CN104991074A - 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法 - Google Patents

一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104991074A
CN104991074A CN201510351085.2A CN201510351085A CN104991074A CN 104991074 A CN104991074 A CN 104991074A CN 201510351085 A CN201510351085 A CN 201510351085A CN 104991074 A CN104991074 A CN 104991074A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gold nanoclusters
caco
fluorescence
fetoprotein
alkaline phosphatase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510351085.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104991074B (zh
Inventor
王光丽
胡雪连
吴秀明
方馨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201510351085.2A priority Critical patent/CN104991074B/zh
Publication of CN104991074A publication Critical patent/CN104991074A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104991074B publication Critical patent/CN104991074B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明提供了一种新型的基于金纳米簇的增强型甲胎蛋白荧光传感器。以巯基化合物为表面修饰剂制备的金纳米簇，具有良好的荧光性质。在KMnO4或H2O2的氧化作用下，金纳米簇的荧光发生猝灭；如果向猝灭的金纳米簇中加入还原性物质如对氨基苯酚、抗坏血酸、邻苯二酚，荧光则重新得到恢复。利用碱性磷酸酶(ALP)能够催化其底物坏血酸磷酸三钠盐或对氨基苯磷酸盐或邻苯二酚磷酸酯分解生成对氨基苯酚、抗坏血酸、邻苯二酚，以ALP为标记物实现信号放大作用，建立了一种新型、高灵敏的针对甲胎蛋白的免疫传感器。本方法具有操作便捷、灵敏度高与选择性好等优点，为构建基于金属纳米簇的新型免疫荧光传感器提供了借鉴。

Description

一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法
技术领域：
本发明涉及纳米分析检测领域，尤其涉及具有良好荧光性质的金纳米簇在免疫检测方面的应用。
背景技术：
甲胎蛋白(AFP)是一种分子量约为70KDa的酸性糖蛋白，主要由胚胎时期的肝脏及卵黄囊产生，是一种重要的肿瘤标记物[Li Y.J.；Ma M.J.；Zhu J.J.；Anal.Chem.2012,84,10492-10499]。健康的成人体内的AFP含量极少。但是，AFP含量的增加与癌症如肝癌、卵黄囊癌、睾丸癌及鼻咽癌等的发生密切相关。因此，AFP的早期检测可被用于某些癌症的早期临床诊断，对癌症预防具有非常重要的意义[Liu J.F.；Lin G.H.；Xiao C.；Xue Y.；Yang A.K.；Ren H.X.；Lu W.S.；Zhao H.；Li X.J.；Yuan Z.B.Biosens.Bioelectron.2015,71,82-87]。AFP的常规检测方法有酶联免疫分析法[Sun W.；Jiao K.；Zhang C.；Zhang Z.Anal.Chim.Acta 2001,434,43-50]、石英晶体微天平[Chou S.；Hsu W.；Hwang J.；Chen C.Chin.Chem.2002,48,913-918]、电化学发光法[Cao Y.L.；Yuan R.；Chai Y.Q.；Mao L.；Yang X.；Yuan S.R.；Yuan Y.L.；Liao Y.H.Electroanalysis 2011,23,1418-1426]、质谱法[Hu S.H.；Zhang S.C.；Hu Z.C.；Xing Z.；ZhangX.R.Anal.Chem.2007,79,923-929]及表面等离子共振法[Chang Y.；Chen R.；Lee Y.；Chao S.；Su L.；Li Y.；Chou C.Biosens.Bioelectron.2009,24,1610–1614]等。上述的检测方法具有其各自的优点但同时也存在一定的不足之处，比如仪器构造复杂且价格昂贵、操作繁琐，样品用量较多，灵敏度不够高、线性范围较窄，选择性不够好，在临床应用上费用高、耗时久等。因此，建立成本低廉，操作简便，灵敏度高，选择性好的AFP免疫分析方法具有十分重要的理论意义及实际应用价值。
荧光分析法在分析检测领域的地位不容小觑。因其具备诸多优点如选择性好、灵敏度高、样品用量少、操作简便、快速、线性范围宽等，使得荧光分析法在化学、环境、生物、医药等众多领域均得到广泛应用[Zhang K.；Guo J.K.；Nie J.J.；Du B.Y.；Xu D.J.Sens.Actuators,B2014,190,279-287；He Y,Xiong L H,Xing X J,Tang H.W.；Pang D.W.Biosens.Bioelectron.2013,42,467-473；Wen F,Dong Y H,Feng L,Wang S.；Zhang S.C.；Zhang X.R.Anal.Chem.2011,83,1193-1196]。
