CN104877040A - 一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,通过冷冻结晶、过滤、醇沉和热醇过滤的方法从罐头企业副产品双孢蘑菇预煮液的浓缩液中分离出蘑菇粗多糖,再通过HZ-830酸性离子交换树脂和D303碱性离子交换树脂两种离子交换树脂柱的串联纯化技术对得到的双孢蘑菇粗多糖进行纯化精制,从而获得精制的双孢蘑菇多糖。本发明操作简单快速,能够同时脱除蛋白和色素杂质,两类杂质的最终脱除率都大于90%,多糖保留率大于70%,整个过程除乙醇以外不使用其它有机溶剂,具有安全、高效和环保的优点。
Description
技术领域
本发明涉及双孢蘑菇多糖的提取纯化方法,具体涉及一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法。
背景技术
在蘑菇罐头生产过程中,为钝化酶,软化组织,必须进行预煮,因此产生大量的预煮液。双孢蘑菇加工过程中产生大量的预煮液,大部分都被直接弃去,造成浪费。部分蘑菇罐头生产企业将蘑菇杀青水回收后通过蒸发浓缩10倍后得到蘑菇预煮液浓缩液,该浓缩液密度在1.4g/mL左右,pH偏酸在6.0左右,在生产上主要用于盐水菇罐头的复味,但用量很少,多数浓缩液未能得到利用,处于仓储状态。
双孢蘑菇预煮液浓缩液中固形物含量高,主要成分为氨基酸、多糖、核苷酸等,双孢蘑菇的大量鲜味成分和营养成分保留在预煮液中,因此对预煮液进行提取加工,充分利用其中的有效成分,可大大提高双孢蘑菇预煮液的利用价值,同时可大大降低对环境的污染。
发明内容
本发明的目的在于提高双孢蘑菇预煮液的利用价值,提供一种简单、高效的从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,包括以下步骤:
第一步:提取双孢蘑菇粗多糖
1)结晶过滤:将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上,并调节pH=6左右,得到双孢蘑菇预煮液浓缩液,并在4℃冷藏24-72小时后,用筛网过滤去除结晶沉淀物,回收滤液,备用;所述结晶沉淀物主要为甘露醇、氨基酸和无机盐类的混合物;
2)醇沉过滤:向上述滤液中添加3-3.5倍体积的95%乙醇,沉淀20-24小时后,水浴加热醇沉液至50℃后,趁热过滤取沉淀物,将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖;滤液则可回收与结晶沉淀物一同用于提取其它成分或做风味剂;
通过该方法获得的蘑菇粗多糖中还含有大量的蛋白质和色素杂质,色泽黑褐色,粘度大,易吸湿,因此还需进一步纯化;
第二步:阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖
HZ-830酸性离子交换树脂的脱色和去蛋白的效果好,而且其多糖保留率也较高;而D303碱性离子交换树脂具有最高的多糖保留率,其脱色和脱蛋白的效果一般,但可用来和HZ-830串联使用吸附其中带负电荷的杂质,因此,选择HZ-830和D303型号的离子交换树脂用于双孢蘑菇粗多糖的纯化精制;
1)树脂柱准备:将HZ-830酸性离子交换树脂柱和D303碱性离子交换树脂柱串联,HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端,两种树脂等体积装柱,根据交换柱规格计算单柱体积BV,串联柱体积2BV;
2)上样:将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为20-30mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液,调节pH至7-8,通过恒流泵以2BV/h的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品,控制泵入样品总体积为5BV;
3)回收:在D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品,上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液,与样品合并,合并后的样品通过浓缩、醇沉、干燥,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
所述双孢蘑菇预煮液的pH为6
进一步,所述树脂经过如下预处理:
HZ-830酸性离子交换树脂的预处理:用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
D303碱性离子交换树脂的预处理:用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用。
所述用于纯化的树脂柱长径比大于7,操作环境温度控制在23-27℃。
进一步,所述上样的的双孢蘑菇粗多糖溶液浓度为20mg/mL。
所述双孢蘑菇粗多糖溶液,以碳酸钠调节pH至7-8。
所述回收步骤中,浓缩、醇沉、干燥的具体操作如下:将合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后,加入4-4.5倍体积95%乙醇,沉淀20-24小时后,过滤取沉淀,再将沉淀至于50-60℃真空干燥2-3小时,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
本发明用于提取双孢蘑菇多糖的双胞蘑菇预煮液浓缩液的密度应在1.5g/mL以上,pH应在6.0左右,因为企业浓缩储存的不同批次的预煮液的密度和酸碱度会有差别,为确保工艺有效性应对原料质量进行规定,不达标的原料应通过调和或浓缩后再使用。
本发明采用以上技术方案,通过冷冻结晶、过滤、醇沉和热醇过滤的方法从罐头企业副产品双孢蘑菇预煮液的10倍浓缩液中分离出蘑菇粗多糖,再通过HZ-830和D303两种离子交换树脂柱的串联纯化技术对得到的双孢蘑菇粗多糖进行纯化精制,从而获得精制的双孢蘑菇多糖。本发明采用HZ-830和D303树脂柱串联纯化双孢蘑菇粗多糖,可以快速高效地去除粗多糖中的蛋白质和色素杂质,两类杂质的最终脱除率都大于90%。同时,本发明还具有较高的多糖保留率,最终多糖保留率大于70%,并有进一步提高的空间。本发明操作简单快速,能够同时脱除蛋白和色素杂质,整个过程除乙醇以外不使用其它有机溶剂,具有安全、高效和环保的优点。
说明书附图
以下结合附图和具体实施方式对本发明做进一步详细说明:
图1为HZ-830酸性离子交换树脂静态吸附色素动力学曲线;
图2为D303碱性离子交换树脂静态吸附色素动力学曲线;
图3为体积流量对脱色和脱蛋白效果的影响(HZ-830);
图4为体积流量对脱色和脱蛋白效果的影响(D303);
图5HZ-830酸性离子交换树脂吸附容量与上样量的关系;
图6为D303碱性离子交换树脂吸附容量与上样量的关系;
图7为洗脱剂用量对多糖洗脱效果的影响(HZ-830);
图8为洗脱剂用量对多糖洗脱效果的影响(D303);
图9为本发明工艺流程图;
图10为本发明工艺示意图。
具体实施方式
本发明HZ-830和D303两种离子交换树脂柱串联纯化条件的选择如下:
1样品的准备
双孢蘑菇粗多糖称量后用去离子水复溶为浓度为20mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液,备用。
2树脂的预处理
酸性离子交换树脂的预处理:取10g HZ-830酸性离子交换树脂,先用乙醇浸泡2小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用。
碱性离子交换树脂的预处理:取10g D303碱性离子交换树脂,先用乙醇浸泡2小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用。
3实验检测指标
双孢蘑菇多糖的纯化过程中需要的去除的杂质主要有两类,一是蛋白质和氨基酸,另外就是影响产品品质的色素杂质。因此本实验以脱色率、蛋白脱除率及多糖的保留率为指标考察离子交换树脂对双孢蘑菇粗多糖纯化的效果。
多糖含量测定:用蒽酮-硫酸法测定多糖脱色前后的多糖含量,并计算多糖保留率,多糖保留率(%)=处理后多糖含量/处理前多糖含量×100
脱色率测定:以460nm为检测波长,测定溶液的吸光度,并计算脱色率,脱色率(%)=(处理前吸光度-处理后吸光度)/处理前吸光度×100
蛋白质含量测定:蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝G-250法测定,蛋白质脱除率(%)=处理后蛋白含量/处理前蛋白含量×100
4具体实验
4.1静态吸附动力学过程
准确称取处理好的树脂HZ-830 1g,加入15mL浓度为20mg/mL的多糖粗提物,置于摇床中,120r/min,pH=7,20℃,脱色。每隔1小时取一次上清液,取上清液于吸光度460nm处测吸光度,并测定蛋白质含量,计算脱色率和蛋白脱除率。由图1可知,随着脱色时间的延长,HZ-830对色素的吸附在前3小时脱色效果逐渐增强,3小时过后则脱色率趋于平缓;而其对蛋白质的吸附则更为迅速,在2小时左右基本达到平衡。由图2可知,D303对色数和蛋白的吸附效果随着时间的延长平稳上升,至4小时后,上升速度有所减缓。由此可见,实验范围内HZ-830树脂的最佳静态脱色时间为3小时,而D303树脂在4小时能达到较好的吸附效果。
4.2体积流量对脱色率和蛋白脱除率的影响
HZ-830树脂30g,D303树脂25g装柱通过计算其柱体积约为30.03mL,按动态吸附试验方法,上样浓度为20mg/mL多糖溶液100mL,分别控制体积流速为1、2、3、4BV/h,并用1倍柱体积的纯化水进行洗脱,合并洗脱液测定其脱色率、蛋白脱除率和糖保留率,两种树脂处理结果见图3和图4,结果表明树脂对蛋白和色素的脱除率随着体积流速的增大而减小,多糖保留率则相反,但总体变化不大。实际操作中由于体积流量过大,树脂与糖液间的接触时间太小就会导致脱色和脱蛋白的效果下降;反之则会造成处理操作时间过长,不利于提高生产效率。因此,综合考虑串联纯化效果和实际的生产需求,选择体积流量为2BV/h较为合适。
4.3树脂最大上样量的确定
取预处理好的HZ-830树脂25g湿法装住柱体积为21.2ml。取预处理好的D303树脂30g湿法装柱柱体积为38ml。浓度为20mg/mL的蘑菇粗多糖溶液以2BV/h的流速经过树脂层析柱,弃去前段1BV后每5mL一份分段收集流出液,收集流出液200ml,实验结束后隔管测定各部分流份的脱色率、蛋白脱除率和多糖保留率。绘制流出液中脱色率、蛋白脱除率和多糖保留率与上样量的关系曲线,结果如图5、图6。由图可知,随着上样量的增大,两种树脂对吸附效率逐渐下降,因而其对色素和蛋白质的脱除率也逐渐降低。HZ-830树脂对多糖的保留率受上样量影响不大,始终维持在较高水平,D303树脂对多糖的保留率初期较低但随着上样量的加大,逐渐提高,总体都在80%以上。25g HZ-830树脂的上样量小于3BV时能获得较好的纯化效果,但效率太低,综合考虑应控制上样量为5BV左右较合适,即100ml左右,折合每克树脂的粗多糖上样量为80mg。30g D303树脂上样量在4BV左右对色素的吸附率维持在较稳定的水平,而对蛋白的吸附率在3BV后出现了下降的趋势,但下降的速率相对HZ-830树脂较缓慢,因而其最佳上样量应在4BV左右,约合每克树脂上样量为100mg。考虑到后期两种树脂需等体积串联使用,而D303串联在HZ-830后使用,工作负担较小。因此统一选择5BV上样量即190mL较合适,折合每克树脂的粗多糖上样量为126.6mg。
4.4最佳洗脱剂用量的确定
HZ-830,D303树脂各30g装柱通过计算其HZ-830柱体积为30.03mL,D303树脂柱体积为38mL。按动态吸附试验方法,上样浓度为20mg/mL多糖溶液100mL,控制体积流速为2BV/h,上样完成后用纯化水进行洗脱,对进行分段收集,每5ml一管。实验结束后测定各管的蛋白含量和多糖含量,结果如图7和图8。对于HZ-830树脂柱当洗脱剂用量达25ml时,洗脱液中的蛋白含量和糖含量出现了陡降,说明药液已完全流出树脂柱床,随着洗脱液的继续洗脱少量被吸附的成分也被洗脱下来,但含量较低。对于D303树脂柱当洗脱液体积达到30mL时,柱子中的样品就已基本洗脱下来。考虑到增加洗脱体积会稀释回收液并增大回收液的体积,不利于后续操作,两种树脂柱的洗脱体积都应控制在1BV(HZ-830为30.3mL,D303为38mL)较为合适。
4.5 HZ-830和D303树脂柱串联纯化蘑菇粗多糖实验
各取处理好的HZ-830,D303等体积树脂装柱通过计算其柱体积为53mL,串联总体积为106mL。按动态吸附试验方法,上样浓度为20mg/mL多糖溶液260mL,约合5BV,控制体积流速为1.77mL/min,约合2BV/h,弃去前端无糖流份后,对流出液进行收集,上样结束后用1BV纯水洗脱。实验结束后测定收集的流出液的总体积和以及波长460nm处的吸光度和蛋白含量、多糖含量,计算色素脱除率和蛋白脱除率以及多糖保留率。
色素脱除率=(A460原液*260-A460处理*V处理)/A460原液*260×100%
蛋白脱除率=(C蛋白原液*260-C蛋白处理*V处理)/C蛋白原液*260×100%
多糖保留率=C糖处理*V处理/C糖原液*260×100%
A460原液:粗多糖原液在460nm处的吸光值;
A460处理:处理后的多糖液在460nm处的吸光值;
C蛋白原液:粗多糖原液的蛋白质浓度测定值(测试时样品稀释50倍);
C蛋白处理:处理后多糖液的蛋白质浓度测定值(测试时样品稀释50倍);
C糖原液:粗多糖原液的蛋白质浓度测定值(测试时样品稀释100倍);
C糖处理:处理后多糖液的蛋白质浓度测定值(测试时样品稀释100倍);
V处理:纯化后回收的多糖液的总体积。
通过HZ-830和D303树脂柱串联纯化蘑菇预煮液浓缩液中提取的蘑菇粗多糖,可以快速高效地去除多糖中的蛋白质和色素杂质,两类杂质的最终脱除率都大于90%。同时,该方法还具有较高的多糖保留率,最终多糖保留率大于70%,并有进一步提高的空间。
实施例1
一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,包括以下步骤:
第一步:提取双孢蘑菇粗多糖
1)结晶过滤:将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上,得到双孢蘑菇预煮液浓缩液,并在4℃冷藏24小时后,用筛网过滤去除结晶沉淀物,回收滤液,备用;
2)醇沉过滤:向上述滤液中添加3倍体积的95%乙醇,沉淀24小时后,水浴加热醇沉液至50℃后,趁热过滤取沉淀物,将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖;
第二步:阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖
1)树脂预处理:
HZ-830酸性离子交换树脂的预处理:用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
D303碱性离子交换树脂的预处理:用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
2)树脂柱准备:用于纯化的树脂柱长径比应大于7,操作环境温度控制在25℃左右,HZ-830酸性离子交换树脂为前柱,D303碱性离子交换树脂为后柱,HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端,两种树脂等体积装柱,根据交换柱规格计算单柱体积(BV),串联柱体积(2BV);
3)上样:将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为20mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液,以碳酸钠调节pH至7,通过恒流泵以2BV/h的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品,控制泵入样品总体积为5BV,
4)回收:在D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品,上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液,与样品合并,合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后,加入4倍体积95%乙醇,沉淀24小时后,过滤取沉淀,再将沉淀至于真空干燥箱内,60℃烘干2小时,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
本实施例蛋白质脱除率为94.14%,色素脱除率为91.57%,双孢多糖保留率为73.49%。
实施例2
一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,包括以下步骤:
第一步:提取双孢蘑菇粗多糖
1)结晶过滤:将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上,得到双孢蘑菇预煮液浓缩液,并在4℃冷藏72小时后,用筛网过滤去除结晶沉淀物,回收滤液,备用;
2)醇沉过滤:向上述滤液中添加3.5倍体积的95%乙醇,沉淀20小时后,水浴加热醇沉液至50℃后,趁热过滤取沉淀物,将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖;
第二步:阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖
1)树脂预处理:
HZ-830酸性离子交换树脂的预处理:用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
D303碱性离子交换树脂的预处理:用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
2)树脂柱准备:用于纯化的树脂柱长径比应大于7,操作环境温度控制在23-27℃,HZ-830酸性离子交换树脂为前柱,D303碱性离子交换树脂为后柱,HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端,两种树脂等体积装柱,根据交换柱规格计算单柱体积(BV),串联柱体积(2BV);
3)上样:将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为30mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液,以碳酸钠调节pH至8,通过恒流泵以2BV/h的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品,控制泵入样品总体积为5BV,
4)回收:在D303D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品,上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液,与样品合并,合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后,加入4.5倍体积95%乙醇,沉淀20小时后,过滤取沉淀,再将沉淀至于真空干燥箱内,50℃烘干3小时,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
本实施例蛋白质脱除率为93.97%,色素脱除率为92.17%,双孢多糖保留率为72.09%。
Claims (7)
1.一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:其包括以下步骤:
第一步:提取双孢蘑菇粗多糖
1)结晶过滤:将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上,得到双孢蘑菇预煮液浓缩液,并在4℃冷藏24-72 小时后,过滤去除结晶沉淀物,回收滤液,备用;
2)醇沉过滤:向上述滤液中添加3-3.5倍体积的95%乙醇,沉淀20-24小时后,水浴加热醇沉液至50℃后,趁热过滤取沉淀物,将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖;
第二步:阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖
1)树脂柱准备:将HZ-830酸性离子交换树脂柱和D303碱性离子交换树脂柱串联,HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端,两种树脂等体积装柱,根据交换柱规格计算单柱体积BV,串联柱体积2BV;
2)上样:将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为20-30mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液,调节pH至7-8,通过恒流泵以2BV/h 的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品,控制泵入样品总体积为5BV;
3)回收:在D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品,上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液,与样品合并,合并后的样品通过浓缩、醇沉、干燥,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
2.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:所述双孢蘑菇预煮液的pH为6。
3.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:所述树脂经过如下预处理:
HZ-830酸性离子交换树脂的预处理:用浓度4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用;
D303碱性离子交换树脂的预处理:用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,再用浓度4%HCl溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,最后用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时,用蒸馏水洗至pH呈中性,备用。
4.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:用于纯化的树脂柱长径比大于7,操作环境温度控制在23-27℃。
5.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:所述上样的的双孢蘑菇粗多糖溶液浓度为20mg/mL。
6.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:所述双孢蘑菇粗多糖溶液,以碳酸钠调节pH至7-8。
7.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法,其特征在于:所述回收步骤中,浓缩、醇沉、干燥的具体操作如下:将合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后,加入4-4.5倍体积95%乙醇, 沉淀20-24小时后,过滤取沉淀,再将沉淀至于50-60℃真空干燥2-3小时,即得到精制的双孢蘑菇多糖。
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