CN104884056A - 用于制备缀合物的化合物和方法 - Google Patents

用于制备缀合物的化合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104884056A
CN104884056A CN201380069173.2A CN201380069173A CN104884056A CN 104884056 A CN104884056 A CN 104884056A CN 201380069173 A CN201380069173 A CN 201380069173A CN 104884056 A CN104884056 A CN 104884056A
Authority
CN
China
Prior art keywords
replacement
alkyl
aryl
thiazolinyl
alkynyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201380069173.2A
Other languages
English (en)
Inventor
R·A·库季卡尔
A·E·阿伯斯
D·兰布卡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Redwood Bioscience Inc
Original Assignee
Redwood Bioscience Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Redwood Bioscience Inc filed Critical Redwood Bioscience Inc
Publication of CN104884056A publication Critical patent/CN104884056A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/18—One oxygen or sulfur atom
    • C07D231/20—One oxygen atom attached in position 3 or 5
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/10—Protein-tyrosine kinases (2.7.10)
    • C12Y207/10001—Receptor protein-tyrosine kinase (2.7.10.1)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本公开提供缀合物结构和用于制备这些缀合物的化合物结构。还提供制备通过修饰的氨基酸连接的药物-多肽或可检测的标记-多肽缀合物的方法。公开了用于制备所述缀合物的所述修饰的氨基酸的结构。

Description

用于制备缀合物的化合物和方法
引言
蛋白质-小分子治疗性缀合物领域已经有了极大的进展，从而提供许多临床上有益的药物，并且在未来的几年有希望提供更多。蛋白质-缀合物治疗剂可因例如特异性、多种功能以及相对较低的脱靶活性(从而产生较少副作用)而提供若干优点。蛋白质的化学修饰可通过使其更有效、稳定或多模式而扩展这些优点。
许多标准化学转化常用于产生和操纵蛋白质的翻译后修饰。存在其中能够选择性地修饰某些氨基酸的侧链的许多方法。例如，羧酸侧链(天冬氨酸和谷氨酸)可通过用水溶性碳二亚胺试剂进行初始激活并且随后与胺反应来靶向。类似地，赖氨酸可通过使用激活的酯或异硫氰酸酯来靶向，且半胱氨酸硫醇可用马来酰亚胺和α-卤基-羰基化合物来靶向。
产生化学上改变的蛋白质治疗剂或试剂的一个显著障碍是生物活性同质形式的蛋白质的产生。药物或可检测标记与多肽的缀合可能难以控制，从而产生在连接的药物分子数目和化学缀合的位置方面不同的缀合物的非均匀混合物。在一些情况下，可能需要使用引导化学键在多肽上的精确和选择性形成的合成有机化学工具来控制缀合的位点和/或缀合至多肽的药物或可检测的标记。
发明内容
本公开提供缀合物结构和用于制备这些缀合物的化合物结构。本公开还包涵制备所述缀合物的方法以及其使用方法。
本公开的实施方案包括一种包含至少一个下式的修饰的氨基酸残基的缀合物：
其中
X是N、NH、O、S、CH或CH2；
Y1和Y2各自独立地选自N、O以及S；
n是1或2；
R2选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R4是任选的并且如果存在，则选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R5是任选的并且如果存在，则是氢或羟基；并且
R6选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基，
其中W1和W2中的一个是多肽且另一个是药物或可检测的标记，
其中虚线表示任选的键，
其中当R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键时，n是1并且R4和R5不存在，并且
其中，当n是2时，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键并且R5不存在。
在缀合物的一些实施方案中，Y1是N。
在缀合物的一些实施方案中，Y2是O。
在缀合物的一些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
在缀合物的一些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在缀合物的一些实施方案中，R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键，n是1并且R4和R5不存在。
在缀合物的一些实施方案中，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键，n是1并且R5是羟基。
在缀合物的一些实施方案中，n是2，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键并且R5不存在。
在缀合物的一些实施方案中，X与Y1之间的虚线是键，以使得所述修饰的氨基酸残基具有下式：
在缀合物的一些实施方案中，X与Y1之间的虚线不是键，以使得所述修饰的氨基酸残基具有下式：
在缀合物的一些实施方案中，所述可检测的标记包括荧光团。
在缀合物的一些实施方案中，W1是药物或可检测的标记，并且W2是多肽。
在缀合物的一些实施方案中，W1是多肽，并且W2是药物或可检测的标记。
本公开的实施方案包括一种下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自羟基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在化合物的一些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
在化合物的一些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在化合物的一些实施方案中，R3是取代的芳基。
在化合物的一些实施方案中，R3被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。
在化合物的一些实施方案中，R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。
在化合物的一些实施方案中，R3是-R9W。
在化合物的一些实施方案中，R7是氢。
在化合物的一些实施方案中，R7是卤素。
在化合物的一些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。
在化合物的一些实施方案中，所述化合物为4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(化合物10)；3-(2-巯基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(化合物A4)；3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸(化合物230)；3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯(化合物240)；或N-“载荷”-3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺(化合物250)。
本公开的实施方案包括一种下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R8选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在化合物的一些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
在化合物的一些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在化合物的一些实施方案中，R7是氢。
在化合物的一些实施方案中，R7是卤素。
在化合物的一些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。
在化合物的一些实施方案中，R8是-R9W。
本公开的实施方案包括一种缀合物，其包含一种或多种下式的化合物：
其中
X1和X2各自独立地选自N和CH；
Y1和Y3各自独立地选自N和S；
Y2和Y4各自独立地选自N、O以及S；
R2和R10各自独立地选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W1a、W1b以及W2各自独立地选自药物、可检测的标记以及多肽。
在缀合物的一些实施方案中，Y1和Y3是N。
在缀合物的一些实施方案中，R2和R10各自独立地选自烷基、取代的烷基、芳基以及取代的芳基。
在缀合物的一些实施方案中，R2和R10各自独立地选自甲基、叔丁基以及芳基。
在缀合物的一些实施方案中，Y2和Y4是O。
在缀合物的一些实施方案中，W1a和W1b各自独立地选自药物和可检测的标记，且W2是多肽。
本公开的实施方案包括一种制备缀合物的方法。所述方法包括在反应混合物中合并如权利要求14所述的化合物，与包含反应性基团的第二化合物，其中所述合并是在适于促进所述化合物与所述第二化合物的所述反应性基团之间的反应以形成缀合物的反应条件下进行。所述方法还包括将所述缀合物从所述反应混合物中分离。
在方法的一些实施方案中，R3是-R9W，W是药物或可检测的标记，并且所述第二化合物是多肽。
在方法的一些实施方案中，R3是-R9W，W是多肽，并且所述第二化合物是药物或可检测的标记。
在方法的一些实施方案中，所述反应性基团包括反应性醛基或反应性酮基。
在方法的一些实施方案中，所述反应混合物包含水。
在方法的一些实施方案中，所述反应混合物具有7的pH。
在方法的一些实施方案中，所述反应条件是在37℃的温度下。
本公开的实施方案包括一种药物组合物，其包含如本文所述的缀合物；以及药学上可接受的赋形剂。
本公开的实施方案包括一种向受试者递送缀合物的方法。所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所述的缀合物。
本公开的实施方案包括一种治疗受试者的病状的方法。所述方法包括向患有所述病状的所述受试者施用治疗有效量的包含如本文所述的缀合物的药物组合物，其中所述施用有效治疗所述受试者的所述病状。
本公开的实施方案包括一种包含下式化合物的缀合物：
其中
X是N或CH；
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基和取代的杂环基以及-R9W；
R7和R12各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R13选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺以及-R14W；
R14选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在缀合物的一些实施方案中，X是N。在缀合物的一些实施方案中，X是CH。
在缀合物的一些实施方案中，R3和R11各自独立地选自甲基和苯基。
在缀合物的一些实施方案中，R13是H或取代的烷基。
附图简述
图1显示根据本公开的实施方案的多肽缀合物的示意图。图1A显示用于产生包含环状偶联部分的多肽缀合物的反应方案。图1B显示用于产生包含非环状偶联部分的多肽缀合物的反应方案。
图2显示根据本公开的实施方案官能化的化合物与含有载有醛的甲酰甘氨酸(fGly)残基的肽的反应性。图2A显示包括起始材料(fGly13聚体和化合物80)接着是在不同时间点(1、2、4以及5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图2B是醛标记的抗体与官能化的化合物反应的示意图。
图3显示根据本公开的实施方案官能化的化合物与含有载有醛的甲酰甘氨酸(fGly)残基的肽在2个不同pH下的反应性。图3A显示包括起始材料(fGly 13聚体和起始材料偶联化合物(SM))接着是在不同时间点(在pH 7.4和pH 4.6下2和24小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图3B显示SM双加成至含有6聚体fGly的肽上。图3C是醛标记的抗体与官能化的化合物反应的示意图。
图4显示根据本公开的实施方案的与醛标记的抗体的缀合。图4A显示展现用化合物C或化合物D进行的缀合的示意图。图4B显示起始材料与产物形成的比率，其是通过液相色谱多反应监测质谱(LC-MRM-MS)来分析。由箭头来突出显示使用化合物D的情况下起始材料的消失。化合物C在相同反应条件下不与抗体显著地反应。
图5显示根据本公开的实施方案可检测的标记与抗体的缀合。图5A显示用于合成官能化的可检测的标记的反应方案。图5B显示官能化的可检测的标记与抗体的缀合反应的示意图。图5C显示示出反应结果的SDS-PAGE凝胶的图像。SDS-PAGE被用于将标记的重链从轻链分离。可检测的标记的缀合通过荧光成像来测定。
图6显示抗体-可检测的标记缀合物的稳定性。在37℃下在血浆和血清中8天之后缀合物没有消失。
图7显示根据本公开的实施方案醛标记的抗体(A)(图7，上图)的疏水性相互作用柱(HIC)迹线。醛标记的抗体(A)与Pz-2PEG-美登素在PBS中在pH 7、37℃下在2.5％DMA存在下反应。在24小时之后反应混合物通过疏水性相互作用柱(HIC)来分析(图7，下图)。观察单缀合(B)和双缀合(D)蛋白质缀合物两者。
图8A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物A4)接着是在不同时间点(3和15小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图8B是来自缀合反应的产物I2的LC-MS/MS分析。图8C是来自缀合反应的产物I3的LC-MS/MS分析。图8D是来自缀合反应的产物I4的LC-MS/MS分析。
图9A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物C3)接着是在不同时间点(4和16小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图9B和9C是来自缀合反应的产物C4的LC-MS/MS分析。
图10A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物D1)接着是反应混合物随着时间的一系列RP HPLC迹线。图10B和10C是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。图10D是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
图11A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物G1)接着是在第0.5、5以及10小时时的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图11B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
图12A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物H1)接着是在第1、5.5以及10小时时的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图12B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
图13A显示包括起始材料(fGly 12聚体和双甲酮)接着是在不同时间点(1.5、11.5以及48小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图13B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
图14A显示包括起始材料(fGly 12聚体和麦德鲁姆酸(Meldrum’sacid))接着是在不同时间点(2和14小时)的反应混合物的一系列RPHPLC迹线。图14B是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
图15A显示包括起始材料(fGly 12聚体和巴比妥酸)接着是在不同时间点(2、6.5以及10小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图15B-15D是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
图16显示包括起始材料(fGly 12聚体和季酮酸)接着是在不同时间点(2.5和14.5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
图17显示包括起始材料(fGly 12聚体和4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮)接着是在不同时间点(1.5和13.5小时)的反应混合物的一系列RPHPLC迹线。
图18显示包括起始材料(fGly 12聚体和2(5H)-呋喃酮)接着是在不同时间点(1.5、6和10小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
图19显示包括起始材料(fGly 12聚体和(苯基磺酰基)乙腈)接着是在不同时间点(0.5和12.5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
图20显示包括起始材料(fGly 12聚体和硝基甲基苯基砜)接着是在不同时间点(1和13小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
图21显示示出Pz与C末端醛标记的抗体的轻链无反应的MS数据(上图)。图21(下图)显示主要产物双加成至抗体的重链上。
图22显示在5.5小时之后硫基-Pz-2PEG-美登素与醛标记的抗体的反应的疏水性相互作用柱(HIC)迹线。
图23显示与硫基-Pz-2PEG-美登素缀合的IgG的LC-MS分析。
定义
除非另有指示，以下术语具有以下含义。任何未定义的术语具有其技术领域认可的含义。
“烷基”是指具有1至10个碳原子如1至6个碳原子、或1至5个、或1至4个、或1至3个碳原子的单价饱和脂族烃基。此术语包括例如直链和支链烃基，如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、异丙基((CH3)2CH-)、正丁基(CH3CH2CH2CH2-)、异丁基((CH3)2CHCH2-)、仲丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔丁基((CH3)3C-)、正戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)以及新戊基((CH3)3CCH2-)。
术语“取代的烷基”是指如本文所定义的烷基，其中烷基链中的一个或多个碳原子已经任选地被杂原子如O-、N-、S-、-S(O)n-(其中n是0至2)、-NR-(其中R是氢或烷基)置换并且具有1至5个选自由以下组成的组的取代基：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、SO2-杂芳基以及-NRaRb，其中R'和R”可相同或不同且选自氢、任选取代的烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、杂芳基以及杂环。
“亚烷基”是指优选具有1至6个且更优选1至3个碳原子的二价脂族烃基，其是直链或支链的且其任选地间插有一个或多个选自以下的基团：-O-、-NR10-、-NR10C(O)-、-C(O)NR10-等等。此术语包括例如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚正丙基(-CH2CH2CH2-)、亚异丙基(-CH2CH(CH3)-)、(-C(CH3)2CH2CH2-)、(-C(CH3)2CH2C(O)-)、(-C(CH3)2CH2C(O)NH-)、(-CH(CH3)CH2-)等等。
“取代的亚烷基”是指其中1至3个氢被如在以下“取代的”定义中针对碳所述的取代基置换的亚烷基。
术语“烷烃”是指如本文所定义的烷基和亚烷基。
术语“烷基氨基烷基”、“烷基氨基烯基”和“烷基氨基炔基”是指基团R'NHR”-，其中R'是如本文所定义的烷基且R”是如本文所定义的亚烷基、亚烯基或亚炔基。
术语“烷芳基”或“芳烷基”是指基团-亚烷基-芳基和-取代的亚烷基-芳基，其中亚烷基、取代的亚烷基和芳基如本文所定义。
“烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烷基如本文所定义。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基等等。术语“烷氧基”还指基团烯基-O-、环烷基-O-、环烯基-O-和炔基-O-，其中烯基、环烷基、环烯基和炔基如本文所定义。
术语“取代的烷氧基”是指基团取代的烷基-O-、取代的烯基-O-、取代的环烷基-O-、取代的环烯基-O-和取代的炔基-O-，其中取代的烷基、取代的烯基、取代的环烷基、取代的环烯基和取代的炔基如本文所定义。
术语“烷氧基氨基”是指基团-NH-烷氧基，其中烷氧基如本文所定义。
术语“卤烷氧基”是指基团烷基-O-，其中烷基上的一个或多个氢原子已被卤基取代，并且包括例如像三氟甲氧基等的基团。
术语“卤烷基”是指如上所述的取代的烷基，其中烷基上的一个或多个氢原子已被卤基取代。所述基团的实例包括但不限于氟烷基，如三氟甲基、二氟甲基、三氟乙基等等。
术语“烷基烷氧基”是指基团-亚烷基-O-烷基、亚烷基-O-取代的烷基、取代的亚烷基-O-烷基以及取代的亚烷基-O-取代的烷基，其中烷基、取代的烷基、亚烷基以及取代的亚烷基如本文所定义。
术语“烷基硫烷氧基”是指基团-亚烷基-S-烷基、亚烷基-S-取代的烷基、取代的亚烷基-S-烷基以及取代的亚烷基-S-取代的烷基，其中烷基、取代的烷基、亚烷基以及取代的亚烷基如本文所定义。
“烯基”是指具有2至6个碳原子且优选2至4个碳原子并且具有至少1个且优选1至2个双键不饱和位点的直链或支链烃基。此术语包括例如联乙烯基、烯丙基以及丁-3-烯-1-基。顺式和反式异构体或这些异构体的混合物也包括在此术语内。
术语“取代的烯基”是指具有1至5个取代基、或1至3个取代基的如本文所定义的烯基，所述取代基选自：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基以及-SO2-杂芳基。
“炔基”是指具有2至6个碳原子且优选2至3个碳原子且具有至少1个且优选1至2个三键不饱和位点的直链或支链单价烃基。这类炔基的实例包括乙炔基(-C≡CH)和炔丙基(-CH2C≡CH)。
术语“取代的炔基”是指具有1至5个取代基、或1至3个取代基的如本文所定义的炔基，所述取代基选自：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基以及-SO2-杂芳基。
“炔氧基”是指基团-O-炔基，其中炔基如本文所定义。炔氧基包括例如乙炔氧基、丙炔氧基等等。
“酰基”是指基团H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-、环烷基-C(O)-、取代的环烷基-C(O)-、环烯基-C(O)-、取代的环烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、取代的杂芳基-C(O)-、杂环基-C(O)-以及取代的杂环基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。例如，酰基包括“乙酰基”CH3C(O)-
“酰基氨基”是指基团-NR20C(O)烷基、-NR20C(O)取代的烷基、-NR20C(O)环烷基、-NR20C(O)取代的环烷基、-NR20C(O)环烯基、-NR20C(O)取代的环烯基、-NR20C(O)烯基、-NR20C(O)取代的烯基、-NR20C(O)炔基、-NR20C(O)取代的炔基、-NR20C(O)芳基、-NR20C(O)取代的芳基、-NR20C(O)杂芳基、-NR20C(O)取代的杂芳基、-NR20C(O)杂环以及-NR20C(O)取代的杂环，其中R20是氢或烷基且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“氨基羰基”或术语“氨基酰基”是指基团-C(O)NR21R22，其中R21和R22独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环，并且其中R21与R22任选地用其上所结合的氮接合在一起以形成杂环或取代的杂环基团，并且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“氨基羰基氨基”是指基团-NR21C(O)NR22R23，其中R21、R22和R23独立地选自氢、烷基、芳基或环烷基，或其中两个R基团接合以形成杂环基。
术语“烷氧基羰基氨基”是指基团-NRC(O)OR，其中每个R独立地是氢、烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基以及杂环基如本文所定义。
术语“酰氧基”是指基团烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、环烷基-C(O)O-、取代的环烷基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、杂芳基-C(O)O-以及杂环基-C(O)O-，其中烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、杂芳基以及杂环基如本文所定义。
“氨基磺酰基”是指基团-SO2NR21R22，其中R21和R22独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环，并且其中R21与R22任选地用其上所结合的氮接合在一起以形成杂环或取代的杂环基团，并且烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“磺酰基氨基”是指基团-NR21SO2R22，其中R21和R22独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环，并且其中R21与R22任选地用其上所结合的原子接合在一起以形成杂环或取代的杂环基团，并且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“芳基”或“Ar”是指具有单环(如在苯基中存在的)或包括多个稠环的环系统(这类芳环系统的实例包括萘基、蒽基以及二氢茚基)的6至18个碳原子的单价芳族碳环基团，所述稠环可以是芳族或不是芳族的，只要连接点是经由芳环的原子即可。此术语包括例如苯基和萘基。除非芳基取代基的定义另有限定，这类芳基可任选地被选自以下的1至5个取代基、或1至3个取代基取代：酰氧基、羟基、氢硫基、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的环烷基、取代的环烯基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰基氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、叠氮基、羧基、羧基烷基、氰基、卤素、硝基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、氨基酰氧基、氧基酰基氨基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及三卤甲基。
“芳氧基”是指基团-O-芳基，其中芳基如本文所定义，包括例如苯氧基、萘氧基等等，包括还如本文所定义的任选取代的芳基。
“氨基”是指基团-NH2。
术语“取代的氨基”是指基团-NRR，其中每个R独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、烯基、取代的烯基、环烯基、取代的环烯基、炔基、取代的炔基、芳基、杂芳基及杂环基，只要至少一个R不是氢即可。
术语“叠氮基”是指基团-N3。
“羧基(Carboxyl)”、“羧基(carboxy)”或“羧酸盐”是指-CO2H或其盐。
“羧基酯(Carboxyl ester)”或“羧基酯(carboxy ester)”或术语“羧基烷基(carboxyalkyl)”或“羧基烷基(carboxylalkyl)”是指基团-C(O)O-烷基、-C(O)O-取代的烷基、-C(O)O-烯基、-C(O)O-取代的烯基、-C(O)O-炔基、-C(O)O-取代的炔基、-C(O)O-芳基、-C(O)O-取代的芳基、-C(O)O-环烷基、-C(O)O-取代的环烷基、-C(O)O-环烯基、-C(O)O-取代的环烯基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)O-取代的杂芳基、-C(O)O-杂环以及-C(O)O-取代的杂环，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“(羧基酯)氧基”或“碳酸酯”是指基团-O-C(O)O-烷基、-O-C(O)O-取代的烷基、-O-C(O)O-烯基、-O-C(O)O-取代的烯基、-O-C(O)O-炔基、-O-C(O)O-取代的炔基、-O-C(O)O-芳基、-O-C(O)O-取代的芳基、-O-C(O)O-环烷基、-O-C(O)O-取代的环烷基、-O-C(O)O-环烯基、-O-C(O)O-取代的环烯基、-O-C(O)O-杂芳基、-O-C(O)O-取代的杂芳基、-O-C(O)O-杂环以及-O-C(O)O-取代的杂环，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
“氰基”或“腈”是指基团-CN。
“环烷基”是指具有单个或多个环状环(包括稠合、桥接以及螺环系统)的3至10个碳原子的环状烷基。适合的环烷基的实例包括例如金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等等。这类环烷基包括例如单环结构如环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等等，或多环结构如金刚烷基等等。
术语“取代的环烷基”是指具有1至5个取代基、或1至3个取代基的环烷基，所述取代基选自：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、SO2-芳基以及-SO2-杂芳基。
“环烯基”是指具有单环或多环并且具有至少一个双键且优选1至2个双键的3至10个碳原子的非芳族环状烷基。
术语“取代的环烯基”是指具有1至5个取代基、或1至3个取代基的环烯基，所述取代基选自：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基及-SO2-杂芳基。
“环炔基”是指具有单环或多环并且具有至少一个三键的5至10个碳原子的非芳族环烷基。
“环烷氧基”是指-O-环烷基。
“环烯氧基”是指-O-环烯基。
“卤基”或“卤素”是指氟、氯、溴以及碘。
“羟基(Hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”是指基团-OH。
“杂芳基”是指在环内具有1至15个碳原子(如1至10个碳原子)和1至10个选自由氧、氮以及硫组成的组的杂原子的芳族基团。这类杂芳基可在环系统(例如在如吲嗪基、喹啉基、苯并呋喃、苯并咪唑基或苯并噻吩基的基团中)中具有单环(如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或多个稠环，其中环系统内的至少一个环是芳族的且环系统内的至少一个环是芳族的，只要连接点是经由芳环的原子即可。在某些实施方案中，杂芳基的氮和/或硫环原子任选地被氧化以提供N-氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。此术语包括例如吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基以及呋喃基。除非杂芳基取代基的定义另有限定，这类杂芳基可任选地被选自以下的1至5个取代基、或1至3个取代基取代：酰氧基、羟基、氢硫基、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的环烷基、取代的环烯基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰基氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、叠氮基、羧基、羧基烷基、氰基、卤素、硝基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、氨基酰氧基、氧基酰基氨基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-杂芳基以及三卤甲基。
术语“杂芳烷基”是指基团-亚烷基-杂芳基，其中亚烷基和杂芳基如本文所定义。此术语包括例如吡啶基甲基、吡啶基乙基、吲哚基甲基等等。
“杂芳氧基”是指-O-杂芳基。
“杂环”、“杂环的”、“杂环烷基”以及“杂环基”是指具有单环或多个稠环(包括稠合桥接及螺环系统)且具有3至20个环原子(包括1至10个杂原子)的饱和或不饱和基团。这些环原子选自由以下组成的组：氮、硫或氧，其中在稠环系统中，环中的一个或多个可以是环烷基、芳基或杂芳基，只要连接点是经由非芳环即可。在某些实施方案中，杂环基团的氮和/或硫原子任选地被氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或-SO2-部分。
杂环和杂芳基的实例包括但不限于氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、中氮茚、异吲哚、吲哚、二氢吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异恶唑、吩恶嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚、酞酰亚胺、1,2,3,4-四氢异喹啉、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、吗啉基、硫吗啉基(也称为噻吗啉基(thiamorpholinyl))、1,1-二氧代硫吗啉基、哌啶基、吡咯烷、四氢呋喃基等等。
除非杂环取代基的定义另有限定，这类杂环基团可任选地被选自以下的1至5个、或1至3个取代基取代：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫芳氧基、硫杂芳氧基、硫杂环氧基、氢硫基、硫烷氧基、取代的硫烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及稠合杂环。
“杂环氧基”是指基团-O-杂环基。
术语“杂环硫基”是指基团杂环-S-。
术语“亚杂环基”是指由如本文所定义的杂环形成的二价基团。
术语“羟氨基”是指基团-NHOH。
“硝基”是指基团-NO2。
“氧代”是指原子(＝O)。
“磺酰基”是指基团SO2-烷基、SO2-取代的烷基、SO2-烯基、SO2-取代的烯基、SO2-环烷基、SO2-取代的环烷基、SO2-环烯基、SO2-取代的环烯基、SO2-芳基、SO2-取代的芳基、SO2-杂芳基、SO2-取代的杂芳基、SO2-杂环以及SO2-取代的杂环，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。磺酰基包括例如甲基-SO2-、苯基-SO2-以及4-甲基苯基-SO2-。
“磺酰氧基”是指基团-OSO2-烷基、OSO2-取代的烷基、OSO2-烯基、OSO2-取代的烯基、OSO2-环烷基、OSO2-取代的环烷基、OSO2-环烯基、OSO2-取代的环烯基、OSO2-芳基、OSO2-取代的芳基、OSO2-杂芳基、OSO2-取代的杂芳基、OSO2-杂环以及OSO2-取代的杂环，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环以及取代的杂环如本文所定义。
术语“氨基羰氧基”是指基团-OC(O)NRR，其中每个R独立地是氢、烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环，其中烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基以及杂环如本文所定义。
“氢硫基”是指基团-SH。
“硫代”或术语“硫酮基”是指原子(＝S)。
“烷硫基”或术语“硫烷氧基”是指基团-S-烷基，其中烷基如本文所定义。在某些实施方案中，硫可被氧化为-S(O)-。亚砜可作为一个或多个立体异构体存在。
术语“取代的硫烷氧基”是指基团-S-取代的烷基。
术语“硫芳氧基”是指基团芳基-S-，其中芳基如本文所定义，包括也在本文中定义的任选取代的芳基。
术语“硫杂芳氧基”是指基团杂芳基-S-，其中杂芳基如本文所定义，包括也在本文中定义的任选取代的芳基。
术语“硫杂环氧基”是指基团杂环基-S-，其中杂环基如本文所定义，包括也在本文中定义的任选取代的杂环基。
除本文的公开内容之外，术语“取代的”当用于修饰指定基团(group/radical)时，也可意味指定基团的一个或多个氢原子各自彼此独立地被如下所定义的相同或不同取代基置换。
除了关于本文的个别术语所公开的基团之外，除非另作说明，用于取代指定基团中的饱和碳原子上的一个或多个氢(单一碳上的任何两个氢被＝O、＝NR70、＝N-OR70、＝N2或＝S置换)的取代基是-R60、卤基、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-SO2R70、-SO2O–M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O–M+、-OSO2OR70、-P(O)(O–)2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O–M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70以及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下组成的组：任选取代的烷基、环烷基、杂烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基，每个R70独立地是氢或R60；每个R80独立地是R70或替代地，两个R80与其所键结的氮原子一起形成5-、6-或7-元杂环烷基，所述杂环烷基可任选地包括1至4个选自由O、N以及S组成的组的相同或不同的另外杂原子，其中N可具有-H或C1-C3烷基取代；且每个M+是具有净单个正电荷的抗衡离子。每个M+可独立地是例如碱金属离子，如K+、Na+、Li+；铵离子，如+N(R60)4；或碱土金属离子，如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(“下标0.5意指这类二价碱土金属离子的抗衡离子中的一个可以是离子化形式的本发明化合物且另一个是典型的抗衡离子如氯离子，或本文所公开的两个离子化化合物可充当这类二价碱土金属离子的抗衡离子，或本发明的双离子化化合物可充当这类二价碱土金属离子的抗衡离子)。作为具体实例，-NR80R80意味着包括-NH2、-NH-烷基、N-吡咯烷基、N-哌嗪基、4N-甲基-哌嗪-1-基以及N-吗啉基。
除本文的公开内容之外，除非另作说明，用于“取代的”烯烃、炔烃、芳基及杂芳基中的不饱和碳原子上的氢的取代基是-R60、卤基、-O-M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三卤甲基、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-SO2R70、-SO3 –M+、-SO3R70、-OSO2R70、-OSO3 –M+、-OSO3R70、-PO3 -2(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-CO2 –M+、-CO2R70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OCO2 –M+、-OCO2R70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2 –M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80以及M+如先前所定义，只要在取代的烯烃或炔烃的情况下，取代基不是-O-M+、-OR70、-SR70或-S–M+即可。
除关于本文的个别术语所公开的基团之外，除非另作说明，用于“取代的”杂烷基和环杂烷基中的氮原子上的氢的取代基是-R60、-O-M+、-OR70、-SR70、-S-M+、-NR80R80、三卤甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O-M+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70以及-NR70C(NR70)NR80R8 0，其中R60、R70、R80以及M+如先前所定义。
除本文的公开内容之外，在某一实施方案中，被取代的基团具有1、2、3或4个取代基，1、2或3个取代基，1或2个取代基，或1个取代基。
应了解，在所有上文定义的被取代的基团中，不意图将通过以针对其本身的另外的取代基来对取代基加以限定而得到的聚合物包括于本文中(例如，具有本身被进一步由取代的芳基取代的取代的芳基取代的取代的芳基作为取代基的取代的芳基)。在此类情况下，这类取代的最大数目是三。例如，本文具体地预期的取代的芳基的连续取代限定为取代的芳基-(取代的芳基)-取代的芳基。
除非另作说明，本文中未明确定义的取代基的命名是通过命名官能团的末端部分随后朝向连接点的相邻官能团得出。例如，取代基“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。
至于包含一个或多个取代基的任何本文所公开的基团，当然应理解这类基团不包含空间上不实际的和/或合成上不可行的任何取代或取代方式。另外，本发明化合物包括由这些化合物的取代产生的所有立体化学异构体。
术语“药学上可接受的盐”意指施用于患者(如哺乳动物)所能接受的盐(对于给定的剂量方案，含有抗衡离子的盐具有对哺乳动物可接受的安全性)。这类盐可衍生自药学上可接受的无机或有机碱和药学上可接受的无机或有机酸。“药学上可接受的盐”是指化合物的药学上可接受的盐，所述盐衍生自本领域众所周知的多种有机和无机抗衡离子并且包括，仅举例来说，钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、四烷基铵盐等等；和当所述分子含有碱性官能基时，有机或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、甲酸盐、酒石酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等等。
术语“其盐”意指当酸的质子被阳离子如金属阳离子或有机阳离子等置换时所形成的化合物。在可适用的情况下，所述盐是药学上可接受的盐，但这对于中间体化合物的盐来说是不需要的，因为这样的中间体化合物并不打算向患者施用。举例来说，本发明化合物的盐包括其中化合物被无机或有机酸质子化以形成阳离子的那些盐，其中无机或有机酸的缀合的碱作为所述盐的阴离子组分。
“溶剂合物”是指由溶剂分子与溶质的分子或离子的组合形成的复合物。溶剂可以是有机化合物、无机化合物或两者的混合物。溶剂的一些实例包括但不限于甲醇、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二甲亚砜以及水。当溶剂是水时，所形成的溶剂合物是水合物。
“立体异构体(Stereoisomer/stereoisomers)”是指具有相同的原子连接但在空间上不同的原子排列的化合物。立体异构体包括顺-反异构体、E和Z异构体、对映异构体以及非对映异构体。
“互变异构体”是指仅在原子的电子键结方面和/或质子的位置方面不同的分子，如烯醇-酮基和亚胺-烯胺互变异构体，或含有-N＝C(H)-NH-环原子排列的互变异构形式的杂芳基，如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑以及四唑。本领域的普通技术人员将认识到其它互变异构环原子排列也是可能的。
应当理解，术语“或其盐或溶剂合物或立体异构体”旨在包括盐、溶剂合物和立体异构体的所有排列，如本发明化合物的立体异构体的药学上可接受的盐的溶剂合物。
“药学上有效量”和“治疗上有效量”是指化合物的足以治疗指定的病症或疾病或其一个或多个症状和/或预防疾病或病症的发生的量。关于致瘤增殖性病症，药学上或治疗上有效量包括足以尤其使得肿瘤萎缩或降低肿瘤生长速率的量。
“患者”是指人和非人受试者，尤其是哺乳动物受试者。
如本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”意指治疗患者如哺乳动物(特别是人)的疾病或医学病状，包括：(a)预防疾病或医学病状的发生，如受试者的预防性治疗；(b)改善疾病或医学病状，如消除或引起患者的疾病或医学病状的消退；(c)抑制疾病或医学病状，例如通过减缓或遏制患者的疾病或医学病状的发展；或(d)减轻患者中疾病或医学病状的症状。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，是指任何长度的聚合形式的氨基酸。除非另外具体指出，“多肽”、“肽”和“蛋白质”可包括遗传编码和非编码的氨基酸、化学上或生物化学上修饰或衍生的氨基酸、以及具有修饰的肽骨架的多肽。术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的融合蛋白；具有异源和同源前导序列的融合蛋白；含有至少一个N末端甲硫氨酸残基(例如以促进在重组细菌宿主细胞中的产生)的蛋白；免疫标记的蛋白；等等。
“天然氨基酸序列”或“亲本氨基酸序列”在本文中可互换使用，是指在修饰以包括修饰的氨基酸残基之前的多肽的氨基酸序列。
术语“氨基酸类似物”、“非天然氨基酸”等可互换地使用，并且包括在结构和/或整体形状上与通常在天然存在的蛋白质中所见的一个或多个氨基酸类似的氨基酸样化合物(例如，Ala或A、Cys或C、Asp或D、Glu或E、Phe或F、Gly或G、His或H、Ile或I、Lys或K、Leu或L、Met或M、Asn或N、Pro或P、Gln或Q、Arg或R、Ser或S、Thr或T、Val或V、Trp或W、Tyr或Y)。氨基酸类似物还包括具有修饰的侧链或骨架的天然氨基酸。氨基酸还包括D形式而非L形式的天然存在的氨基酸。在一些情况下，氨基酸类似物共享一个或多个天然氨基酸的骨架结构和/或侧链结构，其中的差异是分子中的一个或多个修饰的基团。这类修饰可包括但不限于用原子(如N)取代相关原子(如S)、添加基团(如甲基或羟基等等)或原子(如Cl或Br等等)、缺失基团、共价键的取代(单键取代双键等等)或其组合。例如，氨基酸类似物可包括α-羟基酸和α-氨基酸等等。
术语“抗体”以最广义使用并且包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体和多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、单链抗体、嵌合抗体、抗体片段(例如Fab片段)等等。抗体能够结合靶抗原。(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immuno Biology,第5版,Garland Publishing,New York)。靶抗原可具有一个或多个结合位点，也称为表位，由互补决定区(CDR)识别，所述互补决定区由抗体的一个或多个可变区形成。
术语“天然抗体”是指其中抗体的重链和轻链已由多细胞生物的免疫系统产生和配对的抗体。脾脏、淋巴结、骨髓和血清是产生天然抗体的组织的实例。例如，由从用抗原免疫的第一动物分离的抗体产生细胞产生的抗体是天然抗体。
术语“人源化抗体”或“人源化免疫球蛋白”是指含有一个或多个已被来自人抗体的相应定位的氨基酸取代的氨基酸(例如在构架区、恒定区或CDR中)的非人(例如小鼠或兔)抗体。一般说来，人源化抗体与非人源化形式的相同抗体相比在人宿主中产生减小的免疫应答。抗体可使用本领域中已知的多种技术被人源化，包括例如CDR移植(EP 239,400；PCT公布WO 91/09967；美国专利号5,225,539；5,530,101；以及5,585,089)、饰面或表面重修(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,Molecular Immunology 28(4/5):489-498(1991)；Studnicka等,Protein Engineering 7(6):805-814(1994)；Roguska.等,PNAS 91:969-973(1994))、以及链改组(美国专利号5,565,332)。在某些实施方案中，构架取代是通过以下操作来鉴定：模拟CDR与构架残基的相互作用以鉴定对于抗原结合来说重要的构架残基并且进行序列比较以鉴定在特定位置处的不寻常构架残基(参见例如，美国专利号5,585,089；Riechmann等,Nature 332:323(1988))。考虑用于本发明中的使抗体人源化的另外方法描述于美国专利号5,750,078；5,502,167；5,705,154；5,770,403；5,698,417；5,693,493；5,558,864；4,935,496和4,816,567，以及PCT公布WO 98/45331和WO 98/45332中。在具体实施方案中，受试兔抗体可根据US20040086979和US20050033031中阐述的方法来人源化。因此，如上所述的抗体可使用本领域中众所周知的方法来人源化。
术语“嵌合抗体”是指其轻链和重链基因典型地通过遗传工程从属于不同物种的抗体可变和恒定区基因构建的抗体。例如，来自小鼠单克隆抗体的基因的可变区段可与人的恒定区段如γ1和γ3接合。治疗性嵌合抗体的一个实例是由小鼠抗体的可变结构域或抗原结合结构域与人抗体的恒定结构域或效应结构域构成的杂合蛋白质，但也可以使用其它哺乳动物物种的结构域。
如关于多肽、肽或蛋白质的氨基酸序列所用的“遗传可编码的”意指氨基酸序列由能通过编码氨基酸序列的核酸的转录和翻译产生的氨基酸残基组成，其中转录和/或翻译可在细胞中或在不含细胞的体外转录/翻译系统中发生。
术语“控制序列”是指促进可操作地连接的编码序列在例如哺乳动物细胞、细菌细胞、不含细胞的合成等的具体表达系统中表达的DNA序列。适用于原核生物系统的控制序列包括例如启动子、任选地操纵子序列以及核糖体结合位点。真核细胞系统可利用启动子、聚腺苷酸化信号以及增强子。
当将核酸置于与另一个核酸序列成某一功能关系中时其是“可操作地连接”。例如，如果被表达为参与多肽分泌的前蛋白，那么前序列或分泌型前导序列的DNA与多肽的DNA可操作地连接；如果影响序列的转录，那么启动子或增强子与编码序列可操作地连接；或如果被定位成促进翻译的起始，那么核糖体结合位点与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”是指所连接的DNA序列是连续的，而且在分泌型前导序列的情况下，是连续的且位于阅读框中。连接是通过连接或经由扩增反应完成。合成的寡核苷酸衔接子或接头可根据常规实践用于连接序列。
如本文所用的术语“表达盒”是指核酸、通常是DNA的可被插入核酸中的区段(例如，通过使用与连接至所关注的构建体相容的限制性位点或通过同源重组到所关注的构建体或宿主细胞基因组中)。一般说来，所述核酸区段包含编码所关注的多肽的多核苷酸，并且盒与限制性位点被设计来促进盒向适当的阅读框中的插入以用于转录和翻译。表达盒还可包含促进编码所关注的多肽的多核苷酸在宿主细胞中的表达的元件。这些元件可包括但不限于：启动子、最小启动子、增强子、响应元件、终止序列、聚腺苷酸化序列等等。
如本文所用的术语“分离的”意在描述处于不同于化合物天然存在的环境的环境中的所关注的化合物。“分离的”意在包括样品内的化合物，所述样品充分富集了所关注的化合物和/或其中所关注的化合物部分地或基本上被纯化。
如本文所用的术语“基本上纯化的”是指从自然环境中移出的且自与其在天然状态下有关联的其它组分至少60％脱离、至少75％脱离、至少80％脱离、至少85％脱离、至少90％脱离、至少95％脱离、至少98％脱离、或超过98％脱离出的化合物。
术语“生理条件”意在包涵与活细胞相容的那些条件，例如与活细胞相容的温度、pH、盐度等等的主要水性条件。
“反应性搭配物”意指与另一反应性搭配物特异性地反应以产生反应产物的分子或分子部分。示例性反应性搭配物包括硫酸酯酶基序的半胱氨酸或丝氨酸和甲酰甘氨酸生成酶(FGE)，其反应以形成含有甲酰甘氨酸(fGly)代替基序中的半胱氨酸或丝氨酸的转化醛标记的反应产物。其它示例性反应性搭配物包括转化醛标记的fGly残基的醛和“醛反应性的反应性搭配物”，其包含醛反应性基团和所关注的部分，并且其反应以形成具有经由修饰的fGly残基缀合至修饰的多肽的所关注的部分的修饰的醛标记的多肽的反应产物。
“N末端”是指具有游离胺基的多肽的末端氨基酸残基，其在非N末端氨基酸残基中的胺基一般形成多肽共价骨架的一部分。
“C末端”是指具有游离羧基的多肽的末端氨基酸残基，其在非C末端氨基酸残基中的羧基一般形成多肽共价骨架的一部分。
如关于多肽或多肽的氨基酸序列所用的“内部位点”意指不在N末端或C末端处的多肽的区域。
在进一步描述本发明前，应理解本发明不限于所描述的特定实施方案，这些实施方案当然是可改变的。还应理解，本文所用术语只是为了描述特定的实施方案，而不是意图限定，因为本发明的范围仅由随附的权利要求书来限定。
当提供一个数值范围时，应理解在该范围的上限和下限之间的每个间插数值，除非在上下文中另外明确规定否则精确到下限单位的十分之一，以及所述范围内的任何其它所述或间插值都包涵在本发明内。这些更小范围的上限和下限可独立地包含在所述更小的范围内，并且也包涵在本发明的范围内，除非在所述范围内具体排除了任何上限或下限。当所述范围包括所述上下限中的一个或两个时，排除了那些所包括的上下限中的一个或两个的范围也包括在本发明范围内。
应当理解，为了清楚起见而在分开的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征，也可以在单个实施方案中组合地提供。相反地，为了简明起见而在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征，也可以分开地或以任何适合的子组合方式提供。关于本发明的实施方案的所有组合皆具体地涵盖在本发明中且公开在本文中，就如同每个和所有组合均个别地且明确地公开一般，其程度是所述组合涵盖是例如稳定化合物(即，可制备、分离、表征且测试化合物的生物活性)的化合物的主题。另外，各种实施方案以及其要素(例如，化学基团的要素列在描述这类变量的实施方案中)的所有子组合也具体地涵盖在本发明中并且公开在本文中，就如同每个和所有这类子组合个别地且明确地在本文中公开一样。
除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义。虽然类似于或等效于本文所述的那些的任何方法和材料还可以用于实践或测试本发明，但现在描述优选方法和材料。本文所提及的全部公开物以引用的方式并入本文，从而结合所引证的公开物公开和描述方法和/或材料。
应注意，除非上下文中另外清楚指出，如本文和所附权利要求书中所用的单数形式“一个(种)”和“所述”包括复数指示物。还应注意，权利要求书可能撰写成排除了任何可选要素。因此，此声明旨在充当结合权利要求书要素的叙述使用如“单独”、“仅仅”等这类排除性术语或采用“负”限制的前提基础。
应当理解，为了清楚起见而在分开的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征，也可以在单个实施方案中组合地提供。相反地，为了简明起见而在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征，也可以分开地或以任何适合的子组合方式提供。
本文所讨论的公开物只提供在本申请的申请日之前的公开内容。本文中的任何内容都不能被解释为承认本发明无权借助于在先发明使公开日期提前。此外，所提供的公开日期可能不同于真实的公开日期，真实的公开日期可能需要独立地进行确认。
详细描述
本公开提供缀合物(例如多肽缀合物)、用于制备缀合物的化合物以及其制造和使用方法。各自的实施方案在以下部分中更详细地描述。
缀合物
本公开提供缀合物。“缀合物”意指与第二部分稳定地缔合的第一部分。“稳定地缔合”意指部分在标准条件下结合至另一部分或结构。在某些实施方案中，第一与第二部分经由一个或多个共价键彼此结合。
在某些实施方案中，缀合物是多肽缀合物，其包含缀合至第二部分的多肽。如下文中更详细地描述，缀合至多肽的部分可以是多种部分中的任一种，如但不限于可检测的标记、药物、水溶性聚合物、或用于将多肽固定在膜或表面上的部分。所关注的部分可在多肽的任何所需位点处缀合至多肽。因此，本公开提供例如一种在多肽的C末端或附近的位点处具有缀合的部分的修饰的多肽。其它实例包括一种在多肽的N末端或附近的位置处具有缀合的部分的修饰的多肽。实例还包括一种在多肽的C末端与N末端之间的位置(例如在多肽的内部位点处)处具有缀合的部分的修饰的多肽。上述的组合在修饰的多肽缀合至两个或更多个部分时也是可能的。
本公开的实施方案包括其中多肽缀合至一个或多个部分，如2个部分、3个部分、4个部分、5个部分、6个部分、7个部分、8个部分、9个部分、或10个或更多个部分的缀合物。所述部分可在多肽中的一个或多个位点处缀合至多肽。例如，一个或多个部分可缀合至多肽的单一氨基酸残基。在一些情况下，一个部分缀合至多肽的一个氨基酸残基。在其它实施方案中，两个部分可缀合至多肽的同一氨基酸残基。在其它实施方案中，第一部分缀合至多肽的第一氨基酸残基且第二部分缀合至多肽的第二氨基酸残基。以上组合也是可能的，例如其中多肽在第一氨基酸残基处缀合至第一部分且在第二氨基酸残基处缀合至两个其它部分。其它组合也是可能的，如但不限于，在第一氨基酸残基处缀合至第一和第二部分且在第二氨基酸残基处缀合至第三和第四部分的多肽，等等。
缀合至一个或多个部分的一个或多个氨基酸残基可以是天然存在的氨基酸、非天然氨基酸或其组合。例如，缀合物可包括缀合至多肽的天然存在的氨基酸残基的部分。在其它情况下，缀合物可包括缀合至多肽的非天然氨基酸残基的部分。一个或多个部分可在如上所述的单个天然或非天然氨基酸残基处缀合至多肽。多肽中的一个或多个天然或非天然氨基酸残基可缀合至如本文所述的一个或多个部分。例如，多肽中的两个(或更多个)氨基酸残基(例如天然或非天然氨基酸残基)可各自缀合至一个或两个部分，这样使得多肽中的多个位点被修饰。
虽然本文就缀合至一个或多个部分(例如，药物、可检测的标记、多肽等等)的多肽进行描述，但本公开的实施方案还包括以下缀合物，其中部分(例如，药物或可检测的标记)缀合至一个或多个其它部分(例如，药物、可检测的标记、多肽等等)。例如，药物可缀合至一个或多个其它部分(例如，药物、可检测的标记、多肽等等)，或在其它实施方案中，可检测的标记可缀合至一个或多个其它部分(例如，药物、可检测的标记、多肽等等)。因此，例如，本公开的实施方案包括但不限于以下：多肽与药物的缀合物；多肽与可检测的标记的缀合物；两种或更多种多肽的缀合物；两种或更多种药物的缀合物；两种或更多种可检测的标记的缀合物；药物与可检测的标记的缀合物；多肽、药物与可检测的标记的缀合物；多肽与两种或更多种药物的缀合物；多肽与两种或更多种可检测的标记的缀合物；药物与两种或更多种多肽的缀合物；可检测的标记与两种或更多种多肽的缀合物；等等。
在某些实施方案中，多肽与所关注的部分经由偶联部分缀合。例如，多肽与所关注的部分可各自结合(例如共价键合)至偶联部分，由此将多肽与所关注的部分间接结合在一起。在一些情况下，偶联部分包括吡嗪啉酮(Pz，pyrazalinone)化合物或吡嗪啉酮化合物的衍生物。例如，用于将部分与多肽经由吡嗪啉酮偶联部分偶联的一般方案显示于以下一般反应方案中。
在以上反应方案中，R可以是缀合至多肽的所关注的部分。如本文所述，部分可以是多种部分中的任一种，如但不限于可检测的标记、药物、水溶性聚合物、或用于将多肽固定在膜或底物的表面上的部分。R’可以是任何所需的取代基，如但不限于氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。多肽与吡嗪啉酮偶联部分之间的键可以是单键或双键，如下文中更详细地描述。其它偶联部分也是可能的，如下文更详细地描述的缀合物和化合物中所示。
在某些实施方案中，所述缀合物包含至少一个下式的修饰的氨基酸残基：
其中
X是N、NH、O、S、CH或CH2；
Y1和Y2各自独立地选自N、O以及S；
n是1或2；
R2选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R4是任选的并且如果存在，则选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R5是任选的并且如果存在，则是氢或羟基；并且
R6选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基，
其中W1和W2中的一个是多肽且另一个是药物或可检测的标记，
其中虚线表示任选的键，
其中当R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键时，n是1并且R4和R5不存在，并且
其中，当n是2时，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键并且R5不存在。
在某些实施方案中，X是N、NH、O、S、CH或CH2。在某些实施方案中，X是N或NH。在某些实施方案中，X是O。在某些实施方案中，X是S。在某些实施方案中，X是CH或CH2。
在某些实施方案中，Y1和Y2各自独立地选自N、O以及S。在某些实施方案中，Y1是N。在某些实施方案中，Y1是O。在某些实施方案中，Y1是S。在某些实施方案中，Y2是N。在某些实施方案中，Y2是O。在某些实施方案中，Y2是S。
在某些实施方案中，Y1是N且Y2是O。在某些实施方案中，Y1是N且X是N。
在某些实施方案中，n是1或2。在某些实施方案中，n是1。在这些实施方案中，多肽可以缀合至单一部分。例如，在W2是多肽，W1是缀合部分且n是1的实施方案中，多肽缀合至一个部分。例如，如上所述，W1可以是药物或可检测的标记，因此多肽可在多肽的氨基酸残基处缀合至一个药物部分或一个可检测的标记。在某些实施方案中，W1可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。
在某些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，缀合物可包括在多肽的单个氨基酸残基处缀合至两个部分的多肽。例如，在W2是多肽，W1是缀合部分且n是2的实施方案中，多肽在单个氨基酸残基处缀合至两个部分。例如，如上所述，W1可以是药物或可检测的标记，因此多肽可在单个氨基酸残基处缀合至两个药物部分或两个可检测的标记。在其它实施方案中，W1可以是多肽且W2可以是药物或可检测的标记。在这些实施方案中，当n是2时，药物或可检测的标记可缀合至两个多肽。在某些实施方案中，W1和/或W2可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。
在某些实施方案中，R2选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R2是氢。在某些实施方案中，R2是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R2是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R2是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R2是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R2是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R2是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R2可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R2是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R2是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在某些实施方案中，R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R3是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R3是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R3是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R3是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R3是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R3是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R3是酰基氨基。在某些实施方案中，R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R3是芳基或取代的芳基。例如，在一些情况下，R3是苯基或取代的苯基。在某些实施方案中，R3是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R3是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R3是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R4存在。在其中存在R4的实施方案中，R4可选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R4是氢。在某些实施方案中，R4是卤素，如F、Cl、Br或I。在某些实施方案中，R4是F。在某些实施方案中，R4是Cl。在某些实施方案中，R4是Br。在某些实施方案中，R4是I。在某些实施方案中，R4是氰基。在某些实施方案中，R4是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R4是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R4是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R4是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R4是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R5存在。在其中存在R5的实施方案中，R5可以是氢或羟基。在某些实施方案中，R5是氢。在某些实施方案中，R5是羟基。
在某些实施方案中，R4和R5两者均存在。例如，在一些实施方案中，n是1且R4-碳与R5-碳之间的虚线不存在的(即，R4-碳与R5-碳之间的键是单键而不是双键)。在这些实施方案中，R4和R5两者均存在。例如，R5可以是羟基且R4可如上所述。
在某些实施方案中，R4不存在。在某些实施方案中，R5不存在。例如，当R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键时，R4和R5不存在。在这些实施方案中，n是1。在其它实施方案中，R4或R5中的一个可以不存在。例如，在一些实施方案中，n是2且R4-碳与R5-碳之间的虚线可以不存在(即，R4-碳与R5-碳之间的键是单键而非双键)。在这些实施方案中，R5不存在且R4存在。
在某些实施方案中，R6选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R6是氢。在某些实施方案中，R6是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R6是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R6是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R6是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R6是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R6是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R6是酰基氨基。在某些实施方案中，R6是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R6是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R6是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R6是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R6是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，W1和W2中的一者是多肽且另一者是药物或可检测的标记。在某些实施方案中，W1是药物或可检测的标记，且W2是多肽。在某些实施方案中，W1是多肽且W2是药物或可检测的标记。
在某些实施方案中，X与Y1之间的虚线是键，以使得修饰的氨基酸残基具有下式：
在这些实施方案中，元素R2、R3、R4、R5、R6、W1、W2、X、Y1、Y2以及n如上所述。
在某些实施方案中，X与Y1之间的虚线不是键，以使得修饰的氨基酸残基具有下式：
在这些实施方案中，元素R2、R3、R4、R5、R6、W1、W2、X、Y1、Y2以及n如上所述。
如上所述，在缀合物的某些实施方案中，n是2。在这些实施方案中，缀合物可包括在三个部分之间的缀合。例如，缀合物的实施方案可包括具有一种或多种下式化合物的缀合物：
其中
X1和X2各自独立地选自N和CH；
Y1和Y3各自独立地选自N和S；
Y2和Y4各自独立地选自N、O以及S；
R2和R10各自独立地选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基，
W1a、W1b以及W2各自独立地选自药物、可检测的标记以及多肽。
在某些实施方案中，X1和X2各自独立地选自N和CH。在某些实施方案中，X1是N。在某些实施方案中，X1是CH。在某些实施方案中，X2是N。在某些实施方案中，X2是CH。在某些实施方案中，X1和X2是N。在某些实施方案中，X1和X2是CH。在某些实施方案中，X1是N且X2是CH。在某些实施方案中，X1是CH且X2是N。
在某些实施方案中，Y1和Y3各自独立地选自N和S。在某些实施方案中，Y1是N。在某些实施方案中，Y1是S。在某些实施方案中，Y3是N。在某些实施方案中，Y3是S。在某些实施方案中，Y1和Y3是N。在某些实施方案中，Y1和Y3是S。在某些实施方案中，Y1是N且Y3是S。在某些实施方案中，Y1是S且Y3是N。
在某些实施方案中，Y2和Y4各自独立地选自N、O以及S。在某些实施方案中，Y2是N。在某些实施方案中，Y2是O。在某些实施方案中，Y2是S。在某些实施方案中，Y4是N。在某些实施方案中，Y4是O。在某些实施方案中，Y4是S。在某些实施方案中，Y2和Y4是O。
在某些实施方案中，R2选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R2是氢。在某些实施方案中，R2是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R2是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R2是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R2是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R2是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R2是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R2可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R2是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R2是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在某些实施方案中，R10选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R10是氢。在某些实施方案中，R10是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R10是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R10是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R10是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R10是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R10是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R10是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R10是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R10可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如，C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R10是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R10是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R10是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R10是甲基、叔丁基或芳基。
在某些实施方案中，R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R3是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R3是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R3是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R3是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R3是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R3是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R3是酰基氨基。在某些实施方案中，R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R3是芳基或取代的芳基。例如，在一些情况下，R3是苯基或取代的苯基。在某些实施方案中，R3是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R3是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R3是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R11选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R11是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R11是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R11是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R11是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R11是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R11是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R11是酰基氨基。在某些实施方案中，R11是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R11是芳基或取代的芳基。例如，在一些情况下，R11是苯基或取代的苯基。在某些实施方案中，R11是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R11是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R11是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，W1a、W1b以及W2各自独立地选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W1a是药物或可检测的标记。在某些实施方案中，W1a是多肽。在某些实施方案中，W1b是药物或可检测的标记。在某些实施方案中，W1b是多肽。在某些实施方案中，W2是药物或可检测的标记。在某些实施方案中，W2是多肽。例如，W2可以是多肽且W1a和W1b可各自是药物或可检测的标记。在这些实施方案中，两个部分可缀合至多肽的单一氨基酸残基。例如，W2可以是多肽且W1a和W1b可各自是药物。在其它情况下，W2可以是多肽且W1a和W1b可各自是可检测的标记。在其它情况下，W2可以是多肽且W1a和W1b中的一者是药物且另一者是可检测的标记。
缀合部分的其它组合也是可能的。例如，在一些情况下，W1a可以是多肽，W1b可以是药物或可检测的标记且W2可以是药物或可检测的标记。在其它情况下，W1a可以是药物或可检测的标记，W1b可以是多肽且W2可以是药物或可检测的标记。在其它情况下，W1a可以是多肽，W1b可以是多肽且W2可以是药物或可检测的标记。在其它情况下，W1a可以是多肽，W1b可以是药物或可检测的标记且W2可以是多肽。在其它情况下，W1a可以是药物或可检测的标记，W1b可以是多肽且W2可以是多肽。在其它情况下，W1a、W1b以及W2各自是多肽。在其它情况下，W1a、W1b以及W2各自独立地选自药物和可检测的标记。
在某些实施方案中，W1a、W1b以及W2中的一个或多个可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。
适用于制备缀合物的化合物
本公开提供适用于制备本文所述的缀合物的化合物。在某些实施方案中，所述化合物可以是适用于多肽与第二部分的缀合的偶联部分。例如，化合物可结合至多肽并且还结合至第二部分，因此间接地将多肽与第二部分结合在一起。
在某些情况下，化合物可以是吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物。化合物的实施方案包括下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自羟基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在某些实施方案中，R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基及取代的杂环基。在某些实施方案中，R2是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R2是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R2是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R2是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R2是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R2是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R2可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R2是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R2是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。在某些实施方案中，R2是正丙基或取代的正丙基。例如，R2可以是正丙基或被如但不限于以下的一个或多个基团取代的正丙基：羟基、氨基、卤基、氰基等等。在一些情况下，R2可以是被氰基取代的正丙基。在一些情况下，R2可以是被两个氰基取代的正丙基。
在某些实施方案中，R3选自羟基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W。在某些实施方案中，R3是羟基。在某些实施方案中，R3是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R3是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R3是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R3是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R3是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R3是酰基、羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R3是酰基氨基。在某些实施方案中，R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R3是芳基或取代的芳基。例如，在一些情况下，R3是苯基或取代的苯基。在某些实施方案中，R3是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R3是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R3是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R3是-R9W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R9在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R3被一个或多个基团取代以促进化合物与第二部分的偶联。例如，R3可被一个或多个反应性基团取代。在一些情况下，一个或多个反应性基团可被构造来与第二部分(例如药物、可检测的标记或多肽)上的相应的反应性搭配物反应以促进化合物与第二部分的偶联。例如，在某些实施方案中，R3被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、氨基酰基、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。
在某些实施方案中，R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R7是氢。在某些实施方案中，R7是卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施方案中，R7是F。在某些实施方案中，R7是Cl。在某些实施方案中，R7是Br。在某些实施方案中，R7是I。在某些实施方案中，R7是氰基。在某些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R7是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R7是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R7是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R7是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R9是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R9是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R9是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R9是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R9是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R9是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R9是酰基氨基。在某些实施方案中，R9是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R9是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R9是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R9是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R9是杂环基或取代的杂环基。
在一些情况下，R2可以是取代的烷基，如取代的C1-6烷基或取代的C1-3烷基。在一些情况下，R2是取代的乙基。取代的烷基可被本文所定义的任何取代基取代。例如，取代的烷基可被氢硫基或酰基氨基取代。
在一些情况下，所述化合物可以是上述式的化合物，其中R2是取代的乙基，所述取代的乙基被氢硫基取代，R3是烷基(如C1-6烷基或C1-3烷基)且R7是氢。在这些实施方案中，所述化合物可以是3-(2-巯基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(化合物A4)。
在一些情况下，R3可以是取代的烷基，如取代的C1-6烷基或取代的C1-3烷基。在一些情况下，R3是取代的甲基或取代的乙基。取代的烷基可被本文所定义的任何取代基取代。例如，R3可以是取代的甲基。在一些情况下，甲基被羧基或氨基酰基取代。在一些情况下，甲基被氨基酰基取代。另外，如本文所述，本公开的化合物可缀合至药物、可检测的标记或多肽。例如，如在上式中所述，R3可以是-R9W，其中W是药物、可检测的标记或多肽(例如“载荷(cargo)”)。在一些情况下，“载荷”可经由酰胺键缀合至本文所述的化合物。例如，“载荷”可经由酰胺键缀合至化合物以得到下式的化合物：
在一些情况下，当R3是取代的烷基时，取代的烷基可被接头部分取代。接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。此外，接头基团中的最后一个环氧乙烷基团可进一步被一个或多个如本文所定义的官能团取代：例如像烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、氨基酰基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基或取代的杂环基。在一些情况下，接头基团中的最后一个环氧乙烷基团可进一步被羧基或保护的羧基如全氟苯基保护的羧基取代。
例如，上式的具体化合物包括但不限于3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸(化合物230)和3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯(化合物240)。
另外，如本文所述，本公开的化合物可缀合至药物、可检测的标记或多肽。例如，如在上式中所述，R3可以是-R9W，其中W是药物、可检测的标记或多肽(例如“载荷”)。在一些情况下，“载荷”可经由酰胺键缀合至本文所述的化合物。例如，“载荷”可经由形成酰胺键缀合至本文所述的化合物240，从而产生N-“载荷”-3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺(化合物250)。
在某些实施方案中，所述化合物可以是吡嗪啉酮衍生物。所述化合物的实施方案包括下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R10选自烷基、取代的烷基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在某些实施方案中，R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R2是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R2是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R2是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R2是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R2是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R2是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R2可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R2是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R2是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在某些实施方案中，R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R7是氢。在某些实施方案中，R7是卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施方案中，R7是F。在某些实施方案中，R7是Cl。在某些实施方案中，R7是Br。在某些实施方案中，R7是I。在某些实施方案中，R7是氰基。在某些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R7是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R7是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R7是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R7是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R10选自烷基、取代的烷基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W。在某些实施方案中，R10是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R10是羟基。在某些实施方案中，R10是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R10是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R10是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R10是酰胺或取代的酰胺。在某些实施方案中，R10是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R10是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R10是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R10是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R10是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R10是-R9W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括接头部分，经由所述接头部分，药物、可检测的标记或多肽缀合至化合物。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R9在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R9是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R9是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R9是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R9是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R9是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R9是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R9是酰基氨基。在某些实施方案中，R9是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R9是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R9是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R9是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R9是杂环基或取代的杂环基。
上式化合物的一个实例包括一种化合物，其中R2是甲基，R7是氢且R10是羟基。例如，所述化合物可以是4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(化合物10)。
上式化合物的另一实例包括一种化合物，其中R10是氨基或取代的氨基。在这些实施方案中，所述化合物可以是吡嗪啉酮衍生物，如下式化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R8选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在某些实施方案中，R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R2是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R2是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R2是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R2是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R2是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R2是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。例如，R2可以是烷基或取代的烷基，如C1-C10烷基或C1-C10取代的烷基(例如C1-C6烷基或C1-C6取代的烷基)。在一些情况下，R2是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。在某些情况下，R2是甲基或叔丁基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基、芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R2是甲基、叔丁基或芳基。
在某些实施方案中，R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R7是氢。在某些实施方案中，R7是卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施方案中，R7是F。在某些实施方案中，R7是Cl。在某些实施方案中，R7是Br。在某些实施方案中，R7是I。在某些实施方案中，R7是氰基。在某些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R7是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R7是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R7是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R7是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R8选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W。在某些实施方案中，R8是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R8是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R8是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R8是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R8是酰胺或取代的酰胺。在某些实施方案中，R8是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R8是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R8是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R8是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R8是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R8是-R9W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R9在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R9是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R9是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R9是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R9是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R9是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R9是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R9是酰基氨基。在某些实施方案中，R9是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R9是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R9是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R9是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R9是杂环基或取代的杂环基。
另外的化合物
在某些情况下，所述化合物可以是双吡嗪啉酮或双吡嗪啉酮衍生物。所述化合物的实施方案包括下式的化合物：
其中
X是N或CH；
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基、以及-R9W；
R7和R12各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R13选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺以及-R14W；
R14选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
在某些实施方案中，X是N或CH。在某些实施方案中，X是N。在某些实施方案中，X是CH。
在某些实施方案中，R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基、以及-R9W。在某些实施方案中，R3是烷基或取代的烷基。例如，R3可以是烷基，如C1-6烷基，包括C1-3烷基。在一些情况下，R3是甲基。在某些实施方案中，R3是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R3是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R3是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R3是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R3是酰基、羧基、羧基酯或酰基氨基。在某些实施方案中，R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R3是芳基或取代的芳基。例如，R3可以是芳基，如苯基。在某些实施方案中，R3是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R3是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R3是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R3是-R9W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括接头部分，经由所述接头部分，药物、可检测的标记或多肽缀合至化合物。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R9在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R3被一个或多个基团取代以促进化合物与第二部分的偶联。例如，R3可被一个或多个反应性基团取代。在一些情况下，一个或多个反应性基团可被构造来与第二部分(例如药物、可检测的标记或多肽)上的相应的反应性搭配物反应以促进化合物与第二部分的偶联。例如，在某些实施方案中，R3被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。
在某些实施方案中，R11选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基、以及-R9W。在某些实施方案中，R11是烷基或取代的烷基。例如，R11可以是烷基，如C1-6烷基，包括C1-3烷基。在一些情况下，R11是甲基。在某些实施方案中，R11是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R11是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R11是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R11是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R11是酰基、羧基、羧基酯或酰基氨基。在某些实施方案中，R11是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R11是芳基或取代的芳基。例如，R11可以是芳基，如苯基。在某些实施方案中，R11是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R11是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R11是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R11是-R9W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括接头部分，经由所述接头部分，药物、可检测的标记或多肽缀合至化合物。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R9在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R11被一个或多个基团取代以促进化合物与第二部分的偶联。例如，R11可被一个或多个反应性基团取代。在一些情况下，一个或多个反应性基团可被构造来与第二部分(例如药物、可检测的标记或多肽)上的相应的反应性搭配物反应以促进化合物与第二部分的偶联。例如，在某些实施方案中，R11被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。
在某些实施方案中，R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R7是氢。在某些实施方案中，R7是卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施方案中，R7是F。在某些实施方案中，R7是Cl。在某些实施方案中，R7是Br。在某些实施方案中，R7是I。在某些实施方案中，R7是氰基。在某些实施方案中，R7是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R7是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R7是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R7是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R7是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R12选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯。在某些实施方案中，R12是氢。在某些实施方案中，R12是卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施方案中，R12是F。在某些实施方案中，R12是Cl。在某些实施方案中，R12是Br。在某些实施方案中，R12是I。在某些实施方案中，R12是氰基。在某些实施方案中，R12是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R12是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R12是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R12是烷基烷氧基或取代的烷基烷氧基。在某些实施方案中，R12是酰基、羧基或羧基酯。
在某些实施方案中，R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R9是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R9是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R9是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R9是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R9是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R9是羧基或羧基酯。在某些实施方案中，R9是酰基氨基。在某些实施方案中，R9是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R9是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R9是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R9是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R9是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，R13选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺以及-R14W。在某些实施方案中，R13是氢。在某些实施方案中，R13是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R13是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R13是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R13是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R13是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R13是酰基、羧基、羧基酯或酰基氨基。在某些实施方案中，R13是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。
在某些实施方案中，R13是-R14W。在某些实施方案中，W选自药物、可检测的标记以及多肽。在某些实施方案中，W是药物。在某些实施方案中，W是可检测的标记。在某些实施方案中，W是多肽。在某些实施方案中，W可包括药物、可检测的标记或多肽经由其缀合至化合物的接头部分。例如，接头部分可包括一个或多个单体单元，如式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类单元的数目可以变化，其中这类单元的数目是2至10、2至8、2至6、2至4，例如，一些实施方案包括2个单元。R14在下文中更详细地描述。
在某些实施方案中，R14选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。在某些实施方案中，R14是烷基或取代的烷基。在某些实施方案中，R14是烯基或取代的烯基。在某些实施方案中，R14是炔基或取代的炔基。在某些实施方案中，R14是烷氧基或取代的烷氧基。在某些实施方案中，R14是氨基或取代的氨基。在某些实施方案中，R14是羧基、羧基酯或酰基氨基。在某些实施方案中，R14是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。在某些实施方案中，R14是芳基或取代的芳基。在某些实施方案中，R14是杂芳基或取代的杂芳基。在某些实施方案中，R14是环烷基或取代的环烷基。在某些实施方案中，R14是杂环基或取代的杂环基。
在某些实施方案中，当X是CH时，R13是H。在某些实施方案中，当X是CH时，R13是烷基或取代的烷基。例如，R13可以是C1-10烷基或C1-10取代的烷基，如C1-8烷基或C1-8取代的烷基、或C1-6烷基或C1-6取代的烷基、或C1-4烷基或C1-4取代的烷基。例如，在一些情况下，取代的烷基可被酰基氨基或氨基酰基取代。
靶多肽
广泛多种多肽中的任一种可被修饰以便缀合至如上所述的第二部分。适用于修饰的多肽包括具有天然存在的氨基酸序列、天然存在的多肽片段、以及非天然存在的多肽和其片段的蛋白质。
以下是对于使用本文所述的化合物和方法进行修饰以产生本文所述的多肽缀合物来说所关注的多肽类别和类型的实例。
治疗性多肽
在某些实施方案中，将制备缀合物的方法应用于可提供治疗益处的多肽的修饰，如那些连接至部分可提供以下一个或多个的多肽：例如增加的血清半衰期、减少的不利的免疫应答、另外或替代的生物活性或功能性等等，或其它益处或不良副作用的减少。当治疗性多肽是用于疫苗的抗原时，修饰可提供多肽的提高的免疫原性。
治疗性蛋白质的类别的实例包括为细胞因子、趋化因子、生长因子、激素、抗体以及抗原的那些。其它实例包括但不限于以下：促红细胞生成素(EPO，例如天然EPO或合成EPO(参见例如，US 2003/0191291)，如但不限于例如或(依泊汀-α)、(达贝泊汀-α)、 (依泊汀-β)等)；生长激素(例如促生长素，例如 等等)；人生长激素(hGH)；牛生长激素(bGH)；卵泡刺激激素(FSH)；干扰素(例如IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-τ、复合干扰素等)；胰岛素(例如诺和灵(Novolin)、优泌林(Humulin)、优泌乐(Humalog)、来得时(Lantus)、特慢胰岛素(Ultralente)等等)、胰岛素样生长因子(例如IGF-I、IGF-II)；血液因子(例如因子X、组织纤溶酶原激活因子(TPA)等，如但不限于例如(阿替普酶)组织纤溶酶原激活因子、(重组人因子VIIa)、因子VIIa、因子VIII(例如)、因子IX、β-球蛋白、血红蛋白等等)；集落刺激因子(例如粒细胞-CSF(G-CSF，例如(非格司亭))、巨噬细胞-CSF(M-CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)、Neulasta(聚乙二醇化非格司亭)、粒细胞-单核细胞集落刺激因子、巨核细胞集落刺激因子等等)、转化生长因子(例如TGF-β、TGF-α)；白介素(例如IL-1、IL-2(例如)、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12等等)；生长因子(例如表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF，例如(贝可拉明(beclapermin)))、成纤维细胞生长因子(FGF，例如aFGF、bFGF，如 (曲弗明(trafermin)))、胶质细胞系衍生的生长因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、干细胞因子(例如(安塞司亭(ancestim)))、角化细胞生长因子、肝细胞生长因子等)；可溶性受体(例如，TNF-α结合的可溶性受体，如(依那西普)、可溶性VEGF受体、可溶性白介素受体、可溶性γ/δT细胞受体等)；酶(例如α-葡糖苷酶、(伊米苷酶、β-葡糖脑苷脂酶、(阿糖苷酶)；酶激活因子(例如组织纤溶酶原激活因子)；趋化因子(例如，IP-10、Mig、Groα/IL-8、所表达和分泌的调节的和正常T细胞(RANTES)、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、PF-4等)；血管生成剂(例如血管内皮生长因子(VEGF))；抗血管生成剂(例如可溶性VEGF受体)；蛋白质疫苗；神经活性肽，如缓激肽、缩胆囊素、胃泌素、分泌素、催产素、促性腺激素释放激素、β-内啡肽、脑啡肽、P物质、促生长素抑制素、甘丙肽、生长激素释放激素、铃蟾肽、华法林、强啡肽、神经降压素、促胃动素、促甲状腺素、神经肽Y、促黄体素、降钙素、胰岛素、胰高血糖素、后叶加压素、血管紧张素II、促甲状腺激素释放激素、血管活性肠肽、睡眠肽等等；其它蛋白质，如溶栓剂、心房钠尿肽、骨形态发生蛋白、促血小板生成素、松弛素、胶质细胞原纤维酸性蛋白、卵泡刺激激素、人α-1抗胰蛋白酶、白血病抑制因子、转化生长因子、组织因子、胰岛素样生长因子、促黄体素、卵泡刺激激素、巨噬细胞激活因子、肿瘤坏死因子、嗜中性白细胞趋化因子、神经生长因子、金属蛋白酶的组织抑制剂；血管活性肠肽、血管生成素、促血管素、纤维蛋白；水蛭素；白血病抑制因子；IL-1受体拮抗剂(例如 (阿那白滞素))；等等。应该容易理解，天然形式的上述治疗性蛋白质作为本公开中的靶多肽也是受到关注的。
其它实例包括抗体，例如多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、抗原结合片段(例如F(ab)'、Fab、Fv)、单链抗体等(例如(利妥昔单抗)；(英夫利昔单抗)；(曲妥单抗)；HUMIRATM(阿达木单抗)；(奥马佐单抗)；(托西莫单抗)；RAPTIVATM(依法珠单抗)；ERBITUXTM(西妥昔单抗)；等等)。在一些情况下，抗体包括特异性地结合至以下的抗体：肿瘤抗原、免疫细胞抗原(例如CD4、CD8等等)、微生物特别是病原微生物的抗原(例如，细菌、病毒、真菌或寄生虫抗原)等等。
在一些情况下，本文所述的方法、缀合物以及化合物可被用于在糖基化的天然或工程化位点处提供部分(例如水溶性聚合物)，如在超糖基化形式的治疗性蛋白质中所见。
修饰的靶多肽的生物活性可根据本领域中已知的方法来测定。保留相应亲本蛋白质的至少一种所需药理学活性的修饰的多肽是受到关注的。
免疫原性组合物
本文所公开的方法、缀合物以及化合物还在产生免疫原性组合物(例如治疗性疫苗)的组分方面得到应用。例如，所述化合物可用于促进部分的连接，所述部分增大多肽抗原的血清半衰期、提高多肽的免疫原性、或将非氨基酸抗原连接至多肽载体。在这点上，所述化合物可用于促进微生物抗原(例如，细菌、病毒、真菌或寄生虫抗原)、肿瘤抗原以及对于向受试者施用以引出所述受试者中的免疫应答而受关注的其它抗原的修饰。适用于引出可适用作研究工具的抗体的抗原的修饰也是受关注的。
对于使用本文所公开的化合物进行修饰而受关注的多肽的其它实例包括对于在测定中检测或功能监测(例如，作为研究工具，在药物筛选测定等中)而受关注的那些。此类型的多肽的实例包括受体(例如，G蛋白偶联受体(GPCR，包括孤儿GPCR))、受体配体(包括天然存在和合成的)、蛋白质通道(例如，离子通道(例如钾通道、钙通道、钠通道等等)、以及其它多肽。在一些实施方案中，细胞表面缔合的多肽如跨膜多肽的修饰是受关注的，例如其中这类修饰是在多肽存在于膜中时完成。在生理条件下多肽修饰的方法在下文中进一步描述。
多肽产生方法
一般说来，本文所述的多肽可根据常规方式(这取决于表达的目的)在原核生物或真核生物中表达。因此，本发明进一步提供一种宿主细胞，例如包含编码多肽的核酸的遗传修饰的宿主细胞。
用于产生(包括大规模产生)适于形成如本文所述的缀合物的非缀合或修饰的多肽的宿主细胞可选自多种可利用的宿主细胞中的任一种。宿主细胞的实例包括原核或真核单细胞生物的那些，如细菌(例如，大肠杆菌株、芽孢杆菌属(例如微小芽孢杆菌)等)、酵母或真菌(例如，啤酒酵母、毕赤酵母属等)，且可使用其它这样的宿主细胞。最初来源于高等生物如昆虫、脊椎动物、包括哺乳动物(例如CHO、HEK等)的宿主细胞的实例可用作表达宿主细胞。
适合的哺乳动物细胞系包括但不限于Hela细胞(例如，美国典型培养物保藏中心(ATCC)号CCL-2)、CHO细胞(例如，ATCC号CRL9618和CRL9096)、CHO DG44细胞(Urlaub(1983)Cell 33:405)、CHO-K1细胞(ATCC CCL-61)、293细胞(例如，ATCC号CRL-1573)、Vero细胞、NIH 3T3细胞(例如，ATCC号CRL-1658)、Huh-7细胞、BHK细胞(例如，ATCC号CCL10)、PC12细胞(ATCC号CRL1721)、COS细胞、COS-7细胞(ATCC号CRL1651)、RAT1细胞、小鼠L细胞(ATCC号CCLI.3)、人胚肾(HEK)细胞(ATCC号CRL1573)、HLHepG2细胞等等。
所关注的具体表达系统包括源自细菌、酵母、昆虫细胞以及哺乳动物细胞的表达系统。
所表达的多肽可通过本领域中已知的任何适当手段回收。此外，可采用任何适宜的蛋白质纯化工序，其中适合的蛋白质纯化方法描述于Guide to Protein Purification,(Deuthser编著)(Academic Press,1990)中。例如，溶解产物可从包含表达载体(该载体表达所需多肽)的细胞来制备，并且使用高效液相色谱法(HPLC)、排阻色谱法、凝胶电泳、亲和色谱法等来纯化。
修饰多肽的方法
在某些实施方案中，所述多肽可缀合至所关注的部分，而没有首先修饰多肽。例如，所述多肽可包含一个或多个适用于缀合至所关注的部分(例如，包含偶联部分的部分，如本文所述的吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物)的反应性基团。在其它实施方案中，所述多肽可在缀合至所关注的部分之前被修饰。多肽的修饰可产生含有一个或多个适用于缀合至所关注的部分的反应性基团的修饰的多肽。
在一些情况下，所述多肽可在一个或多个氨基酸残基处被修饰以提供一个或多个适用于缀合至所关注的部分(例如，包含偶联部分的部分，如本文所述的吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物)的反应性基团。例如，被引入多肽中的羰基可与α-亲核试剂如带有氨基氧基和酰肼的化合物选择性地反应。具有提高的动力学、位点选择性和缀合物稳定性的、蛋白质上的羰基官能团有选择性的化学法可产生改进的生物缀合物且提供如本文所公开的新的产物和治疗性靶标。
在某些实施方案中，所述多肽可被修饰以包含醛标记。“醛标记”或“ald标记”意指含有来源于能够通过甲酰甘氨酸生成酶(FGE)的作用而转化或已经转化以包含2-甲酰甘氨酸残基(本文中称为“fGly”)的硫酸酯酶基序的氨基酸序列的氨基酸序列。由FGE产生的fGly残基在文献中常被称为“甲酰甘氨酸”。换句话说，本文所用的术语“醛标记”是指包含“未转化的”硫酸酯酶基序(即，其中半胱氨酸或丝氨酸残基并未被FGE转化为fGly、但能够被转化的硫酸酯酶基序，如具有序列L(C/S)TPSR的硫酸酯酶基序)的氨基酸序列以及包含“转化的”硫酸酯酶基序(即，其中半胱氨酸或丝氨酸残基已通过FGE的作用转化为fGly的硫酸酯酶基序，例如L(fGly)TPSR)的氨基酸序列。如在甲酰甘氨酸生成酶(FGE)对硫酸酯酶基序的作用的上下文中所用的“转化”是指在硫酸酯酶基序中的半胱氨酸或丝氨酸残基生化修饰为甲酰甘氨酸(fGly)残基(例如，Cys修饰为fGly，或Ser修饰为fGly)。醛标记以及其在位点特异性蛋白质修饰中的用途的另外方面描述于U.S.7,985,783中，其公开内容以引用的方式并入本文。
多肽转化以包含fGly可通过基于细胞(体内)或无细胞的方法(体外)完成。类似地，修饰多肽以产生适用于缀合的多肽(例如，产生含有适用于缀合的反应性基团的多肽的修饰)可通过基于细胞(体内)或无细胞的方法(体外)完成。
或者，分离的、未修饰的多肽可在缺乏适合的酶的宿主细胞中的重组产生之后或通过合成产生被分离。分离的多肽可接着与适合的酶在提供多肽的所需修饰以包含fGly的条件下接触。多肽可通过本领域中已知的方法(例如，使用热，调整pH，离液剂(例如脲等)、有机溶剂(例如，烃类：辛烷、苯、氯仿)等等)打开(unfolded)且使变性蛋白质与适合的酶接触。修饰的多肽可接着在适合的条件下被再折叠。
在一些情况下，含有fGly残基的修饰的多肽可通过fGly与如本文所述的化合物(例如，含有偶联部分的化合物，如本文所述的吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物)反应缀合至所关注的部分。例如，含有fGly的多肽可从产生来源(例如，重组宿主细胞产生、合成产生)分离，且与含有反应性搭配物的药物或其它部分(例如可检测的标记)在适于提供药物或其它部分与多肽的缀合的条件下接触。例如，含有反应性搭配物的药物或其它部分可包含反应性部分(例如，如本文所述的吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物)。含有吡嗪啉酮的药物或其它部分可与多肽反应以产生如本文所述的多肽缀合物。例如，图1显示根据本公开的实施方案的多肽缀合物的示意图。图1A显示用于产生包含环状偶联部分的多肽缀合物的反应方案。在图1A中，包含fGly的多肽与环状偶联部分(例如，吡嗪啉酮或吡嗪啉酮衍生物)反应以产生包含环状偶联部分的多肽缀合物。图1B显示用于产生包含非环状偶联部分的多肽缀合物的反应方案。在图1B中，包含fGly的多肽与非环状偶联部分反应以产生包含非环状偶联部分的多肽缀合物。
在一些情况下，含有fGly残基的修饰的多肽可通过fGly与化合物如但不限于以下化合物中的一种的反应而缀合至所关注的部分：
多肽缀合物
多肽可经受缀合以提供广泛多种部分的连接。所关注的部分的实例包括但不限于药物、可检测的标记、小分子、水溶性聚合物、肽等等(本文中还称为“有效负载(payload)”或“载荷”)。因此，本公开提供如上所述的多肽缀合物。
提供所关注的部分作为用于与多肽的残基反应的反应性搭配物的组分。在某些实施方案中，多肽缀合的方法与适用于多肽的反应条件相容。例如，反应条件可包括包含水的反应混合物。在一些情况下，反应混合物可具有与多肽相容的pH，如但不限于4至11的pH、或5至10的pH、或6至9的pH、或6至8的pH。在某些情况下，反应混合物具有7的pH。在一些实施方案中，反应条件是在与多肽相容的温度下进行。例如，反应条件可在20℃至45℃，如25℃至40℃、或30℃至40℃、或35℃至40℃的温度下。在一些情况下，反应条件是在室温(例如25℃)下。在一些情况下，反应条件是在37℃的温度下。
如本公开所提供，普通技术人员可容易地适配任何多种部分以提供用于如本文所预期缀合至多肽的反应性搭配物。普通技术人员将理解，如pH和位阻的因素(即，修饰的氨基酸残基对于与所关注的反应性搭配物反应的可及性)具有重要性。修改反应条件以提供最佳缀合条件完全在普通技术人员的技能之内并且在本领域中是常规的。当缀合是以存在于活细胞中或上的多肽进行时，选择条件以便在生理学上相容。例如，pH可暂时下降一段足以允许反应发生但又在细胞能耐受的时段内的时间(例如，约30min至1小时)。用于在细胞表面上进行多肽修饰的生理条件可类似于在修饰带有细胞表面叠氮化物的细胞中、在酮-叠氮化物反应中所用的那些(参见例如，U.S.6,570,040)。
在某些实施方案中，本公开提供一种多肽缀合物，其中所述多肽是抗体。因而，实施方案包括一种缀合至所关注的部分的抗体，其中缀合至所关注的部分的抗体被称为“抗体缀合物”。Ig多肽通常包含至少一个Ig重链恒定区或Ig轻链恒定区，并且可进一步包含Ig可变区(例如，VL区和/或VH区)。Ig重链恒定区包括任何重链同型的Ig恒定区、非天然存在的Ig重链恒定区(包括共有Ig重链恒定区)。Ig恒定区可被修饰以便缀合至所关注的部分，其中所关注的部分存在于Ig恒定区的溶剂可及环区中或附近。
在一些情况下，本公开的抗体缀合物可包含：1)缀合至一个或多个所关注的部分的Ig重链恒定区，以及缀合至一个或多个所关注的部分的Ig轻链恒定区；2)缀合至一个或多个所关注的部分的Ig重链恒定区，以及不缀合至所关注的部分的Ig轻链恒定区；或3)不缀合至所关注的部分的Ig重链恒定区，以及缀合至一个或多个所关注的部分的Ig轻链恒定区。本发明抗体缀合物还可包含可变VH和/或VL结构域。如上所述，一个或多个所关注的部分可在单个氨基酸残基处缀合至Ig重链恒定区或Ig轻链恒定区(例如，一个或两个所关注的部分缀合至单一氨基酸残基)，或在两个或更多个不同氨基酸残基处缀合至Ig重链恒定区和/或Ig轻链恒定区。
本公开的抗体缀合物可包含如本文所述的任何多种化合物作为缀合部分：例如药物(例如，肽药物、小分子药物等)、水溶性聚合物、可检测的标记、合成肽等等。
抗体缀合物可具有任何多种如上所述的抗原结合特异性，包括例如存在于癌细胞上的抗原；存在于自体免疫细胞上的抗原；存在于病原微生物上的抗原；存在于受病毒感染的细胞(例如，受人类免疫缺陷病毒感染的细胞)上的抗原，例如CD4或gp120；存在于患病细胞上的抗原；等等。例如，抗体缀合物可结合如上所述的抗原，其中抗原存在于细胞表面上。本公开的抗体缀合物可以如下适合的结合亲和力结合抗原，例如5×10-6M至10-7M、10-7M至5×10-7M、5×10-7M至10-8M、10-8M至5×10-8M、5×10-8M至10-9M，或大于10-9M的结合亲和力。
作为非限制性实例，本发明抗体缀合物可结合存在于癌细胞上的抗原(例如，肿瘤特异性抗原；在癌细胞上过度表达的抗原；等等)，并且缀合部分可以是细胞毒性化合物(例如，细胞毒性小分子、细胞毒性合成肽等等)。例如，本发明抗体缀合物可对CD19有特异性，其中缀合部分是细胞毒性化合物(例如，细胞毒性小分子、细胞毒性合成肽等等)。作为另一实例，本发明抗体缀合物可对CD22有特异性，其中缀合部分可以是细胞毒性化合物(例如，细胞毒性小分子、细胞毒性合成肽等等)。
作为其它非限制性实例，本发明抗体缀合物可结合存在于感染了病毒的细胞上的抗原(例如，其中抗原由病毒编码；其中抗原在由病毒感染的细胞类型上表达；等等)，并且缀合部分可以是病毒融合抑制剂。例如，本发明抗体缀合物可结合CD4，且缀合部分可以是病毒融合抑制剂。作为另一实例，本发明抗体缀合物可结合gp120，且缀合部分可以是病毒融合抑制剂。
本公开的实施方案还包括多肽缀合物，其中多肽是载体蛋白。例如，载体蛋白可共价地且位点特异性地结合至药物以提供含有药物的支架。载体蛋白可位点特异性地缀合至所关注的共价结合的分子如药物(例如，肽、小分子药物等)、可检测的标记等等。在某些实施方案中，药物-支架缀合物可提供药物的增加的血清半衰期。
一般说来，“载体蛋白”是生物学上惰性的蛋白质，其对如本文所公开的修饰敏感且其可在生理环境中提供经由载体蛋白中的修饰的氨基酸残基(例如，经由醛标记的载体蛋白的转化的硫酸酯酶基序内的肟或腙键)缀合至载体蛋白的所关注的部分的溶剂可及的呈递。“生物学上惰性的”意在指出载体蛋白当向适当的受试者施用时，如当向人受试者施用时展现出临床上不显著的或不可检测的生物活性。因此，载体蛋白是生物学惰性的，因为它们例如具有低免疫原性、不展现显著的或可检测的靶向特性(例如，在结合至特异性受体中不展现显著的或可检测的活性)、并且展现可能干扰缀合至醛标记的载体蛋白的部分(例如药物或可检测的标记)的活性的几乎没有或没有可检测的生物活性。“低免疫原性”意指载体蛋白一旦施用于受试者、如哺乳动物受试者、例如人受试者引出几乎没有或没有可检测的免疫应答。载体蛋白可以单体或多聚(例如二聚)形式提供。
当折叠时具有提供易于修饰(且因此缀合至所关注的部分)的多个不同的溶剂可及位点的三维结构的载体蛋白是受关注的。一般说来，所关注的载体蛋白是以下那些：其具有一定尺寸和三维折叠结构以便提供所关注的缀合部分在溶剂可及表面上以在空间上充分分开以提供一个或多个所关注的缀合部分的活性和生物可用性的方式的呈递。载体蛋白可根据包括但不限于以下的多种因素来选择：有待缀合至载体蛋白的部分(例如药物或可检测的标记)。
因此，广泛多种多肽中的任一种可适用作载体蛋白以供在本公开的载体蛋白缀合物中使用。这类载体蛋白可包括具有天然存在的氨基酸序列、天然存在的多肽片段、以及非天然存在的多肽和其片段的那些蛋白。
载体蛋白的实例包括但不限于白蛋白和其片段(例如人血清白蛋白、牛血清白蛋白等)、转铁蛋白和其片段(例如人转铁蛋白)，以及具有减少的与哺乳动物Fc受体、特别是人Fc受体的结合的Fc片段(例如，抗体(例如IgG)如哺乳动物抗体、例如人抗体的修饰的Fc片段)。具有减少的Fc受体结合的修饰的Fc片段的实例是由赫赛汀(曲妥单抗)和美罗华(利妥昔单抗)的Fc片段来例示，所述Fc片段含有提供减少的Fc受体结合的点突变(参见例如，Clynes等,Nature Medicine(2000),6,443-446)。或者或另外，Fc片段的同型可根据Fc受体结合的所需水平来选择(例如，使用IgG4同型人重链恒定区而非来自IgG1或IgG3的Fc片段)。(参见例如，Fridman FASEB J 1991年9月；5(12):2684-90)。一般说来，载体蛋白可以是至少约4kDa(例如长度约50个氨基酸残基)，通常至少约25kDa，且可以是更大的尺寸(例如，转铁蛋白具有90kDa的分子量而Fc片段可具有30kDa至50kDa的分子量)。
本文所述的缀合物可用于多种应用，包括但不限于使用荧光或表位标记进行可视化(例如，使用配有用于缀合至本文所述的化合物和缀合物的反应性基团的金颗粒的电子显微镜)；蛋白质固定(例如，蛋白质微阵列产生)；蛋白质动态和定位研究和应用；以及蛋白质与所关注的部分(例如，改进亲本蛋白质的半衰期的部分(例如聚(乙二醇))、靶向部分(例如，为了增加向作用位点的递送)以及生物活性部分(例如治疗部分))的缀合。
多肽缀合物可包括缀合至提供广泛多种功能或特征中的一种或多种的一个或多个部分的多肽。一般说来，部分的实例包括但不限于以下：可检测的标记(例如荧光标记)；光激活的动态部分(例如，偶氮苯介导的孔隙闭合、偶氮苯介导的结构变化、光衰减的识别基序)；水溶性聚合物(例如聚乙二醇化)；纯化标记(例如，为了促进通过亲和色谱分离(例如，FLAG表位的连接))；膜定位结构域(例如，脂质或糖磷脂酰肌醇(GPI)型锚定物)；固定标记(例如，为了促进多肽与表面的连接，包括选择性连接)；药物(例如，为了促进药物靶向，例如经由药物与抗体的连接)；靶向递送部分(例如，用于结合至靶受体的配体(例如，为了促进病毒连接、存在于脂质体上的靶向蛋白质的连接等))，等等。
具体的非限制性实例在下文中提供。
用于与多肽缀合的药物
多种药物中的任一种适于使用，或可被修饰以适于使用，作为反应性搭配物缀合至多肽。药物的实例包括小分子药物和肽药物。因此，本公开提供药物-多肽缀合物。
如本文所用的“小分子药物”是指一种化合物，例如有机化合物，其展现所关注的药物活性并且其通常具有800Da或更少、或2000Da或更少的分子量，但可包括达至5kDa且高达10kDa的分子。小无机分子是指不含碳原子的分子，而小有机分子是指含有至少一个碳原子的化合物。
如本文所用的“肽药物”是指含有氨基酸的聚合化合物，且意在包涵天然存在和非天然存在的肽、寡肽、环肽、多肽和蛋白质以及肽模拟物。肽药物可通过化学合成获得或由遗传编码的来源(例如重组来源)产生。肽药物可在一定的分子量范围内，且可以是200Da至10kDa或更大的分子量。
在一些情况下，药物是癌症化疗剂。例如，当多肽是对肿瘤细胞具有特异性的抗体(或其片段)时，所述抗体可如本文所述被修饰以包含修饰的氨基酸，其可随后缀合至癌症化疗剂。癌症化疗剂包括减少癌细胞增殖的非肽(即，非蛋白质)化合物且包涵细胞毒性剂和细胞抑制剂。化疗剂的非限制性实例包括烷化剂、亚硝基脲、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物(长春花)生物碱以及甾体激素。还可以使用肽化合物。
适合的癌症化疗剂包括多拉司它汀以及其活性类似物和衍生物；以及奥瑞斯他汀和其活性类似物和衍生物。参见例如，WO 96/33212、WO 96/14856以及U.S.6,323,315。例如，多拉司它汀10或奥瑞斯他汀PE可被包含在本公开的抗体-药物缀合物中。适合的癌症化疗剂还包括美登木素生物碱以及其活性类似物和衍生物(参见例如，EP1391213；以及Liu等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:8618-8623)；以及多卡霉素和其活性类似物和衍生物(例如，包括合成类似物，KW-2189和CB 1-TM1)。
用于减少细胞增殖的试剂是本领域中已知的且广泛使用。这类试剂包括烷化剂，如氮芥(nitrogen mustard)、亚硝基脲、次乙亚胺衍生物、磺酸烷基酯以及三氮烯，包括但不限于氮芥(mechlorethamine)、环磷酰胺(CytoxanTM)、美法仑(L-沙可来新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、链脲霉素、吡葡亚硝脲、尿嘧啶氮芥、氮芥(chlormethine)、异环磷酰胺、瘤可宁、哌血生、曲他胺、三亚乙基硫磷酰胺、白消安、达卡巴嗪以及替莫唑胺。
抗代谢剂包括叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物以及腺苷脱氨酶抑制剂，包括但不限于阿糖胞苷(CYTOSAR-U)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(FudR)、6-硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)、喷司他丁、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氨甲蝶呤、10-炔丙基-5,8-二脱氮叶酸(PDDF，CB3717)、5,8-二脱氮四氢叶酸(DDATHF)、甲酰四氢叶酸、磷酸氟达拉滨、喷司他丁以及吉西他滨。
适合的天然产物及其衍生物(例如长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子以及表鬼臼毒素)包括但不限于Ara-C、紫杉醇、多西他赛、脱氧助间型霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、硫唑嘌呤；布喹那；生物碱，例如长春新碱、长春花碱、长春瑞滨、长春地辛等等；鬼臼毒素，例如依托泊苷、替尼泊苷等等；抗生素，例如蒽环霉素、盐酸柔红霉素(道诺霉素、红比霉素、盐酸红比霉素)、伊达比星、阿霉素、表柔比星以及吗啉代衍生物等等；吩噁嗪酮(phenoxizone)双环肽，例如放线菌素；碱性糖肽，例如博来霉素；蒽醌糖苷，例如普卡霉素(光神霉素)；蒽二酮，例如米托蒽醌；氮杂环丙烯吡咯并吲哚二酮，例如丝裂霉素；大环免疫抑制剂，例如环孢菌素、FK-506(他克莫司，普乐可复)、雷帕霉素等；等等。
其它抗增殖细胞毒性剂是诺维本、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、雷洛昔芬、环磷酰胺、异环磷酰胺以及屈洛昔芬。
具有抗增殖活性的微管影响剂也是适于使用的并且包括但不限于别秋水仙碱(NSC 406042)、软海绵素B(NSC 609395)、秋水仙碱(NSC 757)、秋水仙碱衍生物(例如NSC 33410)、多拉司它汀10(NSC376128)、美登素(NSC 153858)、利索新(NSC 332598)、紫杉醇、衍生物、多西他赛、硫秋水仙碱(NSC361792)、三苯甲基半胱氨酸、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、天然和合成埃坡霉素，包括但不限于埃坡霉素A、埃坡霉素B、海绵内酯(discodermolide)；雌氮芥、诺考达唑等等。
适于使用的激素调节剂和类固醇(包括合成类似物)包括但不限于肾上腺类固醇，例如强的松、地塞米松等；雌激素和孕激素，例如己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、雌二醇、克罗米芬、他莫昔芬；等；以及肾上腺皮质激素抑制剂，例如氨鲁米特；17α-乙炔雌二醇；二乙基己烯雌酚、睾丸激素、氟羟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、甲基强的松龙、甲基睾酮、氢化泼尼松、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌氮芥、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺(Drogenil)、托瑞米芬(Fareston)以及。雌激素刺激增殖和分化；因此，结合至雌激素受体的化合物用于阻断此活性。皮质类固醇可抑制T细胞增殖。
其它适合的化疗剂包括金属复合物，例如顺铂(顺式-DDP)、卡铂等；脲，例如羟基脲；以及肼，例如N-甲肼；表鬼臼毒素；拓扑异构酶抑制剂；丙卡巴肼；米托蒽醌；甲酰四氢叶酸；替加氟；等。所关注的其它抗增殖剂包括免疫抑制剂，例如霉酚酸、沙利度胺、去氧精胍菌素、氮杂斯波林(azasporine)、来氟米特、咪唑立宾、氮杂螺烷(azaspirane)(SKF 105685)；(ZD 1839，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉)；等等。
紫杉烷类适于使用。“紫杉烷类”包括紫杉醇以及任何活性紫杉烷衍生物或前药。“紫杉醇”(其在本文中应当理解为包括类似物、制剂以及衍生物，例如像多西他赛、TAXOLTM、TAXOTERETM(多西他赛制剂)、紫杉醇的10-去乙酰基类似物和紫杉醇的3'N-去苯甲酰基-3'N-叔丁氧羰基类似物)可利用本领域技术人员已知的技术容易地制备(还参见WO 94/07882、WO 94/07881、WO 94/07880、WO 94/07876、WO 93/23555、WO 93/10076；美国专利号5,294,637；5,283,253；5,279,949；5,274,137；5,202,448；5,200,534；5,229,529；以及EP590,267)，或从多种商业来源获得，包括例如Sigma Chemical Co.,St.Louis,Mo.(来自短叶紫杉(Taxus brevifolia)的T7402；或来自云南紫杉(Taxus yannanensis)的T-1912)。
紫杉醇应该理解为不仅是指常见的化学可用形式的紫杉醇，而且是指类似物和衍生物(例如，如上所述的TaxotereTM多西他赛)和紫杉醇缀合物(例如，紫杉醇-PEG、紫杉醇-葡聚糖或紫杉醇-木糖)。
术语“紫杉烷”还包括多种已知的衍生物，包括亲水性衍生物和疏水性衍生物。紫杉烷衍生物包括但不限于描述于国际专利申请号WO99/18113中的半乳糖和甘露糖衍生物；描述于WO 99/14209中的哌嗪子基和其它衍生物；描述于WO 99/09021、WO 98/22451以及美国专利号5,869,680中的紫杉烷衍生物；描述于WO 98/28288中的6-硫基衍生物；描述于美国专利号5,821,263中的亚磺酰胺衍生物；以及描述于美国专利号5,415,869中的紫杉酚衍生物。其进一步包括紫杉醇的前药，包括但不限于描述于WO 98/58927；WO 98/13059；以及美国专利号5,824,701中的那些。
适于使用的生物反应调节物包括但不限于(1)酪氨酸激酶(RTK)活性抑制剂；(2)丝氨酸/苏氨酸激酶活性抑制剂；(3)肿瘤相关抗原拮抗剂，如特异性地结合至肿瘤抗原的抗体；(4)细胞凋亡受体激动剂；(5)白细胞介素-2；(6)IFN-α；(7)IFN-γ；(8)集落刺激因子；以及(9)血管生成抑制剂。
用于修饰药物以含有反应性搭配物的方法
有待缀合至多肽的药物可被修饰以并入反应性搭配物用于与多肽反应。当药物是肽药物时，反应性部分(例如氨基氧基或酰肼可定位于N末端区、N末端、C末端区、C末端或定位在肽内部的位置。例如，方法的一个实例包括合成具有氨基氧基的肽药物。在此实例中，肽是由Boc保护的前体合成。肽的氨基可与包含羧酸基团和氧基-N-Boc基团的化合物反应。举例来说，肽的氨基与3-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基氧基)丙酸反应。包含羧酸基团和氧基-N-保护基的化合物上的其它变化可包括不同数目的在亚烷基接头中的碳和在亚烷基接头上的取代基。肽的氨基与包含羧酸基团和氧基-N-保护基的化合物之间的反应经由标准肽偶联化学发生。可使用的肽偶联试剂的实例包括但不限于DCC(二环己基碳二亚胺)、DIC(二异丙基碳二亚胺)、二-对甲苯酰基碳二亚胺、BDP(1-苯并三唑二乙基磷酸酯-1-环己基-3-(2-吗啉基乙基)碳二亚胺)、EDC(1-(3-二甲基氨基丙基-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐)、氰尿酰氟、氰尿酰氯、TFFH(四甲基氟代甲酰胺鎓六氟磷酸盐)、DPPA(二苯基磷酰基叠氮化物)、BOP(苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐、HBTU(O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)、TBTU(O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐)、TSTU(O-(N-琥珀酰亚胺基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐)、HATU(N-[(二甲基氨基)-1-H-1,2,3-三唑并[4,5,6]-吡啶-1-基亚甲基]--N-甲基甲烷六氟磷酸胺鎓N-氧化物)、BOP-Cl(双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯)、PyBOP((1-H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基)-三(N-吡咯烷基)鏻四氟磷酸盐)、BrOP(溴三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐)、DEPBT(3-(二乙氧基磷酰基氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮)、PyBrOP(溴三(N-吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐)。作为非限制性实例，HOBt和DIC可用作肽偶联试剂。
脱保护以暴露氨基-氧基官能团是在包含N保护基的肽上完成。N-氧基琥珀酰亚胺基的脱保护例如根据用于环酰胺基团的标准脱保护条件进行。脱保护条件可见于Greene和Wuts,Protective Groups inOrganic Chemistry,第3版,1999,John Wiley&Sons,NY；以及Harrison等中。某些脱保护条件包括肼试剂、氨基试剂或硼氢化钠。Boc保护基的脱保护可用TFA进行。用于脱保护的其它试剂包括但不限于肼、甲肼、苯肼、硼氢化钠以及甲胺。产物和中间物可通过常规手段如HPLC纯化来纯化。
普通技术人员将理解，如pH和位阻的因素(即，氨基酸残基对于与所关注的反应性搭配物反应的可及性)具有重要性。修改反应条件以提供最佳缀合条件完全在普通技术人员的技能之内并且在本领域中是常规的。当缀合是以存在于活细胞中或上的多肽进行时，选择条件以便在生理学上相容。例如，pH可暂时下降一段足以允许反应发生但又在细胞能耐受的时段内的时间(例如，约30min至1小时)。用于在细胞表面上进行多肽修饰的生理条件可类似于在修饰带有细胞表面叠氮化物的细胞中、在酮-叠氮化物反应中所用的那些(参见例如，U.S.6,570,040)。
还考虑将含有或被修饰以含有充当本文所公开的化合物或缀合物的反应性搭配物的α-亲核基团的小分子化合物用作本公开的多肽-药物缀合物中的药物。用于适用于合成所关注的化合物的化学合成方案和条件的一般方法是本领域中已知的(参见例如，Smith和March,March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第五版,Wiley-Interscience,2001；或Vogel,A Textbook ofPractical Organic Chemistry,Including Qualitative Organic Analysis,第四版,New York:Longman,1978)。
肽药物
在一些情况下，缀合物包含共价连接的肽。适合的肽包括但不限于细胞毒性肽；血管生成肽；抗血管生成肽；激活B细胞的肽；激活T细胞的肽；抗病毒肽；抑制病毒融合的肽；增加一个或多个淋巴细胞群体产生的肽；抗微生物肽；生长因子；生长激素释放因子；血管活性肽；抗炎肽；调节葡萄糖代谢的肽；抗血栓形成肽；抗伤害性肽；血管扩张剂肽；血小板凝集抑制剂；止痛剂；等等。
在一些实施方案中，肽可以在化学上合成以包括与多肽的氨基酸残基或修饰的氨基酸残基有反应性的基团。适合的合成肽具有5个氨基酸至100个氨基酸或长于100个氨基酸的长度；例如，适合的肽具有5个氨基酸(aa)至10aa、10aa至15aa、15aa至20aa、20aa至25aa、25aa至30aa、30aa至40aa、40aa至50aa、50aa至60aa、60aa至70aa、70aa至80aa、80aa至90aa或90aa至100aa的长度。
在某些实施方案中，肽可被修饰以包含含有α-亲核试剂的部分(例如，氨基氧基或酰肼部分)，例如，可与含有fGly的多肽反应以产生其中多肽和肽分别通过腙或肟键连接的缀合物。合成肽以使得合成的肽包含与多肽的氨基酸残基或修饰的氨基酸残基有反应性的反应性基团的方法的实例如上所述。
适合的肽包括但不限于hLF-11(乳铁蛋白的11个氨基酸的N末端片段)、抗微生物肽；颗粒溶素，抗微生物肽；菌丝霉素(NZ2114；SAR 215500)、抗微生物肽；病毒融合抑制剂如恩夫韦(Fuzeon)(恩夫韦地(enfuvirtide))、TRI-1249(T-1249；参见例如Matos等(2010)PLoSOne 5:e9830)、TRI-2635(T-2635；参见例如Eggink等(2009)J.Biol.Chem.284:26941)、T651和TRI-1144；C5a受体抑制剂如PMX-53、JPE-1375和JSM-7717；POT-4，人补体因子C3抑制剂；胰激肽释放酶(Pancreate)(INGAP衍生物序列，HIP-人前胰岛蛋白)；促生长素抑制素；促生长素抑制素类似物如DEBIO 8609(Sanvar)、奥曲肽、奥曲肽(C2L)、奥曲肽QLT、奥曲肽LAR、善宁LAR、SomaLAR、索马杜林(兰瑞肽)，参见例如Deghenghi等.(2001)Endocrine 14:29；TH9507(替莫瑞林，一种生长激素释放因子)；POL7080(protegrin类似物，一种抗微生物肽)；松弛素；促肾上腺皮质激素释放因子激动剂如尾加压素、蛙皮降压肽等；热休克蛋白衍生物如DiaPep277；人免疫缺陷病毒进入抑制剂；热休克蛋白-20模拟物如AZX100；凝血酶受体激活肽如TP508(Chrysalin)；尿皮质素2模拟物(例如CRF2激动剂)如尿皮质素-2；免疫激活剂如Zadaxin(胸腺法新；胸腺素-α1)，参见例如，Sjogren(2004)J.Gastroenterol.Hepatol.19:S69；丙型肝炎病毒(HCV)进入抑制剂E2肽，如HCV3；心房钠尿肽如HANP(Sun4936；卡培立肽)；膜联蛋白肽；防卫素(抗微生物肽)如hBD2-4；防卫素(抗微生物肽)如hBD-3；防卫素(抗微生物肽)如PMX-30063；富组蛋白(抗微生物肽)如富组蛋白-3、富组蛋白-5、富组蛋白-6以及富组蛋白-9；富组蛋白(抗微生物肽)如PAC-113；indolicidin(抗微生物肽)如MX-594AN(Omniganin；CLS001)；indolicidin(抗微生物肽)如Omnigard(MBI-226；CPI-226)；抗微生物肽如昆虫杀菌肽；抗微生物肽如乳铁蛋白(lactoferrin)；LL-37/凯萨林菌素衍生物(抗微生物肽)如P60.4(OP-145)；爪蟾抗菌肽(抗微生物肽)如培西加南(MSI-78；Suponex)；protegrin(抗微生物肽)如IB-367(Iseganan)；agan肽；β-利尿钠肽如Natrecor或Noratak(奈西立肽)、或乌拉立肽；比伐卢定(Angiomax)、凝血酶抑制剂；C肽衍生物；降钙素如Miacalcin(Fortical)；脑啡肽衍生物；红细胞生成刺激肽如Hematide；间隙连接调节剂如达奈加肽(ZP1609)；胃泌素释放肽；脑肠肽；胰高血糖素样肽；胰高血糖素样肽-2类似物如ZP1846或ZP1848；葡糖胺酰胞壁酰二肽如GMDP；糖肽抗生素如奥利万星；替考拉宁衍生物如达巴霉素；促性腺激素释放激素(GnRH)如Zoladex(Lupon)或曲普瑞林；组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂缩酚酸肽如PM02734(Irvalec)；整联蛋白如依替巴肽；胰岛素类似物如Humulog；卡拉立德(kahalalide)缩酚酸肽如PM02734；激肽释放酶抑制剂如Kalbitor(艾卡拉肽)；抗生素如特拉万霉素；脂肽如达托霉素或MX-2401；黄体生成激素释放激素(LHRH)如戈舍瑞林；LHRH合成十肽激动剂类似物如Treistar(双羟萘酸曲普瑞林)；LHRH如Eligard；M2蛋白通道肽抑制剂；美曲普汀；黑素皮质素受体激动剂肽如布拉替德(bremalanotide)/PT-141；黑素皮质素；胞壁酰三肽如Mepact(米伐木肽)；髓鞘碱性蛋白肽如MBP8298(地瑞考肽)；N型电压门控钙通道阻断剂如齐考诺肽(Prialt)；甲状旁腺激素肽；甲状旁腺类似物如768974；肽激素类似物如UGP281；前列腺素F2-α受体抑制剂如PDC31；蛋白酶抑制剂如PPL-100；surfaxin；血小板反应蛋白-1(TSP-1)模拟物如CVX-045或ABT 510；血管活性肠肽；后叶加压素；Y2R激动剂肽如RG7089；obinepeptide；及TM30339。
可检测的标记
本公开的缀合物、化合物以及方法可用于将可检测的标记缀合至多肽。可检测的标记的实例包括但不限于荧光分子(例如自发荧光分子、一旦与试剂接触便会发荧光的分子等)、放射性标记(例如，111In、125I、131I、212B、90Y、186Rh等)、生物素(例如，有待经由生物素与抗生物素蛋白的反应来检测)、荧光标记、成像试剂等等。可检测的标记还包括肽或多肽，其可通过抗体结合，例如通过可检测地标记的抗体的结合或通过结合抗体经由夹层型测定的检测来检测。可检测的标记的其它实例包括但不限于染料标记(例如发色团、荧光团，如但不限于Alexa荧光染料(例如Alexa350、405、430、488、532、546、555、568、594、595、610、633、635、647、660、680、700、750、790等等))、生物物理探针(旋转标记、核磁共振(NMR)探针)、共振能量传递(FRET)型标记(例如，FRET对的至少一个成员，包括荧光团/淬灭团对的至少一个成员)、生物发光共振能量传递(BRET)型标记(例如，BRET对的至少一个成员)、免疫可检测的标记(例如，FLAG、His(6)等)、定位标记(例如，为了鉴定标记的多肽在组织或分子细胞水平处的缔合(例如与组织型或具体的细胞膜的缔合)、等等。
用于递送至靶位点的部分的连接
本公开的实施方案还包括一种缀合至一个或多个如但不限于以下的部分的多肽：药物(例如小分子药物)、毒素或用于递送至靶位点(例如细胞)的其它分子，并且其可提供药理学活性或可充当用于递送其它分子的靶标。
还考虑包含一对结合搭配物中的一个(例如，配体、受体的配体结合部分、配体的受体结合部分等)的缀合物。例如，缀合物可包含一种多肽，所述多肽充当病毒受体且一旦与病毒被膜蛋白或病毒壳体蛋白结合，便促进病毒连接至其上表达有修饰的多肽的细胞表面。或者，缀合物可包含由抗体(例如单克隆抗体)特异性地结合的抗原，以促进表达修饰的多肽的宿主细胞的检测和/或分离。
靶分子与载体的连接
所述方法可提供多肽与促进多肽连接至固体衬底(例如，为了便于测定)的部分的缀合，或与促使易于分离(例如，由结合至磁珠的抗体所识别的半抗原)的部分的缀合。在一些实施方案中，所述方法用于提供蛋白质与阵列(例如晶片)在限定的取向上的连接。例如，可产生一种在选择的位点(例如在N末端上或附近)处修饰的多肽，并且方法、缀合物以及化合物用于将部分递送至修饰的多肽。所述部分可然后用作用于将多肽附着到载体(例如，固体或半固体载体，如适用作高通量测定中的微晶片的载体)上的连接位点。
水溶性聚合物
在一些情况下，缀合物包含共价连接的水溶性聚合物。特别所关注的部分是水溶性聚合物。“水溶性聚合物”是指可溶于水中且通常基本上是非免疫原性的且通常具有大于1,000道尔顿的原子分子量的聚合物。本文所述的方法、缀合物以及化合物可用于将一个或多个水溶性聚合物连接至多肽。水溶性聚合物(例如PEG)与多肽如药学活性(例如治疗性)多肽的连接可能是需要的，因为这种修饰可通过由提高的蛋白水解稳定性和/或减小的肾清除率所造成的血清半衰期增大来提高治疗指数。另外，一种或多种聚合物的连接(例如聚乙二醇化)可降低蛋白质药物的免疫原性。
在一些实施方案中，水溶性聚合物具有大于5,000Da、大于10,000Da、大于20,000至500,000Da、大于40,000Da至300,000Da、大于50,000Da至70,000Da，如大于60,000Da的有效水力分子量。在一些实施方案中，水溶性聚合物具有10kDa至20kDa、20kDa至25kDa、25kDa至30kDa、30kDa至50kDa或50kDa至100kDa的有效水力分子量。“有效水力分子量”是指如通过水性基尺寸排阻色谱法(SEC)所测定的聚合物链的有效水溶剂化尺寸。当水溶性聚合物含有具有聚环氧烷重复单元、如环氧乙烷重复单元的聚合物链时，每条链可具有200Da至80,000Da或1,500Da至42,000Da，包括2,000至20,000Da的原子分子量。除非具体地指出，否则分子量意图是指原子分子量。可使用直链、支链以及末端带电的水溶性聚合物(例如PEG)。
适用作连接至多肽的部分的聚合物可具有广泛范围的分子量和聚合物亚单元。这些亚单元可包括生物聚合物、合成聚合物或其组合。这类水溶性聚合物的实例包括：葡聚糖和葡聚糖衍生物，包括硫酸葡聚糖；P-氨基交联的糊精和羧甲基糊精；纤维素和纤维素衍生物，包括甲基纤维素和羧甲基纤维素；淀粉和糊精、以及淀粉的衍生物和水解产物；聚亚烷基二醇和其衍生物，包括聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇、聚乙二醇均聚物、聚丙二醇均聚物、乙二醇与丙二醇的共聚物，其中所述均聚物和共聚物未被取代或在一端被烷基取代；肝素和肝素片段；聚乙烯醇和聚乙烯基乙醚；聚乙烯吡咯烷酮；天冬酰胺以及聚氧乙基化多元醇，其中葡聚糖和葡聚糖衍生物、糊精和糊精衍生物。应理解，也可以考虑具体叙述的水溶性聚合物的各种衍生物。
如以上所述的那些的水溶性聚合物包括基于聚环氧烷的聚合物，如聚乙二醇“PEG”(参见例如，“Poly(ethylene glycol)Chemistry:Biotechnical and Biomedical Applications”,J.M.Harris,编著,PlenumPress,New York,N.Y.(1992)；和“Poly(ethylene glycol)Chemistry andBiological Applications”,J.M.Harris和S.Zalipsky,编著,ACS(1997)；以及国际专利申请：WO 90/13540、WO 92/00748、WO 92/16555、WO 94/04193、WO 94/14758、WO 94/17039、WO 94/18247、WO94/28937、WO 95/11924、WO 96/00080、WO 96/23794、WO 98/07713、WO 98/41562、WO 98/48837、WO 99/30727、WO 99/32134、WO99/33483、WO 99/53951、WO 01/26692、WO 95/13312、WO 96/21469、WO 97/03106、WO 99/45964，以及美国专利号4,179,337；5,075,046；5,089,261；5,100,992；5,134,192；5,166,309；5,171,264；5,213,891；5,219,564；5,275,838；5,281,698；5,298,643；5,312,808；5,321,095；5,324,844；5,349,001；5,352,756；5,405,877；5,455,027；5,446,090；5,470,829；5,478,805；5,567,422；5,605,976；5,612,460；5,614,549；5,618,528；5,672,662；5,637,749；5,643,575；5,650,388；5,681,567；5,686,110；5,730,990；5,739,208；5,756,593；5,808,096；5,824,778；5,824,784；5,840,900；5,874,500；5,880,131；5,900,461；5,902,588；5,919,442；5,919,455；5,932,462；5,965,119；5,965,566；5,985,263；5,990,237；6,011,042；6,013,283；6,077,939；6,113,906；6,127,355；6,177,087；6,180,095；6,194,580；6,214,966)。
所关注的聚合物的实例包括含有聚环氧烷、聚酰胺环氧烷或其衍生物的那些，包括包含式-(CH2-CH2-O)-的环氧乙烷重复单元的聚环氧烷和聚酰胺环氧烷。所关注的聚合物的其它实例包括式-[C(O)-X-C(O)-NH-Y-NH]n-或-[NH-Y-NH-C(O)-X-C(O)]n-的具有大于1,000道尔顿的分子量的聚酰胺，其中X和Y是可相同或不同的二价基团且可以是支链或直链的，且n是2-100、如2至50的不连续整数，并且其中X和Y中的任一者或两者包含可以是直链或支链的生物相容的、基本上非抗原性的水溶性重复单元。水溶性重复单元的其它实例包含式-(CH2-CH2-O)-或-(O-CH2-CH2)-的环氧乙烷。这类水溶性重复单元的数目可显著变化，这类单元的数目是2至500、2至400、2至300、2至200、2至100，例如2至50。一个实施方案的一个实例是以下：其中X和Y中的一者或两者选自：-((CH2)n1-(CH2-CH2-O)n2-(CH2)-或-((CH2)n1-(O-CH2-CH2)n2-(CH2)n-1-)，其中n1是1至6、1至5、1至4或1至3，且其中n2是2至50、2至25、2至15、2至10、2至8或2至5。一个实施方案的另一实例是以下：其中X是-(CH2-CH2)-，且其中Y是-(CH2-(CH2-CH2-O)3-CH2-CH2-CH2)-或-(CH2-CH2-CH2-(O-CH2-CH2)3-CH2)-。
聚合物可包含一个或多个间隔基或接头。间隔基或接头的实例包括包含用于水溶性聚合物中的一个或多个重复单元的直链或支链部分、二氨基和或二酸单元、天然或非天然氨基酸或其衍生物；以及脂族部分，包括烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、烷氧基等，其可含有例如多达18个碳原子或甚至另外的聚合物链。
聚合物部分或聚合物部分的一个或多个间隔基或接头当存在时可包含生物稳定的或生物可降解的聚合物链或单元。例如，具有重复键联的聚合物在生理条件下具有不同程度的稳定性，这取决于键不稳定性。具有这类键的聚合物可基于低分子量类似物的已知水解速率通过它们在生理条件下的相对水解速率来分类，例如从较不稳定至更稳定，例如聚氨基甲酸酯(-NH-C(O)-O-)>聚原酸酯(-O-C((OR)(R’))-O-)>聚酰胺(-C(O)-NH-)。类似地，将水溶性聚合物与靶分子连接的连接系统可以是生物稳定的或生物可降解的，例如从较不稳定至更稳定：碳酸酯(-O-C(O)-O-)>酯(-C(O)-O-)>氨基甲酸酯(-NH-C(O)-O-)>原酸酯(-O-C((OR)(R’))-O-)>酰胺(-C(O)-NH-)。一般说来，可能需要避免使用硫酸化多糖，这取决于硫酸酯基团的不稳定性。另外，使用聚碳酸酯和聚酯可能不太理想。通过举例方式提供这些键，并且其不意图限制适用于本文所公开的修饰的醛标记多肽中的水溶性聚合物的聚合物链或键联系统中可使用的键类型。
制剂
本公开的缀合物(包括抗体缀合物)可以多种不同的方式配制。一般说来，当缀合物是多肽-药物缀合物时，缀合物以与缀合至多肽的药物、有待治疗的病状以及有待使用的施用途径相容的方式进行配制。
缀合物(例如多肽-药物缀合物)可以任何适合的形式提供，例如以药学上可接受的盐形式，并且可配制用于任何适合的施用途径，例如口服、局部或肠胃外施用。当缀合物作为可注射液体提供(如在其中它们是静脉内或直接地施用到组织中的那些实施方案中)时，缀合物可作为即用剂型提供或作为包含药学上可接受的载体和赋形剂的可重构的储存稳定的粉末或液体提供。
用于配制缀合物的方法可由本领域中可用的那些方法修改而来。例如，缀合物可提供于包含治疗有效量的缀合物和药学上可接受的载体(例如盐水)的药物组合物中。药物组合物可任选地包含其它添加剂(例如缓冲剂、稳定剂、防腐剂等)。在一些实施方案中，所述制剂适用于向哺乳动物施用，如适用于向人施用的那些制剂。
治疗方法
本公开的多肽-药物缀合物在治疗可用于治疗可通过施用母体药物(即，在缀合至多肽之前的药物)治疗的受试者的病状或疾病。治疗意指至少达成与影响宿主的病状有关的症状的改善，其中改善是在广义上使用，它是指至少减少与治疗的病状有关的参数例如症状的大小。因而，治疗还包括以下情况：其中病理病状或至少与其相关的症状完全被抑制，例如防止发生或停止，例如终止，从而使宿主不再患有病状或至少表征该病状的症状。因此，治疗包括：(i)预防，即降低临床症状发展的风险，包括使临床症状不发展，例如防止疾病进展至有害的状况；(ii)抑制，即遏制临床症状的发展或进一步发展，例如减轻或完全抑制活动性疾病；和/或(iii)缓解，即，使临床症状消退。
在癌症的情形下，术语“治疗”包括以下任一者或所有：减少实体肿瘤的生长、抑制癌细胞复制、减少总体肿瘤负荷、以及改善与癌症有关的一个或多个症状。
有待治疗的受试者可以是需要治疗者，其中有待治疗的宿主是适于使用母体药物来治疗的宿主。因此，多种受试者可适于使用本文所公开的多肽-药物缀合物来治疗。通常，这类受试者是“哺乳动物”，其中人类是受到关注的。其它受试者可包括家养宠物(例如狗和猫)、家畜(例如，奶牛、猪、山羊、马等等)、啮齿动物(例如，小鼠、豚鼠以及大鼠，例如，如在动物疾病模型中)以及非人灵长类动物(例如黑猩猩和猴子)。
所施用的多肽-药物缀合物的量最初可基于母体药物的剂量指南和/或给药方案来确定。一般说来，多肽-药物缀合物可提供结合药物的靶向递送和/或增加的血清半衰期，从而在给药方案中提供减少的剂量或减少的施用中的至少一个。因此，多肽-药物缀合物可相对于在本公开的多肽-药物缀合物中缀合之前的母体药物在给药方案中提供减少的剂量和/或减少的施用。
此外，如上所述，因为多肽-药物缀合物可提供药物递送的受控制的化学计量，所以多肽-药物缀合物的剂量可基于在每个多肽-药物缀合物基础上所提供的药物分子数目来计算。
在一些实施方案中，施用多剂量的多肽-药物缀合物。多肽-药物缀合物的施用频率可根据以下多种因素中的任一种变化：例如症状的严重程度、受试者的病状等等。例如，在一些实施方案中，多肽-药物缀合物如下来施用：每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周一次(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天一次(qod)、每天一次(qd)、每天两次(qid)或每天三次(tid)。
治疗癌症的方法
本公开提供用于向患有癌症的个体递送癌症化疗剂的方法。所述方法适用于治疗广泛多种癌症，包括癌瘤、肉瘤、白血病和淋巴瘤。
可使用本发明方法治疗的癌瘤包括但不限于食道癌、肝细胞癌、基底细胞癌(一种形式的皮肤癌)、鳞状细胞癌(各种组织)、膀胱癌，包括转移细胞癌(恶性膀胱肿瘤)，支气管癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、肺癌，包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌，肾上腺皮质癌、甲状腺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、肾细胞癌、原位导管癌或胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威氏肿瘤(Wilm's tumor)、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、成骨癌瘤、上皮癌以及鼻咽癌等等。
可使用本发明方法治疗的肉瘤包括但不限于纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、成骨肉瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤以及其它软组织肉瘤。
可使用本发明方法治疗的其它实体肿瘤包括但不限于神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、寡枝神经胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤以及成视网膜细胞瘤。
可使用本发明方法治疗的白血病包括但不限于a)慢性骨髓增生性综合征(多能造血干细胞的肿瘤病症)；b)急性髓性白血病(多能造血干细胞或限制性谱系潜能的造血细胞的肿瘤性转化)；c)慢性淋巴细胞性白血病(CLL；免疫不成熟的和功能不全的小淋巴细胞的克隆增殖)，包括B细胞CLL、T细胞CLL幼淋巴细胞白血病以及毛细胞白血病；以及d)急性淋巴母细胞性白血病(以淋巴母细胞的积聚为特征)。可使用本发明方法治疗的淋巴瘤包括但不限于B细胞淋巴瘤(例如伯基特氏淋巴瘤)；何杰金氏淋巴瘤；非何杰金氏B细胞淋巴瘤；等等。
实施例
提供以下实施例是为了给本领域普通技术人员提供如何实施并且使用本发明的完整的公开内容和说明，而不是要限定本发明人所视为其发明的范围，也不是要将下面的实验作为所进行的所有或仅有的实验。已尽力确保关于所用数值(例如数量、温度等)的精确性，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指出，份是重量份，分子量是重量平均分子量，温度是以℃为单位，且压力为大气压或接近大气压。可采用标准缩写，例如：bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m.，肌肉内；i.p.，腹膜内；s.c.，皮下；等等。
一般合成工序
提供适用于合成所公开的化合物的通常已知的化学合成方案和条件的许多一般参考文献是可获得的(参见例如，Smith和March,March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第五版,Wiley-Interscience,2001；或Vogel,A Textbook ofPractical Organic Chemistry,Including Qualitative Organic Analysis,第四版,New York:Longman,1978)。
如本文所述的化合物可通过本领域中已知的任何纯化方案来纯化，包括色谱法，如HPLC、制备性薄层色谱法、快速柱色谱法以及离子交换色谱法。可使用任何适合的固定相，包括正相和反相以及离子树脂。在某些实施方案中，所公开的化合物是经由硅胶和/或氧化铝色谱法来纯化。参见例如，Introduction to Modern LiquidChromatography,第2版,L.R.Snyder和J.J.Kirkland编著,John Wileyand Sons,1979；以及Thin Layer Chromatography,E.Stahl编著,Springer-Verlag,New York,1969。
在用于制备本发明化合物的任何过程期间，可能必需和/或需要保护所涉及的任何分子上的敏感性或反应性基团。这可借助于以下标准著作中所述的常规保护基来实现，如J.F.W.McOmie,“ProtectiveGroups in Organic Chemistry”,Plenum Press,London和New York1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in OrganicSynthesis”,第三版,Wiley,New York 1999；“The Peptides”；第3卷(编者：E.Gross和J.Meienhofer),Academic Press,London和New York1981；“Methoden der organischen Chemie”,Houben-Weyl,第4版,第15/l卷,Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit,“Aminosauren,Peptide,Proteine”,Verlag Chemie,Weinheim,Deerfield Beach和Basel 1982；和/或Jochen Lehmann,“Chemie derKohlenhydrate:Monosaccharide and Derivate”,Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974。保护基可在适宜的后续阶段使用本领域已知的方法除去。
本发明化合物可经由多种不同的合成路线使用可商购获得的起始材料和/或通过常规的合成方法制备的起始材料来合成。可用于合成本文所公开的化合物的合成路线的多个实施例在以下方案中描述。
合成3-甲基吡嗪啉酮化合物
3-甲基吡嗪啉酮化合物如以下方案1中所示进行合成：
方案1
化合物20(4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯(Pz-PFP))是如下由化合物10合成。向4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(429mg，1.97mmol)在2mL乙酸乙酯和12mLDMF中的溶液中添加在1mL乙酸乙酯中的五氟苯酚(725mg，3.94mmol)且将混合物冷却至0℃。向此溶液中添加405mg(1.97mmol)在1mL EtOAc中的DCC。将溶液在0℃下搅拌1小时，然后经4hr使其温至室温。将粗反应混合物经由PTFE针筒式过滤器过滤且装载到10g Biotage硅胶Samplet上，使用10％-100％EtOAc:己烷梯度进行色谱处理以产生无色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(d,J＝8.8Hz,2H),8.15(d,J＝8.8Hz,2H),3.52(s,2H),2.27(s,3H)。19F NMR(400MHz,CDCl3)δ-152.4(d,J＝18.8Hz),-158.1(t,J＝23.2Hz),-162.4(dd,J＝23.2,18.8Hz)。LRMS(ESI)C17H9F5N2O3[M+H]+的计算值：385.06；实测值：385.1。
化合物30(3-(4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头-酸)如下由化合物20合成。向4mL小瓶装入0.5mg(1.36μmol)Pz-PFP，向其中添加1mg(1.24μmol)H2N-接头-CO2H在DMA中的200μL溶液，接着添加溶于16μL中的0.21mg(2.48μmol)NaHCO3。搅拌此溶液过夜。将反应物用1M HCl酸化至pH 3且使用DCM萃取三次。然后将合并的有机物用盐水洗涤一次且经MgSO4干燥。粗反应混合物的纯化使用C18反相HPLC(柱型、柱尺寸、梯度)以两部分进行。
化合物50(3-(4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头-酰胺-载荷)如下由化合物30合成。向4mL小瓶装入2.0μmol(1当量)3-(4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头酸，向其中添加2当量DIPEA和2.0μmol HATU，接着添加于200μL DMA中的2.0μmol H2N-载荷。将溶液搅拌3小时，然后通过快速色谱法纯化。
合成3-(叔丁基)吡嗪啉酮化合物
3-(叔丁基)吡嗪啉酮化合物如以下方案2中所示进行合成：
方案2
化合物80(4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸)如下由化合物60和70合成。向40mL小瓶装入400mg 4-肼苯甲酸盐酸盐(2.13mmol，1当量)，接着是5mL乙酸和380μL(2.13mmol)4,4-二甲基-3-氧代戊酸乙酯且加热至回流。允许搅拌反应物16hr，并且然后冷却至室温，于是形成黄色晶体。将晶体通过过滤收集，用冷的乙酸洗涤，且抽吸过夜。
化合物90(4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯)如下由化合物80合成。向4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(1.97mmol)在2mL乙酸乙酯和12mL DMF中的溶液中添加在1mL乙酸乙酯中的五氟苯酚(3.94mmol)且将混合物冷却至0℃。向此溶液中添加在1mL EtOAc中的405mg(1.97mmol)DCC。将溶液在0℃下搅拌1小时，然后经4hr使其温至室温。将粗反应混合物经由PTFE针筒式过滤器过滤且装载到10g Biotage硅胶Samplet上，使用10％-100％EtOAc:己烷梯度进行色谱处理以产生无色固体。
化合物100(4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头酸)如下由化合物90合成。向4mL小瓶装入4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯(2μmol)，向其中添加1mg(2μmol)H2N-接头-CO2H在DMA中的200μL溶液，接着添加溶于16μL中的0.21mg(3μmol)NaHCO3。搅拌此溶液过夜。将反应物用1M HCl酸化至pH 3，且用DCM萃取三次。然后将合并的有机物用盐水洗涤一次且经MgSO4干燥。粗反应混合物的纯化使用C18反相HPLC(柱型、柱尺寸、梯度)以两个部分进行。
化合物120(4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头-酰胺-载荷)如下由化合物100合成。向4mL小瓶装入2.0μmol(1当量)4-(3-(叔丁基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺基)-接头酸，向其中添加2当量DIPEA和2.0μmol(1当量)HATU，接着添加于200μL DMA中的2.0μmol H2N-载荷。将溶液搅拌3小时，然后通过快速色谱法纯化。
合成3,4-二甲基吡嗪啉酮化合物
3,4-二甲基吡嗪啉酮化合物如以下方案3中所示进行合成：
方案3
化合物140(4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸)如下由化合物60和130合成。向40mL小瓶装入400mg 4-肼苯甲酸盐酸盐(2.13mmol，1当量)，接着是5mL乙酸和2.13mmol 2-甲基-3-氧代丁酸乙酯且加热至回流。允许搅拌反应物16hr，并且然后冷却至室温，于是形成粉色晶体。将晶体通过过滤收集，用冷的乙酸洗涤，且抽吸过夜。
化合物150(4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯)如下由化合物140合成。向4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(1.97mmol)在2mL乙酸乙酯和12mL DMF中的溶液中添加在1mL乙酸乙酯中的五氟苯酚(3.94mmol)且将混合物冷却至0℃。向此溶液中添加在1mL EtOAc中的405mg(1.97mmol)DCC。将溶液在0℃下搅拌1小时，然后经4hr使其温至室温。将粗反应混合物经由PTFE针筒式过滤器过滤且装载到10g Biotage硅胶Samplet上，使用10％-100％EtOAc:己烷梯度进行色谱处理以产生无色固体。
化合物160(4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰基氨基)-接头酸)如下由化合物150合成。向4mL小瓶装入4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯(2μmol)，向其中添加2μmol H2N-接头-CO2H在DMA中的200μL溶液，接着添加溶于16μL中的0.21mg(3μmol)NaHCO3。搅拌此溶液过夜。将反应物用1M HCl酸化至pH 3，且用DCM萃取三次。然后将合并的有机物用盐水洗涤一次且经MgSO4干燥。粗反应混合物的纯化使用C18反相HPLC(柱型、柱尺寸、梯度)以两个部分进行。
化合物180(4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰基氨基)-接头-酰胺-载荷)如下由化合物160合成。向4mL小瓶装入2.0μmol(1当量)4-(3,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酰基氨基)-接头酸，向其中添加在100μL DMA中的2当量DIPEA和2.0μmol(1当量)HATU，接着添加于200μL DMA中的2.0μmol H2N-载荷。将溶液搅拌3小时，并且然后通过快速色谱法纯化。
合成3-甲基吡嗪啉酮化合物
3-甲基吡嗪啉酮化合物如以下一般反应方案4中所示来合成：
方案4
根据如下更详细描述的反应进行一般反应方案4：
3-(2-(2-氧代乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯：向装有1.67mmol(707mg)Dess-Martin高碘烷的烘干的20mL小瓶中添加3.34mmol(270μL)吡啶，接着是2mL DCM且进行超声处理直到均匀。向此溶液中添加溶于3mL DCM中的1.39mmol 3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯且搅拌3h，之后添加5mL DCM、5mL 10％Na2S2O3水溶液以及5mL NaHCO3饱和水溶液。将此溶液搅拌5min，然后用1×5mLNaHCO3饱和水溶液、接着用1×5mL盐水萃取。将有机层经MgSO4干燥，通过旋转蒸发浓缩且使用10-100％乙酸乙酯:己烷梯度在硅胶上色谱处理，以90％产率得到291.4mg所需产物。
叔丁基-2-(2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)亚乙基)肼基甲酸酯：向3-(2-(2-氧代乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(0.659mmol，153mg)在1mL甲苯中的溶液中添加肼基甲酸叔丁酯(0.659mmol)。将溶液加热直到均匀且维持48h。将反应混合物浓缩且以粗形式进行到随后的步骤。
2-(2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)肼基甲酸叔丁酯：向叔丁基-2-(2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)亚乙基)肼基甲酸酯(0.659mmol)和乙酸(0.659mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加在1mL MeOH中的0.725mmol NaBH3CN且搅拌过夜。然后将反应用1mL NaHCO3饱和水溶液淬灭且用3×5mL乙酸乙酯萃取。将有机物合并，且经MgSO4干燥，过滤，浓缩且使用10％-100％乙酸乙酯:己烷在硅胶上色谱处理，得到所需产物。
3-(2-(2-肼基乙氧基)乙氧基)丙酸：向装有2-(2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)肼基甲酸叔丁酯的4mL小瓶中添加95:5TFA:水的溶液。将反应维持45min，然后在真空中浓缩。将此材料以粗形式用于随后的步骤。
3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸：向40mL小瓶装入3-(2-(2-肼基乙氧基)乙氧基)丙酸，接着是5mL乙酸和4,4-二甲基-3-氧代戊酸乙酯且加热至回流。允许搅拌反应物16hr，并且然后冷却至室温。将溶液在真空中浓缩且使用10-100％梯度在硅胶上进行色谱处理以产生所需产物。
3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯：向3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸(2mmol)在10mL乙酸乙酯中的溶液中添加在1mL乙酸乙酯中的五氟苯酚(4mmol)且冷却至0℃。向此溶液中添加在1mLEtOAc中的(2mmol)DCC。将溶液在0℃下搅拌1小时，然后经4hr使其温至室温。将粗反应混合物经由PTFE针筒式过滤器过滤且装载到10g Biotage硅胶Samplet(Biotage,Charlotte,NC)上，使用10％-100％EtOAc:己烷梯度进行色谱处理以得到无色固体。
N-“载荷”-3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺：向4mL小瓶装入3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯，向其中添加H2N-载荷在DMA中的500μL溶液，接着添加溶于50μL中的2当量NaHCO3且搅拌4h。将粗反应物通过硅胶色谱法使用10-100％乙酸乙酯:己烷梯度纯化以得到所需产物。
实施例1：
根据以下方案5进行实验以产生包含荧光可检测的标记和吡嗪啉酮偶联部分的缀合物。
方案5
向4mL小瓶装入0.5mg(1.36μmol)Pz-PFP，向其中添加1mg(1.24μmol)在DMA中的200μL溶液，接着添加溶于16μL中的0.21mg(2.48μmol)NaHCO3。搅拌此溶液3天。粗反应混合物的纯化是使用C18反相HPLC(Agilent poroshell 120，4.6mm×50mm，60％AcCN:40％H20至100％AcCN)以两部分进行，得到0.8mg紫色膜状物。LRMS(ESI)C17H9F5N2O3[M-H]-的计算值：1005.32；实测值：1005.1。
实施例2：
含FGly的肽与连接试剂的缀合
合并下列试剂且在1、2、4以及5小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
10μL在MilliQ水中的10mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH；
1×DPBS,pH 7.4(80μL)或100mM KOAc，pH 4.6(80μL)；以及
50mM在1:3MeCN:MilliQ水中的Pz(10μL)。
缀合反应的结果示于图2A中。图2A显示包括起始材料(fGly 13聚体和化合物80)、接着是在不同时间点(1、2、4以及5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。在13min处的峰值指示官能化的化合物向多肽的单加成。图2B是醛标记的抗体与官能化的化合物反应的示意图。如图2B所示，单官能化的化合物缀合至醛标记的抗体中的每个fGly残基。
实施例3：
化学计量变化
合并下列试剂且在2小时和24小时时采集等分试样以便通过C18RP HPLC在215nm下监测产物形成：
在MilliQ水(8μL)中的10mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH；
1×DPBS(62μL)；以及
在MilliQ(2μL)水中的20mM Pz-CO2H。
缀合反应的结果示于图3A中。图3A显示包括起始材料(fGly 13聚体和起始材料偶联化合物(SM))、接着是在不同时间点(在pH 7.4和pH 4.6下2和24小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。在约14min处的两个峰指示化合物SM向多肽的双加成。图3B显示使用与以上相同的反应条件进行的偶联化合物(SM)与fGly 6聚体肽的缀合。所得的缀合是通过LC-MS/MS来监测且双加成产物被鉴定为来自反应的唯一产物。图3C是醛标记的抗体与化合物SM反应的示意图。如图3C所示，两种化合物缀合至醛标记的抗体中的每个fGly残基。
实施例4：
用连接试剂缀合C末端醛标记的抗HER2抗体
在1mL Eppendorf管中，将20μL抗-HER2在1×DPBS缓冲液中的6.8μM溶液添加至20μL Pz在含0.5％MeCN的1×DPBS中的0.68mM溶液中。将此溶液在37℃下维持16h，并且然后还原，烷基化，且用胰蛋白酶消化。产物形成是通过液相色谱多反应监测质谱(LC-MRM-MS)来分析。
结果示于图4中。图4A显示示出用化合物C或化合物D进行缀合的示意图。图4B显示起始材料的比率且产物形成是通过液相色谱多反应监测质谱(LC-MRM-MS)来分析。由箭头来突出显示使用化合物D的情况下起始材料的消失。化合物C在相同反应条件不不与抗体显著地反应。
实施例5：
用连接试剂将修饰的AF594缀合至C末端醛标记的HER2
将以下Pz-AF594等效物添加至1.35μM抗HER2中：1、2、5、10、100或200Pz-AF594，且在37℃下孵育2hr。然后将样品在SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离。使用ImageQuant LAS 4000检测AF594荧光且使用考马斯染色检测总蛋白质。
图5A显示用于合成官能化的可检测的标记的反应方案。图5B显示官能化的可检测的标记与抗体的缀合反应的示意图。结果示于图5C中。图5C显示示出反应结果的SDS-PAGE凝胶的图像。SDS-PAGE用于将标记的重链从轻链上分离。可检测的标记的缀合通过荧光成像来测定。
实施例6：
抗体-可检测的标记缀合物的稳定性
Pz-AF594(151当量)在37℃下与6.6μM抗HER2反应16hr。将未反应的Pz-AF594通过尺寸排阻色谱法从反应混合物中除去。将所得的抗体-荧光团缀合物在4℃或37℃下在血浆或血清(人和小鼠)中孵育8天。SDS-PAGE用于分析缀合物。缀合物的存在通过在0.5秒曝光或2秒曝光进行荧光成像来测定。在任一情况下都没有观察到游离染料且缀合物没有分解(参见图6)。
实施例7：
Pz-Ph-2PEG-美登素
根据以下方案6进行实验以产生包含美登素和吡嗪啉酮(Pz)偶联部分的缀合物。
方案6
化合物270(氨基-2PEG-美登素)如下由化合物260合成。向28.2μmol化合物260(Fmoc-N-2PEG-美登素)在100μL MA中的溶液中添加564μmol哌啶且搅拌2h。将粗反应物通过快速色谱法(C18)使用1％MeCN:水(10个柱体积)接着50％MeCN:水(10个柱体积)的分步梯度进行纯化，以22％产率得到产物化合物270。LRMS(ESI)C39H57ClN4O12[M+H]+的计算值：809.3；实测值：809.3。
化合物280(Pz-Ph-2PEG-美登素)如下由化合物270合成。向烘干的1mL小瓶装入在120μL中的6.06μmol化合物270，接着是在80μL中的6.06μmol Pz-PFP(化合物20，4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸全氟苯酯)和在21μL水中的15.4μmol NaHCO3。搅拌反应物4h，然后通过反相HPLC纯化，得到0.9mg化合物280。LRMS(ESI)C50H65ClN6O14[M+Na]+的计算值：1031.4；实测值：1031.5。
醛标记的抗体(A)在2.5％DMA存在下，在pH 7、37℃下，与在PBS中的Pz-Ph-2PEG-美登素反应。反应混合物在24小时之后通过疏水性相互作用柱(HIC)来分析(图7，下图)。观察到单缀合(B)和二缀合(D)蛋白质缀合物。图7还显示醛标记的抗体(A)的疏水性相互作用柱(HIC)迹线(图7，上图)。
实施例8：
一般合成路线
本公开的吡嗪啉酮-载荷(Pz-载荷)构建体根据以下一般合成路线来合成。例如，β-酮酯是由羧酸衍生物合成，且所需Pz-载荷构建体随后由所得的β-酮酯合成。一般合成路线的实例示于以下方案7中。
方案7
制β-酮酯的一般路线
制Pz-载荷构建体的一般路线
亲核阱-吡嗪啉酮偶联部分
亲核阱-吡嗪啉酮偶联部分是根据以下实施例9-14中所示的反应方案来合成。亲核阱-吡嗪啉酮偶联部分包括硫基-Pz、硝基-Pz、氨基-Pz、苯酚-Pz、醇-Pz以及呋喃-Pz偶联部分，如以下实施例9-14中更详细地示出。
实施例9：
硫基-Pz偶联部分
硫基-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案8来合成。
方案8
3-(三苯甲基硫基)丙酸(A1)–向装备有干燥试管的二颈100mL圆底烧瓶装入三苯甲基氯(1.927g，6.9mmol)和6mL无水甲苯。在逐滴添加3-硫基丙酸(720uL，8.3mmol)之后，搅拌非均匀混合物16h以产生白色沉淀。将沉淀经由过滤收集，用冷甲苯洗涤，且在真空下干燥以产生1.875g所需产物。产物在未进一步纯化的情况下使用。
1H NMR(400MHz,DMSO)12.24(s,1H),7.25(m,15H),2.28(t,J＝6.8Hz,2H),2.17(t,J＝6.8Hz,2H)。
3-氧代-5-(三苯甲基硫基)戊酸乙酯(A2)–将3-(三苯甲基硫基)丙酸(287mg，0.824mmol)、麦德鲁姆酸(118.7mg，0.824mmol)和4-二甲基氨基吡啶在1.6mL无水DCM中的溶液冷却至0℃。向此溶液中添加在无水DCM中的0.7mL N,N’-二环己基碳二亚胺(100mg，0.819mmol)。将反应在0℃下维持30min，然后允许温至室温并维持5h。然后将反应物用10mL DCM稀释且转移至分液漏斗中。将有机相用3×10mL 1M HCl(水溶液)、3×10mL盐水洗涤。将有机相收集，然后经MgSO4干燥，过滤且在减压下蒸发。然后将所得的油状物溶于10mL无水乙醇中且回流16h。将粗反应物在减压下蒸发且装载到10g Biotage硅胶Samplet上，使用33％-100％己烷:DCM梯度对其进行色谱处理以产生174.1mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)7.43(app d,J＝9.2Hz,6H),7.31(app t,J＝7.2Hz,6H),7.22(app t,J＝7.2Hz,3H),4.17(t,J＝7.2Hz,2H),3.30(s,2H),2.45(m,4H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)。LRMS(ESI)C26H26O3S[M+Na]+的计算值：441；实测值：441。
1-甲基-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-1H-吡唑-5(4H)-酮(A3)-将甲基肼(10.8μL，0.205mmol)、3-氧代-5-(三苯甲基硫基)戊酸乙酯(85.6mg，0.205mmol)以及1mL无水乙醇在50℃下加热16h。使用50-100％己烷:乙酸乙酯梯度对粗反应物进行色谱处理，以64％产率产生52.3mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)7.44(app d,J＝8Hz,6H),7.31(m,6H),7.24(m,3H),3.26(s,2H),2.97(s,2H),2.43(t,J＝6.4Hz 2H),1.28(t,J＝6.4Hz,2H)。
3-(2-巯基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(A4)–向1-甲基-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-1H-吡唑-5(4H)-酮(46.3mg，0.116mmol)在4mL DCM中的溶液中添加0.1mL水、0.1mL三异丙基硅烷以及0.8mL三氟乙酸。搅拌反应物1h，然后在真空下浓缩。使用0-10％甲醇:DCM对粗混合物进行色谱处理以产生20.2mg所需产物。
LRMS(ESI)C6H10N2OS[M+H]+的计算值：159；实测值：159。
化合物A8(硫基-Pz-2PEG-美登素)是根据以下方案9由化合物A2和化合物270(氨基-2PEG-美登素)来合成。
方案9
2-(5-氧代-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(A5)–将3-氧代-5-(三苯甲基硫基)戊酸乙酯(A2)(499mg，1.24mmol)、2-肼基乙酸乙酯(191mg，1.23mmol)、三乙胺(17μL，0.124mmol)在10mL乙醇中的溶液在50℃下维持2h。将粗反应物在真空下浓缩且在硅胶上使用33-60％己烷:乙酸乙酯梯度进行色谱处理以产生320.6mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)7.44(app d,J＝8Hz,6H),7.31(m,6H),7.24(m,3H),4.40(s,2H),4.21(q,J＝7.2Hz,2H),3.03(s,2H),2.44(t,J＝6.8Hz,2H),2.37(t,J＝6.8Hz 2H),1.28(t,J＝7.2Hz,2H)。
2-(5-氧代-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸(A6)-向2-(5-氧代-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(A5)(97.8mg，0.207mmol)在1mL 2:3:1THF:MeOH:水中的溶液中添加10.7mg氢氧化锂。将反应维持2h，然后在40mL水与40mL乙醚之间分配。将水层酸化至pH 2且用DCM洗涤(3×60mL)。将有机相合并，经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩以产生65.5mg所需产物，其在未进一步纯化的情况下使用。
1H NMR(400MHz,DMSO)7.33(m,12H),7.25(m,3H),5.01(s,1H),4.47(s,2H),2.35(t,J＝7.2Hz,2H),2.28(t,J＝7.2Hz 2H)。
Trt-硫基Pz-2PEG-美登素(A7)-向氨基-2PEG-美登素(270)(18.5mg，0.0229mmol)、2-(5-氧代-3-(2-(三苯甲基硫基)乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸(A6)(6.8mg，0.0153mmol)、2,4,6-三甲基吡啶(0.0153mmol)在100μL DMF中的0℃溶液中添加6.8mg COMU((1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳正离子)。将反应物在0℃下维持30min，然后经30min温至室温。将所得的反应混合物用10mL EtOAc稀释，然后转移至分液漏斗中。将有机相用3×10mL 1M HCl、3×10mL饱和NaHCO3及3×10mL盐水洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩。使用5-12％甲醇:DCM梯度在硅胶上对粗反应物进行色谱处理以产生8.8mg所需产物。
LRMS(ESI)C65H79ClN6O14S[M+Na]+的计算值：1257.5；实测值：1257.5。
硫基-Pz-2PEG-美登素(A8)—将Trt-硫基Pz-2PEG-美登素(A7)(8.8mg)溶于400μL DCM中且冷却至0℃。向此溶液中添加10μL三异丙基硅烷、10μL水以及80μL三氟乙酸。将反应物在0℃下维持1h。通过反相色谱法使用5-67％MeCN:水梯度来纯化粗反应物以产生4mg所需产物。
LRMS(ESI)C46H65ClN6O14S[M-H]-的计算值：991.4；实测值：991.1。
实施例10：
硝基-Pz偶联部分
硝基-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案10来合成。
方案10
4-硝基丁酸叔丁酯(B1)-将丙烯酸叔丁酯(4.4mL，30mmol)在50mL硝基甲烷中的溶液冷却至-20℃。向此溶液中添加0.6mL 1,1,3,3-四甲基胍(TMG)且允许在-20℃下搅拌3h。将反应物用175mL DCM稀释，转移至分液漏斗且用5×100mL盐水洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩。将粗产物通过真空蒸馏(190毫托，65℃)纯化以产生1.27g所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.84(t,J＝6.8Hz,2H),2.41(t,J＝6.8Hz,2H),2.29(tt,J＝6.8,6.8Hz,2H),1.47(s,9H)。
4-硝基丁酸(B2)—向4-硝基丁酸叔丁酯(B1)在2mL DCM中的溶液中添加1mL三氟乙酸且允许搅拌3h。将甲苯(4mL)添加至反应混合物中，然后在真空中浓缩。将此操作重复再次。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.52(t,J＝6.8Hz,2H),2.57(t,J＝6.8Hz,2H),2.33(tt,J＝6.8,6.8Hz,2H)。
6-硝基-3-氧代己酸甲酯(B3)—将4-硝基丁酸(233mg，1.75mmol)(B2)、225μL乙二酰氯以及5mL甲苯的溶液在80℃下加热19h，并且然后在真空下浓缩。将粗反应混合物与甲苯(3×5mL)共沸。将所得的油状物溶于1.6mL无水DCM中且经20min逐滴添加至麦德鲁姆酸(199mg)和4-二甲基氨基吡啶(323mg)的0℃溶液中。添加后，允许将溶液温至室温并维持90min。将反应混合物用60mL DCM稀释且用3×40mL 1M HCl和2×40mL盐水洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩。然后将所得的油状物溶于10mL甲醇中且在65℃下加热16h。然后将反应混合物在真空下浓缩且在硅胶上使用33-100％己烷:乙酸乙酯梯度进行色谱处理以得到189mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.46(t,J＝6.8Hz,2H),3.76(s,3H),3.49(s,2H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H),2.32(tt,J＝6.8,6.8Hz,2H)。
1-甲基-3-(3-硝基丙基)-1H-吡唑-5(4H)-酮(B4)-将189mg 6-硝基-3-氧代己酸甲酯(B3)和57.8μL甲基肼在3mL乙醇中的溶液在50℃下搅拌5h。将反应物在真空下浓缩且在硅胶上使用0-100％乙酸乙酯:乙腈梯度进行色谱处理以产生91mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.54(t,J＝6.8Hz,2H),3.62(s,3H),3.21(s,2H),2.54(t,J＝6.8Hz,2H),2.38(tt,J＝6.8,6.8Hz,2H)。LRMS(ESI)C7H11N3O3[M+H]+的计算值：186；实测值：186。
实施例11：
氨基-Pz偶联部分
氨基-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案11来合成。
方案11
5-((叔丁氧羰基)氨基)-3-氧代戊酸乙酯(C1)-将N-Boc-氨基丙酸(480mg，2.54mmol)、麦德鲁姆酸(2.54mmol)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(2.79mmol)在5mL无水DCM中的溶液冷却至0℃。向此溶液中添加在2mL无水DCM中的N,N’-二环己基碳二亚胺(2.79mmol)。将溶液在0℃下维持3h，用40mL DCM稀释且转移至分液漏斗。将有机相用2×15mL 1M HCl、2×15mL盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩。然后将粗反应物溶于7mL乙醇中且在80℃下加热16h。将反应混合物在真空下浓缩，并且然后在硅胶上使用0-90％乙酸乙酯:己烷梯度进行色谱处理以得到287.5mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.99(bs,1H),4.22(q,J＝7.2Hz,2H),3.46(s,2H),3.39(app q,J＝6Hz,2H),2.79(t,J＝6Hz,2H),1.44(s,9H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)。
(2-(1-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(C2)-将287.5mg 5-((叔丁氧羰基)氨基)-3-氧代戊酸乙酯(C1)和58.3μL甲基肼在1mL乙醇中的溶液在65℃下加热5h。将反应物在真空下浓缩且在硅胶上使用0-15％甲醇:DCM梯度进行色谱处理以产生223.8mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.89(bs,1H),3.44(app q,J＝6.4Hz,2H),3.29(s,3H),3.24(s,2H),2.57(t,J＝6.4Hz,2H),1.44(s,9H)。LRMS(ESI)C11H19N3O3[M+H]+的计算值：242；实测值：242。
3-(2-氨基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮·氯化氢(C3)-向77.7mg(2-(1-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(C2)在1mL甲醇中的溶液中添加0.8mL 3M甲醇HCl。将反应维持18h，之后将反应物在真空下浓缩以产生73.5mg呈其HCl盐形式的所需产物。
1H NMR(400MHz,d3-MeOD)3.77(s,3H),3.32(t,J＝7.6Hz,2H),3.10(t,J＝7.6Hz,2H)。LRMS(ESI)C6H11N3O[M+H]+的计算值：142；实测值：142。
实施例12：
苯酚-Pz偶联部分
苯酚-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案12来合成。
方案12
3-(2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(D1)-将在4mL乙醇中的甲基肼(165μL，3.15mmol)和4-羟基香豆素(170mg，1.05mmol)加热至70℃持续48h。在冷却至室温之后，添加200μL乙酸且在真空下浓缩混合物。将粗反应物通过硅胶色谱法使用0-100％DCM:乙酸乙酯梯度纯化，得到120mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)10.01(s,1H)7.35(app td,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.19(app dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.04(app dd,J＝8.2,0.8Hz,1H),6.95(app td,J＝8,1.2Hz,1H),3.71(s,2H),3.43(s,3H)。LRMS(ESI)C10H10N2O2[M+H]+的计算值：191；实测值：191。
实施例13：
醇-Pz偶联部分
醇-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案13来合成。
方案13
3-(羟基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(E1)-将甲基肼(1.16mmol)和季酮酸(1.16mmol，115.5mg)的溶液在1mL乙醇中加热至75℃持续20h。冷却至室温后形成晶体。将晶体收集，用冷乙醇洗涤，且干燥以产生45.5mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.83(s,2H),4.58(s,1H),3.17(s,3H)。LRMS(ESI)C5H8N2O2[M+H]+的计算值：129；实测值：129。
实施例14：
呋喃-Pz偶联部分
呋喃-Pz亲核阱偶联部分是根据以下方案14来合成。
方案14
将4-(3-(呋喃-3-基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(F1)-将3-(呋喃-3-基)-3-氧代丙酸乙酯(1.46mmol)和4-肼苯甲酸氯化氢在5.5mL乙醇中的溶液回流20h。冷却至室温后，将反应混合物在真空下浓缩且经由硅胶色谱法使用3-60％乙酸乙酯:己烷梯度纯化以产生122.4mg产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.10(m,4H),7.97(dd,J＝1.6,0.8Hz,1H),7.55(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),6.90(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),4.40(q,J＝7.2Hz,2H),3.78(s,2H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)。LRMS(ESI)C16H14N2O4[M+H]+的计算值：299；实测值：299。
亲电子阱-吡嗪啉酮偶联部分
亲电子阱-吡嗪啉酮偶联部分是根据如下实施例15和16中所示的反应方案来合成。亲电子阱-吡嗪啉酮偶联部分包括EtO2C-Pz和MeO2C-CH2-Pz偶联部分，如在以下实施例15-16中更详细地显示。
实施例15：
EtO2C-Pz偶联部分
乙酯-吡嗪啉酮(EtO2C-Pz)亲电子阱偶联部分是根据以下方案15来合成。
方案15
1-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(G1)–将165μL甲基肼、660mg二乙基草酰乙酸钠、179μL乙酸以及6mL乙醇的溶液在50℃下加热20h。将反应物冷却至室温，在真空下浓缩且通过硅胶色谱法使用3％甲醇:DCM纯化以产生120mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)5.97(s,1H),4.34(q,J＝7.2Hz,2H),3.72(s,3H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H)。LRMS(ESI)C7H10N2O3[M+H]+的计算值：171；实测值：171。
实施例16：
MeO2C-CH2-Pz偶联部分
乙酸甲酯-吡嗪啉酮(MeO2C-CH2-Pz)亲电子阱偶联部分是根据以下方案16来合成。
方案16
2-(1-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-3-基)乙酸甲酯(H1)–将338μL二甲基肼、1.12g二甲基-1,3-丙酮二甲酸酯在12mL乙醇中的溶液在50℃下加热20h。将反应物冷却至室温，在真空下浓缩且通过硅胶色谱法使用5％甲醇:DCM纯化以产生796mg所需产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)3.77(s,3H),3.50(s,2H),3.89(s,2H),3.32(s,3H)。LRMS(ESI)C7H10N2O3[M+H]+的计算值：171；实测值：171。
吡嗪啉酮偶联部分与含fGly的肽的缀合
进行实验以便将含fGly的肽缀合至如上根据本公开的实施方案所述的吡嗪啉酮偶联部分。
实施例17：
含FGly的肽与硫基-Pz偶联部分的缀合
合并下列试剂且在3和15小时时采集等分试样且通过C18RPHPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS，
10μL在DMA中的50mM化合物A4，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
产物(I2、I3和I4)经由HPLC来分离且在4000QTRAP上使用LC-MS/MS方法进行分析。前体和产物离子指示所需产物的形成。
缀合反应的结果示于图8A-8D中。图8A显示包括起始材料(fGly12聚体和化合物A4)、接着是在不同时间点(3和15小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图8B是来自缀合反应的产物I2的LC-MS/MS分析。图8C是来自缀合反应的产物I3的LC-MS/MS分析。图8D是来自缀合反应的产物I4的LC-MS/MS分析。
实施例18：
含FGly的肽与氨基-Pz偶联部分的缀合
合并下列试剂且在4和16小时时采集等分试样且通过C18RPHPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS，
10μL在DMA中的50mM化合物C3，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。两种产物均被鉴定为双加成产物C4，其中除存在母体离子[M+H]+之外，主要离子是[M+3]/3+。
LRMS(ESI)C68H107N21O18[M+H]+的计算值：1506.8；实测值：1506.8；C68H107N21O18[M+3]/3+的计算值：502.9；实测值：503.0。
缀合反应的结果示于图9A-9C中。图9A显示包括起始材料(fGly12聚体和化合物C3)、接着是在不同时间点(4和16小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图9B和9C是来自缀合反应的产物C4的LC-MS/MS分析。
实施例19：
含FGly的肽与苯酚-Pz偶联部分的缀合
合并下列试剂且随时间采集等分试样且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM化合物D1，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。产物被鉴定为双加成产物和单加成产物。除存在母体离子[M+H]+之外，双加成的主要离子是[M+2]/2+，而除存在母体离子[M+H]+之外，单加成的主要离子是[M+H+Na]/2+。
缀合反应的结果示于图10A-10D中。图10A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物D1)接着是反应混合物随着时间的一系列RPHPLC迹线。图10B和10C是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。图10D是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
双加成产物
LRMS(ESI)C76H105N19O20[M+H]+的计算值：1604.8；实测值：1605.7；C76H105N19O20[M+2]/2+的计算值：802.9；实测值：802.9。
单加成产物
LRMS(ESI)C66H95N17O18[M+H]+的计算值：1414.7；实测值：1414.4；C66H95N17O18[M+H+Na]/2+的计算值：718.9；实测值：718.9。
实施例20：
含FGly的肽与EtO2C-Pz偶联部分的缀合
合并下列试剂且在0.5、5以及10小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS，
10μL在DMA中的50mM化合物G1，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。主要产物被鉴定为双加成产物。双加成的主要离子是母体离子。
LRMS(ESI)C70H105N19O22[M+H]+的计算值：1564.8；实测值：1564.7。
缀合反应的结果示于图11A和11B中。图11A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物G1)接着是在第0.5、5以及10小时时的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图11B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
实施例21：
含FGly的肽与MeO2C-CH2-Pz偶联部分的缀合
合并下列试剂且在1、5.5以及10小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS，
10μL在DMA中的50mM化合物H1，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。主要产物被鉴定为双加成产物。双加成的主要离子是母体离子。
LRMS(ESI)C70H105N19O22[M+H]+的计算值：1564.8；实测值：1564.7。
缀合反应的结果示于图12A和12B中。图12A显示包括起始材料(fGly 12聚体和化合物H1)接着是在第1、5.5以及10小时时的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图12B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
亲核试剂与含fGly的肽的缀合
进行对照实验以便将含fGly的肽缀合至多种亲核试剂，如在以下实施例中更详细描述。
实施例22：
含FGly的肽与双甲酮的缀合
合并下列试剂且在1.5、11.5以及48小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS，
10μL在DMA中的50mM双甲酮，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。主要产物被鉴定为双加成产物。
LRMS(ESI)C72H109N15O20[M+H]+的计算值：1504.8；实测值：1504.7。
缀合反应的结果示于图13A和13B中。图13A显示包括起始材料(fGly 12聚体和双甲酮)接着是在不同时间点(1.5、11.5以及48小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图13B是来自缀合反应的双加成产物的LC-MS/MS分析。
实施例23：
含FGly的肽与麦德鲁姆酸的缀合
合并下列试剂且在2和14小时时采集等分试样且通过C18RPHPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM麦德鲁姆酸，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。主要产物被鉴定为单加成产物。
LRMS(ESI)C62H93N15O20[M+H]+的计算值：1368.7；实测值：1368.5。
缀合反应的结果示于图14A和14B中。图14A显示包括起始材料(fGly 12聚体和麦德鲁姆酸(Meldrum’s acid))接着是在不同时间点(2和14小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图14B是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
实施例24：
含FGly的肽与巴比妥酸的缀合
合并下列试剂且在2、6.5以及10小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM巴比妥酸，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
将产物经由HPLC分离且通过ESI-MS分析。所有产物均被鉴定为单加成产物。
LRMS(ESI)C62H93N15O20[M+H]+的计算值：1352.7；实测值：1352.5。
缀合反应的结果示于图15A-15D中。图15A显示包括起始材料(fGly 12聚体和巴比妥酸)接着是在不同时间点(2、6.5以及10小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。图15B-15D是来自缀合反应的单加成产物的LC-MS/MS分析。
实施例25：
含FGly的肽与季酮酸的缀合
根据以下方案17，季酮酸经历酮-烯醇互变异构化。
方案17
合并下列试剂且在2.5和14.5小时时采集等分试样且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM季酮酸，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
没有观察到含fGly的肽与季酮酸的缀合。反应结果示于图16中。图16显示包括起始材料(fGly 12聚体和季酮酸)接着是在不同时间点(2.5和14.5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
实施例26：
含FGly的肽与吡喃酮衍生物的缀合
根据以下方案18，4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮经历酮-烯醇互变异构化。
方案18
合并下列试剂且在1.5和13.5小时时采集等分试样且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM 4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
没有观察到含fGly的肽与4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮的缀合。反应结果示于图17中。图17显示包括起始材料(fGly 12聚体和4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮)接着是在不同时间点(1.5和13.5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
实施例27：
含FGly的肽与呋喃酮的缀合
合并下列试剂且在1.5、6以及10小时时采集等分试样并且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM 2(5H)-呋喃酮，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
没有观察到含fGly的肽与2(5H)-呋喃酮的缀合。反应结果示于图18中。图18显示包括起始材料(fGly 12聚体和2(5H)-呋喃酮)接着是在不同时间点(1.5、6和10小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
实施例28：
含FGly的肽与(苯基磺酰基)乙腈的缀合
合并下列试剂且在0.5和12.5小时时采集等分试样且通过C18RP HPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM(苯基磺酰基)乙腈，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
没有观察到含fGly的肽与(苯基磺酰基)乙腈(PhSO2-CH2-CN)的缀合。反应结果示于图19中。图19显示包括起始材料(fGly 12聚体和(苯基磺酰基)乙腈)接着是在不同时间点(0.5和12.5小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
实施例29：
含FGly的肽与硝基甲基苯基砜的缀合
合并下列试剂且在1和13小时时采集等分试样且通过C18RPHPLC在215nm下就产物形成对反应进行监测：
70μL MilliQ水，
10μL 10×DPBS或10μL 500mM磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，
10μL在DMA中的50mM硝基甲基苯基砜，
10μL 1mM H2N-GPSVFPL(fGly)TPSR-OH。
没有观察到含fGly的肽与硝基甲基苯基砜(PhSO2-CH2-NO2)的缀合。反应结果示于图20中。图20显示包括起始材料(fGly 12聚体和硝基甲基苯基砜)接着是在不同时间点(1和13小时)的反应混合物的一系列RP HPLC迹线。
吡嗪啉酮连接试剂与醛标记的抗体的缀合
进行实验以便将醛标记的抗体缀合至如上根据本公开的实施方案描述的吡嗪啉酮连接试剂。
实施例30：
醛标记的抗体与Pz-Ph-2PEG-美登素的缀合
Pz-Ph-2PEG-美登素根据以上实施例7来合成。
醛标记的抗体(A)在2.5％DMA存在下，在pH 7、37℃下，与在PBS中的Pz-Ph-2PEG-美登素反应。反应混合物在24小时之后通过疏水性相互作用柱(HIC)来分析(图7，下图)。观察到单缀合(B)和二缀合(D)蛋白质缀合物。图7还显示醛标记的抗体(A)的疏水性相互作用柱(HIC)迹线(图7，上图)。
Pz修饰的mAb的MS表征
在37℃下将缀合抗体用50mM DTT还原30min。将还原的样品在70℃下在与4000QTRAP串联的PLRP HPLC柱上分离。获得MS1光谱，且使用Bioanalylst软件去卷积。抗体的轻链显示没有修饰，而重链显示主要产物对应于两个Pz-Ph-2PEG-美登素部分的加成(图21)。
实施例31：
醛标记的抗体与硫基-Pz-2PEG-美登素的缀合
硫基-Pz-2PEG-美登素根据以上实施例9来合成。
醛标记的抗体(A)在pH 7、37℃下，在2.5％DMA存在下与在PBS中的硫基-Pz-2PEG-美登素反应。反应混合物在5.5小时之后通过疏水性相互作用柱(HIC)来分析(图22)。仅观察到单缀合(B和C)蛋白缀合物。图22显示醛标记的抗体(A)、具有1的药物抗体比(DAR)的蛋白质(B)以及具有2的DAR的蛋白质(C)的疏水性相互作用柱(HIC)迹线。
在37℃下将缀合抗体用50mM DTT还原30min。将还原的样品在70℃下在与4000QTRAP串联的PLRP HPLC柱上分离。获得MS1光谱，且使用Bioanalylst软件去卷积。抗体的轻链显示没有修饰，而重链显示缀合产物(图23)。
另外的吡嗪啉酮偶联部分
另外的基于吡嗪啉酮的偶联部分可如以下实施例中所述来合成。
实施例32：
N-双-吡嗪啉酮偶联部分
N-双-吡嗪啉酮(N-双-Pz)偶联部分可根据方案19合成。
方案19
使用Graham,等,JACS,1954,76,3993-3995中描述的修饰程序，4-(双(5-氧代-1-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-3-基)氨基)丁酸是通过将苯基-3-氨基-5-吡唑啉酮(20g)、γ-氨基丁酸(25g)在20mL正丁醇中在回流下加热3天来制备。将沉淀收集，用乙酸酸化，并且由热乙醇再结晶以得到5g所需产物(AA)。带有载荷的N-双-吡唑啉酮(BB)合成如下。向4mL小瓶装入在200μL DMA中的2.0μmol化合物BB、2当量H2N-载荷、2当量DIPEA以及1当量HATU。搅拌溶液1小时，然后通过反相色谱法纯化。
实施例33：
C-双-吡嗪啉酮偶联部分
C-双-吡嗪啉酮(C-双-Pz)偶联部分可根据方案20-22合成。
方案20
4-(6-叠氮基己基)-3,5-二氧代庚二酸二甲酯(CC)–向300mL圆底烧瓶装入10mmol 4-(6-氯己基)-3,5-二氧代庚二酸二甲酯(Reihm,等,Org.Biomol.Chem.,2008,6,3079-3084)、25mmol叠氮化钠以及50mL DMF。搅拌反应物16h，并且然后用水(200mL)淬灭。用Et2O(200mL)萃取反应物三次。然后将合并的有机物用水(150mL)洗涤两次且用盐水(200mL)洗涤一次。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下除去溶剂。将粗的反应混合物通过快速色谱法纯化，得到所需产物(CC)。
(3E,5E)-4-(6-叠氮基己基)-3,5-双(2-(叔丁氧羰基)-2-甲基亚肼基)庚二酸二甲酯(DD)–向20mL小瓶装入10mmol化合物CC、N,N-Boc-1-甲肼(25mmol)以及10mL乙醇。将反应物在50℃下搅拌12h，在真空下浓缩，且在未进一步纯化的情况下使用。
方案21
3,3'-(7-叠氮基庚烷-1,1-二基)双(1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮)(EE)–向20mL小瓶装入5mmol化合物DD和10mL 10％TFA在乙醇中的溶液。在室温下搅拌反应物1小时，并且然后在50℃下加热4h。冷却至室温后，将反应物在真空下浓缩且与甲苯(3×5mL)共沸。将粗反应混合物通过快速色谱法纯化，得到所需产物(EE)。
3,3'-(7-氨基庚烷-1,1-二基)双(1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮)(FF)–向20mL小瓶装入5mmol化合物EE、8mmol三苯基膦、30当量水以及5mL DCM。将反应物搅拌12小时，在真空下浓缩且通过反相快速色谱法使用0-100％水:MeCN梯度来纯化，得到所需产物(FF)。
方案22
C-双-Pz-载荷(GG)–向4mL小瓶装入在200μL DMA中的2.0μmol化合物FF、1当量HO2C-载荷、2当量DIPEA以及1当量HATU。搅拌溶液1小时，然后通过反相色谱法使用0-100％水:MeCN梯度来纯化，得到所需产物(GG)。
实施例34：
Pz-CH2-Pz’的差异有效负载
缀合至两个不同部分的双-吡嗪啉酮(Pz-CH2-Pz’)偶联部分可根据方案23和24来合成。
方案23
化合物HH–化合物HH通过将2mmol化合物3,5-二氧代庚二酸二甲酯(Reihm等,Org.Biomol.Chem.,2008,6,3079-3084)与1mmol受保护的烷基肼在1mL乙醇中混合2小时来合成。将反应物在真空下浓缩且在未进一步纯化的情况下使用。
化合物II–向20mL小瓶装入0.5mmol化合物HH、0.5mmol受保护的烷基肼以及5mL乙醇。搅拌反应物2小时，然后在真空下浓缩。将粗反应物在未进一步纯化的情况下使用。
方案24
化合物JJ–向4mL小瓶装入0.1mmol化合物II和1mL DCM。向此溶液中添加100μL水、100μL三异丙基硅烷、800μL三氟乙酸且在室温下搅拌反应1小时。将粗反应物通过反相快速色谱法使用0-100％水:MeCN梯度纯化以产生所需产物(JJ)。
实施例35：
丙二腈-Pz
丙二腈-Pz偶联部分可根据方案25合成。
方案25
实施例36：
α-取代的-吡嗪啉酮
α-取代的-Pz偶联部分可根据方案26来合成。
方案26
2-(4-氟代-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(KK)-将2-氟乙酰乙酸乙酯(1.23mmol)、2-肼基乙酸乙酯(1.23mmol)、三乙胺(17μL，0.124mmol)在10mL乙醇中的溶液在50℃下维持2h。将粗反应物在真空下浓缩且在硅胶上使用33-60％己烷:乙酸乙酯梯度进行色谱处理以产生所需产物(KK)。
2-(4-氟代-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸(LL)-向化合物KK(0.207mmol)在1mL 2:3:1THF:MeOH:水中的溶液中添加氢氧化锂(10.7mg)。将反应维持2h，然后在40mL水与40mL乙醚之间分配。将水层酸化至pH 2且用3×60mL DCM洗涤。将有机相合并，经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩以产生所需产物(LL)，其在未进一步纯化的情况下使用。
氟代-Pz-载荷(MM)–将COMU(6.8mg)添加至H2N-2PEG-May(化合物270)(18.5mg，0.0229mmol)、2-(4-氟代-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酸(LL)(0.0153mmol)、2,4,6-三甲基吡啶(0.0153mmol)在100μL DMF中的0℃溶液中。将反应在0℃下维持30min，然后经30min温至室温。将所得的反应混合物用10mL EtOAc稀释，然后转移至分液漏斗中。将有机相用3×10mL 1M HCl、3×10mL饱和NaHCO3以及3×10mL盐水洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤且在真空下浓缩。使用5-12％甲醇:DCM梯度在硅胶上对粗反应物进行色谱处理以产生所需产物。
尽管已经参照具体实施方案描述了本发明，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的真正精神和范围的情况下，可以作出各种改变并且可以替换等效物。另外，可以进行很多修改，使特定的情形、材料、物质组成、方法、一个或多个方法步骤适应本发明的目标、精神和范围。所有这样的修改旨在处于本文所附的权利要求书的范围内。

Claims (52)

1.一种缀合物，其包含：
至少一个下式的修饰的氨基酸残基：
其中
X是N、NH、O、S、CH或CH2；
Y1和Y2各自独立地选自N、O以及S；
n是1或2；
R2选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R4是任选的并且如果存在，则选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R5是任选的并且如果存在，则是氢或羟基；并且
R6选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基，
其中W1和W2中的一个是多肽且另一个是药物或可检测的标记，
其中虚线表示任选的键，
其中当R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键时，n是1并且R4和R5不存在，并且
其中，当n是2时，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键并且R5不存在。
2.如权利要求1所述的缀合物，其中Y1是N。
3.如权利要求1所述的缀合物，其中Y2是O。
4.如权利要求1所述的缀合物，其中R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
5.如权利要求1所述的缀合物，其中R2是甲基、叔丁基或芳基。
6.如权利要求1所述的缀合物，其中R4-碳与R5-碳之间的虚线是双键，n是1并且R4和R5不存在。
7.如权利要求1所述的缀合物，其中R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键，n是1并且R5是羟基。
8.如权利要求1所述的缀合物，其中n是2，R4-碳与R5-碳之间的虚线不是双键并且R5不存在。
9.如权利要求1所述的缀合物，其中X与Y1之间的虚线是键，以使得所述修饰的氨基酸残基具有下式：
10.如权利要求1所述的缀合物，其中X与Y1之间的虚线不是键，以使得所述修饰的氨基酸残基具有下式：
11.如权利要求1所述的缀合物，其中所述可检测的标记包括荧光团。
12.如权利要求1所述的缀合物，其中W1是药物或可检测的标记，并且W2是多肽。
13.如权利要求1所述的缀合物，其中W1是多肽，并且W2是药物或可检测的标记。
14.一种下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3选自羟基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
15.如权利要求14所述的化合物，其中R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
16.如权利要求14所述的化合物，其中R2是甲基、叔丁基或芳基。
17.如权利要求14所述的化合物，其中R3是取代的烷基或取代的芳基。
18.如权利要求17所述的化合物，其中R3被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、氨基酰基、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基。
19.如权利要求14所述的化合物，其中R3是烷基酰胺或取代的烷基酰胺。
20.如权利要求14所述的化合物，其中R3是-R9W。
21.如权利要求14所述的化合物，其中R7是氢。
22.如权利要求14所述的化合物，其中R7是卤素。
23.如权利要求14所述的化合物，其中R7是烷基或取代的烷基。
24.如权利要求14所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
4-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸(化合物10)；
3-(2-巯基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮(化合物A4)；
3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸(化合物230)；
3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯(化合物240)；以及
N-“载荷”-3-(2-(2-(3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺(化合物250)。
25.一种下式的化合物：
其中
R2选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R7选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R8选自烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰胺、取代的酰胺、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基以及-R9W；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
26.如权利要求25所述的化合物，其中R2是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基。
27.如权利要求25所述的化合物，其中R2是甲基、叔丁基或芳基。
28.如权利要求25所述的化合物，其中R7是氢。
29.如权利要求25所述的化合物，其中R7是卤素。
30.如权利要求25所述的化合物，其中R7是烷基或取代的烷基。
31.如权利要求30所述的化合物，其中R8是-R9W。
32.一种缀合物，其包含：
一种或多种下式的化合物：
其中
X1和X2各自独立地选自N和CH；
Y1和Y3各自独立地选自N和S；
Y2和Y4各自独立地选自N、O以及S；
R2和R10各自独立地选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W1a、W1b以及W2各自独立地选自药物、可检测的标记以及多肽。
33.如权利要求32所述的缀合物，其中Y1和Y3是N。
34.如权利要求32所述的缀合物，其中R2和R10各自独立地选自烷基、取代的烷基、芳基以及取代的芳基。
35.如权利要求32所述的缀合物，其中R2和R10各自独立地选自甲基、叔丁基以及芳基。
36.如权利要求32所述的缀合物，其中Y2和Y4是O。
37.如权利要求32所述的缀合物，其中W1a和W1b各自独立地选自药物和可检测的标记，且W2是多肽。
38.一种制备缀合物的方法，所述方法包括：
在反应混合物中合并：
如权利要求14所述的化合物，与
包含反应性基团的第二化合物，
其中所述合并是在适于促进所述化合物与所述第二化合物的所述反应性基团之间的反应以形成缀合物的反应条件下进行；以及
将所述缀合物从所述反应混合物中分离。
39.如权利要求38所述的方法，其中R3是-R9W，W是药物或可检测的标记，并且所述第二化合物是多肽。
40.如权利要求38所述的方法，其中R3是-R9W，W是多肽，并且所述第二化合物是药物或可检测的标记。
41.如权利要求38所述的方法，其中所述反应性基团包括反应性醛基或反应性酮基。
42.如权利要求38所述的方法，其中所述反应混合物包含水。
43.如权利要求38所述的方法，其中所述反应混合物具有7的pH。
44.如权利要求38所述的方法，其中所述反应条件是在37℃的温度下。
45.一种药物组合物，其包含：
如权利要求1所述的缀合物；以及
药学上可接受的赋形剂。
46.一种向受试者递送缀合物的方法，所述方法包括：
向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的缀合物。
47.一种治疗受试者的病状的方法，所述方法包括：
向患有所述病状的所述受试者施用治疗有效量的包含如权利要求1所述的缀合物的药物组合物，其中所述施用有效治疗所述受试者的所述病状。
48.一种包含下式化合物的缀合物：
其中
X是N或CH；
R3和R11各自独立地选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基和取代的杂环基以及-R9W；
R7和R12各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷基烷氧基、取代的烷基烷氧基、酰基、羧基以及羧基酯；
R9选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；
R13选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、酰基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺以及-R14W；
R14选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、羧基、羧基酯、酰基氨基、烷基酰胺、取代的烷基酰胺、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环基以及取代的杂环基；并且
W选自药物、可检测的标记以及多肽。
49.如权利要求48所述的缀合物，其中X是N。
50.如权利要求48所述的缀合物，其中X是CH。
51.如权利要求48所述的缀合物，其中R3和R11各自独立地选自甲基和苯基。
52.如权利要求48所述的缀合物，其中R13是H或取代的烷基。
CN201380069173.2A 2012-11-12 2013-09-11 用于制备缀合物的化合物和方法 Pending CN104884056A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261725405P 2012-11-12 2012-11-12
US61/725,405 2012-11-12
PCT/US2013/059267 WO2014074218A1 (en) 2012-11-12 2013-09-11 Compounds and methods for producing a conjugate

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104884056A true CN104884056A (zh) 2015-09-02

Family

ID=50685059

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380069173.2A Pending CN104884056A (zh) 2012-11-12 2013-09-11 用于制备缀合物的化合物和方法

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9579390B2 (zh)
EP (1) EP2916835A4 (zh)
JP (1) JP2016500058A (zh)
KR (1) KR20150083121A (zh)
CN (1) CN104884056A (zh)
AU (1) AU2013341711A1 (zh)
CA (1) CA2890190A1 (zh)
WO (1) WO2014074218A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109725101A (zh) * 2017-10-31 2019-05-07 正大天晴药业集团股份有限公司 盐酸特拉万星原料中有关物质的检测方法
CN113891893A (zh) * 2019-03-22 2022-01-04 加利福尼亚大学董事会 用于修饰靶分子的组合物和方法
CN114716380A (zh) * 2022-04-01 2022-07-08 新乡医学院 一种高效相转移催化的4-取代吡唑酮类化合物不对称氟化方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
LT3590949T (lt) 2010-10-01 2022-07-25 Modernatx, Inc. Ribonukleorūgštys, kurių sudėtyje yra n1-metil-pseudouracilų, ir jų naudojimas
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
MX354267B (es) 2011-10-03 2018-02-21 Moderna Therapeutics Inc Star Nucléosidos, nucleótidos, y ácidos nucleicos modificados, y usos de los mismos.
US20130156849A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
CA2868996A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
HRP20220607T1 (hr) 2012-11-26 2022-06-24 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana rna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US20160194368A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
US9493413B2 (en) * 2013-11-27 2016-11-15 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
CA2947484C (en) 2014-06-06 2023-05-09 Redwood Bioscience, Inc. Anti-her2 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
US11466096B2 (en) 2017-03-17 2022-10-11 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
EP3638215A4 (en) 2017-06-15 2021-03-24 Modernatx, Inc. RNA FORMULATIONS
MX2020002348A (es) 2017-08-31 2020-10-08 Modernatx Inc Métodos de elaboración de nanopartículas lipídicas.
MX2020009950A (es) * 2018-03-23 2021-04-28 Carmot Therapeutics Inc Moduladores de receptores acoplados a proteina g.

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0208874A1 (en) * 1985-05-20 1987-01-21 Mitsubishi Kasei Corporation Prophylactic and therapeutic agent for circulatory disorders
GB2373789B (en) * 2001-03-31 2004-06-09 Ilford Imaging Uk Ltd Polycyclic chromophoric systems substituted by (oxo-pyrazolyl) methyl radicals
WO2006129524A1 (ja) * 2005-06-03 2006-12-07 Renascience Co., Ltd. カルボニル化合物除去材
EP1983033A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-22 Xerox Corporation Phase change inks containing colourant compounds
JP2010169666A (ja) * 2008-12-25 2010-08-05 Canon Inc 複合体、それを用いる診断用マーカー及び診断薬、それを用いる検出方法、検出キット
WO2011085039A2 (en) * 2010-01-05 2011-07-14 The Johns Hopkins University Use of histone acetyltransferase inhibitors as novel anti-cancer therapies
US8163757B2 (en) * 2003-11-04 2012-04-24 Medigene Ag Immuno inhibitory pyrazolone compounds

Family Cites Families (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3815826A1 (de) 1988-05-09 1989-11-23 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von vicinal diacyloxysubstituierten verbindungen
US5470829A (en) 1988-11-17 1995-11-28 Prisell; Per Pharmaceutical preparation
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5089261A (en) 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5324844A (en) 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
DK0470128T4 (da) 1989-04-19 2003-12-01 Enzon Inc Aktive polyalkylenoxidcarbonater til modifikation af polypeptider
IL90193A (en) 1989-05-04 1993-02-21 Biomedical Polymers Int Polurethane-based polymeric materials and biomedical articles and pharmaceutical compositions utilizing the same
US5312808A (en) 1989-11-22 1994-05-17 Enzon, Inc. Fractionation of polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions
US5650388A (en) 1989-11-22 1997-07-22 Enzon, Inc. Fractionated polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
NL194941C (nl) 1990-02-15 2003-08-04 Cordis Corp Werkwijze voor het aanbrengen van een fysiologisch actieve verbinding op een substraatoppervlak.
US5275838A (en) 1990-02-28 1994-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
US5171264A (en) 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
US5219564A (en) 1990-07-06 1993-06-15 Enzon, Inc. Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon
WO1992000748A1 (en) 1990-07-06 1992-01-23 Enzon, Inc. Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon
FR2672053B1 (fr) 1991-01-30 1993-04-23 Atochem Polyether bloc amides, leur procede de synthese.
ATE247168T1 (de) 1991-03-06 2003-08-15 Merck Patent Gmbh Humanisierte monoklonale antikörper
FR2673946B1 (fr) 1991-03-15 1993-05-28 Atochem Polyether bloc amides, leur procede de synthese.
AU1676992A (en) 1991-03-18 1992-10-21 Enzon, Inc. Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers
TW197439B (zh) 1991-04-04 1993-01-01 Ueno Pharmaceutics Applic Res Co Ltd
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5283253A (en) 1991-09-23 1994-02-01 Florida State University Furyl or thienyl carbonyl substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
AU3140093A (en) 1991-11-22 1993-06-15 University Of Mississippi, The Synthesis and optical resolution of the taxol side chain and related compounds
GB9125979D0 (en) 1991-12-06 1992-02-05 Wellcome Found Antibody
DE69310148T2 (de) 1992-02-13 1997-07-31 Carlsberg As Polyethylenglykol oder polypropylenglykol enthaltend polymer
IL104782A0 (en) 1992-02-19 1993-06-10 Schering Corp Cloning and expression of humanized monoclonal antibodies against human interleukin-4
US5200534A (en) 1992-03-13 1993-04-06 University Of Florida Process for the preparation of taxol and 10-deacetyltaxol
JPH08500973A (ja) 1992-05-21 1996-02-06 ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション タキソール、関連タキサン及び他の新規な抗癌／抗ウイルス性化合物原料としてのイチイ培養組織
US5274137A (en) 1992-06-23 1993-12-28 Nicolaou K C Intermediates for preparation of taxols
US5294637A (en) 1992-07-01 1994-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Fluoro taxols
US5202448A (en) 1992-08-14 1993-04-13 Napro Biotherapeutics, Inc. Processes of converting taxanes into baccatin III
WO1994004193A1 (en) 1992-08-21 1994-03-03 Enzon, Inc. Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances
US5614549A (en) 1992-08-21 1997-03-25 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
CA2100808A1 (en) 1992-10-01 1994-04-02 Vittorio Farina Deoxy paclitaxels
FR2696462B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-25 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé d'obtention de la désacétyl-10 baccatine III.
FR2696463B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-25 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé d'obtention de la désacétyl-10 baccatine III.
FR2696464B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveau procédé d'estérification de la baccatine III et de la désacétyl-10 baccatine III.
FR2696458B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé de préparation de dérivés du taxane.
FR2696461B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux dérivés d'analogues du taxol, leur préparation et les compositions qui les contiennent.
US5279949A (en) 1992-12-07 1994-01-18 Board Of Trustees Operating Michigan State University Process for the isolation and purification of taxol and taxanes from Taxus spp
US5298643A (en) 1992-12-22 1994-03-29 Enzon, Inc. Aryl imidate activated polyalkylene oxides
US5349001A (en) 1993-01-19 1994-09-20 Enzon, Inc. Cyclic imide thione activated polyalkylene oxides
US5321095A (en) 1993-02-02 1994-06-14 Enzon, Inc. Azlactone activated polyalkylene oxides
AU7109494A (en) 1993-06-16 1995-01-03 Enzon, Inc. Conjugated biodhesives
US5965566A (en) 1993-10-20 1999-10-12 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5880131A (en) 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5824701A (en) 1993-10-20 1998-10-20 Enzon, Inc. Taxane-based prodrugs
US5840900A (en) 1993-10-20 1998-11-24 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5605976A (en) 1995-05-15 1997-02-25 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5415869A (en) 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5618528A (en) 1994-02-28 1997-04-08 Sterling Winthrop Inc. Biologically compatible linear block copolymers of polyalkylene oxide and peptide units
US5686110A (en) 1994-06-02 1997-11-11 Enzon, Inc. Water soluble complex of an alkyl or olefinic end capped polyalkylene oxide and a water insoluble substance
US5730990A (en) 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5705154A (en) 1995-03-08 1998-01-06 Schering Corporation Humanized monoclonal antibodies against human interleukin-4
EP0831100B1 (en) 1995-04-21 2000-10-11 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Novel peptide derivatives
US5756593A (en) 1995-05-15 1998-05-26 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkyene oxide carboxylic acids
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
EP0844891A4 (en) 1995-08-11 2004-05-06 Dow Chemical Co CONJUGATES OF HYPER-BRANCHED COMB POLYMERS
ES2268714T3 (es) 1995-12-18 2007-03-16 Angiotech Biomaterials Corp. Composiciones de polimeros entrecruzados y metodos para su uso.
WO1998008833A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Bristol-Myers Squibb Company Sulfenamide taxane derivatives
WO1998013059A1 (en) 1996-09-27 1998-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
WO1998022451A1 (fr) 1996-11-19 1998-05-28 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Derives taxol
US5977386A (en) 1996-12-24 1999-11-02 Bristol-Myers Squibb Company 6-thio-substituted paclitaxels
DK1695985T3 (da) 1997-04-07 2011-06-14 Genentech Inc Fremgangsmåde til dannelse af humaniserede antistoffer ved tilfældig mutagenese
SI1325932T1 (zh) 1997-04-07 2005-08-31 Genentech Inc
CA2288992C (en) 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
ATE219363T1 (de) 1997-06-20 2002-07-15 Baker Norton Pharma Lösliche prodrugs von paclitaxel
US7288665B1 (en) 1997-08-18 2007-10-30 Florida State University Process for selective derivatization of taxanes
JPH1192468A (ja) 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
DE69729128T2 (de) 1997-10-08 2005-04-28 Bio Research Corporation Of Yokohama, Yokohama Taxoid-derivate und verfahren zu ihrer herstellung
CA2311615A1 (en) * 1997-12-02 1999-06-10 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
CA2312975C (en) 1997-12-17 2012-08-21 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5965119A (en) 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
US6362254B2 (en) 1998-03-12 2002-03-26 Shearwater Corporation Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
US6153655A (en) 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
WO2001026692A1 (en) 1999-10-08 2001-04-19 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US6570040B2 (en) 2000-03-16 2003-05-27 The Regents Of The University Of California Chemoselective ligation
AU2003264009A1 (en) 2002-08-15 2004-03-03 Epitomics, Inc. Humanized rabbit antibodies
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
CN100415765C (zh) 2003-08-07 2008-09-03 宜康公司 兔单克隆抗体的人源化方法
JP2007537981A (ja) * 2003-09-19 2007-12-27 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ 新規の血漿タンパク質親和性タグ
US7985783B2 (en) 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
EP2305692A1 (en) * 2009-09-29 2011-04-06 Academisch Ziekenhuis Leiden Acting Under The Name Leiden University Medical Center Method for releasing and labelling O-glycans
WO2012097333A2 (en) * 2011-01-14 2012-07-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
ES2717657T3 (es) * 2011-02-15 2019-06-24 Immunogen Inc Métodos para la preparación de conjugados
EP2497499A1 (en) * 2011-03-10 2012-09-12 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin-conjugates with improved linkages

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0208874A1 (en) * 1985-05-20 1987-01-21 Mitsubishi Kasei Corporation Prophylactic and therapeutic agent for circulatory disorders
GB2373789B (en) * 2001-03-31 2004-06-09 Ilford Imaging Uk Ltd Polycyclic chromophoric systems substituted by (oxo-pyrazolyl) methyl radicals
US8163757B2 (en) * 2003-11-04 2012-04-24 Medigene Ag Immuno inhibitory pyrazolone compounds
WO2006129524A1 (ja) * 2005-06-03 2006-12-07 Renascience Co., Ltd. カルボニル化合物除去材
EP1983033A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-22 Xerox Corporation Phase change inks containing colourant compounds
JP2010169666A (ja) * 2008-12-25 2010-08-05 Canon Inc 複合体、それを用いる診断用マーカー及び診断薬、それを用いる検出方法、検出キット
WO2011085039A2 (en) * 2010-01-05 2011-07-14 The Johns Hopkins University Use of histone acetyltransferase inhibitors as novel anti-cancer therapies

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109725101A (zh) * 2017-10-31 2019-05-07 正大天晴药业集团股份有限公司 盐酸特拉万星原料中有关物质的检测方法
CN109725101B (zh) * 2017-10-31 2021-11-19 正大天晴药业集团股份有限公司 盐酸特拉万星原料中有关物质的检测方法
CN113891893A (zh) * 2019-03-22 2022-01-04 加利福尼亚大学董事会 用于修饰靶分子的组合物和方法
CN114716380A (zh) * 2022-04-01 2022-07-08 新乡医学院 一种高效相转移催化的4-取代吡唑酮类化合物不对称氟化方法

Also Published As

Publication number Publication date
US9579390B2 (en) 2017-02-28
WO2014074218A1 (en) 2014-05-15
US20160038602A1 (en) 2016-02-11
JP2016500058A (ja) 2016-01-07
AU2013341711A1 (en) 2015-05-21
CA2890190A1 (en) 2014-05-15
KR20150083121A (ko) 2015-07-16
EP2916835A1 (en) 2015-09-16
EP2916835A4 (en) 2016-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104884056A (zh) 用于制备缀合物的化合物和方法
US11426465B2 (en) Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
AU2014354643B2 (en) Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
US11376334B2 (en) Hydrazinyl-substituted heteroaryl compounds and methods for producing a conjugate

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150902