CN104887764A - 一种四味穿心莲散超微粉的制备方法及质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有清热解毒，凉血消肿，抗菌消炎，除湿化滞等功效，用于防治畜禽肠道细菌感染及上呼吸道感染的四味穿心莲散超微粉的制备方法及其质量检测方法。本发明配方合理、添加量小、效果确实，方法易于实施可大规模生产。优点在于整个制备过程均在常温下进行，提高了细胞破壁率；本发明将易粉碎药物和不易粉碎药物分开处理超微粉碎，节约了生产成本，提高了生产效率；本发明的粒度及其含量检测方法可全方位监控制剂质量，使得药物制剂符合质量标准达到其治疗效果。

Description

一种四味穿心莲散超微粉的制备方法及质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种兽药超微粉的制备技术，特别涉及一种具有清热解毒，凉血消肿，抗菌消炎，除湿化滞等功效，用于防治畜禽肠道细菌感染、积滞及上呼吸道感染的四味穿心莲散超微粉的常温制备方法；同时还涉及该超微粉的质量检测方法，特别涉及穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定方法。

背景技术

目前临床应用的中药多为普通散剂，存在剂型粗、用药剂量大，有效成分不能完全释放，生物利用率低等不足，严重影响了中药质量和治疗疗效；此外，现有四味穿心莲散各组分比例用于家禽药效不够理想，需要进一步改进。

中药超微粉技术是近年发展起来的应用现代物理方法对材料进行微粉化的新技术，一般中药材的细胞破壁率≥95％，从而突破原来有效成分须通过细胞壁释放的途径，而更有利于原药材发挥药效。中药材经过细胞破壁后有效成分完全释放出来，有利于畜禽机体对药物的吸收利用，其治疗效果有质的飞跃。该类制剂与传统中药散剂相比，具有有效成分释放速度快、生物利用率高、临床作用效果显著、用药量少等特点，并表现出巨大的市场潜力。

中药超微粉虽然存在诸多优点，但在实际生产中尚存在一些问题和难题：(1)生产效率低、耗能高是制约兽用中药超微粉规模化生产的主要因素。棒磨机在传统的闭路粉碎过程中，当大部分物料已达细度要求时，总有少部分粗粉混在其中，要使这部分粗粉进一步粉碎达到粒度要求，需要延长粉碎时间，使得粉碎效率低，也大幅度增加耗能；(2)风选分级和分级轮分级存在分级后物料均匀度差，大大影响了中兽药超微粉的生产质量；(3)传统的单向气流筛分，由于超微粉碎时，随粒度减小，物料颗粒表面积增加，吸附性增加，流动性变差，易聚集成大颗粒，使得超过200目细度药粉的过筛分级难以进行。上述因素的存在严重影响了中兽药超微粉的标准化、规模化生产，以及在兽医临床上的推广和使用。

此外，目前四味穿心莲散的质量鉴别薄层色谱鉴别以及液相色谱鉴别虽然有所提及，但由于其制备供试品溶液时有效成分提取不够完全，色谱条件不够理想以致鉴别结果不够精确。

为了有效控制四味穿心莲散超微粉的质量，本发明同时对其有效成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量研究，为其质量标准建立提供依据。

发明内容

本发明的目的在于公开一种具有清热解毒，凉血消肿，抗菌消炎，除湿化滞等功效，用于防治畜禽肠道细菌感染、积滞及上呼吸道感染的四味穿心莲散超微粉的常温制备方法，该剂型组方简单、配方合理、有效成分释放完全，添加量小，起效迅速，制剂稳定，应用方便，效果显著。通过临床应用效果验证，证实该超微粉具有很好的防治畜禽细菌性疾病的作用。

本发明另一目的在于提供一种应用于四味穿心莲散超微粉的质量控制研究。

本发明所述的四味穿心莲超微粉常温制备方法包括以下步骤：

第一步：称取穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶，各原料药质量份数比为：

采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍；然后分别于60～70℃烘干至水分质量百分比在8％以下；采用粉粉碎机进行粗粉碎，得粒度为20～24目的粗粉；

第二步：将粗粉碎后的穿心莲和大青叶混合，置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过300目筛，收集穿心莲、大青叶的超微粉混合物；

第三步：将粗粉碎后的辣蓼、葫芦茶混合，置于70℃～90℃烘箱中进一步烘干，以保证其水分质量含量≤6％，得到辣蓼、葫芦茶混合物粗粉。

第四步：将烘干后的辣蓼、葫芦茶混合物粗粉置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过260目筛，收集辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物。

第五步：穿心莲、大青叶的超微粉混合物和辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物再次混合，并进行质量检查后分装密封保存。

进一步地，各原料药质量份数比为：

上述四味穿心莲散超微粉的制备方法制备的四味穿心莲散超微粉的质量检测方法，其特征在于利用高效液相色谱法检测制备的四味穿心莲散超微粉中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量，具体的检测方法为：

步骤一、对照品溶液的制备：分别取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含0.8～1.2mg的混合溶液，即得对照品溶液；

步骤二、供试品溶液的制备：取四味穿心莲散超微粉1.0～1.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中；加入甲醇20～25ml，称定重量，浸泡1h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟；放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；即得供试品溶液；

步骤三、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，并添加聚乙二醇作为固定相；以甲醇-丙酮-水(体积比为60～65:5～10:22～35)为流动相；其中，穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000；

步骤四、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，检测波长：第一时间段为225nm，可检测出穿心莲内酯色谱峰；第二时间段为254nm，测定脱水穿心莲内酯。

进一步地，流动相为甲醇-丙酮-水的体积比65:5:35。

进一步地，步骤三中聚乙二醇与十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为5～15:85～95。

其中，双向气流筛分机特征在于：其特征在于：包括机壳(1)，在所述机壳(1)内腔中部设置有开口向下的筛筒(2)，所述筛筒(2)的筒口与设置在机壳(1)下部的漏斗(3)上开口相衔接；机壳(1)内腔通过上部的负压室(4)与外设引风机(5)相连通；在位于筛筒(2)与机壳(1)之间的区域设置有由横管(6)和立管(7)构成的门字形旋转喷气管，所述门字形旋转喷气管的横管(6)中部与驱动电机(8)传动联接；在筛筒(2)中间位置垂直设置有鼓风管(9)，所述鼓风管(9)的出风口穿过筛筒(2)与门字形旋转喷气管的横管(6)中部相连通，并通过滚动轴承(10)与门字形旋转喷气管的横管(6)滚动连接；鼓风管(9)的进风口延伸出所述漏斗(3)侧壁之外与外设鼓风机(11)的鼓风口相连通；在筛筒(2)内设置有进料管(12)，在所述进料管(12)的出料口上方设置有缓冲伞(13)，进料管(12)的进料口延伸出漏斗(3)侧壁之外；所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向开设在其管壁上的通槽(14)，所述通槽(14)的槽口朝着所述筛筒(2)方向开设；或者所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向间隔排列开设在其管壁上的条形孔(15)；所述条形孔(15)的孔口朝着所述筛筒(2)方向开设。

本发明优点在于：

1、整个制备过程在常温下进行，从而保证了有效成分不发生变化；并且供试品溶液的制备过程无需过中性氧化铝柱。

2、制备的成品药物粒度≤40μm，大大提高了细胞破壁率和生物利用度，节约了药材；

3、本发明针对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的特性，研制了特定的超声法对药材的有效成分进行提取，提高了提取率，降低了成本；

4、本发明以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，在其中添加了固定相聚乙二醇，使得高效液相色谱鉴别精度大大提高；

5、本发明中使用的双向气流筛分机，大大简化了四味穿心莲散超微粉的制备工艺，提高了超微粉的粒径均匀性，实现了中药超微粉的大规模生产。

本发明制备的四味穿心莲散超微粉的临床效果通过以下试验验证：

1.试验药物：四味穿心莲散，四味穿心莲散超微粉。

2.试验动物：250只1日龄罗曼蛋公鸡饲养至10日龄(去除病弱雏鸡)选取200羽随机分为4组，每组50只。空白对照组隔离饲养并口服GN增菌液0.3mL，其余3组每羽口服鸡沙门氏菌液0.3mL攻毒(预实验攻毒菌液浓度10⁹CFU/mL)，出现明显临床症状后，四味穿心莲散超微粉药物试验组按照1％四味穿心莲散超微粉拌料混饲，四味穿心莲散组1％四味穿心莲散拌料混饲，连用5天，阳性对照组不用药。用药结束后观察7天(表1)。试验结束时，观察各组的治愈率、有效率、死亡率。

试验动物分组及处理方式见下表1。

表1动物分组及处理

3.疗效评价标准及结果

结合生长情况按如下标准综合判定疗效：

痊愈：鸡只精神活泼，下痢停止，饮食完全正常。

显效：鸡只存活，但精神、下痢及饮食等未完全恢复正常。

无效：鸡只死亡，剖检呈现典型的沙门氏菌病病变。

有效率＝(痊愈数+显效数)÷样本数×100％。

结果见表2。

与阳性对照组比较，四味穿心莲散超微粉、四味穿心莲散均可以显著降低鸡沙门氏菌病死亡率和提高鸡沙门氏菌病有效率和治愈率(p<0.05)。四味穿心莲散超微粉组的死亡率显著低于四味穿心莲散(p<0.05)，四味穿心莲散超微粉组的有效率显著高于四味穿心莲散(p<0.05)。四味穿心莲散超微粉组的治愈率明显高于四味穿心莲散(p>0.05)。

表2各组对人工感人鸡沙门氏菌病的治疗情况

四味穿心莲超微粉抗沙门氏菌菌病的效果优于四味穿心莲散组，可能是因为中药经超微粉碎后其有效成分和含量溶出增多，大大降低了用药量。

附图说明

图1是穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品的液相色谱图。

注：AND为穿心莲内酯色谱峰；DDAND为脱水穿心莲内酯色谱峰。

图2是不含穿心莲药材的四味穿心莲散超微粉阴性对照液相色谱图。

图3是四味穿心莲散超微粉的液相色谱图。

图4是双向气流筛分机的结构示意图。

具体实施方案

以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1

一种的四味穿心莲超微粉常温制备方法，包括以下步骤：

第一步：称取穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶，各原料药质量份数比为：

采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍；然后分别于60～70℃烘干至水分质量百分比在8％以下；采用粉粉碎机进行粗粉碎，得粒度为20～24目的粗粉；

第二步：将粗粉碎后的穿心莲和大青叶混合，置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过300目筛，收集穿心莲、大青叶的超微粉混合物；

第三步：将粗粉碎后的辣蓼、葫芦茶混合，置于70℃～90℃烘箱中进一步烘干，以保证其水分质量含量≤6％，得到辣蓼、葫芦茶混合物粗粉。

第四步：将烘干后的辣蓼、葫芦茶混合物粗粉置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过260目筛，收集辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物。

第五步：穿心莲、大青叶的超微粉混合物和辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物再次混合，并进行质量检查后分装密封保存。

实施例2

各原料药质量份数比为：

其他制备步骤与实施例1相同。

实施例3

四味穿心莲散超微粉的质量检测方法，其利用高效液相色谱法检测制备的四味穿心莲散超微粉中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量，具体的检测方法为：

仪器与试剂

仪器：P230型液相色谱仪包括：UV230+型可变波长紫外检测器，P230型高压恒流泵，ZWⅡ型注温箱，EC2000工作站；AUW220D1/1万电子天平；JCX-400GZ超声波清洗器。

试剂：穿心莲内酯对照品，脱水穿心莲内酯对照品，色谱级甲醇，分析纯甲醇。

步骤一、对照品溶液的制备：分别取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含0.8～1.2mg的混合溶液，即得对照品溶液；

步骤二、供试品溶液的制备：取四味穿心莲散超微粉1.0～1.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中；加入甲醇20～25ml，称定重量，浸泡1h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟；放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；即得供试品溶液；

步骤三、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，并添加聚乙二醇作为固定相，聚乙二醇与十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为5～15:85～95；以甲醇-丙酮-水为流动相，体积比为65:5:35；其中，穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000；

步骤四、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，检测波长：第一时间段为225nm，可检测出穿心莲内酯色谱峰；第二时间段为254nm，测定脱水穿心莲内酯。

Claims (5)

1.一种四味穿心莲散超微粉的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

第一步：称取穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶，各原料药质量份数比为：

采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍；然后分别于60～70℃烘干至水分质量百分比在8％以下；采用粉粉碎机进行粗粉碎，得粒度为20～24目的粗粉；

第二步：将粗粉碎后的穿心莲和大青叶混合，置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过300目筛，收集穿心莲、大青叶的超微粉混合物；

第三步：将粗粉碎后的辣蓼、葫芦茶混合，置于70℃～90℃烘箱中进一步烘干，以保证其水分质量含量≤6％，得到辣蓼、葫芦茶混合物粗粉。

第四步：将烘干后的辣蓼、葫芦茶混合物粗粉置于棒磨机内粉碎，然后经双向气流筛分机过260目筛，收集辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物。

第五步：穿心莲、大青叶的超微粉混合物和辣蓼、葫芦茶的超微粉混合物再次混合，并进行质量检查后分装密封保存。

2.如权利要求1所述四味穿心莲散超微粉的制备方法，各原料药质量份数比为：

3.如权利要求1所述的四味穿心莲散超微粉的制备方法制备的四味穿心莲散超微粉的质量检测方法，其特征在于利用高效液相色谱法检测制备的四味穿心莲散超微粉中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量，具体的检测方法为：

步骤一、对照品溶液的制备：分别取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含0.8～1.2mg的混合溶液，即得对照品溶液；

步骤二、供试品溶液的制备：取四味穿心莲散超微粉1.0～1.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中；加入甲醇20～25ml，称定重量，浸泡1h；然后在甲醇和丙酮的混合溶液中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟；放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；即得供试品溶液；

步骤三、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，并添加聚乙二醇作为固定相；以甲醇-丙酮-水(体积比为60～65:5～10:22～35)为流动相；其中，穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000；

步骤四、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，检测波长：第一时间段为225nm，可检测出穿心莲内酯色谱峰；第二时间段为254nm，测定脱水穿心莲内酯。

4.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于：流动相为甲醇-丙酮-水的体积比65:5:35。

5.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于：步骤三中聚乙二醇与十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为5～15:85～95。