CN104922214A - 川楝子有效部位的应用及其制备方法 - Google Patents
川楝子有效部位的应用及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104922214A CN104922214A CN201510305677.0A CN201510305677A CN104922214A CN 104922214 A CN104922214 A CN 104922214A CN 201510305677 A CN201510305677 A CN 201510305677A CN 104922214 A CN104922214 A CN 104922214A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fructus toosendan
- total saponins
- extract
- preparation
- extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 150000007949 saponins Chemical group 0.000 claims abstract description 54
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 53
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 52
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims abstract description 52
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 44
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 44
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 27
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 14
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 5
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 abstract description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 abstract 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 abstract 1
- 230000001599 osteoclastic effect Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 18
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 18
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 description 13
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 description 13
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 7
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 7
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 7
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 6
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000158728 Meliaceae Species 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 2
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 2
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 101100004286 Caenorhabditis elegans best-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 1
- 208000019790 abdominal distention Diseases 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000146 antalgic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002420 orchard Substances 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000009705 sanhuang Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种川楝子有效部位及其制备方法和应用，属于中药提取及应用领域。其制备关键在于包括以下步骤：取川楝子药材粗粉，70%乙醇回流提取（料液比为1︰6），第一次4h，第二次和第三次2h，共提取三次，滤液浓缩成膏并用真空干燥为粉末状，得到川楝子提取物，提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经D101大孔吸附树脂柱，大孔树脂柱先用40%乙醇洗脱，再用95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位。本发明的川楝子总皂苷部位提取物，其中总皂苷含量可达50%以上。本发明得到的川楝子总皂苷部位对破骨细胞活性具有抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取及应用领域，特别涉及川楝子有效部位及其制备方法和应用。
背景技术
骨质疏松症是以组织微细结构破坏，骨量减少，骨脆性增加，而导致骨折的危险性增加为特征的一种系统性、全身性的骨骼疾病。骨组织是由细胞以及细胞外基质组成，其中细胞成分包括破骨细胞、成骨细胞、骨细胞等，成骨细胞介导的骨形成与破骨细胞介导的骨吸收两者间保持动态平衡是骨活动保持正常状态的基础，当骨吸收作用大于骨形成作用时，即导致骨量减少，产生骨质疏松症。从传统中药中寻找天然的、副作用小的破骨细胞活性抑制剂具有广泛的前景。
川楝子（Fuctus Toosendan）为楝科植物川楝（Melia toosendan Sib.et Zucc.）的干燥成熟果实，主产于四川、贵州、湖北、湖南、河南及甘肃南部等。具有舒肝行气止痛，驱虫的作用；传统用于胸胁、腕腹胀痛，疝痛，虫积腹痛等。主要含有挥发油类、黄酮类、萜类、酚酸类及简单芳香族类、脂肪酸及其衍生物类、甾体类等成分，具有驱虫、抗癌、抗炎镇痛等药理作用。
《药品注册管理办法》中药、天然药物注册分类5所述“未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂”中的有效部位是指从植物、矿物、动物等药材中提取的一类或数类化学成分的含量占总提取物的50%以上。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制破骨细胞活性作用的川楝子有效部位。本发明提供的川楝子有效部位为川楝子总皂苷，并进一步给出了川楝子总皂苷有效部位的制备方法，含量不低于50%，本发明所述的川楝子有效部位，是从我国产的楝科植物川楝的干燥成熟果实分离纯化得到的总皂苷有效部位提取物。
本发明是这样实现的：
川楝子总皂苷有效部位用于抑制破骨细胞活性的应用。
川楝子有效部位的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）预处理：将川楝子药材烘干后粉碎过筛，即得川楝子粗粉；（2）提取：取川楝子药材粗粉，60-80%乙醇回流提取，第一次2-5h，第二次和第三次1-3h，共提取三次，滤液浓缩成膏并干燥，即得川楝子提取物粉末；（3）纯化：川楝子提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经大孔吸附树脂柱，先用20-60%乙醇洗脱，再用60-95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位粉末。
所述大孔树脂为非极性大孔树脂。
所述非极性大孔树脂为D101型大孔树脂。
本发明的有益效果：
本发明制备的川楝子总皂苷有效部位能够有效的抑制破骨细胞活性，首次得到了川楝子总皂苷有效部位在抑制破骨细胞活性方面的应用。
D101型大孔吸附树脂是苯乙烯型非极性共聚体，对于不带极性或弱极性的化合物，普遍吸附能力强，特别是对皂苷类、黄酮类的分离纯化效果极佳，本发明采用D101大孔树脂分离纯化获得川楝子抑制破骨细胞活性的总皂苷有效部位，含量＞50%，符合《药品注册管理办法》规定，具有如下突出优点：稳定性高、吸附速度快、吸附容量大、操作简便、选择性好、解吸条件温和、再生处理方便、可反复使用、成本较低、综合经济效益显著等。
附图说明
图1为优选比色条件时5%香草醛-冰醋酸的用量对吸光值的影响图；
图2为优选比色条件时高氯酸的用量对吸光值的影响图；
图3为优选比色条件时显色温度对吸光值的影响图；
图4为优选比色条件时显色时间对吸光值的影响图；
图5为对照品人参皂苷的标准曲线图。
具体实施方式
材料及仪器
材料
川楝子，购于贵阳市花果园药材市场，由贵阳中医学院何顺志教授鉴定为楝科植物川楝Melia toosendan Sieb.et Zucc.的干燥成熟果实；人参皂苷标准品A0234，购于中药固体制剂制造技术国家工程研究中心；D101大孔吸附树脂，购于青岛海洋化工有限公司；AB-8大孔吸附树脂，购于安徽三星树脂科技有限公司。
仪器
分析天平 FA2004，上海良平仪器仪表有限公司；超声波发生器 DS-205A，宁波市海曙达盛超声波仪器厂；恒温水浴锅，海梅香仪器有限公司；UV-1801分光光度计，北京北分瑞利分析仪器有限责任公司；振荡器WSZ-200A，上海一恒科学仪器有限公司；C型玻璃仪器气流烘干器，郑州长城科工贸有限公司；DZF-6020型真空干燥箱，上海博讯实业有限公司；DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司。
川楝子总皂苷的富集
最大吸收波长的选择
对照品溶液的配制
精确称取人参皂苷标准品5.1mg置于50mL的容量瓶中，用甲醇超声溶解并定容至刻度，摇匀，得到 0.102mg/mL的对照品溶液。
测定波长的选择
精密量取人参皂苷标准品溶液 1.5 mL，水浴挥干甲醇后，加入5%香草醛- 冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，60℃水浴加热15min，冰水浴冷却至室温后加冰醋酸 5.0mL，随行做空白试剂作为对照，用紫外分光光度计进行薄层扫描，确定最大吸收波长。
对人参皂苷标准溶液进行显色后，在400 nm-600 nm波长范围内进行扫描，确定550nm作为测定波长。
比色条件的优选
5%香草醛- 冰醋酸用量的优选
取人参皂苷对照品溶液1 mL，5份，水浴蒸干甲醇后，分别加入5%香草醛- 冰醋酸溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，加入高氯酸 0.8mL，充分混匀，密塞，60℃水浴 15min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀后，于550nrn波长下，比色测定吸光度，确定最佳5%香草醛- 冰醋酸的用量；测定结果如图1所示，0.2 mL的5%香草醛- 冰醋酸为合适的用量。
高氯酸用量的优选
取人参皂苷对照品溶液1 mL，5份，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛- 冰醋酸溶液 0.2mL，分别加入高氯酸0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，充分混匀，密塞，60℃水浴 15min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳高氯酸用量；测定结果如图2所示，0.8 mL高氯酸为合适的用量。
显色温度的选择
精密量取人参皂苷对照品溶液1.0mL，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛- 冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃下水浴反应 15min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳显色温度；测定结果如图3所示，60℃为最佳显色时间。
显色时间的选择
精密量取人参皂苷对照品溶液1mL，水浴蒸干甲醇后，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2mL和 0.8mL高氯酸，60℃水浴反应 5min、10min、15min、20 min、25min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳显色时间；测定结果如图4所示，15min为最佳显色时间。
标准曲线的绘制
精密量取人参皂苷的标准溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL，水浴蒸干甲醇，冷却后，加入5%香草醛- 冰醋酸溶液 0.2mL和高氯酸0.8mL，充分混匀，密塞，60℃水浴15min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光值，以吸光度度值为纵坐标，人参皂苷标准溶液的浓度（mg/L)为横坐标，绘制标准曲线，得出回归方程和R2，标准曲线如图5所示，在8.5～51.0mg/L 的浓度范围内，吸光度值与总皂苷浓度呈良好的线性关系，回归方程为y=0.0204x－0.0144，R2=0.9995。
川楝子总皂苷的含量测定
供试品溶液的制备
取川楝子药材粗粉10g，70%乙醇回流提取（料液比为1:6），第一次4h，第二次和第三次2h，共提 取三次，滤液浓缩成膏并干燥，得到川楝子提取物。称取川楝子提取物0.10g，精密称定后，用甲醇溶解并定容至25.0mL，静置3h，滤过，精密量取续滤液5.0mL，置50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
川楝子总皂苷的含量测定
精密量取供试品溶液2.0mL置于具塞试管中，水浴蒸干甲醇，冷却后，加入5%香草醛- 冰醋酸溶液 0.2mL和高氯酸0.8mL，充分混匀，密塞，60℃水浴15min，冰水浴冷却至室温加冰醋酸 5.0mL，摇匀，以不加供试品溶液的空白试剂作为对照，在550nm波长下，测定吸光值，并对照标准曲线，计算川楝子中皂苷的含量。
测定方法的评价
精密度实验
精密量取同一供试品溶液2.0mL 6份，按照“2.3”项下标准曲线测定方法进行显色，测定其在550nm波长下的吸光值，测定结果如表1所示，RSD为0.16%，说明该方法精密度良好。
稳定性实验
精密量取对照品溶液1.0mL，按照“2.3”项下标准曲线测定方法进行显色，于550nm处每隔10min测定一次吸光度值，测定结果如表2所示，RSD为1.60%，说明该方法稳定性良好。
表2稳定性实验测定结果
重现性实验
精密称取川楝子提取物样品5份，按照2.4.1项下方法制备供试品溶液并平行测定吸光度，根据线性回归方程，计算总皂苷含量，测定结果如表3所示，RSD为1.71%，说明该方法重现性良好。
加样回收率实验
精密称取已知含量的川楝子提取物13.7mg，置于50mL容量瓶中，加入 2.5mg的人参皂苷标准品，加甲醇适量，超声溶解后，再用甲醇定容至刻度，摇匀，静置3h，用45μm微孔滤膜过滤，收集续滤液即得供试品溶液。精密量取供试品溶液2mL，量取6份，分别置于具塞试管中，按标准曲线绘制方法操作，测定吸光度值，用标准曲线回归方程计算川楝子提取物中的皂苷含量，计算加样回收率。结果如表4所示，计算公式如下：
大孔吸附树脂对川楝子总皂苷的富集纯化
树脂的选择
选择AB-8和D101两种大孔树脂为研究对象，考察其对川楝子总皂苷的吸附与解析能力。
大孔树脂对川楝子皂苷的吸附率与解析率试验
树脂对皂苷的吸附率测定
选择D101和AB-8两种树脂进行吸附率的测定。测定方法为：准确称取经预处理的干树脂10.0g装入具塞的磨口三角瓶中，加入澄清的皂苷水溶液100mL并置电动振荡器上振荡24h，过滤，取续滤液测定剩余皂苷浓度，按（1）式计算各树脂室温下的吸附量Q (mg/g)：
Q=（C0－Cv）V / W （1）
式中Q：吸附量，mg/g；C0：初始浓度，mg/mL；Cv：剩余浓度，mg/mL；V：溶液体积，L；W：树脂质量，g。
假设吸附前后溶液体积不变，可以由（2）式计算吸附率（%），测定结果如表5所示。
吸附率（%）=（C0－Cv）/ C0×100% （2）
由表5看出，D101树脂对川楝子总皂苷的吸附率较AB-8树脂大，为65.60%。
树脂对皂苷解吸率的测定
取按照“2.6.2.1”项下吸附饱和的树脂，加入95%的乙醇 300mL，浸泡振摇24h，过滤，取续滤液测定皂苷浓度，根据皂苷解吸量，可以由（3）式计算解吸率(%)，测定结果如表6所示。
解析率=CV / M×100% （3）
式中C：解吸后供试品浓度，mg/mL；V：解吸液体积，L；M：解吸前树脂的吸附量，mg（即为（1）式中Q×10）。
从表6看出，D101树脂对川楝子总皂苷的解析率较AB-8树脂高，达75.0%。 因此，综合考虑吸附率与解析率，选择D101树脂作为分离川楝子总皂苷的最佳分离树脂。
大孔树脂对川楝子皂苷的富集
取川楝子提取物，先用石油醚萃取，除去脂溶性成分后，再用正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用蒸馏水分散成100ml，湿法上柱，待样品完全进入柱床后，关闭柱子底端阀门，饱和吸附1-2h，然后用3Bv蒸馏水洗脱，换20%-95%的乙醇溶剂进行梯度洗脱，分别收集醇洗液，把收集到的5个组分减压浓缩，干燥，然后分别精密称取各部分样品适量，按供试品制备方法及标准曲线制作方法测定得到的各个样品的吸光度值，按标准曲线，计算出各个样品的皂苷含量，结果如表7所示；用40%乙醇作为洗脱剂时，可以去除大部分大极性物质，因此，另取一部分正丁醇层样品，过D101大孔树脂柱，柱子选择40%乙醇和95%乙醇作为洗脱剂，收集两部分的洗脱液减压浓缩，干燥，测定两个样品的皂苷含量，结果如表8所示。
表8不同浓度乙醇二次洗脱液中皂苷含量
| 乙醇浓度 | 组分量（g） | 吸光度A | 含量（%） |
| 40% | 0.0029 | 0.221 | 23.87 |
| 95% | 0.0025 | 0.499 | 60.40 |
本发明采用人参皂苷为对照品测定川楝子总皂苷的含量。通过考察大孔吸附树脂D101和AB-8对川楝子总皂苷的吸附率与解吸率，发现大孔吸附树脂D101更适用于川楝子总皂苷的分离纯化，具体路线为：取川楝子药材粗粉，70%乙醇回流提取（料液比为1︰6），第一次4h，第二次和第三次2h，共提取三次，滤液浓缩成膏并用真空干燥为粉末状，得到川楝子提取物，提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经D101大孔吸附树脂柱，大孔树脂柱先用洗脱两次，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位。
通过优化后是条件进行下列实施例：
本发明的实施例1：取川楝子药材粗粉2.0kg，70%乙醇回流提取（料液比为1:6），第一次4h，第二次和第三次2h，共提取三次，滤液浓缩成膏并干燥，即得川楝子提取物。
本发明的实施例2：取川楝子提取物100g，依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经D101大孔吸附树脂柱，先用40%乙醇洗脱，再用95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位，其皂苷含量为60.40%。
本发明的实施例3：取川楝子提取物500g，依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经D101大孔吸附树脂柱，先用40%乙醇洗脱，再用95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位，其皂苷含量在50%以上。
本发明的实施例4：取18日龄的三黄鸡，断颈处死，分离其后肢骨髓细胞，用24孔板爬片培养（α-MEM 培养基含 10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100/mL 链霉素）于5% CO2培养箱，设置川楝子总皂苷部位高剂量组（300/mL）及空白对照组给药，于培养第7天用10%甲醛固定，进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。正置相差显微镜观察，显示破骨细胞胞浆内TRAP活性部位形成棕红色小颗粒沉淀，胞核染色呈阴性，多核，有些胞浆可见大小不一的空泡，以多核的阳性细胞为破骨细胞，在显微镜下观察计数，并按以下公式计算抑制率。
结果显示，川楝子总皂苷部位高剂量组（300/mL）对破骨细胞抑制分别为97.42%，表明川楝子总皂苷部位具有抑制破骨细胞活性的作用。
本发明的实施例5：按照实施例4所述步骤及方法，设置川楝子总皂苷部位中剂量组（30/mL）及空白对照组给药，测定其对破骨细胞的抑制率，结果显示，川楝子总皂苷部位中剂量组（30/mL）对破骨细胞抑制率为73.53%，表明川楝子总皂苷部位具有抑制破骨细胞活性的作用。
本发明的实施例6：按照实施例4所述步骤及方法，设置川楝子总皂苷部位低剂量组（3/mL）及空白对照组给药，测定其对破骨细胞的抑制率，结果显示，川楝子总皂苷部位低剂量组（3/mL）对破骨细胞抑制率为21.5%，表明川楝子总皂苷部位具有抑制破骨细胞活性的作用。
Claims (4)
1.川楝子总皂苷有效部位用于抑制破骨细胞活性的应用。
2.如权利要求1川楝子有效部位的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）预处理：将川楝子药材烘干后粉碎过筛，即得川楝子粗粉；（2）提取：取川楝子药材粗粉，60-80%乙醇回流提取，第一次2-5h，第二次和第三次1-3h，共提取三次，滤液浓缩成膏并干燥，即得川楝子提取物粉末；（3）纯化：川楝子提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经大孔吸附树脂柱，先用20-60%乙醇洗脱，再用60-95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位粉末。
