CN104981479A

CN104981479A - 用免疫抑制性Tat衍生多肽治疗炎症、自身免疫和神经退行性疾病

Info

Publication number: CN104981479A
Application number: CN201380072338.1A
Authority: CN
Inventors: 约舒华·高德博格; 科林·比尔; 克里斯托夫·霍兹-贝霍夫希奇; 索菲·汉斯科姆
Original assignee: PIN Pharma Inc
Current assignee: Ruisilian Pharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2012-12-06
Filing date: 2013-12-06
Publication date: 2015-10-14
Anticipated expiration: 2033-12-06
Also published as: WO2014089480A1; RU2015126776A; AU2013355039B2; JP2019163259A; ZA201504100B; CN104981479B; JP2016508121A; IL239271B; AU2013355039A1; CA2894166A1; EP2928910B1; ES2748423T3; US20180185441A1; US9878001B2; NZ708836A; RU2653754C2; EP2928910A1; IL239271A0; HK1216318A1; US20140178420A1

Abstract

本说明书提供了免疫抑制性Tat衍生多肽、组合物以及使用这样的多肽和组合物治疗自身免疫疾病、炎症相关疾病和/或神经退行性疾病的方法。

Description

用免疫抑制性Tat衍生多肽治疗炎症、自身免疫和神经退行性疾病

与相关申请的交叉引用

本申请要求2012年12月6日提交的美国临时专利申请61/734,135和2013年9月23日提交的61/881,266的权益，两者的内容通过引用被全部并入本文。

技术领域

本申请涉及用于治疗以异常免疫反应为特征的疾病(例如神经退行性疾病、自身免疫疾病和炎症相关疾病)的免疫抑制性人类免疫缺陷病毒(HIV)转录反式激活因子(Tat)衍生多肽。

背景

人类免疫缺陷病毒(HIV)转录反式激活因子(Tat)介导至少两种独立的活性，在细胞表面的受体介导的触发事件和控制抗原呈递细胞(APC)分化的细胞内反式激活活性。Tat所介导的受体介导触发事件特异于APC，使它们激活并分化成为高度免疫抑制的抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)或成为刺激特异性细胞毒性T淋巴细胞的树突细胞(DC)。

抗原呈递细胞、巨噬细胞和树突细胞在多种疾病、病症和不期望的免疫反应的发病机理或对多种疾病、病症和不期望的免疫反应的应答中很关键。Tat触发单核细胞分化成抗原呈递巨噬细胞，所述抗原呈递巨噬细胞表达特异性抑制对所呈递抗原的免疫反应的分子。在自身免疫疾病中，某些机体自身的內源分子被不正确地识别为外来的，从而导致广泛的炎症和组织损伤。在一种实例中，II型胶原蛋白降解成免疫原性多肽能够触发动物中的类风湿性关节炎(RA)且已与人类RA相关联。相当多研究已经集中于减少对这些蛋白质的免疫反应。归因于Tat的抗原特异性巨噬细胞诱导的抑制可被用于减少与炎症和神经退行性疾病相关的对外来和內源分子的不期望的免疫反应。

治疗炎症和自身免疫疾病的尝试获得的成功有限。这部分是由于下述事实：炎症和自身免疫疾病的病因学是复杂的反应，该反应部分基于显示为通过冗余机制引发炎症的多种炎症诱导分子和大量炎症介导和炎症敏感分子。因此，能够治疗炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病的化合物、组合物和方法将是高度期望的。

概述

本说明书公开了用于治疗患有异常免疫反应相关疾病(例如神经退行性或自身免疫疾病或炎症相关疾病)的个体的化合物、组合物和方法。这是通过向患所述疾病的个体施用治疗有效量的免疫抑制性Tat衍生多肽或包含所述多肽的组合物来实现的。如本文所公开的，所公开的免疫抑制性Tat衍生多肽已显示出免疫抑制活性。

本文公开了免疫抑制性转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，所述多肽包含下述氨基酸序列，所述氨基酸序列以所示顺序包含下述结构域：转录因子(TF)结构域，其包含来自免疫抑制性人类免疫缺陷病毒(HIV)、SIV Tat蛋白质、无毛(hairless)的或人工免疫抑制性序列的序列；来自慢病毒Tat或防御素分子的富半胱氨酸区；和来自慢病毒Tat蛋白质的C-末端区域。

在另一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽还包含来自慢病毒Tat蛋白质的富精氨酸结构域。在另一种实施方式中，TF结构域还在N-末端包含重复序列，所述重复序列包含(PVDPRLEPWKHPGSQP)_n，其中n＝2-10。在另一种实施方式中，TF结构域中的至少一个氨基酸被保守氨基酸替换修饰。

在免疫抑制性Tat衍生多肽的另一种实施方式中，HIV是HIV-1或HIV-2。在另一种实施方式中，慢病毒Tat来自HIV-1、HIV-2、SIV、FIV、BIV或EIAV。

在免疫抑制性Tat衍生多肽的另一种实施方式中，TF结构域包含SEQID NO:36、39、44、48、50、54、59、60或61中的一种的氨基酸序列。在另一种实施方式中，富半胱氨酸结构域包含SEQ ID NO:37、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、58、62、63、64或70中的一种的氨基酸序列。在另一种实施方式中，C-末端结构域包含SEQ ID NO:38、42、46、47、49、52、53、68或71中的一种的氨基酸序列。在另一种实施方式中，富半胱氨酸区和C-末端区域二者来自相同来源，且组合的富半胱氨酸区和C-末端区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:47、49或53中的一种。在另一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69中的一种有高于85％的序列同一性、高于90％的序列同一性或高于95％的序列同一性。

本文还公开了药物组合物，其包含一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽和药学上可接受的赋形剂。在另一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69中的一种或更多种有高于85％的序列同一性。

本文还公开了治疗以异常免疫反应为特征的疾病的方法，所述方法包括：向有此需要的受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽；从而通过抑制免疫系统来治疗所述疾病。

本文还公开了增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)表达的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽；从而增加AReg上FasL的表达。

本文还公开了减少炎症的方法，所述方法包括：向有此需要的受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽，从而减少受试者中的炎症。

在本文所公开方法的一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQID NO:9-11、13-35或69中的一种有高于85％的序列同一性。

在该方法的另一种实施方式中，治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。在另一种实施方式中，AReg是CD14+巨噬细胞。

在该方法的另一种实施方式中，疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。在一种实施方式中，自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。在另一种实施方式中，炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热(heartburn)、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。在另一种实施方式中，神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

在该方法的另一种实施方式中，施用还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状的减少，其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

在该方法的另一种实施方式中，受试者并未免疫受损。在另一种实施方式中，受试者的免疫系统并未因所述施用而受损。在另一种实施方式中，作为施用的结果，AReg的细胞因子分泌减少。

在该方法的另一种实施方式中，施用多剂免疫抑制性Tat衍生多肽。在另一种实施方式中，每天、每周、每两周、每月或每两月地施用免疫抑制性Tat衍生多肽。在另一种实施方式中，施用步骤包括重复的施用周期，其中每个周期包括：在确定的时期内施用多剂免疫抑制性Tat衍生多肽，随后是静息期；其中重复所述周期多次。

本文还公开了一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于治疗有此需要的受试者中以异常免疫反应为特征的疾病；其中，所述一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用免疫抑制性Tat衍生多肽通过抑制受试者的免疫系统来治疗疾病。

本文还公开了一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于增加受试者中抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)的表达；其中，所述一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，其中施用免疫抑制性Tat衍生多肽增加了AReg上FasL的表达。

本文还公开了一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于减少受试者中的炎症；其中，所述一种或多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用免疫抑制性Tat衍生多肽减少了受试者中的炎症。

在该用途的另一种实施方式中，治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。在另一种实施方式中，AReg是CD14+巨噬细胞。在另一种实施方式中，AReg的细胞因子分泌减少。在另一种实施方式中，受试者并未免疫受损。在另一种实施方式中，作为施用的结果，受试者未免疫受损。

在所述用途的另一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ IDNO:9-11、13-35或69中的一种有高于85％的序列同一性。

在该用途的另一种实施方式中，疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。在另一种实施方式中，自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。在另一种实施方式中，炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。在另一种实施方式中，神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

在该用途的另一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状的减少，其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和依赖于自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

在该用途的另一种实施方式中，施用多剂免疫抑制性Tat衍生多肽。在另一种实施方式中，每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次或每两月一次地施用免疫抑制性Tat衍生多肽。在另一种实施方式中，施用步骤包括重复的施用周期，其中每个周期包括：在确定的时期内施用多剂免疫抑制性Tat衍生多肽，随后是静息期；其中重复所述周期多次。

附图简介

图1描述了单核细胞的Tat活化结果的荧光激活细胞分选仪(FACS)分析。通过在GM-CSF和IL-4中培养5天使人外周血单核细胞定向分化成树突细胞(DC)。在单独的培养基(对照)、脂多糖(LPS)或Tat中过夜培养定向的(committed)DC，然后用抗-CD86抗体进行染色并利用FACScan分析CD86(DC激活的特异性标志物)诱导(左侧图)或广泛性激活(右侧图，在盒R2中放大，显示Tat-刺激的细胞)。

图2描述了Tat*-抗原(Ag)复合体增强细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗原特异性激活。采用ELISPOT试验，将CTL活性量化为分泌γ-干扰素的斑点形成集落(SFC)的数目/10⁶涂布细胞。

图3描述了单核细胞的中值荧光，所述单核细胞不用刺激(0)、用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、用LPS、用浓度降低的C-Tat(常规的来自HIV的天然免疫抑制性Tat)、或用氧化的C-Tat(ox-C-Tat)培养6天并用抗-Fas配体(FasL)单克隆抗体(Mab)染色，随后用带荧光的山羊抗小鼠多克隆抗体染色。

图4A-B描述了在免疫抑制性Tat(PT)存在下或利用非免疫抑制ox-Tat*(Ag)时，2周(图4A)或6周(图4B)之后，对免疫原性抗原的抗体效价。

图5描述了体内巯基乙酸盐刺激(刺激+佐剂)之后或无体内刺激(静息)时分离的小鼠腹膜巨噬细胞的FACS分析。在缺乏额外刺激(C)、利用LPS或利用Tat下，培养小鼠腹膜巨噬细胞5天。激活被测定为扩大细胞的百分比(M1部分)。

图6描述了用免疫抑制性Tat免疫2周之后，Tat-Ag复合体稳定抑制抗原刺激的T淋巴细胞。

图7描述了Tat抑制的抗原特异性。用含Tat的佐剂乳剂(Ag+Tat)，或用作为对照的单独Ag在第0天免疫小鼠，并在第7天加强(boost)。在第14天，收获引流淋巴结细胞并用特异性或非特异性抗原刺激，并在培养4天后通过³H胸苷摄取(CPM)测量增殖。

图8描述了在对照培养基(对照)、或含Tat或LPS的培养基中培养4天的人外周血单核细胞的FACS分析。利用带荧光的抗-FasL Mab(αFasL-FITC)并利用抗-CD14若丹明标记的Mab对收获的细胞进行双重染色。通过FACScan分析细胞的激活(正向散射)、CD14表达(巨噬细胞％，R2)和FasL诱导(MFI)。T细胞群体被标记为R1。

图9A-B描述了Tat激活的巨噬细胞的调控和免疫抑制特征。(A)在含有破伤风抗原(Ag)、额外添加Tat的抗原(Ag+Tat)或带有Tat和重组sFas蛋白的Ag(Ag+Tat+sFas)的培养基中培养来自一个个体(PBMCs#3)的人外周血单核细胞(PBMC)5天。将结果作图为刺激指数(经刺激培养物的平均cpm/培养基对照的平均cpm)。(B)与加入Tat(Ag+Tat)、或Tat和拮抗的抗-Fas抗体ZB4(Ag+Tat+αFas)的培养物相比，用单独的破伤风或念珠菌抗原(Ag)培养6天的PBMC的增殖。

图10描述了利用Tat衍生物来刺激人单核细胞。

图11描述了利用Tat衍生物来刺激人单核细胞的剂量-反应曲线。

图12A-C描述了利用Hoechst-NucBlue和Alexa488标记的Tat衍生物SEQID NO:9(图12A)、Alexa488标记的Tat衍生物SEQ ID NO:11(图12B)或对照(无Tat衍生物，图12C)的Jurkat细胞染色。左列代表利用Hoechst-NucBlue的核染色，中列代表Alexa488染色，右列描述了左侧图像和中间图像的合并。

图13A-C描述了利用Hoechst-NucBlue和Alexa488标记的Tat衍生物SEQID NO:9(图13A)、Alexa488标记的Tat衍生物SEQ ID NO:11(图13B)或对照(无Tat衍生物，图13C)的U937细胞染色。左列代表利用Hoechst-NucBlue的核染色，中列代表Alexa488染色，右列描述了左侧图像和中间图像的合并。

图14A-C描述了通过FasL表达测量的无刺激(图14A)、利用LPS(图14B)或Tat衍生物SEQ ID NO:9(图14C)的人外周血单核细胞(PBMC)的激活。

图15描述了通过细胞表面CD14表达测量的无刺激、利用LPS或Tat衍生物SEQ ID NO:9的人CD14+PBMC的增殖。

图16描述了用LPS、Tat衍生物SEQ ID NO:9处理或不用刺激处理的PBMC的3天培养物中CD14+细胞的百分比。

图17A-E描述了用TNF-α(图17B)、LPS(图17C)、Tat衍生物SEQID NO:9(图17D)或无刺激(图17A)处理并培养5天后，PBMC表达FasL和CD14二者。图17E以图形格式描述了来自图27A-D的数据。

发明详述

本说明书涉及用于治疗患有异常免疫反应相关疾病的个体的化合物、组合物和方法，所述疾病例如自身免疫疾病包括神经退行性疾病或炎症相关疾病。这是通过向患所述疾病的个体施用治疗有效量的免疫抑制性Tat衍生多肽或包含所述多肽的组合物来实现的。如本文所公开，公开的免疫抑制性Tat衍生多肽具有抗炎活性。在本公开范围内的免疫抑制衍生多肽为免疫抑制性的。

当在本文中使用时，术语“异常免疫反应”指的是提高的、不期望的、过度的或不适当的免疫反应，其中对抗原(例如自身抗原)的免疫反应被提高从而使得能够看到炎症和/或自身免疫疾病或神经退行性疾病。当在本文中使用时，异常免疫反应的特征是免疫级联，其导致身体的组织被破坏。典型地，异常免疫结果在对感染的正常反应中见不到，但可由感染引发。

HIV Tat蛋白是长度为86-110个氨基酸的可变的RNA结合肽，其在HIV基因组中2个分开的外显子上编码。基于分子分析，Tat蛋白(SEQ IDNO:2)编码不同且相关联的肽活性。本公开描述了多肽组合物，它们以增强多肽的免疫治疗潜能的方式至少在第一或氨基末端部分由标准的(canonical)HIV-1Tat结构衍生。Tat的氨基末端部分包括来自侧翼通常为脯氨酸残基的核转录因子(TF)的短肽区域。该区域至少部分决定了Tat多肽对免疫系统细胞(特别是固有免疫细胞例如树突细胞(DC)和巨噬细胞(抗原呈递细胞或APC))的刺激程度或抑制程度。因此预测：对TF区域的修饰能够使多肽在疾病治疗中更有活性。

先前研究确定：HIV Tat在大多数人类HIV毒株中有免疫抑制性。然而，在长期无进展者(LTNP)中，HIV Tat蛋白有免疫刺激性，所述LTNP是具有高病毒载量的HIV感染个体的亚组，他们的T4细胞未显著减少且不向获得性免疫缺陷综合症(AIDS)发展。在LTNP中发现的Tat蛋白能够反式激活病毒RNA；然而，LTNP Tat(由刺激免疫Tat而在下文中被表示为“IS-Tat”)不诱导T4细胞或巨噬细胞凋亡且无免疫抑制性。此外，被分离自LTNP的HIV离体感染的T4细胞(这样的细胞系被表示为“Tat TcL”)过表达IS-Tat蛋白(通常是为了实质上排出其它病毒蛋白)，其强烈促进生长而非促进凋亡。克隆自这些Tat TcL的tat基因在两个tat区域(即：在氨基末端及在第二个外显子的第一部分内)中显示出序列变异。

基于分子分析，HIV Tat蛋白(SEQ ID NO:2)包含3个有差异的目的区域。第一个目的区域是位于Tat氨基末端(第3-19位氨基酸)的转导结构域。第二个目的区域是富半胱氨酸配体结合结构域(第22-37位氨基酸)，其含有7个保守半胱氨酸。第三个目的区域是膜转位序列(MTS)，其包含第47-57位氨基酸。

接近转导结构域内HIV-1和HIV-2Tat的氨基末端(第3-19位氨基酸)的富脯氨酸链(stretch)是与小鼠无毛(hr)基因(SEQ ID NO:72)的SH3结合结构域显著同源的SH3结合结构域。SH3结合结构域给出了用于药物开发的重要靶标以及用于诊断、预防和治疗不期望的细胞过程(例如自身免疫)的潜能。

出乎意料地，表达hr基因突变的小鼠发展成类AIDS综合症，其特征为：CTL功能欠佳、辅助性T淋巴细胞从调控性细胞介导免疫的那些(TH1)转变为调控性抗体介导免疫的那些(TH2)，以及对化学品和紫外光诱导的皮肤癌的易感性提高。此外，在感染逆转录病毒的不发展成免疫缺陷和无流行性感染的猴子中发现了Tat的变体。然而，这些变体Tat不具有SH3结合结构域，而是替换了不同的序列(同样由序列两端的脯氨酸起始)进入转导结构域。因此，SH3结合结构域对Tat的免疫抑制活性很重要。遗传数据表明：SH3结合结构域调控单核细胞分化成抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)。在不含这种SH3结构域或这种结构域突变的Tat蛋白中，单核细胞直接分化成刺激CTL反应的DC。

MTS区域允许Tat穿过内体膜自由通行进入细胞质而后结合受体，其中它反式激活基因表达，包括但不限于HIV-1的基因。MTS已被错误假定为促进Tat进入细胞，这仅能在高浓度下完成且在体内不可能实现。

与现有免疫抑制疗法不同，公开的基于Tat的组合物(免疫抑制性Tat衍生多肽)具有抑制抗原特异性免疫反应而不使患者免疫受损的能力。在不存在病毒的情况下，它们保持常规HIV Tat的免疫抑制活性，因此免疫抑制性Tat衍生物调节免疫反应的特异性—身体天然防御的关键组分。当需要慢性免疫抑制疗法(例如在自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病中)时，这尤其重要。

Tat的免疫抑制效果由巨噬细胞介导。当被Tat刺激(通过天然HIV-1感染或通过Tat摄取)时，巨噬细胞诱导Fas配体(FasL)，FasL继而诱导抗原反应性表达Fas的辅助T细胞的程序化细胞死亡(凋亡)(图3)。与之前未激活和利用相对高浓度的Tat刺激相比，Tat提高了培养的鼠巨噬细胞的生存力，只要巨噬细胞首先在体内被激活。相比之下，LPS在对人巨噬细胞有效的相同浓度下，不依赖体内刺激提高鼠巨噬细胞的生存力。本文所公开的某些基于Tat的组合物稳定抑制小鼠淋巴细胞增殖并还可有助于抑制对多种抗原的抗原特异性免疫反应。

负责这些反应的巨噬细胞已被鉴定为抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)。AReg也被称为“替代性激活的”巨噬细胞。AReg是稳定的巨噬细胞，其表达FasL并分泌细胞因子IL-10和IL-6。AReg是稳定的，其以自分泌和旁分泌方式对这两种细胞因子反应，并以旁分泌方式对IL-4反应。这些细胞因子积累并将免疫反应由TH1(基于辅助性T淋巴细胞)转换为TH2(基于抑制性T淋巴细胞)。随着这些细胞因子累积，它们压倒(overwhelm)并抑制免疫反应，并解释了为什么免疫反应在正常情况下以抗原特异性方式自我限制。

出乎意料地观察到：与启动CD4+T细胞直接凋亡所需的浓度(约500nM)相比，降低1000倍的Tat浓度(500pM)引发对巨噬细胞的这种效果。因此，在作为全身施用的免疫调节剂可实现的Tat浓度下，巨噬细胞效果将比T细胞效果优先出现。

Tat介导的抗原特异性抑制通过CD14+FasL+巨噬细胞的反式(细胞内)激活来介导。Tat激活的巨噬细胞是免疫抑制性AReg。在低浓度Tat(50nM)下，Tat诱导的免疫抑制不仅通过加入可溶Fas被完全逆转，而且在这些条件下，Tat实际上变得略微刺激性(相对于单独的抗原处理)。FasL的抗体逆转了Tat对破伤风反应的免疫抑制并增强了念珠菌反应(相对于单独的Tat处理)。向培养物中进一步加入抗-IL-10和抗-IL-6抗体可完全逆转抑制(＞对照的95％)，这两种细胞因子均来源于这些培养条件下的巨噬细胞。一部分Tat诱导的免疫抑制来源于FasL诱导，尽管其它Tat-诱导因子也能参与抑制T细胞增殖反应，在较高Tat浓度下尤其如此。

由Tat基因的外显子1和2编码的HIV-1Tat的完整氨基酸序列在下面列出：

Tat在接近氨基末端(第3-19位氨基酸，上方加下划线的)处具有富脯氨酸(P)区段。HIV-1Tat的这个高度保守区域是标准的SH3结合区域，其在本文中也被称为核转录因子(TF)结构域。小鼠无毛(hr)基因也具有SH3结合基序(TF，hr的第176-196位氨基酸，SEQ ID NO:72)。人类Tat SH3结合结构域(SEQ ID NO:4)和小鼠hr基因的SH3结合结构域之间存在同源性：

人类 3 Pro Val Arg Pro Asn Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro18

小鼠 180 Pro Leu Thr Pro Asn-------Pro Trp Val Tyr Ser Gly Ser Gln Pro193

发现于猴逆转录病毒中的Tat变体不引起免疫缺陷且不具有SH3结合结构域，相反地，其具有下述侧翼为脯氨酸的序列：

Pro Leu Arg Glu Gln Glu Asn Ser Leu Glu Ser Ser Asn Glu Arg Ser Ser Cys IleLeu Glu Ala Asp Ala Thr Thr Pro(SEQ ID NO:3)

所述猴序列(SEQ ID NO:3)的人类等价物为：

Ser Asn Glu Arg Ser Ser Cys Glu Leu Glu Val(SEQ ID NO.4)

另外一个目的区域是富半胱氨酸的建议的配体结合结构域(第22-37位氨基酸)，其包含7个半胱氨酸。

Cys Thr Thr Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys(SEQ IDNO:5)

通过调节由SH3结合结构域所确定的信号转导基序而产生的Tat衍生物推动分化主要朝向树突细胞或免疫抑制AReg。AReg还是胃、胰腺和导管浸润性乳腺肿瘤侵入的关键作用者，以及器官移植中的耐受的组分。SH3结构域两侧位于位置3和18的两个外部脯氨酸被维持以有助于用于SH3结合的正确结构。此外，来自非免疫抑制性人类变体Tat的转导结构域或来自hr突变体的结构域能够取代Tat的第3-19位氨基酸，尽管hr序列被预测为增强抑制。此外，刺激性的猴形式的Tat(SEQ ID NO.3)或其人类等效序列(SEQID NO.4)可替换入该结构域。额外的化学修饰例如ox-Tat(如US2006/0160183中所公开的化学氧化的Tat，其中所包含的关于Tat衍生物的所有内容通过引用被并入本文)可被用于刺激树突/CTL反应。

在本文所公开的一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生物包含其中第3-19位氨基酸被改变的Tat肽。这些改变包括：用替代性氨基酸取代单个氨基酸或者用另一种序列取代所有第3-19位氨基酸。适用于构建所公开的免疫抑制性Tat衍生物的Tat肽包括：来自HIV-1变体、HIV-2变体和SIV变体的Tat。SIV变体可来源于被表4中所列的SIV感染的任何灵长类物种。同样有用的是来自非灵长类物种的免疫抑制慢病毒Tat序列，所述物种包括但不限于猫科动物(来自猫科动物免疫缺陷病毒的Tat，FIV)、牛科动物(来自牛科动物免疫缺陷病毒的Tat，BIV)或马科动物(来自马科动物感染性贫血病毒的Tat，EIAV)。为了本公开的目的，术语“变体”指的是：对应于所示病毒的不同毒株(天然存在的或突变的)的序列的肽。

SH3结合蛋白含有核转录因子(TF)功能所需的一系列内部脯氨酸。在某些实施方式中，内部脯氨酸各自被丙氨酸取代，从而使SH3结合位点失活。

表1中展示了在本公开范围内的示例性免疫抑制性Tat衍生物。通常，用于治疗炎症、自身免疫疾病和神经退行性疾病的免疫抑制性Tat衍生多肽包含3个区域。第一个区域是衍生的TF，第二个区域是富半胱氨酸区，第三个区域是C-末端Tat区域。

TF区域、富半胱氨酸区和C-末端区域按此顺序在Tat衍生多肽中排列。TF区域可来源于下述来源，所述来源包括但不限于HIV-1Tat、HIV-2Tat、SIV Tat、无毛基因或人工的免疫抑制序列。富半胱氨酸区可来自慢病毒Tat或富半胱氨酸的防御素分子。C-末端区域可来源于慢病毒Tat。此外，Tat衍生物C-末端区域可包含来自HIV-1Tat、HIV-2Tat或SIV Tat的富精氨酸区域(也被称为膜转位序列)。

当在本文中使用时，术语“防御素分子”指的是在脊椎动物和无脊椎动物二者中发现的小的富半胱氨酸的阳离子蛋白。防御素包含18-45个氨基酸，其含有6-8个保守半胱氨酸残基。防御素被分成3组：α-防御素、β-防御素和θ-防御素。

在另一种实施方式中，TF区域在N-末端还包含重复序列，所述重复序列包括但不限于(PVDPRLEPWKHPGSQP)_n(SEQ ID NO:12)，其中n＝2-10。此外，重复序列可通过作为间隔区的一个或多个氨基酸与免疫抑制性Tat衍生多肽的N-末端分开。

在另一种实施方式中，TF区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:36、39、44、48、50、54、59、60或61中的一种。在另一种实施方式中，富半胱氨酸区的氨基酸序列是SEQ ID NO:37、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、58、62、63、64或70中的一种。在另一种实施方式中，C-末端区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:38、42、46、47、49、52、53、68或71中的一种。在另一种实施方式中，富半胱氨酸区和C-末端区域二者来自相同来源且富半胱氨酸/C-末端区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:47、49或53中的一种。

在额外的实施方式中，TF结构域中的一个或多个氨基酸(包括但不限于脯氨酸)被缺失或被保守氨基酸替换物替换。

在额外的实施方式中，提供了免疫抑制性Tat衍生物的保守修饰变体的使用。本文中所述的变体维持亲本或来源分子的生物活性。

表1.

