CN104820037A - 高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法 - Google Patents
高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步骤：步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液，步骤4：绘制含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的各个标准溶液的线性回归曲线，并测量步骤3的洗脱液中莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的含量。本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
Description
技术领域
本发明涉及动物组织和排泄物的检测领域，特别是一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
背景技术
样品前处理是分析检测过程的关键环节，是浓缩被测定的痕量组分，提高方法的灵敏度，及除去对分析系统有干扰的物质的重要手段。萃取是从样品集体中分离出目标化合物的一项技术，是样品预处理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是应用最广泛的样品制备方法之一，但是，传统的液液萃取的操作繁琐费时、有机溶剂消耗量大，而且容易出现乳化现象的缺陷，使得在实际应用中具有一定的局限性。
1998年，科学家提出了在传统的液液萃取的基础上，利用一种具有吸附性和较大的比表面积的惰性多空填料作为介质，建立的一种新型高效样品的制备方法-介质液液萃取(supported liquid extraction简称SLE)，SLE萃取技术就是选用一种多孔性惰性材料-煅烧硅藻土作为介质，取代分液漏斗，增大了两相接触时的作用面积，实现高效、快速的萃取过程。
当水溶液样品加样到固定的聚丙烯注射管中的煅烧硅藻土上后，经过一定时间(一般分为几分钟)，水相溶液以一层薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，将有机溶剂从柱管上端加入，当互不相溶的两相在硅藻土表面接触的同时萃取立即发生，最后萃取液在重力作用下流出，必要情况下，可以施加较小的压力，而水相保留在介质中。盛接的流出液直接将溶剂吹干，复溶后，即可用于下一步分析检测。
农业部1063号公告-6-2008《饲料中13种β—受体激动剂的检测液相色谱——串联质谱法》采用阳离子型交换柱来提取饲料中的β—受体激动剂，如何降低上述检测的用时，提高上述检测的准确度是本领域技术人员需要思考的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
本发明的技术方案为：一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步骤：
步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理0.5～1.5分钟后再经过离心处理，将经混合处理的溶液在离心机中以9000～11000转/分钟的速度离心0.5～1.5分钟，取离心处理后的上清液少量；
步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；
步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；
步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的不同浓度标准溶液的标准回归曲线，所述的高效液相色谱法的具体参数为：
色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID
柱温：室温
流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；
检测器：UV检测器；
检测波长：217nm；
其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下重量份组成：
正丁醇 2～4份；
正己烷 2～4份；
乙酸甲酯 2～8份；
所述的缓冲溶液为：Ph范围为6.5～7.0的磷酸缓冲液。
在上述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法中，所述的饲料样品为1g，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。
在上述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法中，所述的SLE柱为奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱，液相色谱仪为LC-2010型高效液相色谱仪(日本岛津)。
本发明的有益效果如下：
采用SLE法分离饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇，采用三元萃取剂可以有效的提高多组分萃取对象的萃取效率，结合HPLC法可以有效的提高检测的准确度和降低检测用时。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
步骤1：取饲料样品1g，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0.5ml；离心处理的转速为10000转/分钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为6.5的磷酸缓冲液。
步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱(奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱)洗脱两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0.5ml。
其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下成分组成：
正丁醇 30wt％；
正己烷 30wt％；
乙酸甲酯 40wt％。
实施例2
步骤1：取饲料样品1g，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0.5ml；离心处理的转速为10000转/分钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为7的磷酸缓冲液。
步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置4分钟；
步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱(奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱)洗脱两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0.5ml。
其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下成分组成：
正丁醇 20wt％；
正己烷 30wt％；
乙酸甲酯 50wt％。
分析：
检测方法具体为：
仪器：LC-2010型高效液相色谱仪(日本岛津)
色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID
柱温：室温
流动相：0.05％磷酸水溶液：乙腈＝100:12；
检测器：UV检测器；
检测波长：217nm；
进样量：50μL
采用上述的检测方法分别测量莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的标准样，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的回归方程，同时，采用实施例1的样品按上述参数进行检测，根据217nm条件下的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的回归方程测定莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的含量，其中，沙丁胺醇出峰时间为7.2min，莱克多巴胺出峰时间为9.3min，克仑特罗的出峰时间为10.2min。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理0.5～1.5分钟后再经过离心处理，将经混合处理的溶液在离心机中以9000～11000转/分钟的速度离心0.5～1.5分钟，取离心处理后的上清液少量；
步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；
步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；
步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的不同浓度标准溶液的标准回归曲线，所述的高效液相色谱法的具体参数为：
色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID
柱温：室温
流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；
检测器：UV检测器；
检测波长：217nm；
其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下重量份组成：
正丁醇 2～4份；
正己烷 2～4份；
乙酸甲酯 2～8份；
所述的缓冲溶液为：Ph范围为6.5～7.0的磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，所述的饲料样品为1g，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。
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Effective date of registration: 20170122 Address after: 543000 the Guangxi Zhuang Autonomous Region Cenxi North Road No. 5 Patentee after: Cenxi Productivity Promotion Center Address before: 543000 the Guangxi Zhuang Autonomous Region, Wuzhou West Ring Road, No. 198 Patentee before: WUZHOU INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL, GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Sun Liangguang Inventor after: Guo Zhenwang Inventor after: Chen Xuesong Inventor after: Chen Qizhao Inventor after: Ye Xiaoqiang Inventor after: Wu Lan Inventor after: Deng Shuide Inventor before: Chen Xuesong Inventor before: Chen Qizhao Inventor before: Ye Xiaoqiang Inventor before: Guo Zhenwang Inventor before: Wu Lan Inventor before: Deng Shuide |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180426 Address after: 543000 198 West Ring Road, Wuzhou, the Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee after: WUZHOU FOOD AND DRUG INSPECTION INSTITUTE Address before: No. 5 north mountain road, Cenxi, the Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee before: Cenxi Productivity Promotion Center |
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| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20150805 Assignee: YULIN RONGXIAN QICHANG BOAR BREEDING CO.,LTD. Assignor: WUZHOU FOOD AND DRUG INSPECTION INSTITUTE Contract record no.: X2022450000306 Denomination of invention: A method for high precision measurement of ractopamine, clenbuterol and salbutamol in feed Granted publication date: 20160824 License type: Common License Record date: 20221212 |