CN104997716B - 含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于该口腔护理产品包括蜂胶醇提物。本发明提供一类传统中医药口腔护理产品，药物提取方法简单，剂量成份稳定、可直接深入口腔。长期使用不会导致口腔内环境紊乱，无副作用。蜂胶中含有大量黄酮类、芳香酸、脂肪酸及萜烯类化合物，具有广谱抗菌作用。本发明不仅有已有中草药保健牙膏等口腔护理类产品相似的除口臭、治口腔溃疡、抗菌口腔常见致病菌，达到消炎目的，更有杀灭幽门螺杆菌，有效阻止幽门螺杆菌经口传播的作用。本发明将天然蜂胶应用于牙膏等口腔护理类产品提高了产品的抗氧化性，使其保质期变长。

Description

含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品

技术领域

本发明属于日化品技术领域，具体涉及一种含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品。

背景技术

幽门螺杆菌，英文名Helicobacter pylori，简称Hp。幽门螺杆菌是一种感染率、传染性很强的致病菌。1983 年澳大利亚学者巴里·马歇尔Barry J.Marshall 和罗宾·沃伦J.Robin Warren 首次在胃炎病人胃粘膜活检组织中分离检测到幽门螺杆菌。1989 年澳大利亚学者Krajden 从胃炎病人口腔牙齿的牙菌斑内检测到HP，并从分子水平证实其与胃内Hp 相同。Hp 是一种经口传播的传染病，口腔Hp 是胃Hp 的重要贮存库。幽门螺杆菌对人体健康的损害是重大的：是诱发胃癌的第一类致癌；90％的十二指肠溃疡和80％的胃溃疡，由幽门螺杆菌感染导致。在我国慢性活动性胃炎患者中，幽门螺杆菌的检出率为95％至100％；十二指肠溃疡患者中检出率为85％至95％ ；胃溃疡患者中检出率为70％至80％；胃癌患者中检出率为80％。流行病学调查我国12 岁以下青少年Hp 感染率高达40％，成人Hp 感染率达60％以上。现有的医学方法采用大剂量多种抗生素同时服用杀灭幽门螺杆菌。现有技术的缺点是：1. 杀灭大量有益菌，易导致疾病反复发作2. 大剂量多种抗生素的服用，增加了幽门螺杆菌的抗药性，细菌产生耐药性使原本有效的抗生素的治疗效果降低或丧失，增加了患者疾病的治疗难度和医疗成本。

俗话说，病从口入，经口腔传播的传染病除了幽门螺杆菌外，还有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及白假丝酵母菌等，因此，口腔卫生及其重要，而口腔卫生的护理，最主要的就是使用牙膏、漱口水之类的产品，现有的口腔护理产品，大多添加消毒剂来治理口腔疾病，但是经常使用会增加口腔细菌的抗药性，破坏口腔环境。

蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂（树胶），混入其上腭腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶为不透明固体，表面光滑或粗糙，折断面呈砂粒状，切面与大理石外形相似。呈黄褐色、棕褐色、灰褐色、灰绿色、暗绿色，极少数深似黑色。具有特殊的芳香味。

牙膏是日常生活中每天必用口腔清洁用品，随着生活水平的提高漱口水、口香糖、糖果、泡腾片或口腔喷剂应用也越来越广泛，目前市售常见的保健牙膏等口腔护理类产品大多数使用合成化学药物作抗菌成分，长期使用合成抗菌剂对人体存在潜在的危害和安全性问题。市场上虽然已有一些中草药保健牙膏，但抗菌效果也不够理想，特别是不具有杀灭幽门螺杆菌作用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品。