随着纳米技术的快速发展，各类具有良好荧光性质的新型纳米材料不断涌现，为创建新型荧光传感器提供了素材。基于纳米材料的荧光传感器尺寸更小，灵敏度更高，选择性更好，因此引起了研究者们的广泛瞩目。金属纳米簇是近年来刚刚兴起的一种新型荧光纳米材料，其由几个到约一百个原子组成。金属纳米簇由于具有超小尺寸(<2nm)、低毒性、良好的光稳定性、大的斯托克斯位移等优点，正成为生物荧光传感器构建工作中极具吸引力的一种纳米材料。目前，很多利用金属纳米簇建立的荧光传感分析均是荧光猝灭型传感器，被广泛应用于金属离子[Sun J.；Yue Y.；Wang P.；He H.L.；Jin Y.D.J.Mater.Chem.C 2013,1,908-913；Zhu H.J.；Yu T.；Xu H.D.；Zhang K.；Jiang H.；Zhang Z.P.；Wang Z.Y.；Wang S.H.ACS Appl.Mater.Interfaces 2014,6,21461-21467]及生物分子，如乙酰胆碱[Li H.C.；Guo Y.X.；Xiao L.H.；Chen B.Biosens.Bioelectron.2014,59,289-292]，胰蛋白酶[Hu L.Z.；Han S.；Parveen S.；Yuan Y.L.；Zhang L.；Xu G.B.Biosens.Bioelectron.2012,32,297-299]和葡萄糖[Xia X.；D.；Long Y.F.；Wang J.X.Anal.Chim.Acta 2013,772,81-86]等的检测。但是，猝灭型传感器的检测背景较高，容易受到非被测物之外的其它因素(如溶剂、基体效应等)的影响，从而产生较大误差。与应用更为广泛的猝灭型荧光传感器相比，荧光增强型传感器检测限更低、灵敏度更高、干扰因素也相对较少，在荧光传感分析领域受到推崇[Zhou Z.X.；Du Y.；Dong S.J.；Biosens.Bioelectron.2011,28,33-37；Huang C.C.；Chen C.T.；Shiang Y.C.；Lin Z.H.；Chang H.T.；Anal.Chem.2009,81,875-882]。到目前为止，基于金纳米簇的荧光免疫分析仅局限在利用金纳米簇标记二抗，通过金纳米簇自身的荧光信号进行检测[Peng J.；Feng L.N.；Zhang K.；Li X.H.；Jiang L.P.；Zhu J.J.；Chem.Eur.J.2012,18,5261–5268；Yang G.H.；Shi J.J.；Wang S.；Xiong W.W.；Jiang L.P.；Burda C.；Zhu J.J.；Chem.Commun.2013,49,10757-107]。本发明中，发现强氧化剂如高锰酸钾或双氧水破坏了金纳米簇的表面结构，导致金纳米簇的荧光猝灭；而碱性磷酸酶(ALP)的磷酸酯底物的水解产物如对氨基苯酚、抗坏血酸、邻苯二酚使金纳米簇的表面结构重新恢复，从而使被猝灭的荧光重新得到恢复。以ALP作为标记物，建立了一种新型的基于金纳米簇的高灵敏荧光免疫分析方法，成功实现了对甲胎蛋白的高灵敏、选择性测定。本发明的特点在于发现通过氧化还原反应调控金纳米簇的表面状态从而调控荧光的猝灭及恢复；结合ALP的催化放大作用，将金纳米簇成功应用于免疫分析中。具有思路新颖、操作便捷、成本低、灵敏度高与选择性好等优点，为构建基于金属纳米簇的增强型荧光传感器在生物检测方面的应用提供了良好的借鉴。
发明内容：
本发明的目的是提供一种新型的荧光分析思路，利用氧化还原反应调控金纳米簇荧光的猝灭与恢复，实现便捷、灵敏的甲胎蛋白免疫测定。
本发明的目的可通过如下技术措施来实现：
1、一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法，其特征在于：
a、将一定量的HAuCl4与一定量的修饰剂混合并用NaOH调节pH至碱性，37℃下搅拌反应24h，得到金纳米簇用超纯水透析12h作为荧光探针；
b、用负载有Au纳米粒子的层状CaCO3微粒固定碱性磷酸酶和甲胎蛋白二抗，形成CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物，作为信号标签诱导检测信号的产生；CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物的制备方法如下：一定量的柠檬酸三钠盐与氯金酸混合后，煮沸搅拌一段时间，冷却得到Au纳米粒子；一定量的吐温-80，氯化钙和碳酸钠混合并超声，离心得到层状CaCO3微粒；将CaCO3微粒分散于Au纳米粒子中超声，离心得到CaCO3-Au纳米粒子复合物；将一定量的甲胎蛋白二抗，碱性磷酸酶和CaCO3-Au纳米粒子复合物混合震荡2h，再加入一定的牛血清白蛋白封闭，30min后离心并重新分散，得到CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物；
c、将30μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白一抗加入到微孔板中，4℃下过夜后用含有0.05％吐温-20的pH＝7.4的Tris-HCl缓冲液作为洗涤液洗涤，并用含有3％(w/v)牛血清白蛋白的pH＝7.4的Tris-HCl溶液作为封闭液封闭30min，然后将不同浓度的甲胎蛋白抗原加入到微孔板中，37℃条件下反应1h；在一抗与抗原特异性结合后，加入CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物反应1h，洗涤移除多余的生物复合物；最后，向微孔板中加入50μL 0.1mol/L的碱性磷酸酶的催化底物溶液和50μL pH＝9.1的Tris-HCl缓冲液，反应25min后加入猝灭剂与金纳米簇形成的混合液；反应5min后测定荧光强度。
