CN104958359A - 一种中药复方制剂及在疣、宫颈癌中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药复方制剂,该中药复方制剂包括丹参和苦参(其中提取物有效成分丹酚酸b,含量为≥5%;丹参酮IIA含量在≥0.2%;氧化苦参碱,含量≥2%;所述丹参药材为9~1:所述苦参药材1~5;该中药制剂的制备方法包括以下步骤:(1)粗提液制备:取经蒸馏水浸泡后的丹参、苦参饮片混合物装进蒸馏容器中,用溶剂1三次加热洗脱,收集有效部位A,该即为粗提液,备用;(2)清洗步骤和(3)提纯步骤。该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣或宫颈癌,配方精简,有效成份明确,质量体系稳定可控,治疗价格低、不复发、治疗效果好。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂,尤其是涉及一种含丹参和苦参含丹酚酸b、丹参酮IIA和氧化苦参碱的治疗疣、宫颈癌的中药复方制剂。
背景技术
皮肤居一身之表,内合于肺,卫气循行其间,为机体屏障,易受各种邪气侵袭,邪毒蕴结于肌肤,此为皮肤病发生的原因。《本草求真》云:“一有邪入,则阳疲郁不伸而热生矣。有热自必有湿,湿淫则热益盛,而风更乘热至,相依为害。”皮肤病的发生和变化,也是受风寒湿热或时疫毒气侵袭,湿郁肌肤,汗出排毒不彻所致。治宜疏风化痰,祛湿解毒,消肿散结。
疣,又名枯筋箭,多由风热邪毒客于肌肤,热邪煎熬成块而致, 或由怒动肝火,肝旺血燥,筋气不荣所成,或因外伤染毒而引起。初起如赤豆,枯则微槁,日久破裂,钻出筋头,如花之蕊,多生于手、足、脸、胸乳之间,挤压触之甚痛, 碰撞擦破时易流血。
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。一般认为高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要危险因素,90%以上的宫颈癌伴有高危型HPV感染。
丹参,为唇型科多年生草本植物丹参的根。根据功效,常用于:活血祛瘀,用于多种瘀血为患的病证;凉血消痈,用于痈肿疮毒证;除烦安神,用于温病热入营血,心烦不寐等证。
苦参,为豆科苦参属的植物。别名:苦骨、地槐、水槐、菟槐、骄槐、野槐或白茎。分布于俄罗斯、日本、印度、朝鲜以及中国大陆的南北各省区等地,生长于海拔1,500米的地区,多生在山坡、沙地、草坡、灌木林中及田野附近,目前尚未由人工引种栽培。功能主治:清热燥湿,杀虫,利尿。用于热痢,便血,黄疸尿闭,赤白带下,阴肿阴痒,湿疹,湿疮,皮肤瘙痒,疥癣麻风;外治滴虫性阴道炎。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种克服现有治疗疣或宫颈癌的药物、手术治疗价格昂贵、易复发、治疗效果差的技术问题。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是,该中药复方制剂,该中药复方制剂包括丹参提取物有效成分丹酚酸b,含量≥5%;丹参酮IIA,含量≥0.2%;所述药复方制剂还包括有苦参提取物有效成分氧化苦参碱,含量≥2%以上;
所述药材丹参:苦参药材配比为, 9 ~1份:1 ~5份。
该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣或宫颈癌。
优选的:该中药复方制剂是外用制剂。
优选的:外用制剂是冻干粉或软膏剂或乳膏剂或糊剂或凝胶剂或栓剂或酊剂。
优选的:药复方制剂中制备方法包括以下步骤:
(1)粗提液制备:取经丹参、苦参按配方均匀配比成混合物装进蒸馏容器中,用溶剂1三次加热洗脱,收集有效部位A备用;
(2)清洗:将上述提取的有效部位A经过滤处理,然后依次用溶剂1清洗蒸馏容器,再蒸馏水清洗;
(3)提纯:将粗提液加入清洗后的蒸馏容器内,加入溶剂1进行蒸馏,按顺序由溶剂2、溶剂1进行提纯,最后得棕黄色流出液,回收流出液中的溶剂后,留下的水溶液经过冷冻干燥,得固体粉末,所述固体粉末有效成分丹酚酸b含量≥5%;丹参酮IIA含量≥0.2%,氧化苦参碱,含量≥2%;
所述溶剂1为50%~80%乙醇,溶剂2为正己烷或乙醚或石油醚。
优选的:在上述步骤(3)中,提纯后,增加回流或提纯步骤,然后再得棕黄色流出液,回流或提纯时间为2小时,回流或提纯次数3次,加醇量为10倍药材量。
优选的:溶剂1为乙醇,溶剂2为正己烷。
优选的:配方以丹参和苦参为主。
优选的:所述剂型为含醇凝胶或酊剂。
优选的:所述配方质量检测成分为丹酚酸b、丹参酮IIA、氧化苦参碱。
优选的:所述配方配比为丹参3:苦参1。
本发明的有益效果是:本发明的中药复方制剂包括丹参和苦参,其中丹酚酸b含量≥5%,丹参酮IIA含量≥0.2%,氧化苦参碱,含量≥2%;该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣或宫颈癌,丹参苦参二药合用,活血化瘀、消肿散结、清热解毒之功效大大提高,该中药复方制剂配方精简、成本低廉、适合大规模生产、使用方便、疗效突出;该中药复方制剂是质量体系稳定、有效成份明确。
本发明的制剂配方合理,能有效的达到治疗效果。
附图说明
图1是治疗好束某某疣患者图片;
图2是治疗好的王某某疣患者图片;
图3是治疗好的程某某疣患者图片;
图4是治疗好的洪某某疣患者图片;
图5是治疗好的林某某疣患者图片;
图6是治疗好的费某某疣患者图片;
图7是治疗好的谢某某疣患者图片;
图8 是本发明治疗案例1中肿瘤细胞杀伤时间依赖关系的折线图。
图9 是本发明复方制剂对宫颈癌细胞系(Hela)的杀伤作用实验细胞存活相对量与药物不同浓度分组的细胞存活率图表。
图10 是本发明复方制剂的最佳配比及阴性、阳性对照实验的图表。
图11 是本发明不同浓度复方制剂处理原代细胞细胞存活率的图表。
图12是本发明复方制剂对高致病hpv导致的子宫颈癌细胞hela杀伤力实验的细胞数量用t检验的图表。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解,下面将结合附图和实施例对本发明做进一步详细描述,该实施例仅用于本发明,并不对本发明的保护范围构成限定。
如图1-12所示,本发明是一种中药复方制剂,该中药复方制剂包括丹参提取物有效成分丹酚酸b,含量≥5%;丹参酮IIA,含量≥0.2%;所述药复方制剂还包括有苦参提取物有效成分氧化苦参碱,含量大于等于2%以上;所述药材丹参:苦参药材配比为, 9 ~1份:1 ~5份,该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣或宫颈癌,该中药复方制剂是外用制剂,所述外用制剂是冻干粉或软膏剂或乳膏剂或糊剂或凝胶剂或栓剂或酊剂。
一种中药复方制剂,所述药复方制剂中制备方法包括以下步骤:
(1)粗提液制备:取经丹参、苦参按配方均匀配比成混合物装进蒸馏容器中,用溶剂1三次加热洗脱,收集有效部位A备用;
(2)清洗:将上述提取的有效部位A经过滤处理,然后依次用溶剂1清洗蒸馏容器,再蒸馏水清洗;
(3)提纯:将粗提液加入清洗后的蒸馏容器内,加入溶剂1进行蒸馏,按顺序由溶剂2、溶剂1进行提纯,最后得棕黄色流出液,回收流出液中的溶剂后,留下的水溶液经过冷冻干燥,得固体粉末,所述固体粉末有效成分丹酚酸b含量≥5%;丹参酮IIA含量≥0.2%,氧化苦参碱,含量≥2%;
所述溶剂1为50%~80%乙醇,溶剂2为正己烷或乙醚或石油醚。
在上述步骤(3)中,提纯后,增加回流或提纯步骤,然后再得棕黄色流出液,回流或提纯时间为2小时,回流或提纯次数3次,加醇量为10倍药材量,在加热条件下进行醇沉纯化,使得产品的稳定性更高,成品外观良好。
所述溶剂1为乙醇,溶剂2为正己烷。
所述配方以丹参和苦参为主。
所述剂型为含醇凝胶或酊剂。
所述配方质量检测成分为丹酚酸b、丹参酮IIA、氧化苦参碱。
所述配方配比为丹参3:苦参1。
实施例1
该复方制剂制备方法包括以下步骤:
(1)粗提液制备:取经丹参、苦参按配方均匀配比成混合物装进蒸馏容器中,用溶剂1三次加热洗脱,收集有效部位A,该即为粗提液,备用;
(2)清洗步骤:将上述提取的有效部位A经过滤处理,然后依次用溶剂1清洗蒸馏容器,再蒸馏水清洗;
(3)提纯步骤:将粗提液加入清洗后的蒸馏容器内,加入溶剂1进行蒸馏,按顺序由溶剂2、溶剂1进行提纯,最后得棕黄色流出液,回收流出液中的溶剂后,留下的水溶液经过冷冻干燥,得固体粉末,所述固体粉末有效成分丹酚酸b含量为≥5%;丹参酮IIA含量为≥0.2%,氧化苦参碱,含量≥2%;
所述溶剂1为50%~80%乙醇,溶剂2为正己烷或乙醚或石油醚。
所述丹参3:所述苦参1;
该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣和宫颈癌。
疣是由人类乳头瘤病毒(HPV)引起的以细胞增生变性为主的一类皮肤浅表性良性赘生物,但因发现HPV感染后有一部分会导致恶性肿瘤(如皮肤癌、舌癌和宫颈癌等),而引起人们的重视。病毒存在于棘层细胞中,可促使细胞增生变性,形成疣状损害。
疣可通过直接或者间接接触传染,肛周、生殖器疣大多通过性接触传染,外伤或皮肤破损是HPV感染的重要因素。疣的病程与机体免疫有重要关系,免疫缺陷状态者,如肾移植、恶性淋巴瘤、慢性淋巴慢性淋巴细胞性白血病及红斑狼疮病人疣的发病率增高。
疣在各地均有流行,多见于儿童及青年,并在相对健康人群中长期存在。
治疗方法有:药物治疗、光动力学疗法、物理疗法、手术切除等。目前无特效药物治疗;各地介绍的土方土药也多,疗效大多不确切;不少患者采用深度破坏方法,但仍有50%以上者复发。
本发明上述技术方案中的药制剂制成含醇凝胶或酊剂,采取对赘疣体直接涂擦的方法,促进赘疣体消退,而达到痊愈的目的,操作便捷,无任何不良反应。
实验1:复方制剂对宫颈癌细胞系(Hela)的杀伤作用实验(本实验数据来自复旦大学上海医学院)
药物采用本发明的中药复方制剂;
细胞系Hela来自美国ATCC,本实验室液氮备存细胞株;
细胞培养依据常规,DMEM,10%胎牛血清(均来自Gibco,Invitrogen),5%CO2培养,细胞培养后达到90~95%覆盖度传代,按照1x105/孔,接种于96孔板,24小时后加入药物,处理一定时间后,测定;
细胞数量测定,CCK-8法,每100ul无血清DMEM加入10ul CCK-8试剂,37度避光培养1小时后,OD450读数(美国)依照说明书绘制标准曲线,计算相对细胞含量;
细胞数量用t检验,结果以(存活百分数±SD)%表示,评估杀伤作用。
每隔八小时加药一次,连续加药3次,计算IC50,IC90,细胞存活相对量与药物不同浓度分组的细胞存活率图表见图9。
如图9所示,计算出的IC50=0.0647mg/ml,IC90=0.163 mg/ml。
2.2 该复方制剂的最佳配比及阴性、阳性对照实验。
简要结果见图10(0.065mg/ml,每8hr加药一次),杀伤率见下表:
