CN104819946A - 一种胱抑素c检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

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刘运双
张绍城
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Abstract

本发明公开一种检测血清或血浆中胱抑素C的胶乳增强型免疫比浊试剂盒检测方法。该方法采用胶乳增强免疫投射比浊法测定胱抑素C，样本中胱抑素C与胶乳颗粒增强的抗胱抑素C抗体特异性反应，形成免疫复合物，在546nm波长检测其吸光度的变化，其变化程度与样本中的胱抑素C的含量成正比，从而得出样本中目标检测物胱抑素C的浓度。本发明检测人体血清或血浆样本中的胱抑素C试剂盒是由R1和R2检测试剂以及CysC校准品组成，是测定肾小球滤过率GFR的理想的内源性标记物，且较肌酐更为敏感和早期，使用本发明的方法灵敏度较高，具有很高的临床应用价值。

Description

一种胱抑素C检测试剂盒及其检测方法
技术领域
本发明属于生物技术领域和医学免疫体外诊断领域，提供了一种准确、灵敏、快速、定量检测人体血清或血浆样本中的胱抑素C(cystatin C)的胶乳增强免疫透射比浊法-LST型检测方法。
背景技术
肾脏疾病是临床上一种常见的疾病，各种原因导致的肾功能损害是进展为终末性肾病及心血管疾病的危险因素。唯一能阻止肾脏疾病恶化的方法就是早诊断、治疗以逆转损伤的肾功能。
胱抑素C是一种非糖化的蛋白，是半胱氨酸蛋白酶抑制剂的一种，大多数有核细胞都能稳定的产生胱抑素C，其分子量小，生成率稳定，由于胱抑素C不受炎症反应、性别、肌肉以及年龄变化的影响，其在血清中的浓度与肾小球滤过率(GFR)有密切的关系，并且对肾小球滤过率比肌酐更为敏感。因此，胱抑素C对测定肾小球滤过率有及其重要的意义。
胶乳增强免疫投射比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。而且，反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值的变化，其变化程度与样本中的胱抑素C的含量成正比。
发明内容
本发明的目的是提供一种定量测定人体血清或血浆中胱抑素C的含量的方法，从而进一步反应肾脏功能的改变，该方法准确性好、精密度高、灵敏度高，操作相对简单省时，检测范围宽。
本发明检测人体血清或血浆样本中的胱抑素C试剂盒是由R1和R2检测试剂以及CysC校准品组成，其中R1检测试剂是50mmol/L Tris缓冲液，R2检测试剂为CysC抗体包被的胶乳颗粒。不同批号试剂盒中各组分不能互换。
具体实施方式
1.样本要求
样本为按标准操作收集的血清或血浆(肝素抗凝，0.1mg肝素抗凝1.0ml血液)。样本应低温条件下保存，2-8℃密闭保存可稳定12天，室温保存可稳定6天。测定前需将样本平衡至室温，避免样本的反复冻融。若样本浑浊或有可见絮状纤维蛋白，需将样本于3000转/min离心3min，吸取上清液使用。严重的脂血、溶血、微生物污染会干扰测定结果。
2.适用仪器
日立LABOSPECT(LST)系列全自动生化分析仪。
3.检测方法
每天测试样本前需进行一次质控物测试，以确认校准的有效性及确保样本测试结果的正确。
当使用本试剂盒新的批次时或当质控物测试结果超出规定范围时，需要进行校准。使用本试剂盒提供的校准品，由仪器根据校准品的浓度与吸光度计算生成校准曲线。
将试剂盒放入仪器试剂仓相应位置，避免产生泡沫，试剂盒信息通过条形码扫描仪输入仪器系统，也可以通过仪器配套软件输入试剂信息。仪器自动计算得出测定样本的胱抑素C含量(mg/L)。
本发明的胱抑素C的检测试剂盒相较于现有技术，具有如下优势：
1.采用两种不同粒径范围的聚苯乙烯胶乳，两者在特定比例范围内使试剂盒灵敏度、精密度及线性均表现较好。
2.在抗体与胶乳的包被中采用化学偶连法，采用CDI做为聚苯乙烯胶乳的活化剂，避免了传统的活化剂EDC/NHS出现的胶乳颗粒制备后发生沉淀、稳定性不好的技术问题，并且提高的试剂盒的灵敏度、精密度及稳定性。
3.本发明的试剂盒组成简单、稳定性好、准确度高。
综上所述，本发明的胱抑素C的检测方法具有灵敏度高、特异性好、准确性高、抗干扰能力强及线性好等优点。
试剂盒存储条件及有效期
本试剂盒适于2-8℃密闭避光保存，有效期12个月，开瓶上机后2-8℃避光可稳定28天。

Claims (3)

1.一种准确、灵敏、快速、定量检测人体血清或血浆样本中的胱抑素C的胶乳增强免疫透射比浊法-LST型检测方法。
2.按照权利要求1所述测定胱抑素C的方法，其特征在于：该检测方法所用试剂组成：R1和R2检测试剂以及CysC校准品组成，其中R1检测试剂是50mmol/LTris缓冲液，R2检测试剂为CysC抗体包被的胶乳颗粒。
3.按照权利要求2所述所述测定胱抑素C的方法：其最佳特征在于：不同批号试剂盒中各组分不能互换。
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