^a agm＝非洲绿猴；^b smm＝烟煤灰白眉猴；^c cpz＝黑猩猩；^d VIVIT＝人工TF序列；^e gor＝大猩猩；^f syk＝赛克斯猴；^g来自Macaca mulatta；^h mac＝猕猴；ⁱ mon＝白腹长尾猴；^j来自Chlorocebusaethiops；^k来自Pongo abelli。

当在本文中使用时，术语“保守修饰变体”指的是具有原始肽的相同或相似生物活性的变体肽。例如，可进行这样的保守氨基酸变化，它们虽然改变了蛋白质或肽的一级序列，但不改变其功能。保守变体具有至少一个氨基酸被另一个氨基酸或氨基酸类似物替换，所述另一个氨基酸或氨基酸类似物具有至少一种性质类似于来自示例性参考肽的原始氨基酸的性质。性质的实例包括但不限于：相似的大小、拓扑(topography)、电荷、疏水性、亲水性、亲脂性、共价结合能力、结合氢的能力、理化性质等，或其任意组合。可通过多种因素评估保守替换，例如，被替换的氨基酸的物理性质(表2)或者原始氨基酸将如何耐受替换(表3)。本领域普通技术人员已知可选择本文所公开肽中的哪个氨基酸替换为另一种氨基酸。保守变体可以以与示例性参考肽基本相同的方式起作用，且在本说明的任何方面均可替换示例性参考肽。

表2.氨基酸性质

性质	氨基酸
		脂肪族	G,A,I,L,M,P,V
芳香族	F,H,W,Y
		C-β分支	I,V,T
疏水	C,F,I,L,M,V,W
		小、有极性	D,N,P
小、无极性	A,C,G,S,T
		大、有极性	E,H,K,Q,R,W,Y
大、有极性	F,I,L,M,V
		带电荷	D,E,H,K,R
不带电荷	C,S,T
		阴性	D,E
阳性	H,K,R
		酸性	D,E
碱性	K,R
		酰胺	N,Q

表3.氨基酸替换

Matthew J.Betts和Robert,B.Russell,Amino Acid Properties andConsequences of Substitutions,第289-316页,Bioinformatics for Geneticists,(Michael R.Barnes编,Ian C.Gray,Wiley,2003)。

表4.Tat衍生肽中使用的SIV毒株缩略语

在一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽是表1中所公开的肽。免疫抑制性Tat衍生多肽还可包含Tat衍生多肽的保守变体。在一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体是本文中所公开的免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体。在这种实施方式的一些方面中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体可以是，例如，与免疫抑制性Tat衍生多肽的氨基酸序列同一性为至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％的氨基酸序列。在这种实施方式的另一些方面中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体可以是，例如，与免疫抑制性Tat衍生多肽的氨基酸序列同一性为至多50％、55％、60％、65％、70％、75％、至多80％、至多85％、至多90％、至多95％、至多97％、至多98％或至多99％的氨基酸序列。

在这种实施方式的另一些方面中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体可以是，例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30或更多个对免疫抑制性Tat衍生多肽的氨基酸序列的保守替换的免疫抑制性Tat衍生多肽。在这种实施方式的另一些方面中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体可以是，例如，具有至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少20个或至少25个对免疫抑制性Tat衍生多肽的氨基酸序列的保守替换的氨基酸序列。在这种实施方式的另一些方面中，免疫抑制性Tat衍生多肽的保守变体可以是，例如，具有至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个、至多12个、至多13个、至多14个、至多15个、至多20个、至多25个或至多30个对免疫抑制性Tat衍生多肽的氨基酸序列的保守替换的氨基酸序列。

修饰(其通常不改变一级序列)包括多肽的(体内或体外)化学衍生化，例如，乙酰化或羧化。还包括糖基化修饰，例如，通过在多肽的合成和加工期间或在进一步加工步骤中修饰其糖基化模式所生成的那些；例如通过使多肽暴露于影响糖基化的酶，例如，哺乳动物糖基化酶或去糖基化酶。还包含具有磷酸化的氨基酸残基(例如，磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸)的序列。

还包括这样的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中已使用普通分子生物学技术进行修饰以改进它们对蛋白质降解的耐受性或优化溶解特性。这样的多肽的类似物包括含有非天然存在的L-氨基酸(例如，D-氨基酸)或非天然存在的合成氨基酸的残基的那些。本文中所公开的肽不限于本文中列出的任何具体的示例性方法的产物。

除了基本上全长的多肽之外，本公开还提供免疫抑制性Tat衍生多肽的生物学活性片段。

当在本文中使用时，基本上相同的氨基酸序列典型地共有高于95％的氨基酸同一性。然而，可以认为：在本公开的范围内考虑了被保守氨基酸替换(或简并密码子替换)修饰或者作为剪接变体出现的含低于上述同一性水平的蛋白质(和编码这类蛋白质的DNA或mRNA)。本领域技术人员容易意识到：已设计出多种方法来比对用于比较的序列，如Henikoff和Henikoff在Proc.Natl.Acad Sci.USA 89:10915(1992)所述的Blosum 62评分矩阵。为了实现该目的便于使用的算法广泛可得(参见，例如，Needleman和Wunsch在J.Mol.Bio.48:443(1970)中)

因此，本文中公开了与表1中所公开的免疫抑制性Tat衍生物具有85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

免疫抑制性Tat衍生物包含改变的Tat肽。在这种实施方式的一方面，免疫抑制性Tat衍生物包含其中第3-19位氨基酸被改变的Tat肽。在这种实施方式的另一方面，免疫抑制性Tat衍生物包含其中SEQ ID NO:6-11、13-35或69的第3-19位氨基酸被改变的Tat肽。

在这种实施方式的另一些方面，免疫抑制性Tat衍生物与SEQ ID NO:6-11、13-35或69的氨基酸同一性为，例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％、至少97％或至少99％。在这种实施方式的另一些方面，免疫抑制性Tat衍生物与SEQ ID NO:6-11、13-35或69的氨基酸同一性为，例如，至多70％、至多75％、至多80％、至多85％、至多90％、至多93％、至多95％、至多97％或至多99％。

在这种实施方式的另一些方面，相对于SEQ ID NO:6-11、13-35或69，免疫抑制性Tat衍生物具有，例如，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续的氨基酸替换、缺失、和/或添加。在这种实施方式的另一些方面，相对于SEQID NO:6-11、13-35或69，免疫抑制性Tat衍生物具有，例如，至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个连续的氨基酸替换、缺失、和/或添加。

在这种实施方式的另一些方面，相对于SEQ ID NO:6-11、13-35或69，免疫抑制性Tat衍生物具有，例如，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个不连续的氨基酸替换、缺失、和/或添加。在这种实施方式的另一些方面，相对于SEQID NO:6-11、13-35或69，免疫抑制性Tat衍生物具有，例如，至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个不连续的氨基酸替换、缺失、和/或添加。

此外，本文中公开的肽除了以单体形式存在之外，还能够自我结合成多聚体，包括但不限于，二聚体、三聚体和四聚体。肽的多聚化可自发发生或者可通过使肽经受有助于多聚化的条件来促进。这些条件对肽化学的普通技术人员已知。本文中公开的组合物可包括肽的单体或多聚体，或者单体和多聚体的混合物。

下述表达系统适用于表达公开的免疫抑制性Tat衍生物：哺乳动物细胞表达系统，例如但不限于，昆虫细胞表达系统，例如但不限于Bac-至-Bac表达系统、杆状病毒表达系统和DES表达系统；和E.coli表达系统，包括但不限于，pET、pSUMO和GST表达系统。在另一种实施方式中，利用有益于分离多肽的组氨酸标签表达Tat衍生物。组氨酸标签纯化系统对本领域普通技术人员已知。此外，免疫抑制性Tat衍生物可通过本领域普通技术人员已知的常规化学合成技术来合成。

当在本文中使用时，当关于疾病使用术语“治疗”时，其包括：预防病症的至少一种症状，即，使可能暴露于或易感染疾病、但尚未经历或展示疾病症状的受试者中的临床症状不显著发生；抑制疾病，即，遏制或减缓疾病或其症状的发生；或缓解疾病，即，导致疾病或其临床症状消退。当在本文中使用时，治疗、预防和改善病症可包括，例如，减缓或根除与炎症、自身免疫疾病或神经退行性疾病相关的损害性或有害病症。

“治疗有效量”意在限定达到治疗效果所需的量。

本公开还涉及包含上述免疫抑制性Tat衍生多肽的药物组合物。所公开的药物组合物的剂量和期望的药物浓度可根据预期的特定用途变化。合适的剂量或施用途径的确定是普通医师熟知的。动物实验为确定人类疗法的有效剂量提供了可靠指导。可遵守Mardenti,J.和Chappell,W.“The use ofinterspecies scaling in toxicokinetics”在Toxicokinetics and New DrugDevelopment,Yacobi等人编,Pergamon Press,New York 1989,42-96页中制定的原则进行有效剂量的种间类推。在一种实施方式中，疾病存在。在另一种实施方式中，细胞或个体的生命由于本文中所述方法而延长。

因此，通过本领域众所周知的方法(例如，利用惰性稀释剂或利用药学上可接受载体)，无需过度实验即可制造为经口、鼻、舌、舌下、颊、颊内、静脉内、皮下、肌肉内和肺施用设计的组合物。为了实现治疗施用的目的，可将药物组合物与赋形剂掺和并以片剂、糖剂、胶囊、酏剂、混悬剂、溶液、糖浆等形式使用。“药学上可接受载体”表示任何标准的药物载体。合适载体的实例在本领域众所周知，其可包括但不限于任何标准的药物载体例如磷酸缓冲盐溶液、含Polysorb 80的磷酸缓冲盐水、水、乳剂例如油/水乳剂、和多种类型的润湿剂。另一些载体还可包括无菌溶液、片剂、包衣片剂和胶囊。典型地，这类载体包含赋形剂例如淀粉、乳、糖、某些类型的黏土、明胶、硬脂酸或其盐(硬脂酸镁或硬脂酸钙)、滑石、植物脂肪或油、胶、乙二醇或其它已知的赋形剂。通过众所周知的常规方法配制包含这类载体的组合物。

免疫抑制性Tat衍生多肽组合物能够容易地肠胃外施用，例如，通过静脉内、肌肉内、鞘内或皮下注射。肠胃外施用可通过将化合物掺入溶液或混悬剂中来实现。这类溶液或混悬剂还可包括无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂。肠胃外制剂还可包括抗细菌剂例如，苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如，抗坏血酸或亚硫酸氢钠；和螯合剂例如EDTA。还可以加入缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可被封装入安瓿、一次性注射器或者由玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。

经皮施用包括通过皮肤透皮吸收组合物。经皮制剂包括贴剂、离子电渗装置、药膏、乳膏、凝胶、软膏等等。

组合物可包括修改固体或液体剂量单元的物理形式的多种材料。例如，组合物可包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性的，其可选自，例如，糖、虫胶和其它肠溶包衣剂。或者，活性成分可被装在明胶胶囊或扁囊剂中。

可根据合适的给药方案，以治疗有效量施用本公开的免疫抑制性Tat衍生多肽组合物。如本领域技术人员所理解，所需的精确量可因受试者而异，这取决于受试者的物种、年龄和一般情况、疾病的严重性、具体药剂和施用方式。在一些实施方式中，基于受试者的体重，施用约0.0001mg/kg至约50mg/kg的组合物(每天一次或多次)以获得期望的治疗效果。在另一些实施方式中，基于受试者的体重，施用约0.001mg/kg至约50mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约0.1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约50mg/kg、约10mg/kg至约50mg/kg、约0.0001mg/kg至约25mg/kg、约0.0001mg/kg至约10mg/kg、约0.0001mg/kg至约5mg/kg、约0.0001mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约45mg/kg、、约1mg/kg至约40mg/kg、、约1mg/kg至约35mg/kg、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、或约1mg/kg至约5mg/kg的组合物(每天一次或多次)以获得期望的治疗效果。

组合物的总日剂量将由主治医师在合理医学判断的范围内确定。用于任何具体患者或受试者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括：所治疗的疾病和疾病的严重性；所使用的具体化合物的活性；使用的具体组合物；年龄、体重、总体健康状况、性别和患者或受试者的饮食；施用时间、施用途径和所使用的具体化合物的排出速率；治疗持续时间；与所使用的具体化合物联合或同时使用的药物；和医学领域众所周知的其它因素。

公开的组合物还可用于联合疗法中。换言之，目前公开的组合物可在一种或多种其它期望的组合物、疗法、治疗或医学程序同时、之前或之后施用。所施用疗法的具体组合将由主治医师确定并将考虑治疗的相容性和要实现的期望治疗效果。应该意识到：联合使用的治疗活性剂可在单一的组合物、治疗或程序中一起施用，或者可分开施用。合适的治疗剂包括但不限于，免疫抑制剂、抗炎剂、化学治疗剂、免疫调节剂、生物剂和小分子。

在另一种实施方式中，考虑了重复或频繁定量给予所公开的免疫抑制性Tat衍生物。频繁定量给药是用于例如变态反应疗法中的一种程序，其能够支持对药剂的免疫耐受。

免疫抑制性Tat衍生物的重复剂数可由医学专业人士基于病人对剂量的反应来确定。在一种实施方式中，在10天时间内，每3天施用一次免疫抑制性Tat衍生物持续3剂。然后，重复这种施用方案持续多个周期。本公开考虑了多种不同的施用方案，其中在所选的时间范围内施用免疫抑制性Tat衍生物多次，然后重复该施用方案持续多个周期。在另一种实施方式中，施用免疫抑制性Tat衍生物可与施用一种或多种其它治疗剂交替。

本说明书的一些方面部分提供包含免疫抑制性Tat衍生多肽的组合物。免疫抑制性Tat衍生多肽包括本文中所公开的化合物。本文中所公开的组合物可包括或可不包括任意数目和组合的本文中所公开的化合物。例如，组合物可包括两种或更多种本文中所公开的化合物或三种或更多种本文中所公开的化合物。

本文中所公开的化合物或者包含这类化合物的组合物通常作为药物组合物施用于个体。可通过如下制备药物组合物：将治疗有效量的至少一种如本文中所述的化合物(作为活性成分)与常规可接受的药物赋形剂组合，并制备适合治疗用途的单位剂型。当在本文中使用时，术语“药物组合物”指的是治疗有效浓度的活性化合物，例如，本文中所公开的任何化合物。优选地，药物组合物施用于个体时不产生副反应、变态反应或其它不当反应或不利反应。本文中所公开的药物组合物有益于医学和兽医应用。药物组合物可单独施用于个体，或者可与其它辅助的活性化合物、试剂、药物或激素联合施用于个体。可使用多种方法中的任何一种来制备药物组合物，所述方法包括但不限于，常规的混合、溶解、制粒、制锭(dragee-making)、研磨、乳化、封装(encapsulating)、包封(entrapping)和冻干。药物组合物可采用多种形式中的任何一种，所述形式包括但不限于，无菌的溶液、混悬剂、乳剂、冻干剂(lyophilizate)、粉末、糖浆、酏剂或适合施用的任何其它剂型。

适合肠胃外注射的液体剂型可包含生理学上可接受的无菌水性或非水性溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂以及用于重构成无菌可注射溶液或分散剂的无菌粉剂。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或运载体的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇(PEG)、甘油、等等)、其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯例如油酸乙酯。可通过以下维持恰当的流动性，例如，通过使用包衣(例如卵磷脂)，通过维持所需的颗粒大小(在分散剂的情况下)，和通过使用表面活性剂。在液体制剂中，本文中所公开的化合物的治疗有效量可在约0.0001％(重量/体积)至约50％(重量/体积)之间、约0.001％(重量/体积)至约10.0％(重量/体积)之间、或约0.01％(重量/体积)至约1.0％(重量/体积)之间。

本文中所公开的药物组合物可任选地包括药学上可接受的载体，其有助于将活性化合物加工成药学上可接受的组合物。当在本文中使用时，术语“药学上可接受的”指的是这样的化合物、材料、组合物、和/或剂型，其在合理医学判断范围内，与合理的效益/风险比相称的适合与人类和动物组织接触，而没有过度的毒性、刺激性、变态反应性或其它问题并发症。当在本文中使用时，术语“药理学上可接受的载体”与“药理学载体”意义相同，其指的是当施用时，基本上无长期或永久的有害作用的任何载体，其涵盖术语例如“药理学上可接受的运载体、稳定剂、稀释剂、添加剂、助剂或赋形剂”。通常将这类载体与活性化合物混合或者允许其稀释或包封活性化合物，其可以为固体、半固体或液体试剂。应该理解：活性化合物可以是可溶的或者可作为在期望的载体或稀释剂中的悬浮物递送。可使用多种药学上可接受的载体中的任何一种，包括但不限于：水性介质，例如，水、盐水、甘氨酸、透明质酸等等；固体载体，例如，淀粉、硬脂酸镁、甘露醇、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、碳酸镁、等等；溶剂；分散介质；包衣；抗细菌剂和抗真菌剂；等张剂和吸收延迟剂；或任何其它非活性成分。药理学上可接受的载体的选择可取决于施用模式。除非任何药理学上可接受的载体均与活性化合物不相容，考虑将其用于药学上可接受的组合物中。这类药学载体的具体用途的非限制性实例可在Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(HowardC.Anse等人编,Lippincott Williams&Wilkins Publishers,第7版,1999)；Remington:The Science and Practice of Pharmacy(Alfonso R.Gennaro编,Lippincott,Williams&Wilkins,第20版,2000)；Goodman&Gilman's ThePharmacological Basis of Therapeutics(Joel G.Hardman等人编,McGraw-HillProfessional,第10版,2001)和Handbook of Pharmaceutical Excipients(Raymond C.Rowe等人,APhA Publications,第4版,2003)中找到。这些实验流程是常规的，并且任何修改完全在本领域技术人员的范围内和来自本文中的教导。

本文中所公开的药物组合物可任选地包括但不限于其它药学上可接受的组分(或药学组分)，包括但不限于，缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、渗透压调节剂、生理物质、药理物质、填充剂、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂、等等。用于调节pH的多种缓冲剂和方法可被用于制备本文中所公开的药物组合物，条件是产生的制剂是药学上可接受的。这类缓冲剂包括但不限于，乙酸盐缓冲剂、硼酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、中性缓冲盐水和磷酸盐缓冲盐水。应该理解：视需要可使用酸或碱调节组合物的pH。药学上可接受的抗氧化剂包括但不限于，焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁羟茴醚和丁羟甲苯。有用的防腐剂包括但不限于，苯扎氯铵、氯丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定的氧氯组合物(例如，亚氯酸钠)和螯合剂(例如，DTPA或DTPA-双酰胺、DTPA钙和CaNaDTPA-双酰胺)。用于药物组合物中的张力调节剂包括但不限于，盐(例如，氯化钠、氯化钾)、甘露醇或甘油和其它药学上可接受的张力调节剂。

本文中所公开的化合物或包含这类化合物的组合物还可以被掺入药物递送平台中以实现经时间受控的化合物释放谱。这类药物递送平台包含分散在聚合物基质(典型地是生物可降解的、生物可侵蚀的和/或生物可吸收的聚合物基质)中的本文中所公开的化合物。当在本文中使用时，术语“聚合物”指的是合成的均聚物或共聚物、天然存在的均聚物或共聚物、以及具有线型、支化或星形结构的合成的改性物或衍生物。共聚物可以以任何形式排列，例如，无规、嵌段、多嵌段、递变嵌段、接枝或三嵌段。聚合物通常为缩聚物。可通过引入交联剂或改变侧残基(side residue)的疏水性来进一步修饰聚合物以增强它们的机械性能或降解性能。如果交联，则聚合物通常低于5％交联，通常低于1％交联。

合适的聚合物包括但不限于，藻酸盐、脂肪族聚酯、聚草酸亚烷基酯(polyalkylene oxalate)、聚酰胺、聚酰胺酯、聚酐、聚碳酸酯、聚酯、聚乙二醇、多羟基脂肪族羧酸、聚原酸酯、聚氧杂酯、多肽、聚磷腈、多糖和聚氨基甲酸酯。聚合物通常构成药物递送平台的至少约10％(重量/重量)、至少约20％(重量/重量)、至少约30％(重量/重量)、至少约40％(重量/重量)、至少约50％(重量/重量)、至少约60％(重量/重量)、至少约70％(重量/重量)、至少约80％(重量/重量)或至少约90％(重量/重量)。生物可降解的、生物可侵蚀的和/或生物可吸收的聚合物和用于制备药物递送平台的方法的实例描述于，例如，美国专利4,756,911；美国专利5,378,475；美国专利7,048,946；美国专利公开2005/0181017；美国专利公开2005/0244464；美国专利公开2011/0008437；其各自以引用的方式整体并入本文。

在这种实施方式的一些方面，组成基质的聚合物是多肽，例如，丝纤蛋白、角蛋白或骨胶原。在这种实施方案的另一些方面，组成基质的聚合物是多糖，例如，纤维素、琼脂糖、弹性蛋白、壳聚糖、甲壳质或糖胺聚糖例如硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素或透明质酸。在这种实施方案的另一些方面，组成基质的聚合物是聚酯，例如，D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、己内酯及其组合。

本领域普通技术人员意识到：适用于形成合适的所公开药物递送平台的聚合物的选择取决于几个因素。在合适聚合物的选择中，更相关的因素包括但不限于，聚合物与药物的相容性、期望的药物释放动力学、平台在植入位置期望的生物降解动力学、平台在植入位置期望的生物可侵蚀动力学、平台在植入位置期望的生物可吸收动力学、平台的体内机械性能、加工温度、平台的生物相容性以及患者耐受性。在某种程度上，影响聚合物的体外和体内性能的其它相关因素包括化学组成、成分的空间分布、聚合物的分子量和结晶度。

药物递送平台包括持续释放(sustained release)药物递送平台和延长释放(extended release)药物递送平台两者。当在本文中使用时，术语“持续释放”指的是本文中所公开的化合物经过约7天或更久时间的释放。当在本文中使用时，术语“延长释放”指的是本文中所公开的化合物经过少于约7天时间的释放。

在这种实施方式的一些方面，持续释放药物递送平台在下述时间内基本以一级释放动力学释放本文中所公开的化合物：例如，施用后约7天、施用后约15天、施用后约30天、施用后约45天、施用后约60天、施用后约75天、或施用后约90天。在这种实施方式的另一些方面，持续释放药物递送平台在下述时间内基本以一级释放动力学释放本文中所公开的化合物：例如，施用后至少7天、施用后至少15天、施用后至少30天、施用后至少45天、施用后至少60天、施用后至少75天或施用后至少90天。

在这种实施方式的一些方面，药物递送平台在下述时间内基本以一级释放动力学释放本文中所公开的化合物：例如，施用后约1天、施用后约2天、施用后约3天、施用后约4天、施用后约5天、或施用后约6天。在这种实施方式的另一些方面，药物递送平台在下述时间内基本以一级释放动力学释放本文中所公开的化合物：例如，施用后至多1天、施用后至多2天、施用后至多3天、施用后至多4天、施用后至多5天或施用后至多6天。

本公开的一些方面部分地提供自身免疫疾病。自身免疫疾病起因于身体对在正常情况下存在于身体中的物质和组织过于活跃的免疫反应，从而导致对自身抗原的耐受性被破坏。换言之，身体实际上攻击其自身细胞，因为免疫系统将身体的某些部分误认为病原体并攻击它。自身免疫疾病的特征为浸润靶器官或组织的病原性T细胞群体的发生，其可局限于某些器官或涉及不同地点的特定组织。

本公开的一些方面部分地提供炎症。炎症指的是对有害刺激的实际组织反应(水肿、红斑等)。神经性炎症指的是下述事实：该组织反应通过从周围感觉神经末端释放炎症介质(即，传出功能，与到达这些神经中的脊髓的正常传入信号相反)而起始和/或维持。神经性炎症涵盖一系列通过复杂的生物过程介导的血管性和非血管性的炎症反应，所述生物过程最终导致从感觉神经元局部释放炎性介质和致敏化合物。经有害刺激(例如病原体、对细胞的损害或刺激)损伤后，炎症介导细胞(例如肥大细胞、免疫细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞)释放炎症介导和致敏分子，例如，组胺、前列腺素、白三烯、5-羟色胺、中性蛋白酶、细胞因子、缓激肽和一氧化氮。参见Richardson和Vasko,J.Pharmacol.Exp.Ther.302:839-845,(2002)，其全部内容通过引用被并入本文。这些炎症介导和致敏分子作用于感觉神经元，从而刺激由周围神经末梢释放炎症诱导分子，例如，神经肽例如P物质(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP)、前列腺素，以及氨基酸例如谷氨酸。这些炎症诱导分子一旦被释放就会引发炎症反应，所述炎症反应的特征通常为水肿(血浆外渗而产生的肿胀)，过敏(由于某些感觉神经元的兴奋性改变而引起)，以及红斑(由于血管舒张而引起的发红和发热)，其蔓延至刺激部位以外(潮红反应)。同上。由于根本的炎症症状是由初级感觉神经元的激活和随后的炎症诱导分子的释放而触发的，因此这种反应被称为神经源性炎症。

炎症包括急性炎症和慢性炎症二者。当在本文中使用时，术语“急性炎症”表示具有如下病理生理学效应的炎症反应，其中至少一种要治疗的根本症状归因于有害刺激病因，例如，抗微生物反应。当在本文中使用时，术语“慢性炎症”表示具有如下病理生理学效应的炎症反应，其中至少一种要治疗的根本症状归因于基于疼痛感觉神经的病因，例如，炎症诱导分子的释放。慢性炎症包括原发性神经性炎症和继发性神经性炎症二者。当在本文中使用时，术语“原发性”神经性炎症指的是由来源于初级感觉神经末端(例如C和A-δ纤维)的物质的释放引发或造成的组织炎症(炎性症状)。当在本文中使用时，术语“继发性”神经性炎症指的是由炎症介质(例如，肽或细胞因子)的非神经性来源(例如，来自血管床或组织小间隙来源的(例如来自肥大细胞或免疫细胞)的外渗物)引发的组织炎症，刺激感觉神经末端并引起由神经释放炎症介质。这些神经来源的炎症介质可继而刺激感觉神经并作用于非神经性靶标(例如，肥大细胞)。神经性炎症的两种形式(原发性和继发性)的净效应是具有通过周围感觉神经纤维的敏化而维持的炎症状态。产生的神经性炎症的生理学结果根据所涉及的组织，产生例如皮肤疼痛(异常性疼痛、痛觉过敏)、关节炎、内脏痛和功能障碍、肺功能障碍(哮喘、COPD)和膀胱功能障碍(疼痛、膀胱过动)。

炎症和/或自身免疫疾病的症状包括但不限于，水肿、充血、红斑、瘀伤、压痛、僵硬、膨张、发热、寒战、呼吸道(包括鼻和支气管)阻塞、窦阻塞、呼吸问题、流体潴留、血块、食欲不振、心率增快、肉芽肿形成、纤维化、脓、或无粘性浆液、溃疡形成、或疼痛。与本文中所公开的炎症和自身免疫疾病有关的实际症状是众所周知的并可由本领域普通技术人员通过考虑如下因素来判定，所述因素包括但不限于炎症或自身免疫疾病的位置、炎症或自身免疫疾病的病因、炎症或自身免疫疾病的严重性、炎症或自身免疫疾病影响的组织或器官、和与炎症相关的疾病。

通常，炎症作为生物体的保护机制，除去伤害性刺激并启动损伤组织的治愈过程。该急性神经性炎症通过维持组织完整性并促进组织修复来形成第一道防线。实际上，在急性神经性炎症不存在时，伤口和感染永远不会痊愈且组织的进展性破坏将危及生物体的存活。然而，严重的或长期的伤害性刺激导致慢性炎症反应，从而刺激损伤而非介导修复。该炎症参与造成多种人类疾病的大量不相关疾病的病理生理学。

慢性炎症及其相关症状可与造成多种人类疾病的大的、不相关的疾病组有关。展示炎症作为症状的疾病的非限制实例包括但不限于，痤疮、胃酸倒流/胃灼热、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、变态反应、变应性鼻炎、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、大疱性类天疱疮、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、炎性皮肤病、炎性神经病、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、寻常型天疱疮、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎和外阴炎。

展示炎症症状的一种疾病是关节炎。关节炎包括涉及归因于滑膜炎症的身体关节损伤的一组病症，包括但不限于骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节病例如强直性脊柱炎、反应性关节炎(莱特尔氏综合症)、银屑病性关节炎、与炎性肠道疾病相关的肠源性关节炎、惠普尔氏病和白塞病、化脓性关节炎、痛风(也被称为痛风性关节炎、结晶性滑膜炎、代谢性关节炎)、假痛风(焦磷酸钙沉积症)和斯提耳氏病。关节炎可影响单个关节(单关节炎)、2-4个关节(少关节炎)或者5个或更多个关节(多关节炎)，且可以为自身免疫疾病或非自身免疫疾病。

本公开的一些方面部分地提供自身免疫疾病。自身免疫疾病也展示出炎症的症状。根据每种疾病的主要临床-病理特征，自身免疫疾病可被概括地分为全身性自身免疫疾病和器官特异性自身免疫疾病。全身性自身免疫疾病包括但不限于，全身性红斑狼疮(SLE)、肖格伦综合症、硬皮病、类风湿性关节炎和多肌炎。局部自身免疫疾病可以是内分泌的(1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、爱迪生氏病等)、皮肤病的(寻常天疱疮)、血液的(自身免疫溶血性贫血)、神经的(多发性硬化症)，或者可几乎涉及身体组织的任何局限部分(circumscribed mass)。自身免疫疾病的类型包括但不限于，急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、爱迪生氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、心血管疾病、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、纤维肌痛症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮(包括盘状红斑狼疮、药物性红斑狼疮、狼疮性肾炎、新生儿狼疮、亚急性皮肤型红斑狼疮和全身性红斑狼疮)、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、牛皮癣、原发性胆汁性硬化、复发性播散性脑脊髓炎(多相播散性脑脊髓炎)、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、腱鞘炎、脉管炎和白斑病。

展示炎症症状的另一种疾病是炎性肌病。炎性肌病由免疫系统攻击肌肉组分的问题引起，从而导致肌肉中的炎症信号。炎性肌病包括但不限于皮肌炎、包涵体肌炎和多肌炎。

展示炎症症状的另一种疾病是脉管炎。脉管炎是多变的疾病组，其特征为归因于白细胞迁移和产生的损害的脉管壁发炎，所述脉管包括淋巴管和血管例如静脉(静脉炎)、动脉(动脉炎)和毛细血管。炎症可影响身体中任何地方的任何尺寸的血管。它可影响动脉和/或静脉。炎症可为病灶性，这表示它影响脉管内的单个位置；或者它可广泛分布，其中发炎区域遍及特定的器官或组织散布，或者甚至影响身体中多于一个器官系统。脉管炎包括但不限于，伯格病(血栓闭塞性脉管炎)、脑脉管炎(中枢神经系统脉管炎)、变应性肉芽肿性动脉炎、冷沉球蛋白血症、原发性冷沉球蛋白血症脉管炎、巨细胞(颞)动脉炎、高尔夫脉管炎(Golfer'svasculitis)、亨-舍二氏紫癜、超敏性脉管炎(变应性脉管炎)、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、大动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、和继发于结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、复发性多软骨炎、白塞病、或其它结缔组织疾病)的脉管炎、继发于病毒感染的脉管炎。

展示炎症症状的另一种疾病是皮肤病。皮肤病包括但不限于，皮炎(包括慢性光化性皮炎)，湿疹(例如异位性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹)，脂溢性皮炎，汗疱症，盘状湿疹，静脉湿疹，疱疹样皮炎，神经性皮炎，和自体湿疹化，以及停滞性皮炎(statis dermatitis)、化脓性汗腺炎、银屑病(包括斑块状银屑病、指甲银屑病、滴状银屑病、头皮银屑病、皮褶性银屑病、脓疱性银屑病和红皮银屑病(erythrodermis psoriasis))，酒糟鼻和硬皮病(包括硬斑病)。

展示炎症症状的另一种疾病是胃肠疾病。胃肠疾病包括但不限于，肠易激综合症、炎性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎(例如，溃疡性直肠炎、左侧结肠炎、全结肠炎和暴发性结肠炎)。

本公开的一些方面部分地提供神经退行性疾病。神经退行性疾病起因于神经元的结构或功能进行性丧失，包括神经元死亡。神经退行性疾病的非限制性实例包括但不限于，亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨和血管性痴呆。神经退化可与自身免疫疾病或非自身免疫疾病有关，且神经退化可以是全身性疾病或器官特异性疾病。本文中所公开的治疗神经退行性疾病的方法减少的症状的非限制性实例包括焦虑、失语、认知、混淆、抑郁、疼痛、麻痹、痉挛、抽搐和震颤。

本公开的一些方面部分地提供减少与自身免疫疾病或神经退行性疾病相关的症状。在该实施方式的一方面中，减少的症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

在一种实施方式中，免疫抑制性Tat衍生多肽具有导致暴露于免疫抑制性Tat衍生多肽的抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)中Fas配体(FasL)的表达增加的活性。在该实施方式的一些方面，相对于未暴露于相同免疫抑制性Tat衍生多肽的细胞，免疫抑制性Tat衍生多肽使细胞中的FasL表达增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％。在该实施方式的另一些方面，相对于未暴露于相同免疫抑制性Tat衍生多肽的细胞，免疫抑制性Tat衍生多肽使细胞中的FasL表达增加约10％至约25％、约10％至约50％、约10％至约75％、约10％至约100％、约10％至约200％、约10％至约300％、约10％至约400％、约10％至约500％、约25％至约50％、约25％至约75％、约25％至约100％、约25％至约200％、约25％至约300％、约25％至约400％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约200％、约50％至约300％、约50％至约400％、约50％至约500％。在某些实施方式中，AReg是CD14+巨噬细胞。

所公开的自身免疫疾病、神经退行性疾病和炎症相关疾病是免疫介导的疾病，其特征为：期望被减少的T细胞介导的炎症增加。增加或诱导AReg或树突细胞上FasL表达的治疗剂减少T细胞介导的炎症，从而治疗自身免疫疾病、神经退行性疾病和炎症相关疾病。因此，在一种实施方式中，本公开提供：通过施用一种或多种所公开的免疫抑制性Tat衍生多肽来减少患有自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病的受试者中T细胞介导的炎症，从而治疗自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病的方法。在另一种实施方式中，本公开提供：通过施用一种或多种所公开的免疫抑制性Tat衍生多肽来诱导患有自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病的受试者中AReg上的FasL表达，从而治疗自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病的方法。

此外，本公开的一些方面部分地提供减少与炎症相关的症状。在该实施方式的一方面中，减少的症状是水肿、充血、红斑、瘀伤、压痛、僵硬、膨张、发热、寒战、呼吸道(包括鼻和支气管)阻塞、窦阻塞、呼吸问题、流体潴留、血块、食欲不振、心率增快、肉芽肿形成、纤维化、脓、或无粘性浆液、溃疡形成、或疼痛。

本公开的一些方面部分地提供哺乳动物。哺乳动物包括人类，且人类可以为患者。本公开的另一些方面部分地提供个体。个体包括哺乳动物和人类，且人类可以为患者。在另一些实施方式中，哺乳动物包括驯养动物，例如狗、猫、马、牛、山羊、绵羊和灵长类。

本公开的一些方面部分地提供施用本文中所公开的化合物或组合物。当在本文中使用时，术语“施用”表示向个体提供本文中所公开的化合物或组合物的任何递送机制，其潜在地导致临床上、治疗上或实验上的有益结果。

施用本文中所公开的化合物或组合物包括多种经肠或肠胃外途径，包括但不限于以任何可接受的形式(例如，片剂、液体、胶囊、粉末、等等)的经口施用；以任何可接受的形式(例如，滴剂、喷雾、乳剂、凝胶剂或软膏剂)的局部施用；以任何可接受的形式经颊、鼻和/或吸入施用；以任何可接受的形式直肠施用；以任何可接受的形式阴道施用；以任何可接受的形式(例如，静脉内推注、静脉内输注、动脉内推注、动脉内输注和导管滴注至脉管系统)脉管内施用；以任何可接受的形式(例如，腹膜内注射、肌内注射、皮下注射、皮下输注、眼内注射、视网膜注射、视网膜下注射或硬膜外注射)的组织周和组织内施用；以任何可接受的形式(例如，导管滴注)泡内施用；和通过安放装置(例如，植入物、支架、贴剂、药丸、导管、渗透泵、栓剂、生物可侵蚀的递送系统、生物不可侵蚀的递送系统或另一种植入延伸或缓释系统)。生物可降解聚合物的示例性列表和使用方法描述于，例如Handbook of Biodegradable Polymers(Abraham J.Domb等人编,Overseas Publishers Association,1997)中。

可采用多种途径将本文中所公开的化合物或组合物施用于哺乳动物。适用于治疗如本文中所公开的炎症、自身免疫疾病或神经退行性疾病的施用途径包括局部施用和全身性施用二者。局部施用导致：与哺乳动物的全身相比，显著更多的组合物递送至特定位置，但全身性递送导致组合物基本上递送至个体的全身。合适的施用途径还包括中枢施用和外周施用二者。中枢施用导致化合物或组合物基本上递送至个体的中枢神经系统，其包括，例如，囊内施用、硬膜外施用以及颅注射或植入。外周施用导致化合物或组合物基本上递送至个体的中枢神经系统之外的任何区域，其包括，不同于直接施用至脊椎或脑的任何施用途径。所使用的本文中所公开的化合物或组合物的实际施用途径可由本领域普通技术人员通过考虑如下因素来确定，所述因素包括但不限于炎症或自身免疫疾病或神经退行性疾病的类型、位置、起因和严重性，期望的治疗持续时间，期望的缓解程度，期望的缓解持续时间、所使用的具体化合物或组合物，所使用的化合或组合物的排出速率、所使用的化合物和组合物的药效学、组合物中包括的其它化合物的属性，具体施用途径，个体的特性、病史和风险因素(例如，年龄、重量、总体健康等等)，个体对治疗的反应，及其任意组合。因此，本文中所公开的化合物或组合物的有效剂量可由本领域普通技术人员通过考虑所有标准并基于个体的利益利用其最佳判断来容易地确定。

在一种实施方式中，本文中所公开的化合物或组合物全身性施用于哺乳动物。在另一种实施方式中，本文中所公开的化合物或组合物局部施用于哺乳动物。在该实施方式的一方面，本文中所公开的化合物或组合物施用至哺乳动物的炎症、神经退行或自身免疫疾病的位点。在该实施方式的另一方面，本文中所公开的化合物或组合物施用至哺乳动物的炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病周围的区域。

本说明书的一些方面部分地提供施用治疗有效量的本文中所公开的化合物或组合物。当在本文中使用时，术语“治疗有效量”与“治疗有效剂量”意义相同，当关于治疗炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病使用时，其表示实现期望的治疗效果所需的本文中所公开的化合物或组合物的最小剂量，并包括足以减少与炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病相关的症状的剂量。在该实施方式的一些方面，治疗有效量的本文中所公开的化合物或组合物使与炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病相关的症状减少，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在该实施方式的另一些方面，治疗有效量的本文中所公开的化合物或组合物使与炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病相关的症状减少，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。在该实施方式的又一些方面，治疗有效量的本文中所公开的化合物或组合物使与炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病相关的症状减少，例如，约10％至约100％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约20％至约100％、约20％至约90％、约20％至约80％、约20％至约20％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％、约30％至约100％、约30％至约90％、约30％至约80％、约30％至约70％、约30％至约60％、或约30％至约50％。在该实施方式的又一些方面，治疗有效量的本文中所公开的化合物或组合物是足以使与炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病相关的症状减少持续，例如，至少1周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、或至少12个月的剂量。

用于治疗炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病的本文中所公开的化合物或组合物中活性成分的量可以改变以获得合适的剂量。待施用于哺乳动物的本文中所公开的化合物或组合物的实际治疗有效量可由本领域普通技术人员通过考虑如下因素来确定，所述因素包括但不限于炎症或自身免疫疾病或神经退行性疾病的类型、位置、起因或严重性，期望的治疗持续时间，期望的缓解程度，期望的缓解持续时间、所使用的具体化合物或组合物，所使用的化合物或组合物的排出速率，所使用的化合物或组合物的药效学，组合物中包括的其它化合物的属性，具体施用途径，个体的特性、病史和风险因素(例如，年龄、重量、总体健康等等)，个体对治疗的反应，或其任意组合。因此，本文中所公开的化合物或组合物的有效剂量可由本领域普通技术人员通过考虑所有标准并基于个体的利益利用其最佳判断来容易地确定。

此外，当采用重复施用本文中所公开的化合物或组合物时，本文中所公开的化合物或组合物的实际有效量还取决于下述因素，所述因素包括但不限于，施用频率、本文中所公开的化合物或组合物的半衰期，或其任意组合。本领域普通技术人员已知：可在施用于人类之前，由体外试验和利用动物模型的体内施用研究推断本文中所公开的化合物或组合物的有效量。考虑到多种施用途径的不同效率，预期必需的有效量变化很大。例如，一般预期经口施用比静脉内施用或玻璃体内注射需要更高剂量。可通过使用标准的经验优化途径来调节这些剂量水平变化，这对本领域普通技术人员是众所周知的。优选地，由主治医师通过考虑以上指出的因素来确定精确的治疗有效剂量水平和模式。

给药可以是单一剂量或累积的(系列给药)，这可由本领域技术人员容易地确定。例如，炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病的治疗可包含施用一次本文中所公开的化合物或组合物的有效剂量。作为非限制性实例，可向哺乳动物施用一次本文中所公开的化合物或组合物的有效剂量，例如作为在展示炎症、神经退行性或自身免疫疾病症状的位点或该位点附近的单次注射或沉积或者化合物或组合物的单次经口施用。或者，炎症、神经退行性疾病或自身免疫疾病的治疗可包含在一个时期范围内多次施用有效剂量的本文中所公开的化合物或组合物，例如，每天、每几天一次、每周、每月或每年。作为非限制性实例，可每周一次或两次向哺乳动物施用本文中所公开的化合物或组合物。施用时间选择可因各个哺乳动物而异，这取决于这类因素，例如哺乳动物的症状的严重性。例如，可每月一次向哺乳动物施用有效剂量的本文中所公开的化合物或组合物，持续不确定的时段或者直至哺乳动物不再需要治疗。本领域普通技术人员将意识到：可贯穿治疗进程监测哺乳动物的病症并可相应调整所施用的本文中所公开的化合物或组合物的有效量。

如本文中所公开，本文中所公开的化合物或组合物还可以与其它治疗化合物联合施用于哺乳动物以增加治疗的总治疗效果。使用多种化合物用于治疗自身民意、神经退行或炎症相关疾病的用途在本公开的范围内。此外，本公开包括所公开的肽用于治疗自身免疫疾病、神经退行性疾病和炎症相关疾病的用途以及所公开的肽在制备用于治疗自身免疫疾病、神经退行性疾病和炎症相关疾病的药物中的用途。

实施例

提供下述非限制性实施例仅用于说明的目的，以有助于更充分地理解目前预期的代表性实施方式。这些实施例不应被解释为限制本说明书中所述的任何实施方式，包括关于使用本文中所公开的Tat衍生物治疗自身免疫疾病、炎症或神经退行性疾病的方法的那些。

实施例1

Tat对树突细胞谱系的影响

Tat诱导定向为树突细胞(DC)谱系的单核细胞增殖成激活的CD86+DC APC(图1)。从PBMC通过Percoll密度梯度分离和对包被抗-CD14的磁珠(Dynabeads M-450,Dynal Biotech)的粘附来富集人类单核细胞，然后通过在GM-CSF(100ng/mL)和IL-4(100ng/mL)中培养5天使其定向分化成DC。在单独的培养基(对照)、LPS(100ng/mL)或Tat(50nM)中过夜培养定向的DC，然后利用抗-CD86抗体(BD Pharmingen)染色并利用FACScan分析CD86诱导(左侧图)或广泛性激活(右侧图，在R2盒中放大，显示Tat刺激的细胞)。CD86表达的MFI是9(对照)、30(LPS)和187(Tat)，CD86是DC激活的特异性决定因素。

衍生的Tat减少AReg分化并强烈地增强CTL的抗原特异性激活(图2)。通过氧化化学衍生Tat(Tat*或ox-Tat)以使它不由单核细胞APC前体诱导AReg(图3)。在第0天和第7天，将在佐剂中的10μg Tat/p24Tat*-Ag缀合物(Ag-Tat*)施用至Balb/C小鼠的胁部。比较地，实验组在一侧胁部用含5μg p24的佐剂且在另一侧胁部用含5μg衍生Tat(Ag&Tat*)的佐剂免疫，或者被含10μg p24的佐剂(Ag)免疫。给予对照小鼠2次佐剂注射。每组中处理4只小鼠。在第14天，收获来自每只动物的引流淋巴结细胞并在经辐照的Ap24(被稳定转染以表达抗原p24的H-2d细胞)细胞或者对照未转染细胞的培养物中再刺激过夜。利用ELISPOT试验，将CTL活性定量为γ-干扰素分泌斑点形成集落数(SFC)/10⁶涂布细胞。利用未转染的再刺激的背景在所有情况下均<10SFC/10⁶，将其从每个点中减去。结果表示3次相似实验。

实施例2

巨噬细胞的Tat激活和免疫反应的抑制

在温和变性条件下如前所述(Li,C.J.等人(1995),Science 268:429-31)制备重组Tat蛋白并在0.1mM DTT存在下使其复性。

单核细胞的Tat激活是剂量依赖性且可饱和的(图3)。在浓度递增的重组Tat中培养人类单核细胞6天，并在那时通过以下分析Fas配体(FasL)诱导作为激活的度量：利用流式细胞仪(FACScan,Becton Dickinson)并使用抗-Fas配体单克隆抗体(Nok 1,BD Pharmingen)来定量染色强度(平均荧光指数(MFI))。较高浓度的Tat不增加MFI(未显示)，T细胞不能被50nM Tat(用于APC的平稳刺激浓度)激活(未显示)。

Tat抑制对HIV-1p24的抗原特异性体液免疫反应(图4)。在第0周，用混合在100μL完全弗氏佐剂中的5μg重组p24蛋白(Chiron,Emeryville,加拿大)和5μg重组Tat蛋白(PT)或5μg重组ox-Tat*蛋白(Ag)免疫小鼠(每组中4只)并在胁部皮下施用。免疫之后，每隔一周收集血清持续10周并利用市售ELISA(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)分析对p24的特异性抗体反应。与ox-Tat*对照(Ag)相比，2周时的p24抗体效价(图4A)完全被Tat蛋白(PT)抑制。该反应维持至少6周。由于免疫反应的成熟，6周时的抗体效价约为2周时的10倍。

与无先前激活和利用相对高浓度的Tat刺激相比，Tat增强了培养的鼠巨噬细胞的生存力，只要巨噬细胞首先被体内激活。通过腹腔灌洗从4天前被2.9％的巯基乙酸盐(作为佐剂)或0.85％的盐溶液(静息)腹腔内注射的小鼠中分离APC。在单独的培养基(对照，C)、脂多糖(LPS，100ng/mL)、或在E.coli中作为重组蛋白产生的Tat(Tat，500ng/mL)中以10⁶细胞/mL培养收获的冲洗细胞5天。激活被测定为扩大的细胞％(M1部分)。

免疫抑制性Tat稳定抑制小鼠淋巴细胞增殖(图6)。利用含5μgTat/p24(重组HIV-1gag蛋白p24)耐受原(GRP 2)的弗氏佐剂乳剂或5μg亲和素-p24(GRP 1)(作为对照)一式四份地免疫小鼠。在2周时，收获残余的引流淋巴结细胞，集中每组内的引流淋巴结细胞并在梯度浓度的重组p24蛋白(p24，μg/mL)存在下以10⁵细胞/微量滴定孔培养4天。通过在液体闪烁记数器中过夜定量³H胸腺嘧啶摄取(CPM)，将增殖测定为回忆T细胞反应的决定因素。这种反应维持长达6周。

此外，免疫抑制性Tat产生抗原特异性免疫抑制(图7)。利用含5μgTat/p24耐受原(Ag+Tol)的佐剂乳剂或5μg亲和素-p24(单独的Ag)(作为对照)一式四份地免疫小鼠。在第14天，收获引流淋巴结细胞并在10⁵细胞/微量滴定培养孔下用加入的抗原(特异，重组p24，1μg/mL)或用加入的抗-T细胞受体单克隆抗体(非特异，2C11，10μg/mL)刺激。在培养的第4天通过液体闪烁法测定氚化的胸腺嘧啶摄取(CPM)。相对于单独的Ag，特异性Ag+Tol反应被抑制98％，且与缺乏刺激时培养的细胞不可区分。

实施例3

Tat抑制由AReg介导

Tat介导的抗原特异性抑制通过CD14+FasL+巨噬细胞的反式-(细胞内)激活来介导(图8)。在小鼠中，Tat耐受T细胞水平，并在图6中所示条件下的初始处理后，维持至少6周。在含5％胎牛血清(FCS，对照)、Tat(50nM)或LPS(100ng/mL)的培养基中培养通过Percoll离心富集单核细胞而获得的人外周血单核细胞(PBMC)群体4天。利用荧光(抗-fl1)抗-FasL单克隆抗体(Mab)(αFasL-FITC,Nok 1,BD Pharmingen)和抗-CD14若丹明标记的Mab(αCD14fl2,BD Biosciences,CD14是特异于巨噬细胞的决定因素(MΦ))双重染色收获的细胞。利用FACScan(BectonDickinson)分析细胞的激活(正向散射)、CD14表达(R2，MΦs百分比)和FasL(MFI)诱导。T细胞群体(R1)为CD14-且不表达FasL。至于在第4天收获的PBMC，获得了与培养2、3、5或6天后收获的细胞相似的结果。

在人类细胞中，Tat激活的巨噬细胞是调控的免疫抑制性APC巨噬细胞调节物(AReg)(图9)。为了确定Tat抑制免疫的途径(通过巨噬细胞上的FasL诱导，导致丢失辅助T细胞回忆反应)，使用回忆抗原、tat和FasL拮抗剂进行T细胞增殖试验。在图9A中，在培养基(未显示)、破伤风抗原(Ag，0.3Lf/mL)、额外加入50nM Tat的抗原(Ag+Tat)或者用于封闭巨噬细胞上表达的表面FasL的含有50nM Tat和重组sFas蛋白(25μg/mL)的Ag(Ag+Tat+sFas)中，一式三份地培养来自一个个体的人类PBMC持续5天。在最后18小时期间加入氚化的胸腺嘧啶，用图将结果表示为刺激指数(刺激的培养物的平均cpm/培养基对照的平均cpm)。结果代表3次相似的实验。在低浓度Tat(50nM)时，Tat诱导的免疫抑制不仅被可溶Fas的加入完全逆转，而且在这些条件下，Tat实际上变得有刺激性(相对于单独的抗原处理为141％)。图9B：与其中还加入Tat(Ag+Tat,125nM)或Tat(125nM)和拮抗性抗-Fas抗体ZB4(250μg/mL,UpstateBiotechnology)(Ag+Tat+αFas)的培养物相比，用单独的破伤风或念珠菌抗体(Ag)培养6天的PBMC的增殖。结果代表3次相似的实验。

实施例4

单核细胞分化的体外生物测定

体外超灵敏单核细胞Tat生物测定被用于评估本文中所公开的Tat蛋白的免疫抑制或免疫刺激活性。该试验利用新鲜的单核细胞，所述单核细胞是使用标准的密度梯度富集程序或本领域已知的其它细胞分离流程由人外周血基本纯化而来。清洗基本纯化的单核细胞，然后在37℃下在补充有10％FBS的RPMI-1640中培养。

使用正对照(FasL，诱导化合物)和负对照(培养物中不加入活性化合物)进行体外超灵敏单核细胞Tat生物试验。附加的合适正对照包括但不限于，终浓度分别为100ng/mL和50ng/mL的脂多糖(LPS)和或肿瘤坏死因子(TNF-α)。以50pM-50nM的终浓度运行试验样品(Tat制品)，包括Tat、ox-Tat和其它Tat衍生物和突变体。

将试验样品和对照各自与基本上纯的单核细胞混合，以10⁶细胞/mL的密度接种在含具有10％FBS的RPMI-1640(在本文中被共同称为试验培养物)的圆底管中。然后，在37℃下，在5％CO₂环境中，孵育试验培养物合适的时期，优选地5-6天。

在孵育阶段结束时，从每个试验培养物中移出细胞并通过用抗-FasL或抗-CD86抗体和恰当的荧光检测剂来检测任何诱导的FasL表达的存在(分化成AReg的测量)或CD86表达(分化成树突细胞)。在培养物已着色之后，使用荧光激活细胞分选仪(FACS)系统检测荧光。使用单独的荧光检测系统进行对照着色并将其从试验培养物中观察到的特异性抗-FasL或抗-CD86着色中减去。给定的试验培养物中FasL阳性细胞的百分比越高，该试验培养物中试验样品的免疫抑制越强。相反地，如果试验培养物含有占优势的CD86阳性细胞，则试验样品被鉴定为免疫刺激性的。负对照应该始终保持不与抗体反应且正对照应落入预定范围内。

实施例5

Tat衍生物的合成

使用CS336X自动合成器(C S Bio Co.,Menlo Park,加拿大)通过标准的Fmoc化学来组装合成肽。使用与7个半胱氨酸的存在相容的三氟乙酸切割/去保护混合物从树脂切割肽。使用反相HPLC进行纯化。由H₂O/乙腈冻干终产物。用Alexa-488标记每个合成物的一部分。所有合成的Tat衍生物达到＞95％的纯度。使用之前，在0.1mM二硫苏糖醇存在时，在磷酸盐缓冲液中重构合成的肽。

实施例6

Tat衍生物的体外活性

利用Tat衍生物(SEQ ID NO:7,Nani-P2)(图10)或脂多糖(LPS)(图11)培养人类单核细胞24-48小时，然后清洗细胞并用荧光标记的CD86使其着色。相较于ISS(TLR)或LPS，Tat衍生物刺激CD86的更高表达。

实施例7

T-淋巴细胞和单核细胞细胞系中Tat衍生物的活细胞成像

Jurkat细胞系(克隆E6-1,美国典型培养物保藏中心)在5％CO₂中在37℃下维持在RPMI-1640(GIBCO)、10％热灭活的FBS(GIBCO)、50U盘尼西林/50μg/ml链霉素(GIBCO)和2mM L-谷氨酰胺(GIBCO)中。U937细胞(美国典型培养物保藏中心)在5％CO₂中在37℃下维持在RPMI-1640(GIBCO)、10％热灭活的FBS、50U盘尼西林、50μg/ml链霉素和2mM L-谷氨酰胺(GIBCO)、10mM HEPES(GIBCO)和0.005％β-巯基乙醇(Sigma-Aldrich)中。

在5％CO₂中在37℃下在完全培养基中孵育一百万个活的Jurkat或U937细胞60-120分钟，其中加入或不加入5μM Alexa-488标记的合成Tat衍生物。在含0.1％热灭活的FBS和1mM EDTA的PBS中清洗细胞并通过向细胞悬浮物中加入2滴HOECHST-NucBlue活细胞染料(Molecular Probes)/mL来使其着色。保持细胞在冰上直至进行活细胞成像。

将细胞放置在玻璃底的皿(MatTek Corp.)中并在Zeiss AxioObserver.Z1显微镜(Carl Zeiss)上使用Plan-Neofluor 100x/1.3物镜成像。处于365nm和470nm的LED(Colibri；Carl Zeiss)被用于激发HOESCHT染色的DNA和Alexa488标记的蛋白质。用标准的DAPI和FITC荧光滤光片收集发射。用Orca ER制冷CCD摄像机(Hamamatsu Photonics)收集荧光和相差图像。

图12和13中所示的结果证明：合成的Tat衍生物在体外进入T淋巴细胞和单核细胞细胞系的能力。经Alexa488-标记的Tat衍生物处理的Jurkat T细胞(图12)和U937单核细胞(图13))显示出荧光标记蛋白的细胞摄取和核定位，从而突出了这些分子作为具备定位在核内和核周围的能力的细胞穿透肽的应用。

实施例8

经Tat衍生物处理的细胞的荧光激活细胞分选

使用ACCUSPIN^TM离心管(Sigma-Aldrich)，利用Histopaque分离介质通过密度梯度离心从全血中分离人外周血单核细胞(PBMC)。在12孔组织培养板中，以1×10⁶细胞/mL的细胞密度在RPMI-1640、10％热灭活的胎牛血清、50U盘尼西林/50μg/ml链霉素和2mM L-谷氨酰胺中建立PBMC培养物。在5％CO₂中在37℃下，在无刺激、1μg/ml LPS(Sigma-Aldrich)、100ng/ml TNF-α(Peprotech)或1μg/ml合成的Tat衍生物(SEQ ID NO:9)存在下孵育PBMC。3-5天后，收获、清洗细胞，并用小鼠抗人CD14-别藻蓝素(APC)缀合的单克隆抗体(克隆M5E2,BD Biosciences)或小鼠抗人Fas配体荧光素(FITC)缀合的单克隆抗体(克隆SB93a,Southern Biotech)使细胞着色。在BD LSR II流式细胞仪(BD Biosciences)上进行荧光激活细胞分选(FACS)之前，加入碘化丙啶以评估生存力。

图14-17中所示的结果证明：通过FACS，相对于未受刺激的对照，Tat衍生物体外刺激和增加人类PBMC上的细胞表面CD14和FasL的能力，这表示存在能够抑制T细胞免疫反应的Areg细胞。

最后，应该理解：虽然通过提及具体实施方式强调了本说明书的一些方面，但本领域技术人员将易于意识到：这些公开的实施方式是用于阐述本文中所公开的主题的原则。因此，应该理解：公开的主题绝不限于本文中所述的具体方法学、实验流程和/或试剂等。因而，可依照本文中的教导对所公开的主题进行多种修改或改变或做出所公开主题的替代配置而不脱离本说明书的精神。最终，本文中所使用的术语仅用于描述具体实施例的目的，其并非意在限制本发明的范围，本发明的范围由权利要求唯一确定。因此，本发明不限于精确展示和描述的那些。

本文中描述了本发明的某些实施方式，包括发明人已知的实施本发明的最佳模式。当然，本领域普通技术人员阅读上述描述后会明白这些所述实施方式的变更。发明人预期熟练的技术人员能适当地采用这类变更，且发明人意欲使得本发明以与本文具体描述不同的方式应用。因此，当可适用的法律允许时，本发明包括附加的权利要求书中所述的主题的所有修改和等价物。另外，除非本文另有说明或与上下文明显抵触，在其所有可能变化中，上述元件的任何组合由本发明所包括。

本发明的备选实施方式、元素或的步骤分组不应解释为限制。各组成员可被单独提到或要求保护，或与本文发现的组的其它成员或其它元素任意组合。应当理解，由于便利和/或专利性的原因，一组的一个或多个成员可以被包括进一组中或从该组删除。当任何这类包括或删除发生时，本申请文件被认为含有经改写的组，以满足对附加的权利要求书中所用的所有马库什组的书面描述。

除非另有说明，本说明书和权利要求书中使用的表达特征、条目、数量、参数、性质、术语等等的数字应理解为在所有情况下由术语“约”修饰。在本文中使用时，术语“约”表示：如此限制的特征、条目、数量、参数、性质或术语涵盖：在所述的特征、条目、数量、参数、性质或术语的值之上或之下加或减10％的范围。因此，除非指出反例，说明书和附加的权利要求书中公开的数量参数是可变化的近似值。至少，并不企图限制将等同原则应用于权利要求书的范围，每个数量参数至少应按照经报导的有效数字的位数并通过应用常规约数技术解释。尽管陈述本发明的宽范围的数值范围和值是近似值，但具体实施例中陈述的数值范围和值被尽可能精确地报告。然而，任何数值范围或值固有地包含误差，这是从它们各自检测测量中发现的标准差必然地产生的。对本文数值范围的叙述仅意图用作为引用落入该范围的每个单独的值的快捷方法。除非本文另有说明，每个单独的值都被并入说明书，就像其被单独地并入本文一样。

除非另有说明或者与上下文明显矛盾，描述本发明的内容时，不使用数量词时(尤其在权利要求书的内容中)应解释为涵盖单数和复数。除非在本文另有说明或与上下文明显抵触，本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。本文所提供的任何和所有实例或举例文字(例如“例如”)的使用仅意欲用来更好地阐述本发明，而非对本发明所要求保护的范围设定限制。申请文件中的文字不应被理解为表示任何不要求保护的元素对本发明的实践而言是必需的。

权利要求书中可使用语言“由…组成”或“基本上由…组成”进一步限制本文中揭示的特定实施例。当用于权利要求书中时(无论申请或根据修正添加)，过渡术语“由…组成”排除权利要求书中未说明的任何要素、步骤或成分。过渡术语“基本上由…组成”使权利要求书的范畴限于指定物质或步骤和本质上不影响基本和新颖特征的物质或步骤。本文中固有地或明确地描述和允许所主张本发明的实施例。

本说明书中引用和确定的所有专利、专利出版物和其它出版物分别、清楚地通过引用被完整并入本文，以用于描述并公开，例如，可与本发明联合使用的这类出版物中所述的组合物和方法学的目的。这些出版物仅是出于它们的公开先于本申请的提交日而提供。在这点上，任何出版物都不应当被理解为承认本发明人因为在先发明或者任何其它原因而无权先于这样的公开。所有关于日期的陈述或关于这些文件内容的表示均基于申请人能够得到的信息且不构成对日期或这些文件内容的准确性的任何承认。

Claims

1.免疫抑制性转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列以所示顺序包含下述结构域：

转录因子(TF)结构域，所述转录因子(TF)结构域包含来自免疫抑制性人类免疫缺陷病毒(HIV)、SIV Tat蛋白、无毛的序列或人工免疫抑制性序列；

来自慢病毒Tat或防御素分子的富半胱氨酸区；和

来自慢病毒Tat蛋白的C-末端区域。

2.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述HIV是HIV-1或HIV-2。

3.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其还包含来自慢病毒Tat蛋白的富精氨酸结构域。

4.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域中的至少一个氨基酸被保守氨基酸替换所修饰。

5.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述慢病毒Tat来自HIV-1、HIV-2、SIV、FIV或EIAV。

6.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域还在N-末端包含重复序列，所述重复序列包含(PVDPRLEPWKHPGSQP)_n，其中n＝2-10。

7.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域包含SEQ ID NO:36、39、44、48、50、54、59、60或61之一的氨基酸序列。

8.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述富半胱氨酸结构域包含SEQ ID NO:37、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、58、62、63、64或70之一的氨基酸序列。

9.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述C-末端结构域包含SEQ ID NO:38、42、46、47、49、52、53、68或71之一的氨基酸序列。

10.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述富半胱氨酸区和所述C-末端区域二者来自相同来源且组合的富半胱氨酸和C-末端区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:47、49或53之一。

11.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

12.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于90％。

13.权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于95％。

14.药物组合物，其包含一种或更多种根据权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽和药学上可接受的赋形剂。

15.根据权利要求14的药物组合物，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

16.一种治疗以异常免疫反应为特征的疾病的方法，所述方法包括：

向有此需要的受试者施用治疗有效量的一种或更多种权利要求1所述免疫抑制性Tat衍生多肽；和

从而通过抑制免疫系统来治疗所述疾病。

17.权利要求16的方法，其中所述治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。

18.权利要求17的方法，其中所述AReg是CD 14+巨噬细胞。

19.权利要求16的方法，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

20.权利要求16的方法，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

21.权利要求20的方法，其中所述自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。

22.权利要求20的方法，其中所述炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。

23.权利要求20的方法，其中所述神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

24.权利要求16的方法，其中所述方法还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状减少，且其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

25.权利要求16的方法，其中所述受试者是未免疫受损的。

26.权利要求16的方法，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

27.权利要求16的方法，其中作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

28.权利要求16的方法，其中以多剂量施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

29.权利要求28的方法，其中每天、每周、每两周、每月或每两月施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

30.权利要求16的方法，其中施用步骤包括重复的施用周期，其中每个周期包括在确定的时段施用多剂量的所述免疫抑制性Tat衍生多肽，随后是静息期，且其中重复所述周期多次。

31.一种增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)的表达的方法，所述方法包括：

向受试者施用治疗有效量的一种或更多种权利要求1所述免疫抑制性Tat衍生多肽；和

从而增加所述AReg上FasL的表达。

32.根据权利要求31的方法，其中所述AReg是CD 14+巨噬细胞。

33.权利要求31的方法，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

34.权利要求31的方法，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

35.权利要求31的方法，其中所述受试者是未免疫受损的。

36.权利要求31的方法，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

37.权利要求31的方法，其中作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

38.一种减少炎症的方法，所述方法包括：

从而增加减少所述受试者中的炎症。

39.权利要求38的方法，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

40.权利要求38的方法，其中所述炎症与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关。

41.权利要求38的方法，其中所述受试者是未免疫受损的。

42.权利要求38的方法，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

43.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于治疗有此需要的受试者中以异常免疫反应为特征的疾病；其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽通过抑制所述受试者的免疫系统来治疗所述疾病。

44.根据权利要求43的用途，其中所述治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。

45.根据权利要求43的用途，其中所述AReg是CD 14+巨噬细胞。

46.权利要求43的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

47.权利要求43的用途，其中所述受试者是未免疫受损的。

48.权利要求43的用途，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

49.权利要求43的用途，其中作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

50.权利要求43的用途，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

51.根据权利要求50的用途，其中所述自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。

52.根据权利要求50的用途，其中所述炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。

53.根据权利要求50的用途，其中所述神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

54.根据权利要求43的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状减少，且其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

55.权利要求43的用途，其中以多剂量施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

56.权利要求55的用途，其中每天、每周、每两周、每月或每两月施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

57.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于增加受试者中抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)的表达；其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽增加所述AReg上FasL的表达。

58.根据权利要求57的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

59.根据权利要求57的用途，其中所述AReg是CD 14+巨噬细胞。

60.根据权利要求57的用途，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

61.根据权利要求57的用途，其中所述受试者是未免疫受损的。

62.根据权利要求57的用途，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

63.根据权利要求57的用途，其中作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

64.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于减少受试者中的炎症，其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽减少所述受试者中的炎症。

65.根据权利要求64的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

66.根据权利要求64的用途，其中所述炎症与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关。

67.根据权利要求64的用途，其中所述受试者是未免疫受损的。

68.根据权利要求64的用途，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

69.免疫抑制性转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列以所示顺序包含下述结构域：

来自慢病毒Tat或防御素分子的富半胱氨酸区；和

来自慢病毒Tat蛋白的C-末端区域。

70.权利要求69的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述HIV是HIV-1或HIV-2。

71.权利要求69或70的免疫抑制性Tat衍生多肽，其还包含来自慢病毒Tat蛋白的富精氨酸结构域。

72.权利要求69-71中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域中的至少一个氨基酸被保守氨基酸替换所修饰。

73.权利要求69-72中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述慢病毒Tat来自HIV-1、HIV-2、SIV、FIV或EIAV。

74.权利要求69-73中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域还在N-末端包含重复序列，所述重复序列包含(PVDPRLEPWKHPGSQP)_n，其中n＝2-10。

75.权利要求69-74中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述TF结构域包含SEQ ID NO:36、39、44、48、50、54、59、60或61之一的氨基酸序列。

76.权利要求69-75中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述富半胱氨酸结构域包含SEQ ID NO:37、40、41、43、45、47、49、51、53、55、57、58、62、63、64或70之一的氨基酸序列。

77.权利要求69-76中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述C-末端结构域包含SEQ ID NO:38、42、46、47、49、52、53、68或71之一的氨基酸序列。

78.权利要求69-77中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述富半胱氨酸区和所述C-末端区域二者来自相同来源且组合的富半胱氨酸和C-末端区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:47、49或53之一。

79.权利要求69-78中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

80.权利要求69-79中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于90％。

81.权利要求69-80中任一项的免疫抑制性Tat衍生多肽，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于95％。

82.一种治疗以异常免疫反应为特征的疾病的方法，所述方法包括：

从而通过抑制免疫系统来治疗所述疾病。

83.一种增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)的表达的方法，所述方法包括：

从而增加所述AReg上FasL的表达。

84.一种减少炎症的方法，所述方法包括：

从而增加爱减少所述受试者中的炎症。

85.权利要求82-84中任一项的方法，其中所述治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。

86.权利要求82-85中任一项的方法，其中所述AReg是CD14+巨噬细胞。

87.权利要求82-86中任一项的方法，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

88.权利要求82-87中任一项的方法，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

89.权利要求88的方法，其中所述自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。

90.权利要求88的方法，其中所述炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。

91.权利要求88的方法，其中所述神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

92.权利要求82-91中任一项的方法，其中所述方法还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状减少，且其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

93.权利要求82-92中任一项的方法，其中所述受试者是未免疫受损的。

94.权利要求82-93中任一项的方法，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

95.权利要求82-94中任一项的方法，其中，作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

96.权利要求82-95中任一项的方法，其中以多剂量施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

97.权利要求82-96中任一项的方法，其中每天、每周、每两周、每月或每两月施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

98.权利要求82-97中任一项的方法，其中施用步骤包括重复的施用周期，其中每个周期包括在确定的时段施用多剂量的所述免疫抑制性Tat衍生多肽，随后是静息期，且其中重复所述周期多次。

99.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于治疗有此需要的受试者中以异常免疫反应为特征的疾病；其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽通过抑制所述受试者的免疫系统来治疗所述疾病。

100.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于增加受试者中抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体(FasL)的表达，其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽增加所述AReg上FasL的表达。

101.一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽在制备药物中的用途，所述药物用于减少受试者中的炎症，其中，所述一种或更多种免疫抑制性Tat衍生多肽与权利要求1的免疫抑制性Tat衍生多肽至少85％相同，且其中施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽减少所述受试者中的炎症。

102.根据权利要求99-101中任一项的用途，其中所述治疗增加抗原呈递细胞调控性巨噬细胞(AReg)上Fas配体的表达。

103.根据权利要求99-102中任一项的用途，其中所述AReg是CD14+巨噬细胞。

104.根据权利要求99-103中任一项的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽与SEQ ID NO:9-11、13-35或69之一的序列同一性高于85％。

105.根据权利要求99-104中任一项的用途，其中所述受试者是未免疫受损的。

106.根据权利要求99-105中任一项的用途，其中所述受试者的免疫系统未因所述施用而受损。

107.根据权利要求99-106中任一项的用途，其中，作为所述施用的结果，通过AReg的细胞因子分泌减少。

108.根据权利要求99-107中任一项的用途，其中所述疾病是自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病。

109.根据权利要求108的用途，其中所述自身免疫疾病是急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、抗磷脂抗体综合症(APS)、关节炎、哮喘、自身免疫缺陷综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、湿疹、子宫内膜异位症、肠胃失调症、古德帕斯彻氏综合症、格雷夫斯氏病、格林·巴利综合症(GBS)、桥本氏甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症性肠病、炎症性皮肤疾病、间质性膀胱炎、狼疮、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、嗜睡症、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性硬化、牛皮癣、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、肖格伦综合症、皮肤病、腱鞘炎、葡萄膜炎、脉管炎或白斑病。

110.根据权利要求108的用途，其中所述炎症相关疾病是痤疮、胃酸倒流/胃灼热、变态反应、变应性鼻炎、阿尔茨海默病、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、自身免疫疾病、龟头炎、睑炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球性肾炎、舌炎、心脏疾病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角结膜炎、喉炎、狼疮、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合症(X综合症)、偏头痛、多发性硬化、脊髓炎、心肌炎、肌病、肌炎、肾炎、神经病、肥胖症、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病、腮腺炎、骨盆炎性疾病、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、唾液腺炎、鼻窦炎、痉挛性结肠、口腔炎、滑膜炎、腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。

111.根据权利要求108的用途，其中所述神经退行性疾病是亚历山大病、进行性脑灰质萎缩、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化、焦虑症、共济失调毛细血管扩张症、注意力缺陷症、卡纳万病、中枢神经系统损伤、进行性腓骨肌萎缩症、科克因综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、抑郁症、脑炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、弗里德赖希共济失调额颞叶痴呆、遗传性痉挛性截瘫、格林-巴利综合症(及其变体急性运动轴突神经病变、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病、和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆复合症、亨廷顿氏疾病、神经系统缺血性损伤、肯尼迪氏病、克拉伯病、路易体痴呆、马查多-约瑟夫病、脑膜炎(例如，细菌、寄生虫、真菌或病毒性)、多发性硬化、多系统萎缩、神经创伤(例如，撞击脑损伤、脊髓损伤和神经系统创伤)、神经病(例如，化疗引起的神经病、糖尿病相关的神经病和周围神经病)、帕金森氏病、佩-梅病、皮克氏病、原发性侧索硬化症、朊病毒障碍、进行性核上性麻痹、雷弗素姆氏病、桑德霍夫病、精神分裂症、谢耳德氏病、脊髓小脑萎缩、斯蒂尔-理查森-欧斯祖斯基疾病、中风、脊髓痨或血管性痴呆。

112.根据权利要求99-111中任一项的用途，其中所述免疫抑制性Tat衍生多肽还引起与自身免疫疾病、神经退行性疾病或炎症相关疾病相关的至少一种症状减少，且其中所述症状是炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和高体温、四肢对寒冷极度敏感、肌肉和关节脆弱和僵硬、体重改变、消化或肠胃问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动降低(性欲低下)、血糖改变、和根据自身免疫疾病类型的器官或组织大小增加或器官或组织破坏。

113.根据权利要求99-112中任一项的用途，其中以多剂量施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

114.根据权利要求99-113中任一项的用途，其中每天、每周、每两周、每月或每两月施用所述免疫抑制性Tat衍生多肽。

115.根据权利要求99-114中任一项的用途，其中施用步骤包括重复的施用周期，其中每个周期包括在确定的时段施用多剂量的所述免疫抑制性Tat衍生多肽，随后是静息期，且其中重复所述周期多次。