CN104823852B - 一种铁皮石斛根尖组培快速繁育方法 - Google Patents

一种铁皮石斛根尖组培快速繁育方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛根尖组培快速繁殖的育苗方法，从根尖诱导分化培养，增殖培养，生根培养后，得到生根苗，炼苗、移栽得到成品苗。本发明培育的铁皮石斛种苗继承了人工选择植株的优良性状，抗性良好，产量稳定，在生产上具有重要推广价值。

Description

一种铁皮石斛根尖组培快速繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种铁皮石斛根尖组培快速繁殖的育苗方法，属于生物工程技术领域。
背景技术：
野生铁皮石斛由于生长条件十分苛刻，产量极为稀少，被国家列为濒危物种保护。现代人工种植的种苗来自铁皮石斛种子有性繁殖，由于自然育种条件下，种子繁殖后代变异较多，个体植株差异较大，性状不稳定，生产成本高，产量较低，因此，优良品种的留种扩繁成为迫切需求。本发明采用人工选取优良植株，通过脱毒种苗组织培养快繁技术，使种苗后代继承了原植株的优良性状，不带病毒，抗性良好，产量稳定。从而在生产上具有重要的推广价值。
发明内容：
本发明提供一种铁皮石斛根尖组培快速繁育方法，包括如下步骤：
根尖消毒：选取健壮的铁皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次经流水冲洗1h，75%的乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗2遍后再把根尖放入容器中，用质量分数为0.1%的升汞浸泡8分钟，再用无菌水冲洗4-5遍，得到待接种根尖；
根尖分化：将上述待接种根尖切取0.3-0.5mm，接入诱导分化培养基中，在温度为25℃，光照强度1800lx，每日光照时间12小时的条件下，培养两个月，得到分化的根尖；
增殖培养：将上述步骤中待分化的根尖置于增殖培养基，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养45天，得到经增殖培养的根尖；
生根培养：将上述经增殖培养的根尖置于生根培养基中，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养45天，得到生根苗，得到的生根苗经炼苗后即可移栽。
所述的诱导分化培养基由如下重量份的原料组成的：MS培养基100份， 0.4mg/LNAA 1-10份，质量分数为10%香蕉汁1-10份，5.7g/L 琼脂0.5-5份，30g/L 蔗糖10-30份、松花粉5-20份，硅藻粉5-10份。进一步优选为：MS培养基100份， 0.4mg/L NAA 5.5份，质量分数为10%香蕉汁1-10份，5.7g/L 琼脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，硅藻粉6份。
所述的增殖培养基由如下原料组成的：MS培养基100份，1.0mg/L NAA 1-5份，0.2mg/L 6-BA0.5-3份，质量分数为10% 马铃薯汁1-10份，5.7g/L 琼脂 0.5-5份，30g/L 蔗糖10-20份，硫脲3-10份。进一步有选为：所述的增殖培养基由如下原料组成的：MS培养基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，质量分数为10%马铃薯汁6.5份，5.7g/L 琼脂 2份，30g/L 蔗糖13份，硫脲5.5份。
所述的生根培养基由如下原料组成的：MS培养基100份， 0.2mg/L NAA 1-5份，质量分数为10%香蕉汁1-10份，5.7g/L琼脂 0.5-5份，30g/L 蔗糖10-20份，茶树根粉5-15份。进一步优选为：MS培养基100份， 0.2mg/L NAA 3.5份，质量分数为10%香蕉汁4.5份，5.7g/L琼脂 2.5份，30g/L 蔗糖15份，茶树根粉12.5份。
采用上述培养基进行野生铁皮石斛的培养，培养周期短，野生铁皮石斛的适应性强，移栽后成活率高，如实施例2，比实施例1培养的铁皮石斛的成活率高10-25%，移栽后的成活率比实施例1高17-20%。
本发明的松花粉、硅藻粉具有消毒杀菌、防霉变的作用；硫脲具有抑制病菌的效果，同时在增殖培养中提供营养；茶树根粉由于粒度较细（本发明所用的粒度为过300目及以上），在生根过程中，促进根系部位的呼吸，同时具有杀菌消毒的作用。
具体实施方式
结合实验案例，进一步阐述。
实验例1：
选取健壮的铁皮石斛苗，取1.5cm左右的根尖用流水冲洗1h左右，再用75%的乙醇溶液消毒40s，接着无菌水冲洗2遍，然后把材料放入烧杯中，用0.1%的升汞浸泡8分钟，然后用无菌水冲洗4-5遍，取0.3-0.5mm大小的根尖接种到诱导分化培养基中：MS培养基（100份）+ NAA0.4mg/L（3.5份）+香蕉汁10%（6.4份）+琼脂5.7g/L（3.7份）+蔗糖30g/L（28份），在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养两个月。后转接增殖培养基中：MS培养基（100份）+ NAA1.0mg/L（1.5份）+6-BA0.2 mg/L（1.2份）+马铃薯汁10%（7.3份）+琼脂5.7g/L（1.8份）+蔗糖30g/L（14.3份），在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养一个半月。转接到生根培养基： MS培养基（100份）+ NAA0.2mg/L（2.1份）+香蕉汁10%（5.5份）+琼脂5.7g/L（1.6份）+蔗糖30g/L（20份），在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养一个半月左右，即可炼苗后移栽。
实施例2
根尖消毒：选取健壮的铁皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次经流水冲洗1h，75%的乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗2遍后再把根尖放入容器中，用质量分数为0.1%的升汞浸泡8分钟，再用无菌水冲洗4-5遍，得到待接种根尖；
根尖分化：将上述待接种根尖切取0.3-0.5mm，接入诱导分化培养基中，在温度为25℃，光照强度1800lx，每日光照时间12小时的条件下，培养45天，得到分化的根尖；所述的诱导分化培养基为MS培养基100份， 0.4mg/L NAA 5.5份，质量分数为10%香蕉汁1-10份，5.7g/L 琼脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，硅藻粉6份的混合物。
增殖培养：将上述步骤中待分化的根尖置于增殖培养基，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养38天，得到经增殖培养的根尖，所述的增殖培养基为MS培养基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，质量分数为10%马铃薯汁6.5份，5.7g/L 琼脂 2份，30g/L 蔗糖13份，硫脲5.5份的混合物；
生根培养：将上述经增殖培养的根尖置于生根培养基中，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养38天，得到生根苗，得到的生根苗经炼苗后即可移栽，所述的生根培养基为MS培养基100份， 0.2mg/L NAA 3.5份，质量分数为10%香蕉汁4.5份，5.7g/L琼脂 2.5份，30g/L 蔗糖15份，茶树根粉12.5份的混合物。
采用本发明的技术方案培养时间短，稳定性高，不带来病菌，保持了野生铁皮石斛原有的生长特性。

Claims (4)

1.一种铁皮石斛根尖组培快速繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：
根尖消毒：选取健壮的铁皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次经流水冲洗1h，75%的乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗2遍后再把根尖放入容器中，用质量分数为0.1%的升汞浸泡8分钟，再用无菌水冲洗4-5遍，得到待接种根尖；
根尖分化：将上述待接种根尖切取0.3-0.5mm，接入诱导分化培养基中，在温度为25℃，光照强度1800lx，每日光照时间12小时的条件下，培养两个月，得到分化的根尖，所述的诱导分化培养基由如下重量份的原料组成：MS培养基100份， 0.4mg/L NAA 1-10份，质量分数为10%的香蕉汁1-10份，5.7g/L 琼脂0.5-5份，30g/L 蔗糖10-30份、松花粉5-20份，硅藻粉5-10份；
增殖培养：将上述步骤中分化的根尖置于增殖培养基，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养45天，得到经增殖培养的根尖，所述的增殖培养基由如下原料组成：MS培养基100份，1.0mg/L NAA 1-5份，0.2 mg/L 6-BA0.5-3份，质量分数为10%的马铃薯汁1-10份，5.7g/L 琼脂 0.5-5份，30g/L 蔗糖10-20份，硫脲3-10份；
生根培养：将上述经增殖培养的根尖置于生根培养基中，在温度25℃，光照强度1800lx，光照时间12小时的条件下，培养45天，得到生根苗，得到的生根苗经炼苗后移栽，所述的生根培养基由如下原料组成：MS培养基100份，0.2mg/L NAA 1-5份，质量分数为10%的香蕉汁1-10份，5.7g/L琼脂 0.5-5份，30g/L蔗糖10-20份，茶树根粉5-15份。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛根尖组培快速繁育方法，其特征在于，所述的诱导分化培养基由如下重量份的原料组成：MS培养基100份， 0.4mg/L NAA 5.5份，质量分数为10%的香蕉汁1-10份，5.7g/L 琼脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，硅藻粉6份。
3.根据权利要求1所述的铁皮石斛根尖组培快速繁育方法，其特征在于，所述的增殖培养基由如下原料组成：MS培养基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，质量分数为10%的马铃薯汁6.5份，5.7g/L 琼脂 2份，30g/L 蔗糖13份，硫脲5.5份。
4.根据权利要求1所述的铁皮石斛根尖组培快速繁育方法，其特征在于，所述的生根培养基由如下原料组成：MS培养基100份，0.2mg/L NAA 3.5份，质量分数为10%的香蕉汁4.5份，5.7g/L琼脂 2.5份，30g/L 蔗糖15份，茶树根粉12.5份。
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