本发明通过以下技术方案加以实现：

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于该口腔护理产品包括蜂胶醇提物。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述口腔护理产品为牙膏、漱口水、口香糖、糖果、泡腾片或口腔喷剂。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述牙膏由以下重量份数的组分组成：磷酸氢钙 80-100份，水 20-30份，山梨糖醇 5-10份，水合硅石 1-5份，聚乙二醇-8 1-5份，丙二醇 1-5份，月桂醇硫酸酯钠 1-5份，纤维素胶 1-5份，羟乙基纤维素 1-5份，香精 1-5份，苯甲酸钠 1-5份，糖精钠 1-5份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述漱口水由以下重量份数的组分组成：水 90-100份，山梨醇 10-20份，丙二醇 5-10份，木糖醇 5-10份，PEG-400聚乙二醇 5-10份，甘草酸二甲 1-5份，苯甲酸钠 1-5份，香精 1-3份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的口腔护理产品，其特征在于所述口香糖由以下重量份数的组分组成：木糖醇 30-40份，胶基 20-30份，山梨醇 15-20份，麦芽糖醇液 10-15份，D-甘露糖醇5-10份，柠檬酸 150-200份，磷脂 100-120份，阿斯巴甜 30-40份，香精30-40份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的口腔护理产品，其特征在于所述糖果由以下重量份数的组分组成：麦芽糖醇 50-100份，柠檬酸 1-5份，香精 1-5份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述泡腾片由以下重量份数的组分组成：VC 20-30份，柠檬酸 10-20份，碳酸氢钠 30-40份，羧甲基淀粉钠 5-10份，乳糖 10-20份，阿斯巴甜 1-5份，香精 1-5份，PVP-K30 1-5份，PEG6000 1-5份，微粉硅胶 1-5份，硬脂酸镁 1-5份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述口腔喷剂由以下重量份数的组分组成：水 40-50份，山梨醇 5-10份，丙二醇 5-10份，木糖醇 1-5份，PEG-400聚乙二醇 1-5份，甘草酸二甲 1-5份，苯甲酸钠 1-5份，香精 1-2份，蜂胶醇提物 1-5份。

所述的含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品，其特征在于所述蜂胶醇提物采用以下方法制备：

1）天然蜂胶原胶-20℃冷冻，待其变硬变脆后，用木锤敲打粉碎，去除杂质，获得蜂胶粉末；

2）按料液比1：20（g/mL）在蜂胶粉末中加入60%乙醇，60℃回流抽提4 h，得提取液；

3）提取液滤纸减压过滤除渣，得滤液；

4）滤液用旋转蒸发仪35 r/min 60℃旋蒸浓缩至膏状或干燥；

5）计算得率，4℃冰箱保存备用。

本发明提供一类传统中医药口腔护理产品，药物提取方法简单，剂量成份稳定、可直接深入口腔。长期使用不会导致口腔内环境紊乱，无副作用。蜂胶中含有大量黄酮类、芳香酸、脂肪酸及萜烯类化合物，具有广谱抗菌作用。本发明不仅有已有中草药保健牙膏等口腔护理类产品相似的除口臭、治口腔溃疡、抗菌口腔常见致病菌，达到消炎目的，更有杀灭幽门螺杆菌，有效阻止幽门螺杆菌经口传播的作用。本发明将天然蜂胶应用于牙膏等口腔护理类产品提高了产品的抗氧化性，使其保质期变长。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，并给出具体实施方式。

实施例1

含蜂胶醇提取的具有抗幽门螺杆菌功效的牙膏，由以下重量份数的组分组成：磷酸氢钙 90份，水 25份，山梨糖醇 7份，水合硅石 3份，聚乙二醇-8 3份，丙二醇 4份，月桂醇硫酸酯钠2份，纤维素胶 3份，羟乙基纤维素 3份，香精 3份，苯甲酸钠3份，糖精钠3份，蜂胶醇提物3份。

