发明内容
本发明旨在提供一种去除欧李果仁中苦杏仁苷的方法并且据此提供一种欧李果仁露的制备方法。
在本发明的第一方面,提供了一种欧李果仁露的制备方法,所述方法包括步骤:
(i)将欧李果仁与水在50-70℃混合、过滤,分别得到经水浸泡后的果仁和浸泡水溶液;
(ii)将步骤(i)得到的浸泡水溶液与纤维素酶在45-55℃混合至少1.5小时所得到的溶液煮沸,得到酶解液;
(iii)将步骤(i)得到的经水浸泡后的果仁与步骤(ii)得到的酶解液混合打浆,得到浆液;(iv)将步骤(iii)得到的浆液与碱性蛋白酶在50-60℃混合至多1.5小时,得到果仁多肽液;和
(v)将步骤(iv)得到的果仁多肽液与果糖混合后进行二级均质处理,得到欧李果仁露。
在另一优选例中,步骤(i)中与欧李果仁混合的水量至少为其3倍。
在另一优选例中,步骤(i)中将欧李果仁与水在50-70℃混合至少4次,每8-12小时换水一次。
在另一优选例中,步骤(ii)中以步骤(i)得到的浸泡水溶液的总重量计,纤维素酶的用量为其0.2-1.5%。
在另一优选例中,步骤(ii)中步骤(i)得到的浸泡水溶液与纤维素酶的混合在pH6-8条件下进行。
在另一优选例中,步骤(ii)中所述的煮沸温度在100℃,煮沸时间至少20分钟。
在本发明的第二方面,提供了一种脱去欧李果仁中苦杏仁苷的方法,所述方法包括步骤:
(1)将欧李果仁与水在50-70℃混合、过滤,得到浸泡水溶液;和
(2)将步骤(1)得到的浸泡水溶液与纤维素酶在45-55℃混合至少1.5小时所得到的溶液煮沸。
在另一优选例中,步骤(1)中与欧李果仁混合的水量至少为其3倍;并且步骤(1)中将欧李果仁与水在50-70℃混合至少4次,每8-12小时换水一次。
在另一优选例中,步骤(2)中以步骤(1)得到的浸泡水溶液的总重量计,纤维素酶的用量为其0.2-1.5%;并且步骤(2)中步骤(1)得到的浸泡水溶液与纤维素酶的混合在pH6-8条件下进行。
在另一优选例中,步骤(2)中所述的煮沸温度在100℃,煮沸时间至少20分钟。
据此,本发明提供了一种新的消除苦杏仁苷潜在危害的方法,该方法同时能够保留果仁中的功能性成分,提高了其营养价值。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究,意外地发现将浸泡与酶解有机结合的方法可以将苦杏仁苷进行酶解,由此不仅可以消除苦杏仁苷的潜在危害,同时保留了果仁中的功能性成分,提高了其营养价值。
在本文中,“纤维素酶(cellulase),CAS NO.9012-54-8”是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶活力,在分解纤维素时起生物催化作用,是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。可以使用本领域的常规方法获得,例如但不限于,来自于真菌生产的纤维素酶,比较典型的真菌有木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicillium)。也可以通过市售获得,例如但不限于,诺维信公司生产的纤维素酶。
在本文中,“碱性蛋白酶,CAS NO.9014-01-1”是一种蛋白水解酶,属于一种丝氨酸脆外高碱性蛋白酶,它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸,具有较强的分解蛋白质的能力。可以通过本领域常规的方法制备得到,例如但不限于,经细菌原生质体诱变方法造育的2709枯草杆微生物通过深层发酵、提取及精制而成。也可以通过市售获得,例如但不限于,诺维信公司生产的碱性蛋白酶Alcalase2.4L。
在本文中,“中性蛋白酶”是一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、pH值下,能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可以通过本领域常规的方法制备得到,例如但不限于,由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得到。也可以通过市售获得,例如但不限于,广西庞博生物公司生产的。
在本文中,“糖化酶(Amyloglucosidase),CAS NO.9032-08-0,又称葡萄糖淀粉酶,学名为α-1,4-葡萄糖水解酶(α-1,4-Glucan glucohydrolace)”是一种能把淀粉从非还原性末端水解α-1,4葡萄糖苷键产生葡萄糖,也能缓慢水解α-1,6葡萄糖苷键,转化为葡萄糖;同时也能水解糊精,糖原的非还原末端释放β-D-葡萄糖。可以使用本领域的常规方法获得,例如但不限于,经由微生物深层发酵生产,菌种名称:Aspergillus niger。也可以通过市售获得,例如但不限于,诺维信公司生产的糖化酶AMG300L。
在本文中,“欧李果仁”、“果仁”可以互换使用,都是指果核除去外壳坚硬的木质部分之后的部分。
在本文中,“苦杏仁苷”即“维生素B17”,但并非B族维生素(因为它的任何组成部分都不能作为辅酶),是由龙胆二糖和苦杏仁睛组成的β-型糖苷,分子式为C20H27NO11,分子量为457.43。
除非本说明书另有定义,此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。此外,在不和上下文冲突的情形下,本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型;而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
本发明提供一种去除欧李果仁中苦杏仁苷的方法,包括浸泡和脱苦、脱毒步骤,具体包括下述步骤:
第一步,将欧李果仁与水在50-70℃混合,过滤得到浸泡水溶液;
第二步,将第一步得到的浸泡水溶液与纤维素酶在45-55℃混合至少1.5小时,煮沸,完成脱苦和脱毒。
上述第一步的目的是使果仁中的苦杏仁苷通过浸泡的方式溶解在水中,形成浸泡水溶液,但温度、水量、浸泡时间等都需进行控制,以免其它营养物质的流失。
在上述第一步中,使用的水量至少是欧李果仁总重量的3倍,优选3-10倍,更优选3-4倍。
在上述第一步中,每8-12小时换水一次,最低浸泡次数为4次,优选4-8次,更优选4-6次。在本发明的一个优选方案中,每次浸泡后都必须过滤,取固体部分重新换水浸泡;每次的液体部分,即浸泡水溶液则储存起来,以便后期用纤维素酶水解。
上述第二步是使用纤维素酶对浸泡水溶液进行脱苦脱毒处理,将浸泡水溶液中的苦杏仁苷酶解生成苯甲醛,氢氰酸及葡萄糖,得到酶解液,再将酶解液中的氢氰酸通过煮沸的方式去除,同时灭酶。
通过上述两步处理,欧李果仁中的苦杏仁苷的脱除率可达95%以上。
上述第二步中的混合在pH6-8下进行,纤维素酶的用量以第一步得到的浸泡水溶液的总重量计,为其0.2-1.5%,优选0.5-1.0%,更优选0.8-1.0%。
上述第二步中的酶解在45-55℃下进行,至少酶解1.5小时,优选1.5-5小时,更优选2-3小时。
上述第二步中的煮沸温度为100℃,在该温度下至少20分钟。
本发明在上述去除欧李果仁中苦杏仁苷的方法的基础上,进一步提供了一种欧李果仁露的制备方法,所述方法包括步骤:
第一步,将欧李果仁与水在50-70℃混合,过滤分别得到经水浸泡后的果仁和浸泡水溶液;
第二步,将第一步得到的浸泡水溶液与纤维素酶在45-55℃混合至少1.5小时,煮沸,得到完成了脱苦和脱毒的酶解液;
第三步,将第一步得到的经水浸泡后的果仁与第二步得到的完成了脱苦和脱毒的酶解液混合打浆,得到浆液;
第四步,将第三步得到的浆液与碱性蛋白酶在50-60℃混合至多1.5小时,得到果仁多肽液;
第五步,将第四步得到的果仁多肽液与果糖混合后进行二级均质处理,得到欧李果仁露。
上述第一步的目的是使果仁中的苦杏仁苷通过浸泡的方式溶解在水中,形成浸泡水溶液,但温度、水量、浸泡时间等都需进行控制,以免其它营养物质的流失。
在上述第一步中,使用的水量至少是欧李果仁总重量的3倍,优选3-10倍,更优选3-4倍。
在上述第一步中,每8-12小时换水一次,最低浸泡次数为4次,优选4-8次,更优选4-6次。在本发明的一个优选方案中,每次浸泡后都必须过滤,取固体部分重新换水浸泡;每次的液体部分,即浸泡水溶液则储存起来,以便后期用纤维素酶水解。
上述第二步是使用纤维素酶对浸泡水溶液进行脱苦脱毒处理,将浸泡水溶液中的苦杏仁苷酶解生成苯甲醛,氢氰酸及葡萄糖,得到酶解液,再将酶解液中的氢氰酸通过煮沸的方式去除,同时灭酶。
通过上述两步处理,欧李果仁中的苦杏仁苷的脱除率可达95%以上。
上述第二步中的混合在pH6-8下进行,纤维素酶的用量以第一步得到的浸泡水溶液的总重量计,为其0.2-1.5%,优选0.5-1.0%,更优选0.8-1.0%。
上述第二步中的酶解在45-55℃下进行,至少酶解1.5小时,优选1.5-5小时,更优选2-3小时。
上述第二步中的煮沸温度为100℃,在该温度下至少20分钟。
上述第三步的打浆是将果仁中的蛋白质及脂肪等成分与水充分混合得到细腻的悬浮液。打浆可以通过本领域技术人员了解的方式进行,例如但不限于,通过研磨设备将固体与液体进行混合。
上述第四步是为了分解欧李果仁中的蛋白质,使其成为有利于服用、吸收的多肽物质,所述混合优选15分钟-1.5小时,更优选20分钟-1小时。在本发明的一个优选方案中,在进行第五步之前,需将第四步中用到的碱性蛋白酶灭活,可以使用本领域常规的方法,例如但不限于,将第四步得到果仁多肽液升至可以使碱性蛋白酶灭活的温度,并在该温度下保持一段时间,如升至90℃保温10分钟等。在另一个更优选的方案中,在进行第五步之前,将经过灭酶的果仁多肽液进行过滤,保留过滤液,以除去在工业化生产中可能存在的较大颗粒物,防止影响最终产品的质量。
为了增加产品的口感,如增加甜味,本发明提供的欧李果仁露的配方中有果糖,以本发明提供的欧李果仁露的总重量计,果糖添加量为5w/w%-10w/w%;优选为6w/w%-9w/w%;更优选为7w/w%-8w/w%。发明人经过大量试验发现,当果糖添加量低于5w/w%时,产品的甜味下降明显,不易于让人接受;当果糖添加量高于10w/w%时产品的甜度太高,也不易于让人接受。
在本发明的一个优选例中,上述第五步是将第四步得到的果仁多肽液与果糖混合,用水定容后进行二级均质处理。均质处理的目的是为了使产品更加的细腻,增加产品的口感,同时能够使产品的体系更加的稳定。,在本发明的一个优选例中,一级均质压力为20-40MPa,二级均质压力40-60MPa。
经过上述方法得到的本发明提供的欧李果仁露色泽呈乳白色,具有欧李果仁特有的香味,口感细腻,淳厚,无苦味,且含有丰富的蛋白质,脂肪酸,GABA及矿物质元素,具有很好的保健效果,是一款优质的植物蛋白饮料。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于:
1、本发明首次采用酶法进行脱毒,将苦杏仁苷进行酶解,消除苦杏仁苷的潜在危害。
2、本发明提供的脱毒方法同时保留了果仁中的功能性成分,提高了其营养价值。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的,例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
下述实施例中涉及的纤维素酶购自诺维信公司,酶活最低700EGU/g;
下述实施例中涉及的碱性蛋白酶购自诺维信公司,酶活最低2.4AU/g;
下述实施例中涉及的中性蛋白酶购自广西庞博生物公司,酶活最低10000U/g;
下述实施例中涉及的糖化酶购自诺维信公司,酶活最低300AGU/ml。