CN104962477B - 壮观丝衣霉zrv2011f2‑p3及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株新菌株‑‑壮观丝衣霉ZRV2011F2‑P3及作为可溶性环氧化酶(sEH)活性抑制剂的应用,壮观丝衣霉ZRV2011F2‑P3保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.10637,保藏日期为2015年3月19日,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101;此菌株来自传统米醋发酵醋醪,能够生产心血管疾病靶标sEH酶的抑制剂,强烈抑制sEH的N端磷酸酶的活性,从而达到预防和治疗高胆固醇血症的作用,并且有助于揭示心血管疾病靶标sEH的新的生理功能。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种可溶性环氧化酶抑制剂,特别涉及一株新菌株--壮观丝衣霉(Talaromyces(Byssochlamys)spectabilis)ZRV2011F2-P3(宛氏拟青霉(Paecilomycesvariotii)的有性型)及其作为可溶性环氧化酶抑制剂的应用。
(二)背景技术
可溶性环氧化酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是近几年出现的具有交叉功能的心血管疾病新靶标,该酶的抑制剂被认为是最具前景的心血管疾病靶标药物,不仅有抗高血压、抗炎症功能,还有保护心肌、肾脏、大脑等与高血压和粥样动脉硬化相关的终末器官的作用(Marino,J.P.,Jr.(2009)Soluble epoxide hydrolase,a target withmultiple opportunities for cardiovascular drug discovery.Curr Top Med Chem,9,452-63.)。
sEH是由两个60Kda的单体以反平行方式组成的同型二聚体,具有双重酶活性。每个单体有两个结构域,C末端有环氧化物水解酶活性,而N末端含有磷酸酶活性位点。sEH的主要生理功能是将环氧化二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acides,EETs)等环氧化合物水解成相应的二醇化合物,EETs被证明是内皮源性超极化因子,具有抗高血压、维持血管稳态平衡和抗炎症等作用,而这些环氧化合物的二醇化合物几乎不具备这类生理功能。因此抑制sEH的活性就能够增进EETs的心血管保护功能。
sEH的N末端磷酸酶活性,尽管功能尚未完全明确,已被认为是一个潜在高胆固醇血症的治疗靶标,而且sEH单核苷酸多态性的研究表明,拥有N末端Lys55Arg的人群,即使C末端的环氧化物水解酶活性不高,其较高的磷酸酶活性依然会增加冠心病的风险。
寻找sEH抑制剂已经成为世界各大制药公司新药研发的热点,已经有一个sEH的人工合成抑制剂1,3-二取代脲类化合物AR9281进入临床二期a研究(Imig,J.D.&B.D.Hammock(2009)Soluble epoxide hydrolase as a therapeutic target for cardiovasculardiseases.Nature Reviews Drug Discovery,8,794-805.)。而具有sEH抑制作用的天然化合物尚未见报道。
(三)发明内容
本发明目的是从米醋发酵醋醪中分离到1株真菌--壮观丝衣霉(Talaromycesspectabilis)ZRV2011F2-P3,其代谢产物能够抑制sEH的活性,壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3体积终浓度5%添加量对sEH磷酸酶的抑制率为93.7%。
本发明采用的技术方案是:
本发明提供一株新菌株--壮观丝衣霉(Talaromyces spectabilis)ZRV2011F2-P3,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.10637,保藏日期为2015年3月19日,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101。
本发明还涉及所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3作为可溶性环氧化酶(sEH)活性抑制剂的应用,所述抑制剂是将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3培养液经甲醇浸提后的浸提液离心,取上清液浓缩去除甲醇,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,取悬浮液即为抑制剂;所述悬浮液相对于可溶性环氧化酶反应体系的体积终浓度为1~5%,所述可溶性环氧化酶反应体系包括可溶性环氧化酶、底物和反应介质。所述底物为AttoPhos(Promega)或PHOME(Cayman),以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质。
优选,所述悬浮浓缩物所用缓冲液为含终浓度1mM MgCl2和终浓度0.1mg/ml BSA的25mM bis-tris HCl,pH 7.0。
本发明壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3作为可溶性环氧化酶(sEH)活性抑制剂的应用,具体方法为:将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至M6培养基,25~30℃培养11~13天,将培养液用甲醇浸提,将甲醇浸提液离心,取上清液减压浓缩去除溶剂,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,获得的悬浮液即为可溶性环氧化酶活性抑制剂;所述M6培养基的终浓度组成为:甘油70-110g/L,葡萄糖10-30g/L,豆粕30-50g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠2g/L,硫酸镁0.5-1g/L,橄榄油5g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
优选,所述培养液经24h冷冻干燥(Freeze Dry System,LABCONCO,USA)。
优选,所述M6培养基的终浓度组成为:甘油70g/L,葡萄糖30g/L,豆粕30g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠2g/L,硫酸镁1g/L,橄榄油5g/L,溶剂为去离子水,pH值自然。
所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至M6培养基前,先接种至斜面培养基进行活化,所述活化方法为:将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至PDA斜面,25~30℃培养5天,获得菌体斜面;所述PDA培养基的组成:马铃薯浸出粉10.0g/L,葡萄糖20.0g/L,琼脂13g/L,氯霉素0.1g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
本发明所述甲醇浸提方法为:将培养液冷冻干燥后,加入培养液1倍体积的体积浓度90%甲醇水溶液,经涡旋混匀,置于超声波清洗仪(KUDOS,上海科导)中超声10sec后,在4℃浸提12h,获得甲醇浸提液。
本发明还提供一种所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3制备的可溶性环氧化酶活性抑制剂,所述的抑制剂是以所述的壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3培养液经甲醇浸提后的浸提液离心,取上清液浓缩去除甲醇,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,取悬浮液即为所述的抑制剂。
本发明利用多孔板酶标仪SPECTRAMAX M5(MD,美国)检测可溶性环氧化酶活性抑制剂对sEH的两种酶活性抑制情况:C-端水解酶与N-端磷酸酶的抑制作用。本发明所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的代谢产物能够较强地抑制sEH的N端磷酸酶活性,而对C端水解酶的阻碍作用较弱。壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的这种对sEH的N端磷酸酶的高特异性抑制作用,不仅具备了潜在的阻碍高胆固醇血症的发生与发展作用,而且有望在生理作用机制尚未完全明晰的N端磷酸酶的活性机理研究中发挥作用。
sEH是一个具有双酶活性的心血管疾病的新靶标,尽管C端水解酶的生理功能比较清楚,N端磷酸酶的生理功能因底物尚未十分明确而不明朗。酶抑制剂的发现对该酶功能解析是十分重要的。以上个世纪70年代莫纳克林K的发现为例,莫纳克林K是人体胆固醇合成限速酶-HMG-CoA还原酶的抑制剂,不仅发展成为降胆固醇的药物,给成千上万的心血管疾病患者带来福音,其发现还直接帮助了美国得克萨斯大学的布朗(Michael S.Brown)和戈尔茨坦(Joseph L.Goldstein)揭示出胆固醇代谢调节机理并荣获1985年诺贝尔生理学奖。可见,特意性高的抑制剂将有助于更多的sEH生理功能的探索与分析,加深对心血管疾病形成机理的认识,从而达到控制与治疗这一致死率最高的疾病的终极目标。
因此,在尚未见到微生物代谢产物中有能够抑制sEH活性的文献报道的今天,本发明所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的代谢产物,除了具有潜在的高胆固醇血症的治疗作用,还有可能以其对sEH的N端磷酸酶的高特异性抑制作用,在揭示N端磷酸酶的生理作用方面发挥作用。
与现有技术相比,本发明的有益效果主要体现在:本发明提供一株新菌株--壮观丝衣霉(Talaromyces spectabilis)ZRV2011F2-P3,此菌株来自传统米醋发酵醋醪,能够生产心血管疾病靶标sEH酶的抑制剂,强烈抑制sEH的N端磷酸酶的活性,从而达到预防和治疗高胆固醇血症的作用,并且有助于揭示心血管疾病靶标sEH的新的生理功能。
(四)附图说明
图1为实施例3中壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的M6培养液对sEH的磷酸酶和水解酶活性的抑制作用柱形图,纵坐标为抑制率,横坐标为抑制剂体积终浓度。
图2为实施例4中壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的M6培养液对sEH的磷酸酶和水解酶活性的抑制作用柱形图,纵坐标为抑制率,横坐标为抑制剂体积终浓度。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1.菌株壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3的分离鉴定及其代谢产物中sEH活性抑制剂的检测
1.菌株的分离纯化
利用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基从米醋固态发酵醋醪(大米糖化阶段的料饼)中分离丝状真菌。采用无菌水将醋醪配制成质量浓度20%的悬浊液,进一步用无菌水稀释10倍,100倍和1000倍,分别涂布在虎红PDA平板,25℃-30℃培养5天,从能够挑出单个菌落的平板上,挑选不同形态的菌落于PDA平板进行划线培养,25℃-30℃培养3-5天,从划线培养的平板上挑选单个菌落,保存于PDA斜面。从PDA斜面挑取菌落接种到PDA平板进行划线培养,25-30℃培养3天,重复划线培养2次,进一步分离纯化,从划线培养的平板上挑选单菌株,命名为菌株ZRV2011F2-P3。
2.培养基的配制
PDA培养基的具体成分如下:马铃薯浸出粉10.0g/L,葡萄糖20.0g/L,琼脂13g/L,氯霉素0.1g/L,溶剂为去离子水,pH自然。虎红PDA培养基在PDA培养基的基础上添加终浓度0.05g/L的虎红。
3.菌株代谢产物的获得
将菌株ZRV2011F2-P3接种于M6培养基中,25℃-30℃培养13天,将培养液冷冻干燥,然后加入培养液等量体积的90%甲醇水溶液(体积浓度),涡旋混匀,置于超声波清洗仪(KUDOS,上海科导)中超声10sec,4℃浸提12h,将浸提液离心取上清液,减压浓缩去除溶剂,获得甲醇提取物。以等体积的缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH7.0)将甲醇提取物重悬,作为抑制剂用于sEH抑制活性的检测,添加量为5%体积终浓度。
M6培养基组成为:甘油110g/L,葡萄糖10g/L,豆粕50g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠1g/L,硫酸锌0.5g/L,橄榄油5g/L,溶剂为水,pH值自然。
4.代谢产物中sEH活性抑制剂的检测
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,利用人工底物经人源sEH酶切后,其产物能够形成荧光的特点,采用多孔板检测仪SPECTRAMAX M5(MD,美国)动态监测酶反应过程中反应液的荧光强度,以反应的初速度来表示sEH活性的大小。在相同的100μL反应体系中,以添加缓冲液替代样品为空白对照,其活性计为100%。以添加样品(步骤3制备的培养液提取物,即抑制剂)为实验对象,分别检测sEH酶活性,从而获得样品对sEH酶活性的抑制率。
(1)磷酸酶活性检测
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为300ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为5μM的底物AttoPhos(Promega),在30℃反应30分钟,在激发波长435nm,发射波长555nm动态检测荧光强度。
(2)水解酶活性检测
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为12.5μM的PHOME(Cayman)为底物,以终浓度为160ng/ml人源sEH酶为催化剂,30℃反应20分钟,以激发波长330nm,发射波长465nm进行荧光动态检测。
(3)检测结果
菌株ZRV2011F2-P3的M6培养液甲醇浸提物添加量为5%(V/V)时,对sEH磷酸酶的抑制率为81.5%,对水解酶的抑制率为13%。
可见,此菌株ZRV2011F2-P3的代谢产物只对sEH双酶活性中的N端磷酸酶活性具有较高的专一性抑制作用。
5.菌株ZRV2011F2-P3的真菌ITS rRNA基因序列的分析
利用真菌ITS rRNA基因序列进行菌株ZRV2011F2-P3的分子鉴定。采用真菌DNA提取试剂盒(Omega)提取DNA,利用真菌ITS引物ITS1(5'TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3')和ITS4(5'TCCTCCGCTTATTGATATGC 3')进行ITS rRNA基因序列的PCR扩增。扩增体系:反应体系25μL,DNA模板100ng,10×PCR Buffer 2.5μL,dNTP mix(10Mm)0.5μL,10μM上下游引物各0.5μL,Taq酶(5U/μL)0.2μL,加去离子水补足至25μL。扩增条件:预变性94℃5min,循环94℃1min,50℃1min,72℃2min,共30个循环,72℃延伸10min。
菌株ZRV2011F2-P3的PCR产物纯化后送至上海桑尼生物工程有限公司(中国)进行DNA测序,将测序结果(SEQ ID NO:1所示)提交NCBI数据库中进行Blast比对,比对结果显示菌株ZRV2011F2-P3与Talaromyces(Byssochlamys)spectabilis strain LTBF 008 1同源性为99%,将菌株ZRV2011F2-P3鉴定为壮观丝衣霉,命名为壮观丝衣霉(Talaromycesspectabilis)ZRV2011F2-P3。
SEQ ID NO:1
GAGGGTACTCGGGGCCCGCCTCCCATCCGAGTTGTCCTGACACCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTGGTTCACGCCCCG
GCCGCCGGGGGGTTCACGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCTGGAACGCTGCCTGGAAGGTTGCCGTCTGAGTA
TACAATCAATCAATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGT
AATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTG
TCCGAGCGTCATTGCTAACCCTCCAGCCCGGCTGGTGTGTTGGGCCGCCGTCCCCCCCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAA
AGGCAGCGGCGGCGTCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACACGCTTCAGTAGAACCGGCCGGCTTGCTGG
CCACACGACCTTCACGGTCACCTATATTTCTCTTAGGTGACCTCGGATCAGGTAGCACCCCC。
实施例2壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3抑制剂
(1)将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至PDA斜面培养基,25~30℃培养5天,获得菌体斜面;所述PDA培养基的组成:马铃薯浸出粉10.0g/L,葡萄糖20.0g/L,琼脂13g/L,氯霉素0.1g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
(2)将步骤(1)斜面菌体接种至M6培养基,25~30℃培养11~13天,取培养液冷冻干燥(Freeze Dry System,LABCONCO,USA)24h后,加入培养液1倍体积的90%甲醇水溶液(体积浓度),经涡旋混匀,置于超声波清洗仪(KUDOS,上海科导)中超声10sec后,在4℃浸提12h,将浸提液离心取上清液,即获得甲醇浸提液,将甲醇浸提液减压浓缩去除溶剂,获得浓缩物,以等体积的缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)将浓缩物重悬,获得sEH抑制剂。
实施例3.壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3对sEH抑制作用随着添加浓度的增加而增强
1、sEH酶活性检测条件
(1)磷酸酶活性检测
对照:以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH7.0)为反应介质,以终浓度为300ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为5μM的底物Attophos(promega),在30℃反应30分钟,以激发波长435nm、发射波长555nm进行荧光动态检测。
实验:
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为300ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为5μM的底物Attophos(promega),再分别加入体积终浓度1%,3%和5%的实施例2获得的sEH抑制剂,在30℃反应20分钟,在激发波长435nm,发射波长555nm进行动态荧光检测。
(2)水解酶活性检测
对照:以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH7.0)为反应介质,以终浓度为12.5μM的PHOME(Cayman)为底物,以终浓度为160ng/ml人源sEH酶为催化剂,30℃反应20分钟,在激发波长330nm,发射波长465nm进行荧光动态检测。
实验:
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为160ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为12.5μM的PHOME为底物,再分别加入体积终浓度1%,3%和5%实施例2获得的sEH抑制剂,在30℃反应30分钟,在激发波长330nm,发射波长465nm进行荧光动态检测。
2、检测结果:
利用96孔板进行荧光检测,每个样品重复2次,分别计算每个孔板中的酶活性,与空白对照比较计算抑制率,取平均值。如图1所示,当sEH抑制剂添加量为1%,3%和5%(V/V)时,其对sEH磷酸酶与水解酶的抑制率分别呈现随着添加量增加而增加的趋势(图1)。
实施例4
将实施例2中M6培养基的组成改为:甘油70g/L,葡萄糖30g/L,豆粕30g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠2g/L,硫酸镁1g/L,橄榄油5g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
其它操作同实施例2,获得sEH抑制剂,结果见图2所示。
1、sEH酶活性检测条件
(1)磷酸酶活性检测
对照:以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH7.0)为反应介质,以终浓度为300ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为5μM的底物Attophos(promega),在30℃反应20分钟,在激发波长435nm,发射波长555nm进行荧光动态检测。
实验:
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为300ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为5μM的底物Attophos(promega),再分别加入体积终浓度1%,3%和5%的sEH抑制剂,在30℃反应30分钟,在激发波长435nm,发射波长555nm进行动态荧光检测。
(2)水解酶活性检测
对照:以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH7.0)为反应介质,以终浓度为12.5μM的PHOME(Cayman)为底物,以终浓度为160ng/ml人源sEH酶为催化剂,30℃反应20分钟,在激发波长330nm,发射波长465nm进行荧光动态检测。
实验:
以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质,以终浓度为160ng/ml的人源sEH酶为催化剂,加入终浓度为12.5μM的PHOME为底物,再分别加入体积终浓度1%,3%和5%sEH抑制剂,在30℃反应20分钟,在激发波长330nm,发射波长465nm进行荧光动态检测。
2、检测结果:
利用96孔板进行荧光检测,每个样品重复2次,分别计算每个孔板中的酶活性,与空白对照比较计算抑制率,取平均值。如图2所示,当sEH抑制剂添加量为5%(V/V)时,其对sEH磷酸酶的抑制率为93.7%,对水解酶的抑制率为8.7%(图2)。结果表明,在M6培养基中检测到较高的抑制N端磷酸酶的活性。结合实施例3,表明壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3能够在较广泛的培养基中生产sEH抑制剂,有潜在的获得最优化生产条件的可能性。
Claims (9)
1.壮观丝衣霉(Talaromyces spectabilis)ZRV2011F2-P3,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.10637,保藏日期为2015年3月19日,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101。
2.一种权利要求1所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3在制备可溶性环氧化酶活性抑制剂中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述抑制剂是将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3培养液经甲醇浸提后的浸提液离心,取上清液浓缩去除甲醇,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,取悬浮液即为抑制剂;所述悬浮液相对于可溶性环氧化酶反应体系的体积终浓度为1~5%,所述可溶性环氧化酶反应体系包括可溶性环氧化酶、底物和反应介质。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述缓冲液为含终浓度1mM MgCl2和终浓度0.1mg/ml BSA的25mM bis-tris HCl,pH 7.0。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用为:将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至M6培养基,25~30℃培养11~13天,将培养液用甲醇浸提,将甲醇浸提液离心,取上清液减压浓缩去除溶剂,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,获得的悬浮液即为可溶性环氧化酶活性抑制剂;所述M6培养基的终浓度组成为:甘油70-110g/L,葡萄糖10-30g/L,豆粕30-50g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠2g/L,硫酸镁0.5-1g/L,橄榄油5g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至M6培养基前,先接种至斜面培养基进行活化,所述活化方法为:将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3接种至PDA斜面,25~30℃培养5天,获得菌体斜面;所述PDA培养基的组成:马铃薯浸出粉10.0g/L,葡萄糖20.0g/L,琼脂13g/L,氯霉素0.1g/L,溶剂为去离子水,pH自然。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述甲醇浸提方法为:将培养液冷冻干燥后,加入培养液1倍体积的体积浓度90%甲醇水溶液,混匀,超声10sec后,在4℃浸提12h,获得甲醇浸提液。
8.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述M6培养基的终浓度组成为:甘油70g/L,葡萄糖30g/L,豆粕30g/L,蛋白胨8g/L,硝酸钠2g/L,硫酸镁1g/L,橄榄油5g/L,溶剂为去离子水,pH值自然。
9.一种权利要求1所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3制备的可溶性环氧化酶活性抑制剂,其特征在于所述的抑制剂是以所述的壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3培养液经甲醇浸提后的浸提液离心,取上清液浓缩去除甲醇,取浓缩物用等体积缓冲液悬浮,取悬浮液即为所述的抑制剂。
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CN101081848A (zh) * | 2006-01-06 | 2007-12-05 | 华北制药集团有限责任公司 | 新的多烯类化合物及其制备方法和用途 |
CN104140933A (zh) * | 2014-08-06 | 2014-11-12 | 浙江省农业科学院 | 土曲霉zrv2011f5及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
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Draft Genome Sequence of the Formaldehyde-Resistant Fungus Byssochlamys spectabilis No. 5 (Anamorph Paecilomyces variotii No. 5) (NBRC109023);Takuji Oka 等;《Genome Announcements》;20140109;第2卷(第1期);第1-2页 * |
R.A.Samson 等.Polyphasic taxonomy of the heat resistant ascomycete genus Byssochlamys and its Paecilomyces anamorphs􀁗􀁈􀀃􀁊􀁑􀁘􀁖.《persoonia》.2009,第22卷(第22期),第14-27页. * |
Sexual Reproduction as the Cause of Heat Resistance in the Food Spoilage Fungus Byssochlamys spectabilis (Anamorph Paecilomyces variotii);Jos Houbraken 等;《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》;20080111;第74卷(第5期);第1613-1619页 * |
酒曲中霉菌的分类统计;潘明 等;《化学与生物工程》;20100325;第27卷(第3期);第73-76页 * |
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