其中，蜂胶醇提物采用以下方法制备：

1）天然蜂胶原胶-20℃冷冻，待其变硬变脆后，用木锤敲打粉碎，去除杂质，获得蜂胶粉末；

2）按料液比1：20（g/mL）在50g蜂胶粉末中加入60%乙醇1000mL，60℃回流抽提4 h，得提取液；

3）提取液滤纸减压过滤除渣，得滤液；

4）滤液用旋转蒸发仪35 r/min 60℃旋蒸浓缩至膏状或干燥；

5）计算得率，4℃冰箱保存备用。

蜂胶醇提物提取率=（天然蜂胶原胶醇提物蒸干物重量/天然蜂胶原胶重量）×100%。

实施例2

含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的漱口水，由以下重量份数的组分组成：水 95份，山梨醇 15份，丙二醇 7份，木糖醇 8份，PEG-400聚乙二醇 8份，甘草酸二甲 3份，苯甲酸钠3份，香精 2份，蜂胶醇提物 3份。

蜂胶醇提物的制备方法同实施例1。

实施例3

含蜂胶醇提物的口香糖，由以下重量份数的组分组成：木糖醇35份，胶基25份，山梨醇 17份，麦芽糖醇液17份，D-甘露糖醇8份，柠檬酸170份，磷脂110份，阿斯巴甜35份，香精35份，蜂胶醇提物 3份。

蜂胶醇提物的制备方法同实施例1。

实施例4

含蜂胶醇提物的糖果，由以下重量份数的组分组成：麦芽糖醇 75份，柠檬酸 3份，香精3份，蜂胶醇提物3份。

蜂胶醇提物的制备方法同实施例1。

实施例5

含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的泡腾片，由以下重量份数的组分组成：VC25份，柠檬酸 15份，碳酸氢钠35份，羧甲基淀粉钠7份，乳糖15份，阿斯巴甜3份，香精 3份，PVP-K30 3份，PEG6000 3份，微粉硅胶 3份，硬脂酸镁 3份，蜂胶醇提物 3份。

蜂胶醇提物的制备方法同实施例1。

实施例6

含蜂胶醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔喷剂，由以下重量份数的组分组成：水 45份，山梨醇 8份，丙二醇 7份，木糖醇 3份，PEG-400聚乙二醇 3份，甘草酸二甲2份，苯甲酸钠3份，香精 2份，蜂胶醇提物3份。

蜂胶醇提物的制备方法同实施例1。

试验例

实验仪器与器材

主要仪器：厌氧培养罐（广州海太光电生物科技有限公司），WGB-300恒温培养箱（重庆车达实验仪器厂），Millipore A10超纯水处理系统；SW-CJ-2F超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司），Fresco台式恒温高速离心机（Heraeus），TU-181型紫外分光光度计（Hewlett Packard，USA），-20℃冰箱（青岛海尔股份有限公司），-70℃冰箱（Sanyo），LDZX-4011高压蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；0-250℃恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂），AT261电子天平（Mettler），倒置光学显微镜（Olympus），普通光学显微镜（Olympus），LABMED抽气仪。

主要器材：微量移液器（Gilson），接种环，L型玻棒，灭菌三角涂布棒，酒精灯，镊子（需灭菌），碘酊棉球、酒精棉球，锥形培养瓶，一次无菌性封口膜，载玻片，香柏油，各种无菌注射器，试管架，6 cm一次性培养皿，灭菌枪头（10、100、1000 μL），灭菌塑料试管（1.5、5、10mL），无菌乳胶手套。

主要实验材料和试剂

⑴菌种：幽门螺杆菌NCTC11637株、大肠埃希菌（俗称大肠杆菌）药敏标准株ATCC25922、金黄色葡萄球菌药敏标准株ATCC29213、白假丝酵母菌标准株ATCC14053株由浙江大学医学院病原生物学系严杰提供；

⑵混合气体（85%氮气、10%二氧化碳、5%氧气）：压力10Mpa，杭州今工特种气体有限公司提供；

⑶幽门螺杆菌选择性哥伦比亚血平板（梅里埃上海生物制品有限公司）：杭州怡丹生物科技有限公司提供；

⑷布氏肉汤培养基（Oxoid）、布氏琼脂培养基（Oxoid）、沙堡琼脂培养基（Barebio）、Mueller-Hinton（MH）琼脂培养基（Barebio）：杭州百思生物技术有限公司提供。

