.0/364.0.(M+1)。
4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮(化合物8)
在250mL圆底烧瓶中，将4-(5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(73mg，202μmol，Eq:1.00)与TFA(3ml)组合以得到暗红色溶液。将反应混合物加热至65℃，搅拌17h。浓缩粗反应混合物，将残余物用饱和NaHCO3稀释并过滤。将固体用二氯甲烷(3x10mL)研磨。将固体用水洗涤，在真空下干燥。将残余物悬浮于甲醇中，过滤以除去不溶性褐色固体。将滤液真空蒸发以提供43mg(90％)期望产物，为橙色固体。MS+m/z:241.9/244.1.(M+1)。
实施例9
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2H-酞嗪-1-酮(化合物9)
6-氨基-2H-哒嗪-1-酮
在10ml密封管中，将6-溴-2H-哒嗪-1-酮(108mg，480μmol，Eq:1.00),NH4OH(931mg，1.03ml，7.97mmol，Eq:16.6)和铜粉(30.5mg，480μmol，Eq:1.00)与异丙醇(1ml)组合以得到浅褐色悬液。将管密封，将反应加热至100℃过夜。将粗反应混合物真空浓缩。将反应混合物用饱和NH4Cl和二氯甲烷稀释。过滤2相混合物，将滤液分离，用二氯甲烷萃取(3X30ml)水相。将SiO2加入至水相，浓缩。将固体悬浮于热二氯甲烷/甲醇9:1中，超声处理。过滤，用温热二氯甲烷/甲醇9:1洗涤滤饼。将滤液与二氯甲烷萃取液合并，蒸发得到浅黄色粉末。将粉末在真空下于25℃干燥1小时以提供62mg(80％)期望产物。MS+m/z:162.1.(M+1)。
6-异硫氰基-2H-哒嗪-1-酮
在100mL梨形烧瓶中，将6-氨基酞嗪-1(2H)-酮(60mg，372μmol，Eq:1.00)和碳酸钙(130mg，1.3mmol，Eq:3.5)与二氯甲烷(5ml)和水(5.00ml)组合以得到浅褐色悬液。加入硫光气(47.1mg，31.4μl，410μmol，Eq:1.1)，将反应混合物在25℃搅拌5天。将反应混合物用二氯甲烷稀释，分离，用二氯甲烷萃取水相。将有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩以得到黄色固体。将产物在真空下于25℃干燥2小时，其用于后续反应而不经进一步纯化。MS+m/z:204.0.(M+1)。
6-((甲基-λ4亚硫烷基)-甲基-氰胺)-2H-哒嗪-1-酮
在250mL圆底烧瓶中，将6-异硫氰基酞嗪-1(2H)-酮(75mg，369μmol，Eq:1.00)和氰胺一钠(sodium hydrogen cyanamide)(26.0mg，406μmol，Eq:1.1)与甲醇(2ml)和二氯甲烷(1ml)组合以得到橙色悬液。将反应混合物在25℃搅拌3小时，然后加入甲基碘(62.9mg，27.7μl，443μmol，Eq:1.2)。将反应混合物在25℃搅拌16h。将粗反应混合物真空浓缩，橙色固体用于后续反应不经进一步纯化。MS+m/z:260.0.(M+1)。
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2H-酞嗪-1-酮(化合物9)
在250mL圆底烧瓶中，将6-((甲基-λ4亚硫烷基)-甲基-氰胺)-2H-哒嗪-1-酮(95mg，366μmol，Eq:1.00)与乙醇(3ml)组合以得到浅黄色悬液。加入肼一水合物(183mg，178μl，3.66mmol，Eq:10)，将反应混合物加热至70℃，搅拌3小时。真空浓缩粗反应混合物，将残余物在真空下干燥过夜。浅褐色固体用二氯甲烷/甲醇/NH4OH(60:10:1)研磨，用甲醇洗涤，在真空下干燥。固体在加热同时用甲醇和1M HCl研磨。过滤温热悬液，将褐色固体在真空下干燥以提供6mg(7％)期望产物。MS-m/z:242.0.(M-1)。
实施例10
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-甲基-2H-酞嗪-1-酮(化合物10)
6-溴-2-甲基-2H-哒嗪-1-酮
在50mL梨形烧瓶中，将6-溴酞嗪-1(2H)-酮(214mg，951μmol，Eq:1.00)和Cs2CO3(372mg，1.14mmol，Eq:1.20)与DMF(3ml)组合以得到浅褐色悬液。加入甲基碘(202mg，89.0μl，1.43mmol，Eq:1.50)，将反应混合物在25℃搅拌20小时。反应物用二氯甲烷和水稀释。将水层用二氯甲烷反萃取(3x 20mL)。合并的有机层用H2O(1x 25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。将粗物质从二氯甲烷重结晶以得到浅黄色固体。将固体在真空下干燥以提供112mg(49％)期望产物，为浅黄色结晶固体。MS+m/z:239/241(M+1)。
6-氨基-2-甲基-2H-哒嗪-1-酮
在10mL密封管中，将6-溴-2-甲基酞嗪-1(2H)-酮(112mg，468μmol，Eq:1.00)和铜粉(29.8mg，468μmol，Eq:1.00)与2-丙醇(1ml)组合以得到浅褐色悬液。加入氢氧化铵(908mg，1.01ml，7.78mmol，Eq:16.6)，将反应混合物加热至100℃，在密封管中搅拌21小时。冷却，用二氯甲烷稀释。加入Na2SO4，过滤混合物。将无色滤液浓缩至棕褐色固体，在真空下于25℃干燥过夜以提供63mg(77％)期望产物，为灰白色固体。该物质用于后续反应而不经任何进一步纯化。MS+m/z:176(M+1)。
6-异硫氰基-2-甲基-2H-哒嗪-1-酮
在100mL梨形烧瓶中，将6-氨基-2-甲基酞嗪-1(2H)-酮(63mg，360μmol，Eq:1.00)和碳酸钙(126mg，1.26mmol，Eq:3.5)与二氯甲烷(3ml)和水(3ml)组合以得到浅褐色悬液。加入硫光气(45.5mg，30.3μl，396μmol，Eq:1.1)，将反应混合物在25℃搅拌23小时。在t＝23h时的LC-MS显示反应完全。将反应混合物用二氯甲烷稀释，分离，水相用二氯甲烷萃取。将有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩以得到蓬松的白色固体。将产物在真空下干燥，其用于后续反应而不经进一步纯化。MS+m/z:218.0.(M+1)。
6-((甲基-4亚硫烷基)-甲基-氰胺)-2-甲基-2H-哒嗪-1-酮
在250mL圆底烧瓶中，将6-异硫氰基-2-甲基酞嗪-1(2H)-酮(78mg，359μmol，Eq:1.00)和氰胺一钠(25.3mg，395μmol，Eq:1.1)与甲醇(4ml)和二氯甲烷(1.5ml)组合以得到黄色悬液。将反应混合物在25℃搅拌2h，然后加入甲基碘(61.2mg，26.9μl，431μmol，Eq:1.2)。将反应混合物在25℃搅拌19小时，真空浓缩至浅黄色固体，其用于后续反应而不经进一步纯化。MS+m/z:274.0.(M+1)。
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-甲基-2H-酞嗪-1-酮(化合物10)
在100mL梨形烧瓶中，将6-((甲基-λ4亚硫烷基)-甲基-氰胺)-2-甲基-2H-哒嗪-1-酮(98mg，359μmol，Eq:1.00)和肼一水合物(179mg，174μl，3.59mmol，Eq:10)与乙醇(3ml)组合以得到浅黄色悬液，将反应混合物加热至70℃达3小时。将粗反应混合物真空浓缩，用1M HCl酸化，过滤固体，用水洗涤。将固体悬浮于甲醇中，加入浓NH4OH。将黄色悬液浓缩，过滤，用水洗涤。将棕褐色固体在真空下于45℃干燥过夜以提供44mg(48％)期望产物，为灰白色固体。MS+m/z:258.0.(M+1)。
实施例11
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物11)
3,5-二溴-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑
在100mL圆底烧瓶中，将3,5-二溴-1H-1,2,4-三唑(5g,22.0mmol，Eq:1.00)、1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(3.45g，22.0mmol，Eq:1)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(5.7g，44.1mmol，Eq:2)与乙腈(101ml)合并以得到浅黄色溶液。加入碘化钾(1.83g，11.0mmol，Eq:0.5)。将混合物加热至回流2小时。将反应混合物冷却，用EtOAc(100mL)稀释，用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物以得到油状物，通过柱色谱(己烷/EtOAc＝70/30)从该油状物分离出化合物，得到7.3g期望产物(95％)。
5-溴-2-(4-甲氧基-苄基)-2H-[1,2,4]三唑-3-基]-双-(4-甲氧基-苄基)-胺
在10mL密封管中，将3,5-二溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-三唑(400mg，1.15mmol，Eq:1.00)和双(4-甲氧基苄基)胺(356mg，1.38mmol，Eq:1.20)组合，将混合物加热至140℃，过夜。将反应混合物冷却至室温，加入CH2Cl2(50mL)，用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物。通过柱色谱分离出化合物，得到浅黄色固体300mg(50％)。MH+525.1。
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1,N*5*,N*5*-三-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺
在25mL密封管中，将2-甲基丙-2-醇钠(60.2mg，626μmol，Eq:1.20)、双(二亚苄基丙酮)钯(30.0mg，52.2μmol，Eq:0.1)和2-二叔丁基(2',4',6'-三异丙基联苯基-2-基)膦(22.2mg，52.2μmol，Eq:0.1)与甲苯(5.00mL)组合以得到深棕色悬液。加入3-溴-N,N,1-三(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-三唑-5-胺(278mg，522μmol，Eq:1.00)和咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(69.5mg，522μmol，Eq:1.00)。将反应混合物用氩气脱气15min，然后加热至110℃达3小时。将反应混合物冷却，用EtOAc(50mL)稀释，用H2O(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物，得到粗产物280mg(93％)。MH+576.4。
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物11)