本研究中高锰酸钾或双氧水可以使金纳米簇表面发生氧化作用，破坏其表面结构引起荧光猝灭；被破坏的表面结构在具有还原性的物质如抗坏血酸或对氨基苯酚或邻苯二酚的存在下能够得到恢复，金纳米簇的荧光又重新恢复。我们的发明利用抗原抗体的特异性结合作用依次将一抗、抗原和CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物依次固定到微孔板上，形成“三明治”夹心结构，磷酸酯类底物在CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶复合材料中碱性磷酸酶的催化作用下水解产生抗坏血酸或对氨基苯酚或邻苯二酚，使得被高锰酸钾或双氧水猝灭的金纳米簇的荧光得到恢复，且其恢复程度与甲胎蛋白浓度之间呈线性关系。
本发明的目的还可通过如下技术措施来实现：
所述的金纳米簇合成时使用的修饰剂为带有巯基且能够稳定纳米簇的化合物，所述修饰剂选自牛血清白蛋白、还原性谷胱甘肽、2,3-二巯基丁二酸、嘌呤；修饰剂的物质的量与氯金酸的物质的量之比为1/20-1/5；碱性磷酸酶的催化底物选自抗坏血酸磷酸三钠盐、对氨基苯磷酸盐、邻苯二酚磷酸酯；加入的猝灭剂选自高锰酸钾、双氧水，猝灭剂的量为金纳米簇的量的1/1000-1。
附图说明：
图1是发明制备的金纳米簇在高锰酸钾及抗坏血酸的作用下荧光的猝灭和恢复的光谱图，(a)金纳米簇；(b)金纳米簇与高锰酸钾的混合物；(c)金纳米簇与高锰酸钾的混合物中加入抗坏血酸。
图2是发明制备的CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物在形成过程中的紫外吸收变化图，(a)CaCO3-Au纳米粒子；(b)CaCO3-Au纳米粒子/二抗；(c)CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶。
图3是发明做制备的免疫传感器对不同物质的选择性，甲胎蛋白浓度为0.05ng/mL，其余干扰物浓度为0.5ng/mL。
图4是发明制备的免疫传感器对不同浓度甲胎蛋白的荧光响应及测定甲胎蛋白的线性关系图。以高锰酸钾为猝灭剂，以抗坏血酸磷酸三钠盐为碱性磷酸酶的底物。
具体实施方式：
实施实例1：
a、搅拌条件下，2mL HAuCl4(10mmol/L，37℃)溶液加入到2mL牛血清白蛋白(50mg/mL,37℃)溶液中，5min后加入0.2mL NaOH(1mol/L)溶液至上述混合液中，37℃条件下搅拌反应24h，所得Au纳米簇，用超纯水透析12h作为荧光探针；
b、用负载有金纳米粒子(Au NPs)的层状CaCO3微粒固定碱性磷酸酶(ALP)和甲胎蛋白抗体(二抗，Ab2)，形成CaCO3-Au NPs/Ab2/ALP生物复合物，作为信号标签诱导检测信号的产生；CaCO3-Au NPs/Ab2/ALP生物复合物的制备方法如下：搅拌条件下，2.5mL 1％的柠檬酸三钠盐溶液快速加入煮沸的HAuCl4溶液(100mL 0.01％)中，溶液颜色变为酒红色后继续搅拌冷却至室温得到Au NPs；10mL吐温-80加入到20mL 0.05mol/L CaCl2溶液中搅拌至溶液达到均一状态，然后向上述混合液中快速加入20mL Na2CO3(0.05mol/L)溶液并超声10min，离心并水洗三遍得到层状CaCO3微粒；将0.5g CaCO3微粒分散于50mL Au NPs溶液中并超声15min，离心后得到亮紫色的CaCO3-Au NPs复合物；20μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白抗体(二抗，Ab2)和ALP加入到2mL CaCO3-Au NPs(10mg)溶液中，缓慢震荡2h，然后加入200μL 1％牛血清白蛋白封闭液，30min后离心并水洗三遍，得到CaCO3-AuNPs/Ab2/ALP生物复合物。
c、30μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白抗体(一抗，Ab1)加入到微孔板中，4℃下过夜后用洗液洗涤三次并用牛血清白蛋白封闭液封闭30min，然后将不同浓度的甲胎蛋白抗原(Ag)加入到微孔板中，37℃条件下反应1h后洗液洗涤三遍；在一抗与抗原特异性结合后，加入CaCO3-AuNPs/Ab2/ALP生物复合物反应1h，移除多余的生物复合物并用超纯水洗涤；最后，向微孔板中加入50μL的ALP的催化底物抗坏血酸磷酸三钠盐(0.1mol/L)溶液和50μL pH＝9.1的Tris-HCl缓冲液，反应25min后加入猝灭剂KMnO4(1mmol/L)与金纳米簇形成的混合液(荧光强度记做F0)(100μL/well)，反应5min后测定微孔板中的荧光强度。
实施实例2：
a、搅拌条件下，2mL HAuCl4(10mmol/L，37℃)溶液加入到2mL谷胱甘肽(15mmol/L,37℃)溶液中，5min后加入0.2mL NaOH(1mol/L)溶液至上述混合液中，37℃条件下搅拌反应24h，所得金纳米簇用超纯水透析12h作为荧光探针；
b、用负载有金纳米粒子(Au NPs)的层状CaCO3微粒固定碱性磷酸酶(ALP)和甲胎蛋白抗体(二抗，Ab2)，形成CaCO3-Au NPs/Ab2/ALP生物复合物，作为信号标签诱导检测信号的产生。CaCO3-Au NPs/Ab2/ALP生物复合物的制备方法如下：搅拌条件下，2.5mL 1％的柠檬酸三钠盐溶液快速加入煮沸的HAuCl4溶液(100mL 0.01％)中，溶液颜色变为酒红色后继续搅拌冷却至室温得到Au NPs；10mL吐温-80加入到20mL 0.05mol/L CaCl2溶液中搅拌至溶液达到均一状态，然后向上述混合液中快速加入20mL Na2CO3(0.05mol/L)溶液并超声10min，离心并水洗三遍得到层状CaCO3微粒；将0.5g CaCO3微粒分散于50mL Au NPs溶液中并超声15min，离心后得到亮紫色的CaCO3-Au NPs复合物；20μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白抗体(二抗，Ab2)和ALP加入到2mL CaCO3-Au NPs(10mg)溶液中，缓慢震荡2h，然后加入200μL 1％牛血清白蛋白封闭液，30min后离心并水洗三遍，得到CaCO3-AuNPs/Ab2/ALP生物复合物。
c、30μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白抗体(一抗，Ab1)加入到微孔板中4℃下过夜后用洗液洗涤三次并用牛血清白蛋白封闭液封闭30min，然后将不同浓度的甲胎蛋白抗原(Ag)加入到微孔板中，37℃条件下反应1h后洗液洗涤三遍；在一抗与抗原特异性结合后，加入CaCO3-AuNPs/Ab2/ALP生物复合物反应1h，移除多余的生物复合物并用超纯水洗涤；最后，向微孔板中加入50μL的ALP的催化底物抗坏血酸磷酸三钠盐(0.1mol/L)溶液和50μL pH＝9.1的Tris-HCl缓冲液，反应25min后加入双氧水(1mmol/L)与金纳米簇的混合液(荧光强度记做F0)(100μL/well)，反应5min后测定微孔板中的荧光强度。

Claims (4)

1.一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法，其特征在于：
a、将一定量的HAuCl4与修饰剂混合并用NaOH调节pH至碱性，37℃下搅拌反应24h，得到金纳米簇用超纯水透析12h作为荧光探针；
b、用负载有Au纳米粒子的层状CaCO3微粒固定碱性磷酸酶和甲胎蛋白二抗，形成CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物，作为信号标签诱导检测信号的产生；CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物的制备方法如下：一定量的柠檬酸三钠盐与氯金酸混合后，煮沸搅拌一段时间，冷却得到Au纳米粒子；一定量的吐温-80，氯化钙和碳酸钠混合并超声，离心得到层状CaCO3微粒；将CaCO3微粒分散于Au纳米粒子中超声，离心得到CaCO3-Au纳米粒子复合物；将一定量的甲胎蛋白二抗，碱性磷酸酶和CaCO3-Au纳米粒子复合物混合震荡2h，再加入一定的牛血清白蛋白封闭，30min后离心并重新分散，得到CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物；
c、将30μL 0.5mg/mL的甲胎蛋白一抗加入到微孔板中，4℃下过夜后用含有0.05％吐温-20的pH＝7.4的Tris-HCl缓冲液作为洗涤液洗涤，并用含有3％(w/v)牛血清白蛋白的pH＝7.4的Tris-HCl溶液作为封闭液封闭30min，然后将不同浓度的甲胎蛋白抗原加入到微孔板中，37℃条件下反应1h；在一抗与抗原特异性结合后，加入CaCO3-Au纳米粒子/二抗/碱性磷酸酶生物复合物反应1h，洗涤移除多余的生物复合物；最后，向微孔板中加入50μL 0.1mol/L的碱性磷酸酶的催化底物溶液和50μL pH＝9.1的Tris-HCl缓冲液，反应25min后加入猝灭剂与金纳米簇形成的混合液；反应5min后测定荧光强度。
2.根据权利要求1所述的基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法，其特征在于所述的金纳米簇合成时使用的修饰剂为带有巯基且能够稳定纳米簇的化合物，所述修饰剂选自牛血清白蛋白、还原性谷胱甘肽、2,3-二巯基丁二酸、嘌呤；修饰剂的物质的量与氯金酸的物质的量之比为1/20–1/5；
3.根据权利要求1所述的基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法，其特征在于碱性磷酸酶的催化底物选自抗坏血酸磷酸三钠盐、对氨基苯磷酸盐、邻苯二酚磷酸酯。
4.根据权利要求1所述的基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法，其特征在于加入的金纳米簇的猝灭剂选自高锰酸钾、双氧水，猝灭剂的量为金纳米簇的量的1/1000-1。
CN201510351085.2A 2015-06-23 2015-06-23 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法 Active CN104991074B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510351085.2A CN104991074B (zh) 2015-06-23 2015-06-23 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510351085.2A CN104991074B (zh) 2015-06-23 2015-06-23 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104991074A true CN104991074A (zh) 2015-10-21
CN104991074B CN104991074B (zh) 2017-04-26

Family

ID=54302913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510351085.2A Active CN104991074B (zh) 2015-06-23 2015-06-23 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104991074B (zh)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105382269A (zh) * 2015-11-09 2016-03-09 东南大学 基于置换法和聚集诱导的水溶性发光金纳米团簇的制备方法
CN105954268A (zh) * 2016-04-22 2016-09-21 华南师范大学 一种基于四氧化三铁纳米簇催化信号放大的可视化检测传感器及其构建与应用
CN108474778A (zh) * 2015-12-09 2018-08-31 印度理工学院 利用集成方法来进行基于逆转录聚合酶链式反应（rt-pcr）和/或dna/蛋白质阵列的分析的装置
CN109580958A (zh) * 2018-12-05 2019-04-05 中国科学院长春应用化学研究所 一种心肌肌钙蛋白i的荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法
CN109724957A (zh) * 2018-12-28 2019-05-07 南京工业大学 一种基于铝离子诱导磷光铜纳米簇聚集增强荧光检测铝离子的方法及其应用
CN109837083A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 中国农业大学 一种有机/无机杂化双功能荧光纳米花及其制备方法与应用
CN110174459A (zh) * 2019-06-14 2019-08-27 广西师范大学 金簇在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测中的应用
CN110501318A (zh) * 2019-08-27 2019-11-26 中国科学院长春应用化学研究所 一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法
CN110846031A (zh) * 2019-11-27 2020-02-28 重庆医科大学 一种自组装复合纳米颗粒及其制备方法
CN110885678A (zh) * 2019-09-26 2020-03-17 华东理工大学 金纳米团簇自组装体及其制备方法和发光材料
CN111948186A (zh) * 2020-08-31 2020-11-17 燕山大学 一种荧光传感器的制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1773281A (zh) * 2005-10-20 2006-05-17 上海交通大学 免疫胶体金粒子荧光淬灭的测量方法
US20090298115A1 (en) * 2008-05-29 2009-12-03 Chung Yuan Christian University Fluorescent Gold Nanocluster and Method for Forming the Same
US20110185854A1 (en) * 2007-04-10 2011-08-04 The Regents Of The University Of California Synthesis of Fluorescent Metal Nanoclusters
CN102590166A (zh) * 2012-02-10 2012-07-18 中国科学院长春应用化学研究所 一种胰蛋白酶的检测方法
CN103713134A (zh) * 2013-12-17 2014-04-09 武汉大学 一种可视化检测病毒的检测试剂盒及其检测方法
CN104502614A (zh) * 2015-01-26 2015-04-08 湖南科技大学 一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1773281A (zh) * 2005-10-20 2006-05-17 上海交通大学 免疫胶体金粒子荧光淬灭的测量方法
US20110185854A1 (en) * 2007-04-10 2011-08-04 The Regents Of The University Of California Synthesis of Fluorescent Metal Nanoclusters
US20090298115A1 (en) * 2008-05-29 2009-12-03 Chung Yuan Christian University Fluorescent Gold Nanocluster and Method for Forming the Same
CN102590166A (zh) * 2012-02-10 2012-07-18 中国科学院长春应用化学研究所 一种胰蛋白酶的检测方法
CN103713134A (zh) * 2013-12-17 2014-04-09 武汉大学 一种可视化检测病毒的检测试剂盒及其检测方法
CN104502614A (zh) * 2015-01-26 2015-04-08 湖南科技大学 一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIMEI AO, ET AL.: "Fluoroimmunoassay for Antigen Based on Fluorescence Quenching Signal of Gold Nanoparticles.", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
YANG CHEN, ET AL.: "Cysteine-directed fluorescent gold nanoclusters for the sensing of pyrophosphate and alkaline phosphatase.", 《JOURNAL OF MATERIALS CHEMISTRY C》 *
YANG CHEN, ET AL.: "Substrate hydrolysis triggered formation of fluorescent gold nanoclusters-a new platform for the sensing of enzyme activity.", 《CHEM.COMMUN.》 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105382269A (zh) * 2015-11-09 2016-03-09 东南大学 基于置换法和聚集诱导的水溶性发光金纳米团簇的制备方法
CN108474778A (zh) * 2015-12-09 2018-08-31 印度理工学院 利用集成方法来进行基于逆转录聚合酶链式反应（rt-pcr）和/或dna/蛋白质阵列的分析的装置
CN108474778B (zh) * 2015-12-09 2020-07-24 印度理工学院 利用集成方法来进行基于逆转录聚合酶链式反应和/或dna/蛋白质阵列的分析的装置
CN105954268A (zh) * 2016-04-22 2016-09-21 华南师范大学 一种基于四氧化三铁纳米簇催化信号放大的可视化检测传感器及其构建与应用
CN109837083B (zh) * 2017-11-24 2020-10-27 中国农业大学 一种有机/无机杂化双功能荧光纳米花及其制备方法与应用
CN109837083A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 中国农业大学 一种有机/无机杂化双功能荧光纳米花及其制备方法与应用
CN109580958A (zh) * 2018-12-05 2019-04-05 中国科学院长春应用化学研究所 一种心肌肌钙蛋白i的荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法
CN109580958B (zh) * 2018-12-05 2022-02-01 中国科学院长春应用化学研究所 一种心肌肌钙蛋白i的荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法
CN109724957A (zh) * 2018-12-28 2019-05-07 南京工业大学 一种基于铝离子诱导磷光铜纳米簇聚集增强荧光检测铝离子的方法及其应用
CN109724957B (zh) * 2018-12-28 2022-04-05 南京工业大学 一种基于铝离子诱导磷光铜纳米簇聚集增强荧光检测铝离子的方法及其应用
CN110174459A (zh) * 2019-06-14 2019-08-27 广西师范大学 金簇在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测中的应用
CN110501318B (zh) * 2019-08-27 2020-11-13 中国科学院长春应用化学研究所 一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法
CN110501318A (zh) * 2019-08-27 2019-11-26 中国科学院长春应用化学研究所 一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法
CN110885678A (zh) * 2019-09-26 2020-03-17 华东理工大学 金纳米团簇自组装体及其制备方法和发光材料
CN110885678B (zh) * 2019-09-26 2022-09-13 华东理工大学 金纳米团簇自组装体及其制备方法和发光材料
CN110846031A (zh) * 2019-11-27 2020-02-28 重庆医科大学 一种自组装复合纳米颗粒及其制备方法
CN111948186A (zh) * 2020-08-31 2020-11-17 燕山大学 一种荧光传感器的制备方法
CN111948186B (zh) * 2020-08-31 2022-05-10 燕山大学 一种荧光传感器的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104991074B (zh) 2017-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104991074A (zh) 一种基于金纳米簇的荧光增强型甲胎蛋白免疫测定方法
Chen et al. Alkaline phosphatase-triggered in situ formation of silicon-containing nanoparticles for a fluorometric and colorimetric dual-channel immunoassay
Zhou et al. Emerging strategies to develop sensitive AuNP-based ICTS nanosensors
Lv et al. Wet NH3-triggered NH2-MIL-125 (Ti) structural switch for visible fluorescence immunoassay impregnated on paper
Zhang et al. Turn-on and ratiometric luminescent sensing of hydrogen sulfide based on metal–organic frameworks
Ma et al. Multiplex immunochips for high-accuracy detection of AFP-L3% based on surface-enhanced Raman scattering: Implications for early liver cancer diagnosis
Sun et al. Fluorescence immunoassay system via enzyme-enabled in situ synthesis of fluorescent silicon nanoparticles
Liang et al. The surface-plasmon-resonance effect of nanogold/silver and its analytical applications
Quesada-González et al. Nanoparticle-based lateral flow biosensors
Kuningas et al. Upconversion fluorescence resonance energy transfer in a homogeneous immunoassay for estradiol
Su et al. Strategies in liquid-phase chemiluminescence and their applications in bioassay
Xu et al. Ultrasensitive detection of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus based on immunofluorescent carbon dots/SiO2 nanosphere-based lateral flow assay
Zhang et al. Colorimetric and SERS dual-readout for assaying alkaline phosphatase activity by ascorbic acid induced aggregation of Ag coated Au nanoparticles
Molinero-Fernández et al. Polymer-based micromotor fluorescence immunoassay for on-the-move sensitive procalcitonin determination in very low birth weight infants’ plasma
Yao et al. Reverse fluorescence enhancement and colorimetric bimodal signal readout immunochromatography test strip for ultrasensitive large-scale screening and postoperative monitoring
CN102803962B (zh) 信号放大微球、其在一步和多步分析放大方法中的用途和用于其生产的方法
Li et al. Dynamic light scattering (DLS)-based immunoassay for ultra-sensitive detection of tumor marker protein
Shi et al. Advances of metal organic frameworks in analytical applications
CN104865247B (zh) 基于纳米金聚集的显色方法在免疫检测中的应用
Ma et al. Development of an immunosensor based on the exothermic reaction between H2O and CaO using a common thermometer as readout
Sabouri et al. A gold nanoparticle-based immunosensor for the chemiluminescence detection of the hepatitis B surface antigen
CN101458215A (zh) 一种多联吡啶钌络合物的电化学发光适配子传感器及制法
Chen et al. Versatile T1-based chemical analysis platform using Fe3+/Fe2+ interconversion
CN109612977A (zh) 基于表面增强拉曼光谱的无酶信号放大生物标志物检测方法
CN103525815A (zh) 适配体修饰的纳米银探针及其试剂盒与在检测pdgf-bb中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant