CN104887678B - 苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 - Google Patents
苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104887678B CN104887678B CN201410078977.5A CN201410078977A CN104887678B CN 104887678 B CN104887678 B CN 104887678B CN 201410078977 A CN201410078977 A CN 201410078977A CN 104887678 B CN104887678 B CN 104887678B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- norfloxacin
- benzoyl
- drug
- antibiotic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属药学领域，涉及苯甲酰多羟基环己烯化合物及其对外泵耐药金葡菌的协同抗菌作用。本发明的化合物本身没有抑制细菌生长作用，与抗生素诺氟沙星配伍时，通过针对细菌外排泵(efflux)耐药机制，采用含有NorA基因的耐氟喹诺酮类耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验耐药菌SA1199B进行试验，结果显示化合物Zeylenol和Ellipeiopsol B使诺氟沙星的最低抑菌浓度值分别降低4倍和16倍。本发明所涉及化合物Zeylenol对细菌的外排泵抑制效果与阳性对照药物相当。本发明涉及的化合物可用于制备抗生素增效药物。
Description
技术领域
本发明属于药学领域，涉及苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途，具体涉及在制备抗外泵耐药金葡菌协同作用的药物组合物中的用途；尤其是苯甲酰多羟基环己烯在制备对外泵型耐氟喹诺酮类耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)药物中的用途。
背景技术
耐甲氧西林金黄葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus,MRSA)为医院内最常见的传染病菌之一。如今，MRSA对所有内酰胺类抗生素如青霉素等药物都具有耐药性，而且对大环内酯类，氟喹诺酮类，四环素类等抗生素也都产生了耐药性，这使得它的感染变得更加难以治疗。目前，可用于治疗MRSA的抗生素只有万古霉素，然而不幸的是，2002年在美国已经出现了完全抗万古霉素MRSA菌株。近年来，我国由于抗生素广泛的使用，甚至是滥用，特别是在万古霉素成为多家医院常规抗生素类用药之后，这一形势变得愈加严峻。除了通过采取限制滥用抗生素的相关措施以减缓耐药MRSA增长的速度外，同时必须加速研发新的抗耐药MRSA药物，以防现有的抗菌药物无法起作用时，出现细菌的大规模爆发。
细菌耐药性(Drug Resistance)的产生具有多种原因，其中细菌对药物产生外排作用而导致的外泵(efflux)耐药性是最重要的耐药性机制之一。根据世界卫生组织的报告，具有多药耐药外排泵的细菌引起的感染已经占到了院内感染的60%。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有多种耐药机制，除了具有染色体为40kb的耐药基因(mecA)通过编码甲氧西林接合蛋白(Penicilin Binding Protein，PBP)产生对β-内酰胺类抗生素的耐药性之外，还对多种类型抗生素产生耐药性。对氟喹诺酮类(fluoroquinolones)通过过度表达NorA[1]外泵蛋白产生耐药性。细菌细胞通过外排泵将普遍使用的绝大多数抗生素泵出细胞外，使细胞内的抗生素浓度降低而无法起到抗菌作用。
诺氟沙星是一种氟喹诺酮类抗生素，1986年开始被用于临床[2]。因它对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌，尤其是金黄色葡萄球菌，具有较强的抑制作用而广泛用于尿道、呼吸道等的抗感染治疗[3]。也正因为诺氟沙星在临床及畜牧业的广泛应用，细菌对其产生了严重耐药性，从而限制了诺氟沙星的应用[4]。产生耐药性的机制多样，其中之一便是细菌外排泵[2,5]。因此，选择具有NorA外泵基因的MRSA细菌株作为外泵抑制剂的筛选靶标是寻找具有外泵抑制作用的抗耐药金葡菌抗生素增敏剂的一种重要途径。
本申请的发明人，拟通过使用天然成分EllipeiopsolB和Zeylenol分别与诺氟沙星配伍成组合药物，使降低诺氟沙星的最低抑菌浓度，对诺氟沙星产生抗耐药金葡菌的增效作用。
于本发明相关的现有技术有：
[1]Guay,GG,etal.The Tet(K)Gene of plasmid PT181 of Staphylococcusaureus encodes an efflux protein that contains 14 transmenbranehelices.Plasmid.1993,30(2):163-166.
[2]Bearden DT,Danziger LH.Mechanism of action of and resistance toquinolones.Pharmacotherapy2001,21:40-61.
[3]Holmes,B,etal.Norfloxacin.Drugs.1985,30(6):482-513.
[4]Markham PN,Neyfakh AA.Inhibition of the multidrug transporter NorAIn Staphylococcus aureus prevents emergence of norfloxacinresistance.Antimicrobial Agents Chemotheropy.1996,40(11):2673-2674.
[5]HooperDC.Emerging mechanisms offluoroquinolone resistance.EmergingInfectious Diseases.2001,7:337–341.。
发明内容
本发明目的是提供苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途，具体涉及在制备抗外泵耐药金葡菌协同作用的药物组合物中的用途；尤其是苯甲酰多羟基环己烯在制备对外泵型耐氟喹诺酮类耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)药物中的用途。
本发明的组合物中增效成分为具有苯甲酰基多基取代环己烯类化学结构，根据结构中羟基和苯甲酰基构型取向不同，具有四个异构体；
本发明通过下述分离，鉴定方法确认化合物
胡椒属植物蒌叶(Piper spp.)紫玉盘属植物（Uvaria spp.）分别用95%乙醇提取物的氯仿萃取部位进行硅胶柱层析分，纯化后所得化合物加入氘代氯仿溶解进行核磁共振和质谱结构测试。
本发明中代表化合物为EllipeiopsolB和Zeylenol，分子式为C21H20O7，分子量为384。
本发明经实验表明，所述的苯甲酰多羟基环己烯化合物对外泵耐药金葡菌具有协同抗菌作用。所述的苯甲酰多羟基环己烯化合物本身没有抑制细菌生长作用，但与抗生素诺氟沙星配伍时，其针对细菌外排泵(efflux)耐药机制，进行含有NorA基因的耐氟喹诺酮类耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验耐药菌SA1199B的实验，结果显示，化合物Zeylenol和Ellipeiopsol B能使诺氟沙星的最低抑菌浓度值分别降低4倍和16倍。
本发明中，采用多氧取代环己烯类天然化合物Ellipeiopsol B和Zeylenol与抗生素诺氟沙星不同浓度下进行对耐氟喹诺酮金葡菌SA1199菌株单独抑菌实验，及两者形成不同配比的组合物进行抑菌试验，结果显示两个化合物对诺氟沙星皆以协同作用方式产生抑菌增效作用，Zeylenol效果与阳性药利血平相同，而Ellipeiopsol B效果更佳，协同增效作用是利血平的4倍，协同增效作用非常明显；用溴化乙锭为荧光标记物进行外排泵抑制试验，结果显示化合物Zeylenol抑制外排效果明显，抑制作用与实验阳性对照物氰氯苯腙水平相当。
本发明中，实验菌SA1199B为对氟诺喹酮类抗生素耐药的金黄色葡萄球菌，抗生素诺氟沙星对它最低抑制浓度为(MIC)值为64μg/mL；耐药机制为细菌过度表达NorA多药耐药外泵蛋白形成外排泵(efflux pump)机制，降低了抗生素在细菌细胞内的药物浓度；对于耐药菌株SA1199B，诺氟沙星的MIC值为64μg/mL，上述两个化合物对此菌株的MIC均大于128μg/mL，但化合物Ellipeiopsol B和Zeylenol分别与诺氟沙星配伍时，能使诺氟沙星对菌株SA1199B的MIC值分别降至4和16μg/mL，分别降低了16和4倍；Zeylenol协同增效作用与文献报道利血平效果相同，EllipeiopsolB效果是文献报道利血平的4倍，所述两个化合物均具有明显的协同抗菌活性。
本发明实验包括步骤：
1.细菌培养及检测
细菌培养在细胞培养室超净台中操作，在96孔板中进行细菌培养，米勒-亨顿肉汤(Mueller-HintonBrooth,MHB)为培养基。取化合物样品及抗生素诺氟沙星各适量，以DMSO溶解配置成一定浓度的两种母液，以肉汤稀释。不加药物作为阴性对照。接种细菌96孔板于37℃的培养箱中培养18-24小时，加入MTT，观察结果，以细菌完全不生长时所需药物的最低浓度为药物对此菌种的MIC值，以MTT溶液3-[4,5-二甲基噻唑基-2]-2,5-二苯基四唑蓝溴化物(Sigma)，用于检测细菌的生长，MTT由黄色变成蓝色则指示有细菌生长；
2.协同作用方法试验化合物对抗生素的增效作用
在96孔板上以二倍稀释法形成的不同浓度进行化合物与抗生素协同作用抗菌试验；
取适量诺氟沙星溶于DMSO配成抗生素母液，取适量诺氟沙星母液溶于肉汤中配成诺氟沙星原液，取化合物样品适量溶于DMSO配成母液，用肉汤稀释，化合物和抗生素起始抑制浓度分别为128和64μg/mL，以此进行正交实验，记录每行恰好细菌不生长的微孔所对应的诺氟沙星的浓度是与化合物样品联用时诺氟沙星的MIC值；
研究报道药物利血平(reserpine)具有抑制外排泵作用，它能够抑制耐药细菌对药物的外排作用，增加抗生素的抑菌效果，利血平作为在本发明研究实验平台的阳性对照药物，用本发明中协同作用实验方法测试利血平与诺氟沙星联用对SA1199B的抑制作用，结果显示，在利血平浓度为4μg/mL时可将诺氟沙星对SA1199B的最低抑菌浓度降低4倍，由64μg/mL降至16μg/mL，利血平药物购买于阿拉丁化学试剂公司（Aladdin ChemistryCo.Ltd）；
3.EtBr外排抑制实验方法
取适量SA1199B菌种以适量MH肉汤培养过夜，配制菌悬液OD620为0.8，加入溴化乙锭(EtBr)，再分别加入阳性对照药氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorphenyl-hydrazone,CCCP)和化合物Zeylenol(100μM)，室温培养20分钟后离心，再用适量肉汤悬浮；然后往96孔板各加入200μL混悬液，在激发波和发射波波长分别为530和600nm波长下连续测定荧光吸收值，每5分钟测量一次，连续测试一小时。
本发明中，通过使用天然成分EllipeiopsolB和Zeylenol分别与诺氟沙星配伍成组合药物，显著降低诺氟沙星的最低抑菌浓度，对诺氟沙星产生抗耐药金葡菌的增效作用。
附图说明
图1是Zeylenol抑制EtBr外排泵作用结果。
具体实施方式
实施例1.从植物蒌叶中分离增效化合物EllipeiopsolB和Zeylenol
胡椒属植物蒌叶(Piperbetle)的95%乙醇提取物的氯仿萃取部位3.5g浸膏，用200-300目的硅胶拌样进行柱层析，每20mL为一个流分。以氯仿-丙酮（9:1）洗脱，收集流分32-36，记为Fr02-32。对Fr02-32进行分离，以氯仿-甲醇（95:5）洗脱，收集流分4-5，记为Fr02-32-4，减压蒸干后称重为430mg。继续分离Fr02-32-4，以氯仿-丙酮（9:1）洗脱，分别收集流分2-5和流分6-10，分别记为Fr02-32-4-2和Fr02-32-4-6，减压蒸干后称重分别为160mg和220mg。分别对Fr02-32-4-2和Fr02-32-4-6纯化数次，终得白色固体Fr02-32-4-2重20mg，Fr02-32-4-6重35mg，经薄层色谱和液相检测为一纯品，分别为EllipeiopsolB和Zeylenol。
实施例2、从植物小花紫玉盘中分离增效化合物EllipeiopsolB和Zeylenol
紫玉盘属植物小花紫玉盘（Uvaria rufa）干燥地上部分3.34Kg经氯仿提取，得绿色浸膏482g。取部分此浸膏（150 g）经50%的石油醚-酒精/水溶液萃取分层，然后将酒精/水层部分再经氯仿萃取，得氯仿次提物104g。将104g浸膏通过柱色谱分离，经氯仿-丙酮洗脱，得Fr-1～Fr-5五个组分。对Fr-3（5 g）继续硅胶柱色谱分离，经氯仿-甲醇洗脱得Fr-3-1～Fr-3-9九个组分。对Fr-3-5（2.89 g）继续以硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-丙酮洗脱，得Fr-3-5-1～Fr-3-5-13十三个组分。对Fr-3-5-7（1.22g）进一步经反相硅胶柱色谱和正相硅胶柱色谱分离纯化得EllipeiopsolB和Zeylenol分别67.5mg和161.9mg。质谱实验显示两个化合物的分子量均为384，1H-NMR及13C-NMR数据分别如表1所示。
表1.化合物2和3的NMR数据(化学位移ppm,峰形，耦合常数Hz,溶剂CDCl3)
实施例3、以简单化学原料合成增效化合物Zeylenol
合成路线：
实施例4、化合物与诺氟沙星联用时的协同增效作用
在96孔板上以二倍稀释法形成的不同浓度进行化合物与抗生素协同作用抗菌试验；
取适量诺氟沙星溶于DMSO配成抗生素母液，取适量诺氟沙星母液溶于肉汤中配成诺氟沙星原液，取化合物Ellipeiopsol B和Zeylenol样品按计算量溶于DMSO配成母液，用肉汤稀释，化合物和抗生素起始抑制浓度分别为128和64μg/mL，以此进行正交实验，记录每行恰好细菌不生长的微孔所对应的诺氟沙星的浓度是与化合物样品联用时诺氟沙星的MIC值，试验结果如表2所示。
表2.化合物及抗生素诺氟沙星对耐药菌的最低抑菌浓度(MIC)和部分抑菌浓度指数(FICI)
其中，1.FICI≤0.5为协同作用；0.5<FICI≤1相加作用；1<FICI≤2为无相关作用;；2<FICI≤4为拮抗作用；
2.两个化合物对SA1199B菌种皆无直接作用，但与诺氟沙星联用时分别能降低抗生素用量16和4倍，协同作用明显。
实施例5、确定化合物协同作用机制——外排泵抑制作用
取适量SA1199B菌种以适量MH肉汤培养过夜，配制菌悬液OD620为0.8，加入溴化乙锭(EtBr)，再分别加入阳性对照药氰氯苯腙(carbonyl cyanidem-chlorphenyl-hydrazone,CCCP)和化合物Zeylenol(100μM)，室温培养20分钟后离心，再用适量肉汤悬浮，然后往96孔板各加入200μL混悬液，在激发波和发射波波长分别为530和600nm波长下连续测定荧光吸收值，每5分钟测量一次，连续测试一小时，实验结果显示，化合物作用效果与CCCP相当，具有明显外排抑制作用，说明化合物协同作用机制可能是通过抑制细菌外排泵实现的，结果如图1所示。
Claims (4)
1.苯甲酰多羟基环己烯化合物在制备抗外泵耐药金葡菌协同作用的药物组合物中的用途；
所述的苯甲酰多羟基环己烯化合物为具有苯甲酰基多基取代环己烯类化学结构的
Ellipeiopsol B和Zeylenol，结构中羟基和苯甲酰基构型取向不同；
分子式为C21H20O7，分子量为384；
所述的苯甲酰多羟基环己烯化合物与诺氟沙星协同作用。
2.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物中，苯甲酰多羟基环己烯化合物逆转氟喹诺酮耐药金葡菌的耐药性，降低诺氟沙星实验耐药金葡菌的最低抑菌浓度(MIC)。
3.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的耐药金葡菌为SA1199B，其对抗生素诺氟沙星不敏感。
4.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的化合物Ellipeiopsol B和Zeylenol与诺氟沙星合用能提高抗生素对耐药金葡菌SA1199B的抑制效果，分别使诺氟沙星对耐药金葡菌株SA1199B的MIC降低为抗生素单独使用时的十六分之一和四分之一；在不改变抑菌效果时，降低诺氟沙星抗生素的使用剂量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410078977.5A CN104887678B (zh) | 2014-03-05 | 2014-03-05 | 苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410078977.5A CN104887678B (zh) | 2014-03-05 | 2014-03-05 | 苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104887678A CN104887678A (zh) | 2015-09-09 |
| CN104887678B true CN104887678B (zh) | 2017-11-17 |
Family
ID=54020923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410078977.5A Expired - Fee Related CN104887678B (zh) | 2014-03-05 | 2014-03-05 | 苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104887678B (zh) |
-
2014
- 2014-03-05 CN CN201410078977.5A patent/CN104887678B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Emerging Mechanisms of Fluoroquinolone Resistance;David C. Hooper;《Emerging Infectious Diseases》;20011231;第7卷(第2期);337-341 * |
| Inhibition of the Multidrug Transporter NorA Prevents Emergence of Norfloxacin Resistance in Staphylococcus aureus;无;《ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY》;19961231;第40卷(第11期);2673–2674 * |
| The first enantiocontrolled synthesis of naturally occurring polyoxygenated cyclohexenylmethanol dibenzoates (–)-zeylenol, (–)-uvarigranol G,(–)-tonkinenin A and (+)-pipoxide;Kou Hiroya et al;《Chem. Commun.》;19991231;2197–2198 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104887678A (zh) | 2015-09-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Romha et al. | Antibacterial activities of five medicinal plants in Ethiopia against some human and animal pathogens | |
| CN114948915B (zh) | 百里醌在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用 | |
| Tan et al. | A novel ivermectin-derived compound D4 and its antimicrobial/biofilm properties against MRSA | |
| CN104274454B (zh) | 一种抗药耐药金黄色葡萄球菌组合药物及用途 | |
| US7259265B2 (en) | Coumarin compounds and method for preparing and using the same | |
| Ren et al. | Crystal structures and human leukemia cell apoptosis inducible activities of parthenolide analogues isolated from Piptocoma rufescens | |
| Murugan et al. | 'In vitro'and'in silico'screening for Andrographis paniculata quorum sensing mimics: New therapeutic leads for cystic fibrosis Pseudomonas aeruginosa biofilms | |
| CN104887678B (zh) | 苯甲酰多羟基环己烯在制备药物组合物中的用途 | |
| KR20090081854A (ko) | 개똥쑥 정유를 함유하는 항균 조성물 | |
| CN104788413B (zh) | 一种木脂素类型化合物及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途 | |
| JP5288532B2 (ja) | セスキテルペンラクトンを含有する医薬組成物 | |
| CN107951878A (zh) | 螺缩酮多炔类化合物在制备抗外泵耐药金葡菌增敏药物中的用途 | |
| CN106588581A (zh) | 芪类衍生物及其应用 | |
| US20200222485A1 (en) | Medicinal ambrosia plant extracts | |
| CN115708824B (zh) | 7,8-二羟基黄酮作为铁稳态扰动剂在制备多粘菌素增效剂中的应用 | |
| Priya et al. | Antidiabetic Activity Of The Ethanolic Extract Of A Simple Ascidian, Phallusia Nigra | |
| CN101269060B (zh) | 化合物hsr01-4-9在制备抗多药耐药金葡菌抑制剂中的用途 | |
| Fadhil Abdul-Hussein | Study of the effect of carob (Ceratonia Siliqua L.) extract activity as antibiotic from UTI | |
| CN111840340A (zh) | 石榴皮鞣质在制备抑制细菌群体感应系统药物中的应用 | |
| CN108186618A (zh) | 柠檬醛及其衍生物在制备mrsa感染性疾病药物中的新用途 | |
| CN110156737A (zh) | 一类吡喃酮化合物及其抗铜绿假单胞菌生物膜的应用 | |
| Soliman et al. | New insights into sepsis therapy using Sepia Officinalis | |
| CN113582863B (zh) | 一种氨乙基联苯类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN103040897A (zh) | 清开灵活性组分板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用 | |
| CN110038005B (zh) | 化合物tovophyllin A在制备治疗帕金森病的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171117 Termination date: 20210305 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |