CN104938339A

CN104938339A - 一种葡萄的组培快繁方法

Info

Publication number: CN104938339A
Application number: CN201510379647.4A
Authority: CN
Inventors: 赵桂珍
Original assignee: DAXIN COUNTY SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION INSTITUTE
Current assignee: DAXIN COUNTY SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION INSTITUTE
Priority date: 2015-06-29
Filing date: 2015-06-29
Publication date: 2015-09-30

Abstract

本发明公开了一种葡萄的组培快繁方法，属于农业种植技术领域。该方法是指选取旺盛生长的葡萄新蔓，剪取半木质化茎段作为外植体材料，分别进行外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养和驯化移栽；所述启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养20-24d得到葡萄小芽。本发明通过筛选组培过程中的外植体、培养基、培养温度、培养光照等条件，可达到提高生根率和移栽成活率的目的。

Description

一种葡萄的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及农业种植技术领域，尤其是一种葡萄的组培快繁方法。

背景技术

葡萄是一种应用广泛，经济价值极高的作物。在栽培方式上，呈现出由传统自根苗向嫁接苗逐渐过渡的发展趋势。常规繁殖多采用嫁接和扦插，但这两种繁殖方式易造成病毒积累，同时繁殖时间受季节限制。组织培养在葡萄快速繁殖中应用较为广泛，其优点不仅可以加快繁殖速度，而且还可以热处理结合茎尖培养，有效地消除病毒，获得无毒苗木。葡萄的组培快繁可有效解决葡萄繁殖的技术难题。

然而，要想达到快速繁殖的目的，必须考虑葡萄外植体、培养基、培养温度、培养光照强度等内外因素，其中培养基的选择占据重要位置。凝固剂(支持剂)——琼脂也具有较大的影响，若琼脂浓度过大，则会对根的伸长和生长产生阻碍作用；若琼脂浓度过低，则会出现无菌苗倒伏等不利因素。因此，有必要针对不同葡萄品种筛选适合组培快繁的培养条件，找到最佳的培养环境，加快苗木的快速繁殖。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种葡萄的组培快繁方法，通过筛选组培过程中的外植体、培养基、培养温度、培养光照等条件，达到提高生根率和成活率的目的。

本发明采用的技术方案如下：

一种葡萄的组培快繁方法，包括下述过程：选取旺盛生长的葡萄新蔓，剪取半木质化茎段作为外植体材料，分别进行外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养和驯化移栽；所述启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养20-24d得到葡萄小芽；其中所述培养基A是在NLN培养基加入IBA0.2-0.4mg·L^-1+6-BA1.0-1.2mg·L^-1+KT0.5-0.8mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.8g·L^-1，pH为5.5-5.8。

所述外植体消毒的方法为先用70％酒精将外植体打湿，用0.1％的升汞消毒6-10min，用无菌水反复冲洗5次，每次冲洗10-15min。

所述增殖培养的方法为：单芽萌发生长至长度为5-6cm时,剪切萌发的新梢,去除大叶片后剪成长5-15mm的单芽茎段,接种到培养基B上，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养28-32d；所述培养基B为MS+IBA 0.3-0.5mg·L^-1+KT 0.5-0.8mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.6g·L^-1，pH为5.5-5.8。

所述生根培养的方法为：选用增殖培养过程中生长健壮的组培苗,剪切长度在2.5-3.0cm并含有顶端生长点的新梢,接种在培养基C上，培养基C为1/2MS+6-BA0.5-0.8mg·L^-1+KT0.5-0.8mg·L^-1+IBA0.2-0.4mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.6g·L^-1，pH为5.5-5.8。