3.根据权利要求2所述的川楝子有效部位的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为非极性大孔树脂。
4.根据权利要求3所述的川楝子有效部位的制备方法，其特征在于：所述非极性大孔树脂为D101型大孔树脂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510305677.0A CN104922214B (zh) | 2015-06-08 | 2015-06-08 | 川楝子有效部位的应用及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510305677.0A CN104922214B (zh) | 2015-06-08 | 2015-06-08 | 川楝子有效部位的应用及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104922214A true CN104922214A (zh) | 2015-09-23 |
| CN104922214B CN104922214B (zh) | 2019-11-12 |
Family
ID=54109867
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510305677.0A Active CN104922214B (zh) | 2015-06-08 | 2015-06-08 | 川楝子有效部位的应用及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104922214B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101239100A (zh) * | 2008-03-14 | 2008-08-13 | 贵州大学 | 川楝子提取物在制药中的应用及其提取方法 |
| CN102940687A (zh) * | 2011-12-12 | 2013-02-27 | 苏州大学 | 一种川楝子提取物及其用途 |
| CN102940686A (zh) * | 2012-10-15 | 2013-02-27 | 中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康产业创新中心 | 川楝子提取物在制备抗病毒药物中的应用及其提取方法 |
-
2015
- 2015-06-08 CN CN201510305677.0A patent/CN104922214B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101239100A (zh) * | 2008-03-14 | 2008-08-13 | 贵州大学 | 川楝子提取物在制药中的应用及其提取方法 |
| CN102940687A (zh) * | 2011-12-12 | 2013-02-27 | 苏州大学 | 一种川楝子提取物及其用途 |
| CN102940686A (zh) * | 2012-10-15 | 2013-02-27 | 中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康产业创新中心 | 川楝子提取物在制备抗病毒药物中的应用及其提取方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 周秋丽等主编: "《现代中药基础研究与临床》", 30 June 2012, 天津科技翻译出版公司 * |
| 周英等: "川楝子抑制破骨细胞活性组份的研究", 《中药材》 * |
| 张晶等主编: "《中药化学》", 30 April 2015, 中国农业大学出版社 * |
| 陈敏等: "川楝子正丁醇部位对小白鼠的急性毒性", 《贵州农业科学》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104922214B (zh) | 2019-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105111255A (zh) | 一种肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分离方法 | |
| CN106248817B (zh) | 一种金银花质量评价方法 | |
| CN105130796A (zh) | 一种二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN104725450B (zh) | 一种从素馨花中提取高纯度橄榄苦苷的方法 | |
| CN106138928A (zh) | 一种蜜炼强力枇杷膏及其制备方法和应用 | |
| CN104311623B (zh) | 一种名为油茶皂苷c1和油茶皂苷c2的五环三萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN103830306A (zh) | 一种忍冬叶有效提取物的制备方法 | |
| CN109692131A (zh) | 一种无患子科植物种子中神经酰胺提取物的制备方法及产品 | |
| CN104447910A (zh) | 从中药山茱萸中制备马钱苷的方法 | |
| CN101468104B (zh) | 一种治疗骨质疏松症的中药复方制剂及其制备方法 | |
| CN105106252A (zh) | 一种从田基黄中提取分离黄酮类化合物的方法 | |
| CN104013703A (zh) | 一种栀子提取物及其制备方法 | |
| CN109045087A (zh) | 一种盐肤木有效部位的富集纯化工艺 | |
| CN106226415A (zh) | 一种同时测定金银花中六种环烯醚萜苷类成分的方法 | |
| CN104922214A (zh) | 川楝子有效部位的应用及其制备方法 | |
| CN103109813B (zh) | 一种4-h-苦皮藤素原药及其制备方法和质量检测方法 | |
| CN103316184B (zh) | 一种中药萃取物的制备方法 | |
| CN101766664A (zh) | 一种岗梅总皂苷的提取方法及其质量检测方法 | |
| CN104288189B (zh) | 一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法 | |
| CN101647997B (zh) | 感冒疏风胶囊及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN101396460A (zh) | 含芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法 | |
| CN103520243A (zh) | 一种环磷酸腺苷雪菊油树脂复合软胶囊及其制备方法 | |
| CN101721531B (zh) | 森登四味汤有效部位及其制备方法 | |
| CN113512017A (zh) | 一种莱菔叶千里光中的化合物及其制备方法与应用 | |
| CN106176935A (zh) | 一种黄芩素铝胶囊及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210907 Address after: 550008 room b409, standard workshop auxiliary room, Jinyang science and Technology Industrial Park, Guiyang National High tech Industrial Development Zone, Guiyang City, Guizhou Province Patentee after: Smart wealth (Guizhou) Intellectual Property Operation Co.,Ltd. Address before: 550025 science and technology office, Huaxi north campus, Guizhou University, Guiyang City, Guizhou Province Patentee before: Guizhou University |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220118 Address after: 300304 room 1-2050, Block E, No. 6, Huafeng Road, Huaming high tech Industrial Zone, Dongli District, Tianjin Patentee after: Zhongzhi online Co.,Ltd. Address before: 550008 room b409, standard workshop auxiliary room, Jinyang science and Technology Industrial Park, Guiyang National High tech Industrial Development Zone, Guiyang City, Guizhou Province Patentee before: Smart wealth (Guizhou) Intellectual Property Operation Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20221020 Address after: Room 107, Building 6, No. 91, Fahuasi Street, Dongcheng District, Beijing 100062 Patentee after: Beijing Legend Yousheng Culture Media Co.,Ltd. Address before: 300304 room 1-2050, Block E, No. 6, Huafeng Road, Huaming high tech Industrial Zone, Dongli District, Tianjin Patentee before: Zhongzhi online Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20150923 Assignee: TIANJIN SHENGJI GROUP Co.,Ltd. Assignor: Beijing Legend Yousheng Culture Media Co.,Ltd. Contract record no.: X2024980003570 Denomination of invention: The Application and Preparation Method of Effective Parts of Melia azedarach Granted publication date: 20191112 License type: Common License Record date: 20240401 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |