CN103040897A - 清开灵活性组分板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用 - Google Patents
清开灵活性组分板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种板蓝根提取物的新医药用途，同时为临床提供一种可有效拮抗多重耐药菌的药物。本发明所述板蓝根制剂可用于治疗上述由含NDM-1耐药基因多重耐药细菌引发的疾病，如含NDM-1耐药基因多重耐药细菌引发的肠道感染、呼吸系统感染、伤口及皮肤感染、泌尿生殖系统感染、菌血症菌血症、脑膜炎等，尤其是适用于治疗由乙酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽寡养窄食单胞菌或含NDM-1耐药基因大肠杆菌引发的各种感染性疾病。
Description
技术领域
本发明涉及板蓝根的一种新的医药用途，具体地说是板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用。
背景技术
多重耐药菌（multiple resistant bacteria）是指有多重耐药性的病原菌，即一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、红霉素、B－内酰胺类）或三类以上抗生素同时耐药。其中最为多见的是NDM-1、MDR-TB、MDR-MRSA以及常在ICU中出现的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。NDM-1（New Delhi metallo-β-lactamase-1，新德里金属β-内酰胺酶），又名NDM-1细菌，是一种耐碳青霉烯类的酶。NDM-1基因常由质粒携带，但也整合在细菌的染色体上，易于在不同的菌株间传播和扩散，NDM-1编码的蛋白单体分子量为28kDa，它的序列和其他MBL的序列相似性很低。NDM-1主要分布在肠杆菌科和鲍曼不动杆菌中，携带NDM-1的细菌不但包括条件致病菌，也包括致病菌，如常见的志贺氏菌、霍乱、绿脓假单胞杆菌等。它具有高度耐药性，几乎可以水解临床常用的一线抗菌药物，包括β-内酰胺类、碳青霉烯类、氟喹诺酮类、氨基糖苷等。长期以来，抗生素药物的滥用，是催生多重耐药菌的重要原因。目前，多重耐药菌感染呈现出增长趋势，但抗菌药物选择方案却很少，因此重耐药菌感染已成为全球性棘手问题。
板蓝根（十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根）为清热解毒复方中药清开灵注射液的主要原料药。传统医药和现代药理研究表明，板蓝根具有抗病毒活性，尤其是流感病毒。开发和研究板蓝根更多更好的医药功效，是许多中医药学领域的重要研究课题之一。
发明内容
本发明的目的就是要开发板蓝根提取物的新医药用途，同时为临床提供一种可有效拮抗多重耐药菌的药物。
本发明的发明人经长期研究发现板蓝根提取物对含NDM-1耐药基因细菌具有显著的抑制作用，且其作用与药物浓度成正比，从而发明了板蓝根提取物的一种新的医药用途，即完成了板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用。
本发明所述的板蓝根提取物可按照常规的中药提取方法进行。
本发明在此提供的方法如下：
（1）取干燥的板蓝根药材适量，粉碎成粗粉，加入水或乙醇提取，过滤；
（2）将所得滤液上大孔吸附树脂，依次用水、乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，减压回收乙醇至无醇味，得板蓝根提取物，冷藏。
其中，步骤（1）中，乙醇是20%乙醇，水或乙醇的用量是60倍量，提取温度是40℃～70℃，提取时间是3小时；步骤（2）中，洗脱剂水用量是6～8倍量柱体积，乙醇是12～15倍量柱体积的30%乙醇。
本发明中所述板蓝根提取物，可按照现有技术所述方法制备成板蓝根颗粒、板蓝根冲剂、板蓝根注射剂、板蓝根胶囊、口服液等药物制剂。
本发明中所述的多重耐药菌是指含有NMD-1基因的多重耐药菌，包括乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，A.baumannii）、嗜麦芽寡养窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）或含NDM-1耐药基因大肠杆菌（Escherichia coli）。
上述含NDM-1耐药基因检测菌株为革兰氏阴性菌，具有较强的致病性和抗生素耐药性。其中，乙酸钙不动杆菌和鲍曼不动杆菌可引起肺部感染、伤口及皮肤感染、泌尿生殖系统感染、菌血症菌血症、脑膜炎等，麦芽寡养窄食单胞菌能引起严重的呼吸系统感染等，含NDM-1耐药基因大肠杆菌可引发对肠道感染且对抗生素具有抗药性。
更进一步地，本发明还提供了板蓝根在制备抗乙酸钙不动杆菌药物中的应用。
更进一步地，本发明还提供了板蓝根制备抗嗜麦芽寡养窄食单胞菌药物中的应用。
更进一步地，本发明还提供了板蓝根在制备抗鲍曼不动杆菌药物中的应用。
更进一步地，本发明还提供了板蓝根在制备抗含NDM-1耐药基因细菌药物中的应用。
本发明所述板蓝根制剂可用于治疗上述由含NDM-1耐药基因多重耐药细菌引发的疾病，如含NDM-1耐药基因多重耐药细菌引发的肠道感染、呼吸系统感染、伤口及皮肤感染、泌尿生殖系统感染、菌血症菌血症、脑膜炎等，尤其是适用于治疗由乙酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽寡养窄食单胞菌或含NDM-1耐药基因大肠杆菌引发的各种感染性疾病。
本发明所述药物制剂在作为本发明的用途使用时，其具体用量时可根据临床实验以及患者的具体情况确定，也可参照板蓝根制剂的给药剂量给药。
具体实施方案
以下通过实施例和试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。
实施例1
板蓝根提取物的制备方法
（1）取干燥的板蓝根药材适量，粉碎成粗粉，加入60倍量的水（或20%乙醇），在40℃～70℃下提取3个小时，过滤；
（2）将所得滤液上大孔吸附树脂，依次用6～8倍量柱体积的水、12～15倍量柱体积的30%乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，减压回收乙醇至无醇味，得板蓝根提取物，冷藏。
药效学试验
试验例1
板蓝根提取物对含NDM-1耐药基因细菌的抑菌效果研究
本药效学试验所采用的检测菌株：乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus，A.calcoaceticus）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，A.baumannii）和嗜麦芽寡养窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia，S.maltophilia），均含有blaNDM-1耐药基因；pGEX-4T-NDM1-DH5α是含NDM-1重组质粒的大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）；pGEX-4T-NDM-1-BL21（在大肠杆菌BL21中表达NDM-1）是含NDM-1重组质粒的大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli），其质粒上带有GST标签。上述菌株均由中国人民解放军疾病预防控制所提供。
配制LB琼脂培养基，高压冷却至60℃时，取板蓝根提取物，按1:9（药物：LB，V/V）比例配制不同浓度药物（0.5g/ml、1.0g/ml、1.325g/ml）平板，琼脂厚度3-4mm，制备药物平板，备用。
研究板蓝根对含NDM-1耐药基因细菌进行抑菌实验：
将4株含NDM-1基因耐药菌株乙酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽寡养窄食单胞菌及大肠杆菌pGEX-4T-NDM1-DH5α分别接种于含16μg/ml亚胺培南的LB液体培养基中，37℃、200rpm培养过夜，次日菌液用无菌PBS缓冲液稀释10倍后，分别吸取2μl接种于药物琼脂平板表面或采用划线法接种，平板置于37℃孵育24h左右，观察各菌株生长状况，得板蓝根提取物的抑菌性测定结果，见表1。
采用琼脂稀释法对板蓝根提取物的最小抑菌浓度（MIC）进行测定，将耐药菌株接种于不同药物浓度的琼脂平板上，37℃孵育24h左右，观察各菌株生长状况，抑制菌株不能生长的最小药物浓度（MIC值）分别为乙酸钙不动杆菌1.325g/ml、鲍曼不动杆菌＞1.325g/ml、嗜麦芽寡养窄食单胞菌1.0g/ml、pGEX-4T-NDM-1-BL21＞1.325g/ml。
实验结果表明：板蓝根对耐药菌株均有抑制作用，随着药物浓度的增加，抑制作用明显增强，说明板蓝根对含NDM-1耐药基因耐药菌都有抑制作用，且抑菌效果明显；药物对不同检测菌株的抗菌能力不同，MIC也有所差异，具有较强的广谱抗含NDM-1耐药基因耐药菌的能力。
表1 板蓝根提取物浓度对菌株的影响
注：+++表示不抑制生长，++表示抑制不明显，+表示明显抑制，—表示完全抑制，不生长。
Claims (7)
1.板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用。
2.板蓝根提取物在制备抗含NDM-1耐药基因细菌药物中的应用。
3.板蓝根提取物在制备抗乙酸钙不动杆菌药物中的应用。
4.板蓝根提取物在制备抗鲍曼不动杆菌药物中的应用。
5.板蓝根提取物在制备抗嗜麦芽寡养窄食单胞菌药物中的应用。
6.板蓝根提取物在制备抗含NDM-1耐药基因大肠杆菌药物中的应用。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述应用，其特征在于，所述板蓝根提取物是由板蓝根药材，粉碎成粗粉，加入60倍量的水或20%乙醇，在40℃～70℃下提取3个小时，过滤，滤液上大孔吸附树脂，依次用6～8倍量柱体积的水、12～15倍量柱体积的30%乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤，减压回收乙醇至无醇味，即得。
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| Title |
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| 陈美玲等: "中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用", 《中医药学报》, vol. 40, no. 2, 30 April 2012 (2012-04-30), pages 10 - 13 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113975304A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-01-28 | 湖南农业大学 | 含板蓝根提取物的抗菌组合物及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103040897B (zh) | 2015-05-13 |
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