CN104937403B - 包括生物传感器和支撑物的装置 - Google Patents

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Abstract

利用生物传感器以使得能够快速电化学感应容器内一种或多种分析物的装置。该装置包含支撑物，其包含至少一个参照电极和至少一个感测电极。所述感测电极包含导电基材，其涂覆合适的电子受体的第一层，及随后的包含吸附的或在合适的带电聚合物基质或载体内的生物识别分子的第二层。

Description

包括生物传感器和支撑物的装置
本发明涉及用于一种或多种分析物的快速电化学感测的生物传感器装置，所述装置适合于用于生物学样品的容器或支持物，例如真空管(vacutube)。还提供了含有所述装置的试剂盒，以及它们在快速电化学感测生物学样品中的分析物中的应用。
背景技术
在例如诊断或监测生物学系统中的身体状况或生理状态中，需要更快速的方式，测量或监测生物学样品中的分析物的存在和浓度。
在医学领域，从人或动物受试者取样的点通常也是床旁，例如受试者处于医护人员在场，随时准备根据分析结果采取措施的情况。对于生物学样品，从它的收集点，也就是说床旁(如医生外科诊所或门诊部、医院床边、手术室)，运送到合适的实验室或专用的实验室区域所花费的时间相当于显著延迟。对于每个额外的处理和运输步骤需要几分钟或更长的时间，从任何给定的样品得到一个相关的结果或者读数之前，尤其是当涉及需要进一步的样品制备的分析技术如HPLC时，可以是几小时或更久的问题。
生物传感器是测定生物学样品中广泛的分析物的有价值的工具。典型的生物传感器包含具有生物识别分子(例如抗体或酶)的感测电极，连接到换能器，以便使其能够检测分析物与生物识别分子的结合。用于生物传感器的换能器包括：电化学、压电、光电、光纤、热敏电阻、二极管或声学装置。广泛的化合物和聚合物可用于使电子能够在合适的生物识别分子和导电基材之间转移。
在电聚合物基质中捕获生物识别分子使得可以用非常小和定制形状的感测元件构建生物传感器。例如WO 2003/087801，描述生物传感器和生产生物传感器的方法，所述生物传感器用于检测和监测嘌呤诸如腺苷。这些生物传感器包含基材，其包含铂或铂合金；在基材上形成的第一层，其包含吡咯的糖衍生物，以及在第一层上形成的第二层，其包含两亲吡咯以及在第二层内的一种或多种的酶。WO 2004/048603描述在导电基材上生产溶胶-凝胶的方法，以允许将，例如，酶捕获进入溶胶-凝胶基质，用于生物传感器的生产。这种微型传感器是微创，且已用于在中枢神经系统中检测神经递质的释放。微电极几乎都是由铂或铂合金丝制成的，只有最终大约2毫米Pt丝由拉出的玻璃毛细管保护，所述玻璃毛细管使用加热融合在所述丝上。合适的裸露的传感头直径为25至100微米。这些微传感器是脆弱的，尤其是传感头需要小心处理，以免损坏传感头。
并入本文的WO 2008/081193描述包含导电基材的生物传感器，具有导电基材上形成的包含钌紫(Ruthenium Purple)的第一层，在第一层上形成的第二层，所述第二层包含聚苯胺或其包含一个或多个非极性取代的衍生物，以及在第二层上形成的第三层，所述第三层包含捕获在基质中的一种或多种酶。使用钌紫，KFeRu(CN)6或Fe4[Ru(CN)6]3的优势在于它允许形成小型/微型生物传感器，例如直径大约50微米，长度0.1-2毫米的生物传感器。较好的微型生物传感器，如直径小于23微米，长度大约0.3-2毫米。这种生物传感器在检测分析物如嘌呤和其衍生物，特别是次黄嘌呤，特别有用。在操作中，这样的生物传感器稳定数小时。
发明内容
本发明现在提供适合于用于生物学样品的容器或支持物的生物传感器装置，以便可以使用电化学生物传感器探针进行样品分析物的快速或“床旁”测量。
因此，在第一方面，本发明提供用于利用生物传感器进行一种或多种分析物的快速电化学感测的装置，所述装置适合于用于接受生物学样品的容器或支持物，其中该装置包含用于支撑至少一个感测电极和至少一个参照电极的支撑物，所述或每个感测电极和所述或每个参照电极被支撑并从所述支撑物的样品接收表面突出，所述或每个感测电极包含导电基材，其包含铂、铂合金、金、金合金或碳，具有所述基材上的包含合适的电子受体的第一层，以及包含吸附的或在合适的带电聚合物基质或载体内的生物识别分子第二层。
在本发明的一个实施方式中，所述装置形成容器或支持物的闭合部的部分。在另一个实施方式中，所述装置形成用于真空管或真空容器(vacutainer)盖子的部分。
在进一步的实施方式中，所述支撑物可以包含2、3、4、5或6个感测电极。在另一个实施方式中，所述电子受体是钌紫(RP)。
在一个实施方式中，所述导电基材表面包含至少18开纯度的金。在进一步的实施方式中，所述导电基材表面包含铂:铱比(重量:重量)为90:10的铂合金。
在另一个实施方式中，所述电聚合物基质材料包含溶胶-凝胶，如包含含有硫醇的硅烷和/或双官能硅烷的溶胶-凝胶。在进一步的实施方式中，所述或每个感测电极在电子受体和电聚合物基质或载体之间具有中间层，其中，所述中间层包含聚苯胺或其包含一个或多个非极性取代基的衍生物。
在本发明的一个实施方式中，所述分析物是生物标记，其选自次黄嘌呤、腺苷、三磷酸腺苷、肌苷、乙酰胆碱、胆碱、葡萄糖、谷氨酸、乳酸和D-丝氨酸的一种或多种。在进一步的实施方式中，所述生物识别分子是抗体或酶。在另一个实施方式中，所述分析物提供用于诊断或监测目的的生化异常指标或健康生物体的生理状况指标。
在又一个实施方式中，所述支撑物包括多于一种类型的感测电极，用于分析多于一种的分析物。
在本发明的另一个方面，所述装置形成真空管或真空容器盖子的部分。在本发明的进一步方面，提供用于一种或多种分析物的检测的试剂盒。在一个实施方式中，所述试剂盒用于胎儿监护、中风监测或精神分裂症诊断。在进一步的实施方式中，该试剂盒可用于家庭或移动应用。
在进一步的实施方式中，所述装置、盖子或试剂盒可单次或一次性使用。本发明的另一个方面提供了用于检测一种或多种分析物的装置、盖子或试剂盒。在另一个实施方式中，所述装置、盖子或试剂盒可用于其中至少一种分析物在生物学样品中的半衰期小于10分钟的情况。
本发明的再一个方面提供制备根据前述任一权利要求所述的装置的方法，其包括以下步骤：
i.提供基材，其包含支撑物内的导电基材表面；
ii.沉积第一层，其包含合适的电子受体；
iii.沉积第二层，该第二层包含具有吸附在所述第二层上或包含在所述第二层中的一种或多种生物识别分子的电聚合物基质。
在一个实施方式中，提供了一种方法，其中在沉积包含电聚合物基质的第二层之前，包含合适的电子受体的第一层通过沉积聚苯胺层或包含聚苯胺衍生物的层而受到保护，所述聚苯胺衍生物包含一种或多种非极性取代。
该装置的感测电极和参照电极的布置是这样的，一旦支持物或容器和装置被组装并进行必要定位，就与样品接触以便可快速读取。
根据本发明的装置的主要优势在于能测量单个样品里的多种分析物。尤其有用的是，根据本发明的装置使用小型生物传感器，其可以用于非常小的样品或者小到滴或几微升的体积。
例如，当用于监测作为分娩期间的胎儿氧气水平指标的次黄嘌呤时，可以从仍然在子宫里的胎儿头皮上采集血滴，接着放到所述装置上测量。
根据本发明可被分析的生物材料包括体液和体液、细胞或颗粒物的混合物。例如，血液、血清、尿液、脑脊液、血浆、泪液、汗液及其它分泌物、适当的消化物等。
用于样品采集的支持物或容器类型将取决于分析类型和任何添加剂的类型，如果使用的话。本领域已知这样的容器，通常是试管，其真空或部分真空，所以当样品源连接到容器上，如通过针或虹吸，所述容器和生物体液之间的压力差导致体液流入容器。
当涉及小样品或小体积样品，倾斜或倒置组件以帮助电极与样品接触可能有必要或有利的。例如，当本发明的装置合并或安装在试管或容器的盖内，盖提供密封，这样允许管被倾斜或混合(如有必要)和倒置。在一个实施方式中，该装置进一步包括适合的或惰性的材料的垫片，提供密封或闭合部，并允许管或容器倾斜或倒置，以便保持样品。
对于血液或含有细胞或颗粒其它体液，收集容器可包括凝胶来分离各种组分。沉降或离心后的细胞或颗粒去到容器的底部，体液或血清在上方。例如在体液是血液时，可以密度介于血细胞和血清之间的凝胶，因而所述凝胶可用于分离两者。
本发明的再一个方面提供包括根据本发明的装置的盖子，可用于或适用于全球医疗专业人员和从业者所使用的常规血液取样管。
专为毛细血管或静脉采血设计的容器包括“Vacutube”(Becton Dickinson&Co的商标)或“Vacutainer”(商标)可得自Becton Dickinson,www.bd.com。其他供应商有International Scientific Supplies Ltd,www.intscientific.com。血液真空管的盖子是根据通过制造商的标准颜色编码的。例如，正常真空管是不透明盖子，用于细或娇嫩静脉的盖子是半透明的。管子可能含有抗凝血剂如肝素(绿盖)、EDTA(紫色或淡紫色盖)或柠檬酸钠(淡蓝色盖)。其他含有防腐剂。当一次填充多于一个的试管，试管需要遵循特定的顺序，使得针可以携带添加剂从一个试管到下一个，否则可能干扰一些分析物。所采集的典型的样品大小是大约5ml。也可以用为采集更小的样品如0.5ml的定制试管，根据本发明相应提供含有装置的更小的盖子。
本发明优选的实施方式是用于真空管的盖子。例如，样品采集后，可移除已有的真空管盖子，根据本发明的盖子取代，以允许进行快速生物传感器分析。
有快速或床旁结果的特别益处是清楚的，因为决定或诊断的时机是关键的，需要在几分钟内确定，而不是几小时或更长的时间。即使时机不是关键的，早期结果的可用性允许更有效地利用医疗专业人士的时间，因为可直接给出相关建议，从而避免查看结果的后续预约或拜访。
根据本发明可能的快速分析特别有利于检测、诊断和治疗许多身体状况，例如在中风中和在检测胎儿分娩中的缺氧中。此外，快速分析在分离的生物学样品中的分析物快速降解情况下非常有利，例如ATP、腺苷、肌苷或次黄嘌呤。
除了在医学和保健中应用，它在健康受试者中也是有用的，能够快速测量代谢物，如在动物，包括人类中受试期间的乳酸或葡萄糖水平。
多种分析物(如嘌呤腺苷、肌苷、次黄嘌呤)的测量是在检测和监测中风(脑缺氧和局部缺血)、轻微中风(短暂性缺血发作或TIA)中是特别有用的。这些分析物的测量对于不是中风的条件(例如，在创伤性脑损伤后的临床处理过程中)引起的脑缺氧/缺血也特别有用。
测量D-丝氨酸的能力在精神分裂症的诊断中特别有用。
测量和监测嘌呤如次黄嘌呤的含量的能力能够特别有价值。次黄嘌呤可提供在分娩过程中胎儿的氧气含量的指标，因此充当遇险预警系统。胎儿缺氧或氧气匮乏，会导致脑瘫或孩子的其他生物学缺陷。如果婴儿的大脑缺氧，助产士和医生可以在剖腹产手术或剖腹产术的必要性上作出更有根据的决定。每升血超过5uM次黄嘌呤的婴儿处于严重的胎儿缺氧的风险。15uM或更高的水平意味着主要的缺氧和升高的脑损伤风险。因此，监测次黄嘌呤水平可有助于防止不必要的或预防性的紧急剖腹产术。
当前，例行地，血液样品从分娩室或手术室采集，送到实验室或用于分析的分离的实验室空间，这引起获得结果的固有延迟。因此，本发明的特别的优点是在使生物传感器系统能够给在分娩室或手术室中的医生关于未出生的孩子是否面临缺氧的危险的几乎即时的数据。
