CN105007932A - 用于组织修复和再生的可流动的配制品 - Google Patents

Abstract

本披露总体上涉及可流动的原胶原配制品和这类配制品用于促进由例如创伤或损伤、一种疾病状态、褥疮或手术诱导的伤口的愈合和组织修复和/或再生的用途。

Description

用于组织修复和再生的可流动的配制品

技术领域

本发明总体上涉及可流动的原胶原配制品和这类配制品用于促进由例如创伤或损伤、一种疾病状态、褥疮或其他压力性溃疡或手术诱导的伤口的愈合和组织修复和/或再生的用途。

相关申请的交叉引用

本专利申请要求2011年10月7日提交的美国临时申请61/545,106的权益。

发明背景

伤口的数量和用于促进伤口愈合的产品的市场是大量的并且不断增加的。每年产生超过1.1亿医源性伤口(由医疗程序诱导或引起的伤口)，同时估计2000万患者寻求创伤性伤口的医疗看护。

由于人口老龄化，难以愈合的和慢性伤口(包括压力性溃疡、静脉性溃疡和糖尿病性溃疡)的发生率在逐年增长。在世界范围内大约850万患者患有压力性溃疡，估计1250万患者患有静脉性溃疡并且大约1350万患者患有糖尿病性溃疡。相关的发病率和死亡率也是非常显著和不断增加的。例如，不愈合性糖尿病性溃疡不仅影响患者可动性，而且在美国和许多其他工业化国家是截肢的主要原因。大约50％的这类被截肢者在截肢的三年之内死于相关共病。

在糖尿病足部溃疡的情况下，当前护理标准(SOC)包括外科清创术、湿性换药和卸除。当前可用的二次介入包括活体皮肤等同物、高压氧、负压装置、针对感染的抗生素、专用敷料或含有生长因子或胶原的局部凝胶。这类二次介入提供相对于SOC的适度改进并且可能是昂贵、耗时和/或难以使用的。此外，尽管存在这些介入，许多伤口仍不愈合并且可能恶化至截肢变得必要的程度。对于易于使用和有效治疗这些和其他伤口仍然存在需要。

本发明总体上涉及去端肽(atelopeptide)原胶原基质的配制品和这类配制品用于促进由例如创伤或损伤、一种疾病状态、褥疮或手术诱导的伤口的愈合和组织修复和/或再生的用途。

相关技术说明

各种胶原配制品及其用途已在本领域中进行描述，参见例如美国专利号3,034,852；3,121,049；3,131,130；3,314,861；3,530,037；3,949,073；4,140,537，2,920,000；2,934,446-7；3,014,024；3,562,820；3,563,228；4,331,766，3,491,760，4,760,131；4,808,570；4,745,098；4,950,483；7,993,679；5,219,576；5,110,604；5,024,841；以及5,128,136,布雷特D(Brett D)，胶原和基于胶原的伤口敷料的综述(A Review of Collagen and Collagen-based Wound Dressings)，伤口(Wounds)20(12)，(2008)；Li W.(李W.)等人，由I型胶原和血小板源性生长因子-BB驱动的人真皮成纤维细胞迁移的机制(Mechanism of Human Dermal FibroblastMigration Driven by Type I Collagen and Platelet-derived Growth Factor-BB)，细胞分子生物学(Mol.Biol.Cell)15:294-309(2004)；兰加拉贾A(Rangaraj A)等人，胶原在伤口护理中的作用(Role of Collagen in Wound Management)，伤口UK 7(2):54-63(2011)；塞PK(Sai PK)和巴布(Babu)，基于胶原的敷料——综述(Collagen Based Dressings-a Review)，烧伤(Burns)26:54-62(2000)；舒尔德斯MD(Shoulders MD)和雷恩斯RT(Raines RT)，胶原结构和稳定性(Collagen Structure and Stability)，生物化学年评(Ann Rev.Biochem.)78:929-958(2009)；西尔威斯特MF(Sylvester MF)等人，胶原带状纤维结构和胶原-血小板反应(Collagen Banded Fibril Structure and the Collagen-Platelet Reaction)，血栓研究(Thromb.Res.)55:135-148(1989)；以及其中引用的参考文献，在本申请中提及的那些和所有其他参考文献明确地通过引用而结合。

发明的简要概述

本发明总体上涉及去端肽原胶原的配制品和这类配制品用于促进由例如创伤或损伤、一种疾病状态或医源性伤口诱导的伤口的愈合和组织修复和/或再生的用途。在此所用的各种术语在下文定义。

在一个优选实施例中，该配制品包含原胶原、至少一种佐剂以及生理学上可接受的载体。该配制品优选地包含一种选择性地可流动的胶态悬浮液或胶体。在优选的实施例中，该配制品包含一种选择性地可流动的溶胶。在一个替代实施例中，该配制品包含一种选择性地可流动的凝胶。在另一个实施例中，该配制品包含一种乳剂。

如在该配制品中使用的原胶原优选地是一种去端肽原胶原，其中末端肽已例如通过酶降解如下文所述的胃蛋白酶降解除去。原胶原优选地被复性以用于在最终配制品中使用。在一个实施例中，至少50％的原胶原被复性。在一个优选实施例中，至少75％的原胶原被复性。在一个更优选的实施例中，至少90％的胶原被复性。在一个示例性实施例中，至少95％的原胶原被复性。在一个优选实施例中，原胶原能够促进血小板释放PDGF。原胶原优选地是I型牛胶原。

在一个优选实施例中该配制品具有中性pH。在一个实施例中，该配制品具有6至9的pH。在一个更优选的实施例中，该配制品具有7至8的pH。

在一个优选实施例中，该配制品在大约15℃的温度下表现出足够流动以便通过注射器、套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置挤出。在一个优选实施例中，该配制品在约20℃至25℃下表现出足够流动以便填充它所施加的伤口的凹陷或通道。

在一个优选实施例中，该配制品中的至少一种佐剂是一种结构调节剂。在一个更优选的实施例中，该结构调节剂是一种原胶原稳定剂。在一个实施例中，原胶原稳定剂是一种多元醇。在一个优选实施例中，至少一种结构调节剂是一种配制品调节剂。

在一个优选实施例中，至少一种佐剂是一种增强剂。在另一个优选实施例中，至少一种增强剂是一种抗微生物剂。在另一个优选实施例中，至少一种抗微生物剂是一种醇。在另一个优选实施例中，用于在配制品中使用的至少一种增强剂是一种MMP抑制剂。在一个更优选的实施例中，至少一种MMP抑制剂是一种锌螯合剂。

在优选实施例中，该配制品是无菌的。

本发明还提供该配制品的用途和使用该配制品的方法。在一个实施例中，该配制品是用于在组织修复中使用。在另一个实施例中，该配制品是用于在组织再生中使用。在一个优选实施例中，该配制品是用于在使伤口愈合中使用。在一个优选实施例中，伤口是一种慢性伤口。在一个更优选的实施例中，伤口是一种糖尿病性溃疡。在一个优选实施例中，该配制品被涂敷至伤口。在一个更优选的实施例中，该配制品在外科清创术之后被涂敷至伤口。在一个仍然更优选的实施例中，在初次涂敷之后至少一周不向伤口给予该配制品的新的涂覆。在一个最优选的实施例中，在初次涂敷之后至少两周不向伤口给予该配制品的新的涂覆。

本发明还提供一种装置，该装置包括含有该配制品的一个储库。在一个实施例中，该装置包括一个注射器。在一个优选实施例中，该装置包括一个涂抹器尖端，该配制品可通过该涂抹器尖端挤出。在一个优选发明中，可通过施加手压将配制品从装置中挤出。在一个更优选的实施例中，该涂抹器尖端包括一个柔性管，该柔性管允许装置被固持在相对于配制品的挤出角度的各种角度处。在一个最优选的实施例中，该涂抹器尖端旨在用于一次性使用。

本发明进一步提供一种套件，该套件包括该装置和使用说明书。

本发明进一步提供一种用于生产该配制品的方式。

本发明的示例性实施例包括如下：

1.一种配制品，包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂，其中所述配制品是一种选择性地可流动的胶体。

2.根据实施例1的配制品，其中该原胶原是一种去端肽原胶原。

3.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原是复性原胶原。

4.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原是非交联原胶原。

5.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该胶体是一种溶胶。

6.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原是非聚集的并且被分散在该赋形剂内以便形成一种均匀分散体。

7.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该配制品具有中性pH。

8.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该配制品在大约15℃的温度下表现出足够流动以便通过注射器、套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置挤出。

9.根据以上实施例中任一项的配制品，其中在大约15℃的温度下该配制品表现出足够流动以便从注射器中挤出到伤口的凹陷或通道中。

10.根据以上实施例中任一项的配制品，其中至少一种佐剂是一种结构调节剂。

11.根据实施例10的配制品，其中该结构调节剂是一种原胶原稳定剂。

12.根据实施例11的配制品，其中该原胶原稳定剂是一种多元醇。

13.根据实施例10的配制品，其中该结构调节剂是一种配制品调节剂。

14.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原能够促进血小板释放PDGF。

15.根据以上实施例中任一项的配制品，其中至少一种佐剂是一种增强剂。

16.根据实施例15的配制品，其中该增强剂是一种抗微生物剂。

17.根据实施例16的配制品，其中该抗微生物剂是一种醇。

18.根据实施例15的配制品，其中该增强剂是一种MMP抑制剂。

19.根据实施例18的配制品，其中该MMP抑制剂是一种锌螯合剂。

20.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该配制品是无菌的。

21.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原是牛I型原胶原。

22.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该原胶原是非冻干原胶原。

23.根据以上实施例中任一项的配制品，其中该配制品不包含PDGF或编码PDGF的基因。

24.一种选择性地可流动的胶体配制品用于治疗伤口的用途，该配制品包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂。

25.根据实施例24的用途，其中该原胶原是一种去端肽原胶原。

26.根据实施例24或25的用途，其中该原胶原是复性原胶原。

27.根据实施例24-26中任一项的用途，其中该原胶原是非交联原胶原。

28.根据实施例24-27中任一项的用途，其中该胶体是一种溶胶。

29.根据实施例24-28中任一项的用途，其中该原胶原是非聚集的并且被分散在该赋形剂内以便形成一种均匀分散体。

30.根据实施例24-29中任一项的用途，其中该配制品具有中性pH。

31.根据实施例24-30中任一项的用途，其中该配制品在大约15℃的温度下表现出足够流动以便通过注射器、套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置挤出。

32.根据实施例24-31中任一项的用途，其中在大约15℃的温度下该配制品表现出足够流动以便从注射器中挤出到伤口的凹陷或通道中。

33.根据实施例24-32中任一项的用途，其中至少一种佐剂是一种结构调节剂。

34.根据实施例33的用途，其中该结构调节剂是一种原胶原稳定剂。

35.根据实施例34的用途，其中该原胶原稳定剂是一种多元醇。

36.根据实施例33的用途，其中该结构调节剂是一种配制品调节剂。

37.根据实施例24-36中任一项的用途，其中该原胶原能够促进血小板释放PDGF。

38.根据实施例24-37中任一项的用途，其中至少一种佐剂是一种增强剂。

39.根据实施例38的用途，其中该增强剂是一种抗微生物剂。

40.根据实施例39的用途，其中该抗微生物剂是一种醇。

41.根据实施例38的用途，其中该增强剂是一种MMP抑制剂。

42.根据实施例41的用途，其中该MMP抑制剂是一种锌螯合剂。

43.根据实施例24-42中任一项的用途，其中该配制品是无菌的。

44.根据实施例24-43中任一项的用途，其中该原胶原是牛I型原胶原。

45.根据实施例24-44中任一项的用途，其中该原胶原是非冻干原胶原。

46.根据实施例24-45中任一项的用途，其中该配制品不包含PDGF或编码PDGF的基因。

47.根据实施例24-46中任一项的用途，其中该伤口是一种创伤损伤性伤口。

48.根据实施例24-47中任一项的用途，其中该伤口与一种疾病状态相关。

49.根据实施例24-48中任一项的用途，其中该伤口是一种医源性伤口。

50.根据实施例24-49中任一项的用途，其中该伤口是一种软组织伤口。

51.根据实施例24-50中任一项的用途，其中该伤口是一种慢性伤口。

52.根据实施例24-51中任一项的用途，其中该伤口是一种糖尿病足部溃疡。

53.一种治疗伤口的方法，该方法包括向该伤口涂覆一种选择性地可流动的配制品，该配制品包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂。

54.根据实施例53的方法，其中该原胶原是一种去端肽原胶原。

55.根据实施例53或54的方法，其中该原胶原是复性原胶原。

56.根据实施例53-55中任一项的方法，其中该原胶原是非交联原胶原。

57.根据实施例53-56中任一项的方法，其中该胶体是一种溶胶。

58.根据实施例53-57中任一项的方法，其中该原胶原是非聚集的并且被分散在该赋形剂内以便形成一种均匀分散体。

59.根据实施例53-58中任一项的方法，其中该配制品具有中性pH。

60.根据实施例53-59中任一项的方法，其中该配制品在大约15℃的温度下表现出足够流动以便通过注射器、套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置或方法挤出。

61.根据实施例53-60中任一项的方法，其中在大约15℃的温度下该配制品表现出足够流动以便从注射器中挤出到伤口的凹陷或通道中。

62.根据实施例53-61中任一项的方法，其中至少一种佐剂是一种结构调节剂。

63.根据实施例62的方法，其中该结构调节剂是一种原胶原稳定剂。

64.根据实施例63的方法，其中该原胶原稳定剂是一种多元醇。

65.根据实施例62的方法，其中该结构调节剂是一种配制品调节剂。

66.根据实施例53-65中任一项的方法，其中该原胶原能够促进血小板释放PDGF。

67.根据实施例53-66中任一项的方法，其中至少一种佐剂是一种增强剂。

68.根据实施例67的方法，其中该增强剂是一种抗微生物剂。

69.根据实施例68的方法，其中该抗微生物剂是一种醇。

70.根据实施例67的方法，其中该增强剂是一种MMP抑制剂。

71.根据实施例70的方法，其中该MMP抑制剂是一种锌螯合剂。

72.根据实施例53-71中任一项的方法，其中该配制品是无菌的。

73.根据实施例53-72中任一项的方法，其中该原胶原是牛I型原胶原。

74.根据实施例53-73中任一项的方法，其中该原胶原是非冻干原胶原。

75.根据实施例53-74中任一项的方法，其中该配制品不包含PDGF或编码PDGF的基因。

76.根据实施例53-75中任一项的方法，其中该伤口是一种创伤损伤性伤口。

77.根据实施例53-76中任一项的方法，其中该伤口与一种疾病状态相关。

78.根据实施例53-77中任一项的方法，其中该伤口是一种医源性伤口。

79.根据实施例53-78中任一项的方法，其中该伤口是一种软组织伤口。

80.根据实施例53-79中任一项的方法，其中该伤口是一种慢性伤口。

81.根据实施例53-80中任一项的方法，其中该伤口是一种糖尿病足部溃疡。

82.根据实施例53-81中任一项的方法，进一步包括将该配制品再涂覆至该伤口的步骤。

83.根据实施例82的方法，其中该配制品的一个第二涂覆在该初始涂覆之后大约一周进行。

84.根据实施例82的方法，其中该配制品的一个第三涂覆在该第二涂覆之后大约一周进行。

85.一种装置，其包括根据实施例1-23中任一项的配制品。

86.如实施例85的装置，其中该装置是含有该配制品的一个注射器筒。

87.如实施例86的装置，其中该注射器筒被适配用于接收适合用于涂覆至伤口的一个涂抹器尖端。

88.如实施例86的装置，其中该注射器筒包括含有该配制品的一个储库，并且其中该储库可操作地连接至适合用于涂覆至伤口的一个涂抹器尖端。

89.如实施例85的装置，其中该注射器筒可操作地连接至适合用于涂覆至伤口的一个涂抹器尖端。

90.如实施例89的装置，其中该涂抹器尖端包括一个柔性管。

91.一种包括如实施例85-90中任一项的装置的套件，该套件进一步包括用于在伤口的治疗中使用该装置的说明书。

92.一种制备根据实施例1-23中任一项所述的配制品的方法，该方法包括以下步骤：(i)使一种胶原研磨物变性且溶解于一种第一溶液中，得到一种于溶液中溶解的胶原，(ii)将一种复性剂添加至该于溶液中溶解的胶原，从而导致复性原胶原的形成，(iii)将该复性原胶原分散于一种药学上可接受的复性剂中。

93.如实施例92的方法，其中该第一溶液是包含胃蛋白酶的一种酸性溶液。

94.如实施例93的方法，其中该复性剂是添加至该溶液以便使pH增加至中性范围的一种碱，并且使该溶液混合以便允许形成复性原胶原。

95.如实施例94的方法，其中在被分散于一种药学上可接受的赋形剂中之前通过离心使该复性原胶原与该溶液分离。

96.如实施例94的方法，其中该胶原研磨物是从已被浸泡在一种酸性溶液中的牛皮获得的。

97.如实施例92-96中任一项的方法，其中使该溶液中的胶原通过一个无菌过滤器以便除去污染物并且所有随后步骤是无菌地进行的。

98.如实施例92-97中任一项的方法，其中该原胶原配制品是呈一种选择性地可流动的溶胶形式的大约2.6％牛去端肽原胶原。

99.如实施例92-98中任一项的方法，进一步包括装置的无菌填充，这些装置包括被适配成含有该原胶原配制品并且维持该原胶原配制品处于无菌形式的一个储库。

100.如实施例99的方法，其中该装置是一个注射器筒。

发明详细说明

在下文进一步详细地描述本发明的各个优选方面。在进一步提出关于本发明的另外细节之前，阐述将在下文中使用的某些术语的定义可能有助于本发明的理解。

如在此所用的“佐剂”通常是指调节或增强配制品或原胶原的功能以便促进伤口或其他组织损伤的组织修复和再生的任何试剂。

如在此所用的“抗微生物剂”通常是指适合用于在人或其他哺乳动物中使用的减少或抑制伤口或其他组织损伤部位中微生物的繁殖和/或增殖的任何试剂。

“细胞因子”是改变暴露于该试剂的细胞的细胞功能或活性的任何试剂。本发明中细胞因子的优选类别包括促进组织修复和再生的信号传导蛋白(包括生长因子)以及促进伤口的上皮再形成、血管生成、基质产生和瘢痕形成的其他试剂。

如在此所用的“胶体”通常是指其中一种物质具有分散于其内的另一种物质的一种系统。

“配制品调节剂”通常是指调节原胶原配制品的粘度、胶原间相互作用或其他生理化学特性的任何试剂。

如在此提及的“结构调节剂”通常是指调节原胶原或配制品的结构的任何试剂。

“原胶原稳定剂”通常是指促进原胶原的稳定性、允许其长期储存或另外在冷藏或室温下最小化或抑制原胶原的降解的任何试剂。

如在此所用的“增强剂”通常是指提高、加强或另外增强原胶原基质促进组织修复和再生的能力的任何试剂。

如在此所用的“修复细胞”通常是指被刺激以便响应于组织损伤迁移并增殖的任何细胞。修复细胞是伤口愈合反应的组成部分。这类细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞、上皮细胞、成纤维细胞、毛细血管内皮细胞、毛细血管周细胞、肥大细胞、巨核细胞、角化细胞、平滑肌细胞、单核炎性细胞、分节炎性细胞、肉芽组织细胞、组织特异性细胞及其前体，包括但不限于肝细胞、心肌细胞、肾小管细胞、II型肺细胞、角化细胞、肠细胞、胃细胞、成软骨细胞、成骨细胞等。

如在此所用的“伤口位点”通常是指宿主中起因于创伤性组织损伤、一种疾病状态或由包括注射或缝合或类似程序的医疗程序诱导或引起的组织损伤的任何位置。

如在此所用，“细胞浸润”通常是指关于原胶原基质的细胞迁移。细胞浸润涵盖细胞迁移至原胶原基质的内表面中和沿着原胶原基质的内表面迁移。细胞浸润还包括细胞迁移跨过一种可渗透原胶原基质。

“凝胶”是介于固体与自由流动液体之间的配制品中间体。

如在此所用的“原胶原”通常是指包含通过氢键一起结合成一种三螺旋结构的三条肽(α-链)的蛋白质大分子以及其复性复合物(即微原纤维、原纤维和纤维)。如在此所用这种“复性原胶原”通常是指已经变性并且然后复性的原胶原，例如在一种酸性溶液中变性并且然后在一种中性溶液中循环以便允许三螺旋原胶原大分子重新形成复性复合物。术语“去端肽原胶原”通常是指碱性原胶原大分子或复性原胶原，在每种情况下主要除去末端或端肽；优选地除去至少95％，更优选地除去大于99％。

如在此所用的“选择性地可流动的胶体”通常是指在某些温度和/或在某些施加的压力下表现出流动的一种胶体。

“治疗性蛋白质”通常是指具有促进伤口愈合、组织修复或组织再生的能力的任何肽、多肽或蛋白质。治疗性蛋白质还包括治疗、预防或减轻任何临床疾病、病症或相关生物学表现的症状或预后的任何其他肽、多肽或蛋白质。

“医源性伤口”通常是指由一种医疗程序(例如，注射、切开、穿刺、截骨术、切除术等)诱导或引起的伤口。

术语“生理学上可接受的赋形剂”意指作为一种药用配制品在一种药剂的配制中使用的试剂，该试剂对该配制品将被给予的宿主无害并且基本上不影响与其一起配制的药剂的药物活性。

如在此所用的术语“水溶液”通常是指含有水(包括氚化水)、优选地蒸馏水的溶液以及“盐水溶液”(下文所定义)，并且根据需要或所希望的该溶液可以用盐酸或氢氧化钠进行pH调节，以便稳定或促进本发明的原胶原配制品的溶解。

如在此所用的术语“盐水溶液”通常是指含有溶解于水(包括氚化水)、优选地蒸馏水中的大约0.9％氯化钠的溶液，根据需要或所希望的该溶液可以用盐酸或氢氧化钠进行pH调节，以便稳定或促进本发明的原胶原配制品的溶解。

本发明的药用组合物和配制品可适用于涉及伤口的多种临床疾病或病理情况。伤口可能起因于创伤性损伤、一种疾病状态或由一种医疗程序诱导抑或引起的组织损伤。说明性伤口包括糖尿病足部溃疡和其他伤口如部分皮层和完全皮层皮肤伤口、压力性溃疡、静脉性溃疡、慢性血管性溃疡、通道式/无规则(undermined)伤口、外科伤口(供体部位/移植物、Moh手术后、激光手术后、足病师治疗、伤口裂开)、创伤伤口(擦伤、撕裂伤、二度烧伤和皮肤撕裂)以及引流伤口。可以受益于本发明的应用的伤口包括例如糖尿病性溃疡、压力性溃疡、静脉淤血性溃疡、动脉溃疡、手术伤口或高能量创伤伤口。这些组合物还可用于治疗愈合缓慢的伤口、对现有疗法无反应的伤口(例如，慢性伤口)以及用于具有由例如糖尿病和老龄化引起的愈合能力受损的患者中。在某些实施例中，本发明的治疗方法在临床目标是阻止疾病过程、从而允许发生自然组织愈合时也是有用的。

伤口愈合通常是协调、刻板的一系列事件，这些事件包括(a)组织破坏和正常组织结构的损失；(b)细胞坏死和出血；止血(凝块形成)；(c)分节和单核炎性细胞的浸润，伴随血管充血和组织水肿；(d)凝块以及受损细胞和组织通过单核细胞(巨噬细胞)溶解；(e)肉芽组织形成(纤维增生和血管生成)；(f)原组织的再生。已经在大量哺乳动物种类中产生的来自所有组织和器官的伤口中观察到这一系列细胞事件(盖里特(Gailet)等人，细胞生物学新观点(Curr.Opin.Cell.Biol.)6:717-725，1994)。因此，上述细胞系列是大多数哺乳动物组织修复的几乎普遍方面。

在本发明的配制品的某些配制品中，据信参与伤口愈合过程的修复细胞可被诱导来增殖和迁移至组织损伤部位并且浸润所涂覆的原胶原配制品。

在本发明的一个方面，该配制品包含用于在给予或植入至伤口部位之上或之内中使用的原胶原胶体。配制品的给予是通过将该配制品涂覆至伤口的表面来进行的。这种给药可以通过如在此所描述的一种涂抹器来完成。在将配制品涂覆至伤口之后，细胞浸润可以在修复细胞迁移至所涂覆的原胶原配制品中时发生，这类细胞可以表达生长因子并且向含有原胶原配制品的组织提供一种治疗作用。

在一个优选实施例中，该配制品将包含0.01％至10％原胶原。在一个更优选的实施例中，该配制品将包含大约2.6％原胶原。

在某些实施例中，该配制品具有足够表面积并且暴露于营养物，这样使得细胞向内生长和分化可以在血管向内生长之前或与血管向内生长并行发生。在植入之后，该配制品可以在细胞增殖发生时允许营养物和废物产物的扩散并且允许持续血管向内生长。生长组织的组构可以通过基质的显微结构调控。特定孔径和结构可以用于控制来自宿主的纤维血管组织向内生长的模式和程度。因此，细胞可以在植入之前接种在基质中。也可以引导接种细胞的组构。基质的表面几何形状和化学可以进行调控以便控制接种细胞的或生长宿主细胞中的粘附、组构和功能。

该配制品将优选地具有通常与为“生物相容的”相关的所有特征，在于它处于当给予至哺乳动物受试者时不会产生不利的、过敏的或其他不良反应的形式。该配制品将优选地根据具体情况和有待治疗的伤口的部位进行定制。可以在选择配制品中考虑物理和化学特征，例如像生物相容性、生物可降解性、强度、刚度、界面特性以及甚至美学外观，如对于本领域的技术人员是熟知的。适当的配制品将优选地提供在储存期间和给药之后的基质稳定性，还充当原位支架，哺乳动物修复细胞可以通过该原位支架迁移。

用于伤口和神经病变性溃疡的含有胶原的局部治疗是本领域中已知的。这类组合物典型地含有通常研磨成粉末并且悬浮于盐水流体中的冻干或水解胶原。水解和冻干两者均已知用于使支撑蛋白质的二级结构的氢键断裂。当氢键断裂时，形成蛋白质的二级结构的α-链分离，从而形成肽片段和单螺旋卷曲。本发明包括复性原胶原。优选地，配制品中的至少50％的胶原是复性原胶原。更优选地，配制品中的至少75％的胶原是复性原胶原。仍然更优选地，配制品中的至少90％的胶原是复性原胶原。最优选地，配制品中的至少95％的胶原是复性原胶原。

在一个优选实施例中，复性原胶原是处于能够促进血小板的活化以便释放PDGF的复性复合物的形式，PDGF进而能够刺激巨噬细胞和成纤维细胞迁移到基质中并且促进内源性胶原和蛋白聚糖合成。本发明的这种优选的复性复合物已经显示使血小板活化以便释放PDGF增加至少50％。在一个优选实施例中，这些复合物使血小板的释放增加至少100％。在一个更优选的实施例中，这些复合物使血小板的释放增加至少200％。

本发明的配制品优选地包含未交联(即彼此共价连接)的原胶原。如在此所用的“交联”通常是指胶原内反应，其中原胶原大分子变得结合至其他原胶原大分子以便形成聚集体。优选地，至少75％的原胶原是未交联的。更优选地，至少85％的原胶原是未交联的。更优选地，至少90％的原胶原是未交联的。最优选地，至少95％的原胶原是未交联的。

在一个实施例中，配制品是一种选择性地可流动的胶态悬浮液或一种胶体。一类优选的选择性地可流动的胶体是一种原胶原溶胶，其中非交联原胶原分散于一种液相中。一种替代胶体是凝胶。另一种替代胶体是乳剂。在一个优选实施例中，配制品可以被储存在一个注射器中并且通过一个套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置或方法挤出。某些配制品的流动性也将优选地是足够高的以便填充伤口以及该伤口中或周围的任何凹陷或通道。某些配制品的粘度将优选地是足够高的以使得一旦涂覆该配制品将不会从伤口中滴下或流出。

在一个优选实施例中，配制品在大约15℃的温度下是足够可流动的以便通过一个套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置或方法挤出。在一个优选实施例中，在大约15℃的温度下，配制品是足够可流动的以便容易地扩散遍布伤口并且填充伤口的凹陷或通道，这可以通过适合于所治疗的伤口的性质和类型的涂覆来帮助。

在一个优选实施例中，配制品包含一种佐剂。如在此所用的“佐剂”通常是指调节或增强配制品或原胶原的功能以便促进伤口或其他组织损伤的组织修复和再生的任何试剂。

如用于配制品中的佐剂可以是一种结构调节剂。如在此所用的“结构调节剂”通常是指调节原胶原或配制品的结构的任何试剂。

如用于配制品中的结构调节剂可以包含一种原胶原稳定剂。原胶原稳定剂包括减缓或防止原胶原的三螺旋结构(或微原纤维、原纤维和纤维的其他大分子结构)在增加的温度下变性的任何试剂。原胶原稳定剂的一个优选实例是甘油。原胶原稳定剂是本领域中已知的，并且通过引用包括在此。另外的原胶原稳定剂可以通过常规程序来鉴别。能够减缓或防止原胶原在增加的温度下变性的试剂包括具有可以被结合到原胶原的水-链结构中的一个羟基的试剂。能够减缓或防止原胶原在增加的温度下变性的试剂包括多元醇、糖和渗压剂。如在此所用，术语“多元醇(polyol)”与“糖醇”、“多元醇(polyhydric alcohol)”和“多元醇(polyalcohol)”同义并且通常是指碳水化合物的一种氢化形式，碳水化合物的羰基基团(醛或酮、还原糖)已被还原成伯或仲羟基基团(由此还原成醇)，例如像来自甘露糖的甘露醇、来自木糖的木糖醇和来自乳果糖的乳糖醇。可以用于本发明中的多元醇的非限制性实例包括甘油、苏糖醇、阿拉伯糖醇、赤藓糖醇、核糖醇、木糖醇、半乳糖醇(或卫矛醇)、葡萄糖醇(或山梨糖醇)、艾杜糖醇、肌醇、甘露糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇以及聚糖醇(polyglycitol)。可以用于本发明中的多元醇的其他非限制性实例可见于例如，药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems)(霍华德C.安塞尔(Howard C.Ansel)等人编辑,利平科特威廉姆斯&威尔金斯出版公司(Lippincott Williams&Wilkins Publishers)，第7版1999)；雷明登氏：药物科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)(阿方索R.真纳罗(Alfonso R.Gennaro)编辑，利平科特威廉姆斯&威尔金斯出版公司，第20版2000)；古德曼和吉尔曼的治疗剂药理基础(Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics)(乔尔G.哈德曼(Joel G.Hardman)等人编著，麦格劳-希尔专业出版公司(McGraw-Hill Professional)，第10版2001)；以及药物赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(雷蒙德C.罗威(Raymond C.Rowe)等人，阿尔法出版(APhA Publications)，第4版2003)中，这些文献各自特此通过引用以其全部内容结合。可用于本发明中的糖的实例包括果糖、葡萄糖、甘油醛、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖、三氯蔗糖、松三糖和棉子糖。可以用于配制品中的渗压剂的实例包括但不限于，糖(例如，蔗糖、葡萄糖、海藻糖、果糖、木糖、甘露糖、岩藻糖)、多元醇(例如，甘油、甘露醇、山梨糖醇、乙二醇、肌醇)、两性离子化合物(例如牛磺酸)、无净电荷的游离氨基酸(例如，甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺)、氨基酸的衍生物(例如，甜菜碱(glycine betaine)，可替代地被称为甜菜碱(betaine))、以及三甲基氨基N-氧化物(TMAO)。甜菜碱、甜菜碱衍生物和TMAO是两性离子四取代胺衍生物的实例，其也可以用于配制品中。

结构调节剂可以是配制品调节剂。用于在配制品中使用的配制品调节剂可以包括调节配制品的粘度、胶原间相互作用或其他生理化学特性的任何试剂。优选的结构调节剂将不会对配制品的治疗特性具有不利作用并且将不会以旨在用于涂覆至伤口的量引起宿主的不利反应。

如用于配制品中的配制品调节剂可以包含一种疏溶剂。如在此所用的“疏溶剂”通常是指稳定原胶原的三螺旋结构并且同时减弱原胶原间相互作用且减少原胶原的聚集的任何试剂。优选地，用于在本发明中使用的疏溶剂是无毒的并且不会在用于配制品的浓度和量下引起不可接受的副作用。优选地，本发明中使用的疏溶剂不会抑制伤口部位处的血管生成。疏溶剂的一个说明性实例是甘油。可以用于本发明中的其他疏溶剂的非限制性实例包括但不限于乙二醇、脲、硫氰酸钠、盐酸orguanadinium。本领域已知的其他这类疏溶剂也可以用于本发明中。

用于在本发明中使用的配制品调节剂可以包括吸湿剂。如在此所用的“吸湿剂”通常是指提供或增加配制品的吸湿特性(其是吸收水的能力)的任何试剂。可以选择配制品，该配制品包含吸湿剂以便提供具有吸湿特性的本发明。在一些实施例中，配制品能够吸收来自伤口的水和渗出物。吸湿剂的非限制性实例包括糖、醇和盐，包括潮解性盐如氯化钙、氯化镁、氯化锌、碳酸钾、氢氧化钾、磷酸钾、光卤石、柠檬酸铁铵和氢氧化钠。

用于在本发明中使用的配制品调节剂可以包括一种溶剂。用于在配制品中使用的溶剂包括具有溶解任何其他液体或固体的能力的任何液体。溶剂可以在本发明中用于例如调节配制品的粘度或调节胶原内相互作用。溶剂的非限制性实例包括乙腈、乙酸乙酯、丙酮、苯、甲苯、二噁烷、二甲基甲酰胺、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、四氯化碳、氯苯、丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇。也可以使用溶剂的组合。

用于在本发明中使用的配制品调节剂可以包含一种趋化剂。用于在配制品中使用的趋化剂包括用于增强细胞在体内涂覆的配制品上或至该配制品中的浸润、附着和/或生长的任何物质。这些物质包括但不限于，生物活性剂如细胞生长因子(例如TGF-β、FGF等)、刺激软骨形成的物质(例如，刺激软骨形成的BMP如BMP-2、BMP-12和BMP-13)、

刺激细胞迁移到基质上的因子、刺激基质沉积的因子、抗炎药(例如，非类固醇抗炎药)、免疫抑制剂(例如，环孢酶素)、以及其他蛋白质，如弹性纤维、网状纤维、糖蛋白或糖胺聚糖，如硫酸肝素、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白等。例如，生长因子(如TGF-β)与抗坏血酸已被发现触发细胞分化和由软骨细胞形成软骨。生物活性剂还可以是一种细胞助留剂(如层粘连蛋白、纤连蛋白等)以便使细胞粘附到基质上，或可以是细胞迁移的活性抑制剂如巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)。本领域的普通技术人员将容易地认识到，这类试剂可以呈多肽形式抑或编码这类多肽的核酸分子的形式，这样使得在植入之后这类核酸分子被迁移细胞摄取并且表达。

如用于配制品中的佐剂可以包含一种增强剂。用于在配制品中使用的增强剂可以是提高、加强或另外增强该配制品促进组织修复和再生的能力的任何试剂。

增强剂可以包含一种基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂。用于在配制品中使用的MMP抑制剂可以是降低或抑制MMP的活性的任何试剂。MMP抑制剂是本领域中已知的，并且通过引用包括在此。其他MMP抑制剂可以通过常规程序来鉴别。

慢性伤口通常特征在于过量MMP的存在。在一个正常伤口中，已知MMP在伤口愈合的重塑过程期间降解胶原。在慢性伤口中，升高的MMP水平据信通过降解生长因子和血管生成介质来抑制伤口中的血管生成。作为抑制血管生成的结果，过量MMP水平还通过防止形成新血管来支撑新形成的组织、分解活组织并且促成伤口渗出物来升高伤口的坏死负担。

慢性伤口中的过量MMP水平将可以通过使用MMP抑制剂得以改善。MMP抑制剂可以是MMP的组织抑制剂(下文称为“TIMP”)、重组TIMP或其衍生物。在相关的更具体实施例中，TIMP分别是TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4。TIMP是为MMP的天然特异性生理抑制剂的蛋白质家族并且是通过产生MMP的相同细胞合成的。TIMP-1、TIMP-2、TIMP-2和TIMP-4是迄今为止已经鉴别的四种TIMP分子。在本发明的时间未知但将来在本领域中描述的TIMP通过引用结合在此。

用于在配制品中使用的MMP抑制剂可以是一种螯合剂。螯合剂是与某些金属离子形成络合物或螯合某些金属离子、使这些离子失活以使得这些离子不能与其他元素或离子正常反应的任何试剂。优选地，用于在本发明中使用的螯合剂是一种锌螯合剂。锌螯合剂是能够与锌离子形成络合物或螯合锌离子的试剂。优选地，本发明的锌螯合剂是无毒的并且不会在所给予的剂量下引起不可接受的副作用。锌螯合剂的一个说明性实例是乙二胺四乙酸(EDTA)钙。锌螯合剂的其他非限制性实例包括但不限于，二乙基二硫代氨基甲酸酯(DEDTC)、3-巯基-D-缬氨酸、双(二乙基硫代氨基甲酰基)二硫化物、N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)-乙二胺、N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-对甲苯磺酰胺、8-羟基喹啉、8-羟基喹啉-5-磺酸、二乙基二硫代氨基甲酸酯、菲咯啉及其衍生物、吡啶二羧酸酯(dipicolinate)、二苯基硫卡巴腙(diphenylthiocarbazone)、双硫腙、西咪替丁、吡啶二羧酸、氯碘羟喹、氨丁三醇、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、吲哚美辛、酮洛芬、萘丁美酮、阿扎丙宗、舒林酸、美洛昔康、噻洛芬酸、氟比洛芬、托芬那酸、保泰松、苄达明(benzydamide)、阿司匹林、水杨酸或上述中的任一种的药学上可接受的盐或衍生物。

MMP抑制剂也可以是一种抗微生物剂。抑制MMP的抗微生物剂的说明性实例是强力霉素。已知抑制MMP的抗微生物剂的其他非限制性实例包括四环素、米诺环素以及这类抗微生物剂的衍生物。MMP抑制剂还可以是马马司他(marimstat)或西马司他(cipemastat)。

用于配制品中的增强剂可以包含一种抗微生物剂。

抗微生物剂包括减少或抑制伤口或其他组织损伤部位中的微生物的繁殖或增殖的任何试剂。用于本发明的抗微生物剂可以包括能够抑制革兰氏阴性细菌的繁殖或增殖的试剂，革兰氏阴性细菌是如奈瑟氏菌(例如脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌)和不动杆菌属或杆菌，如拟杆菌属(例如脆弱拟杆菌)、博德特氏菌(例如百日咳博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌)、布鲁氏菌(例如马尔他布布鲁氏菌、流产布鲁氏菌、猪布鲁氏菌)、弯曲杆菌(例如空肠弯曲杆菌、大肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌)、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、埃希氏菌属(例如大肠杆菌)、嗜血杆菌(例如流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌)、克雷伯氏菌属(例如肺炎克雷伯菌)、军团菌(例如嗜肺军团菌)、巴斯德氏菌属(例如耶尔森巴斯德氏菌、多杀巴斯德氏菌)、变形杆菌属(例如奇异变形杆菌、普通变形杆菌)、假单胞菌属(例如铜绿假单胞菌、类鼻疽假单胞菌、梅勒假单胞菌)、沙门氏菌属(例如肠炎沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、薛氏沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、或2,500其他血清型中的任一种)、沙雷氏菌属(例如粘质沙雷氏菌、液化沙雷氏菌)、志贺氏杆菌(例如宋内氏志贺氏菌、弗氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌)、弧菌属(例如霍乱弧菌、埃尔托弧菌)、以及耶尔森氏菌属(例如小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌)。用于本发明的抗微生物剂可以包括能够抑制革兰氏阳性细菌的繁殖或增殖的试剂，革兰氏阳性细菌是如链球菌属(例如，肺炎链球菌、草绿色链球菌、粪肠球菌、化脓性链球菌)、葡萄球菌属(例如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、白色葡萄球菌)以及杆菌，如放线菌属(例如衣氏放线菌)、芽孢杆菌属(例如蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、炭疽芽孢杆菌)、梭菌属(例如肉毒梭菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌)、棒状杆菌属(例如白喉棒状杆菌)、李斯特氏菌属以及普罗威登斯菌属。用于本发明的抗微生物剂可以包括能够抑制未在此列出但本领域中已知的其他细菌的繁殖或增殖的试剂。

用于本发明的抗微生物剂可以包括通过抑制细胞壁合成具有抗菌作用的试剂，如3-内酰胺和万古霉素，优选地青霉素类，如氮卓脒青霉素(amdinocillin)、氨苄西林、阿莫西林、阿洛西林、巴氨西林、苄星青霉素G、羧苄青霉素、氯唑西林、环己西林、双氯西林、甲氧西林、美洛西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G、青霉素V、哌拉西林以及替卡西林；头孢菌素类，如第一代药物头孢羟氨苄、头孢唑林、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢匹林以及头孢拉定，第二代药物头孢克洛、头孢羟唑、头孢尼西、头孢雷特、头孢西丁以及头孢呋辛，或第三代头孢菌素、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢替坦、头孢他啶、头孢唑肟、头孢曲松以及拉氧头孢；碳青霉烯类如亚胺培南；或单环内酰胺类如氨曲南。

用于本发明的抗微生物剂可以包括通过抑制蛋白质合成具有抗菌作用的试剂，如氯霉素；其他四环素类，优选地地美环素、强力霉素、美他环素、二甲胺四环素以及土霉素；氨基糖苷类，如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、巴龙霉素、壮观霉素、链霉素以及妥布霉素；多粘菌素类如粘菌素、甲磺酸粘菌素(colistimathate)和多粘菌素B，以及红霉素和林可霉素；具有通过抑制核酸合成起作用的抗微生物剂，特别是磺胺类如磺胺西汀、磺胺嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺甲噁唑、磺胺甲二唑以及磺胺吡啶；甲氧苄啶、喹诺酮类、新生霉素、乙胺嘧啶以及利福平。

用于本发明的抗微生物剂可以包括能够抑制以下各项的繁殖或增殖的试剂：引起龋齿的细菌(例如变形链球菌、乳杆菌属)、引起牙周病的细菌(例如伴放线菌放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、微小消化链球菌、弯曲杆菌(梭菌属)、葡萄球菌、福赛斯拟杆菌)、引起牙槽炎等的细菌(例如葡萄球菌属、放线菌属和芽孢杆菌属)、以及引起根尖周病变的细菌(例如螺旋体和所有上述)。

抗微生物剂的实例包括醇。醇的说明性实例是乙二醇。用于在配制品中使用的抗微生物剂的其他非限制性实例包括乙二醇、木糖醇、甘露醇或山梨糖醇。

抗微生物剂的其他实例包括以下类别：氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类。用于在配制品中使用的抗微生物剂可以选自任何常见抗生素类别如青霉素类、头孢菌素类、多粘菌素类、喹诺酮类或磺酰胺类。

如在此所定义的“四环素类”通常是指当在所需血清水平阈值以上给药时具有抗生素活性的如上所述的四环素或任何四环素衍生物，如本领域中所已知。

四环素以及5-OH(氧四环素，例如土霉素)和7-C1(氯四环素，例如金霉素(Aureomycin))衍生物存在于自然界中，并且全部是众所周知的抗生素。半合成衍生物如7-二甲基氨基-四环素(二甲胺四环素)和6a-脱氧-5-羟基-四环素(强力霉素)也是已知的四环素抗生素。天然四环素可进行修改而不损失其抗生素特性，但是某些结构元素必须被保留以便做到这一点。优选的抗生素四环素包括四环素、强力霉素、地美环素、二甲胺四环素和赖甲环素。

用于在本发明中使用的抗微生物剂可以包括局部抗微生物剂，如含有治疗剂的贵金属，局部抗菌剂，包括但不限于聚维酮-碘、碘伏(betadine)、次氯酸钠、乙酸、阳离子抗菌剂(如十六烷基三甲基溴化铵、氯己定和烷基二甲基苄基氯化铵)、过氧化氢、治疗性蛋白质、以及局部或全身性抗生素，包括来自以下类别的抗生素：安莎霉素类、碳头孢烯类(carbacephem)、碳青霉烯类、糖肽类、单环内酰胺类、多肽类、喹诺酮类、磺酰胺类、青霉素类、头孢菌素、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类以及林可酰胺类，以及来自包括以下各项的组的抗生素：克林霉素、红霉素、四环素、甲硝唑、莫匹罗星、氟替卡松、杆菌肽锌、硫酸新霉素以及硫酸多粘菌素B。

用于在本发明中使用的抗微生物剂可以是抗生素，如庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、链霉素、妥布霉素、巴龙霉素、格尔德霉素、除莠霉素、氯碳头孢、厄他培南、多尼培南、亚胺培南、西司他丁、美罗培南、头孢羟氨苄、头孢唑林、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢克洛、头孢羟唑、头孢西丁、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼、头孢妥仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢他啶、头孢布烯(ceffibuten)、头孢唑肟、头孢曲松、头孢地尼、头孢吡肟、替考拉宁、万古霉素、阿奇霉素、克拉霉素、cirithromycin、红霉素、罗红霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素、壮观霉素、氨曲南、阿莫西林、氨苄西林、阿洛西林、羧苄西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素、哌拉西林、替卡西林、杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B、环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星(lomeflxacin)、莫西沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、磺胺米隆、百浪多息、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺、柳氮磺吡啶、磺胺异噁唑、甲氧苄啶、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、地美环素、强力霉素、米诺环素、土霉素、四环素、胂凡纳明、氯霉素、克林霉素、林可霉素、乙胺丁醇、磷霉素(fusfomycin)、夫西地酸、呋喃唑酮、异烟肼、雷奈佐利(linezoilid)、甲硝唑、莫匹罗星、呋喃妥因、平板霉素(platensimycin)、吡嗪酰胺、奎奴普丁、达福普汀、利福平(rifampin)、利福平(rifampicin)、替硝唑等。

用于在配制品中使用的抗微生物剂可以是一种局部抗菌剂。局部抗菌剂的非限制性实例包括聚维酮-碘、碘伏、次氯酸钠、乙酸、阳离子抗菌剂以及过氧化氢。

抗微生物剂可以是一种肽。用于在配制品中使用的肽可以是一种糖肽。“糖肽”通常是指寡肽(例如七肽)抗生素，其特征在于任选地被糖基团取代的一个多环肽核心，如万古霉素。包括在用于在配制品中使用的这类抗微生物剂中的糖肽的非限制性实例可见于“糖肽分类、发生和发现”，雷蒙德C.拉奥(RaymondC.Rao)和路易丝W.克兰德尔(Raymond C.Rao)，(“生物活性剂和药物科学(Bioactive agents and the Pharmaceutical Sciences)”第63卷，由罗摩克里希纳卡拉占纳(RamakrishnanNagarajan)编辑，由马卡德克公司(MarcalDekker，Inc.)出版。糖肽的另外实例披露于美国专利号4,639,433；4,643,987；4,497,802；4,698,327；5,591,714；5,840,684；和5,843,889；EP 0 802 199；EP 0 801 075；EP 0 667 353；WO 97/28812；WO 97/38702；WO 98/52589；WO 98/52592；以及美国化学会志(J.Amer.Chem.Soc)，1996，118，13107-13108；美国化学会志，1997，119，1204112047；和美国化学会志，1994，116，4573-4590中。非限制性代表性糖肽包括被鉴别为以下的那些：A477、A35512、A40926、A41030、A42867、A47934、A80407、A82846、A83850、A84575、AB-65、阿克他宁(Actaplanin)、艾替诺丁(Actinoidin)、阿达星(Ardacin)、阿伏帕星、远青霉素(Azureomycin)、巴尔赫霉素(Balhimyein)、Chloroorientiein、Chloropolysporin、Decaplanin、-去甲基万古霉素、伊瑞霉素(Eremomycin)、Galacardin、Helvecardin、伊肽菌素(Izupeptin)、凯勃孢囊菌素(Kibdelin)、LL-AM374、甘露糖肽素(Mannopeptin)、MM45289、MM47756、MM47761、MM49721、MM47766、MM55260、MM55266、MM55270、MM56597、MM56598、OA-7653、Orenticin、寡子菌素(Parvodicin)、瑞斯托菌素(Ristocetin)、瑞斯托霉素(Ristomycin)、Synmonicin、替考拉宁(Teicoplanin)、UK-68597、UD-69542、UK-72051、万古霉素等。如在此所用的术语“糖肽”或“糖肽类抗生素”还旨在包括以上所披露的在其上不存在糖部分的一般类别的糖肽,即，糖肽的糖苷配基系列。例如，通过温和水解除去附接至万古霉素上的苯酚的二糖部分得到万古霉素糖苷配基。还包括在术语“糖肽类抗生素”的范围之内的是以上所披露的一般类别的糖肽的合成衍生物，包括烷基化和酰化衍生物。另外，在该术语范围内的是以下糖肽：这些糖肽已经以与万古胺类似的方式进一步附接有另外糖残基，尤其是氨基糖苷。

如在此所用的术语“脂质化糖肽”通常确切地指已经被合成修饰为含有一个脂质取代基的那些糖肽抗生素。如在此所用，术语“脂质取代基”通常是指含有5个或更多个碳原子、优选地10至40个碳原子的任何取代基。脂质取代基可以任选地含有从1至6个选自卤代、氧、氮、硫和磷的杂原子。脂质化糖肽抗生素是本领域中熟知的。参见，例如美国专利号5,840,684、5,843,889、5,916,873、5,919,756、5,952,310、5,977,062、5,977,063、EP 667,353、WO 98/52589、WO 99/56760、WO 00/04044、以及WO 00/39156。

抗微生物剂可以是一种抗病毒剂，包括但不限于非核苷逆转录酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和核苷类似物逆转录酶抑制剂。

用于配制品中的增强剂可以包含一种细胞因子。用于在配制品中使用的细胞因子可以包括促进上皮再形成、血管生成、基质产生和瘢痕形成的细胞信号传导蛋白。细胞因子的一个说明性实例是PDGF。细胞因子的其他非限制性实例包括IL-la、IL-113、25IL-2、IL-3、I-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、IL-23、IFN-a、IFN-13、MIP-la、MIP-113、TGF-13、TNFa、以及TNF-13。趋化因子的实例包括BCA1/BLC、BRAK、趋化因子CC-2、CTACK、CXCL-16、ELC、ENA、ENA-70、ENA-74、ENA-78、嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)、Exodus-2、Frac-30talkine、GCP-2、GRO、GROα(MGSA)、GRO-β、GRO-γ、HCC-1、HCC-4、1-309、IP-10、1-TAC、LAG-1、LD78-β、LEC/NCC-4、LL-37、淋巴细胞趋化因子、MCP、MCAF(MCP-1)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MDC、MDC、MDC-2、MDC-4、MEC/CCL28、MIG、MIP、MIP-1α、35MIP-1β、MIP-1δ、MIP-3/MPIF-1、MIP-3α、MIP-3β、MIP-4(PARC)、MIP-5、NAP-2、PARC、PF-4、RANTES、RANTES-2、SDF-1α、SDF-1β、TARC、以及TECK。细胞因子可以是一种生长因子。生长因子的实例包括人双调蛋白、人血管生成蛋白、人ACE、40人血管生成素(Angiogenin)、人血管生成素(Angiopoietin)、人血管抑素、人乙胞素、人BMP、人BMP-13/CDMP-2、人BMP-14/CDMP-1、人BMP-2、人BMP-3、人BMP-4、人BMP-5、人BMP-6、人BMP-7、人BMP-8、人BMP-9、45人集落刺激因子、人flt3-配体、人GCSF、人GM-CSF、人M-CSF、人结缔组织生长因子CTGF、人Cripto-1、人隐蔽、人ECGF、人EGF、人EG-VEGF、人促红细胞生成素、人胎球蛋白、人FGF、人50FGF-1、人FGF10、人FGF-16、人FGF-17、人FGF-18、人FGF-19、人FGF2、人FGF-20、人FGF-3、人FGF-4、人FGF-5、人FGF-6、人FGF-7/KGF、人FGF-8、人FGF-9、人FGF-酸性、人FGF-碱性、人55GDF-11、人GDF-15、人生长激素释放因子、人HB-EGF、人调蛋白、人HGF、人IGF、人IGF-I、人IGF-II、人抑制素、人KGF、人LCGF、人LIF、人混杂生长因子、人MSP、人Myo-60抑制素、人肌生成抑制蛋白前肽、人神经生长因子、人制瘤素M、人PD-ECGF、人PDGF、人PDGF(AA同二聚体)、人PDGF(AB异二聚体)、人PDGF(BB同二聚体)、人PDGF(CC同二聚体)、人PIGF、人PIGF、65人PIGF-1、人PIGF-2、人SCF、人SMDF、人干细胞生长因子、人SCGFα、人SCGF-β、人血小板生成素、人转化生长因子、人TGF-α、人TGF-β、以及人VEGF。未在此列出但本领域中描述的任何细胞因子和在本发明的时间未知的但在本领域中未来描述的任何细胞因子通过引用结合在此。

用于配制品中的增强剂可以包括一种伤口愈合剂。用于在本发明中使用的伤口愈合剂包括具有促进伤口愈合、组织修复和/或组织再生能力的任何试剂。伤口愈合剂包括但不限于皮肤病学活性剂，包括用于治疗伤口愈合、炎症、痤疮、银屑病、皮肤老化、皮肤癌、脓疱病、疱疹、水痘、皮炎、疼痛、瘙痒、以及皮肤刺激的试剂。这类皮肤病学活性剂的非限制性实施例包括氢化可的松、地塞米松、泛醇、苯酚、盐酸四环素、酵母、己雷琐辛、核纤层蛋白、激动素、倍他米松、曲安奈德、肤轻松、甲基泼尼松龙、氨苯砜、柳氮磺吡啶、间苯二酚、水杨酸、过氧化苯甲酰、红霉素-过氧化苯甲酰、红霉素、克林霉素、莫匹罗星、灰黄霉素、唑类(如咪康唑、益康唑、伊曲康唑、氟康唑和酮康唑)、环吡酮、烯丙胺类(如萘替芬和特比萘芬)、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、苯佐卡因、利多卡因、二丁卡因、盐酸普莫卡因、水杨酸甲酯、樟脑、薄荷醇、resocinol、以及维生素类(如生育酚和乙酸生育酚)。

用于在配制品中使用的伤口愈合剂可以包括促进由内皮细胞内源性产生一氧化氮的试剂。用于在本发明中使用的伤口愈合剂还可以包括供给、转移或释放一氧化氮、提高一氧化氮的内源水平、刺激一氧化氮的内源合成、或充当一氧化氮合酶的底物或抑制平滑肌细胞的增殖的任何生物活性剂。这类伤口愈合剂的非限制性实例是氨基氧类、氧化呋咱类、亚硝基硫醇、硝酸酯和花色素苷；核苷，如腺苷；和核苷酸，如腺苷二磷酸(ADP)和腺苷三磷酸(ATP)；神经递质/神经调节物质，如乙酰胆碱和5-羟色胺(血清素/5-HT)；组胺和儿茶酚胺，如肾上腺素和去甲肾上腺素；脂质分子，如鞘氨醇-1-磷酸酯和溶血磷脂酸；氨基酸，如精氨酸和赖氨酸；肽如缓激肽、P物质和钙基因相关肽(CGRP)；以及蛋白质，如胰岛素、血管内皮生长因子(VEGF)和凝血酶。这类伤口愈合剂还可以包括结合一氧化氮释放官能团的任何化合物(例如聚合物)。结合一氧化氮释放官能团的化合物的非限制性实例是牛或人血清白蛋白的S-亚硝基硫醇衍生物(加合物)并且如披露于例如美国专利号5,650,447中。

用于在配制品中使用的伤口愈合剂可以包括针对内皮祖细胞(PEC)的已知表面标志物的单克隆抗体。循环内皮祖细胞是沿着从(骨髓)单核细胞至成熟内皮细胞的发育路径的某种方式。已知结合并且由此捕获这类抗体分子的小蛋白质基序(如细菌A蛋白的B结构域和G蛋白的功能等效区)可以共价附接至聚合物并且充当配体以便通过Fc区从宿主的血流中捕获抗体。因此，可以使用A蛋白或G蛋白功能区附接至聚合物的抗体类型是含有Fc区的那些。被捕获的抗体将进而结合并且保持被捕获的内皮祖细胞于聚合物表面附近，而其他活化因子如缓激肽活化内皮祖细胞。

已报道修饰内皮细胞表面的互补决定簇(CD)包括CD31、CD34+、CD34-、CD102、CD105、CD106、CD109、CDwl30、CD141、CD142、CD143、CD144、CDwl45、CD146、CD147、以及CD166。这些细胞表面标志物可以具有变化的特异性并且针对特定细胞/发育类型/阶段的特异性程度在许多情况下没有被完全表征。此外，这些细胞标志物分子(针对其已产生了抗体)将尤其与相同谱系的细胞上的CD重叠(就抗体识别而言)：在内皮细胞的情况下是单核细胞。CD 106、142和144已被报道标记具有某种特异性的成熟内皮细胞。当前已知CD34对内皮祖细胞具有特异性，并且因此当前优选用于从配制品被植入部位的循环血液中捕获内皮祖细胞。这类抗体的实例包括单链抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab片段、IgA、IgG、IgM、IgD、IgE和人源化抗体，如在本领域中所已知。

用于在本发明中使用的伤口愈合剂可以包括伤口愈合细胞。可以用于配制品中的伤口愈合细胞的非限制性实例包括例如周细胞和内皮细胞，包括内皮祖细胞。

可以用于配制品中的另一类伤口愈合细胞是炎性愈合细胞。伤口愈合细胞可以被直接移植入到配制品中或通过这类细胞的配体如抗体和更小分子配体(无论是生物学的还是合成的)被募集至伤口部位，这些配体特异性地结合各种“细胞粘附分子”(CAM)。这类配体的非限制性实例是ICAM-1(CD54抗原)；ICAM-2(CD102抗原)；ICAM-3(CD50抗原)；ICAM-4(CD242抗原)；和ICAM-5；血管细胞粘附分子(VCAM)，如VCAM-1(CD106抗原)；神经细胞粘附分子(NCAM)，如NCAM-1(CD56抗原)；或NCAM-2；血小板内皮细胞粘附分子PECAM，如PEC AM-1(CD31抗原)；白细胞内皮细胞粘附分子(ELAM)，如LECAM-1；或LECAM-2(CD62E抗原)等。

在另一方面，伤口愈合剂包括细胞外基质蛋白，这些蛋白是可以分散在配制品中的大分子。用于此目的的有用细胞外基质蛋白的实例包括例如，通常与蛋白质(蛋白聚糖)连接的糖胺聚糖，和纤维状蛋白(例如，胶原、弹性蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)。还可以使用细胞外蛋白质的仿生学。这些通常是非人的但生物相容的糖蛋白，如藻酸盐和壳聚糖的衍生物。还可以使用这类细胞外基质蛋白或其仿生学的特定片段的伤口愈合肽。

用于在配制品中使用的伤口愈合剂包括使能愈合的药物。这类使能愈合药物包括例如抗炎剂以及某些愈合促进剂，例如像维生素A和脂质过氧化的合成抑制剂。

用于在配制品中使用的伤口愈合剂可以包括抗炎剂。抗炎剂包括减少炎症的任何试剂。抗炎剂的非限制性实例包括镇痛剂(例如，NSAIDS和水杨酸酯)、抗风湿药、胃肠药、痛风制剂、激素(糖皮质激素)、鼻制剂、眼制剂、耳制剂(例如，抗生素和类固醇组合)、呼吸系统药物和皮肤及粘膜药物。参见，医师案头参考(Physician's Desk Reference)，2005版，通过引用结合在此。抗炎剂的说明性实例是地塞米松。可替代地，抗炎剂可以包括西罗莫司(雷帕霉素)，它是从吸水链霉菌(Steptomyces hygroscopicus)分离的一种三烯大环内酯类抗生素。

用于在本发明中使用的伤口愈合剂还可以包含一种用于促进新血管形成和血管生成的药用组合物。一种用于促进新血管形成和血管生成的药用组合物可以包含一种类固醇。适合用于在本发明中使用的类固醇将优选地在用于配制品中的剂量下不具有任何毒性或不利副作用。类固醇的非限制性实例包括血管生成抑制类固醇如四氢类固醇，包括四氢皮质醇(THF)、四氢皮质酮(THE)和四氢皮甾酮(tetrahydrocortexolone)(THS)。

用于在本发明中使用的伤口愈合剂可以包含一种促进前胶原的表达的药用组合物。促进前胶原的表达的药用组合物可以包括一种合成代谢类固醇。用于在本发明中使用的优选合成代谢类固醇将增加胶原密度、增加拉伸强度并且增加疤痕组织的细胞性。用于在配制品中使用的合成代谢类固醇的说明性实例是氧甲氢龙(Oxandrolone)。配制用于给药的组合物的方法是本领域、特别是药物和临床医学领域中熟知的。参见，例如雷明登氏：药物科学与实践(Remington,The Science and Practice of Pharmacy)，阿方索R.真纳罗(Alfonso R.Gennaro)编辑，利平科特.威廉姆斯.威尔金斯(出版公司)。

用于在本发明中使用的伤口愈合剂还可以包含一种糖皮质激素受体拮抗剂。

本领域中已知糖皮质激素增加伤口感染的风险并且延迟开放性伤口的愈合并抑制或减少内源性胶原产生。糖皮质激素的作用可以通过一种糖皮质激素受体拮抗剂逆转。

用于在本发明中使用的糖皮质激素拮抗剂可以包括一种类固醇抗糖皮质激素。各种类固醇抗糖皮质激素可以通过修饰已知糖皮质激素如皮质醇的基本结构，即类固醇主链的改变形式来获得。皮质醇的结构例如可以按多种方式进行修饰。用于产生糖皮质激素拮抗剂的皮质醇类固醇主链的结构修饰的两种最常见的已知种类包括羟基的修饰和侧链的修饰(参见，例如列斐伏尔(Lefebvre)，类固醇生物化学杂志(J.Steroid Biochem.)33:557-563，1989)。

可以用于配制品中的类固醇糖皮质激素受体拮抗剂的非限制性实例包括如描述于美国专利号5,929,058中的雄激素型类固醇化合物,以及在以下中所披露的化合物：美国专利号4,296,206；4,386,085；4,447,424；4,477,445；4,519,946；4,540,686；4,547,493；4,634,695；4,634,696；4,753,932；4,774,236；4,808,710；4,814,327；4,829,060；4,861,763；4,912,097；4,921,638；4,943,566；4,954,490；4,978,657；5,006,518；5,043,332；5,064,822；5,073,548；5,089,488；5,089,635；5,093,507；5,095,010；5,095,129；5,132,299；5,166,146；5,166,199；5,173,405；5,276,023；5,380,839；5,348,729；5,426,102；5,439,913；5,616,458，5,696,127以及6,303,591。用于在配制品中使用的这类类固醇糖皮质激素受体拮抗剂可以包括皮甾酮、地塞米松-氧杂环丁酮、19-去甲基脱氧皮质酮、19-去甲基孕酮、皮质醇-21-甲磺酸酯；甲磺酸地塞米松-21、II(3-(4-二甲基氨基乙氧基苯基)-17a丙炔基-17(3-羟基-4,9雌甾二烯-3-酮(RU009)以及17(3-羟基-17a-19-(4-甲基苯基)雄甾-4,9(II)二烯-3-酮(RU044)。

类固醇抗糖皮质激素的其他非限制性实例披露于范坎彭(Van Kampen)等人(2002)欧洲药理学杂志(Eur.J.Pharmacol.)457(2-3):207、WO 03/043640、EP 0 683 172 Bl和EP 0 763 541 Bl中，其各自通过引用结合在此。

用于在配制品中使用的伤口愈合剂可以包含一种具有修饰的类固醇主链的糖皮质激素激动剂，该主链包含II-(3羟基基团的取代。这种类别包括天然抗糖皮质激素，包括皮甾酮、孕酮和睾酮衍生物以及合成组合物，如米非司酮(列斐伏尔等人，同上)。本发明的实施例包括类固醇主链衍生物，因为这些化合物缺乏孕酮受体(PR)结合活性(阿加瓦尔(Agarwal)，FEBS 217:221-226，1987)。另一个实施例包括一种II-(3苯基-氨基二甲基类固醇主链衍生物，即米非司酮，其是有效的抗糖皮质激素和抗孕酮剂两者。这些组合物充当可逆地结合类固醇受体拮抗剂。例如，当结合II-(3苯基-氨基二甲基类固醇时，类固醇受体被维持处于不能结合其天然配体(如在糖皮质激素受体的情况下皮质醇)的构象(卡德蓬(Cadepond)，1997，同上)。

合成II-(3苯基-氨基二甲基类固醇包括米非司酮，还被称为RU486，或17-(3-羟基-II-(3-(4-二甲基-氨基苯基)17-a-(l-丙炔基)雌甾-4,9-二烯-3-酮)。米非司酮已被证明是孕酮受体和糖皮质激素(糖皮质激素受体)受体两者的强力拮抗剂。显示出具有糖皮质激素受体拮抗作用的另一种II-(3苯基-氨基二甲基类固醇包括RU009(RU39.009)，II-|3-(4-二甲基-氨基乙氧基苯基)-17-a(丙炔基-17(3-羟基-4,9-雌甾二烯-3-酮)(参见博凯尔(Bocquel)，类固醇生物化学和分子生物学杂志(J.Steroid Biochem.Molec.Biol.)45:205-215，1993)。与RU486相关的另一种糖皮质激素受体拮抗剂是RU044(RU43.044)17-|3-羟基-17-a-19-(4-甲基-苯基)-雄甾-4,9(II)-二烯-3-酮)(博凯尔，1993，同上)。还参见托伊奇(Teutsch)，类固醇(Steroids)38:651-665，1981；美国专利号4,386,085和4,912,097。

一个实施例包括含有基本糖皮质激素类固醇结构的组合物，这些组合物是不可逆的抗糖皮质激素。这类化合物包括皮质醇的a-酮基-甲磺酸酯衍生物，包括皮质醇-21-甲磺酸酯(4-孕烯-II-(3,17-a,21-三醇-3,20二酮-21-甲烷-磺酸酯和地塞米松-21-甲磺酸酯(16-甲基-9a-氟-I,4-孕甾二烯-II|3,17-a,21-三醇-3,20-二酮-21-甲烷-磺酸酯)。参见西蒙斯(Simons)，类固醇生物化学杂志24:25-32，1986；梅西埃(Mercier)，类固醇生物化学杂志25:11-20，1986；美国专利号4,296,206。

可通过17-(3侧链的各种结构修饰获得的类固醇抗糖皮质激素也用于本发明的方法中。这种类别包括合成抗糖皮质激素如地塞米松-氧杂环丁酮，各种17,21-缩丙酮衍生物和地塞米松的17-|3-甲酰胺衍生物(列斐伏尔，1989，同上；卢梭(Rousseau)，自然(Nature)279:158-160，1979)。

在本发明的不同实施例中使用的糖皮质激素受体拮抗剂包括任何类固醇主链修饰，该修饰实现由一种糖皮质激素受体-激动剂相互作用引起的生物反应。类固醇主链拮抗剂可以是皮质醇的任何天然或合成变型，如缺少C-19甲基基团的肾上腺类固醇，如19-去甲基脱氧皮质酮和19-去甲基孕酮(怀恩(Wynne)，内分泌学(Endocrinology)107:12781280,1980)。

一般来说，II-(3侧链取代基并且特别是该取代基的大小可以在决定类固醇的抗糖皮质激素活性的程度中起关键作用。在类固醇主链的A环中的取代也可能是重要的。与含有17-丙炔基侧链的化合物相比，17-羟基丙烯基侧链通常降低抗糖皮质激素活性。

本领域中已知并且适于本发明的实践的另外糖皮质激素受体拮抗剂包括21-羟基-6,19-氧化孕酮(参见维森特(Vicent)分子药理学(Mol.Pharm.)52:749-753，1997)、Org31710(参见水谷(Mizutani)，类固醇生物化学和分子生物学杂志42(7):695-704，1992)、RU43044、RU40555(参见金姆(Kim)，类固醇生物化学和分子生物学杂志67(3):21322，1998)、RU28362、以及ZK98299。

非类固醇糖皮质激素受体拮抗剂的非限制性实例包括克霉唑；N(三苯基甲基)咪唑；N-([2-氟-9-苯基]芴基)咪唑；N-([2-吡啶基]二苯基甲基)咪唑；N(2[4,4',4"-三氯三苯甲基]氧基乙基)吗啉；l-(2[4,4',4"-三氯三苯甲基]氧基乙基)-4(2羟乙基)哌嗪马来酸氢酯；N-([4,4',4"]-三氯三苯甲基)咪唑；9-(3-巯基-I,2,4三唑基)9-苯基-2,7-二氟芴酮；I-(2-氯三苯甲基)-3,5二甲基吡唑；4(吗啉代甲基)-A-(2吡啶基)二苯基甲醇；5-(5-甲氧基-2-(N-甲基氨甲酰基)苯基)二苯并环庚醇；N-(2-氯三苯甲基)-L-脯氨醇乙酸酯；I-(2-氯三苯甲基)-2-甲基咪唑；1(2氯三苯甲基)-I,2,4-三唑；I,S-双(4,4',4"-三氯三苯甲基)-I,2,4三唑-3-硫醇；以及N((2,6二氯-3甲基苯基)二苯基)甲基咪唑(参见美国专利号6,051,573)；美国专利号5,696,127和6,570,020中所披露的糖皮质激素受体拮抗剂化合物；美国专利申请20020077356中所披露的GR拮抗剂化合物，布兰德利(Bradley)等人，药物化学杂志(J.Med.Chem.)45，2417-2424(2002)中所披露的糖皮质激素受体拮抗剂，例如，4a(S)-苄基-2(R)-氯乙炔基-l,2,3,4,4a,9,10,10a(R)-八氢-菲-2,7-二醇(“CP 394531”)和4a(S)-苄基-2(R)-丙-l-炔基-l,2,3,4,4a,9,10,10a(R)-八氢-菲-2,7-二醇(“CP 409069”)；霍伊博格(Hoyberg)等人，国际神经精神药理学杂志(Int'l J.of Neuro-psychopharmacology)5:增刊1，S148(2002)中所披露的化合物(II|3,17|3)-II-(l,3-苯并二氧杂环戊-5基)-17-羟基-17-(l-丙炔基)雌甾-4,9-二烯-3-酮(“ORG 34517”)；PCT国际申请号WO 96/19458中所披露的化合物，该申请描述非类固醇化合物，这些化合物是针对类固醇受体的高亲和力、高度选择性拮抗剂，如6-取代的-l,2-二氢-N保护的-喹啉；和一些K阿片配体，如K阿片化合物强啡肽-1,13二酰胺，1150,488(反式(IR,2R)-3,4-二氯-N-甲基-N-[2-(l-吡咯烷基)环己基苯乙酰胺)、布马佐辛和乙基酮基环唑辛；以及如埃文斯(Evans)等人，内分泌学，141:22942300(2000)中所披露的非特异性阿片受体配体，纳洛酮。

用于在配制品中使用的非类固醇糖皮质激素受体拮抗剂也可以是针对糖皮质激素受体的一种抗体。

用于在本发明中使用的增强剂可以包括一种治疗性蛋白。用于在本发明中使用的治疗性蛋白质可以包括具有促进伤口愈合、组织修复或组织再生能力的任何肽、多肽或蛋白质。

治疗性蛋白包括酶、血液因子、凝血因子、胰岛素、促红细胞生成素、干扰素(包括干扰素-a、干扰素-(3)、蛋白C、水蛭素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、生长激素、表皮生长因子、白蛋白、血红蛋白、乳铁蛋白、血管紧张素转化酶、葡糖脑苷脂酶、人生长激素、VEGF、抗体、以及单克隆抗体。

具体生长因子包括但不限于选自以下家族的生长因子：如转化生长因子-β(TGF-(3)、骨形态发生蛋白(BMP)、神经营养因子(NGF、BDNF和NT3)、成纤维细胞生长因子(FGF)(例如，酸性成纤维细胞生长因子(aFGF或FGF-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF或FGF-2))、粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子、血小板源性生长因子(PDGF)、促红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)、肌生成抑制蛋白(GDF-8)、生长分化因子-9(GDF9)、表皮生长因子(EGF)、以及肝细胞生长因子(HGF)。

用于在本发明中使用的增强剂可以包含用于递送至宿主的细胞的一种核酸或转基因。这种增强剂可以进一步包含一种病毒载体。

根据本发明通过病毒递送至细胞的核酸可以被稳定地整合到该细胞的基因组中或者可以在该细胞中维持为单独的附加型核酸区段。虽然可以使用整合型病毒载体，但对于伤口愈合优选的是不会传播病毒基因组或转基因至许多代的子细胞的非整合型系统。以此方式，转基因产物在伤口愈合过程期间表达，并且随着转基因在子代中被稀释，所表达的转基因产物的量减少。

在本发明的某些实施例中，腺病毒或腺病毒源性病毒被用于引入一种或多种转基因。本发明所使用的病毒载体的实例包括完整腺病毒、在病毒颗粒的产生中需要辅助质粒或病毒的复制缺陷型腺病毒载体、以及天然趋向性被修饰或消除的腺病毒载体，包括含有一个靶向配体的腺病毒载体。在具体实施例中，靶向配体是与一种细胞表面受体如一种FGF受体反应的一种多肽。用于使用这些腺病毒载体的载体组合物、系统和方法在通过引用以其全部内容结合的WO98/40508中披露。描述可以用于本发明的组合物和方法中的腺病毒载体和其他病毒载体的其他参考文献包括以下：霍维茨(Horwitz)，第1679-1721页，腺病毒科及其复制(Adenoviridae and Their Replication)，菲尔茨(Fields)等人(编辑)病毒学(Virology)，第2卷(1990)纽约雷文出版社(Raven Press New York)；格拉哈姆(Graham)等人，第109-128页，分子生物学方法(Methods in MolecularBiology)，第7卷：基因转移和表达方案(Gene Transfer and Expression Protocols)，默里，E.(Murray,E.)(编辑)，胡玛纳出版社(Humana Press)，克利夫顿(Clifton)，新泽西州(N.J.)(1991)；米勒(Miller)等人(1995)美国实验生物学联合会会志(FASEB J.)9:190-199；施雷尔(Schreier)(1994)瑞士药学学报(Pharmaceutica Acta Helvetiae)68:145-159；柯里尔(Curiel)等人(1992)人类基因疗法(Hum.Gene Ther.)3:147-154；WO 95/00655；WO 95/16772；WO 95/23867；WO 94/26914；WO 95/02697；WO 95/25071)。各种基于腺病毒的质粒也可从商业来源获得，包括例如安大略省多伦多(Toronto,Ontario)的微毕克斯生物系统(Microbix Biosystems)(参见例如，微毕克斯产品信息表：用于腺病毒载体构建的质粒，1996)。

已开发各种腺相关病毒(AAV)载体系统用于多核苷酸递送。作为说明，适用于本发明的方法和组合物的AAV载体例如由于缺失rep和/或cap基因(这些基因是AAV复制所必需的)而优选地是在人中复制缺陷型的，并且插入其中的转基因(包括相关启动子和其他调节序列)优选地侧接AAV反向末端重复(ITR)序列。然后将所得到的重组AAV载体在一个包装细胞系中进行复制，从而反式提供缺失的AAV功能(即rep和/或cap基因)。AAV载体可以使用本领域中熟知的技术容易地构建。参见例如，美国专利号5,173,414和5,139,941；WO 92/01070；WO 93/03769；WO 96/17947；WO 99/11764；雷柏科斯基(Lebkowski)等人(1988)分子与细胞生物学(Molec.Cell.Biol.)8:3988-3996；萨穆尔斯基(Samulski)等人(1989)病毒学杂志(J.Virol.)63:3822-3828；文森特(Vincent)等人(1990)疫苗(Vaccines)90(冷泉港实验室出版社(ColdSpring Harbor Laboratory Press))；伯恩斯(Berns)，病毒学(Virology)，第1743-1764页(雷文出版社1990)；卡特(Carter)(1992)生物技术新见(Curr.Opin.Biotechnol.)3:533-539；穆济卡(Muzyczka)(1992)微生物学和免疫学当前主题(Curr.Top.Microbiol,and Immunol.)158:97-129；科廷(Kotin)(1994)人类基因疗法5:793-801；雪林(Shelling)和史密斯(Smith)(1994)基因疗法(Gene Therapy)1:165-169；和周(Zhou)等人(1994)实验医学杂志(J.Exp.Med.)179:1867-1875；查特吉(Chatterjee)等人(1995)纽约科学学术年报(Ann.NY Acad.Sci.)770:79-90；夫洛特(Flotte)等人(1995)基因疗法2:357-362；杜(Du)等人(1996)基因疗法3:254-261；卡普利特(Kaplitt)等人(1996)胸外科年报(Ann.Thorac.Surg.)62:1669-1676；佐罗图金(Zolotukhin)等人(1999)基因疗法6:973-985。

在其他实施例中，本发明可以采用重组逆转录病毒以用于引入转基因。产生适合于基因疗法的重组逆转录病毒病毒粒子的方法已经进行了广泛描述(参见例如，曼(Mann)等人(1983)细胞(Cell)33:153；尼古拉斯(Nikolas)和鲁宾斯坦(Rubenstein)，载体：分子克隆载体及其用途的调查(Vectors:A surveyof molecular cloning vectors and their uses)，罗德里格斯(Rodriquez)和丹哈特(Denhardt)(编辑)，斯通哈姆：巴特沃斯(Stoneham:Butterworth)，494-513，1988)。作为说明，逆转录病毒的慢病毒属(例如，人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)等)可以进行修饰以使得它们能够转导典型地非分裂的细胞(参见，例如，纳蒂尼(Naldini)等人(1996)科学(Science)272:263-267；梅木(Miyoshi)等人(1998)病毒学杂志72:8150-8157；以及布克查彻(Buchschacher)等人，(2000)血液(Blood)15:2499-2504；美国专利号6,013,516)。虽然基于HIV的慢病毒载体系统已经在这方面得到一定程度的关注，但最近已经开发了提供优于基于HIV的系统的潜在优点的其他慢病毒系统，如基于FIV的慢病毒载体系统(参见例如波斯切拉(Poeschla)等人(1998)自然医学(Nat.Med.)4:354-357；罗马诺(Romano)等人(2000)干细胞(Stem Cells)18:19-39以及其中综述的参考文献)。

适合用于与上述病毒载体构建体一起使用的包装细胞系可以容易地制备并且用于产生生产细胞系(还被称为病毒载体细胞系)以用于产生重组病毒颗粒。

本发明的组合物和方法可以采用编码不同类型的治疗剂的多种转基因。这些转基因可以编码促进组织修复、血管生成或再生的多种治疗剂，包括细胞外、细胞表面和细胞内蛋白和RNA。细胞外蛋白的实例包括生长因子、细胞因子、细胞外基质分子、治疗性蛋白、激素和激素的肽片段、细胞因子的抑制剂、肽生长和分化因子、白介素、趋化因子、干扰素、集落刺激因子以及血管生成因子。蛋白质的实例包括组织金属蛋白酶抑制剂，包括TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4。这类蛋白质的实例包括但不限于，TGF-β分子的超家族，包括TGF-β同种型和骨形态发生蛋白(BMP)如BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8、BMP9、BMP10、BMP11、BMP12或BMP13；软骨源性形态发生蛋白(CDMP)；潜伏TGF-β结合蛋白(LTBP)；角质形成细胞生长因子(KGF)；肝细胞生长因子(HGF)；血小板源性生长因子(PDGF)；胰岛素样生长因子(IGF)；成纤维细胞生长因子(FGF-1、FGF-2等)、表皮生长因子(EGF)；结缔组织生长因子(CTGF)；骨骼生长因子(SGF)；血管内皮生长因子(VEGF)；白血病抑制因子(LIF)；甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)；活化素；抑制素；白介素(IL)；巨噬细胞-集落刺激因子(M-CSF)；以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。在具体实施例中，多肽生长因子是例如PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、HGF、FGF-1、FGF-2、FGF-3、FGF-4、FGF-5、FGF-6、FGF-7、FGF-8、FGF-9、FGF-10、FGF-11、FGF-12、FGF-13、FGF-14、FGF-15、FGF-16、FGF-17、FGF-18、FGF-19、FGF-20、FGF-21、TGF-α、TGF-β1、TGF-β2或TGF-β3。

在另一个实施例中，转基因可以编码锌指结合蛋白、细胞存活因子(例如BCL-2)、转录因子、或单或多克隆抗体或结合炎症介质的可溶性受体。可以在本发明的实践中使用的激素包括，例如，生长激素(GH)和甲状旁腺激素(PTH)。细胞外蛋白的实例包括细胞外基质蛋白(或其片段)，如胶原、层粘连蛋白和纤连蛋白。细胞表面蛋白的实例包括细胞粘附分子的家族(例如整联蛋白、选择蛋白、Ig家族成员如N-CAM和L1、以及钙粘蛋白)；细胞因子信号传导受体如TGF受体和FGF受体；以及非信号传导共受体如β聚糖和多配体蛋白聚糖。细胞内RNA和蛋白质的实例包括信号转导激酶的家族、

细胞骨架蛋白如踝蛋白和粘着斑蛋白、细胞因子结合蛋白如潜伏TGF-β结合蛋白的家族、以及核反式作用蛋白，如转录因子、染色质相关蛋白和调控mRNA稳定性和转换的蛋白。

这些转基因还可以编码阻断病理过程、由此允许自然伤口愈合过程不受阻碍地发生的蛋白质。阻断因子的实例包括破坏RNA功能的核酶，和转基因，这些转基因例如编码破坏组织完整性的酶的组织抑制剂，例如，与关节炎相关的金属蛋白酶的抑制剂。

可以使用本领域的技术人员通常已知的多种分子生物学技术获得编码感兴趣的蛋白质或治疗剂的转基因。例如，可以使用具有基于已知核苷酸序列的序列的引物或探针来筛选cDNA或基因组文库。聚合酶链式反应(PCR)也可以用于产生编码感兴趣的治疗剂的转基因片段。可替代地，可以从商业来源获得转基因。感兴趣的核酸序列是本领域中和从Genbank数据库可获得的。

适用于本发明的转基因包括具有天然存在的核苷酸序列及其功能变体的那些。多肽可以由由于遗传密码的简并性而在序列上与天然存在的基因、cDNA或mRNA不相同的转基因核酸编码。变体和突变体可以包括氨基酸取代、添加或缺失。氨基酸取代可以是保守性氨基酸取代或消除非必需氨基酸的取代，如改变糖基化位点、磷酸化位点或乙酰化位点的取代，或通过一个或多个半胱氨酸残基的取代或缺失使错误折叠减至最少的取代。保守性氨基酸取代是保留多肽的一般特征(包括所取代的氨基酸的电荷、疏水性/亲水性和/或空间位阻)的那些取代。

用于在被设计用来改变所编码的蛋白质或多肽的功能特性的核苷酸序列中引入变化的技术是本领域中熟知的。这类修饰包括碱基的缺失、插入或取代，这些碱基导致氨基酸序列的变化。可以进行改变以便增加一种编码的蛋白质的活性、增加其生物稳定性或半衰期、改变其糖基化模式、赋予温度敏感性或改变蛋白质的表达模式等。对核苷酸序列的所有这类修饰均由本发明涵盖。

编码感兴趣的翻译或转录产物的转基因可以被重组工程化以便包含用于在病毒感染或摄取之后指导由在伤口处的修复细胞体内进行转基因序列的转录和/或翻译的必要元件。可以使用本领域的技术人员熟知的方法来构建含有编码与适当的转录/翻译控制信号可操作地相关的序列的蛋白质的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术和合成技术。参见，例如，描述于以下中的技术：萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1992，分子克隆：实验指南(Molecular Cloning,ALaboratory Manual)纽约冷泉港实验室和奥苏贝尔(Ausubel)等人，1989，分子生物学现代方法(Current Protocols in Molecular Biology)，跨学科的格林威利出版协会(Greene Publishing Associates&Wiley Interscience)，纽约。

