CN104838894A

CN104838894A - 一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法

Info

Publication number: CN104838894A
Application number: CN201510301673.5A
Authority: CN
Inventors: 程加兵
Original assignee: Zhong Mao Bio Tech Ltd Dianbai
Current assignee: Zhong Mao Bio Tech Ltd Dianbai
Priority date: 2015-06-05
Filing date: 2015-06-05
Publication date: 2015-08-19

Abstract

本发明公开一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，包括：培养基配制、培养基灭菌、液体母种处理、接种、转接培养。将挑选好的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14～16分钟后，在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6～9天，在培养期间控制培养温度19～22℃，通气压力1.2～1.8Mpa。本发明技术方案的有益效果是：液体菌种制备过程简单，操作简便。菌丝形态大部分为极小片段，能渗透至培养基内部，接种时很少堵喷头。接种后菌丝活性高，萌发快，整个发菌周期短。应用本发明的培养基培养金针菇液体菌种，发菌时间只需16～18天，比球形菌种缩短4～6天。

Description

一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法

技术领域

本发明属于食用菌工厂化栽培技术领域，具体的说涉及一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法。

背景技术

目前国内白色金针菇菌种主要为固体菌种和球形的液体菌种。固体菌种的众多缺点已在淘汰的边缘，而球形液体菌种有两大缺陷，球形菌种的粒径大，在接种操作时容易堵住喷头，对生产效率和员工士气影响很大。球形菌种的菌丝含量偏低，有效菌丝量也偏少、接种后萌发偏慢，整个栽培瓶发菌周期达到22天左右。相对传统的固体菌种的栽培尚存在优势，但是在集约化规模化的生产中已成瓶颈。

发明内容

本发明旨在解决上述技术问题。

本发明的目的是提供一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法。

为解决上述技术问题，本发明公开一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，包括如下步骤：

S1.分别配制接种培养基和转接培养基；

S2.接种培养基和转接培养基灭菌；

S3.液体母种处理；

S4.将S3处理后的液体母种接种至接种培养基进行培养;

S5.步骤S4培养完成后，利用转接培养基进行转接培养。

进一步的，步骤S1所述接种培养基由如下组分组成：白糖30g/L，豆粕粉4g/L，MgSO₄0.2～1.0g/L，KH₂PO₄0.2～1.2g/L，消泡剂0.3～0.4ml/L，加水定容，配制液体培养基；所述豆粕粉经过140目粉碎。

作为进一步的优选方案，步骤S1所述转接培养基由如下组分组成：豆柏粉0. 15%～0.35%、白砂糖0.15%～0.35%、MgSO₄0. 04%～0.09%、KH₂PO₄0.04%～0.09%、余量为水，配制液体培养基；所述豆粕粉经过140目粉碎后用水溶解，所述白砂糖用热水溶解，所述MgSO₄和KH₂PO₄用水溶解。

作为进一步的优选方案，步骤S2所述灭菌是将液体培养基（接种培养基和转接培养基）加入液体菌种培养罐内后，将培养罐推入灭菌锅灭菌，温度95～105℃维持60min，再温度121～123℃维持80min。

更进一步地，所述液体培养基灭菌完成后推进万级冷却室, 冷却到室温。

作为进一步的优选方案，步骤S3所述液体母种处理是将挑选好的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14～16分钟后使用。

作为进一步的优选方案，步骤S4或步骤S5均是在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6～9天，在培养期间控制培养温度19～22℃，通气压力1.2～1.8Mpa。

更近一步地，所述无菌压缩空气是由最小孔径为0.01ppm的过滤器所过滤，并由冷冻式干燥机、吸附式干燥机除油除水的空气。

与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是：

1、液体菌种制备过程简单，操作简便。

2、菌丝形态大部分为极小片段，接种时很少堵喷头，能渗透至培养基内部。

3、接种后菌丝活性高，萌发快，整个发菌周期短。

4、应用本发明的培养基培养金针菇液体菌种，发菌时间只需16～18天，比球形菌种缩短4～6天。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的作进一步的说明。但本发明的实施方式并不因此限定于以下实施例。除非特别说明，本发明采用的材料和加工方法为本技术领域常用材料和加工方法。

一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，包括如下步骤：

S1.培养基配制；

S2.培养基灭菌；

S3.液体母种处理；

S4.接种;

S5.转接培养。

步骤S1中进行培养基配制包括以下步骤：

S11.接种培养基配制；

S12.转接培养基配制。

首先，步骤S11中接种培养基配制包括以下步骤：豆粕粉过140目的粉碎机粉碎，按以下比例：白糖30g/L，豆粕粉4g/L，MgSO₄0.2～1.0g/L，KH₂PO₄0.2～1.2g/L，消泡剂150～200ml/500L，加水定容，配制液体培养基。

步骤S12中转接培养基配制包括以下步骤：豆粕粉过140目的粉碎机粉碎后用水溶解，白糖用热水溶解，硫酸镁和磷酸二氢钾用水溶解后，按以下重量比例：豆柏粉0. 15%～0.35%、白砂糖0.15%～0.35%、MgSO₄0. 04%～0.09%、KH₂PO₄0.04%～0.09%、余量为水，配制液体培养基。

其次，步骤S2中将液体培养基加入液体菌种培养罐内后，将培养罐推入灭菌锅灭菌，温度95～105℃维持60min，温度121～123℃维持80min。灭菌完成后推进万级冷却室, 冷却到室温。

再次，步骤S3中将挑选好的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14～16分钟后使用。

最后，步骤S4、S5在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6～9天，在培养期间控制培养温度19～22℃，通气压力1.2～1.8Mpa。无菌压缩空气是由最小孔径为0.01ppm的过滤器所过滤，并由冷冻式干燥机、吸附式干燥机除油除水的空气。

本发明实施例所采用的供试菌种，白色金针菇（F.var.velutipes.）母种为电白中茂生物技术有限公司佛山三水分公司的W14。

接种培养基包括：白糖30g/L、豆粕粉4g/L、MgSO₄0.2-1.0g/L，KH₂PO₄0.2-1.2g/L，其余为水。并放入磁力搅拌器转子1枚，规格为长35mm，宽8mm。1L刻度三角瓶装液量为600ml。灭菌后接入8块2mm左右试管斜面原种，将其放入22℃、转速为150转/分摇床中培养9天。

转接培养基配制：

① 将白糖放入容器中加10L水，搅拌使其溶解；

② 加入MgSO₄和KH₂PO₄并使其溶解；

③ 将豆粨粉经过120目筛子过滤，然后加入上述溶液中，使其充分分散在水中定容。

④ 将上述液体通过40目的不锈钢筛过滤，倒入发酵罐，加入消泡剂200ml；加水将配制好的培养基倒入发酵罐中，121℃高压蒸汽灭菌，待其温度冷却至85℃以下时，将发酵罐推出，通入无菌空气，压力为1.2～1.8兆帕，并在罐体上放置一水淋以迅速冷却罐体，当罐体温度冷却至25℃以下时即可接液体母种。

其中，发酵罐培养温度为21℃，通气压力为1.2兆帕，液体母种培养8天后测量菌丝含量、菌球密度与直径。

菌丝含量的测定：将培养好的发酵罐出料口打开倒出菌丝，分别在上中下三层用三角瓶取250ml菌液，菌丝放置磁力搅拌机上搅拌10分钟，量取10ml菌液进行3500r/m离心分离,倒掉上清液，称量菌丝重量。

下表为对发酵罐液体菌种的菌丝含量、菌球密度、菌体粒径的测量结果：

表明了本发明制备的培养金针菇液体菌种，接种后菌丝活性高，萌发快，整个发菌周期短。另外，应用本发明的方法培养金针菇液体菌种，发菌时间只需16～18天，比球形菌种缩短4～6天。

以上记载的本发明的培养金针菇液体菌种的方法，是发明人经过大量的研究和探索，优化得出的，包括培养工艺的控制以及培养基的优化。其中，值得强调的是：接种和转接培养的方法及其对应的培养基也是很关键的影响因素之一。先利用接种培养基进行液体母种的培养，再利用转接培养基进行转接培养的方式是最佳方案；所述接种培养基由如下组分组成：白糖30g/L，豆粕粉4g/L，MgSO₄0.2～1.0g/L，KH₂PO₄0.2～1.2g/L，消泡剂0.3～0.4ml/L，加水定容，配制液体培养基；所述豆粕粉经过140目粉碎。所述转接培养基由如下组分组成：豆柏粉0. 15%～0.35%、白砂糖0.15%～0.35%、MgSO₄0. 04%～0.09%、KH₂PO₄0.04%～0.09%、余量为水，配制液体培养基；所述豆粕粉经过140目粉碎后用水溶解，所述白砂糖用热水溶解，所述MgSO₄和KH₂PO₄用水溶解。

实验显示，接种培养和转接培养、及其对应培养基互换后，所制备的金针菇液体菌种的菌丝活性、萌发速度、整个发菌周期等性能显著下降。

显然，本发明的上述实施例仅为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims

1.一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.分别配制接种培养基和转接培养基；

S2.接种培养基和转接培养基灭菌；

S3.液体母种处理；

S4.将S3处理后的液体母种接种至接种培养基进行培养;

S5.步骤S4培养完成后，利用转接培养基进行转接培养。

2.根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步骤S1所述接种培养基由如下组分组成：白糖30g/L，豆粕粉4g/L，MgSO₄0.2～1.0g/L，KH₂PO₄0.2～1.2g/L，消泡剂0.3～0.4ml/L，加水定容；所述豆粕粉经过140目粉碎。

3. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步骤S1所述转接培养基由如下组分组成：豆柏粉0. 15%～0.35%、白砂糖0.15%～0.35%、MgSO₄0. 04%～0.09%、KH₂PO₄0.04%～0.09%、余量为水；

所述豆粕粉经过140目粉碎后用水溶解，所述白砂糖用热水溶解，所述MgSO₄和KH₂PO₄用水溶解。

4. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步骤S2所述灭菌是将接种培养基和转接培养基在95～105℃维持60min，再121～123℃维持80min。

5. 根据权利要求4所述的白色金针菇液体菌种的制备方法，其特征在于，所述灭菌完成后冷却到室温。

6. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步骤S3所述液体母种处理是将挑选的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14～16分钟后使用。

7. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步骤S4或步骤S5是在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6～9天，在培养期间控制培养温度19～22℃，通气压力1.2～1.8Mpa。

8. 根据权利要求7所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，所述无菌压缩空气是由最小孔径为0.01ppm的过滤器所过滤，并由冷冻式干燥机、吸附式干燥机除油除水的空气。