本发明所使用的分析物和用于其检测的酶的例子包括：次黄嘌呤(黄嘌呤氧化酶)、乳酸(乳酸氧化酶或L-乳酸脱氢酶和谷丙转氨酶)、肌酸(肌酸酐酶和肌酸酶和肌氨酸氧化酶)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶)、胆固醇(胆固醇氧化酶)、半乳糖(半乳糖氧化酶)、谷氨酸(谷氨酸氧化酶或L-谷氨酸脱氢酶)、谷氨酰胺和谷氨酸(谷氨酰胺或谷氨酸氧化酶)、氢过氧化物(辣根过氧化物酶)、果糖(D-果糖脱氢酶)、乙醇(乙醇脱氢酶)、甲醇(甲醇脱氢酶)、尿素(脲酶)和尿酸(尿酸酶和辣根过氧化物酶)、D-氨基酸氧化酶、甘油-3-磷酸氧化酶、甘油激酶、腺苷脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶。
合适地，所述分析物是生物标志物。生物标志物提供用于诊断或监测目的生化异常指标，并且包括例如分析物嘌呤及其衍生物(例如次黄嘌呤)、腺苷、ATP、肌苷、乙酰胆碱、葡萄糖、谷氨酸盐、次黄嘌呤、乳酸和D-丝氨酸。
现在仅通过示例的方式，参照以下附图和实施例描述本发明，意图仅是说明，而不是对本发明的范围的限制。
附图说明
图1：示出用于容器的装置的示意性横截面图。
图2：示出连接到用于分析物检测的测量设备的示意性横截面图。
图3：示出聚氨酯模制盖的图片。
发明详述
参照图1，该装置包含至少一个参照电极(1)和至少一个感测电极(2)。该装置可以包含2、3、4、5或6个感测电极。在本发明的一个实施方式中，该装置包含四个感测电极。在进一步的实施方式中，该装置包含四个感测电极和两个参照电极。
电极整合进支撑物(3)和突起到容器的内部(4)。本领域技术人员会理解，电极的突出部分进容器足以使它们与容器内的任何生物学样品接触。在一个实施方式中，电极的突出部分的范围是10-150微米。在进一步的实施方式中，突出部分大约100微米。还会理解的是，容器可以倒置或倾斜，以使得能形成此接触，因此该装置可密封容器，以使得能够倒置并保留内容物。在本发明的一个实施方式中，所述装置形成容器盖子的部分。在进一步的实施方式中，所述装置形成了真空管或真空容器的盖子的部分。在另一个实施方式中，所述装置是真空管的盖子。
每个感测电极(2)包含导电基材，其可由铂、铂合金、金、金合金或碳制成。在一个实施方式中所述基材包含金丝。在本发明的另一个实施方式中，所述基材包含至少18开纯度的金。在进一步的实施方式中，所述基材包含铂:铱比(重量:重量)为90:10的铂合金。
此基材涂覆第一层(5)，所述第一层包含电子受体，以及第二层(7)，所述第二层包含吸附的或在合适的电聚合物基质或载体内的生物识别分子。在本发明的一个实施方式中，用于所述第一层的电子受体是钌紫，KFeRu(CN)6或Fe4[Ru(CN)6]3。在进一步的实施方式中，所述电子受体是钌紫，切所述电聚合物或载体包含溶胶-凝胶。在进一步的实施方式中，所述溶胶-凝胶含一种或多种硅基化合物。在另一个实施方式中，所述溶胶-凝胶包含含有硫醇的硅烷和/或双官能硅烷。
生物识别分子可以是，例如，抗体或酶。合适的抗体或酶包括那些识别生物标志物，例如次黄嘌呤、腺苷、三磷酸腺苷、肌苷、乙酰胆碱、胆碱、葡萄糖、谷氨酸、乳酸和D-丝氨酸的抗体或酶。嘌呤，如腺苷、肌苷和次黄嘌呤是指示中风或缺血的合适的生物标志物。不同嘌呤加谷氨酸和/或D-丝氨酸的组合可用于尝试区分不同来源的缺血。
本领域技术人员会理解，所述装置适用于电化学感测广泛半衰期的分析物，包括那些在生物学样品中半衰期短的分析物，例如ATP、腺苷、肌苷或次黄嘌呤。在生物学样品中短半衰期的分析物包括那些具有小于5分钟，例如小于2分钟，小于1分钟，小于30秒以及小于15秒的半衰期的分析物。
可在包含电子受体的第一层(5)以及包含吸附的或在合适的电基质或载体内的生物识别分子的第二层(7)之间使用附加层(6)。附加层(6)可以起到保护和保存电子受体的作用。在一个实施方式中，所述附加层包含聚苯胺。在进一步的实施方式中，所述附加层是包含一个或多个非极性取代的聚苯胺衍生物。
应当指出的是，所述电极和涂覆电极的所述层的相对大小如图1和图2所示，仅为便于说明。
可用多于一个感测电极以允许同时测量多于一种分析物，并整合没有酶来检测特定分析物的控制传感器，从而提高了数据的质量。会理解的是，为了能同时检测多于一种分析物，所述感测电极可包含不同的生物识别分子。
所述至少一个参照电极(1)由导电基材制成。所述导电基材可被涂覆以形成层(8)。在一个实施方式中，所述参照电极包含银丝。在进一步的实施方式中，所述参照电极是涂覆有氯化银的银丝。所述至少一个参照电极(1)和至少一个感测电极(2)可含不同的导电基材。在本发明的一个实施方式中，所述至少一个参照电极含银丝和所述至少一个感测电极含金丝。在本发明的一个实施方式中，金属丝的直径范围150-250微米。在进一步的实施方式中，金属丝直径大约200微米。电极被连接到支撑腿(9)，其嵌入所述支撑物(3)内。本领域技术人员可理解支撑腿由导电基材制成。在本发明的一个实施方式的支撑腿由镍合金制成。
支撑物(3)包含惰性且绝缘的材料。在本发明的一个实施方式的所述盖包含聚氨酯树脂。
参照图2，所述至少一个参照电极(1)和所述至少一个感测电极(2)由所述支撑物(3)定位，以突出到容器(4)的内部，以及与生物学样品(11)接触。所述支撑物还可以使电极(1，2)进行电连接，经由支承腿(9)到对接站(12)，后者又依次通过导线(13)，连接电极与测量装置(14)。
每个感测电极连接到对接站上的一个通道。进一步的通道对于参照电极是需要的。每个通道连接到测量装置(14)。在本发明的一个实施方式中，测量装置是可以测量在pA至nA的范围的电流的恒电势器。本领域技术人员会理解，所述恒电势器应该能够运行至少两个电极。
实施例
形成具有集成的感测电极和参照电极的盖
(A)模制聚氨酯盖
聚氨酯盖的例子如图3所示。此图所示，金丝镶齿腿(21)，银丝镶齿腿(22)，聚氨酯盖(23)和支撑套管(24)。
金丝附着于四条镍合金腿(长度2.5厘米)和银丝附着于两条镍合金腿(长度2.5厘米)。六条腿被放置在支撑套管(24)中，其使所述腿对准模具底部的孔。模具限定了盖的形状，并且每侧有三个孔对应电极的预定位置。腿被定位，以便每边有一个银丝镶齿腿(22)和两个金丝镶齿腿(21)，中央位置是银丝镶齿电极。
快速铸造聚氨酯树脂(约1.5ml)用注射器注入模具。然后，在室温15分钟后将盖子(23)从模具中取出，然后固化一天。
(B)氯化银电沉积到所述银丝电极的表面上。
盖子连接到一个多插座板上，然后浸入含有氯化银的盐酸(1M)的电化学浴中。电化学浴装有铂箔对电极和银/氯化银参照电极。10毫安/平方厘米的持续恒定电流施加到阳极电镀氯化银的银丝
(C)钌紫电沉积在金丝电极的表面
将连接到一个多插座板上的盖子浸入装有铂箔对电极和银/氯化银参照电极的电化学浴中，所述电化学浴填充有FeCl3(1mM)、KCl(40mM,pH 2)、K4Ru(CN)6(1mM)和KCl(40mM,pH 2)的混合物。与金丝相连的通道进行循环伏安法扫描，以50毫伏/秒的速度，从-0.2到+0.7伏，四十个循环。所得的钌紫修饰的盖子在80度加热12小时。盖子在RuCl3溶液中(1mM，含1mM KCl,pH2)进一步进行循环伏安法扫描(2-4个循环，-0.2到+0.7伏，50毫伏/秒)，以进一步稳定金丝上的钌紫膜。
(D)聚苯胺层的形成
在使用聚苯胺层的例子中，钌紫修饰的金丝浸入含10mM苯胺加0.5M硫酸和0.5M氯化钾的电化学浴中，接着进行电化学循环，-0.2到+1.3伏之间，7个循环，100毫伏/秒。
(E)溶胶凝胶层的电沉积
多插座板被转移到多层盘上，其以有或没有所需的酶的预水解的硅烷混合物填充。盖子的每侧中央的涂覆有氯化银的银丝用作参照电机和对电极，用于钌紫修饰的金丝上凝胶形成。优选地，溶胶凝胶层通过电沉积(在-0.9到+1.3伏或6微安，10-30秒)获得。
具有不同感测电极的盖的形成
具有多于一种类型的生物传感器的盖的形成，可以通过在溶胶凝胶层的电化学沉积过程中，控制到每个感测电极的电路进行。金丝与多插座板的不同通道相连和受其控制。可以接通每个通道，在特定的金丝的表面上形成生物传感器。因此，可以使用一系列用不同的酶预水解的硅烷的混合物，并通过每个电路依次施加适当的电势或电流来制备不同类型的生物传感器。

Claims (21)

1.用于利用生物传感器进行一种或多种分析物的快速电化学感测的装置，所述装置适合于用于接受生物学样品的容器或支持物，
其中该装置包含用于支撑至少一个感测电极和至少一个参照电极的支撑物，
所述至少一个感测电极和所述至少一个参照电极被支撑并从支撑物的样品接收表面突出，
所述至少一个感测电极包含导电基材，所述导电基质包含铂、铂合金、金、金合金或碳，具有所述基材上的包含合适电子受体的第一层，以及
包含吸附的或在合适的电聚合物基质或载体内的生物识别分子的第二层，
其中所述装置形成用于血液取样管的闭合部的部分。
2.权利要求1的装置，其中所述装置形成用于容器或支持物的闭合部的部分，并且其中所述装置形成用于真空管或真空容器的盖子的部分。
3.权利要求1或2的装置，其中支撑物包含2、3、4、5或6个感测电极。
4.权利要求1或2的装置，其中所述电子受体是钌紫。
5.权利要求1或2的装置，其中所述导电基材表面包含至少18开纯度的金。
6.权利要求1或2的装置，其中所述导电基材表面包含铂:铱比(重量:重量)为90:10的铂合金。
7.权利要求1或2的装置，其中所述电聚合物基质材料包含溶胶-凝胶，如包含含有硫醇的硅烷和/或双官能硅烷的溶胶-凝胶。
8.权利要求1或2的装置，其中所述至少一个感测电极在电子受体和电聚合物基质或载体之间具有中间层，其中，所述中间层包含聚苯胺或其包含一个或多个非极性取代的衍生物。
9.权利要求1或2的装置，其中所述分析物是生物标记，其选自次黄嘌呤、腺苷、ATP、肌苷、乙酰胆碱、胆碱、葡萄糖、谷氨酸、乳酸和D-丝氨酸中的一种或多种。
10.权利要求1或2的装置，其中所述生物识别分子是抗体或酶。
11.权利要求1或2的装置，其中所述分析物提供用于诊断或监测目的的生化异常指标或健康生物体的生理状况指标。
12.权利要求1或2的装置，其中所述支撑物包含多于一种类型的感测电极，用于分析多于一种的分析物。
13.真空管或真空容器的盖子，其包含前述权利要求任一项的装置。
14.用于检测一种或多种分析物的试剂盒，其包含前述权利要求任一或多项的装置或权利要求13的盖子。
15.权利要求14的试剂盒，用于胎儿监护、中风监测或精神分裂症诊断。
16.权利要求14或15的试剂盒，用于家庭或移动应用。
17.权利要求1或2的装置，权利要求13的盖子或权利要求14或15的试剂盒，为单次或一次性使用。
18.权利要求1至12任一项的装置，权利要求13的盖子或权利要求14至16任一项的试剂盒在检测一种或多种分析物中的用途。
19.权利要求18的装置、盖子或试剂盒的用途，其中至少一种分析物在生物学样品中的半衰期小于10分钟。
20.制备前述权利要求任一项的装置的方法，其包括以下步骤：
i).提供基材，其包含支撑物内的导电基材表面；
ii).沉积第一层，其包含合适的电子受体；
iii).沉积第二层，所述第二层包含电聚合物基质，所述电聚合物基质具有吸附在所述第二层上或包含在所述第二层中的一种或多种生物识别分子。
21.权利要求20的方法，其中在沉积包含电聚合物基质的第二层之前，包含合适的电子受体的第一层通过沉积聚苯胺层或包含聚苯胺衍生物的层而受到保护，所述聚苯胺衍生物包含一种或多种非极性取代。
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