⑸革兰染色液：杭州百思生物技术有限公司提供。

⑹直径6 mm空白药敏试纸、茶多酚、无菌脱纤维绵羊血：杭州泽衡生物科技有限公司提供；

⑺二甲基亚砜（DMSO）（Sigma）：杭州泽衡生物科技有限公司提供；

⑻无水乙醇、75%乙醇、甘油、香柏油：上海国药集团化学试剂有限公司产品。

受试菌株培养及染色镜检

1. 幽门螺杆菌NCTC11637株培养及染色镜检

超净工作台中用灭菌接种环将幽门螺杆菌NCTC11637株密集划线接种于幽门螺杆菌选择性哥伦比亚血平板上，平板倒置放入厌氧培养罐中，抽气至负压为650 mmHg，放入混合气体（85%氮气、10%二氧化碳、5%氧气）至气压为0，如此重复3次，将厌氧培养罐37℃培养3d。

在玻片上加1滴生理盐水，用灭菌接种环挑取菌苔涂布于生理盐水使之均匀，室温中自然干燥形成菌膜，过酒精灯火3-4次杀菌并固定菌膜。革兰染色：玻片菌膜上滴加结晶紫染液，室温染色1 min，自来水小水冲洗，甩干后滴加碘液室温染色1 min，自来水小水冲洗，甩干后滴加脱色液室温脱色15-30 Sec（需缓慢旋转玻片以提高脱色效果），自来水小水冲洗，甩干后滴加复染液室温染色1 min，自来水小水冲洗，甩干后在玻片菌膜上滴加香柏油1滴，玻片房在普通光学显微镜载物台上，在10×目镜、100×物镜下观察。

2. 大肠埃希菌ATCC25922株培养及染色镜检

超净工作台中用灭菌接种环将大肠埃希菌ATCC25922株密集划线接种于MH琼脂平板上，平板倒置后37℃培养18-24 h。染色及镜检方法同上。

3. 金黄色葡萄球ATCC29213株培养及染色镜检

超净工作台中用灭菌接种环将金黄色葡萄球ATCC29213株密集划线接种于MH琼脂平板上，平板倒置后37℃培养18-24 h。染色及镜检方法同上。

4. 白假丝酵母菌ATCC14053株培养及染色镜检

超净工作台中用灭菌接种环将白假丝酵母菌ATCC14053株密集划线接种于沙堡琼脂平板上，平板倒置后37℃培养2-3 d。染色及镜检方法同上。

受试药物及配制

受试药物原液配制及外观：蜂胶醇提物，37.360g提取物／100g生药，溶于20 mLDMSO中，其生药终浓度为5000 mg/mL，然后用灭菌双蒸水分别配制成生药终浓度为2500、500、100、50、10 mg/mL溶液，蜂胶醇提物无味。

幽门螺杆菌药物敏感试验（纸片扩散法）

1. 药敏纸片制备

将直径6 mm空白药敏滤纸片放入培养皿中，121℃高压蒸气灭菌30 min，60℃烘干备用。使用灭菌枪头吸取20μL上述不同浓度的提取物药物原液加在灭菌滤纸片上，使滤纸片所含药物浓度不同。另制备DMSO及灭菌双蒸水纸片作为对照。

2. 受试菌液制备

用灭菌L型玻棒刮取新鲜培养的幽门螺杆菌NCTC11637株菌苔，放入灭菌生理盐水中，采用比浊法将幽门螺杆菌配制成1×10⁷/mL菌液（生长困难，需较高浓度菌液）。

