CN104841014B - 一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法，该方法由以下步骤组成：(1)配制壳聚糖溶液和明胶溶液；(2)配制交联剂溶液；(3)壳聚糖溶液、明胶溶液和交联剂溶液混合，再加入包载普伐他汀钠的壳聚糖微球混均倒入血管支架模具中，冷冻干燥后脱模；(4)将脱模后的血管支架反复洗涤，再冷冻干燥即得。本发明制得的载有普伐他汀的血管组织工程支架材料具有10～600μm的孔径，包载普伐他汀钠的壳聚糖微球在支架中分散良好，释药时间长达60天以上。

Description

一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法

技术领域

本发明涉及能移植到体内的假体，具体涉及载有普伐他汀药物的血管支架材料的制备方法。

背景技术

心血管疾病复发率高，并发症多，发病逐年上升，已成为人类首要致死原因。临床上病损严重的心血管疾病常需采用外科手术进行治疗，对于病损的血管常需重建和更换，来源通常为自体移植、异体或异种移植，以及人工材料替代。自体移植效果虽佳，但供给不足，有的患者尤其是患有脉管疾病或已经动过手术的患者并无适用的自体血管；异体或者异种移植存在免疫排斥、感染以及伦理学问题。人工材料如聚四氟乙烯、涤纶等，不适用于小口径血管，容易出现血栓栓塞、狭窄、钙沉积等，由于不能降解，始终作为异物存在于机体内，不具有生物活性和自我重塑的功能。

血管组织工程为受损、病变的血管再生修复带来了希望，通过细胞在支架材料上的生长增殖，可以最终形成具有生理功能的新的组织。作为组织工程三大要素之一，支架材料为细胞生长增殖提供形状与场所，对组织重建的成败起到至关重要的作用。但是对于血管疾病，如动脉粥样硬化，其发病通常具有多位点，易复发的特点，同时血管手术还常伴随手术并发症，多部位手术或者多次手术会给病人增加痛苦和风险。因此对于血管重建手术，在修复病损使其再生重建的基础上，如何能防止复发、减少手术并发症是一个很重要的问题。

他汀类药物是临床上广泛使用的一类心血管药物，是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-COA还原酶)的竞争性抑制剂，可阻断或者减少体内胆固醇的生物合成，显著降低血脂，还具有抗炎、抗凝血、加速受损血管内皮化、减缓或减退动脉粥样硬化斑块的发展等作用，可用于血管重建手术后的再狭窄防治，并降低血管手术并发症。

普伐他汀钠是他汀家族中的一种水溶性他汀药物，在体内无需代谢转化就能具有药理活性，不良反应少。普伐他汀钠最早由日本三共株式会社研制，1989年在日本以“美百乐镇”商品名上市，随后1990年经美国FDA批准，美国施贵宝公司以商品名“普拉固”上市。但他汀类药物主要采用口服给药，经过消化道、肝脏的代谢、消除，发生首过效应，生物利用度较低。对于普伐他汀，还具有在低pH环境下比如胃中(pH1.2)很不稳定的特性，容易转化为其异构体3’-α异普伐他汀，而这种异构体抑制HMG-CoA还原酶的活性只有普伐他汀钠的1/10～1/40，大大降低了普伐他汀钠的生物利用度低，且半衰期短(1.5-2小时)。

因此，如果能改变普伐他汀钠的给药方式，使其不经过胃肠道、肝脏，而直接作用于心血管系统，将大大提高其生物利用度。公开号为CN 1778296A的专利申请公开了一种他汀类药物的长效制剂，该制剂将他汀类药物经皮给药，或者将药物包裹在不降解的聚合物或者金属小管中皮下植入的给药系统。但该专利中使用的是他汀类药分子前体药，需在体内经酯类水解酶水解转化为他汀类药物才能发挥药效，而且由于使用的基本为不能降解的材料，如果制成皮下植入材料，由于材料在体内不能降解，还需再次取出。公开号为CN101856342A的专利申请公开了一种普伐他汀经皮给药制剂，该制剂将普伐他汀与透皮促进剂、由合成高分子和/或改性纤维素组成的储库基质搅拌均匀得到药物储库，制得经皮给药制剂，但这种剂型使用的材料也基本为不可降解材料，且持续释药时间仅为1～7天。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法，该方法制得的血管组织工程支架材料具有三维多孔、载药微粒分散均匀和持续释放时间长的优点。

本发明解决上述问题的技术方案如下：

一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法，该方法由以下步骤组成︰

(1)将壳聚糖溶于体积浓度为1～3％的醋酸溶液中，磁力搅拌1～24h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为0.5～3％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为0.5～5％的明胶溶液；

(2)将京尼平溶解在体积浓度为10～60％的乙醇中，制成浓度为0.2～1.2g/L的交联剂溶液，或者将EDC/NHS溶解在MES-乙醇中，制成浓度为12.5～22.5g/L的交联剂溶液；其中，所述的EDC/NHS由EDC与NHS按EDC︰NHS＝2︰1的质量比混合制成，所述的MES-乙醇由MES与体积浓度为40％的乙醇混合制成，且MES在体积浓度为40％的乙醇中的浓度为50mmol/L；

(3)将步骤(1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝1︰1～5︰1的体积比混合，搅拌0.5～12h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰1～5的体积比往混合溶液中加入步骤(2)制得的交联剂溶液，再加入包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为10～50％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置6～48h，转移至-10～-60℃下预处理2～48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(4)将脱模后的血管支架放入稀NaOH溶液中浸泡0.5-12h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-10～-60℃下预处理2～48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料；

上述步骤(3)中所述的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球由以下方法制得：

(A)将乳化剂与机溶剂按乳化剂︰有机溶剂＝2︰100～8︰100体积比混合，搅拌均匀，制得油相；其中，所述的乳化剂为span-80、吐温-80、卡波姆1342或单油酸二甘酯，所述的有机溶剂为液体石蜡、大豆色拉油、橄榄油或苯甲酸乙酯；

(B)将壳聚糖加入到体积浓度为0.5～3％的醋酸溶液中，磁力搅拌1～24h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为0.5～3％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使得普伐他汀钠在水中的浓度13.3～66.6g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将壳聚糖溶液与普伐他汀钠水溶液混合均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰1～1︰5的水相；

(C)将交联剂京尼平溶于体积浓度为30～90％的乙醇中，配成京尼平在30～90％的乙醇中浓度为1.3～13g/L的交联剂溶液；

(D)按油相︰水相＝2︰1～15︰1的体积比将步骤(B)制得的水相边搅拌边滴加到步骤(A)制得的油相中，再继续搅拌0.5～6h，制得w/o型乳液；

(E)4～60℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.085～0.85g/L，将步骤(C)制得的交联剂溶液在搅拌的条件下分2～3次等量滴加到步骤(D)制得的w/o型乳液中，加完后继续搅拌2～48h，其中，分2次或3次滴加的间隔为10～60min，每次滴加的时间为10～30min；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用石油醚、丙酮、异丙醇、氯仿和乙醇中的两种或三种各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得包载普伐他汀钠的壳聚糖微球。

经上述方法制备得到的载有心血管药物普伐他汀钠的壳聚糖/明胶三维血管组织工程支架与现有技术比较，具有以下有益效果︰

1、由于本发明所述方法血管组织工程支架材料中含有壳聚糖包裹普伐他汀钠，因此该血管组织工程支架材料植入人体后，普伐他汀钠可实现缓慢释放，直接作用于心血管系统，从而避免了经过首过效应和胃酸的酸性环境，显著提高普伐他汀钠的生物利用度。

2、在支架植入再生修复病损血管的同时，普伐他汀钠的释放可起到降低手术并发症和防治复发的作用。

3、所述血管组织工程支架材料的基质材料可逐渐降解排出，无需取出。

附图说明

图1为下述实施例1所制得的包载普伐他汀壳聚糖微球的体外释药曲线。

图2为下述实施例3所制得的血管组织工程支架材料的电镜图。

具体实施方式

实施例1

一、血管组织工程支架材料的制备

(1)制备包载普伐他汀壳聚糖微球

(1.1)将吐温-80与液体石蜡按吐温-80︰液体石蜡＝2︰100的体积比混合，在500r/min速度下电动搅拌混合均匀，制得油相；

(1.2)将黏度低于200mPa.s的壳聚糖加入到体积浓度为1％的醋酸溶液中，磁力搅拌1h，配成质量浓度为1.5％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使普伐他汀钠在水中的浓度为66.6g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将配好的壳聚糖溶液与到普伐他汀钠水溶液，搅拌均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰1的水相；

(1.3)将京尼平溶于30％的乙醇水溶液中，使得京尼平在体积浓度为30％的乙醇中的浓度为1.3g/L，得到交联剂溶液；

(1.4)按油相︰水相＝5︰1的体积比将步骤(2)制得的水相在600r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(1)制得的油相中，再继续搅拌4h，制得w/o型乳液；

(1.5)20℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.085g/L将步骤(3)制得的交联剂溶液平均分成两份，分2次在600r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(4)制得的w/o型乳液中，间隔30min滴加一次，每次30min滴加完毕，加完后继续搅拌6h；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用石油醚、丙酮和异丙醇各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得包载普伐他汀壳聚糖微球。

(2)制备血管支架

(2.1)将黏度为200～400mPa.s的壳聚糖溶于体积浓度为1％的醋酸溶液中，磁力搅拌2h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为1％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为3％的明胶溶液；

(2.2)将京尼平溶解在体积浓度为10％的乙醇中，获得京尼平在体积浓度为10％的乙醇中的浓度为0.2g/L的交联剂溶液；

(2.3)将步骤(2.1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝1︰1的体积比混合，搅拌8h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰3的体积比往混合溶液中加入步骤(2.2)制得的交联剂溶液，再加入步骤(1)制得的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为20％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置6h，转移至-10℃下预处理2h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(2.4)将脱模后的血管支架放入质量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中浸泡1h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-20℃下预处理2h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料。

二、效果的检测

〈1〉步骤(1)制得的壳聚糖微球的包封率的测试

准确称取所制备的普伐他汀钠长效缓释微球20mg于玛瑙研钵中研细，置于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，用细胞粉碎机充分打散，过滤，取滤液于238nm处测其紫外吸光度，根据标准工作曲线计算药物含量，平行测定三次，按下式计算得包封率为30.9％：

包封率＝微球中包封的药量/投入的药量×100％。

〈2〉步骤(2)制得的血管支架中药物释放时间的检测

将载药血管组织工程支架材料放入透析袋，浸入200ml的PBS溶液(pH＝7.4)中，置于37℃恒温摇床中(100r/min)。定时取样，同时补充等量释放液。在238nm处测其紫外吸光度，根据标准曲线测定载药量，结果见图1。由图1可见，60天累积释药量仅为25％，药物仍在持续释放。

实施例2

一、血管组织工程支架材料的制备

(1)制备包载普伐他汀壳聚糖微球

(1.1)将span-80与苯甲酸乙酯按span-80︰苯甲酸乙酯＝8︰100的体积比混合，在1000r/min速度下电动搅拌混合均匀，制得油相；

(1.2)将黏度为200～400mPa.s的壳聚糖加入到体积浓度为0.5％的醋酸溶液中，磁力搅拌5h，配成质量浓度为3％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使普伐他汀钠在水中的浓度为16.6g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将配好的壳聚糖溶液与普伐他汀钠水溶液混合，搅拌均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰4的水相；

(1.3)京尼平溶于40％的乙醇水溶液中，使得京尼平在体积浓度为40％的乙醇中的浓度为7.8g/L，得到交联剂溶液；

(1.4)按油相︰水相＝2︰1的体积比将步骤(2)制得的水相在500r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(1)制得的油相中，再继续搅拌3h，制得w/o型乳液；

(1.5)4℃下，按交联剂在w/o型乳液中浓度为0.51g/L将步骤(3)制得的交联剂溶液平均分成两份，分2次在500r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(4)制得的w/o型乳液中，间隔60min滴加一次，每次10min滴加完毕，加完后继续搅拌48h；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用丙酮、异丙醇和乙醇各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得包载普伐他汀壳聚糖微球。

(2)制备血管支架

(2.1)将黏度小于200mPa.s的壳聚糖溶于体积浓度为2％的醋酸溶液中，磁力搅拌1h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为0.5％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为0.5％的明胶溶液；

(2.2)将EDC/NHS溶解在MES-乙醇中，获得EDC在MES-乙醇中的质量浓度均为12.5g/L的交联剂溶液；其中，所述的EDC/NHS由EDC与NHS按EDC︰NHS＝2︰1的质量比混合制成，所述的MES-乙醇由MES与体积浓度为40％的乙醇混合制成，且MES在体积浓度为40％的乙醇中的浓度为50mmol/L；

(2.3)将步骤(2.1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝5︰1的体积比混合，搅拌0.5h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰5的体积比往混合溶液中加入步骤(2.2)制得的交联剂溶液，再加入步骤(1)制得的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为10％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置48h，转移至-40℃下预处理48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(2.4)将脱模后的血管支架放入质量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中浸泡0.5h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-10℃下预处理12h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料。

二、效果的检测

〈1〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(1)所制得的包载普伐他汀壳聚糖微球的包封率为46.3％。

〈2〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(2)制得的血管支架60天累积释药量仅为36.1％，药物仍在持续释放。

实施例3

一、血管组织工程支架材料的制备

(1)制备包载普伐他汀壳聚糖微球

(1.1)将span-80与液体石蜡按span-80︰液体石蜡＝4︰100的体积比混合，在850r/min速度下电动搅拌混合均匀，制得油相；

(1.2)将黏度为200～400mPa.s的壳聚糖加入到体积浓度为1％的醋酸溶液中，磁力搅拌1h，配成质量浓度为1.5％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使普伐他汀钠在水中的浓度为33.3g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将配好的壳聚糖溶液与到普伐他汀钠水溶液，搅拌均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰2的水相；

(1.3)将京尼平溶于90％的乙醇水溶液中，使得京尼平在体积浓度为90％的乙醇中的浓度为13g/L，得到交联剂溶液；

(1.4)按油相︰水相＝10︰1的体积比将步骤(2)制得的水相在850r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(1)制得的油相中，再继续搅拌1h，制得w/o型乳液；

(1.5)40℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.85g/L将步骤(3)制得的交联剂溶液平均分为两份，分2次在850r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(4)制得的w/o型乳液中，间隔30min滴加一次，每次30min滴加完毕，加完后继续搅拌6h；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用石油醚、丙酮和异丙醇各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得普伐他汀钠长效缓释微球。

(2)制备血管支架

(2.1)将黏度为200～400mPa.s的壳聚糖溶于体积浓度为1％的醋酸溶液中，磁力搅拌12h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为2％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为2％的明胶溶液；

(2.2)将京尼平溶解在体积浓度为30％的乙醇中，获得京尼平在体积浓度为30％的乙醇中的浓度为1.2g/L的交联剂溶液；

(2.3)将步骤(2.1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝3︰1的体积比混合，搅拌1h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰2的体积比往混合溶液中加入步骤(2.2)制得的交联剂溶液，再加入步骤(1)制得的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为33％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置24h，转移至-20℃下预处理12h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(2.4)将脱模后的血管支架放入质量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中浸泡6h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-20℃下预处理24h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料。

二、效果的检测

〈1〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(1)所制得的包载普伐他汀壳聚糖微球的包封率为33.7％。

〈2〉血管支架微观结构观察

在本例步骤(2)制得的血管支架点截取一小块附于导电胶上，真空下喷金，扫描电镜SEM观察其微观形貌，结果见图2。由图2可见，所得到的血管组织工程支架材料具有三维多孔的微观结构，其孔径为10～600μm。

〈3〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(2)制得的血管支架60天累积释药量仅为16.8％，药物仍在持续释放。

实施例4

一、血管组织工程支架材料的制备

(1)制备包载普伐他汀壳聚糖微球

(1.1)将卡波姆1342与大豆色拉油按卡波姆1342︰大豆色拉油＝8︰100的体积比混合，在1500r/min速度下电动搅拌混合均匀，制得油相；

(1.2)将黏度大于400mPa.s的壳聚糖加入到体积浓度为1％的醋酸溶液中，磁力搅拌10h，配成质量浓度为0.5％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使普伐他汀钠在水中的浓度为13.3g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将配好的壳聚糖溶液与到普伐他汀钠水溶液，搅拌均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰5的水相；

(1.3)将京尼平溶于70％的乙醇水溶液中，使得京尼平在体积浓度为70％的乙醇中的浓度为6.5g/L，得到交联剂溶液；

(1.4)按油相︰水相＝15︰1的体积比将步骤(2)制得的水相在1600r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(1)制得的油相中，再继续搅拌6h，制得w/o型乳液；

(1.5)50℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.42g/L将步骤(3)制得的交联剂溶液平均分为三份，分3次在1200r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(4)制得的w/o型乳液中，间隔20min滴加一次，每次10min滴加完毕，加完后继续搅拌12h；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用氯仿和乙醇各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得普伐他汀钠长效缓释微球。

(2)制备血管支架

(2.1)将黏度大于400mPa.s的壳聚糖溶于体积浓度为3％的醋酸溶液中，磁力搅拌12h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为3％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为3％的明胶溶液；

(2.2)将EDC/NHS溶解在MES-乙醇中，获得EDC在MES-乙醇中的质量浓度均为22.5g/L的交联剂溶液；其中，所述的EDC/NHS由EDC与NHS按EDC︰NHS＝2︰1的质量比混合制成，所述的MES-乙醇由MES与体积浓度为40％的乙醇混合制成，且MES在体积浓度为40％的乙醇中的浓度为50mmol/L；

(2.3)将步骤(2.1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝2︰1的体积比混合，搅拌6h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰1的体积比往混合溶液中加入步骤(2.2)制得的交联剂溶液，再加入步骤(1)制得的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为40％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置48h，转移至-60℃下预处理6h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(2.4)将脱模后的血管支架放入质量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中浸泡2h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-40℃下预处理48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料。

二、效果的检测

〈1〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(1)所制得的包载普伐他汀壳聚糖微球的包封率为60.2％。

〈2〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(2)制得的血管支架60天累积释药量仅为22.9％，药物仍在持续释放。

实施例5

一、血管组织工程支架材料的制备

(1)制备包载普伐他汀壳聚糖微球

(1.1)将单油酸二甘酯与橄榄油按单油酸二甘酯︰橄榄油＝6︰100的体积比混合，在2000r/min速度下电动搅拌混合均匀，制得油相；

(1.2)将黏度大于400mPa.s的壳聚糖加入到体积浓度为3％的醋酸溶液中，磁力搅拌24h，配成质量浓度为2％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使普伐他汀钠在水中的浓度为22.2g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将配好的壳聚糖溶液与到普伐他汀钠水溶液，搅拌均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰3的水相；

(1.3)将京尼平溶于50％的乙醇水溶液中，使得京尼平在体积浓度为50％的乙醇中的浓度为5.2g/L，得到交联剂溶液；

(1.4)按油相︰水相＝12︰1的体积比将步骤(2)制得的水相在1200r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(1)制得的油相中，再继续搅拌0.5h，制得w/o型乳液；

(1.5)60℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.34g/L将步骤(3)制得的交联剂溶液平均分为三份，分3次在1600r/min的速度下边搅拌边滴加到步骤(4)制得的w/o型乳液中，间隔10min滴加一次，每次20min滴加完毕，加完后继续搅拌2h；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用氯仿、丙酮和乙醇各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得普伐他汀钠长效缓释微球。

(2)制备血管支架

(2.1)将黏度低于200mPa.s的壳聚糖溶于体积浓度为3％的醋酸溶液中，磁力搅拌24h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为1％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为5％的明胶溶液；

(2.2)将京尼平溶解在体积浓度为60％的乙醇中，获得京尼平在体积浓度为60％的乙醇中的浓度为0.5g/L的交联剂溶液；

(2.3)将步骤(2.1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝3︰1的体积比混合，搅拌12h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰1的体积比往混合溶液中加入步骤(2.2)制得的交联剂溶液，再加入步骤(1)制得的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为50％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置12h，转移至-40℃下预处理3h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(2.4)将脱模后的血管支架放入质量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中浸泡12h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-60℃下预处理3h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料。

二、效果的检测

〈1〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(1)所制得的包载普伐他汀壳聚糖微球的包封率为34.2％。

〈2〉按实施例1同样的方法测得本例步骤(2)制得的血管支架60天累积释药量仅为20.1％，药物仍在持续释放。

Claims (1)

1.一种载有普伐他汀钠的血管组织工程支架材料的制备方法，该方法由以下步骤组成：

(1)将壳聚糖溶于体积浓度为1～3％的醋酸溶液中，磁力搅拌1～24h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为0.5～3％的壳聚糖溶液；将明胶溶于40℃水中，配成质量浓度为0.5～5％的明胶溶液；

(2)将京尼平溶解在体积浓度为10～60％的乙醇中，制成浓度为0.2～1.2g/L的交联剂溶液，或者将EDC/NHS溶解在MES-乙醇中，制成浓度为12.5～22.5g/L的交联剂溶液；其中，所述的EDC/NHS由EDC与NHS按EDC︰NHS＝2︰1的质量比混合制成，所述的MES-乙醇由MES与体积浓度为40％的乙醇混合制成，且MES在体积浓度为40％的乙醇中的浓度为50mmol/L；

(3)将步骤(1)制得的明胶溶液和壳聚糖溶液按明胶溶液︰壳聚糖溶液＝1︰1～5︰1的体积比混合，搅拌0.5～12h，静置，除去气泡，得到混合溶液；然后，先按混合溶液︰交联剂溶液＝5︰1～5的体积比往混合溶液中加入步骤(2)制得的交联剂溶液，再加入包载普伐他汀钠的壳聚糖微球，控制壳聚糖微球的终浓度为10～50％的质量浓度；磁力搅拌均匀倒入血管支架模具中，室温下放置6～48h，转移至-10～-60℃下预处理2～48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥后脱模；

(4)将脱模后的血管支架放入稀NaOH溶液中浸泡0.5-12h后放入蒸馏水中反复洗涤，于-10～-60℃下预处理2～48h后转入冷冻干燥机中，冷冻干燥即得血管组织工程支架材料；

上述步骤(3)中所述的包载普伐他汀钠的壳聚糖微球由以下方法制得：

(A)将乳化剂与机溶剂按乳化剂︰有机溶剂＝2︰100～8︰100体积比混合，搅拌均匀，制得油相；其中，所述的乳化剂为span-80、吐温-80、卡波姆1342或单油酸二甘酯，所述的有机溶剂为液体石蜡、大豆色拉油、橄榄油或苯甲酸乙酯；

(B)水相制备：将壳聚糖加入到体积浓度为0.5～3％的醋酸溶液中，磁力搅拌1～24h，使其充分溶解，静置，配成质量浓度为0.5～3％的壳聚糖溶液；将普伐他汀钠溶解于水中，使得普伐他汀钠在水中的浓度13.3～66.6g/L，得到普伐他汀钠水溶液；然后，将壳聚糖溶液与普伐他汀钠水溶液混合均匀，制得含有质量比为普伐他汀钠︰壳聚糖＝1︰1～1︰5的水相；

(C)将交联剂京尼平溶于体积浓度为30～90％的乙醇中，配成京尼平在30～90％的乙醇中浓度为1.3～13g/L的交联剂溶液；

(D)按油相︰水相＝2︰1～15︰1的体积比将步骤(B)制得的水相边搅拌边滴加到步骤(A)制得的油相中，再继续搅拌0.5～6h，制得w/o型乳液；

(E)4～60℃下，按京尼平在w/o型乳液中浓度为0.085～0.85g/L将步骤(C)制得的交联剂溶液在搅拌的条件下分2～3次等量滴加到步骤(D)制得的w/o型乳液中，加完后继续搅拌2～48h，其中，分2次或3次滴加的间隔为10～60min，每次滴加的时间为10～30min；然后，高速离心，弃去上层液，将下层的固体用石油醚、丙酮、异丙醇、氯仿和乙醇中的两种或三种各洗涤3次；最后，将所得产物真空干燥，即得包载普伐他汀钠的壳聚糖微球。