编码感兴趣的治疗剂的转基因可以与各种不同的启动子/增强子元件可操作地相关。这些载体的表达元件可以在其强度和特异性方面不同。启动子可以处于与感兴趣的基因天然相关的启动子的形式，一种内源性启动子。可替代地，这些转基因可以定位在一种重组或异源启动子(即与该基因正常不相关的的启动子)的控制下。启动子可以是组成型抑或调控型的。例如，组织特异性启动子/增强子元件可以用来调控转移的DNA在特定细胞类型中的表达。已经描述和可以使用的表现出组织特异性的转录控制区的实例包括但不限于：弹性蛋白酶I基因控制区(斯威夫特(Swift)等人(1984)细胞38:639-646；奥尼茨(Ornitz)等人，冷泉港定量生物学专题论文集(Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.)(1986)50:399-409；麦克唐纳(MacDonald)(1987)肝脏病学(Hepatology)7:42S-51S)；胰岛素基因控制区(哈纳汉(Hanahan)，自然315:115-122，1985)；免疫球蛋白基因控制区(格罗斯切德(Grosschedl)等人，细胞38:647-658，1984；亚当斯(Adams)等人，自然318:533-538，1985；亚历山大(Alexander)等人，分子与细胞生物学7:1436-1444，1987)；白蛋白基因控制区(平克特(Pinkert)等人，基因与发育(Genes and Devel.)1:268-276，1987)；α-胎蛋白基因控制区(克伦劳夫(Krumlauf)等人，分子与细胞生物学5:1639-1648，1985；哈默(Hammer)等人，科学235:53-58，1987)；α-1-抗胰蛋白酶基因控制区(凯尔西(Kelsey)等人，基因与发育1:161-171，1987)；β-球蛋白基因控制区(玛格拉姆(Magram)等人，自然315:338-340，1985；卡尼尔斯(Kollias)等人，细胞46:89-94，1986)；髓磷脂碱性蛋白基因控制区(里德黑德(Readhead)等人，细胞48:703-712，1987)；肌球蛋白轻链-2基因控制区(沙尼(Shani)，自然314:283-286，1985)；以及促性腺激素释放激素基因控制区(梅森(Mason)等人，科学234:1372-1378，1986)。可以使用从生长在哺乳动物细胞中的病毒的基因组分离的启动子(例如，RSV、痘苗病毒7.5K、SV40、HSV、腺病毒MLP、人延伸因子-1α/HTLV(Hef-1α/HTLV)、MMTV LTR和CMV启动子)，以及通过重组DNA或合成技术产生的启动子。应理解，包含靶组织的细胞可以被病毒感染并且表达治疗性转基因。因此，可能有利的是使用含有靶组织特异性启动子/增强子元件的转基因，并且其在根据要求保护的方法和要求保护的组合物内利用这类元件的本发明的范围之内。因此，在某些实施例中，转基因(和/或含有转基因的病毒)将被构建为使在浸润修复细胞中的表达最大化，以便提供用于在靶向广泛组织中使用的通用转基因。在其他实施例中，转基因(和/或含有转基因的病毒)可以被构建成使靶组织细胞内的表达最大化。一个优选实施例利用能够在浸润修复细胞和靶组织细胞两者中高水平表达的转基因。

在一些情况下，启动子元件可以是组成型或诱导型启动子并且可以在适当条件下用于指导感兴趣的转基因的高水平或调控表达。在组成型启动子的控制下转基因的表达不要求特异性底物的存在来诱导基因表达并且将在细胞生长的所有条件下发生。相比之下，由诱导型启动子控制的转基因的表达响应于诱导剂的存在或不存在。

特定起始信号也被要求用于插入的蛋白质编码序列的足够翻译。这些信号包括ATG起始密码子和邻近序列。在整个编码序列包括起始密码子和邻近序列被插入到适当表达载体中的情况下，可能不需要额外的翻译控制信号。然而，在仅插入编码序列的一部分的情况下，必须提供外源翻译控制信号(包括ATG起始密码子)。另外，起始密码子必须与蛋白质编码序列的阅读框同期以便确保整个插入物的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以具有多种来源，天然的和合成的。表达的效率和控制可以通过包括转录衰减序列、增强子元件等来增强。

在本发明的范围之内的是，可以使用在一个或多个启动子的控制下在单个遗传构建体上组合的多个转基因。因此，可以采用不同转基因和基因构建体的几乎无限的组合，这受制于包含一个或多个转基因的病毒的核酸能力。某些基因组合可以被设计成或它们的使用可以另外导致实现对细胞刺激和再生的协同作用，任何和所有这类组合都旨在落入本发明的范围内。实际上，在科学文献中已经描述了许多种协同作用，这样使得本领域的普通技术人员将能够容易地鉴别可能的协同基因组合或甚至基因-蛋白质组合。

还在本发明的范围之内的是用于本发明的转基因包括编码重组融合蛋白的那些。融合蛋白可以由两个或更多个多肽或其片段组成。在某些实施例中，融合蛋白包含用一种免疫原性表位如FLAG表位(Kodak)标记的一种治疗性多肽，该表位可以用于通过本领域中已知的免疫学方法如ELISA、蛋白质印迹或放射性免疫测定来检查治疗性蛋白的表达和递送。在具体实施例中，融合蛋白含有一个靶向部分，该靶向部分被引入以便促进融合治疗性多肽有效摄取到靶细胞中。靶向部分的实例包括免疫球蛋白和结合靶细胞表面受体的配体。

除了编码治疗性蛋白的转基因序列之外，本发明的范围包括使用可以在哺乳动物修复细胞中表达的编码核酶或反义RNA分子的转基因。这类核酶和反义分子可以用于抑制基因的RNA编码蛋白质的翻译，这些基因抑制疾病过程或伤口愈合过程，由此允许组织修复发生。

反义核酸被设计成特异性地结合RNA，从而导致RNA-DNA或RNA-RNA杂合体的形成以及DNA复制、逆转录或信使RNA翻译的停滞。基于一个选定序列的反义核酸可以特异性地干扰相应基因的表达。在本发明中，反义核酸典型地通过从转基因构建体表达来在感染的或转导的细胞内产生，这些转基因构建体含有作为转录链的反义链。反义产生及其使用在文献中广泛地论述，并且是对于本领域的技术人员广泛已知和可获得的。

核酶是具有内切核糖核酸酶活性的反式裂解催化RNA分子。核酶被特异性地设计用于一种特定靶核苷酸序列。核酶被工程化以便以位点特异性方式裂解细胞RNA背景中的RNA种类。裂解事件使mRNA不稳定并且阻止蛋白质表达。核酶的制备和使用是本领域熟知的(参见，例如，乌斯曼(Usman)等人(1996)结构生物学评论(Current Opin.Struct.Biol.)6:527；隆(Long)等人(1993)美国实验生物学联合会会志7:25；西蒙斯(Symons)(1992)生物化学年评(Ann.Rev.Biochem.)61:641；美国专利号5,254,678)。了解靶核糖核酸分子的核苷酸序列允许有效核酶的构建。

用于在配制品中使用的增强剂可以包括条件培养基。条件培养基通常是指已经与细胞一起孵育并且作为源必需氨基酸、盐、维生素、矿物质、痕量金属、糖、脂质和核苷由细胞使用的培养基。条件培养基典型地含有原始培养基的营养物和细胞产物如细胞因子、蛋白质、细胞外基质组分或其任何组合，这些细胞产物已经由细胞合成并且分泌到培养基中。调理是以下过程：在该过程期间细胞合成并分泌细胞因子、蛋白质和细胞外基质成分到培养基中。

优选地，本发明的条件培养基由皮肤细胞的培养细胞产生；这些皮肤细胞是角质形成细胞、真皮成纤维细胞或更优选地当细胞作为角质形成细胞和真皮成纤维细胞两者的共培养物一起培养时是角质形成细胞和真皮成纤维细胞两者。本发明的条件培养基最优选地在共培养物是一种培养的皮肤构建体时产生，该皮肤构建体具有以类似于天然皮肤的取向安排的至少一个真皮层和一个表皮层。真皮层包含成纤维细胞(优选地具有真皮来源)和细胞外基质(主要是胶原)。本领域的技术人员将理解，培养的皮肤构建体可以通过有意添加抑或在来自初级来源的成纤维细胞的继续培养的情况下包含在皮肤中发现的其他细胞和其他细胞外基质组分。

用于在本发明中使用的优选细胞类型来源于间充质。更优选的细胞类型是成纤维细胞、基质细胞和其他支撑结缔组织细胞，或如在最优选的实施例中人皮肤成纤维细胞。人成纤维细胞细胞株可以来源于许多来源，包括但不限于新生雄性包皮、真皮、腱、肺、脐带、软骨、尿道、角膜基质、口腔粘膜和肠。人细胞可以包括但不必限于：间充质来源的成纤维细胞、平滑肌细胞、软骨细胞以及其他结缔组织细胞。优选地但不是必需地，用于产生一种组织构建体的基质产生细胞的来源是源自在采用本发明的培养方法之后相似或模拟的一种组织类型。例如，一种多层片状构建体与成纤维细胞一起培养以便形成一种活结缔组织构建体；或对于一种骨骼肌构建体，与成肌细胞一起培养。多于一种细胞类型可以用于制作一种组织构建体。细胞供体可以在发育和年龄方面变化。细胞可以来源于胚胎、新生儿或老年个体(包括成人)的供体组织。胚胎祖细胞如间充质干细胞可以用于本发明并且被诱导分化以便发育成所希望的组织。

虽然人细胞优选用于在本发明中使用，但待用于本发明的方法中的细胞不限于来自人来源的细胞。可以使用来自其他哺乳动物物种的细胞，包括但不限于，马、犬、猪、牛、猫、山羊和绵羊来源。也可以使用鼠类细胞和来自啮齿动物来源的其他细胞。此外，遗传工程化的细胞、重组细胞以及自发地、化学地或病毒转染的细胞也可以用于本发明中。对于并入多于一种细胞类型的那些实施例，可以使用正常细胞与遗传修饰的细胞或转染细胞的混合物，并且可以使用两种或更多种物种或组织来源的细胞的混合物，或两者。

在一个实施例中，用于在配制品中使用的伤口愈合剂包含干细胞。如在此所用，术语“干细胞”通常是指具有发育可塑性的细胞，这些细胞能够产生与这些干细胞所来源的细胞不同的其他细胞类型。为此，它们称为能够分化成多种细胞类型的多潜能细胞。

本发明的干细胞由于其多能或表型广泛的分化潜力、特别是分化成各种伤口愈合细胞和组织并且替代、再生或修复组织的能力而可以用于有效地填充受伤区域。例如，干细胞可以分化成愈合伤口、修复组织或再生组织所需的组织类型。可以根据本发明使用任何类型的干细胞或多潜能细胞。这类干细胞可以包括本领域中已知的任何多潜能、多能或全能干细胞。例如，干细胞可以是人胚胎干细胞、小鼠胚胎干细胞或其他哺乳动物干细胞。可替代地，干细胞可以分离自人或鼠脐带血或与获得这类细胞相关的人任何其他方式。为此，细胞可以从生物体、胚泡或通过本领域中已知的适合方式分离或产生的细胞获得。在其他实施例中，干细胞是能够在根据在此所描述的方法给予或培养时产生成肌纤维细胞样细胞的多潜能成人干细胞和其他干细胞。

不管来源并且如上所述，在一个实施例中，治疗有效量的干细胞可以被分离并且包括于配制品中。

在一个优选实施例中，配制品包含一种生理学上可接受的赋形剂。用于在本发明中使用的生理学上可接受的赋形剂包括作为一种药用配制品在一种药剂的配制中使用的任何试剂，该试剂对该配制品可能被给予的动物无害并且基本上不影响与其一起配制的药剂的药物活性。典型地，出于促进药物活性剂的配制的目的采用生理学上可接受的赋形剂。这类生理学上可接受的赋形剂可以是例如液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。生理学上可接受的赋形剂可以是盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等。此外，可以使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一种情况下，生理学上可接受的赋形剂在给予至一种动物时是无菌的。生理学上可接受的赋形剂优选地是在制造和储存条件下稳定的并且优选地被保存免于微生物的污染作用。盐溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液也可以用作液体赋形剂。适合的生理学上可接受的赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、乙二醇、水，乙醇等。适合的生理学上可接受的赋形剂的其他实例描述于雷明登氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)第1447-1676页(阿方索R.真纳罗编辑，第19版1995)。液体载体可以用于制备溶液、悬浮液、乳剂、糖浆和酏剂。在此描述的原胶原可以被悬浮在一种药学上可接受的液体载体(如水)、一种有机溶剂、二者的混合物或药学上可接受的油或脂肪中。液体载体可以含有其他适合的药物添加剂，包括增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、香味剂、悬浮剂、增稠剂、色素、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂、纤维素溶液、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇)及其衍生物、以及油(例如分馏椰子油和花生油)。液体载体可以呈用于给药的无菌液体形式。

生理学上可接受的赋形剂可以包含一种缓冲剂以便维持基质配方的所希望的pH。用于在本发明中使用的缓冲剂可以包括具有以下特性的溶液：当将少量酸或碱添加至其中时它的pH变化很小。在一个优选实施例中，配制品具有5与9之间的pH。在一个更优选的实施例中，配制品具有6与8之间的pH。在一个最优选的实施例中，配制品具有大约7.6的pH。

本发明涉及稳定的复性原胶原配制品以及制备和使用这些配制品的方法。这些方法和配制品提供适于长时间且在适于药物产品加工、运输、储存和使用的温度下储存的一种选择性地可流动的胶体。具体地说，本发明的组合物当在远高于超低温度(例如，-70℃)的温度下储存相当长的时间段时是稳定的。在一个优选实施例中，该组合物是在标准冷藏温度(例如，2℃至8℃)下持续至少18个月稳定的。在一个更优选的实施例中，该组合物是在标准冷藏温度下持续至少两年稳定的。优选地，该组合物还是在室温(例如，20℃至25℃)下持续至少12个月稳定的。

在一些实施例中，基质和哺乳动物细胞迁移通过电荷相互作用相关联。因此，可以选择配制品以便提供基质与修复细胞之间的适当电荷相互作用并且还提供一种储存稳定的组合物。此外，这些配制品能够支持细胞向内生长并且具有哺乳动物修复细胞(例如，通过浸渍、吸附、吸收或化学共轭)，这样使得修复细胞能够迁移到基质中。本领域的普通技术人员可以容易地确定一种特定基质是否能够细胞向内生长。在最低限度，基质必须具有大到足以用于细胞进入的腔室、孔或开口。这种向内生长可以通过几种方法进行分析，这些方法包括离体接种基质并在基质上的培养物中生长细胞，并且随后分析基质的向内生长。基质然后可以被除去并且进行组织学或微观分析以便确定细胞向内生长的程度。在具体实施例中，向内生长通过一种伤口反应起始。虽然伤口本身可以是医源性的(例如，由医师直接或间接引起)或是由于病理学或创伤性损伤，但其来源是不重要的，只要伤口反应在基质放置的部位处正在进行或起始。

本发明的配制品包括在整个配制品中相对均匀的原胶原。均匀性要求原胶原未聚集。优选地，至少75％的原胶原未聚集。更优选地，至少90％的原胶原未聚集。更优选地，至少95％的原胶原未聚集。

用于本发明的药用制剂的胶原可以从多种来源获得，这些来源包括哺乳动物或鱼的皮肤、骨、软骨、腱或韧带。在一个优选实施例中，胶原是I型胶原。在一个示例性实施例中，胶原自小牛的皮肤获得。

各种方法可以用于制备本发明的配制品。在一个优选实施例中，制备包括以下基本步骤，其中使胶原溶解在一种稀酸中并且然后无菌过滤以便选择均匀的复性原胶原含量。在一个优选实施例中，所有步骤都在无菌条件下进行，这样使得最终产物是无菌的并且由复性原胶原组成。在一个优选实施例中，配制品是无菌的。

如在此所论述并且如基于本发明的传授内容和实例现在对于本领域的技术人员将清楚的是，具有本发明的各种实施例的属性的原胶原胶体及其配制品可以从多种来源和使用多种制备方法来制备。一种制备根据本发明的原胶原配制品的说明性方法包括以下步骤：(i)使一种胶原研磨物变性且溶解于一种第一溶液中，得到一种于溶液中溶解的胶原，(ii)将一种复性剂添加至该于溶液中溶解的胶原，从而导致复性原胶原的形成，(iii)将该复性原胶原分散于一种药学上可接受的复性剂中。在一个优选实施例中，该第一溶液是包含胃蛋白酶的一种酸性溶液，并且该复性剂是添加至该溶液以便使pH增加至中性范围的一种碱，并且使该溶液混合以便允许形成复性原胶原。复性原胶原然后可以通过离心从溶液中分离，之后被分散于一种药学上可接受的赋形剂中。在一个优选实施例中，该胶原研磨物是从已被浸泡在一种酸性溶液中的牛皮获得的。优选地，使该溶液中的胶原通过一个无菌过滤器以便除去污染物并且所有随后步骤是无菌地进行的。在本发明的原胶原胶体的一个说明性实施例中，该原胶原配制品是呈一种选择性地可流动的溶胶形式的大约2.6％牛去端肽原胶原。溶胶然后可以用于无菌填充装置如注射器筒，这些装置包括被适配成含有原胶原配制品并且维持该原胶原配制品处于无菌形式的一个储库。注射器筒优选地被适配用于接收适合用于涂覆至伤口的一个涂抹器尖端。在一个优选实施例中，涂抹器尖端是一个柔性管，并且可以通过施加手压至与注射器筒可操作地连接的一个柱塞来将原胶原配制品通过该管挤出并且到伤口的表面上。

在一个优选实施例中，所述套件包括用于每个注射器的一个涂抹器尖端。在一个优选实施例中，涂抹器尖端是用于一次性使用并且在给予配制品之后被丢弃。

关于配制品在慢性伤口或溃疡的治疗中的使用，伤口或溃疡的清创和清洁是重要的。伤口或溃疡的清洁和/或清创是必要的以便从伤口部位除去坏死组织和病原体以及允许血液流入到伤口中用于愈合过程，并且另外地配制品与来自伤口中的新鲜血液的血小板结合起作用。用于在本发明的方法中使用的坏死组织的清创优选地是机械或外科的并且是以使得允许少量血液流动到伤口中的这样一种方式进行的。当伤口已经进行了清创时，可以将配制品直接涂覆到伤口之上抑或之中。因此，本发明还涉及与用于伤口愈合的配制品的使用组合的一种清创术的使用。本发明的方法包括以下两个步骤，即i)一种清创方法和ii)将一种配制品涂覆至伤口部位。这些步骤可以根据需要重复，但优选地伤口将被清创并且配制品涂覆不超过每周一次。在本发明的方法的一个更优选的实施例中，伤口将被清创并且配制品涂覆不超过每两周一次。

本发明进一步提供一种套件，该套件包括至少一个涂抹器，该涂抹器含有足以用于至少一次给予的量的配制品。在一个优选实施例中，该套件包括一个涂抹器尖端。

实例

提供以下实例以便进一步帮助本领域的普通技术人员。这类实例旨在是说明性的并且因此不应被视为限制本发明。在本申请中描述了许多示例性修改和变化，并且其他修改和变化将对于本技术领域的技术人员变得清楚。这类变化被认为落入如在此所述和要求保护的本发明的范围之内。

实例1

将14与20个月之间大的小牛的皮进行机械研磨并且然后浸泡在乙酸中。然后将研磨物从乙酸中除去并且浸泡在一种含胃蛋白酶的酸性溶液(pH 2)中以便除去端肽并使胶原溶解。然后将胶原纯化并且浸泡在盐酸中，并且通过一个0.2微米无菌过滤器过滤以便除去污染物。然后将无菌溶解胶原置于一种无菌中和缓冲液中并且使原胶原复性和稳定化。然后离心胶原，并且将沉淀的小丸分散于6.5％PBS溶液中以产生复性的

原胶原溶胶。然后将一种MMP抑制剂、一种抗微生物剂以及一种生理学上可接受的流体添加至溶胶中。这所得的胶体包含大约2.6％的去端肽复性原胶原。

实例2

作为一个说明性实施例，根据实例1制备的本发明的配制品显示有效地刺激从血小板释放PDGF。虽然配制品的实施例不包括任何PDGF或表达PDGF的核酸或包含表达PDGF的核酸的任何载体，但该配制品显示有效地引发内源性PDGF从血小板释放并且促进伤口愈合。

将六个凝结管一式两份地设置以用于测试用凝血酶(作为一种阳性对照)、根据实例1制备的配制品和PBS(作为一种阴性对照)活化一种可商购的血小板浓缩物。将重构的血小板浓缩物置于所有六个管中。两个管接受阳性对照(凝血酶)，两个管接受PBS，并且两个管接受根据实例1制备的配制品。使管在37℃下凝结。

在六小时和十二小时时从管中除去样品。将样品在10,000×g下离心10分钟。在离心之后，将上清液转移至一个适当的容器中并且在-80℃下冷冻直到测定时间。通过使用一种可商购的PDGF A/B ELISA试剂盒评定来自凝结混合物的分泌的PDGF A/B来进行定量分析。来自用该配制品处理的管的样品在六小时之后含有7255pg/ml的PDGF-AB并且在十二小时之后含有16678pg/ml的PDGF-AB。通过比较，阴性对照在六小时之后具有4417pg/ml的PDGF-AB并且在十二小时之后具有5645pg/ml的PDGF-AB。这是在六小时之后65％和十二小时之后200％的差异。这一令人惊奇和出人意料的结果证明了该配制品刺激PDGF的释放的能力。

实例3

作为另一个说明性实施例，根据实例1制备的本发明的配制品显示有效地刺激从血小板释放PDGF。用于测试一种可商购的血小板浓缩物的活化的凝结管以300微升或720微升的根据实例1制备的配制品或作为一种阴性对照的PBS的浓度制备。使管在37℃下凝结。

在二十四小时和四十八小时时从管中除去样品。将样品在4℃下在10,000×g下离心10分钟。在离心之后，将上清液转移至一个适当的容器中并且在-80℃下冷冻直到测定时间。通过使用一种可商购的PDGF A/B ELISA试剂盒评定来自凝结混合物的分泌的PDGF A/B来进行定量分析。在二十四小时之后，含有300微升的配制品浓度的管被发现具有比阴性对照多230％的PDGF，而含有720微升的配制品浓度的管被发现具有比阴性对照多超过300％的PDGF。在四十八小时之后，含有300微升的配制品浓度的样品被发现具有比阴性对照多大约170％的PDGF，而含有720微升的配制品浓度的样品被发现具有比阴性对照多超过200％的PDGF。这一结果证明了该配制品刺激PDGF的释放的能力。

实例4

将诊断为有慢性溃疡(未愈合持续至少6周)、周围神经病变(在临溃疡区域(pert-ulcer area)中使用塞姆斯-温斯坦(Semmes-Weinstein)5.07单丝不能感知10g压力)和足够血流(TcpO2>40mmHg或趾压力>40mmHg)的四十八个人类患者随机分成两组。一组用标准护理(SOC)处理并且第二组用根据实例1制备的原胶原配制品(FCG)处理。

在赋予资格和知情同意之后，患者经历溃疡的外科清创术、培养物的活组织检查、溃疡照相以及在第14天的溃疡大小测量以便开始筛选用SOC处理的2周磨合期。在两周磨合期过程中，所有患者经历外科清创术以便除去所有坏死软组织、角化过度的伤口边缘、细菌负荷、细胞碎片、窦道、瘘管、破坏的边界以及愈伤组织以便产生有活力的伤口边缘和干净的溃疡部位。如果不需要清创术，则将溃疡部位和边缘轻微刻痕以便产生较小血液流入到伤口部位中。所所有患者在磨合期和整个试验期间穿着一种特殊卸除矫形鞋(DH步行者(Walker)；奥索公司(Ossur)，科科纳特克里克(Coconut Creek)，佛罗里达州(FL))。

第1天就诊包括溃疡的外科清创术(如果医学上必要)、溃疡部位的临床评定和溃疡的照相。通过每1cm2的溃疡面积涂覆1ml该配制品将制备的纤丝原胶原基质给予至随机化至FCG组的患者。将该配制品作为一种连续薄膜涂覆在伤口的整个溃疡区域(包括边缘)上。将伤口覆盖并且静置一周。随机化至SOC组的患者继续每日换药。

主要患者数据是伤口照片，其中包括标尺以用于校准，并且伤口照片是通过一种固定焦距照相机从相同距离拍得。在伤口评估方面有经验或受过训练的五名不知情的观察者独立地跟踪所有照片以便测量从第14天到第2周的伤口大小。对于一些有问题的照片的区域通过群体一致性确定。

对患者数据的分析证明当与SOC组相比时，FCG组的伤口愈合的改善。在第1周期间FCG组中的伤口平均减少1.97mm2，与SOC组中的.78mm2相比，这是p值小于0.001的情况的结果。在第2周期间，FCG组中的伤口在半径上减少0.81mm2，与SOC组中的0.48mm2相比，这是p值小于0.01的情况的结果。该结果和在本发明的原胶原配制品的情况下观察到的伤口愈合的改善程度是令人惊奇和出乎意料的。

Claims (27)

1.一种配制品，包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂，其中所述配制品是一种选择性地可流动的胶体。

2.根据权利要求1所述的配制品，其中该原胶原是一种去端肽复性原胶原。

3.根据权利要求1所述的配制品，其中该原胶原是非聚集的并且被分散于该赋形剂内以便形成一种均匀分散体。

4.根据权利要求1所述的配制品，其中该配制品在大约15℃的温度下表现出足够流动以便通过注射器、套管、涂抹器尖端或用于将胶体递送至伤口的任何装置挤出。

5.根据权利要求1所述的配制品，其中至少一种佐剂是一种结构调节剂。

6.根据权利要求5所述的配制品，其中该结构调节剂是一种原胶原稳定剂。

7.根据权利要求6所述的配制品，其中该原胶原稳定剂是一种多元醇。

8.根据权利要求5所述的配制品，其中该结构调节剂是一种配制品调节剂。

9.根据权利要求1所述的配制品，其中该原胶原能够促进血小板释放PDGF。

10.根据权利要求1所述的配制品，其中至少一种佐剂是一种增强剂。

11.根据权利要求10所述的配制品，其中该增强剂是一种抗微生物剂。

12.根据权利要求10所述的配制品，其中该增强剂是一种MMP抑制剂。

13.根据权利要求12所述的配制品，其中该MMP抑制剂是一种锌螯合剂。

14.根据权利要求1所述的配制品，其中该配制品是无菌的。

15.根据权利要求1所述的配制品，其中该原胶原是牛I型原胶原。

16.一种选择性地可流动的胶体配制品用于治疗伤口的一个用途，该配制品包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂。

17.根据权利要求16所述的用途，其中该原胶原是一种去端肽复性原胶原。

18.一种治疗伤口的方法，该方法包括向该伤口涂覆一种选择性地可流动的配制品，该配制品包含(i)一种原胶原，(ii)至少一种佐剂，以及(iii)一种生理学上可接受的赋形剂。

19.根据权利要求18所述的方法，其中该原胶原是一种去端肽原胶原。

20.根据权利要求18所述的方法，其中该原胶原能够促进血小板释放PDGF。

21.根据权利要求18所述的方法，其中该伤口选自下组，该组由以下各项组成：一种创伤损伤性伤口、一种疾病状态、一种医源性伤口、一种软组织伤口、一种慢性伤口、一种糖尿病足部溃疡。

22.一种装置，包括根据权利要求1所述的配制品。

23.如权利要求22所述的装置，其中该装置是含有该配制品的一个注射器筒。

24.一种包括如权利要求22所述的装置的套件，该套件进一步包括用于在伤口的治疗中使用该装置的说明书。

25.一种制备根据权利要求1所述的配制品的方法，该方法包括以下步骤：(i)使一种胶原研磨物变性且溶解于一种第一溶液中，得到一种于溶液中溶解的胶原，(ii)将一种复性剂添加至该于溶液中溶解的胶原，从而导致复性原胶原的形成，(iii)将该复性原胶原分散于一种药学上可接受的复性剂中。

26.根据权利要求25所述的方法，其中该第一溶液是包含胃蛋白酶的一种酸性溶液，其中该复性剂是添加至该溶液以使pH增加至中性范围的一种碱，并且使该溶液混合以允许形成复性原胶原，并且其中在被分散于一种药学上可接受的赋形剂中之前通过离心使该复性原胶原与该溶液分离。

27.如权利要求25所述的方法，其中该原胶原配制品是呈一种选择性地可流动的溶胶形式的大约2.6％牛去端肽原胶原。