CN104833763B - 参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 - Google Patents
参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104833763B CN104833763B CN201510228784.8A CN201510228784A CN104833763B CN 104833763 B CN104833763 B CN 104833763B CN 201510228784 A CN201510228784 A CN 201510228784A CN 104833763 B CN104833763 B CN 104833763B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powder
- solution
- ginseng
- ultramicro
- harpagoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于参草超微粉中成分的鉴别方法，可用于参草超微粉中成分哈巴俄苷的定性分析，该方法在中药材玄参普通薄层鉴别的基础上改进方法用于中兽药复方中的成分鉴别，通过对无玄参药材的阴性对照进行鉴别表明此方法对于中兽药复方参草超微粉的鉴别斑点清晰，结果理想，大大拓宽薄层鉴别检测途径，有效提高了中兽药成方制剂中的薄层鉴别增订率。
Description
技术领域
本发明涉及一种超微粉成分的薄层鉴别方法，涉及一种能定性测定中药复方制剂中哈巴俄苷的试验方法。特别涉及一种用薄层色谱法测定参草超微粉中哈巴俄苷的样品处理及检测的相关技术。
背景技术
目前在国家各类中兽药制剂质量标准中，其成分药的薄层鉴别平均约为处方中药材总量的30％，其成分药的含量测定比例较少，无法全方位监控制剂质量。尤其是超微粉制剂，药材的显微特征已不复存在，显微鉴别对其束手无策，用薄层鉴别定性控制制剂中特征性标示成分，可控制制剂质量，使得药物制剂符合质量标准达到其治疗效果。
对药材玄参的薄层鉴别方法，中国兽药典2010年版对其有详细描述，但对含玄参的复方制剂使用此方法鉴别哈巴俄苷时，斑点不清晰，难以达到中国兽药典的要求。而且，现有技术中玄参的薄层色谱鉴别虽然有所提及，但由于其制备供试品溶液时有效成分提取不够完全，浪费了试剂和药材，成本无法降低。
此外，现有对玄参进行薄层色谱鉴别时，由于供试品溶液点于硅胶薄层板上展开后，少量的哈巴俄苷在薄层板上分解或是被薄层板的硅胶吸附，故当待测溶液在硅胶板上展开后，对薄层进行分析应在短时间内进行，才能保证测定结果的偏差在允许范围内。
发明内容
本发明的目的在于公开一种能鉴别参草超微粉中哈巴俄苷的试验方法，通过多次重复试验证实该方法对于参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别，鉴别精度较高、操作简单、结果易于观察。
一种用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该试验方法包括下述步骤：
第一步、取参草药材，采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍，烘干；然后用粉碎机进行粗粉碎，混合之后于60～80℃烘干至水分质量百分比在6％以下，然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎，将通过250～300目筛网筛分的药物进行收集，再混合之后即得到参草超微粉；
第二步、供试品溶液的制备：取参草超微粉适量，加甲醇，配制成1mL甲醇含参草超微粉1.0～1.2g，浸泡1～2h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟，放冷，滤过；蒸干滤液，残渣加水25mL使溶解；加正丁醇振摇提取2～3次，每次添加正丁醇的量为20～30mL，合并正丁醇液；蒸干，残渣加甲醇5～8mL使溶解，作为供试品溶液。
第三步：对照品溶液的制备：取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
第四步：吸取供试品及对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷-甲醇-甲苯-水(三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为5～6：3～4：1：1～1.5)的下层溶液为展开剂，置于展开剂预饱和15～20min的展开缸中，展开，取出，晾干；喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，加热至斑点显色清晰；所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为5～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
第五步：白光下检视，将供试品溶液的薄层色谱与对照品溶液的薄层色谱进行对比，当在与对照品色谱相应位置上显相同的斑点时，制备的板青超微粉为合格产品。
进一步地，第一步中混合之后于70～75℃烘干至水分质量百分比在5％以下。
进一步地，用双向气流超微粉筛机进行超微粉碎，过300目筛网进行收集。
进一步地，第四步中三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为6：3：1：1。
进一步地，第四步中所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
其中所用仪器：AUW220D1/1万电子天平；JCX-400GZ超声波清洗器。薄层自动点样仪，GoodLook-1000型全自动薄层色谱成像系统。
其中，双向气流超微粉筛机特征在于：其特征在于：包括机壳(1)，在所述机壳(1)内腔中部设置有开口向下的筛筒(2)，所述筛筒(2)的筒口与设置在机壳(1)下部的漏斗(3)上开口相衔接；机壳(1)内腔通过上部的负压室(4)与外设引风机(5)相连通；在位于筛筒(2)与机壳(1)之间的区域设置有由横管(6)和立管(7)构成的门字形旋转喷气管，所述门字形旋转喷气管的横管(6)中部与驱动电机(8)传动联接；在筛筒(2)中间位置垂直设置有鼓风管(9)，所述鼓风管(9)的出风口穿过筛筒(2)与门字形旋转喷气管的横管(6)中部相连通，并通过滚动轴承(10)与门字形旋转喷气管的横管(6)滚动连接；鼓风管(9)的进风口延伸出所述漏斗(3)侧壁之外与外设鼓风机(11)的鼓风口相连通；在筛筒(2)内设置有进料管(12)，在所述进料管(12)的出料口上方设置有缓冲伞(13)，进料管(12)的进料口延伸出漏斗(3)侧壁之外；所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向开设在其管壁上的通槽(14)，所述通槽(14)的槽口朝着所述筛筒(2)方向开设；或者所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向间隔排列开设在其管壁上的条形孔(15)；所述条形孔(15)的孔口朝着所述筛筒(2)方向开设。
鉴别结果:
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点，可检出哈巴俄苷；色谱斑点清晰，背景无干扰，经无玄参阴性样品对照，色谱无干扰。
本发明的优点在于：
1、本发明优于已公开的技术，方法简单，又能达到中国兽药典的要求。尤其适用于含玄参的复方参草超微粉。
2、薄层鉴别方法测定含玄参的复方中兽药参草超微粉中哈巴俄苷时，减少了三氯甲烷及甲醇的使用量；同时分析了哈巴俄苷的特性，从而添加了关键组分-甲苯，即采用具有特定体积配比的三氯甲烷-甲醇-甲苯-水作为展开剂，从而使得鉴别斑点清晰，结果易于观察。
3、在薄层色谱鉴别时，喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，从而使得鉴别结果更加精确。
4、本发明为了避免薄层色谱鉴别长时间测定结果存在偏差以及显色不明显，对薄层色谱板进行了改进，即在制备时掺有质量百分比为5～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
附图说明
图1是采用中国兽药典2010年版所述方法做出的玄参的薄层色谱图。
注：左边起第1个斑点为玄参对照药材，第2个斑点为哈巴俄苷对照品，第3-5个斑点为中药材玄参。
图2是采用本发明方法所做无玄参的参草超微粉阴性对照样品及样品的薄层色谱图。
注：左起第1-3个斑点为参草超微粉样品，第4个斑点为无玄参阴性对照样品，第5个斑点为哈巴俄苷对照品。
图3是采用本发明所述方法做出的参草超微粉的薄层色谱图。
注：左起第1个斑点为哈巴俄苷对照品，第2-3个斑点为参草超微粉样品。
图4是双向气流超微粉筛机的结构示意图。
具体实施方式
以下结合实施例，举例说明本发明方法的具体实施方式，详述如下：
实施例1
一种用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该试验方法包括下述步骤：
第一步、取参草药材，采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍，烘干；然后用粉碎机进行粗粉碎，混合之后于60～80℃烘干至水分质量百分比在6％以下，然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎，将通过250～300目筛网筛分的药物进行收集，再混合之后即得到参草超微粉；
第二步、供试品溶液的制备：取参草超微粉适量，加甲醇，配制成1mL甲醇含参草超微粉1.0～1.2g，浸泡1～2h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟，放冷，滤过；蒸干滤液，残渣加水25mL使溶解；加正丁醇振摇提取2～3次，每次添加正丁醇的量为20～30mL，合并正丁醇液；蒸干，残渣加甲醇5～8mL使溶解，作为供试品溶液。
第三步：对照品溶液的制备：取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
第四步：吸取供试品及对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷-甲醇-甲苯-水(三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为5～6：3～4：1：1～1.5)的下层溶液为展开剂，置于展开剂预饱和15～20min的展开缸中，展开，取出，晾干；喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，加热至斑点显色清晰；所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为5～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
第五步：白光下检视，将供试品溶液的薄层色谱与对照品溶液的薄层色谱进行对比，当在与对照品色谱相应位置上显相同的斑点时，制备的板青超微粉为合格产品。
实施例2
一种用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该试验方法包括下述步骤：
第一步、取参草药材，采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍，烘干；然后用粉碎机进行粗粉碎，混合之后于70～75℃烘干至水分质量百分比在6％以下，然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎，将通过280～300目筛网筛分的药物进行收集，再混合之后即得到参草超微粉；
第二步、供试品溶液的制备：取参草超微粉适量，加甲醇，配制成1mL甲醇含参草超微粉1.0～1.2g，浸泡1～2h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟，放冷，滤过；蒸干滤液，残渣加水25mL使溶解；加正丁醇振摇提取2～3次，每次添加正丁醇的量为20～30mL，合并正丁醇液；蒸干，残渣加甲醇6～8mL使溶解，作为供试品溶液。
第三步：对照品溶液的制备：取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
第四步：吸取供试品及对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷-甲醇-甲苯-水(三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为6：3：1：1.5)的下层溶液为展开剂，置于展开剂预饱和15～20min的展开缸中，展开，取出，晾干；喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，加热至斑点显色清晰；所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
第五步：白光下检视，将供试品溶液的薄层色谱与对照品溶液的薄层色谱进行对比，当在与对照品色谱相应位置上显相同的斑点时，制备的板青超微粉为合格产品。
实施例3
一种用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该试验方法包括下述步骤：
第一步、取参草药材，采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍，烘干；然后用粉碎机进行粗粉碎，混合之后于80℃烘干至水分质量百分比在6％以下，然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎，将通过300目筛网筛分的药物进行收集，再混合之后即得到参草超微粉；
第二步、供试品溶液的制备：取参草超微粉适量，加甲醇，配制成1mL甲醇含参草超微粉1.0～1.2g，浸泡1～2h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟，放冷，滤过；蒸干滤液，残渣加水25mL使溶解；加正丁醇振摇提取2～3次，每次添加正丁醇的量为20～30mL，合并正丁醇液；蒸干，残渣加甲醇5～8mL使溶解，作为供试品溶液。
第三步：对照品溶液的制备：取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
第四步：吸取供试品及对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷-甲醇-甲苯-水(三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为6：3：1：1)的下层溶液为展开剂，置于展开剂预饱和15～20min的展开缸中，展开，取出，晾干；喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，加热至斑点显色清晰；所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
第五步：白光下检视，将供试品溶液的薄层色谱与对照品溶液的薄层色谱进行对比，当在与对照品色谱相应位置上显相同的斑点时，制备的板青超微粉为合格产品。
Claims (4)
1.一种用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该鉴别方法包括下述步骤：
第一步、取参草药材，采用乙醇洗净1遍，然后用去离子水清洗2遍，烘干；然后用粉碎机进行粗粉碎，混合之后于60～80℃烘干至水分质量百分比在6％以下，然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎，将通过250～300目筛网筛分的药物进行收集，再混合之后即得到参草超微粉；
第二步、供试品溶液的制备：取参草超微粉适量，加甲醇，配制成1mL甲醇含参草超微粉1.0～1.2g，浸泡1～2h；然后在甲醇中进行超声处理，超声处理的功率为250W，频率为33kHz，时间为30～60分钟，放冷，滤过；蒸干滤液，残渣加水25mL使溶解；加正丁醇振摇提取2～3次，每次添加正丁醇的量为20～30mL，合并正丁醇液；蒸干，残渣加甲醇5～8mL使溶解，作为供试品溶液；
第三步：对照品溶液的制备：取哈巴俄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
第四步：吸取供试品溶液及对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的下层溶液为展开剂，三氯甲烷-甲醇-甲苯-水混合溶液的体积百分比为6:3:1:1，置于展开剂预饱和15～20min的展开缸中，展开，取出，晾干；喷以5～8％香草醛硫酸试液作为荧光增强剂，加热至斑点显色清晰；所述硅胶G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为5～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂；
第五步：白光下检视，将供试品溶液的薄层色谱与对照品溶液的薄层色谱进行对比，供试品溶液的薄层色谱中，在与对照品溶液的薄层色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
2.如权利要求1所述的用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：第一步中混合之后于70～75℃烘干至水分质量百分比在5％以下。
3.如权利要求1所述的用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：第一步中，将通过300目筛网筛分的药物进行收集。
4.如权利要求1所述的用于检测参草超微粉中哈巴俄苷的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：第四步中所述硅胶G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8～10％的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510228784.8A CN104833763B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510228784.8A CN104833763B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104833763A CN104833763A (zh) | 2015-08-12 |
| CN104833763B true CN104833763B (zh) | 2017-03-15 |
Family
ID=53811776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510228784.8A Expired - Fee Related CN104833763B (zh) | 2015-05-07 | 2015-05-07 | 参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104833763B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1588055A (zh) * | 2004-08-27 | 2005-03-02 | 广州中一药业有限公司 | 鼻咽灵片的质量控制方法 |
| CN103070972A (zh) * | 2012-12-11 | 2013-05-01 | 河南省康星药业股份有限公司 | 参草超微粉的常温制备方法及其专用双向气流筛分机 |
| CN103520359A (zh) * | 2013-10-22 | 2014-01-22 | 浙江百草中药饮片有限公司 | 一种鲜玄参超微粉制备工艺 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3399600B2 (ja) * | 1993-11-25 | 2003-04-21 | 日立化成工業株式会社 | 樹脂組成物およびオープンモールド用樹脂組成物 |
| FR2915900B1 (fr) * | 2007-05-07 | 2012-08-24 | Burgundy | Nouveau procede de preparation d'extraits purifies d'harpagophytum procumbens. |
-
2015
- 2015-05-07 CN CN201510228784.8A patent/CN104833763B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1588055A (zh) * | 2004-08-27 | 2005-03-02 | 广州中一药业有限公司 | 鼻咽灵片的质量控制方法 |
| CN103070972A (zh) * | 2012-12-11 | 2013-05-01 | 河南省康星药业股份有限公司 | 参草超微粉的常温制备方法及其专用双向气流筛分机 |
| CN103520359A (zh) * | 2013-10-22 | 2014-01-22 | 浙江百草中药饮片有限公司 | 一种鲜玄参超微粉制备工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 化学键合相薄层色谱;张震南等;《色谱》;19871231;第5卷(第4期);第225～231页 * |
| 玄参;国家药典委员会;《中华人民共和国药典2010年版一部》;中国医药科技出版社;20100131;第108页右栏【鉴别】项下第2段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104833763A (zh) | 2015-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106841433B (zh) | 一种青皮对照提取物及其应用 | |
| CN106501442B (zh) | 一种芩黄清肺散的质量检测方法 | |
| CN105181847B (zh) | 一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法 | |
| CN103197027A (zh) | 芪蛭通络胶囊的质量控制方法 | |
| CN106918674A (zh) | 一种治疗腰膝酸痛、坐骨神经痛的中药组合物的检测方法 | |
| CN104825872B (zh) | 一种清瘟败毒超微粉的常温制备及薄层鉴别方法 | |
| CN104330489A (zh) | 一种疏风解毒胶囊的质量控制方法 | |
| CN108760945A (zh) | 一种芪胶升白胶囊的检测方法 | |
| CN107505427A (zh) | 一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法 | |
| CN107315061B (zh) | 一种治疗妇女子宫出血的茜芷中药制剂的检测方法 | |
| CN106814157B (zh) | 青皮对照提取物的制备方法 | |
| CN106198810B (zh) | 一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法 | |
| CN102038795B (zh) | 中药制剂五仁润肠丸的检测方法 | |
| CN104833763B (zh) | 参草超微粉中哈巴俄苷的鉴别方法 | |
| CN103163272B (zh) | 一种小儿健脾药物中山楂和甘草的鉴别方法 | |
| CN108362802A (zh) | 一种木香对照提取物及其制备方法和应用 | |
| CN105548384A (zh) | 一种口鼻清喷雾剂的检测方法 | |
| CN105628853A (zh) | 一种芸香草药材的质量检测方法 | |
| CN106226409B (zh) | 清咳平喘颗粒的检测方法 | |
| CN101168009B (zh) | 一种猴枣牛黄散的定性定量检测方法 | |
| CN101703656A (zh) | 调经活血胶囊的质量检测方法 | |
| CN101690748A (zh) | 中药参附强心丸的鉴别方法 | |
| CN105801480B (zh) | 一种从中华鲎尾中制备犬尿酸的方法 | |
| CN118225962B (zh) | 一种包含淫羊藿的中药复方中莪术、知母、川芎的薄层鉴别方法及其应用 | |
| CN106383195B (zh) | 风湿宁药酒中白鲜皮的鉴别方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Ma Xia Inventor after: Zhou Yanzhou Inventor after: Guo Zhenhuan Inventor after: Wang Xingtao Inventor after: Liu Yonglu Inventor after: Yang Shuai Inventor before: Ma Xia Inventor before: Zhou Yanzhou Inventor before: Guo Zhenhuan Inventor before: Wang Xingtao Inventor before: Wang Wenwen Inventor before: Yang Shuai |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20160520 Address after: 451464 Zhongmu City, Zhengzhou province Baisha Industrial Park Town Xing Xing Kang Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: Henan Health Star Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant after: Henan Kang Xing Biotechnology Co., Ltd. Applicant after: Henan University of Animal Husbandry and Economy Address before: 451464 Zhongmu City, Zhengzhou province Baisha Industrial Park Town Xing Xing Kang Pharmaceutical Co., Ltd. Applicant before: Henan Health Star Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170315 Termination date: 20170507 |