在10mL圆瓶中，将N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1,N*5*,N*5*-三-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(280mg，486μmol，Eq:1.00)与TFA(5.00mL)组合以得到无色溶液。将所得溶液加热至回流过夜，浓缩反应混合物，然后用EtOAc(30mL)稀释。将溶液用饱和NaHCO3洗涤，有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物。通过制备型TLC分离出化合物以得到灰白色固体56mg(54％)。MH+215.9。
实施例12
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物12)
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1,N*5*,N*5*-三-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺
在25mL密封管中，将2-甲基丙-2-醇钠(60.2mg，626μmol，Eq:1.20)、双(二亚苄基丙酮)钯(30.0mg，52.2μmol，Eq:0.1)和2-二叔丁基(2',4',6'-三异丙基联苯基-2-基)膦(22.2mg，52.2μmol，Eq:0.1)与甲苯(5.00mL)组合以得到深棕色悬液。加入3-溴-N,N,1-三(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,4-三唑-5-胺(278mg，522μmol，Eq:1.00)和咪唑并[1,2-a]吡啶-7-胺(69.5mg，522μmol，Eq:1.00)。将反应混合物用氩气脱气15min，然后加热至110℃达3小时。将反应混合物冷却，用EtOAc(50mL)稀释，用H2O(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物以得到粗产物290mg(97％)。MH+576.4。
N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物12)
在10mL圆瓶中，将N*3*-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1,N*5*,N*5*-三-(4-甲氧基-苄基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(300mg，521μmol，Eq:1.00)与TFA(5.00mL)组合以得到无色溶液。将所得溶液加热至回流过夜；浓缩反应混合物，然后用EtOAc(30mL)稀释。将溶液用饱和NaHCO3洗涤，有机层经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下除去挥发物。通过制备型TLC分离出化合物，得到灰白色固体44mg(39％)。MH+215.9。
生物实施例
使用假型HCV颗粒(HCVpp)报告基因测定法测定化合物HCV GT1b和GT1a进入抑制活性。
用于产生假型病毒颗粒的哺乳动物表达质粒
表达GT1a H77株(Proc Natl Acad Sci USA 199794:8738-43)或GT1bCon1株(Science 1999 285:110-3)的HCV E1和E2包膜蛋白的质粒通过将编码HCV核心蛋白的最后60个氨基酸和所有HCV E1与E2蛋白的核酸克隆入pcDNA3.1(+)载体中来构建。表达水泡性口炎病毒(VSV G)的糖蛋白G的质粒pVSV-G来自Clontech(目录号631530)。表达萤火虫荧光素酶报告基因的HIV包装构建体通过进一步删除部分HIV包膜蛋白、基于包膜缺陷性pNL.4.3.Luc-R-.E-载体(Virology 1995206:935-44)来修饰。
在瞬时转染的HEK-293T细胞中产生假型病毒颗粒
假型HCV GT1a和GT1b颗粒(HCVpp)以及假型VSV G颗粒(VSVpp)自瞬时转染的HEK-293T细胞(ATCC目录号CRL-573)产生。为了产生HCVpp，将HEK-293T细胞用等量的表达HCV包膜蛋白和HIV包装基因组的质粒、通过使用聚乙烯亚胺(Polysciences目录号23966)作为转染试剂来转染。为了产生VSVpp，将HEK-293T细胞用等量的表达VSV G和HIV包装基因组的质粒、通过使用聚乙烯亚胺来转染。转染后24小时，含有转染混合物的细胞培养基被替换为补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen目录号25030-081)的新鲜杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)(DMEM-GlutamaxTM-I；Invitrogen目录号10569-010)。转染后48小时收集上清液，通过无菌0.45μm滤器过滤。将上清液的等分试样冷冻并在-80℃储存直至使用。
具有高CD81表达水平的Huh7-高CD81细胞通过流式细胞术分选、使用FITC-标记的CD81抗体JS-81(BD Biosciences目录号561956)来富集，以允许更有效的HCV进入。将Huh7-高CD81细胞于杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I；Invitrogen目录号10569-010)中培养。培养基补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和1％青霉素/链霉素(Invitrogen目录号15070-063)。将细胞保持在37℃的潮湿的5％CO2气氛中。
测定Huh7-高CD81细胞中化合物HCVpp进入抑制活性
将Huh7-高CD81细胞以8000个细胞/孔的细胞密度铺板于96孔板(Perkin Elmer，目录号6005660)中。将细胞铺板于补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和1％青霉素/链霉素(Invitrogen目录号15070-063)的100μl杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I，Invitrogen目录号10569-010)中。使细胞在37℃和5％CO2平衡24小时，此时加入化合物和假型病毒。测定当天，将HCVpp等分试样于37℃水浴中解冻并保持在4℃直至使用。将化合物(或作为对照的培养基)在具有2％DMSO和2％青霉素/链霉素的DMEM-GlutamaxTM-I中稀释成3倍系列稀释液。除去每个培养孔中的100μl平板培养基，接着添加50μl化合物稀释液和50μl解冻HCVpp。在添加化合物和HCVpp后72小时、按照制造商说明、使用Steady-Glo荧光素酶测定系统(Promega，目录号E2520)读取萤火虫荧光素酶报告基因信号。EC50值被定义为与不含化合物的对照样品相比较，观察到萤火虫荧光素酶报告基因的水平减少50％的化合物浓度，并通过化合物剂量-响应数据的非线性拟合来确定。
测定Huh7-高CD81细胞中的化合物选择性
将Huh7hCD81细胞测定板和化合物稀释液以与HCVpp测定中相同的形式设置。细胞铺板后24小时，将解冻的VSVpp于补充有10％胎牛血清的DMEM-GlutamaxTM-I中稀释800倍。从培养孔除去细胞铺板培养基后，将50μl化合物稀释液和50μl稀释的VSVpp加入至孔中。在添加化合物和HCVpp后72小时、使用Steady-Glo荧光素酶测定系统(Promega，目录号E2520)读取萤火虫荧光素酶报告基因信号。EC50值被定义为与不含化合物的对照样品相比较，观察到萤火虫荧光素酶报告基因的水平减少50％的化合物浓度，并通过化合物剂量-响应数据的非线性拟合来确定。当最大抑制百分比低于90％且高于70％时EC50为近似值。
代表性测定数据可见于下表II：
表II.
出于清楚和容易理解的目的，通过说明和实施例已详细地描述了前述发明。对于本领域技术人员而言显而易见的是，可在所附权利要求的范围内进行变化和修饰。
因此，应理解，上述说明书意图是说明性的而非限定性的。因此，本发明的范围不是参考上述说明来确定，而是应参考下列所附权利要求以及该权利要求所赋予的等同物的全部范围来确定。
本申请中引用的所有专利、专利申请和公布为了所有目的据此通过引用整体并入，以达到如同单独引用每个单独的专利、专利申请或公布的程度。

Claims (20)

1.式I化合物或其药学上可接受的盐
其中：
A为不饱和的或部分饱和单环或双环杂芳基，其任选地被一个或多个A’取代；且
每个A’独立地为卤代、卤代低级烷基、低级烷基或氧代。
2.权利要求1的化合物，其中A为吡啶基，其任选地被一个或多个A’取代。
3.权利要求2的化合物，其中一个A’为卤代或两个A’为卤代。
4.权利要求2的化合物，其中A’为卤代低级烷基。
5.权利要求1的化合物，其中A为噻唑基，其任选地被一个或多个A’取代。
6.权利要求5的化合物，其中A’为低级烷基。
7.权利要求1的化合物，其中A为噻吩基，其任选地被一个或多个A’取代。
8.权利要求7的化合物，其中A’为卤代。
9.权利要求1的化合物，其中A为哒嗪酮，其任选地被一个或多个A’取代。
10.权利要求1的化合物，其中一个A’为低级烷基而另一个为卤代。
11.权利要求1的化合物，其中A为酞嗪酮或咪唑并吡啶基，其任选地被一个或多个A’取代。
12.选自下组的化合物：
N3-(2-氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(2,6-二氯-吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(4-叔丁基-噻唑-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(5-氯-噻吩-3-基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮；
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-甲基-2H-酞嗪-1-酮；
N3-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；和
N3-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺。
13.用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向需要其的患者施用治疗有效量的权利要求1-12中任一项的化合物。
14.权利要求13的方法，其还包括向需要其的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
15.用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向需要其的患者施用治疗有效量的权利要求1-12中任一项的化合物。
16.权利要求13-15中任一项的方法，其还包括施用抑制HCV复制的抗病毒剂的组合。
17.权利要求13-16中任一项的方法，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合。
18.权利要求17的方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或用化学方法衍生的干扰素。
19.权利要求17的方法，其中所述抗病毒剂选自下组：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂、或其任何组合。
20.组合物，其包含权利要求1-12中任一项的化合物和药学上可接受的赋形剂。
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