3. 药物敏感试验操作

⑴在超净工作台中用灭菌枪头吸取200 μL上述幽门螺杆菌菌液加至灭菌三角涂布棒上，然后均匀涂布于幽门螺杆菌选择性哥伦比亚血平板上；

⑵用灭菌镊子分别将不同含药浓度纸片等距离贴于血平板上，另贴上DMSO及灭菌双蒸水纸片作为对照。

⑶平板倒置放入厌氧培养罐中，抽气至负压为650 mmHg，放入混合气体（85%氮气、10%二氧化碳、5%氧气）至气压为0，如此重复3次，将厌氧培养罐37℃培养3 d。

⑷培养后肉眼观察各纸片周围有无抑菌环，在DMSO及灭菌双蒸水纸片无抑菌环的前提下，若含药纸片出现抑菌环，则以mm为单位测量各抑菌环直径。

4. 实验结果： 蜂胶醇提物幽门螺杆菌药物敏感试验（纸片扩散法）结果见表1。

表1

药物敏感试验（平板稀释法）

1.受试菌液制备

用灭菌L型玻棒刮取新鲜培养的幽门螺杆菌NCTC11637株、大肠埃希菌ATCC25922株、金黄色葡萄球菌ATCC29213株、白假丝酵母菌ATCC14053株菌苔，放入灭菌生理盐水中，采用比浊法将幽门螺杆菌配制成1×10⁷/mL菌液（生长困难，需较高浓度菌液）、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌及白假丝酵母菌按常规均配制成1×10⁶/mL菌液。

2.含药平板制备

⑴在6 cm直径灭菌平皿中加入1 mL不同浓度的蜂胶醇提物；

⑵按产品说明书配制布氏琼脂培养基、MH琼脂培养基、沙堡琼脂培养基，121℃高压蒸汽灭菌20 min，MH琼脂培养基、沙堡琼脂培养基室温冷却至55-60℃时直接用灭菌吸管取9 mL加入上述加药平皿中，轻轻旋磨平皿使药物混合均匀，布氏琼脂培养基室温冷却至55-60℃时先加入37℃预热的10%脱纤维绵羊血，然后按上法加入加药平皿中并轻轻旋磨平皿使药物混合均匀；

⑶上述平皿倒置37℃孵育24 h检菌并使药物充分混匀。

3.药物敏感试验操作及结果判断

⑴在超净工作台中用接种环挑取上述菌液一环，密集划线接种于上述含药平板上；

⑵接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌平板倒置后37℃培养24 h；白假丝酵母菌（以往称白色念珠菌，白念）平板倒置后37℃培养48 h；接种幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）平板倒置放入厌氧培养罐中，抽气至负压为650 mmHg，放入混合气体（85%氮气、10%二氧化碳、5%氧气）至气压为0，如此重复3次，将厌氧培养罐37℃培养3 d。

⑶培养结束后肉眼观察各菌生长情况，无菌生长（-）药物最高稀释度判为该药物的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC），较多菌生长判为（+），少数或极少数菌生长判为（±）。

4.实验结果：蜂胶醇提取药物敏感性试验，平皿稀释法，结果见表2，MIC判定结果见表3。

表2

表3

Claims (1)

1.含蜂胶醇提物的口腔护理产品，其特征在于该口腔护理产品包括蜂胶醇提物，所述口腔护理产品为口香糖，并由以下重量份数的组分组成：木糖醇 30-40份，胶基 20-30份，山梨醇 15-20份，麦芽糖醇液 10-15份，D-甘露糖醇5-10份，柠檬酸 150-200份，磷脂 100-120份，阿斯巴甜 30-40份，香精30-40份，蜂胶醇提物 1-5份；所述蜂胶醇提物采用以下方法制备：

1）天然蜂胶原胶-20℃冷冻，待其变硬变脆后，用木锤敲打粉碎，去除杂质，获得蜂胶粉末；

2）按料液比g/mL 1：20在蜂胶粉末中加入60%乙醇，60℃回流抽提4 h，得提取液；

3）提取液滤纸减压过滤除渣，得滤液；

4）滤液用旋转蒸发仪35r/min、 60℃旋蒸浓缩至膏状或干燥；

5）计算得率，4℃冰箱保存备用。