CN102866256A

CN102866256A - 一种超敏c反应蛋白检测方法及检测试剂

Info

Publication number: CN102866256A
Application number: CN2012101196072A
Authority: CN
Inventors: 韦胜富; 李晓; 孙海江; 王建东; 李淮彬
Original assignee: SHENZHEN HORRON XLH MEDICAL ELECTRONICS CO Ltd
Current assignee: SHENZHEN HORRON XLH MEDICAL ELECTRONICS CO Ltd
Priority date: 2012-04-23
Filing date: 2012-04-23
Publication date: 2013-01-09
Anticipated expiration: 2032-04-23
Also published as: CN102866256B

Abstract

本发明涉及免疫检测，具体涉及一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。该检测方法，包括以下步骤：（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库；（2）将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数据库录入仪器计算软件，通过测试样本的散射值后通过计算可以得到样本的浓度结果。该检测方法及检测试剂检测速度快，特异性高，可以在特定蛋白分析仪上检测体液，特别是血液中微量生物化学物质，检测范围为0.4mg/L-350mg/L，扩大了超敏C反应蛋白的检测范围。

Description

一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂

技术领域

本发明涉及免疫检测，具体涉及一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。

背景技术

1930年，Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C－多糖发生特异性沉淀反应的物质。 1941年Avery等测知它是一种蛋白质，故称为C反应蛋白(CRP)。 C反应蛋白是一类正急性时相反应蛋白，随着损伤、炎症或各类疾病迅速增加。

常规C反应蛋白检测试剂盒的检测范围3mg/L—350mg/L，目前超敏C反应蛋白试剂盒最宽的检测范围是1mg/L—350mg/L，还可以继续优化，让超敏C反应蛋白能检测到更低含量。

发明内容

为解决现有技术的上述问题，本发明提供一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。

本发明的超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库；

（2）将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数据库录入仪器计算软件，通过测试样本的散射值后通过计算可以得到样本的浓度结果。

其中，步骤（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库的操作为：①用处理稀释液将已知浓度的标准品稀释成多个不同浓度；②将多个已知不同浓度的C反应蛋白标准品分别与缓冲液R1试剂混匀制得抗原标准液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原标准液、同时用特定蛋白分析仪测定标准品散色值，从而建立散射值-浓度对应标准数据库；③测定待检样品的散色值：用处理稀释液按测试要求稀释待检样品，将稀释样本与缓冲液R1试剂混匀制得抗原液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原液、同时用特定蛋白分析仪测定待检样品的散色值；④查询C反应蛋白浓度：将③步骤测定的散色值与散射值-浓度数据库对照，查询得知C反应蛋白浓度。

所述处理稀释液试剂包括如下组分：SDS 0.1%、叠氮钠0.12%.

所述缓冲液R1试剂包括如下组分：NaCl 0.9%、Tirs 1.2%、Na₂CO₃0.06%；

所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分：羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.6%、甘氨酸1.1%、碳酸钠0.1%、碳酸氢钠0.1%；

本发明所述超敏C反应蛋白检测试剂，该检测试剂包含处理稀释液、缓冲液R1试剂、乳胶抗体R2试剂，其中，处理稀释液包含SDS 0.1%～0.５％、叠氮钠0.12%～0.4%，试剂R1包含 NaCl 0.9%～2.1%、Tirs 1.2%～2.5%、Na₂CO₃0.06%～0.1%；试剂R2包含羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.2%～0.7%、甘氨酸1.1%～2%、碳酸钠0.1%～0.9%、碳酸氢钠0.1%～0.9%；

优选地，所述处理稀释液试剂包括如下组分：SDS 0.1%、叠氮钠0.12%；

所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分：羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.6%、甘氨酸1.1%、碳酸钠0.1%、碳酸氢钠0.1%。

该检测方法及检测试剂检测速度快，特异性高，可以在特定蛋白分析仪上检测体液，特别是血液中微量生物化学物质，检测范围为0.4mg/L-350mg/L，扩大了超敏C反应蛋白的检测范围。

附图说明

图1是散射值与浓度的曲线图。

具体实施方式

以下提供本发明的一些优选实施例，以助于进一步理解本发明，但本发明的保护范围并不仅限于这些优选实施例。

实施例1

以静脉全血为样本测试超敏C反应蛋白，包括如下步骤：

a 、建立散射值与多个已知标准品浓度的散射值-浓度对应数据库：检测方法为定时散射比浊法，将10微升的多个不同浓度的标准品分别与440微升的处理稀释液混合，制成标准品稀释样本；将标准品稀释样本与400微升的R1混合，再加入40微升的R2，第20秒读取的该时间段最低散射值得A1，第80秒后读取散射值A2，标准品散射值为A2减去A1的差值，根据多个标准品浓度与散射值差值建立标准品散射值-浓度对应数据库（如图1，图1是散射值与浓度曲线图。），仪器的检测光源为670nm。（其中，处理稀释液试剂包括如下组分：SDS 0.1%、叠氮钠0.12%；缓冲液R1试剂包括如下组分：NaCl 0.9%、Tirs 1.2%、Na₂CO₃0.06%；乳胶抗体R2试剂包括如下组分：羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.6%、甘氨酸1.1%、碳酸钠0.1%、碳酸氢钠0.1%。）

b、测定静脉全血的散射值：取静脉全血10微升，加入处理稀释液440微升，摇匀至完全溶血，制成稀释样本；将稀释样本与400微升的R1混合，再加入40微升的R2，第20秒读取的该时间段最低散射值得A1，第80秒后读取散射值A2，样本散射值为A2减去A1的差值为1800。

c、查询样本的浓度：将b 步骤测定的散射值1800与数据库对照，查询得知样本检测浓度为30mg/L。

其中实施案例1中检测样本可以是末梢全血、血清或血浆。

在实践中，取样量为10微升至20微升，取样量不会因为少而产生测试结果一致性偏差大，相比较目前市场上取样量小于5微升的检测方法，其检测结果的一致性将容易受到取样误差影响检测结果。步骤b检测样本，测试时间总共为80秒，检测范围为0.4mg/L-350mg/L，目前市场上超敏C反应检测试剂的检测范围都没有这么宽。

实施例2

准确度验证实施：取具有溯源性的血清高值质控物和低值质控物各一份，用试剂分别进行检测，各检测10次，与质控物靶值进行对照。结果见下表1：

表1

次数	低值质控物（mg/L）	高值质控物（mg/L）
			1	150.656	20.778
2	150.112	20.008
			3	150.897	20.565
4	151.234	20.775
			5	151.189	21.092
6	151.650	20.443
			7	152.011	20.710
8	151.763	21.177
			9	151.881	21.201
10	151.990	20.334
			平均	151.3383	20.7083
靶值	150	20
			准确度	99.11%	96.58%

由表1数据可知，本发明的C反应蛋白检测准确度高。

实施例3

精密度验证实施：取具有溯源性的血清高值质控物和低值质控物各一份，用试剂分别进行检测，各检测10次，计算检测结果的平均值、标准差和变异系数。结果见下表2：

表2

次数	低值质控物（mg/L）	高值质控物（mg/L）
			1	150.151	20.312
2	150.334	21.111
			3	150.367	20.521
4	151.137	21.033
			5	150.456	21.093
6	151.990	20.681
			7	151.778	20.555
8	151.161	21.087
			9	151.155	21.001
10	152.390	21.021
			平均	151.0919	20.8415
标准差	0.7719	0.295
			变异系数	0.51%	1.4%

由表2中变异系数可知，本发名检测C反应蛋白具有较高的精密度。

实施例4

灵敏度验证实施：取具有溯源性的质控物稀释至检测范围下限附件进行测定，重复5次，计算平均值与质控物靶值对照。见表3

表3

次数	低值质控物（mg/L）
		1	0.432
2	0.434
		3	0.407
4	0.437
		5	0.406
平均值	0.423
		靶值	0.4

由表3数据可知，本发明检测C反应蛋白的灵敏度较高。

实施例5

线性验证实施：取具有溯源性的高值标准品，用处理依稀进行稀释，每个点测试两次，取平均值，结果与预期浓度做回归直线，结算回归系数r的平方，结果见表4：

表4

预期浓度	第一次检测	第二次检测	平均值
				0.5	0.511	0.523	0.517
5.0	5.233	5.389	5.311
				50	51.333	51.122	51.228
150	152.377	151.989	152.183
				250	245.445	247.78	246.612
350	358.77	360.26	359.515

由表4数据可知，在0.5 mg/L~350 mg/L的范围内，r²=0.9993，说明本发明检测C反应蛋白的线性好，检测范围宽。

Claims

1.一种超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，步骤（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库的操作为：①用处理稀释液将已知浓度的标准品稀释成多个不同浓度；②将多个已知不同浓度的C反应蛋白标准品分别与缓冲液R1试剂混匀制得抗原标准液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原标准液、同时用特定蛋白分析仪测定标准品散色值，从而建立散射值-浓度对应标准数据库；③测定待检样品的散色值：用处理稀释液按测试要求稀释待检样品，将稀释样本与缓冲液R1试剂混匀制得抗原液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原液、同时用特定蛋白分析仪测定待检样品的散色值；④查询C反应蛋白浓度：将③步骤测定的散色值与散射值-浓度数据库对照，查询得知C反应蛋白浓度。

3.根据权利要求2所述的超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，所述处理稀释液包括如下组分：SDS 0.1%、叠氮钠0.12%。

4.根据权利要求2所述的超敏C反应蛋白检测方法，其特征是：所述缓冲液R1试剂包括如下组分：NaCl 0.9%、Tirs 1.2%、Na₂CO₃0.06%；

5.一种超敏C反应蛋白检测试剂，其特征是，该检测试剂处理稀释液、缓冲液R1试剂、乳胶抗体R2试剂，其中，处理稀释液包含SDS 0.1%～0.５％、叠氮钠0.12%～0.4%，缓冲液R1试剂包含 NaCl 0.9%～2.1%、Tirs 1.2%～2.5%、Na₂CO₃0.06%～0.1%；乳胶抗体R2试剂包含羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.2%～0.7%、甘氨酸1.1%～2%、碳酸钠0.1%～0.9%、碳酸氢钠0.1%～0.9%。

6.根据权利要求5所述的超敏C反应蛋白检测试剂，其特征是，所述处理稀释液包括如下组分：SDS 0.1%、叠氮钠0.12%。

7.根据权利要求5所述的超敏C反应蛋白检测试剂，其特征是：所述缓冲液R1试剂包括如下组分：NaCl 0.9%、Tirs 1.2%、Na₂CO₃0.06%；所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分：羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶0.6%、甘氨酸1.1%、碳酸钠0.1%、碳酸氢钠0.1%。