所述驯化移栽包括炼苗和移栽，所述炼苗是指将生根培养所得组培苗移至有自然光照的室温条件下,置放于散射光下炼苗5-7d后,移至直射光照射的地方继续炼苗5-7d，待组培苗的叶片颜色变浓绿、富有光泽时揭开封口膜,继续炼苗3-5d,并及时喷水防止叶片萎蔫。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：本发明以葡萄的半木质化茎段为外植体，在启动培养、增殖培养、生根培养等步骤中采用了适于葡萄各个成长阶段的组培培养基，使得葡萄生芽健壮、再生苗生长速度快、生根数量多、生根健壮，是一种葡萄快速繁殖的技术。本发明中育苗基质所用的原材料来源广泛，应用成本低；有利于葡萄苗工厂化、规模化、集约化生产。

具体实施方式

本发明以葡萄的半木质化茎段为外植体，消毒后进行启动培养、增殖培养、生根培养的技术，以下通过具体实施例对本发明作进一步详述。

实施例1

选取旺盛生长的葡萄新蔓，剪取半木质化茎段作为外植体材料，分别进行外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养和驯化移栽。

外植体消毒的方法为先用70％酒精将外植体打湿，用0.1％的升汞消毒6min，用无菌水反复冲洗5次，每次冲洗10min。

启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx的条件下，培养20d得到葡萄小芽；其中，本实施例所用培养基A是在NLN培养基加入IBA0.2mg·L^-1+6-BA1.0mg·L^-1+KT0.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1，pH为5.5。

增殖培养的方法为：单芽萌发生长至长度为5-6cm时,剪切萌发的新梢,去除大叶片后剪成长5-15mm的单芽茎段,接种到培养基B上，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养28d；培养基B为MS+IBA0.5mg·L^-1+KT 0.5mg·L^-1+蔗糖35g·L^-1+琼脂7.6g·L^-1，pH为5.5。

生根培养的方法为：选用增殖培养过程中生长健壮的组培苗,剪切长度在2.5-3.0cm并含有顶端生长点的新梢,接种在培养基C上，培养基C为1/2MS+6-BA0.5mg·L^-1+KT0.5mg·L^-1+IBA0.2mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1，pH为5.5。

驯化移栽包括炼苗和移栽，其中炼苗是将生根培养所得组培苗移至有自然光照的室温条件下,置放于散射光下炼苗5d后,移至直射光照射的地方继续炼苗7d，待组培苗的叶片颜色变浓绿、富有光泽时揭开封口膜,继续炼苗5d,并及时喷水防止叶片萎蔫。

实施例2

外植体消毒的方法为先用70％酒精将外植体打湿，用0.1％的升汞消毒6-10min，用无菌水反复冲洗5次，每次冲洗15min。

启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx的条件下，培养24d得到葡萄小芽；其中，本实施例所用培养基A是在NLN培养基加入IBA0.4mg·L^-1+6-BA1.2mg·L^-1+KT0.8mg·L^-1+蔗糖35g·L^-1+琼脂7.8g·L^-1，pH为5.5-5.8。

增殖培养的方法为：单芽萌发生长至长度为5-6cm时,剪切萌发的新梢,去除大叶片后剪成长5-15mm的单芽茎段,接种到培养基B上，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养32d；培养基B为MS+IBA 0.3mg·L^-1+KT 0.8mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1，pH为5.8。

生根培养的方法为：选用增殖培养过程中生长健壮的组培苗,剪切长度在2.5-3.0cm并含有顶端生长点的新梢,接种在培养基C上，培养基C为1/2MS+6-BA0.8mg·L^-1+KT0.8mg·L^-1+IBA0.4mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1，pH为5.8。

驯化移栽包括炼苗和移栽，其中炼苗是将生根培养所得组培苗移至有自然光照的室温条件下,置放于散射光下炼苗7d后,移至直射光照射的地方继续炼苗5d，待组培苗的叶片颜色变浓绿、富有光泽时揭开封口膜,继续炼苗3d,并及时喷水防止叶片萎蔫。

实施例3

外植体消毒的方法为先用70％酒精将外植体打湿，用0.1％的升汞消毒6-10min，用无菌水反复冲洗5次，每次冲洗10-15min。

启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx的条件下，培养22d得到葡萄小芽；其中，本实施例所用培养基A是在NLN培养基加入IBA0.3mg·L^-1+6-BA1.1mg·L^-1+KT0.6mg·L^-1+蔗糖32g·L^-1+琼脂7.0g·L^-1，pH为5.6。

增殖培养的方法为：单芽萌发生长至长度为5-6cm时,剪切萌发的新梢,去除大叶片后剪成长5-15mm的单芽茎段,接种到培养基B上，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养30d；培养基B为MS+IBA0.4mg·L^-1+KT0.6mg·L^-1+蔗糖32g·L^-1+琼脂7.0g·L^-1，pH为5.5-5.8。

生根培养的方法为：选用增殖培养过程中生长健壮的组培苗,剪切长度在2.5-3.0cm并含有顶端生长点的新梢,接种在培养基C上，培养基C为1/2MS+6-BA0.6mg·L^-1+KT0.6mg·L^-1+IBA0.3mg·L^-1+蔗糖32g·L^-1+琼脂7.0g·L^-1，pH为5.6。

驯化移栽包括炼苗和移栽，其中炼苗是将生根培养所得组培苗移至有自然光照的室温条件下,置放于散射光下炼苗6d后,移至直射光照射的地方继续炼苗6d，待组培苗的叶片颜色变浓绿、富有光泽时揭开封口膜,继续炼苗4d,并及时喷水防止叶片萎蔫。

经过实施例1-3培育出的葡萄幼苗生长健壮、颜色深绿，长势良好，每个根都比较健壮，能满足栽培的要求。本发明的方法所得葡萄的接种成活率90％以上，接种萌芽率72％以上，培养萌芽率均在73％以上，移栽成活率88％以上。

本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。

Claims

1.一种葡萄的组培快繁方法，其特征在于：选取旺盛生长的葡萄新蔓，剪取半木质化茎段作为外植体材料，分别进行外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养和驯化移栽；所述启动培养的方法为：将消毒后的外植体放到培养基A中进行培养，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养20-24d得到葡萄小芽；其中所述培养基A是在NLN培养基加入IBA0.2-0.4mg·L^-1+6-BA1.0-1.2mg·L^-1+KT0.5-0.8mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.8g·L^-1，pH为5.5-5.8。

2.根据权利要求1所述的一种葡萄的组培快繁方法，其特征在于：所述外植体消毒的方法为先用70％酒精将外植体打湿，用0.1％的升汞消毒6-10min，用无菌水反复冲洗5次，每次冲洗10-15min。

3.根据权利要求2所述的一种葡萄的组培快繁方法，其特征在于：所述增殖培养的方法为：单芽萌发生长至长度为5-6cm时,剪切萌发的新梢,去除大叶片后剪成长5-15mm的单芽茎段,接种到培养基B上，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h·d^-1，光照强度2000lx，培养28-32d；所述培养基B为MS+IBA0.3-0.5mg·L^-1+KT 0.5-0.8mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.6g·L^-1，pH为5.5-5.8。

4.根据权利要求3所述的一种葡萄的组培快繁方法，其特征在于：所述生根培养的方法为：选用增殖培养过程中生长健壮的组培苗,剪切长度在2.5-3.0cm并含有顶端生长点的新梢,接种在培养基C上，培养基C为1/2MS+6-BA0.5-0.8mg·L^-1+KT0.5-0.8mg·L^-1+IBA0.2-0.4mg·L^-1+蔗糖30-35g·L^-1+琼脂6.5-7.6g·L^-1，pH为5.5-5.8。

5.根据权利要求4所述的一种葡萄的组培快繁方法，其特征在于：所述驯化移栽包括炼苗和移栽，所述炼苗是指将生根培养所得组培苗移至有自然光照的室温条件下,置放于散射光下炼苗5-7d后,移至直射光照射的地方继续炼苗5-7d，待组培苗的叶片颜色变浓绿、富有光泽时揭开封口膜,继续炼苗3-5d,并及时喷水防止叶片萎蔫。