CN105021752A - 一种足光散中苯甲酸含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：S1.对照品溶液及供试品溶液制备：（1）对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；（2）供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理3~7min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；S2.检测：精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时以0.03~0.07mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相。本发明提供的检测方法简单易于操作，足光散中苯甲酸提取彻底，检测结果准确可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，属于药物检测领域。
背景技术
足光散为浅黄棕色至浅红棕色的粉末，主要成分为水杨酸、苯甲酸、硼酸、苦参。辅料为滑石粉。足光散具有清热燥湿，杀虫敛汗的功效，主要用于湿热下注所致的角化型手足癣及臭汗症。
苯甲酸(benzoic acid)为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶。在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。苯甲酸微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强，它们的化学性质相似，都能形成盐、酯、酰卤、酰胺、酸酐等，都不易被氧化。苯甲酸用于医药、染料载体、增塑剂、香料和食品防腐剂等的生产，也用于醇酸树脂涂料的性能改进，与水杨酸合用于成人皮肤真菌病，浅部真菌感染如体癣、手癣及足癣等。
国家药品监督管理局现行国际药品标准含量测定，中成药足光散标准采用容量滴定法测定足光散中苯甲酸、水杨酸、硼酸的总酸量，不能体现各成份的含量，难以有效控制药品含量。目前国内还没有专利文献对高效液相色谱法检测足光散中苯甲酸含量进行报道，只有余小平于2005年在《药物分析杂志》发表过一篇关于足光散中苯甲酸含量的测定，该方法采用甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液作为流动相，检测波长240nm，加水提取苯甲酸，众所周知足光散不完全溶解于水中，在溶解足光散时，大部分足光散成分沉于水底，且苯甲酸微溶于水，所以该方法在检测足光散中苯甲酸含量具有一定的局限性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，该方法简单快捷、易于操作，足光散中苯甲酸提取彻底，检测结果准确可靠。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理3～7min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.03～0.07mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为50～60：40～50；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm。
所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为55:45，所述的磷酸二氢钾溶液浓度为0.05mol/L，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.2～3.4。
所述的检测方法还包括如下色谱条件：流动相流速为0.6～1.2ml/min，色谱柱温度为25℃～40℃，检测波长为280nm。
所述流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为280nm。
本发明的有益效果是：(1)流动相采用的是0.03～0.07mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇混合溶液，pH值3.2～3.4，为弱酸性的苯甲酸提供了良好的酸性环境，抑制苯甲酸的分解，使苯甲酸主要以分子形式存在，使检测结果呈现良好的峰型，拖尾因子较小，且能基线分离；
(2)在280nm的波长条件下，检测样品峰分离度和峰型均较好；
(3)苯甲酸易溶于无水乙醇，在无水乙醇中溶解度大，选取无水乙醇提取苯甲酸，提取效果好，能够较为完全的提取出足光散中的苯甲酸，更有利于检测的准确性；
(4)本发明提供的苯甲酸检测方法，苯甲酸稳定性、重复性、耐用性均良好，检测专属性强，苯甲酸浓度在2.4013μg～60.032μg范围内其含量均能与峰面积呈良好的线性关系；
(5)本发明提供的检测方法简单快捷易于操作，使检测人员易于掌握又能得出准确的检测结果，且本发明检测方法中使用的均为低毒试剂，降低了对操作人员的伤害。
附图说明
图1为苯甲酸对照品溶液色谱图；
图2为足光散供试品溶液色谱图；
图3为苯甲酸对照品溶液线性关系图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
【实施例1】一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理3min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.03mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为60：40，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.2；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm，检测结果如表1。
所述流动相流速为0.6ml/min，色谱柱温度为40℃，检测波长为280nm。
【实施例2】一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理4min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为58：42，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.3；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm，检测结果如表1。
所述流动相流速为0.8ml/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为280nm。
【实施例3】一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理5min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为55:45，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.3；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm，检测结果如表1，分析纯苯甲酸供试品溶液色谱图如图1，足光散供试品溶液色谱图如图2所示。
所述流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为280nm。
【实施例4】一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理6min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.06mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为53:47，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.4；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm，检测结果如表1。
所述流动相流速为1.1ml/min，色谱柱温度为33℃，检测波长为280nm。
【实施例5】一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，包括以下步骤：
S1.对照品溶液及供试品溶液制备：
(1)对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理7min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.07mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为50:50，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.4；高效液相色谱仪优选：安捷伦1260四元泵，安捷伦1260可变波长紫外检测器；色谱柱优选：Wondasil C18柱，5μ，4.6×250mm，检测结果如表1。
所述流动相流速为1.2ml/min，色谱柱温度为25℃，检测波长为280nm。
下表为各实施例的检测结果：
表1各实施例检测结果
由表1可以看出，实施例3条件下所得色谱峰的对称性和柱效均最好，因此实施例3的色谱条件较优。
下面针对苯甲酸的稳定性，本发明检测方法的线性关系，本发明检测方法的重复性三个方面做进一步验证。
【苯甲酸稳定性试验】取苯甲酸对照品溶液10μl，在不同时间进样测定，检测按实施例3的检测条件进行检测，记录苯甲酸峰面积，考察其稳定性。结果见表2。
表2苯甲酸的稳定考察结果
从表2可以看出，苯甲酸在24小时内的峰面积都维持在一个相对稳定的值，说明苯甲酸在24小时内是稳定的。
【线性试验】取苯甲酸对照品适量，加无水乙醇制成适宜浓度，检测按实施例3的检测条件进行检测，检测如结果见表3所示。
表3苯甲酸线性关系考察结果
上述试验结果可知苯甲酸浓度在2.4013μg～60.032μg范围内，其含量与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y＝337.03x+83.293，r＝0.9999，线性关系见图3。
【重复性试验】取上述同一批的足光散，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，检测按实施例3的检测条件进行检测，分别进样10μl，同时取对照品溶液10μl进样测定，按外标法测定含量并计算RSD，结果见表4。
表4苯甲酸重复性考察结果
从表中可以看出，RSD％为0.72，说明重复性考察结果复合要求，该检测方法重复性好。
综上所述，本方法简单快捷、易于操作，足光散中苯甲酸提取彻底，检测结果准确可靠，且重复性好。
Claims (4)
1.一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法检测，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 对照品溶液及供试品溶液制备：
（1）对照品溶液的配制：取分析纯苯甲酸适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
（2）供试品溶液的配制：取足光散0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇40ml，密塞，超声处理3~7min，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
S2.检测：精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测定时色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.03~0.07mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为50~60：40~50。
2.根据权利要求1所述的一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，其特征在于，所述流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为55:45，所述的磷酸二氢钾溶液浓度为0.05mol/L，所述的磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.2～3.4。
3.根据权利要求1所述的一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，其特征在于，所述的检测方法还包括如下色谱条件：流动相流速为0.6~1.2ml/min，色谱柱温度为25℃~40℃，检测波长为280nm。
4.根据权利要求3所述的一种足光散中苯甲酸含量的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为280nm。
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