其中:DM为DMSO二甲基亚砜溶剂阴性空白对照;
#12为丹参1:苦参1配比;
#13为丹参3:苦参2配比;
#14为丹参3:苦参1配比;
#15为丹参4:苦参1配比;
GJ为阳性对照鬼臼毒素。
结果:#14丹参3:苦参1配比杀伤效果最好,杀伤率分别86.3%,杀伤率高于阳性对照鬼臼毒素与阴性对照二甲基亚砜。
实验2:该复方制剂对原代寻常疣的体外杀伤作用(本实验数据来自复旦大学上海医学院)
药物采用本发明的中药复方制剂;
寻常疣来自江苏省镇江市丹阳医院新鲜获取标本;
原代细胞处理成单细胞悬液方法暂略,培养依据常规,DMEM,10%胎牛血清(均来自Gibco,Invitrogen),5%CO2培养,细胞培养12~24小时后加药处理;
细胞数量测定,CCK-8法,每100ul无血清DMEM加入10ul CCK-8试剂,37度避光培养5小时后,OD450读数(美国)依照说明书绘制标准曲线,计算相对细胞含量;
细胞数量用t检验,结果以(存活百分数±SD)%表示,评估杀伤作用;
用不同浓度复方制剂处理原代细胞(每隔8hr,共3次),细胞存活率见图 11。
如图11可见0.1~1mg/ml提取物可以杀死原代细胞,可以考虑增加用药次数。
证明案例1:
复旦大学上海医学院针对该复方制剂对高致病hpv导致的子宫颈癌细胞hela杀伤力做了实验:
取本发明中药复方制剂,来自美国ATCC的细胞系Hela(本实验室液氮备存细胞株),依据常规培养细胞,DMEM,10%胎牛血清(均来自Gibco,Invitrogen),5%CO2培养,细胞培养后达到90~95%覆盖度传代,按照1x105/孔,接种于96孔板。24小时后加入药物。
处理一定时间后,采用CCK -8法测定细胞数量,(来自日本同仁化学)参照说明书。每100ul无血清DMEM加入10ul CCK-8试剂。37度避光培养1小时后,OD450读数(美国)依照说明书绘制标准曲线,计算相对细胞含量。
最后,细胞数量用t检验,结果以(存活百分数±SD)%表示,评估杀伤作用。
试验结果显示:1.肿瘤细胞杀伤剂量依赖关系(分别设置高中低1,0.1,0.01 mg/ml三个浓度【终浓度】,100ul培养液/孔,加入1ul 100X药物稀释液。100X药物稀释液以无菌双蒸水新鲜配置,-20度存放一周内使用)加入药物24小时后测定,结果见图12和下表所示:
从上表可以看出低中高浓度组对Hela细胞杀伤率分别是(38.1±5.8)%,(45.1±4.47)%和(61.8±10.3)%。
注:杀伤率=(1-存活率)x100%。
如图12所示,横轴表示药物不同浓度分组,1空白对照,2. 0.01mg/ml组 3. 0.1mg/ml组 4 1mg/ml组,纵轴表示细胞存活相对量。
肿瘤细胞杀伤时间依赖关系(以0.1mg/ml浓度,分别处理3,6,12,24,48,72小时)如图8所示,1~7分别是加药后0,3,6,12,24,48,72小时,1号折线代表空白对照即左起往上延伸线,2号折线代表加入药物处理即左起往下延伸线,从图8可以看出,药物处理24小时后达到较好的抑制效果。
证明案例2
治疗好的疣患者图片
如图1所示,束某某,43岁,某广告公司总经理,2005年2月手部患指状寻常疣,用冷冻方法、鸡眼膏、疣迪搽剂、干扰素等药物多方治疗无效后,2013年4月用该药物每日三次涂抹,治疗10天,痊愈。
如图2所示,王某某,7岁,某某小学一年级学生,2012年2月手部感染乳头瘤病毒,用冷冻方法、干扰素等药物多方治疗无效后,用该发明每日三次涂抹,治疗12天,痊愈。
如图3所示,程某某,女,27岁,职业为服务员,2011年8月脸部感染乳头瘤病毒,用干扰素等药物多方治疗无效,用该发明每日三次涂抹,治疗14天,痊愈。
如图4所示,洪某某,女,47岁,职业为收营员,2007年2颈部感染乳头瘤病毒,用干扰素等药物多方治疗无效,用该发明每日三次涂抹,治疗16天,痊愈。
如图5所示,林某某,女,34岁,职业为出纳,2008年6手部感染乳头瘤病毒,用干扰素等药物多方治疗无效,用该发明每日三次涂抹,治疗10天,痊愈。
如图6所示,费某某,女,30岁,职业为办公室文员,2010年12面部感染乳头瘤病毒,用干扰素等药物多方治疗无效,用该发明每日三次涂抹,治疗10天,痊愈。
如图7所示,谢某某,女,41,职业为物业保洁员,2012年2月肛门感染乳头瘤病毒,用干扰素等药物多方治疗无效,用该发明每日三次涂抹,治疗15天,痊愈。
Claims (10)
1.一种中药复方制剂,其特征在于:该中药复方制剂包括丹参提取物有效成分丹酚酸b,含量≥5%;丹参酮IIA,含量≥0.2%;所述药复方制剂还包括有苦参提取物有效成分氧化苦参碱,含量2%以上;
所述药材丹参:苦参药材配比为, 9 ~1份:1 ~5份,
该中药复方制剂在制造药物中的应用,该药物用于治疗疣或宫颈癌。
2.根据权利要求1所述一种中药复方制剂,其特征在于:该中药复方制剂是外用制剂。
3.根据权利要求2所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述外用制剂是冻干粉或软膏剂或乳膏剂或糊剂或凝胶剂或栓剂或酊剂。
4.根据权利要求1-3任一项所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述药复方制剂中制备方法包括以下步骤:
(1)粗提液制备:取经丹参、苦参按配方均匀配比成混合物装进蒸馏容器中,用溶剂1三次加热洗脱,收集有效部位A备用;
(2)清洗:将上述提取的有效部位A经过滤处理,然后依次用溶剂1清洗蒸馏容器,再蒸馏水清洗;
(3)提纯:将粗提液加入清洗后的蒸馏容器内,加入溶剂1进行蒸馏,按顺序由溶剂2、溶剂1进行提纯,最后得棕黄色流出液,回收流出液中的溶剂后,留下的水溶液经过冷冻干燥,得固体粉末,所述固体粉末有效成分丹酚酸b含量≥5%;丹参酮IIA含量≥0.2%,氧化苦参碱,含量≥2%;
所述溶剂1为50%~80%乙醇,溶剂2为正己烷或乙醚或石油醚。
5.根据权利要求4所述一种中药复方制剂,其特征在于:在上述步骤(3)中,提纯后,增加回流或提纯步骤,然后再得棕黄色流出液,回流或提纯时间为2小时,回流或提纯次数3次,加醇量为10倍药材量。
6.根据权利要求4所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述溶剂1为乙醇,溶剂2为正己烷。
7.根据权利要求1-3任一项所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述配方以丹参和苦参为主。
8.根据权利要求3所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述剂型为含醇凝胶或酊剂。
9.根据权利要求1所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述配方质量检测成分为丹酚酸b、丹参酮IIA、氧化苦参碱。
10.根据权利要求1所述一种中药复方制剂,其特征在于:所述配方配比为丹参3:苦参1。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151007 |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |