CN104940184A

CN104940184A - 一种银杏黄素类化合物的应用

Info

Publication number: CN104940184A
Application number: CN201410114936.7A
Authority: CN
Inventors: 吴彤; 沈龙海; 周海凤; 李默影; 乐心逸; 张乐乐; 颜仁杰; 陶峰; 张雪; 张美璇; 孙艳
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; China State Institute of Pharmaceutical Industry
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; China State Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date: 2014-03-25
Filing date: 2014-03-25
Publication date: 2015-09-30

Abstract

本发明公开了一种银杏黄素类化合物的应用。本发明公开的一种如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用；其中，R₁和R₂各自独立地为甲氧基或羟基。本发明发现了一种银杏黄素类化合物的全新用途，该化合物对于关节炎，特别是类风湿关节炎表现出很好的抑制活性，也可用于制备预防和/或治疗关节炎疾病的药物。

Description

一种银杏黄素类化合物的应用

技术领域

本发明涉及一种银杏黄素类化合物的应用。

背景技术

双黄酮类化合物，是由2分子黄酮或其衍生物聚合而成的二聚物，其组成单元可以是不同类型的黄酮单体化合物。银杏黄素是从银杏Ginkgo bilobaL.、柱冠粗榧（Cephalotaxus harringtonia(Forbes)Koch cv.Fastigiata Ohwi）、三尖杉（Cephalotaxus fortunei Hook.f）、朝鲜淫羊藿（Epimedium koreanumNakai.）、陆均松属（Dacrydium sp）、刺山柑（Capparis spinoa L.）等植物中分离得到的双黄酮化合物。

双黄酮类化合物尤其是银杏黄素在自然界中广泛存在，可以通过多重途径发挥抗炎、抗病毒、抗癌的功效。但目前还未见有关对类风湿关节炎作用相关报道。现有的文献（Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty Acids2001,65(5-6):281-286;Planta Med2002;68(4):316-321）报道银杏黄素具有抑制磷脂酶A2活性，并能抑制前炎症基因环氧合酶2(COX-2)和诱生型NO合成酶的表达；在慢性皮肤炎症动物模型上，银杏黄素能够明显减轻耳部肿胀、表皮增生及炎症细胞浸润等炎症反应，可有效降低PGE2水平，并可剂量相关地抑制IL-1β的表达，对COX-2表达的影响也较小，对细胞黏附分子(ICAM)-1及TNF-α表达的影响也很小（Biol Pharm Bull2006,29(5):1046～1049）。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用。本发明发现了一种银杏黄素类化合物的全新用途，该化合物对于关节炎，特别是类风湿关节炎表现出很好的抑制活性，也可用于制备预防和/或治疗关节炎疾病的药物。

本发明提供了一种如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用；

其中，R₁和R₂各自独立地为甲氧基或羟基。

较佳地，当R₁为羟基时，R₂为甲氧基，此时，所述的如式I所示的化合物为银杏黄素（如式Ia所示的化合物）；当R₁为甲氧基时，R₂为羟基，此时，所述的如式I所示的化合物为异银杏黄素（如式Ib所示的化合物）；

所述的关节炎较佳地为骨关节炎。所述的关节炎较佳地还可为类风湿关节炎。所述的骨关节炎的症状主要表现为关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等。所述的类风湿关节炎的症状主要表现为手和/或足小关节的多关节和/或对称性关节肿胀等。

所述的关节炎更佳地为类风湿骨关节炎。

所述的药物较佳地可为市售的所述的如式I所示的化合物单体纯品，也可以包括从天然植物中提取的所述的如式I所示的化合物的粗品或纯品，还可以包括以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物。其中，所述的以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物中的植物较佳地为银杏、柱冠粗榧、三尖杉、知母、朝鲜淫羊藿、陆均松属植物和刺山柑中的一种或多种。

所述的药物较佳地还可包含药用辅料。所述的药用辅料可为本领域常规适用的药物辅料，其目的为解决制剂的成型性、有效性、稳定性、安全性，较佳地为稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。

所述的药物可为任何适用的常规剂型，其中所含如式I所示的化合物的用量为治疗有效量以上，较佳地，所述的如式I所示的化合物的含量为90%～99%。所述药物的用量可根据具体情况选择，以药物活性成分计，一般为400～450mg/kg/天。所述的药物可以仅以如式I所示的化合物或者以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物作为唯一活性成分，也可还含有除如式I所示的化合物或者以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物以外的其它活性成分。所述的其它活性成分为对如式I所示的化合物或者以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物没有不良影响可联合适用的其他活性成分（如拮抗作用等），较佳地为具有类风湿关节炎的其他活性成分。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明发现了一种银杏黄素类化合物的全新用途，该化合物对于关节炎表现出很好的抑制活性，进一步有效调控关节炎等疾病，也可用于制备预防和/或治疗关节炎疾病的药物。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体—抗体融合蛋白（益赛普），上海中信国健药业有限公司生产，12.5mg/支，批号20080206。

弗氏不完全佐剂，美国Sigma公司，10ml/瓶，批号028K8616。

YLS-7A足趾容积测量仪，山东省医学科学院生产。

Wistar大鼠，雄性，BK公司提供，体重120g-150g。

银杏黄素样品制备：称取20kg银杏叶，置50L不锈钢桶中，以95%乙醇冷浸，浸泡三次，合并冷浸液，减压浓缩至适量，加适量水使醇浓度至50%，静置过夜。过滤，取上清液，浓缩，得粗提物I。称取粗提物I50g，加十倍量水，超声1h使溶解，过滤，取滤渣加适量95%EtOH，加热使溶解，继续加入水适量使醇浓度至50%，静置，过滤，取上清液，浓缩，得粗提取II。称取粗提取II20g，进行制备液相分离，条件为：柱温为室温，waters510泵，waters484检测器，global-C18柱子（由江苏环球色谱有限责任公司提供），检测波长270nm，流动相：甲醇:水=90:10，流速1.5×2.25mL/min3.40mL/min。收集保留时间为24.7min的组分，得到银杏黄素12.05g，纯度为98%。收集保留时间为21.8min的组分，得到异银杏黄素6.21g，纯度为98%。

其结构鉴定数据如下：

银杏黄素，黄色晶体,mp347-349℃;ESI-MS:565.18[M-H]^-;¹H-NMR(DMSO-d₆)δppm:3.77(3H,s,4′-OCH₃),3.81(3H,s,7-OCH₃),6.21(1H,s,H-6″),6.34(1H,s,H-6),6.68(1H,s,H-3″),6.70(2H,d,J=8.5Hz,H-3′′′,5′′′),6.77(1H,s,H-8),6.96(1H,s,H-3),7.32(1H,d,J=9.0Hz,H-5′),7.46(2H,d,J=8.5Hz,H-2′′′,6′′′),8.04(1H,d,J=2.0Hz,H-2′),8.15(1H,dd,J=9.0,2.0Hz,H-6′),12.92(1H,s,5-OH),13.04(1H,s,5″-OH);¹³C-NMR(DMSO-d₆)δppm:55.9(4′-OCH₃),56.1(7-OCH₃),92.7(C-8),98.2(C-6),99.5(C-6″),102.2(C-3″),103.7(C-3,C-10″),103.9(C-8″),104.8(C-10),111.6(C-5′),115.9(C-3′′′,C-5′′′),121.3(C-1′′′),122.2(C-1′),123.1(C-3′),127.8(C-2′,C-2′′′,C-6′′′),131.2(C-6′),154.5(C-9′′),157.4(C-9),160.6(C-4′,C-5′′),161.0(C-4′′′),161.2(C-5),161.7(C-7′′),163.9(C-2,C-2′′),165.2(C-7),181.4(C-4),182.0(C-4′′).

与文献报道一致（文献为：Konda,Y.,Sasaki,T.,Kagawa,H.,Takayanagi,H.,Harigaya,Y.,Sun,X.-L.,et al.(1995).Conformational analysis of C₃′-C₈connected biflavones.J Heterocyclic Chem,32(5),1531-1535）。

效果实施例1

1、试剂及方法

雌性Wistar大鼠，将预先已溶解在0.1mol/L醋酸并放置过夜的II型胶元（CII），以1:1比例慢慢滴加至弗氏不完全佐剂（ICFA）中，充分研磨，乳化成乳剂，使胶原溶液终浓度为1mg/mL，分别在每个大鼠背部皮内4点、尾尖皮内1点各注射0.1mL胶原溶液，总共0.5ml含CII0.5mg致敏，至第7天用同样方法加强注射免疫1次。在第16天时大部分大鼠已有一侧足关节开始肿胀，在出现肿胀症状后的第2天，即第18天，挑选足关节出现肿胀，足背面也开始红肿的致敏大鼠，随机分组，每组8只，分别为致炎对照组，给予相应溶剂（N.S），银杏黄素50mg/kg组；阳性药益赛普3mg/kg组；另设一组无胶元致炎剂的作为空白对照组。19天给药，开始之日为0天。

实验组每天口服给药，益赛普每周1、4天皮下给药。以足趾容积测量仪用排水法测量致炎开始后不同时间的足关节肿胀值，计算肿胀率及抑制率，数据以表示，统计学处理采用单因素方差分析。

计算公式：

E_n=致炎后不同时间的肿胀值；E₀=空白对照组肿胀值。

C=对照组的肿胀率%；T=治疗组的肿胀率%。

2、实验结果

表1银杏黄素对II型胶原所致大鼠类风湿关节炎作用

表中数值为肿胀率%，<>内为抑制率%，与模型组比较：*P<0.05；**P<0.01

实验数据可以看出：造模12天后致炎大鼠已开始体重减轻、消瘦、萎靡、尾尖部溃烂灶，大部分只留下半根尾巴，个别大鼠整根尾巴全烂掉，背部注射部位也都有溃烂灶，19天时部分大鼠的足关节已开始红肿，20天时大部分大鼠的足关节已红肿，部分大鼠对侧足也出现红肿。当症状开始后第2天（致炎后第21天）开始给药，给药3天后给药组均有不同程度的抑制足关节的肿胀程度，外观可见红肿逐渐消退，活动逐渐趋向正常，而模型对照组动物足关节依然肿胀、红肿，行动不便，有的双肢瘫痪，消瘦、萎靡，体重减轻。

显著性差异的比较：第7天、第10天、第14天二者与模型组比较均显示有显著性差异，其中第10天益赛普组与模型组比较具有极显著性差异（**P<0.01）；银杏黄素组与模型组比较具有显著性差异（*P<0.05），但益赛普组与银杏黄素组比较无显著性差异，结果表明银杏黄素和益赛普的疗效相当。第17天银杏黄素组与模型组比较显示有显著性差异，而益赛普组与模型组比较无显著性差异，表明第17天银杏黄素还有疗效，而益赛普没有疗效。综上所述，表1中的数据表明，银杏黄素样品具有较好的治疗效果，作用与阳性药益赛普相当，且有效作用时间较益赛普长。

Claims

1.一种如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用；

其中，R₁和R₂各自独立地为甲氧基或羟基。

2.如权利要求1所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，当R₁为羟基时，R₂为甲氧基，所述的如式I所示的化合物为银杏黄素；当R₁为甲氧基时，R₂为羟基，所述的如式I所示的化合物为异银杏黄素；

3.如权利要求1所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的关节炎为骨关节炎。

4.如权利要求1所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的关节炎为类风湿关节炎。

5.如权利要求3或4所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的关节炎为类风湿骨关节炎。

6.如权利要求1～5任一项所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的药物为市售的所述的如式I所示的化合物单体纯品，从天然植物中提取的所述的如式I所示的化合物的粗品或纯品，或者包括以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物。

7.如权利要求6所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物中的植物为银杏、柱冠粗榧、三尖杉、知母、朝鲜淫羊藿、陆均松属植物和刺山柑中的一种或多种。

8.如权利要求6所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的药物还包含药用辅料；所述的药用辅料为稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。

9.如权利要求6所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的药物中所述的如式I所示的化合物的含量为90%～99%；所述药物的用量以药物活性成分计，为400～450mg/kg/天。

10.如权利要求6所述的如式I所示的银杏黄素类化合物在制备预防和/或治疗关节炎药物中的应用，其特征在于，所述的药物仅以如式I所示的化合物或者以如式I所示的化合物为有效成份的植物提取物作为唯一活性成分。