CN105051033B - 抗病毒化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了式(I)的化合物，其中式(I)中的变量如本文所述定义。还公开了含所述化合物的药物组合物，及使用式(I)的化合物预防或治疗HCV感染的方法。

Description

抗病毒化合物
本发明提供了式I的化合物，其可用作丙型肝炎病毒(HCV)的抑制剂、用作HCV感染的抑制剂，以及用于预防和治疗丙型肝炎感染。
丙型肝炎病毒(HCV)感染是一个主要的健康问题，其在世界范围内影响1.7亿人，在美国影响3-4百万人(Armstrong,G.L.等人,Ann.Intern.Med.2006,144:705-714；Lauer,G.M.等人,N.Eng.J.Med.2001,345:41-52)。HCV感染在相当数量的感染个体中导致慢性肝病、诸如肝硬化和肝细胞癌。在美国与慢性HCV感染相关的肝硬化和肝细胞癌也是肝移植的首要原因。目前HCV感染的治疗方法包括组合使用聚乙二醇干扰素-α与核苷-类似物利巴韦林的免疫疗法。聚乙二醇干扰素-α与利巴韦林及两种最新批准的HCV NS3蛋白酶抑制剂Incivek或Victrelis之一的组合是用于基因型1HCV感染的患者(最难治疗的患者群)的治疗的现行护理标准。然而，目前的HCV治疗受限于最适度以下的持续的病毒学应答率，且伴有严重的副作用以及对蛋白酶抑制剂的抗性。因此对于具有更好的功效、安全性和抗性性质的的改善的抗病毒药有明确的需求。
HCV对人肝细胞的感染、也称为HCV进入(HCV entry)，是由病毒-编码的包膜糖蛋白E1和E2与宿主细胞共受体的功能性相互作用介导的，随后是受体-介导的胞吞过程。该HCV进入步骤是治疗性介入的普遍认为的靶点。若干病毒-编码酶也是治疗性介入的普遍认为的靶点，包括金属蛋白酶(NS2-3)、丝氨酸蛋白酶(NS3、氨基酸残基1-180)、解旋酶(NS3，全长)、NS3蛋白酶辅助因子(NS4A)、膜蛋白(NS4B)、锌金属蛋白质(NS5A)和RNA-相关的RNA聚合酶(NS5B)。
已经开发了用来研究HCV进入宿主细胞的生物学的系统。已经开发了其中E1和E2糖蛋白被用于功能性替代逆转录病毒的糖蛋白的假型化系统(Bartosch,B.,Dubuisson,J.和Cosset,F.-L.J.Exp.Med.2003,197:633-642；Hsu,M.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2003,100:7271-7276)。这些系统产生HCV假颗粒，其据信以类似于天然病毒的方式结合于和进入宿主细胞，由此使得它们成为研究病毒进入步骤以及鉴别阻止该过程的抑制剂的方便的工具。
对于开发有效的治疗HCV感染的治疗剂有明确的和长期的需求。特别是，有开发选择性抑制HCV病毒进入和复制并可用于治疗HCV-感染患者和保护肝脏移植患者免于HCV再感染的化合物的需求。本申请公开了在预防HCV感染中有效的新的化合物。此外，所公开的化合物提供了药物应用的优点，例如，在它们的作用机制、结合、感染的预防、抑制功效和靶点选择性方面。
发明概述
本申请提供了式I的化合物
A是不饱和的或部分不饱和的单环或二环的杂芳基或单环或螺环的杂环烷基；
各R1独立地是卤素、卤代低级烷基或低级烷基磺酰基；
m是0、1或2；
各R2独立地是卤素、低级烷氧基、氧代、氨基、低级烷基、C(＝O)OR2’、S(＝O)2R2’、S(＝O)2NHR2’、羟基低级烷基、C(＝O)NHR2’或C(＝O)R2’；
n是0、1或2；且
R2’是低级烷基、卤代低级烷基或金刚烷基；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供了预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了包含式I的化合物和药学上可接受的赋形剂的组合物。
发明详述
定义
本文所用的单数形式(“a”或“an”)的实体是指一个或多个该实体；例如，化合物(acompound)是指一种或多种化合物或至少一种化合物。就此而言，术语的单数形式(“a”或“an”)、“一种或多种”和“至少一种”在本文中可互换使用。
如本说明书中所用的那样，不管是在连接短语中还是在权利要求中，术语“包含/包括”应被解释为具有开放的含义。即，该术语应被解释为与“至少具有”或“至少包括”同义。当用于方法的上下文中时，术语“包括”意指该方法至少包括所列举的步骤，但也可以包括另外的步骤。当用于化合物或组合物的上下文中时，术语“包含/包括”意指该化合物或组合物至少包括所列举的特征或组分，但是也可以包括其他特征或组分。
除非另外清楚说明，否则本文所用的措辞“或”是以“和/或”的“非排他性”含义而非“两者择一”的“排他性”含义进行应用的。
本文所用的术语“独立地”是指一个变量可用于任何一种情形而不考虑在相同的化合物中是否存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R"出现两次并且被定义为“独立地是碳或氮”的化合物中，两个R"可以均是碳、两个R"可以均是氮，或者一个R"可以是碳并且另一个是氮。
当任何变量在描绘和描述本发明所用的或所要求保护的化合物的任何部分或式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义与其在每一其它出现时的定义是独立的。此外，只有当该化合物产生稳定的化合物时，取代基和/或变量的组合才是允许的。
在键的末端的符号“*”或穿过键的符号“------”各自是指官能团或其它化学部分与包含其作为一部分的分子的其余部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4w其he中r或
画到环系内的键(与连接到明确的顶点的键不同)表示该键可以连接在任何适宜的环原子上。
本文中使用的术语“任选的”或“任选地”表示随后所述的事件或情况可以但不是必需发生，并且该表述包括其中事件或情况发生的情形和其中它不发生的情形。例如，“任选被取代的”表示该任选被取代的部分可以掺入氢原子或取代基。
如果取代基被指定为“不存在”，则没有该取代基。
本文所用的术语“约”用来表示近似地、在一定区域内、大约或左右。当术语“约”与数值范围一起使用时，其通过使边界由所给出的数值向上和和向下扩展来对该范围进行修改。通常，本文所用的术语“约”在数值上以20％的偏离值向上和向下修改所述的数值。
某些化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可相互转化的物质的形式存在。质子转移互变异构体源于两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮形式占优势；而在酚中，烯醇形式占优势。常见的质子转移互变异构体包括酮/烯醇酰胺/亚胺酸和脒互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中特别常见，本发明包含化合物的所有互变异构形式。
除非另外定义，否则本文中使用的技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员通常所理解的含义。可以参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。解释药理学基本原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis ofTherapeutics,第10版,McGraw Hill Companies Inc.,纽约(2001)。可以用本领域技术人员已知的任何适宜材料和/或方法来实施本发明。然而，对优选的材料和方法进行了描述。除非特别说明，否则在以下描述和实施例中所提到的材料、试剂等可以得自商业来源。
可对本文所述的定义进行附加从而形成化学相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”在另一个术语后用作后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，其意指被一至两个选自具体指明的其它基团的取代基取代的如上面所定义的烷基。因此，例如，“苯基烷基”是指具有一至两个苯基取代基的烷基，因此包括苄基、苯基乙基和联苯基。“烷基氨基烷基”是具有一至两个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基”包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2,3-二羟基丁基、2-(羟基甲基)、3-羟基丙基等。因此，如本文所用的那样，术语“羟基烷基”用来定义下面所定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未被取代的烷基或芳烷基。术语(杂)芳基是指芳基或杂芳基。
本文所用的术语“羰基”或“酰基”是指式-C(＝O)R的基团，其中R是氢或如本文所定义的低级烷基。
本文所用的术语“酯”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R是本文所定义的低级烷基。
本文所用的术语“烷基”表示包含1至10个碳原子的、无支链或有支链的饱和单价烃基。术语“低级烷基”表示包含1至6个碳原子的直链或支链烃基。本文所用的“C1-10烷基”是指由1至10个碳组成的烷基。烷基的实例非限制性地包括低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”在另一个术语后用作后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，其意指被一至两个选自具体指明的其它基团的取代基取代的如上面所定义的烷基。因此，例如，“苯基烷基”表示基团R'R"-，其中R'是苯基，R"是如本文所定义的亚烷基，应当清楚的是，该苯基烷基的连接点将位于亚烷基上。芳基烷基的实例非限制性地包括苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或“芳烷基”具有类似解释，只是R'是芳基。术语“(杂)芳基烷基”或“(杂)芳烷基”具有类似解释，只是R'任选地是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代低级烷基”或“低级卤代烷基”是指其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代的包含1至6个碳原子的直链或支链烃基。
除非特别说明，否则本文所用的术语“亚烷基”表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如，(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如，-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)。除亚甲基外，亚烷基的开放价键不连接在同一个原子上。亚烷基的实例非限制性地包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1,1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
本文所用的术语“烷氧基”意指其中烷基如上面所定义的-O-烷基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。本文所用的“低级烷氧基”表示具有如前面所定义的“低级烷基”的烷氧基。本文所用的“C1-10烷氧基”是指其中烷基是C1-10的-O-烷基。
术语“卤代烷氧基”或“卤代低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代的低级烷氧基。
本文所用的术语“羟基烷基”表示其中一至三个位于不同碳原子上的氢原子被羟基替代的如本文所定义的烷基。
本文所用的术语“亚磺酰基”表示-SO-基团。
本文所用的术语“磺酰基”表示-SO2-基团。
本文所用的术语“烷基磺酰基”和“芳基磺酰基”是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基并且烷基和芳基如本文所定义。本文所用的术语“杂烷基磺酰基”表示其中R是本文所定义的“杂烷基”的式-S(＝O)2R的基团。
本文所用的术语“低级烷基氨基磺酰基”是指式-S(＝O)2NR2的基团，其中R各自独立地是氢或C1-3烷基，且低级烷基如本文所定义。
本文所用的术语“三氟甲基磺酰基”是指式-S(＝O)2CF3的基团。
本文所用的术语“三氟甲基亚磺酰基”是指式-S(＝O)CF3的基团。
本文所用的术语“三氟甲基硫烷基”是指式-SCF3的基团。
本文所用的术语“硝基”是指式–N+(＝O)O-的基团。
本文所用的术语“羧基”是指式-C(＝O)R2的基团，其中R各自独立地是氢或C1-3烷基，且低级烷基如本文所定义。
术语“环烷基”是指3至10个环碳原子的一价的饱和的单环或二环烃基。在具体的实施方案中，环烷基是指3至8个环碳原子的一价的饱和的单环烃基。二环意指由共有一个或多个碳原子的两个饱和的碳环组成。具体的环烷基为单环的。单环环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。二环环烷基的实例为二环[2.2.1]庚烷基或二环[2.2.2]辛烷基。
本文所用的术语“氨基”表示式-NR’R”的基团，其中R’和R”独立地是氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。或者，R’和R”与它们所连接的氮原子一起可以形成杂环烷基。术语“伯氨基”是指其中R’和R”均是氢的基团。术语“仲氨基”是指其中R’是氢且R”不是氢的基团。术语“叔氨基”是指其中R’和R”均不是氢的基团。具体的仲胺和叔胺是甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、苯胺、苄胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺和二异丙胺。
本文所用的术语“酰氨基”表示式–C(＝O)NR’R”或–NR’C(＝O)R”的基团，其中R’和R”独立地是氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。
术语“杂芳基”是指5至12个环原子的一价的芳族的杂环的单-或二环环系统，其包含1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子，剩余的环原子是碳。杂芳基的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、唑基、噻唑基、三唑基、二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、氮杂基、二氮杂基、异唑基、苯并呋喃基、异噻唑基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并异唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基或喹喔啉基。
术语“杂环烷基”是指3至9个环原子的一价的饱和的或部分不饱和的单-或二环环系统，其包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，剩余的环原子是碳。在具体的实施方案中，杂环烷基是4至7个环原子的一价的饱和的单环环系统，其包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，剩余的环原子是碳。单环饱和的杂环烷基的实例是吖丙啶基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢-噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、唑烷基、异唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、1,1-二氧代-硫吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基或氧杂氮杂环庚烷基。二环饱和的杂环烷基的实例是8-氮杂-二环[3.2.1]辛基、奎宁环基、8-氧杂-3-氮杂-二环[3.2.1]辛基、9-氮杂-二环[3.3.1]壬基、3-氧杂-9-氮杂-二环[3.3.1]壬基或3-硫杂-9-氮杂-二环[3.3.1]壬基。部分不饱和的杂环烷基的实例是二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢-唑基、四氢-吡啶基或二氢吡喃基。
HCV进入的抑制剂
本申请提供了式I的化合物
A是不饱和的或部分不饱和的单环或二环的杂芳基或单环或螺环的杂环烷基；
各R1独立地是卤素、卤代低级烷基或低级烷基磺酰基；
m是0、1或2；
各R2独立地是卤素、低级烷氧基、氧代、氨基、低级烷基、C(＝O)OR2’,S(＝O)2R2’、S(＝O)2NHR2’、羟基低级烷基、C(＝O)NHR2’或C(＝O)R2’；
n是0、1或2；且
R2’是低级烷基、卤代低级烷基或金刚烷基；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供了式I的化合物，其中m是1。
本申请提供了式I的化合物，其中m是2。
本申请提供了式I的化合物，其中一个R1是卤素并且另一个是卤代低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中m是2且一个R1是卤素并且另一个是卤代低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中两个R1是卤素。
本申请提供了式I的化合物，其中m是2并且两个R1是卤素。
本申请提供了以上的式I的化合物中的任何一种，其中n是0。
本申请可选择地提供以上的式I的化合物中的任何一种，其中n是1。
本申请可选择地提供以上的式I的化合物中的任何一种，其中n是2。
本申请提供了以上的式I的化合物中的任何一种，其中A是吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、三唑基、四唑基、哌嗪基、2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷、氮杂环丁基、噻吩基或吡唑基。
本申请提供了以上的式I的化合物中的任何一种，其中R2是卤素、低级烷氧基、氧代、氨基、低级烷基、C(＝O)OR2’、S(＝O)2R2’、S(＝O)2NHR2’、羟基低级烷基、C(＝O)NHR2’或C(＝O)R2’。
本申请提供了以上的式I的化合物中的任何一种，其中R2’是低级烷基或卤代低级烷基。
本申请提供了选自以下的化合物：
N3-[3,5-二氯-4-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(5-甲磺酰基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮；
N3-[4-(6-氨基-吡啶-3-基)-3,5-二氯-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[4-(2-氨基-嘧啶-5-基)-3,5-二氯-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮；
N-{5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-吡啶-2-基}-甲磺酰胺；
N5-[3-氟-4-(6-氟-吡啶-3-基)-5-三氟甲基-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N5-(3-氟-4-吡啶-3-基-5-三氟甲基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(6-甲磺酰基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
6-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯；
N3-(3-氯-4-哒嗪-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3-氯-4-(2-甲基-2H-[1,2,4]三唑-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(3,5-二氯-4-吡唑-1-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯；
N3-[3,5-二氯-4-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯；
N3-[3-氯-4-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)-5-三氟甲基-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N5-(3,5-二氯-4-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N-{3-氯-4-[6-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶-3-基]-5-三氟甲基-苯基}-4H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺；
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺；
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺；
N3-[2-氯-4'-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-三氟甲基-联苯-4-基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(3-氯-4-哒嗪-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-苯基]-1H-吡啶-2-酮；
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮；
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮；
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-甲酸甲基酰胺；
N3-(3,5-二氯-4-哒嗪-4-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
1-{3-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-噻吩-2-基}-乙酮；
N3-(3,5-二氯-4-吡啶-4-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(5-氯-噻吩-2-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(3,5-二氯-4-吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(1H-吡唑-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-(3,5-二氯-4-嘧啶-5-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；
N3-[3,5-二氯-4-(5-氯-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺；和
N3-[3,5-二氯-4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺.
本申请提供了预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法，其还包括向有需要的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供了治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用抑制HCV的复制的抗病毒剂的组合。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合。
本申请提供了以上方法，其中免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合，其中抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂或其任何组合。
本申请提供了包含式I的化合物和药学上可接受的赋形剂的组合物。
本申请提供了式I的化合物在制备用于预防HCV的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗HCV的药物中的用途。
本申请提供了如本文所述的任何化合物、组合物、方法或用途。
化合物
在下表中提供了本发明所包括的并在本发明范围内的代表性化合物的实例。以下所提供的这些实施例和制备例使得本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。不应将它们理解为对本发明范围的限制，它们仅仅是本发明的说明性和代表性的实例。
本申请所用的命名法通常是基于AUTONOMTM 4.0版，一种用于生成IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机化系统。如果所画的结构和对结构给出的命名存在不一致时，以所画的结构为准。此外，如果结构或结构的一部分的立体化学未用例如粗线或虚线指明时，结构或结构的一部分应理解为包括其所有的立体异构体。
表I描述了通式I的化合物的一些实例。
表I.
合成
通用流程
以下流程描述了获得式I的化合物的通用方法。
剂量和施用:
本发明化合物可以配制在多种口服施用剂型和载体中。口服施用可以是片剂、包衣片、糖衣剂(dragées)、硬和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂、糖浆或混悬剂形式的。本发明化合物在通过其它施用途径施用时也是有效的，包括连续(静脉内滴注)、局部、胃肠外、肌内、静脉内、皮下、经皮(可以含有渗透增强剂)、颊、鼻、吸入和栓剂施用，以及其他施用途径。优选的施用方式通常是采用方便的日施用方案的口服方式，其可以根据疾病程度和患者对活性成分的响应来调节。
本发明化合物以及它们的药学上可接受的盐与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可以被制成药物组合物和单位剂量的形式。该药物组合物和单位剂型可以包含常规比例的常规成分，可以含有或不含另外的活性化合物或成分，并且单位剂型可以含有任何适宜的与所采用的预期日剂量范围相称的有效量的活性成分。该药物组合物可以以如下形式应用：用于口服使用的固体，如片剂或填充胶囊、半固体、散剂、缓释制剂，或液体，例如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂或填充胶囊；或者供直肠或阴道施用的栓剂；或者供胃肠外使用的无菌可注射溶液。典型的制剂含有约5％至约95％的活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂，本领域技术人员可以理解，根据靶器官或组织和所需的剂量以及药代动力学参数，活性成分可以存在于不同的制剂中。
本文所用的术语“赋形剂”是指可用于制备药物组合物的化合物，其通常是安全无毒的，既非生物学也非其它方面所不期望的，并且包括对于兽医学用途以及人类药用而言可接受的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但是通常与一种或多种根据预期施用途径和标准药学实践选择的适宜药用赋形剂、稀释剂或载体一起施用。
“药学上可接受的”是指可以用于制备药用组合物的，通常是安全、无毒的并且既非生物学也非其它方面所不期望的，并且包括对于兽用和人类药用可接受的。
活性成分的“药学上可接受的盐”形式还可以最初赋予活性成分其非盐形式所不存在的所需药代动力学性质，并且甚至可以就其体内治疗活性而言积极地影响活性成分的药效学。措辞化合物的“药学上可接受的盐”表示药学上可接受的、并且具备母体化合物的所需药理活性的盐。此类盐包括：(1)与无机酸或有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；所述有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或者(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代时形成的盐；或者当与有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位时形成的盐。
固体形式制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种还可以作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料的物质。在散剂中，载体通常为微粉化的固体，其是与微粉化的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常与具有所需粘合能力的载体按适宜比例混合并被压制成所需的形状和大小。适宜的载体非限制性地包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除活性组分外，固体形式的制剂还可以包含着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
液体制剂也适宜于口服施用，包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液剂、含水混悬剂。它们包括意欲在临用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以在溶液(例如丙二醇水溶液)中制备，或者可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液剂可以通过将活性组分溶于水中并加入适宜的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。含水混悬剂可以通过将微粉化的活性组分分散在具有粘性材料的水中来制备，所述粘性材料如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它众所周知的助悬剂。
本发明化合物可以被配制用于胃肠外施用(例如通过注射，例如推注或连续输注)，并且可以以在安瓿、预填充注射器、小体积输液或添加有防腐剂的多剂量容器中的单位剂型存在。该组合物可以采取诸如位于油性或水性溶媒中的混悬液、溶液或乳剂的形式，例如位于含水聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，并且可含有制剂用物质，如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以为通过无菌分装被灭菌的固体或者通过将溶液冷冻干燥而得的、用于在临用前用适宜的溶媒如无菌无热原的水进行重构的粉末形式。
本发明化合物可以配制成局部施用于表皮的形式如软膏剂、霜剂或洗剂或者经皮贴剂。软膏和霜剂可以例如采用加有适当的增稠剂和/或凝胶剂的水性或油性基质配制。洗剂可以采用水性或油性基质制备，并且通常还包含一或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适用于在口腔内局部施用的制剂包括在矫味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中含有活性成分的锭剂；在惰性基质(如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中含有活性成分的软锭剂；在适当的液体载体中含有活性成分的漱口剂。
本发明的化合物还可被制备成以栓剂形式进行施用。首先，将低熔点蜡(如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂)熔化并将活性成分通过例如搅拌均匀分散。然后将熔化的均匀混合物倾至适宜大小的模具中，冷却并固化。
本发明的化合物可以制备成用于阴道施用的形式。除活性成分以外还含有本领域已知的载体的阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂是适宜的。
本发明化合物可以制成鼻腔施用的形式。溶液剂或混悬剂可以通过常规方法直接应用于鼻腔，例如，采用滴管、吸管或喷雾的形式。该制剂可以是单剂量或多剂量形式。在滴管或吸管的情况下，可以通过给予患者适当的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾剂的情况下，这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。
本发明化合物可以配制用于气雾剂施用，特别是应用于呼吸道，包括鼻腔内施用。该化合物通常具有小的粒度，例如5微米或更小的粒度。该粒度可以用本领域已知的方法获得，例如用微粉化获得。活性成分可以在含有适当抛射剂的加压容器中提供，所述抛射剂如氯氟烃类(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或二氧化碳或其它适宜的气体。气雾剂也可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以用计量阀控制。或者，活性成分可以以干粉的形式提供，例如所述化合物在适当的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂型存在，例如位于例如明胶胶囊或药筒或者泡罩包装中，粉末可以从其中通过吸入器进行施用。
当需要时，可以采用适用于活性成分缓释或控释施用的肠包衣材料制备制剂。例如，可以将本发明化合物配制到经皮或皮下药物递送装置中。当需要缓释化合物并且患者对治疗方案的依从性至关重要时，这些递送系统是有利的。经皮递送系统中的化合物通常附着在皮肤粘着性固体支撑物上。也可以将感兴趣的化合物与渗透促进剂例如氮酮(1-十二基氮杂环庚烷-2-酮)合用。可以通过手术或注射将缓释递送系统皮下插入到皮下层。皮下植入物将化合物包封在脂溶性膜例如硅橡胶或者生物可降解聚合物如聚乳酸中。
在Remington：The Science and Practice of Pharmacy 1995.E.W.Martin编辑,Mack Publishing Company,第19版,Easton,Pennsylvania中对适宜的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂进行了描述。制剂领域技术人员可以在说明书的教导范围内改变制剂，从而提供大量用于特定施用途径且不会使得本发明的组合物不稳定或者损害它们的治疗活性的制剂。
为了使本发明化合物在水或其它溶媒中具有更大的溶解性而对其进行的修饰例如可以容易地通过较小的修饰(成盐、酯化等)来完成，这些完全在本领域的普通技能范围内。同样完全在本领域普通技能范围内的是改变特定化合物的施用途径和剂量方案以便控制本发明化合物的药代动力学，从而在患者中达到最大的有益效果。
本文所用的术语“治疗有效量”是指减轻个体疾病症状所需的量。剂量在各具体病例中可以根据个体需要进行调节。该剂量可以在较宽范围内根据各种因素进行改变，例如所治疗疾病的严重性、患者的年龄与一般健康状况、正用于治疗患者的其它药物、施用途径和形式以及参与的医务人员的偏爱与经验。就口服施用而言，在单一疗法和/或在组合疗法中，约0.01至约1000mg/kg体重/天的日剂量应当是适当的。优选的日剂量为约0.1至约500mg/kg体重/天，更优选为0.1至约100mg/kg体重/天，最优选1.0至约10mg/kg体重/天。因而，对于70kg的人的施用而言，剂量范围将为约7mg至0.7g/天。日剂量可以以单一剂量或者分剂量(通常每天1至5次剂量)形式进行施用。一般而言，以低于化合物的最佳剂量的较小剂量开始治疗。然后，以较小增量逐渐增加剂量，直至达到个体患者的最佳效果。普通技术人员在治疗本文所述疾病时，无需过多的实验，根据个人的知识、经验以及本申请的公开内容即能够确定本发明化合物对于特定疾病和患者而言的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂型。在该类形式中，制剂被细分为包含适宜量活性组分的单位剂量。该单位剂型可以是被包装的制剂、包含离散量制剂的包装，如被包装的片剂、胶囊和位于小瓶或安瓿中的散剂。单位剂型也可以是胶囊、片剂、扁囊或锭剂本身，或者其可以是适宜数量的包装形式的这些制剂中的任何一种。
适应症和治疗方法
适应症
本申请提供了预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法，其还包括向有需要的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供了治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合。
本申请提供了以上方法，其中免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合，其中抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂或其任何组合。
组合治疗
本发明的化合物及其异构形式和药学上可接受的盐可单独或者与靶向于病毒或HCV生命周期中涉及的细胞元件或功能的其它化合物组合用于治疗和预防HCV感染。可用于本发明中的化合物类别非限制性地包括HCV抗病毒剂的所有类别。
对于组合治疗而言，可用于与本发明化合物组合使用的活性剂的机理类别包括例如HCV聚合酶的核苷和非-核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、解旋酶抑制剂、NS4B抑制剂、NS5A抑制剂和功能性抑制内部核糖体进入位点(IRES)的药学活性剂以及抑制HCV细胞附着或病毒进入、HCV RNA翻译、HCV RNA转录、复制或HCV成熟、装配或病毒释放的其它药物。这些类别中的可用于本发明的具体化合物非限制性地包括大环、杂环和线型HCV蛋白酶抑制剂如特拉普韦(telaprevir)(VX-950)、波西普韦(boceprevir)(SCH-503034)、纳拉普韦(narlaprevir)(SCH-900518)、ITMN-191(R-7227)、TMC-435350(a.k.a.TMC-435)、MK-7009、BI-201335、BI-2061(西鲁普韦(ciluprevir))、BMS-650032、ACH-1625、ACH-1095(HCV NS4A蛋白酶辅因子抑制剂)、VX-500、VX-813、PHX-1766、PHX2054、IDX-136、IDX-316、ABT-450EP-013420(和同源物)和VBY-376；可用于本发明的核苷类HCV聚合酶(复制酶)抑制剂非限制性地包括R7128、PSI-7851、IDX-184、IDX-102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938和PSI-879以及各种其它核苷和核苷类似物和HCV抑制剂，包括(但不限于)以2'-C-甲基修饰的核苷(酸)、4'-氮杂修饰的核苷(酸)和7'-去氮杂修饰的核苷(酸)形式衍生出来的那些。可用于本发明的非核苷类HCV聚合酶(复制酶)抑制剂非限制性地包括HCV-796、HCV-371、VCH-759、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、GL-59728和GL-60667。
此外，本发明化合物还可以与下列物质组合：环菲林(cyclophyllin)和亲免素(immunophyllin)拮抗剂(例如但不限于，DEBIO化合物、NM-811以及环孢菌素及其衍生物)、激酶抑制剂、热休克蛋白(例如，HSP90和HSP70)抑制剂、其它免疫调节剂，非限制性地包括干扰素(-α、-β、-ω、-γ、-λ或合成的)如Intron A、Roferon-A、Canferon-A300、Advaferon、Infergen、Humoferon、Sumiferon MP、Alfaferone、IFN-β、Feron等；聚乙二醇衍生的(PEG化)干扰素化合物，如PEG干扰素-α-2a(Pegasys)、PEG干扰素-α-2b(PEGIntron)、PEG化IFN-α-con1等；干扰素化合物的长效制剂和衍生物如白蛋白-融合的干扰素、Albuferon、Locteron等；使用各类受控递送系统的干扰素(例如，ITCA-638，由DUROS皮下递送系统递送的ω-干扰素)；刺激细胞中干扰素合成的化合物，如瑞喹莫德(resiquimod)等；白介素类；增强1型辅助T细胞响应的化合物，如SCV-07等；TOLL-样受体激动剂如CpG-10101(actilon)、isotorabine、ANA773等；胸腺素α-1；ANA-245和ANA-246；组胺二盐酸盐；丙帕锗(propagermanium)；tetrachlorodecaoxide；安普利近(ampligen)；IMP-321；KRN-7000；抗体,如civacir、XTL-6865等以及预防和治疗性疫苗如InnoVac C、HCV E1E2/MF59等。此外，可通过施用有效量TNF-α拮抗剂来增强涉及施用NS5A抑制剂、I型干扰素受体激动剂(例如，IFN-α)和II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)的上述方法中的任何一种。适用于该类组合治疗的非限制的TNF-α拮抗剂的例子包括ENBREL、REMICADE和HUMIRA。
此外，本发明化合物也可与抗原虫药和认为可有效治疗HCV感染的其它抗病毒剂、例如但不限于前药硝唑尼特联用。硝唑尼特可以以与本发明公开的化合物组合的活性剂以及与用于治疗HCV感染的其它活性剂如聚乙二醇干扰素α-2a和利巴韦林组合的活性剂的形式进行应用。
本发明化合物还可以与下列物质一起使用：干扰素和PEG化干扰素的其它形式、利巴韦林或其类似物(例如，tarabavarin、levoviron)、微小RNA、小干扰RNA化合物(例如，SIRPLEX-140-N等)、核苷酸或核苷类似物、免疫球蛋白、肝脏保护剂、抗炎剂和其它NS5A抑制剂。HCV生命周期的其它靶点的抑制剂包括NS3解旋酶抑制剂；NS4A辅因子抑制剂；反义寡核苷酸抑制剂,如ISIS-14803、AVI-4065等；载体编码的短发卡RNA(shRNA)；HCV特异性核糖酶如heptazyme、RPI、13919等；进入抑制剂如HepeX-C、HuMax-HepC等；α葡糖苷酶抑制剂如西戈斯韦、UT-231B等；KPE-02003002和BIVN 401以及IMPDH抑制剂。其它示例性HCV抑制剂化合物包括在下面公开物中公开的那些化合物:US专利号5,807,876；6,498,178；6,344,465和6,054,472；PCT专利申请公开号WO97/40028；WO98/40381；WO00/56331,WO02/04425；WO03/007945；WO03/010141；WO03/000254；WO01/32153；WO00/06529；WO00/18231；WO00/10573；WO00/13708；WO01/85172；WO03/037893；WO03/037894；WO03/037895；WO02/100851；WO02/100846；WO99/01582；WO00/09543；WO02/18369；WO98/17679,WO00/056331；WO98/22496；WO99/07734；WO05/073216、WO05/073195和WO08/021927。
此外，例如利巴韦林和干扰素的组合可以以与至少一种本发明化合物一起使用的多重组合治疗的形式进行施用。本发明并不限于上述类别的化合物，而且考虑已知的和新的化合物、以及生物活性剂的组合。本发明的组合治疗还包括本发明化合物与本发明其它化合物或除本发明化合物外的其它化合物的任何化学可相容的组合，只要该组合不会消除本发明化合物的抗病毒活性或该药物组合物本身的抗病毒活性即可。
组合治疗可以是顺序进行的，即首先用一种活性剂来进行治疗，然后使用第二种活性剂来进行治疗(例如，在各治疗包含不同本发明化合物的情况中，或者在一种治疗包含本发明化合物而另一种治疗包含一种或多种生物学活性剂的情况中)，或者，可以同时用两种活性剂来进行治疗(同时的)。顺序治疗在第一种治疗结束后、第二种治疗开始前，可以包括一段合理的时间。用两种活性剂同时进行治疗可以以相同的日剂量或分开的剂量进行。组合治疗不限于两种活性剂，可以包括三种或更多种活性剂。用于同时或顺序组合治疗的剂量都将取决于组合治疗组分的吸收、分布、代谢和排泄速率以及本领域技术人员已知的其它因素。剂量值还将根据所缓解疾患的严重程度来变化。应进一步理解的是，对于任何特定个体而言，可以根据个体的需要和施用该组合治疗或监督该组合治疗的施用的本领域技术人员的判断，随着时间的进行调整具体的剂量方案和时间表。
本申请提供了预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法，其还包括向有需要的患者施用治疗有效量的免疫系统抑制剂。
本申请提供了治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合。
本申请提供了以上方法，其中免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。
本申请提供了以上方法中的任何一种，其还包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或其组合，其中抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂或其任何组合。
实施例
缩写
常用的缩写包括:乙酰基(Ac)、偶氮二异丁腈(AIBN)、大气压(Atm)、9-硼杂二环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(BINAP)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或boc酐(BOC2O)、苄基(Bn)、丁基(Bu)、化学文摘登记号(CASRN)、苄氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)、三氟化二乙基氨基硫(DAST)、二亚苄基丙酮(dba)、1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)、氢化二-异丁基铝(DIBAL或DIBAL-H)、二-异丙基乙基胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、1,1'-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、乙基(Et)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et2O)、乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐乙酸(HATU)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高压液相色谱法(HPLC)、异丙醇(IPA)、异丙基氯化镁(iPrMgCl)、六甲基二硅烷胺(HMDS)、液相色谱-质谱(LCMS)、六甲基二硅烷胺化锂(LiHMDS)、间-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO2-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间-氯过苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)、正丁基锂(nBuLi)、N-羧基酐(NCA)、N-氯琥珀酰亚胺(NCS)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、吡啶氯铬酸盐(PCC)、二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁基)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)、乙酸钯(II)(Pd(OAc)2)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)、吡啶重铬酸盐(PDC)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅/平方英寸(psi)、吡啶(pyr)、1,2,3,4,5-五苯基-1'-(二-叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)、室温(环境温度、rt或RT)、仲-丁基锂(sBuLi)、叔丁基二甲基硅基或t-BuMe2Si(TBDMS)、氟化四正丁基铵(TBAF)、三乙胺(TEA或Et3N)、2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)、三氟甲磺酸基或CF3SO2-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、1,1'-双-2,2,6,6-四甲基庚烷-2,6-二酮(TMHD)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、薄层色谱法(TLC)、四氢呋喃(THF)、三甲基硅基或Me3Si(TMS)、对-甲苯磺酸单水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)和N-尿烷-N-羧基酐(UNCA)。当与烷基一起使用时，包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo)在内的常规命名法具有其常规含义。(J.Rigaudy和D.P.Klesney,有机化学命名法(Nomenclature in Organic Chemistry),IUPAC1979Pergamon Press,牛津大学)。
通用条件
本发明化合物可以用下面实施例部分所述的说明性合成反应中所述的多种方法来进行制备。
在制备这些化合物时所用的起始材料和试剂通常可容易地从供应商如AldrichChemical Co.获得，或者按照文献中所述的操作用本领域技术人员已知的方法来进行制备，所述文献如Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis；Wiley&Sons:纽约,1991,第1-15卷；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds,Elsevier SciencePublishers,1989,第1-5卷和增刊；和Organic Reactions,Wiley&Sons:纽约,1991,第1-40卷。应当意识到，在实施例部分所示的合成反应流程仅是可由其合成本发明化合物的一些方法的示例，可以对这些合成反应流程进行各种修改，参阅本申请包含的公开内容的本领域技术人员将能意识到这些修改。
如果需要，可以用常规技术对合成反应流程的起始材料和中间体进行分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。可以用包括物理常数和光谱数据在内的常规手段对该类物质进行鉴定。
除非特别作出相反说明，否则本文所述的反应通常是在惰性气氛下、在大气压下、在约-78℃至约150℃，通常约0℃至约125℃，更通常和方便地在约室温(或环境温度)，例如约20℃的反应温度下进行的。
本发明化合物上的各种取代基可以存在于起始化合物中、被加入到任何一种中间体上或者在终产物形成后用已知的取代方法或转化反应加入。如果取代基本身有反应性，则可以用本领域已知的技术对取代基本身进行保护。各种保护基团是现有技术中已知的，且都可以被使用。在“有机合成中的保护基团(Protective Groups in OrganicSynthesis)”，Green等,John Wiley和Sons,1999中可以找到许多可能基团的实例。例如，可以通过硝化来引入硝基，并且硝基可被转换成其它基团，例如通过还原被转换成氨基，通过氨基的重氮化和用卤素替代重氮基来引入卤素。可以通过Friedel-Crafts酰化来引入酰基。然后，可以用各种方法将酰基转换成相应的烷基，所述方法包括Wolff-Kishner还原和Clemmenson还原。可以将氨基烷基化从而形成单-和二-烷基氨基；可以将巯基和羟基烷基化，从而形成相应的醚。可以用本领域已知的氧化剂对伯醇进行氧化从而形成羧酸或醛，并且可以将仲醇氧化形成酮。因此，可以用取代或变更反应来在包括分离产物在内的起始材料、中间体或终产物分子中提供各种取代基。
制备实施例
中间体1
方案1
N*3*-(4-溴-3-氯-5-三氟甲基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(中间体1)
2-溴-1-氯-5-异硫氰酸基-3-(三氟甲基)苯
在0下，向4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯胺(15g,54.7mmol,Eq:1.00)的二氯甲烷(13.2g,10.0ml,155mmol,Eq:25.3)的混悬液，加入1,1'-硫代羰基二咪唑(11.7g,65.6mmol,Eq:1.2)。将反应逐渐升温至室温并搅拌过夜。将反应浓缩并色谱分离(220gRedisep,5至15％二氯甲烷/己烷)，得到13.84g(80％)淡黄色油状物。
(Z)-S-甲基-N-4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基-N'-氰基异硫脲
向2-溴-1-氯-5-异硫氰酸基-3-(三氟甲基)苯(13.84g,43.7mmol,Eq:1.00)的二甲氧基乙烷(100mL)溶液中加入氰胺一钠(3.36g,52.5mmol,Eq:1.2)和甲醇(10mL)。30分钟后，将甲基碘(15.9g,7ml,112mmol,Eq:2.56)加入到所述红紫色溶液中并将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干并溶解在～50mL乙腈中。加入100mL水得到白色沉淀。过滤白色固体，用水冲洗并空气-干燥o/n，得到16.0g(99％)的白色固体。
N*3*-(4-溴-3-氯-5-三氟甲基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(中间体1)
在500mL的圆底烧瓶中，将(Z)-S-甲基-N-4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基-N'-氰基异硫脲(1.45g,3.89mmol,Eq:1.00)与乙醇(15ml)合并得到白色混悬液。加入肼(1.25g,1.22ml,38.9mmol,Eq:10)并将反应混合物加热至70℃并搅拌3h。将反应冷却并在振摇下将水(～40mL)加入到反应中。将得到的混悬液过滤，用水洗涤并在45C下真空干燥箱干燥过周末。得到的白色固体为期望产物(1.12g,81％产率)。从母液中收集另一样品，为粉色固体(148mg,～90纯度,9.6％产率)
MS m/z 356[M+H]
中间体2
方案1
N*3*-(4-溴-3,5-二氯-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(中间体2)
(Z)-S-甲基-N-4-溴-3,5-二氯苯基-N'-氰基异硫脲
将甲醇钠溶液(2.6ml,1.3mmol,Eq:1.23)加入氰胺(50mg,1.19mmol,Eq:1.12)并在室温下搅拌15分钟，将2-溴-1,3-二氯-5-异硫氰酸基苯(300mg,1.06mmol,Eq:1.00)加入到反应混合物并搅拌1hr。加入碘甲烷(331mg,146μl,2.33mmol,Eq:2.2)并在室温下将淡黄色溶液搅拌过夜。将得到的混悬液过滤并空气干燥，得到154mg(43％)的期望产物，为浅棕色固体。
N*3*-(4-溴-3,5-二氯-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(中间体2)
将(Z)-S-甲基-N-4-溴-3,5-二氯苯基-N'-氰基异硫脲(154mg,454μmol,Eq:1.00)和肼(153mg,150μl,4.78mmol,Eq:10.5)的乙醇(5mL)溶液在65℃下加热。3hr后，LCMS鉴定没有原料。冷却至rt并搅拌溶液历经周末。将反应混合物浓缩并色谱分离(11g Supelco,0至10％MeOH/CH2Cl2)，得到80mg(55％)的期望产物，为类白色固体。
1H NMR(300MHz,DMSO)□:11.35(s,1H),9.33(s,1H),7.75(s,2H),6.05(s,2H)ppm
中间体3
方案1
N5-(4-溴-3-氟-5-三氟甲基苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺(中间体3)
2-溴-1-氟-5-异硫氰酸基-3-三氟甲基苯
将4-溴-3-氟-5-三氟甲基苯胺(4.22g,16.4mmol,Eq:1.00)和碳酸钙(3.44g,1.17ml,34.3mmol,Eq:2.1)混悬在50％二氯甲烷的水混合物(20ml)中。在0℃下，将稠的混悬液剧烈搅拌。缓慢滴加硫光气(2.07g,1.38ml,18.0mmol,Eq:1.1)到混合物中。滴加后，在0℃下，将混合物搅拌1.5hr然后在室温下搅拌过夜。将固体过滤并将滤液用二氯甲烷萃取。将合并的有机相用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥和在真空下浓缩，获得4.71g(96％)的预期物质，为浅棕色固体。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)ppm 7.84(s,1H)7.96(dd,J＝9.06,2.27Hz,1H)
(4-溴-3-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-(甲基-□4硫烷亚基)-甲基-氰胺
将2-溴-1-氟-5-异硫氰酸基-3-三氟甲基苯(4.71g,15.7mmol,Eq:1.00)溶解在中无水甲醇(30ml)中。加入氰胺一钠(1.00g,15.7mmol,Eq:1)并将反应在环境温度下搅拌1hr。滴加甲基碘(4.46g,1.96ml,31.4mmol,Eq:2)并将反应在环境温度下搅拌过夜。将浅棕色混悬液过滤，获得1.91g(34％)的期望产物，为粉色固体。
MS+m/z:357.7.(M+1)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)□ppm 2.78(s,3H)7.87(s,1H)7.97(dd,J＝1.00Hz,1H)10.38(br.s,1H)
N5-(4-溴-3-氟-5-三氟甲基苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺(中间体3)的制备
将肼(1.71g,53.4mmol,Eq:10)加入到搅拌的(4-溴-3-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-(甲基-□4硫烷亚基)-甲基-氰胺(1.9g,5.34mmol,Eq:1.00)的乙醇(30ml)混悬液中。将混合物加热至70℃反应1hr。将反应混合物浓缩至减少的体积(～5ml)并在搅拌的同时加入水(～10ml)。将混悬液搅拌30min。过滤沉淀并用水(～50ml)洗涤，然后在高真空、70℃下干燥2小时，过滤获得1.73g(95％)的期望产物，为淡粉色固体。
MS+m/z:339.9.(M+1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)□ppm 6.03(s,2H)7.81(s,1H)7.86(d,J＝12.13Hz,1H)9.52(s,1H)11.40(s,1H)
N*3*-[3,5-二氯-4-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物1)
3,5-二氯-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯胺
将含有4-溴-3,5-二氯苯胺(250mg,1.04mmol,Eq:1.00)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(206mg,1.35mmol,Eq:1.3)、碳酸钠(275mg,2.59mmol,Eq:2.5)和(双(三苯基膦)二氯化钯(II)(42.0mg,59.8μmol,Eq:0.0577)的微波小瓶用氩气脱气15min。加入二甲氧基乙烷(4mL)和水(1mL)并将反应用微波在115度下加热30min。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。将有机萃取液用硫酸钠干燥并色谱分离(40g Redisep,100％己烷至10％乙酸乙酯/己烷)，得到206mg(74％)的期望产物，为无色油状物。
5-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-2-甲氧基吡啶
在0度下，向碳酸钙(192mg,1.92mmol,Eq:2.51)和硫光气(105mg,70μl,913μmol,Eq:1.19)的二氯甲烷(10.0ml)/水(10.0ml)混悬液中,加入3,5-二氯-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯胺(206mg,765μmol,Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温并搅拌过夜。缓慢地加入24mL1N HCl。分离有机层并用硫酸钠干燥，得到186mg(78％)的期望产物，为淡黄色油状物。
N-((3,5-二氯-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯基氨基)(甲硫基)甲基)氰胺
向5-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-2-甲氧基吡啶(186mg,598μmol,Eq:1.00)的MeOH(5mL)溶液中，加入氰胺一钠(48mg,750μmol,Eq:1.25)。30分钟后，加入甲基碘(170mg,75μl,1.2mmol,Eq:2.01)并将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩并色谱分离(24gRedisep,10至40％乙酸乙酯/己烷)，得到131mg(60％)的期望产物，为白色固体。
N*3*-[3,5-二氯-4-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物1)
向N-((3,5-二氯-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯基氨基)(甲硫基)甲基)氰胺(131mg,355μmol,Eq:1.00)的乙醇(5mL)溶液中加入肼(123mg,120μl,3.82mmol,Eq:10.8)。将反应混合物在60度下加热o/n。将得到的混悬液过滤得到80mg的期望产物，为白色固体。随时间推移滤液沉淀，过滤得到另外的49mg的白色固体，总共129mg(100％)。
MS m/z 351[M+H]
N*3*-[3,5-二氯-4-(5-甲磺酰基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物2)
将含有N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(100mg,310μmol,Eq:1.00)、5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基硼酸(98mg,488μmol,Eq:1.57)、碳酸钠(85mg,802μmol,Eq:2.59)和Pd(Ph3P)4(38mg,32.9μmol,Eq:0.106)的微波小瓶用氩气脱气15分钟。加入二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，并将混悬液超声脱气5分钟，并将反应用微波在125°下加热1hr。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并色谱分离(24gSupelco,0至10％MeOH/DCM)，得到20mg的期望产物，为黄色固体。MS m/z 399[M+H]
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物3)
在密闭管中，将N3-(3,5-二氯-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺化合物1(95mg,271μmol,Eq:1.00)和HBr(231mg,155μl,1.37mmol,Eq:5.06)的AcOH(5mL)溶液在100度下加热2天。将反应混合物小心地倾入冰NaHCO3中，用乙酸乙酯萃取，并用硫酸钠干燥，得到42mg(46％)的期望产物，为类白色固体。
MS m/z 337[M+H]
N*3*-[4-(6-氨基-吡啶-3-基)-3,5-二氯-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物4)
将含有N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(100mg,310μmol,Eq:1.00)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺(104mg,473μmol,Eq:1.53)、碳酸钠(92mg,868μmol,Eq:2.8)和Pd(Ph3P)4(58mg,50.2μmol,Eq:0.162)的微波小瓶用氩气脱气15分钟。加入二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，并将混悬液超声脱气5分钟，并将反应用微波在125°下加热1hr。将反应浓缩，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并通过制备薄层色谱法(10％MeOH/DCM)纯化，得到26mg(25％)的期望产物，为淡黄色固体。
MS m/z 336[M+H]
N*3*-[4-(2-氨基-嘧啶-5-基)-3,5-二氯-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物5)
将含有N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(100mg,310μmol,Eq:1.00)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)嘧啶-2-胺(108mg,489μmol,Eq:1.58)、碳酸钠(88mg,830μmol,Eq:2.68)和Pd(Ph3P)4(49mg,42.4μmol,Eq:0.137)的微波小瓶用氩气脱气15分钟。加入二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，并将混悬液超声脱气5分钟，并将反应用微波在125°下加热1.5hr。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并色谱分离(11g Supelco,0至10％MeOH/DCM)，得到9.5mg(9％)的期望产物，为淡黄色固体。
MS m/z 337[M+H]
N3-(3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物6)
向N-((3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基氨基)(甲硫基)甲基)氰胺(192mg,520μmol,Eq:1.00)的乙醇(7mL)溶液中加入肼(184mg,180μl,5.74mmol,Eq:11.0)。将反应混合物在60度下加热o/n。将反应浓缩并色谱分离(23g Supelco,0至10％MeOH/DCM)，得到126mg(69％)的期望产物，为白色固体。
3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯胺
将含有4-溴-3,5-二氯苯胺(350mg,1.45mmol,Eq:1.00)、2-甲氧基吡啶-4-基硼酸(289mg,1.89mmol,Eq:1.3)、碳酸钠(394mg,3.72mmol,Eq:2.56)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(65mg,92.6μmol,Eq:0.0637)的微波小瓶用氩气脱气15min。加入DME(8mL)和水(2mL)并将反应用微波在115度下加热30min。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并色谱分离(40g Redisep,100％至10％乙酸乙酯/己烷)，得到254mg(65％)的期望产物，为无色油状物。
4-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-2-甲氧基吡啶
在0度下，向碳酸钙(264mg,2.64mmol,Eq:2.79)和硫光气(135mg,90μl,1.17mmol,Eq:1.24)的二氯甲烷(10.0mL)/水(10.0mL)混悬液中加入3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯胺(254mg,944μmol,Eq:1.00)。将反应逐渐升温至室温并搅拌过夜。缓慢地加入2.5mL1N HCl。分离有机层并用硫酸钠干燥，得到240mg(82％)的期望产物，为淡黄色油状物。
N-((3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基氨基)(甲硫基)甲基)氰胺
向4-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-2-甲氧基吡啶(240mg,771μmol,Eq:1.00)的MeOH(6mL)溶液中加入氰胺一钠(61.9mg,967μmol,Eq:1.25)。30分钟后，加入甲基碘(227mg,100μl,1.6mmol,Eq:2.07)并将反应在室温下搅拌过夜。将得到的混悬液过滤，得到94mg的期望产物，为白色固体。将滤液浓缩并色谱分离(24g Redisep,10至40％乙酸乙酯/己烷)，得到另外的98mg的期望产物，为类白色固体，产物总共为192mg(68％)。
N3-(3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物6)
向N-((3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基氨基)(甲硫基)甲基)氰胺(192mg,520μmol,Eq:1.00)的乙醇(7mL)溶液中加入肼(184mg,180μl,5.74mmol,Eq:11.0)。将反应混合物在60度下加热o/n。将反应浓缩并色谱分离(23g Supelco,0至10％MeOH/DCM)，得到126mg(69％)的期望产物，为白色固体。
MS m/z 352[M+H]
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物7)
5/910am在密闭管中，将N3-(3,5-二氯-4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺化合物6(126mg,359μmol,Eq:1.00)和HBr(298mg,200μl,1.77mmol,Eq:4.93)的AcOH(5mL)溶液在100度下加热2d。将反应混合物小心地倾入冰NaHCO3，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，得到64mg(53％)的期望产物，为类白色固体。
MS m/z 337[M+H]
N-{5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-吡啶-2-基}-甲磺酰胺(化合物8)
N-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)甲磺酰胺
在0度下，向5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺(500mg,2.27mmol,Eq:1.00)和吡啶(538mg,550μl,6.8mmol,Eq:2.99)的DCM(10mL)溶液中加入Ms-Cl(323mg,220μl,2.82mmol,Eq:1.24)。将反应混合物逐渐升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，用1N HCl洗涤，并用硫酸钠干燥，得到118mg(17％)的白色固体，含有期望产物和杂质。
N-{5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-吡啶-2-基}-甲磺酰胺
将含有N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺化合物7(100mg,310μmol,Eq:1.00)、N-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)甲磺酰胺(118mg,396μmol,Eq:1.28)、碳酸钠(82.0mg,774μmol,Eq:2.5)和Pd(Ph3P)4(42mg,36.3μmol,Eq:0.117)的微波小瓶用氩气脱气15分钟。加入二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，并将混悬液超声脱气5分钟，并将反应用微波在125°下加热1.5hr。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并色谱分离(24g Redisep,0至10％MeOH/DCM)，得到含有产物和杂质的棕色固体。将固体用MeOH/DCM研磨，得到30mg(24％)的期望产物，为浅棕色固体。
MS m/z 414[M+H]
N5-(3-氟-4-(6-氟吡啶-3-基)-5-三氟甲基苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺(化合物9)
向15mL微波小瓶中，加入N5-(4-溴-3-氟-5-三氟甲基苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺中间体3(50mg,147μmol,Eq:1.00)、6-氟吡啶-3-基硼酸(31.1mg,221μmol,Eq:1.5)和氢氧化钠(735μl,735μmol,Eq:5)的DME(1.5ml)混合物。加入Pd(Ph3P)4(8.49mg,7.35μmol,Eq:0.05)，将混合物用氩气冲洗，将小瓶盖上并在微波、120℃下加热30分钟。将反应混合物用二氯甲烷稀释，通过硅藻土过滤并真空浓缩。将残留物溶取在MeOH中，通过4微米的过滤器过滤并将粗物质通过制备HPLC(20％ACN:0.3％TFA的水溶液至100％ACN)纯化，获得11mg(20％)的期望产物，为白色固体。
MS+m/z:357.0.(M+1)
N5-(3-氟-4-(吡啶-3-基)-5-三氟甲基苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺(化合物10)
除了用吡啶-3-硼酸替代6-氟吡啶-3-基硼酸以外，采用类似化合物8的方法制备，获得5mg(7％)的预期物质，为白色固体。
MS+m/z:339.0.(M+1)
N5-(3,5-二氯-4-(6-甲磺酰基-吡啶-3-基)-苯基)-1H-[1,2,4]-三唑-3,5-二胺(化合物11)
向15mL微波小瓶中，加入N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(201mg,622μmol,Eq:1.00)、6-(甲基磺酰基)吡啶-3-基硼酸(125mg,622μmol,Eq:1.00)和Cs2CO3(608mg,1.87mmol,Eq:3)的正丁醇(3.00ml)和水(600μl)溶液。加入PdCl2(DPPF)(50.8mg,62.2μmol,Eq:0.1)，将混合物用氩气冲洗，将小瓶盖上并用微波在135℃下加热30分钟。将混合物用二氯甲烷稀释，加入Na2SO4并通过硅藻土过滤。将滤液溶取在甲醇中，过滤并浓缩。将粗物质通过制备HPLC(0.1％TFA的水溶液/0.1％TFA的AcCN溶液)纯化。95％至10％历经25分钟，获得13mg(5％)的预期物质，为白色固体。
MS+m/z:398.9/400.8.(M+1)
6-[4-(5-氨基-2H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(化合物12)
6-(2,6-二氯-4-硝基苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
在50mL圆底烧瓶中，将1,3-二氯-2-氟-5-硝基苯(467mg,2.22mmol,Eq:1.00)、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(529mg,2.67mmol,Eq:1.2)和Cs2CO3(1.81g,5.56mmol,Eq:2.5)与DMF(10ml)合并得到黄色混悬液。将混合物加热至90℃并在氩气下搅拌18小时。TLC显示完全转化。冷却并将反应混合物用H2O和EtOAc稀释。将水层用EtOAc(2x40ml)洗涤。将有机层合并，用H2O(2x 25mL)、盐水(1x 25mL)洗涤,用Na2SO4干燥并在真空下浓缩，以定量的产率获得期望产物，为亮黄色粉末。
MS-m/z:386.9/389.0.(M-1)
6-(4-氨基-2,6-二氯苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
在50mL圆底烧瓶中，将6-(2,6-二氯-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(700mg,1.8mmol,Eq:1.00)和甲酸铵(955mg,15.1mmol,Eq:8.4)与甲醇(100ml)和水(15ml)合并得到黄色混悬液。加入锌(495mg,7.57mmol,Eq:4.2)并将混悬液在25℃下搅拌18小时。另外加入甲酸铵(1.02g,16.2mmol,Eq:9)和锌(472mg,7.21mmol,Eq:4)以及甲醇(50ml)和水(10ml)并将黄色混悬液在25℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤并将该滤饼用甲醇洗涤。将滤液真空下浓缩。将粗物质用热EtOAc研磨，过滤并剥脱(stripped)。将暗黄色滤液在真空下剥脱并将粗物质通过快速色谱法纯化(硅胶,80g,0％至30％EtOAc的庚烷溶液)。将暗黄色油状物在真空25C下干燥过夜，获得399mg(62％)的期望产物，为黄色结晶固体。
MS+m/z:358/360.(M+1)
6-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基-苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
将6-(4-氨基-2,6-二氯苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(137mg,382μmol,Eq:1.00)和碳酸钙(80.4mg,803μmol,Eq:2.1)混悬在50％二氯甲烷的水混合物(3ml)中。在25℃下，滴加硫光气(48.4mg,32.2μL,421μmol,Eq:1.1)到混合物中。加入后，将混合物在25℃下搅拌22小时。将反应过滤并将滤饼用二氯甲烷洗涤。将滤液分离并将水层用二氯甲烷萃取。将有机层用Na2SO4干燥并在真空下浓缩，得到黄色晶状固体。该粗物质不需要进一步纯化即使用。
6-(2,6-二氯-4-(氰氨基(甲硫基)亚甲基氨基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
在250mL圆底烧瓶中，将6-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(153mg,382μmol,Eq:1.00)与甲醇(2ml)合并得到黄色混悬液。加入氰胺化钠(26.9mg,420μmol,Eq:1.1)并将反应在25℃、氩气下搅拌1.5小时。加入甲基碘(65.1mg,28.7μl,459μmol,Eq:1.2)并将反应混合物在25℃、氩气下搅拌17小时。将反应混合物在真空下浓缩并不需要进一步纯化即使用。
MS+m/z:457/459.(M+1)
6-[4-(5-氨基-2H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基]-2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(化合物12)
在50mL圆底烧瓶中，将6-(2,6-二氯-4-(氰氨基(甲硫基)亚甲基氨基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(174mg,381μmol,Eq:1.00)与乙醇(3ml)合并得到黄色溶液。加入肼一水合物(191mg,185μl,3.81mmol,Eq:10)并将反应混合物加热至70℃并搅拌1.5小时。将粗反应混合物在真空下浓缩并将残留物用水稀释并搅拌过夜。将固体过滤并用MeOH研磨。将混悬液过滤并将滤液浓缩。将粗物质通过制备HPLC(0.1％TFA的水溶液/0.1％TFA的AcCN溶液)纯化。95％至10％历经25mins。将洁净的流分收集，用3滴的1M NaOH碱化并真空下剥脱得到白色粉末。将粉末过滤并用水洗涤除去盐。将洁净的产物在真空、45℃下干燥，获得13.5mg(8％)的期望产物，为白色固体。
MS+m/z:440.0/441.9.(M+1)
{3-氨基甲基-1-[4-(5-氨基-2H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基]-氮杂环丁-3-基}-甲醇(化合物13)
在100mL圆底烧瓶中，将6-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯化合物11(21mg,47.7μmol,Eq:1.00)与二氯甲烷(2ml)、甲醇(0.5ml)和TFA(1.5ml)合并，得到粉色溶液。将反应在25℃下搅拌3天。将反应在真空下浓缩并将残留物通过制备HPLC(0.1％TFA的水溶液/0.1％TFA的AcCN溶液)纯化。95％至10％历经16mins。将无色玻璃状物在真空45℃下干燥，获得2.3mg(14％)的期望产物，为白色固体。
MS-m/z:356/358(M-1)
N3-(3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物14)
3-氯-4-哒嗪-3-基-苯基胺
在250mL圆底烧瓶中，将3-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯胺(950mg,3.75mmol,Eq:1.00)、3-氯哒嗪(437mg,3.82mmol,Eq:1.02)和四(三苯基膦)钯(0)(437mg,378μmol,Eq:0.101)与甲苯(38.0mL)合并得到棕色溶液。加入2.0M碳酸钠水溶液(7.6ml,15.2mmol,Eq:4.06)和乙醇(7.6mL)。将反应混合物在115℃下搅拌5小时。
将反应混合物冷却至室温，并将其在室温下搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)之间分配。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤，然后用硅胶浓缩。将硅胶载有的粗产物装载在115克硅胶柱(Analogix)上。快速色谱法(70％乙酸乙酯的己烷溶液)得到3-氯-4-哒嗪-3-基-苯基胺(700mg,90％)，其含有作为少量杂质的三苯基膦氧化物。
3-(2-氯-4-异硫氰酸基-苯基)-哒嗪
在1L圆底烧瓶中，将3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯胺(0.7g,3.4mmol,Eq:1.00)和1,1’-硫代羰基二咪唑(700mg,3.93mmol,Eq:1.15)与二氯甲烷(20mL)合并得到棕色溶液。将混合物在室温下搅拌22小时。将反应混合物在硅胶上浓缩。将硅胶载有的粗产物装载自115gAnalogix柱上。快速色谱法(50％乙酸乙酯-己烷)提供3-(2-氯-4-异硫氰酸基-苯基)-哒嗪(400mg,47％)，为白色晶状固体。
(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基-N'-氰基异硫脲
在50mL梨形烧瓶中，将氰胺(204mg,4.84mmol,Eq:3.0)和0.5M甲醇钠的甲醇溶液(4.84mL,2.42mmol,Eq:1.5)与甲醇(6.5mL)合并得到无色溶液。将混合物在室温下搅拌15分钟。这段时间后，将混合物滴加到3-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)哒嗪(400mg,1.61mmol,Eq:1.00)和6.5mL甲醇的混悬液中。在加入氰胺-甲醇钠混合物后，该混悬液快速变为微黄色溶液。将该混合物在室温下搅拌1小时。此后，加入碘甲烷(344mg,151μl,2.42mmol,Eq:1.5)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。早晨，黄色沉淀出现。将反应混合物过滤，并将收集的固体用少量的甲醇洗涤。进一步在布氏漏斗上干燥后，将该固体收集。当母液产生黄色沉淀时，得到第二部分产物。合并两产物得到(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基-N'-氰基异硫脲(229mg,46％)，为黄色粉末。
N3-(3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物14)
在50mL圆底烧瓶中，将(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基-N'-氰基异硫脲(229mg,754μmol,Eq:1.00)和肼(245mg,240μl,7.64mmol,Eq:10.1)与乙醇(7.5ml)合并得到黄色混悬液。搅拌大约10分钟后，几乎所有的起始原料溶解，得到黄色液体。将反应混合物在85℃下加热。仅仅15分钟加热后，反应混合物再次为黄色混悬液。将反应在85℃下加热总共5小时。将反应混合物冷却至室温，并使用真空过滤将沉淀收集，获得N3-(3-氯-4-(哒嗪-3-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(153mg,71％)，为黄色粉末。C12H10ClN7[(M+H)]的MS计算值:288,观察值：288.0.
N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物15)
2-氯-N-甲基-4-硝基-苯甲酰胺
在500mL的圆底烧瓶中，将2-氯-4-硝基苯甲酸(5.0g,24.8mmol,Eq:1.00)和亚硫酰氯(40.8g,25ml,343mmol,Eq:13.8)合并得到白色混悬液。将混合物在无溶剂情况下(neat)回流4小时。此后，将反应混合物在旋转蒸发器上浓缩。将粗产物与45mL二氯甲烷合并并使用冰-水浴冷却至0℃。加入甲胺盐酸盐(2.01g,29.8mmol)，然后加入N,N-二异丙基乙基胺(8.66mL,49.6mmol)。将反应混合物搅拌并随着冰浴逐渐融化升温至室温。将反应混合物搅拌过夜反应16小时。此后，将反应混合物用水然后盐水洗涤。将有机相用MgSO4干燥，过滤，并浓缩获得2-氯-N-甲基-4-硝基-苯甲酰胺(258mg,63％)，为黄色固体。粗产物不需要进一步纯化用于下一步骤。
5-(2-氯-4-硝基-苯基)-1-甲基-1H-四唑
在500mL的圆底烧瓶中，将2-氯-N-甲基-4-硝基-苯甲酰胺(6.31g,29.4mmol)和亚硫酰氯(5.25g,3.22ml,44.1mmol,Eq:1.5)与甲苯(200mL)合并。将得到的混合物回流过夜。早晨，将混合物冷却至室温，并将混合物在室温下搅拌历经周末。将反应混合物在旋转蒸发器上浓缩。然后将粗残留物与另外的20mL甲苯合并，并再次浓缩。将来自上述的粗产物和40mL乙腈的混合物加入0℃的叠氮基三甲基硅烷(5.44ml,41.2mmol,Eq:1.4)的乙腈(80mL)混合物中。将反应混合物在0℃下搅拌2小时，然后升温至室温。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，并将残留物在二氯甲烷和水之间分配。将有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并用硅胶浓缩。将硅胶载有的粗产物装载在220克analogix柱上。快速色谱法(45％乙酸乙酯-己烷)提供5-(2-氯-4-硝基-苯基)-1-甲基-1H-四唑(4.14g,59％)，为黄色晶状固体。
3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-苯基胺
在100mL圆底烧瓶中，将5-(2-氯-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-四唑(0.6g,2.5mmol,Eq:1.00)、铁(700mg,12.5mmol,Eq:5.01)和氯化铵(1.34g,25.0mmol,Eq:10.00)与甲醇(6.7ml)合并得到灰色混悬液。加入水(3.3mL)。将反应混合物在75℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，然后浓缩。将粗产物在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间分配。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，获得3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-苯基胺(490mg,93％)，为无色油状物。该粗产物不需要其他纯化即用于下一步骤。
5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-四唑
在500mL的圆底烧瓶中，将3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯胺(490mg,2.34mmol,Eq:1.00)和1,1’-硫代羰基二咪唑(480mg,2.69mmol,Eq:1.15)与二氯甲烷(20ml)合并得到淡棕色混悬液。在氩气球下将反应混合物在室温下搅拌历经周末。将反应混合物用硅胶浓缩，并将硅胶载有的粗产物装载在115克Analogix柱上。快速色谱法(40％乙酸乙酯-己烷)提供5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-四唑(334mg,57％)，为无色膜状物。
(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基-N'-氰基异硫脲
在250mL梨形烧瓶中，将0.5M的甲醇钠的甲醇溶液(4.0mL,2.00mmol,Eq:1.51)和氰胺(167mg,3.98mmol,Eq:3.0)与甲醇(13mL)合并得到无色溶液。将混合物在室温下搅拌15分钟。然后将混合物滴加到5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-四唑(334mg,1.33mmol,Eq:1.00)和13mL甲醇的混合物中。将得到的混合物在室温下搅拌1小时。此后，加入甲基碘(284mg,125μl,2.00mmol,Eq:1.51)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。早晨，形成白色沉淀。将该产物用真空下过滤收集，得到(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基-N'-氰基异硫脲(258mg,63％)，为白色粉末。
N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物15)
在100mL圆底烧瓶中，将(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基-N'-氰基异硫脲(258mg,838μmol,Eq:1.00)和肼(265μL,8.43mmol,Eq:10.1)与乙醇(8.5mL)合并。将反应混合物回流3小时。此后，将反应混合物冷却至室温，然后在室温下搅拌过夜。早晨，白色沉淀出现在溶液中，得到稠白色的混悬液。将沉淀通过真空过滤收集，得到N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺。C10H10ClN9的MS计算值[(M+H)]:292,观察值：292.0.
N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5二胺(化合物16)
2-氯-N-[1-二甲基氨基-甲-(Z)-亚基]-4-硝基-苯甲酰胺
在500mL圆底烧瓶中，将2-氯-4-硝基苯甲酰胺(3.5g,17.4mmol,Eq:1.00)和N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(23mL,173mmol,Eq:9.92)合并得到类白色混悬液。将该混合物在130℃下加热过夜。早晨，将溶剂蒸发，得到2-氯-N-[1-二甲基氨基-甲-(Z)-亚基]-4-硝基-苯甲酰胺，为黄色固体。该粗产物不需要进一步纯化即用于随后的步骤。
5-(2-氯-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑
在500mL的圆底烧瓶中，将(Z)-2-氯-N-((二甲基氨基)亚甲基)-4-硝基苯甲酰胺(2.0g,7.82mmol,Eq:1.00)和甲基肼(5.35mL,102mmol,Eq:13)与冰醋酸(90mL)合并得到类白色混悬液。将反应混合物在90℃下加热1.5小时。此后，将反应混合物冷却至大约50℃，并随后在旋转蒸发器上浓缩。将粗产物在乙酸乙酯和饱和的NaHCO3水溶液之间分配。将有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将该粗产物用快速色谱法(120克Analogix柱,15-35％乙酸乙酯-己烷)纯化，得到5-(2-氯-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(481mg,26％)，为黄色固体。
3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯胺
在250mL圆底烧瓶中，将5-(2-氯-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(481mg,2.02mmol,Eq:1.00)、铁(113mg,2.02mmol,Eq:1.00)和氯化铵(108mg,2.02mmol,Eq:1.00)与甲醇(5.4mL)合并得到棕色混悬液。加入水(2.7mL)。将反应混合物在85℃下加热。仅仅15分钟后，反应混合物已变为锈色的混悬液。将反应混合物在85℃下搅拌3小时。此后，TLC显示一些起始原料仍旧存在。将反应混合物冷却至室温。加入另外的铁(108mg铁,1.93mmol)和氯化铵(113mg,2.11mmol)。将反应混合物再加热1小时，然后冷却至室温。将反应混合物在室温下搅拌过夜。此后，TLC显示该反应完全。将混合物浓缩，并将残留物在乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠水溶液之间分配。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩获得3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯胺，为黄色油状物。
5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑
在1L圆底烧瓶中，将3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯胺(421mg,2.02mmol,Eq:1.00)和1,1’-硫代羰基二咪唑(414mg,2.32mmol,Eq:1.15)与二氯甲烷(20.2mL)合并得到棕色混悬液。将该反应混合物在室温下搅拌历经周末。将反应混合物用硅胶浓缩。将硅胶载有的粗产物装载在120克硅胶柱上。快速色谱法(35％乙酸乙酯-己烷)提供5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(280mg,55％)。
(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基-N'-氰基异硫脲
在10mL梨形烧瓶中，将0.5M甲醇钠的甲醇溶液(840μL,420μmol,Eq:1.5)与氰胺(35.0mg,833μmol,Eq:2.98)合并得到无色溶液。将该混合物在室温下搅拌15分钟。此后，将混合物加入到11mL甲醇和5-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(70mg,279μmol,Eq:1.00)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入甲基碘(104μL,1.68mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。早晨，反应混合物为澄清无色溶液。溶剂在不加热条件下蒸发，留存1mL的甲醇。将该混合物用二氯甲烷(10mL)稀释。在加入二氯甲烷后，反应混合物变浑浊。将该稀释的反应混合物用硅胶在稍微加热条件下浓缩。将硅胶载有的粗产物装载在25克硅胶柱上。快速色谱法(80％-100％乙酸乙酯-己烷)提供(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基-N'-氰基-异硫脲(28mg,33％)，为白色固体。
N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物16)
在10mL圆底烧瓶中，将(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基-N'-氰基-异硫脲(28mg,91.3μmol,Eq:1.00)和肼(30.6mg,30μL,955μmol,Eq:10.5)与乙醇(1mL)合并得到无色溶液。将反应混合物在75℃下加热数小时。将反应混合物浓缩，获得N3-(3-氯-4-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(23mg,87％)，为白色粉末。C11H11ClN8[(M+H)]的MS计算值:291,观察值：291.0.
N3-(3,5-二氯-4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物17)
1-(2,6-二氯-4-硝基-苯基)-1H-吡唑
在250mL的圆底烧瓶中，将1,3-二氯-2-氟-5-硝基苯(1.5g,7.14mmol,Eq:1.00)、1H-吡唑(486mg,7.14mmol,Eq:1.00)和碳酸钾(1.5g,10.9mmol,Eq:1.52)与DMF(30mL)合并得到黄色混悬液。将该混合物在115℃下加热3小时。将反应混合物冷却至室温。将冷却的混合物倾入～100mL冰水中。乳色固体沉淀出来。将沉淀通过真空过滤收集并空气干燥，获得1-(2,6-二氯-4-硝基-苯基)-1H-吡唑(1.73g,94％)，为类白色固体。
3,5-二氯-4-吡唑-1-基-苯基胺
在250mL的圆底烧瓶中，将1-(2,6-二氯-4-硝基苯基)-1H-吡唑(1.73g,6.7mmol,Eq:1.00)、铁(1.80g,32.2mmol,Eq:4.81)和氯化铵(3.6g,67.3mmol,Eq:10.0)与甲醇(18mL)合并得到灰色混悬液。加入水(9mL)。将反应混合物在85℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温，然后在乙酸乙酯和饱和的氯化铵水溶液之间分配。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤，并且最后浓缩，获得3,5-二氯-4-吡唑-1-基-苯基胺(1.29g,84％)，为米黄色固体。
1-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基-苯基)-1H-吡唑
在1L圆底烧瓶中，将3,5-二氯-4-(1H-吡唑-1-基)苯胺(1.5g,6.58mmol,Eq:1.00)和1,1'-硫代二羰基咪唑(1.30g,7.29mmol,Eq:1.11)与二氯甲烷(50mL)合并得到淡黄色混悬液。将反应混合物在室温下搅拌24小时。将反应混合物用硅胶浓缩，并将硅胶载有的粗产物装载在120克硅胶柱上。快速色谱法(15％乙酸乙酯-己烷)提供1-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基-苯基)-1H-吡唑(886mg,50％)，为淡黄色油状物。
(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-1-基)-苯基-N'-氰基异硫脲
在100mL圆底烧瓶中，将氰胺(75mg,1.78mmol,Eq:3.01)和0.5M甲醇钠的甲醇溶液(1.77mL,886μmol,Eq:1.5)合并得到无色溶液。将混合物在室温下搅拌15分钟。此后，快速滴加氰胺混合物到1-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-1H-吡唑(160mg,592μmol,Eq:1.00)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌1小时。最后，加入碘甲烷(126mg,55.6μL,888μmol,Eq:1.5)。将反应混合物用10mL的二氯甲烷稀释并经硅藻土浓缩。将硅藻土载有的粗产物装载在40克硅胶柱上。快速色谱法(15％-75％乙酸乙酯-己烷)提供(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-1-基)-苯基-N'-氰基异硫脲(62mg,32％)，为白色固体。
N3-(3,5-二氯-4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物17)
在25mL的圆底烧瓶中，将(Z)-S-甲基-N-3-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-1-基)-苯基-N'-氰基异硫脲(62mg,190μmol,Eq:1.00)和肼(61.2mg,60μl,1.91mmol,Eq:10.1)与乙醇(1.5ml)合并得到无色溶液。将混合物回流16小时。将反应混合物浓缩，并再次溶解在10％乙醇-二氯甲烷溶液中。将混合物过滤并将滤液浓缩。将产物进一步在真空干燥箱中在～75℃下干燥，得到N3-(3,5-二氯-4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(58mg,99％)为淡棕色粉末。C11H9Cl2N7[(M+H)]的MS计算值:311,观察值.311.8.
4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(化合物18)
4-(4-氨基-2,6-二氯-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
在密闭管中，将1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基硼酸(450mg,1.98mmol,Eq:0.955)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(150mg,205μmol,Eq:0.0988)和4-溴-3,5-二氯苯胺(0.5g,2.08mmol,Eq:1.00)与DMF(7mL)合并得到暗红色混悬液。加入碳酸钾(860mg,6.22mmol,Eq:3.00)。将反应混合物在115℃下加热过夜。将反应混合物与水合并，然后将暗色混悬液用乙酸乙酯萃取。将有机相干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩为黑色油状物。将该产物溶解在CH2Cl2中并将混合物通过硅胶浓缩。将硅胶硅胶载有的粗产物装载在80克的硅胶柱上。快速色谱法(5％-20％乙酸乙酯-己烷)得到4-(4-氨基-2,6-二氯-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.267g,38％)，为淡黄色油状物。
4-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
在100mL圆底烧瓶中，将4-(4-氨基-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.229g,667μmol,Eq:1.00)和1,1'-硫代羰基二咪唑(140mg,786μmol,Eq:1.18)与二氯甲烷(4mL)合并得到棕色混悬液。将反应混合物在室温下历经周末搅拌。将反应通过硅胶浓缩。将硅胶载有的粗产物装载在80克的SiliCycle柱上。快速色谱法提供4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(216mg,84％)，为黄色油状物。
(Z)-4-(2,6-二氯-4-(氰氨基(甲硫基)亚甲基-氨基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
在100mL圆底烧瓶中，将氰胺(70mg,1.67mmol,Eq:2.98)和0.5M甲醇钠的甲醇溶液(1.7mL,850μmol,Eq:1.52)合并，得到无色溶液。将混合物在室温下搅拌15分钟。此后，加入4-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.215g,558μmol,Eq:1.00)的甲醇(5.6mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。最后，加入甲基碘(118mg,52.0μL,832μmol,Eq:1.49)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物经硅藻土直接浓缩。将将硅藻土载有的粗产物装载在40克SiliCycle柱上。快速色谱法(30％-65％乙酸乙酯-己烷)提供(Z)-4-(2,6-二氯-4-(氰氨基(甲硫基)亚甲基-氨基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(33mg,13％)，为无色油状物。
4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(化合物18)
在50mL梨形烧瓶中，将(Z)-4-(2,6-二氯-4-(氰氨基(甲硫基)亚甲基-氨基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(33mg,74.8μmol,Eq:1.00)和肼(24.5mg,24μL,765μmol,Eq:10.2)与乙醇(1mL)合并得到无色溶液。将反应混合物在75℃下加热2.5小时。此后，LCMS显示反应完全。将反应混合物浓缩获得油状物。将该产物再次溶解在CDCl3和CD3OD中。再次蒸发溶剂获得4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(22mg,69％)，为类白色油性固体。MS[(M+H)+]观察值.425.0.
N3-(3,5-二氯-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物19)
在5mL小瓶中，将4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯化合物17(16mg,37.6μmol,Eq:1.00)和4.0M HCl的二氧六环溶液(250μL,1.00mmol,Eq:26.6)与二氯甲烷(250μL)合并得到浅棕色混悬液。将反应混合物在室温下持续搅拌3小时。然后将混合物在乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间分配。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩获得N3-(3,5-二氯-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺，为无色油状物。MS[(M-H)-]观察值.323.1.
4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(化合物20)
4-(4-氨基-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
在250mL圆底烧瓶中，将4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯胺(2.55g,9.29mmol,Eq:1.00)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(2.76g,8.92mmol,Eq:0.96)和碳酸钾(3.85g,27.9mmol,Eq:3.0)与DMF(30mL)合并。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯甲烷络合物(1.14g,1.39mmol,Eq:0.15)。将反应混合物在125℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并倾入水中。将得到的混悬液用乙酸乙酯萃取。将有机相用MgSO4干燥，过滤，并通过硅胶浓缩。将硅胶载有的粗产物分成两份。将各份分别地在120克SiliCycle柱上使用快速色谱法(15％-40％乙酸乙酯-己烷)纯化，获得4-(4-氨基-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(2.23g,64％)，为淡黄色油状物。
4-(2-氯-4-异硫氰酸基-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
在1L圆底烧瓶中，将4-(4-氨基-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(2.23g,5.92mmol,Eq:1.00)和二(1H-咪唑-1-基)甲烷硫酮(1.2g,6.73mmol,Eq:1.14)与二氯甲烷(60mL)合并得到淡黄色溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅胶浓缩。硅胶载有的粗产物装载在120克的硅胶柱。快速色谱法(10％-20％乙酸乙酯-己烷)提供4-(2-氯-4-异硫氰酸基-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.67g,67％)，为无色油状物。
(Z)-4-(2-氯-4-(氰氨基(甲硫基)-亚甲基氨基)-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
在250mL圆底烧瓶中，将0.5M甲醇钠的甲醇溶液(7.16mL,3.58mmol,Eq:1.5)和氰胺(301mg,7.16mmol,Eq:3.0)合并得到无色溶液。将混合物在室温下搅拌20分钟。通过注射器滴加4-(2-氯-4-异硫氰酸基-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.0g,2.39mmol)的18mL甲醇溶液。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。此后，加入甲基碘(224μL,3.58mmol,Eq:1.5)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物经硅藻土浓缩。
将硅藻土载有的粗产物装载在80克的硅胶柱。快速色谱法(15％-50％乙酸乙酯-己烷提供(Z)-4-(2-氯-4-(氰氨基-(甲硫基)亚甲基氨基)-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.776g,68％)，为淡黄色油状物。
4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(化合物20)
在250mL圆底烧瓶中，将(Z)-4-(2-氯-4-(氰氨基(甲硫基)-亚甲基氨基)-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.776g,1.63mmol,Eq:1.00)和肼(524mg,513μL,16.3mmol,Eq:10)与乙醇(16mL)合并得到无色溶液。将反应混合物回流4小时，然后冷却至室温并另外搅拌3小时。此后，LC-MS分析显示有少量的起始原料和可能的中间体。继续加热另外14小时。此后，将反应冷却至室温并浓缩至粉色油状物。该粗产物从10mL的30％乙醇-二氯甲烷中沉淀出来。通过过滤分离该第一批沉淀。来自以上的母液历经周末最终固化。将这些固体用冷乙醇研磨，然后将该浆状物过滤。将收集的固体用冷乙醇洗涤，然后使用真空过滤干燥，得到第二批。将第一和第二批产物合并获得4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(183mg,24％)，为类白色固体。C19H22ClF3N6O2的MS计算值[(M+H)+]:459,观察值.459.0.
N3-[3-氯-4-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)-5-三氟甲基-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺盐酸盐(化合物21)
在20mL的梨形烧瓶中，将4-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯化合物19(20mg,43.6μmol,Eq:1.00)和4M氢氯酸的二氧六环溶液(500μL,2.00mmol,Eq:45.9)与二氧六环(500μL)合并得到无色溶液。仅数分钟后，油性固体在反应烧瓶底部沉淀。将反应混合物在室温下搅拌5小时。此后，将反应混合物在不搅拌情况下放置。将液体倾析，在烧瓶中仅得到油性固体。将该产物溶解在甲醇中然后转移到小瓶中，并浓缩，获得N3-[3-氯-4-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)-5-三氟甲基-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺盐酸盐。C14H14ClF3N6的MS计算值[(M+H)+]:359,观察值.359.0.
N*3*-(3,5-二氯-4-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物22)
4-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-3,5-二氯苯胺
将2,6-二氯-4-硝基-苯甲醛(105mg,0.48mmol)和2-肼基吡啶(57mg,0.52mmol)的CH3OH溶液加热至50℃反应3小时，然后，在减压下除去所有的挥发物。将得到的固体混悬在THF(5mL)中并加入氯胺-T(164mg,0.67mmol)得到深紫红色的反应混合物，将其加热至50℃持续1小时。再次除去所有挥发物，并通过硅胶色谱法(EtOAc)分离预期的产物3-(2,6-二氯-4-硝基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶(120mg,81％)，为橙色固体。
将3-(2,6-二氯-4-硝基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶(105mg,0.34mmol)在1:1THF:饱和的NH4Cl(4mL)的混合物中的溶液用锌粉(67mg；1.0mmol)处理并将反应混合物搅拌2小时。过滤并在减压下除去挥发物，得到粗的反应产物。通过硅胶色谱法(EtOAc)分离4-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-3,5-二氯苯胺(26mg,27％)，为黄色油状物。
N*3*-(3,5-二氯-4-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物22)
将4-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-3,5-二氯苯胺(58mg,0.28mmol)和硫代羰基二咪唑(58mg,0.21mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液搅拌过夜，然后将产物3-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶通过柱色谱法(66％EtOAc的己烷溶液)直接分离，为白色固体(37mg,55％)。
将氰胺一钠(8.4mg,0.13mmol)加入到3-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶(35mg,0.11mmol)的1:1CH3OH:CH3CN(2mL)溶液中。将反应混合物搅拌3小时后，通过TLC检测没有起始原料。然后加入碘甲烷(13.6μL；0.22mmol)并将反应混合物搅拌过夜。在减压下除去所有挥发物得到蜡状固体，通过硅胶色谱法(AcOEt)从其中纯化出(Z)-S-甲基-N-4-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-3,5-二氯苯基-N'-氰基异硫脲(29mg；71％)。
将(Z)-S-甲基-N-4-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-3,5-二氯苯基-N'-氰基异硫脲(26mg,0.069mmol)和肼(10.8L,0.34mmol)在乙醇中加热3小时，然后在减压下除去所有的挥发物。从粗产物中通过柱色谱法分离N*3*-(3,5-二氯-4-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺，为白色固体(21mg,84％)。MH+＝361.0
N*3*-{3-氯-4-[6-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶-3-基]-5-三氟甲基-苯基}-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物23)
5-溴-2-异丙基硫烷基-吡啶
向5-溴-2-氯吡啶(1.03g,5.35mmol,Eq:1)的二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入2-丙硫醇钠(3g,30.6mmol,Eq:5.71)并将得到的混合物在室温下搅拌1H。将得到的混合物倾入水(20ml)中并用二氯甲烷(3x 50ml)萃取。将合并的有机相用盐水(1x 100ml)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，得到粗的5-溴-2-异丙基硫烷基-吡啶，为黄色油状物。
5-溴-2-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶
向粗的5-溴-2-异丙基硫烷基-吡啶(1.24g,5.34mmol,Eq:1)的二氯甲烷(10ml)溶液中分5次历经15分钟加入3-氯过氧苯甲酸(4.61g,13.4mmol,Eq:2.5)。将得到的混合物在室温下搅拌30分钟，然后用1N氢氧化钠溶液(25ml)淬灭。将得到的混合物用二氯甲烷萃取(3x 50ml)并将合并的有机相用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，得到白色固体将其通过快速色谱法(Analogix Intelliflash 310,AnalogixSF15-12g柱,0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将相似的流分合并并蒸发，得到5-溴-2-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶，为白色固体(995mg,71％)。
2-(丙烷-2-磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶
向5-溴-2-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶(995mg,3.77mmol,Eq:1),4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(2.96g,11.6mmol,Eq:3.09)和乙酸钾(1.69g,17.3mmol,Eq:4.58)的二氧六环中(15mL)溶液中加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(295mg,403μmol,Eq:0.107)。在氩气气氛下，将得到的混合物加热至85℃过夜。将得到的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50ml)稀释并蒸发。将残留物溶取在乙酸乙酯(100ml)中，用盐水(100ml)洗涤并用硫酸钠干燥。将混合物过滤并向滤液中加入硅胶(～3g)。将混合物蒸发并通过快速色谱法纯化(Analogix Intelliflash,VersaPak Spherical Silica柱20-45μM,23g,10-50％乙酸乙酯/己烷)。将相似的流分合并并蒸发，得到粗的2-(丙烷-2-磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶，为淡黄色固体(1.1221g,HNMR显示54％纯度,52％)。
N*3*-{3-氯-4-[6-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶-3-基]-5-三氟甲基-苯基}-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物23)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体1(407mg,1.14mmol,Eq:1.08)、2-(异丙基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶(607mg,1.05mmol,Eq:1.00)、3M碳酸钾溶液(702μl,2.11mmol,Eq:2)、二甲氧基乙烷(2ml)p-二氧六环(2ml)和四(三苯基膦)钯(0)(277mg,240μmol,Eq:0.228)的混合物放置在微波反应管中并用氩气在超声下脱气15分钟。将该管密闭并将得到的混合物在微波反应器中加热至128℃并在该温度维持3h。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯(2mL)和水(1mL)稀释并将相分离。将水相用乙酸乙酯(3x 1mL)萃取并将合并的有机相用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。将得到的混合物过滤并蒸发，得到棕色残留物，将其用硅胶色谱分离(Analogix Intelliflash 310,RediSep硅胶24g,4-10％甲醇/二氯甲烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，并将残留物通过SFC色谱法纯化(THAR/SFC/Waters Multigram II系统，用25％甲醇/二氧化碳以70ml/mn洗脱，CYANO柱3X25cm，在220nM检测，35度和100ba反压力)，得到N*3*-{3-氯-4-[6-(丙烷-2-磺酰基)-吡啶-3-基]-5-三氟甲基-苯基}-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺，为淡黄色固体(125mg,26％)。MS+m/z:460.8(M+H)+
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺(化合物24)
2-(苄硫基)-5-溴吡啶
向苄硫醇(5.29g,5.00ml,42.6mmol,Eq:1.1)的干燥四氢呋喃(75ml)溶液中以3次历经30分钟加入氢化钠(1.41g,55.7mmol,Eq:1.44)。将得到的白色浆状物在室温下搅拌30分钟后，一次性加入2,5-二溴吡啶(9.17g,38.7mmol,Eq:1)。将得到的混合物在室温下搅拌3小时。将得到的混合物用水(75ml)淬灭并用乙醚(3x 100mL)萃取。将醚层合并，用饱和碳酸氢钠溶液(250ml)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，得到2-(苄硫基)-5-溴吡啶，为黄色油状物(10.68g)。
5-溴-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺
在冰浴中，将粗的2-(苄硫基)-5-溴吡啶(2.94g,10.5mmol,Eq:1.00)、水(30.0ml)和四氯化碳(125ml)的混合物冷却至0℃并强力地搅拌，同时将氯气缓慢地冒泡通入混合物。3分钟后，反应混合物被氯饱和并转为亮黄绿色。冒泡持续10分钟，然后在氯覆盖下再搅拌5分钟，然后通过冒泡向溶液通入氩气10分钟将混合物喷洒氯。将混合物用二氯甲烷(100ml)稀释并将相分离。将有机相用水(100ml)、饱和碳酸氢钠溶液(100ml)和盐水洗涤。将有机相用叔丁基胺(3.84g,5.56ml,52.5mmol,Eq:5)处理，并在室温下搅拌过夜。将得到的混合物用水(2x 100ml)、饱和碳酸氢钠溶液(2x 100ml)和盐水(1x 200ml)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，并将残留物通过快速色谱法(Analogix Intelliflash 310,SF15-12g柱,0-20％乙酸乙酯/己烷梯度)纯化。将相似的流分合并并蒸发，得到5-溴-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺，为淡黄色固体(565mg,18％)。
5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺
向5-溴-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺(565mg,1.93mmol,Eq:1.00),4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(1.51g,5.95mmol,Eq:3.09)和乙酸钾(866mg,8.83mmol,Eq:4.58)的二氧六环(20ml)溶液中加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(151mg,206μmol,Eq:0.107)，并在氩气气氛下，将得到的混合物加热至85℃过夜。将得到的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释并蒸发。将残留物溶取在乙酸乙酯(50ml)中，用盐水(50ml)洗涤并用硫酸钠干燥。将混合物过滤并向滤液中加入硅胶(～1.5g)。将混合物蒸发并通过快速色谱法纯化(Analogix Intelliflash,VersaPak Spherical Silica柱20-45uM,11g柱,10-50％乙酸乙酯/己烷)。将相似的流分合并并蒸发，得到粗的5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺，为类白色固体(404mg,37％纯度，23％)。
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺(化合物24)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体1(253mg,709μmol,Eq:1)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸叔丁基酰胺(635mg,709μmol,Eq:1.00)、3M碳酸钾溶液(473μl,1.42mmol,Eq:2)、二甲氧基乙烷(1.5ml)p-二氧六环(1ml)和四(三苯基膦)钯(0)(152mg,131μmol,Eq:0.185)的混合物放置在微波反应管中并用氩气在超声下脱气15分钟。将该管密闭并将得到的混合物在微波反应器中加热至128℃并维持该温度3h。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯(3mL)和水(8mL)稀释并将相分离。将水相用乙酸乙酯(3x 15mL)萃取，并将合并的有机相用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。将得到的混合物过滤并蒸发，得到棕色残留物将其在硅胶上色谱分离(AnalogixIntelliflash 310,RediSep silica24g,4-10％甲醇/二氯甲烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，并将残留物通过SFC色谱法纯化(THAR/SFC/Waters Multigram II系统，用25％甲醇/二氧化碳以70ml/mn洗脱，CANYO柱3X25cm，在220nM检测，35度和100bar反压力)，得到5-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-N-叔丁基吡啶-2-磺酰胺，为淡黄色固体(45mg,13％)。MS+m/z:489.9(M+H)+
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺(化合物25)
5-溴-吡啶-2-磺酰氯
将粗的2-(苄硫基)-5-溴吡啶(在化合物2中制备,7.74g,27.6mmol,Eq:1.00)、水(80.0ml)和四氯化碳(300ml)的混合物在冰浴下冷却至0℃并剧烈搅拌，同时将氯气缓慢冒泡通入混合物中。3分钟后，反应混合物被氯饱和并变为亮黄色。冒泡持续10分钟，然后在氯覆盖下再搅拌5分钟，然后通过将氩气冒泡通入溶液10分钟将混合物喷洒氯。将混合物用二氯甲烷(100ml)稀释并将相分离。将有机相用水(100ml)、饱和碳酸氢钠溶液(100ml)和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，得到5-溴吡啶-2-磺酰氯，为半结晶固体(4.34g,61％)。
5-溴-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺
向5-溴吡啶-2-磺酰氯(2.17g,6.34mmol,Eq:1)的干燥吡啶(10ml)溶液中加入1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-胺(806mg,6.34mmol,Eq:1)，并将得到的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物蒸发并将残留物吸收在硅胶上并通过快速色谱法纯化(Analogix Intelliflash310,Redisep Rf 40g柱,0-30％乙酸乙酯/己烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，得到5-溴-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺，为淡黄色固体(660mg,30％)。
5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺
向5-溴-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺(660mg,1.9mmol,Eq:1)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(1.49g,5.87mmol,Eq:3.09)和乙酸钾(855mg,8.71mmol,Eq:4.58)的二氧六环(20ml)溶液中加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(149mg,203μmol,Eq:0.107)，并在氩气气氛下，将得到的混合物加热至85℃过夜。将得到的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释并蒸发。将残留物溶取在乙酸乙酯(50ml)中，用盐水(50ml)洗涤并用硫酸钠干燥。将混合物过滤并向滤液中加入硅胶(～1.5g)。将混合物蒸发并通过快速色谱法纯化(AnalogixIntelliflash,RediSep Rf 24g柱,10-50％乙酸乙酯/己烷)。将相似的流分合并并蒸发，得到粗的5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺，为类白色固体(637mg,HNMR测得70％纯度,60％)。
5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺(化合物25)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体1(190mg,533μmol,Eq:1.00)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺(300mg,533μmol,Eq:1.00)、3M碳酸钾溶液(355μl,1.07mmol,Eq:2)、二甲氧基乙烷(1ml)p-二氧六环(1ml)和四(三苯基膦)钯(0)(114mg,98.5μmol,Eq:0.185)的混合物放置在微波反应管中并用氩气在超声下脱气15分钟。将该管密闭并将得到的混合物在微波反应器中加热至128℃并维持该温度3h。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯(2mL)和水(1mL)稀释并将相分离。将水相用乙酸乙酯(3x 1mL)萃取并将合并的有机相用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。将得到的混合物过滤并蒸发，得到棕色残留物，将其在硅胶上色谱分离(Analogix Intelliflash 310,RediSep硅胶24g,4-10％甲醇/二氯甲烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，并将残留物通过SFC色谱法纯化(THAR/SFC/WatersMultigram II系统，用20％甲醇/二氧化碳以70ml/mn洗脱，SILICA柱3X25cm，在220nM和35度以及100bar反压力下检测)，得到5-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-酰胺，为类白色固体(22.4mg,8％)。MS+m/z:453.9(M+H)+
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺(化合物26)
5-溴-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺
向5-溴吡啶-2-磺酰氯(在实施例3中制备的,2.17g,6.34mmol,Eq:1)的吡啶(10ml)溶液中加入1-金刚烷胺(960mg,6.34mmol,Eq:1)并将得到的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物蒸发并将残留物吸收在硅胶上并通过快速色谱法纯化(AnalogixIntelliflash 310,RedisepRf 40g柱,0-30％乙酸乙酯/己烷)。将相似的流分合并并蒸发，得到5-溴-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺(900mg,38％)。
5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺
向5-溴-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺(900mg,2.42mmol,Eq:1)、双(频哪醇合)二硼(1.9g,7.49mmol,Eq:3.09)和乙酸钾(1.09g,11.1mmol,Eq:4.58)的二氧六环溶液中加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(190mg,259μmol,Eq:0.107)。在氩气气氛下，将得到的混合物加热至85℃过夜。将得到的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释并蒸发。将残留物溶取在乙酸乙酯(50ml)中，用盐水(50ml)洗涤并用硫酸钠干燥。将混合物过滤并向滤液中加入硅胶(～1.5g)。将混合物蒸发并通过快速色谱法纯化(Analogix Intelliflash,RediSep Rf 24g柱,10-50％乙酸乙酯/己烷)。将相似的流分合并并蒸发，得到粗的5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺，为淡黄色固体(759mg,HNMR测定为71％纯度,53％)。
4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺(化合物26)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(256mg,717μmol,Eq:1)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊-2-基)-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺(300mg,717μmol,Eq:1)、3M碳酸钾溶液(478μl,1.43mmol,Eq:2)、二甲氧基乙烷(1ml)p-二氧六环(1ml)和四(三苯基膦)钯(0)(114mg,98.5μmol,Eq:0.185)的混合物放置在微波反应管中并用氩气在超声下脱气15分钟。将该管密闭并将得到的混合物在微波反应器中加热至128℃并维持该温度3h。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯(2mL)和水(1mL)稀释并将相分离。将水相用乙酸乙酯(3x 1mL)萃取，并将合并的有机相用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。将得到的混合物过滤并蒸发，得到棕色残留物，将其在硅胶上色谱分离(AnalogixIntelliflash 310,RediSep硅胶24g,4-10％甲醇/二氯甲烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，并将残留物通过SFC色谱法纯化(THAR/SFC/Waters Multigram II系统，用20％甲醇/二氧化碳以70ml/mn洗脱，在SILICA柱3X25cm上，在220nM和35度和100bar反压力检测)，得到4-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-6-三氟甲基-苯基]-吡啶-2-磺酸金刚烷-1-基酰胺，为淡黄色固体(44.4mg,11％)。MS+m/z:568(M)+
N3-(2-氯-4'-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)联苯-4-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物27)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体1(590mg,1.65mmol,Eq:1)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)哌嗪(500mg,1.65mmol,Eq:1)、3M碳酸钾溶液(1.1ml,3.31mmol,Eq:2)、二甲氧基乙烷(1.67ml)p-二氧六环(1.67ml)和四(三苯基膦)钯(0)(354mg,306μmol,Eq:0.185)的混合物放置在微波反应管中并用氩气在超声下脱气15分钟。将该管密闭并将得到的混合物在微波反应器中加热至128℃，并维持该温度3h。将反应混合物冷却，将该管打开，加入1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)哌嗪(200mg,1.65mmol,Eq:1)。将该管再密闭并在微波反应器加热至128℃反应2h。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯稀释，并将有机相用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并蒸发，得到棕色残留物，并将其在硅胶上色谱分离(Analogix Intelliflash 310,RediSep硅胶24g,4-10％甲醇/二氯甲烷梯度)。将相似的流分合并并蒸发，并将残留物通过HPLC(Gilson,Supelcosil ABZ+Plus柱,25cm x 21.2mm 12μM,25-100％乙腈/水梯度0.3％甲酸)纯化。将相似的流分合并并冻干，得到N3-(2-氯-4'-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)联苯-4-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺，为白色冻干固体(20.23mg,44.8μmol,2.71％)。MS+m/z:543.0(M+H)+
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物28)
1-(4-硝基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在50mL圆底烧瓶中，在0℃、氮气下，将叔丁醇钾(885mg,7.89mmol,Eq:1.50)和吡啶-2(1H)-酮(500mg,5.26mmol,Eq:1.00)与DMF(10.0mL)合并得到浅棕色溶液。加入1-氟-4-硝基苯(742mg,5.26mmol,Eq:1.00)。将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2(50mL)稀释，用H2O(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并在减压下除去挥发物得到油状物，通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝70/30)从其中分离化合物，得到类白色固体1g(88％)。MH+217.1
1-(4-氨基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆形瓶中，将1-(4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮(1.0g,4.63mmol,Eq:1.00)和锌(1.51g,23.1mmol,Eq:5.00)与饱和NH4Cl水溶液/THF(1:1)(50ml)溶液合并，将混合物搅拌过夜。滤出固体，用CH2Cl2(50mLx2)萃取，将有机层用无水Na2SO4干燥；将溶液在真空下浓缩，获得粗产物740mg(86％).MH+188.3
1-(4-异硫氰酸基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆底烧瓶中，将二(1H-咪唑-1-基)甲硫酮(718mg,4.03mmol,Eq:1.5)与CH2Cl2(30mL)合并得到无色溶液。在0℃下，滴加1-(4-氨基苯基)吡啶-2(1H)-酮(500mg,2.69mmol,Eq:1.00)的CH2Cl2(20mL)。将反应升温至室温，并搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝80/20)分离，得到产物580mg(95％)。MH+228.9
甲基硫烷基-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基-氰胺
在100mL圆底烧瓶中，加入1-(4-异硫氰酸基苯基)吡啶-2(1H)-酮(580mg,2.54mmol,Eq:1.00)的MeOH(20mL)溶液、氰胺一钠(184mg,2.87mmol,Eq:1.13)。数分钟后，混悬液转为澄清，将反应在室温下搅拌1小时，加入碘甲烷(721mg,5.08mmol,Eq:2)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝95/5)分离，得到类白色固体120mg(17％)。MH+284.9
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物28)
在100mL圆底烧瓶中，加入甲基硫烷基-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基-氰胺(120mg,419μmol,Eq:1.00)的EtOH(30mL)溶液、肼(134mg,4.19mmol,Eq:10.00)。将反应加热至65℃反应3小时。将反应混合物浓缩，将H2O(20mL)加入到残留物中，滤出固体并用H2O(30mL)和CH2Cl2(10mL)洗涤固体，将固体空气-干燥过夜，得到类白色固体36mg(32％)。MH+268.9
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物29)
1-(2-氯-4-硝基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在50mL圆底烧瓶中，在0℃、氮气下，将叔丁醇钾(7.08g,63.1mmol,Eq:1.50)和吡啶-2(1H)-酮(4g,42.1mmol,Eq:1.00)与DMF(50.0mL)合并得到浅棕色溶液。加入N2.2-氯-1-氟-4-硝基苯(7.38g,42.1mmol,Eq:1.00)。将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2(50mL)稀释，用H2O(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并在减压下除去挥发物得到油状物，通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝70/30)从其中分离化合物，得到类白色固体4.07g(39％)。MH+250.9
1-(4-氨基-2-氯-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆形瓶中，将1-(2-氯-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮(4.07g,16.2mmol,Eq:1.00)和锌(5.31g,81.2mmol,Eq:5.00)与饱和NH4Cl水溶液/THF(1:1)溶液(50mL)合并，将混合物搅拌过夜。滤出固体，用CH2Cl2(50mLx2)萃取，将有机层用无水Na2SO4干燥；将溶液在真空下浓缩，获得粗产物3.3g(92％)。MH+221.0
1-(2-氯-4-异硫氰酸基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆底烧瓶中，将二(1H-咪唑-1-基)甲硫酮(2.42g,13.6mmol,Eq:1.5)与CH2Cl2(30mL)合并得到无色溶液。在0℃下，滴加1-(4-氨基-2-氯苯基)吡啶-2(1H)-酮(2g,9.06mmol,Eq:1.00)的CH2Cl2(20mL)溶液。将反应升温至室温，并搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝50/50)分离，得到产物1.1g(46％)。MH+262.9
[3-氯-4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基硫烷基-甲基-氰胺
在100mL圆底烧瓶中，加入1-(2-氯-4-异硫氰酸基苯基)吡啶-2(1H)-酮(1.1g,4.19mmol,Eq:1.00)的MeOH(20mL)溶液、氰胺一钠(303mg,4.73mmol,Eq:1.13)。数分钟后，混悬液转为澄清，将反应在室温下搅拌1小时，加入碘甲烷(1.19g,8.37mmol,Eq:2)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝95/5)分离，得到类白色固体590mg(44％)。MH+320.9
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2-氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物29)
在100mL圆底烧瓶中，加入[3-氯-4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基硫烷基-甲基-氰胺(590mg,1.84mmol,Eq:1.00)的EtOH(30mL)溶液、肼(589mg,18.4mmol,Eq:10.00)。将反应加热至65℃反应3小时。将反应混合物浓缩，加入H2O(20mL)到残留物中，滤出固体并用H2O(30mL)和CH2Cl2(10mL)洗涤固体，空气-干燥固体过夜，得到类白色固体494mg(89％)。MH+303.0
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物30)
1-(2,6-二氯-4-硝基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在50mL圆底烧瓶中，在0℃、氮气下，将叔丁醇钾(3.54g,31.5mmol,Eq:1.50)和吡啶-2(1H)-酮(2g,21.0mmol,Eq:1.00)与DMF(25.0ml)合并得到淡棕色混悬液。加入1,3-二氯-2-氟-5-硝基苯(4.42g,21.0mmol,Eq:1.00)。将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2(50mL)稀释，用H2O(25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并在减压下除去挥发物得到油状物，通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝70/30)从其中分离化合物，得到类白色固体2.8g(47％)。MH+284.9
1-(4-氨基-2,6-二氯-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆形瓶中，将1-(2,6-二氯-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮(2.8g,9.82mmol,Eq:1.00)和锌(3.21g,49.1mmol,Eq:5.00)与饱和的NH4Cl水溶液/THF(1:1)(50mL)溶液合并，将混合物搅拌过夜。滤出固体，用CH2Cl2(50mLx2)萃取，将有机层用无水Na2SO4干燥；将溶液在真空下浓缩，获得粗产物1.3g(50％)。MH+255.9
1-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基-苯基)-1H-吡啶-2-酮
在100mL圆底烧瓶中，将二(1H-咪唑-1-基)甲硫酮(1.26g,7.06mmol,Eq:1.5)与CH2Cl2(30mL)合并得到无色溶液。在0℃下，滴加1-(4-氨基-2,6-二氯苯基)-吡啶-2(1H)-酮(1.2g,4.7mmol,Eq:1.00)的CH2Cl2(20mL)溶液，将反应升温至室温，并搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(己烷/EtOAc＝50/50)分离，得到产物520mg(37％)。MH+296.8
[3,5-二氯-4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基硫烷基-甲基-氰胺
在100mL圆底烧瓶中，加入1-(2,6-二氯-4-异硫氰酸基苯基)吡啶-2(1H)-酮(520mg,1.75mmol,Eq:1.00)的MeOH(20mL)溶液、氰胺一钠(127mg,1.98mmol,Eq:1.13)。数分钟后，混悬液转为澄清，将反应在室温下搅拌1小时，加入碘甲烷(497mg,3.5mmol,Eq:2)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩溶液，将化合物通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝95/5)分离，得到类白色固体200mg(32％)。MH+352.9
1-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-1H-吡啶-2-酮(化合物30)
在100mL圆底烧瓶中，加入[3,5-二氯-4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)-苯基氨基]-甲基硫烷基-甲基-氰胺(200mg,563μmol,Eq:1.00)的EtOH(30mL)溶液、肼(180mg,5.63mmol,Eq:10.00)。将反应加热至65℃反应3小时。将反应混合物浓缩，将H2O(20mL)加入到残留物中。滤出固体并用H2O(30mL)和CH2Cl2(10mL)洗涤固体，将固体空气-干燥过夜，得到类白色固体36mg(19％)。MH+336.9
N3-(3,5-二氯-4-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺.三氟乙酸盐(化合物31)
2,6-二氯-4-硝基苄腈
将氰化铜(i)(2.6g,29.0mmol,Eq:2)的DMSO(5mL)溶液在60o下加热1hr。加入亚硝酸叔丁酯(5.98g,6.9ml,58.0mmol,Eq:4.00)和2,6-二氯-4-硝基苯胺(3g,14.5mmol,Eq:1.00)的DMSO(5mL)溶液，并将反应搅拌3hr。将反应混合物倾入冰水中并用乙酸乙酯萃取3x。将有机萃取物用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。色谱法(200g Analogix,100％hex至5％EtOAc/hex)，得到515mg(16％)的期望产物为浅棕色固体。
4-氨基-2,6-二氯苄腈
将2,6-二氯-4-硝基苄腈(2.46g,11.3mmol,Eq:1.00)、铁(3.17g,56.7mmol,Eq:5)和氯化铵(6.06g,113mmol,Eq:10)的甲醇(30mL)/水(10mL)溶液在回流下加热o/n。TLC显示不完全反应。在100度下持续加热6hr，然后在60度下加热过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤。将该滤液混悬在乙酸乙酯中，得到不溶解的固体。将该浆状物浓缩至干，混悬在水里，过滤，并用水冲洗。将该固体转移至圆底烧瓶中，混悬在苯中，并浓缩。加入另外部分的苯，并再次浓缩，得到1.37g(65％)的期望产物，为浅棕色固体。
2,6-二氯-4-异硫氰酸基苄腈
将4-氨基-2,6-二氯苄腈(500mg,2.67mmol,Eq:1.00)、硫光气(1.35g,900μl,11.7mmol,Eq:4.39)、三乙胺(875mg,1.2ml,8.64mmol,Eq:3.23)的苯(30ml)混悬液在回流下加热过夜。将棕色反应混合物浓缩并色谱分离(80g Analogix,0至5％乙酸乙酯/己烷)，得到436mg(71％)的期望产物，为浅棕色固体。
(Z)-S-甲基-N'-氰基-N-(3,5-二氯-4-氰基苯基)异硫脲
将甲醇钠(0.5M在甲醇中)(5.7ml,2.85mmol,Eq:1.22)加入到氰胺(108mg,2.58mmol,Eq:1.1)中。15分钟后，将该溶液加入到2,6-二氯-4-异硫氰酸基苄腈(537mg,2.34mmol,Eq:1.00)的甲醇(5mL)溶液中。1hr后，加入甲基碘(704mg,310μl,4.96mmol,Eq:2.11)并将反应在室温下搅拌过夜。将得到的混悬液过滤并干燥，得到43mg的期望产物，为灰色固体。将滤液浓缩并色谱分离(40g Analogix,50％EtOAc/hex至75％EtOAc/hex)，得到191mg的期望产物，为黄色固体。将该固体合并得到234mg(35％)的期望产物。
4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苄腈
将(Z)-S-甲基-N'-氰基-N-(3,5-二氯-4-氰基苯基)异硫脲(234mg,821μmol,Eq:1.00)和肼(263mg,258μl,8.21mmol,Eq:10)的乙醇(10mL)溶液在65℃下加热o/n。将反应混合物浓缩并色谱分离(23Supelco,100％DCM至5％至10％MeOH/DCM，得到156mg(71％)的期望产物，为类白色固体。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ:11.55(s,1H),9.99(s,1H),7.74(s,2H),6.14(s,2H)ppm
N3-(3,5-二氯-4-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺，三氟乙酸盐(化合物31)
将4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2,6-二氯苄腈(85mg,316μmol,Eq:1.00)、丙烷-1,3-二胺(70.2mg,948μmol,Eq:3)和4-甲基苯磺酸一水合物(60.1mg,316μmol,Eq:1.00)的混合物在210℃下搅拌5h。
将反应混合物冷却并将得到的固体在真空下干燥，然后通过反相HLPC纯化，获得46mg(33％)的期望产物，为白色固体。
MS-m/z:438.0(M-H)-
5-(4-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基氨基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯基)-N-甲基吡啶酰胺(化合物32)
将N3-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体1(200mg,561μmol,Eq:1.00)、N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)吡啶酰胺[945863-21-8](198mg,757μmol,Eq:1.35)和(三苯基膦)钯(0)(64.8mg,56.1μmol,Eq:0.1)的混合物脱气(真空/氮气循环)，然后加入脱气的干燥二氧六环(1.85ml)(在超声下用氮气起泡)和脱气的(在超声下用氮气起泡)2M碳酸钠的水溶液(561μl,1.12mmol,Eq:2)。将反应混合物密闭并在105℃下搅拌18h。将反应混合物吸附在硅胶(1g)上，浓缩并在硅胶上(硅胶24g,二氯甲烷/甲醇97:3至70:30)纯化。将一流分分离并在真空下干燥，获得45mg(20％)的期望产物，为黄色半固体固体。
MS+m/z:411.9(M+H)+
N3-(3,5-二氯-4-(哒嗪-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物33)
向脱气的(循环真空/氮气)N3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(80mg,248μmol,Eq:1.00)和Pd(PPh3)2Cl2(17.4mg,24.8μmol,Eq:0.1)的混合物中加入脱气的(在超声下用氮气起泡)干燥二甲基甲酰胺(3ml)，然后加入4-(三丁基锡烷基)哒嗪(229mg,195μl,619μmol,Eq:2.5)。将反应混合物进一步脱气(真空/氮气循环)。将反应混合物在100℃下搅拌3天，然后吸附在硅胶(0.7g)上，并在硅胶上(柱12g，二氯甲烷/甲醇100:0至60:40)纯化。得到37mg的棕色固体。将化合物在甲醇(1mL)中研磨，然后用甲醇(2x1mL)洗涤。将固体在真空下干燥，获得30mg(38％)的期望产物，为棕红色固体。
NMR(300MHz,DMSO d6):11.38(1H,s)；9.45(1H,s)；9.34(1H,dd,J＝1,6Hz)；9.22(1H,宽s)；7.78(2H,s)；7.74(1H,dd,J＝3,6Hz)；6.06(2H,s).
1-{3-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-噻吩-2-基}-乙酮(化合物34)
向N-3-(4-溴-3,5-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺中间体2(80.7mg,0.25mmol,Eq:1.00)的二氧六环(1.25ml)溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(23.1mg,20μmol,Eq:0.08)、碳酸钾(167μl,3M,Eq:2)和2-乙酰基-3-噻吩基硼酸(85mg,0.5mmol Eq:2)。在氮气下将混合物脱气两次，然后在100℃下加热16小时。冷却至室温下后，在真空下除去溶剂。向粗产物中加入数滴乙酸，然后加入MeOH/CH3CN/H2O(45％/45％/10％)(2ml)的混合物。将得到的混悬液离心，并将溶液分离并通过反相HPLC(0.1％HOAc的乙腈溶液和水)纯化。将产物流分收集并冻干，获得1-{3-[4-(5-氨基-1H-[1,2,4]三唑-3-基氨基)-2,6-二氯-苯基]-噻吩-2-基}-乙酮(28.5mg,31％)，为白色固体。MS m/z:369(M+H)+.
下面化合物35–44全部采用与实施例34的类似方法制备：
N-3-(3,5-二氯-4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺(化合物35)
从吡啶-4-基硼酸开始，产率＝13％,MS m/z 322(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(5-氯-噻吩-2-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物36)
从5-氯噻吩-2-硼酸开始，产率＝2％,MS m/z 362(M+H)
N-3-(3,5-二氯-4-吡啶-3-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物37)
从吡啶-3-硼酸开始，产率＝15％,MS m/z 322(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(1H-吡唑-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物38)
从吡唑-3-硼酸开始，产率＝1％,MS m/z 311(M+H)
N-3-(3,5-二氯-4-嘧啶-5-基-苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物39)
从嘧啶-5-硼酸开始，产率＝4％,MS m/z 323(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物40)
从2-甲氧基嘧啶-5-硼酸开始，产率＝26％,MS m/z 353(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物41)
从2-三氟甲基-5-吡啶硼酸开始，产率＝61％,MS m/z 390(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物42)
从1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-硼酸开始，产率＝3％,MS m/z 393(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(5-氯-吡啶-3-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物43)
从5-氯吡啶-3-硼酸开始，产率＝31％,MS m/z 357(M+H)
N-3-[3,5-二氯-4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-1H-[1,2,4]三唑-3,5-二胺(化合物44)
从6-甲氧基吡啶-2-硼酸开始，产率＝1％,MS m/z 352(M+H)
生物学实施例
使用假型HCV颗粒(HCVpp)报道分子试验测定化合物的HCV GT1b和GT1a进入抑制活性。
用于假型病毒颗粒的生成的哺乳动物表达质粒。
通过将编码HCV核心蛋白的最后60个氨基酸和HCV E1和E2蛋白所有氨基酸的核酸克隆至pcDNA3.1(+)载体中，构建表达GT1a H77株(Proc Natl Acad Sci USA 1997 94:8738-43)或GT1b Con1株(Science 1999285:110-3)的HCV E1和E2包膜蛋白的质粒。表达水疱性口炎病毒的糖蛋白G(VSV G)的质粒pVSV-G来自Clontech(目录号631530)。基于包膜缺陷的pNL.4.3.Luc-R-.E-载体(Virology 1995206:935-44)通过进一步删除HIV包膜蛋白的部分来修饰表达荧火虫荧光素酶报道分子基因的HIV包装构建体。
在瞬时转染的HEK-293T细胞中假型病毒颗粒的生成。
从瞬时转染的HEK-293T细胞(ATCC目录号CRL-573)生成假型HCV GT1a和GT1b颗粒(HCVpp)和假型VSV G颗粒(VSVpp)。为生成HCVpp，用等量的表达HCV包膜蛋白的质粒和HIV包装基因组通过使用聚乙烯亚胺(Polysciences目录号23966)作为转染试剂将HEK-293T细胞转染。为生成VSVpp，用等量的表达VSV G的质粒和HIV包装基因组通过使用聚乙烯亚胺将HEK-293T细胞转染。转染24小时后，用补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen目录号25030-081)的新鲜的杜氏改良伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I；Invitrogen目录号10569-010)替换含转染混合物的细胞培养基。转染后48小时收集上清液，并经无菌的0.45μm过滤器过滤。将上清液的等分试样冷冻，并在-80℃存储直至使用。
使用FITC-标记的CD81抗体JS-81(BD Biosciences目录号561956)通过流式细胞仪分选来富集具有高CD81表达水平的Huh7-高CD81细胞以允许更有效的HCV进入。将Huh7-高CD81细胞在杜氏改良伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I；Invitrogen目录号10569-010)中培养。该培养基补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和1％青霉素/链霉素(Invitrogen目录号15070-063)。将细胞保持在37℃、潮湿的5％CO2气氛下。
在Huh7-高CD81细胞中化合物的HCVpp进入抑制活性的测定。
将Huh7-高CD81细胞以8000细胞/孔的细胞密度接种于96孔板中(Perkin Elmer,目录号6005660)。将细胞铺于100μl补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)和1％青霉素/链霉素(Invitrogen目录号15070-063)的杜氏改良伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I,Invitrogen目录号10569-010)中。使细胞在37℃和5％CO2平衡24小时，在这时加入化合物和假型病毒。在试验当天，将HCVpp等分试样在37℃水浴中解冻，并保持在4℃直至使用。将化合物(或作为对照的介质)在具有2％DMSO和2％青霉素/链霉素的DMEM-GlutamaxTM-I中以3倍系列稀释进行稀释。将每个培养孔中的100μl铺板培养基除去，随后加入50μl化合物稀释液和50μl解冻的HCVpp。在化合物和HCVpp添加72小时后根据生厂商说明使用Steady-Glo萤光素酶检测系统(Promega,目录号E2520)读取荧火虫荧光素酶报道分子信号。EC50值定义为，与没有化合物的对照样品相比，观测到使荧火虫荧光素酶报道分子的水平减少50％的化合物浓度，且通过化合物剂量响应数据的非线性拟合来测定。
在Huh7-高CD81细胞中化合物选择性的测定。
以与HCVpp检测中的相同的模式，设置Huh7hCD81细胞检测板和化合物稀释液。细胞接种24小时后，将解冻的VSVpp在补充有10％胎牛血清的DMEM-GlutamaxTM-I中稀释800倍。在从培养孔中除去细胞铺板培养基后，将50μl化合物稀释液和50μl稀释的VSVpp加入各孔中。在化合物和VSVpp添加72小时后使用Steady-Glo萤光素酶检测系统(Promega,目录号E2520)读取荧火虫荧光素酶报道分子信号。EC50值定义为与没有化合物的对照样品相比，观测到使荧火虫荧光素酶报道分子的水平减少50％的化合物浓度，且通过化合物剂量响应数据的非线性拟合来测定。如果最大抑制百分比低于90％且高于70％，则EC50是近似值。
在下面的表II中可以找到代表性的试验数据:
表II.
出于清楚和理解的目的，已经通过说明和实施例的方式对本发明进行了详细描述。对本领域技术人员而言显而易见的是，可以在所附权利要求所要求保护的范围内进行改变和变通。
因此，可以理解，上述说明是说明性的而非限制性的。本发明的范围因此不应当取决于上述说明，而应当由随后所附的权利要求以及这些权利要求的等同方式的全部范围来确定。
本申请所引用的所有专利、专利申请和出版物都被全部引入本文作为参考用于所有的目的，其程度如同每一篇专利、专利申请或出版物被单独指明引入本文作为参考一样。

Claims (20)

1.式I的化合物或其药学上可接受的盐
A是不饱和的或部分不饱和的单环或二环的杂芳基或单环或螺环的杂环烷基，其中所述杂芳基选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、唑基、噻唑基、三唑基、二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基或异唑基；且所述杂环烷基选自氮杂环丁烷基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢-噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、唑烷基、异唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷基或四氢-吡啶基；
各R1独立地是卤素或卤代C1-6烷基；
m是1或2；
各R2独立地是卤素、C1-6烷氧基、氧代、氨基、C1-6烷基、C(＝O)OR2’、S(＝O)2R2’、S(＝O)2NHR2’、羟基C1-6烷基、C(＝O)NHR2’或C(＝O)R2’；
n是0、1或2；且
R2’是C1-6烷基、卤代C1-6烷基或金刚烷基。
2.权利要求1的化合物，其中m是1。
3.权利要求2的化合物，其中m是2。
4.权利要求3的化合物，其中一个R1是卤素并且另一个是卤代C1-6烷基。
5.权利要求3的化合物，其中两个R1都是卤素。
6.权利要求1至5中任意一项的化合物，其中n是0。
7.权利要求1至5中任意一项的化合物，其中n是1。
8.权利要求1至5中任意一项的化合物，其中n是2。
9.权利要求1至5中任意一项的化合物，其中A是吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、三唑基、四唑基、哌嗪基、2,6-二氮杂-螺[3.3]庚烷基、氮杂环丁基、噻吩基或吡唑基。
10.权利要求9的化合物，其中R2是卤素、C1-6烷氧基、氧代、氨基、C1-6烷基、C(＝O)OR2’、S(＝O)2R2’、S(＝O)2NHR2’、羟基C1-6烷基、C(＝O)NHR2’或C(＝O)R2’。
11.权利要求10的化合物，其中R2’是C1-6烷基或卤代C1-6烷基。
12.选自以下的化合物：
13.治疗有效量的权利要求1-12中任意一项的化合物在制备用于预防丙型肝炎病毒(HCV)感染的药物中的用途。
14.权利要求13的用途，其中所述化合物还与治疗有效量的免疫系统抑制剂组合。
15.治疗有效量的权利要求1-12中任意一项的化合物在制备用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的药物中的用途。
16.权利要求13-15中任意一项的用途，其中所述化合物还与抑制HCV的复制的抗病毒剂的组合进行组合。
17.权利要求13-15中任意一项的用途，其中所述化合物还与免疫系统调节剂或抑制HCV的复制的抗病毒剂或者其组合进行组合。
18.权利要求17的用途，其中免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。
19.权利要求17的用途，其中抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂或其任何组合。
20.组合物，其包含权利要求1-12中任意一项的化合物和药学上可接受的赋形剂。
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