CN104799083B

CN104799083B - 一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂

Info

Publication number: CN104799083B
Application number: CN201510188472.9A
Authority: CN
Inventors: 谷珉; 白楠; 张小葵; 韩晓弟; 张研琪
Original assignee: Shandong University Weihai
Current assignee: Shandong University Weihai
Priority date: 2015-04-21
Filing date: 2015-04-21
Publication date: 2016-02-24
Anticipated expiration: 2035-04-21
Also published as: CN104799083A

Abstract

本发明的目的是提供一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂及其在大菱鲆饲料中的应用。本发明的肠道黏膜保护剂，包含有谷氨酰胺二肽、L-精氨酸和多糖混合物。本发明的肠道黏膜保护剂作为添加剂应用在大菱鲆饲料中，添加量仅为2％～3％就能缓解豆粕引起的大菱鲆肠道黏膜损伤，促进大菱鲆的生长，提高大菱鲆对豆粕的利用，减少饲料中鱼粉的使用量，从而起到降低饲料成本的作用。

Description

一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂

技术领域

本发明属于水产饲料制备技术领域，具体涉及一种可用于大菱鲆饲料的添加剂，特别涉及一种提高大菱鲆抗豆粕致肠道黏膜损伤的添加剂。

背景技术

近年来，随着我国水产养殖产量的逐年增加，水产饲料的产量远不能满足市场的需求。目前，我国水产饲料的市场空间在1000万吨以上。在提高水产饲料产量的同时还必需考虑如何降低饲料的成本，以获得最大的经济效益。蛋白质是饲料中的主要营养物质，也是决定饲料成本的关键因素。水产养殖动物大多数都要求在饲料中有较高的蛋白质含量，同时还特别依赖动物性蛋白源鱼粉，这就大大提高了水产养殖动物饲料的成本。尤其是鱼粉在世界范围内将永远是一种越来越短缺的资源。因此，人们试图利用价格比较低廉的植物蛋白部分或全部替代动物蛋白，以此配制水产养殖动物的饲料，达到降低成本、提高经济效益的目的。豆粕因具有蛋白含量高、价格适中、供应稳定、氨基酸模式理想等优点，一直作为优质的鱼粉替代蛋白源被广泛地加以研究和利用。然而大量研究表明，在肉食性鱼饲料中豆粕仅能少量替代鱼粉，其中一个重要原因是豆粕替代鱼粉后所引起的鱼类肠道健康水平的下降。研究表明豆粕对鱼类肠道健康所造成的负面影响主要表现为：1)非炎症性肠道组织形态学改变：肠道黏膜皱襞高度降低，杯状细胞数量异常；2)肠道黏膜渗透性增加；3)炎症性肠病的发生。这些变化说明豆粕造成了鱼类肠道黏膜的损伤。

大菱鲆是欧洲名贵的经济鱼种，它适应低水温环境、生长快、抗逆性强、肉质细嫩、胶质丰富、口感独特，深受养殖业者和消费者的喜爱。自1992年引入我国以来，在我国北方沿海发展迅速，成为我国北方海水养殖的一项支柱产业。大菱鲆饲料中的蛋白质需求量达到48％，这要求在饲料中添加较高含量的鱼粉，从而导致大菱鲆饲料价格一直居高不下。因此，用植物蛋白源替代饲料中昂贵的鱼粉，是降低大菱鲆饲料成本的有效途径。在之前的研究中发现，当饲料中豆粕的替代水平高于50％时，就会引起大菱鲆肠道黏膜的损伤。肠道黏膜的损伤会引起大菱鲆消化吸收的下降，免疫水平的下降，同时增加了外来有害物质入侵的可能，极大限制了豆粕在大菱鲆饲料中的应用。因此，有必要提供一种抗豆粕致肠道黏膜损伤的保护剂，从而提高大菱鲆饲料中豆粕的比例。

发明内容

本发明的目的是提供一种肠道黏膜保护剂及其在大菱鲆饲料中的应用，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种肠道黏膜保护剂，包含有谷氨酰胺二肽、L-精氨酸和多糖混合物。

本发明的肠道黏膜保护剂按质量百分比的组成为：谷氨酰胺二肽40％～60％，L-精氨酸30％～40％，多糖混合物10％～20％。

本发明优选的，所述的谷氨酰胺二肽为丙氨酸-谷氨酰胺(Ala-Gln)。

本发明优选的，所述的多糖混合物为甘露寡糖和β-葡聚糖的混合物。

更进一步的，所述的甘露寡糖β-葡聚糖的质量份数比为3-5:1-3份。

上述肠道黏膜保护剂作为添加剂在水产饲料中的应用。

其中所属的水产饲料为大菱鲆饲料，肠道黏膜保护剂的质量百分比添加量优选为2％～3％。

本发明的肠道黏膜保护剂作为添加剂应用在大菱鲆饲料中，添加量仅为2％～3％就能缓解豆粕引起的大菱鲆肠道黏膜损伤，促进大菱鲆的生长，提高大菱鲆对豆粕的利用，减少饲料中鱼粉的使用量，从而起到降低饲料成本的作用。

具体实施方式

本发明所使用的甘露寡糖是低聚糖的一种，低聚糖是由2～10个单糖通过糖苷键连接形成的直链或支链的一类糖。β-葡聚糖的活性结构是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数通过β-1,3结合。

本发明配方中的各种原料既发挥自身的作用，起到效果，又能够通过这种组分和配比的调配互相协同作用，基于大菱鲆肠道营养、肠道免疫和肠道微生态的基础原理，能更加有效修复豆粕引起的肠道黏膜损伤，提高大菱鲆肠道健康和免疫力，从而提高大菱鲆的生长速度。

本发明的肠道黏膜保护剂按质量百分比的组成优选如下：谷氨酰胺二肽40％～60％，L-精氨酸30％～40％，多糖混合物10％～20％。但在本发明思路的基础上，可以在上述数值范围做上下的浮动。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1：一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂，包括如下原料：

谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)50g

L-精氨酸40g

多糖混合物10g

其中多糖混合物中甘露寡糖6g和β-葡聚糖4g。

实施例2：一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂，包括如下原料：

谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)60g

L-精氨酸30g

多糖混合物10g

其中多糖混合物中甘露寡糖6g和β-葡聚糖4g。

实施例3：一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂，包括如下原料：

谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)40g

L-精氨酸40g

多糖混合物20g

其中多糖混合物中甘露寡糖12g和β-葡聚糖8g。

实施例4：一种大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂，包括如下原料：

谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)50g

L-精氨酸35g

多糖混合物15g

其中多糖混合物中甘露寡糖9g和β-葡聚糖6g。

实施例5：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂的应用

以鱼粉、豆粕、小麦粉、鱼油、卵磷脂、大菱鲆维生素预混料、大菱鲆矿物质预混料、氯化胆碱、微晶纤维素为主要原料，配制2种大菱鲆配合饲料(详见表1)：饲料1#为豆粕替代鱼粉的处理组，替代水平为45％；饲料2#在饲料1#的基础上添加20g/kg的上述实施例1的保护剂。

表1.饲料配方

其中大菱鲆维生素预混料(mg/kg)：维生素A，15000IU/kg；维生素D3，1667IU/kg；α-生育酚，83.3；维生素K，16.6；维生素B11，2.5；维生素B2，12.5；泛酸钙，33.3；烟酸，116.7；吡哆醇，8.3；叶酸，4.2；维生素B12，0.04；生物素，0.5；抗坏血酸，83.3；肌醇，250；使用的维生素预混料也可以是水产领域中使用的其它维生素混合物。

大菱鲆矿物质预混料(mg/kg)：七水硫酸镁，1845；五水硫酸铜，9.77；七水硫酸亚铁，119.14；七水硫酸锌，76.17；一水硫酸锰，43.97；六水氯化钴，2.02；二水碘化钠，0.88；亚硒酸钠(97％)，0.44。使用的矿物质预混料也可以是水产领域中使用的其它矿物质预混料。

混合晶体氨基酸(g/kg)：苏氨酸，0.3；赖氨酸，0.4；缬氨酸，0.3；蛋氨酸，0.7；精氨酸，0.6；组氨酸，0.4。也可以使用已有的其它水产领域应用的氨基酸组合物。

选用当年人工孵化的同一批大菱鲆，体重约6.8g左右，作为试验用鱼。经1周的驯养后，挑选出体格健壮、规格一致的大菱鲆进行分组试验。共分为2组，每组设3个平行，每个平行为1个250L的玻璃钢桶，放养30尾试验用大菱鲆，2个组分别投喂1#和2#试验饲料。流水养殖，充气。在为期56天的养殖试验中，海水的溶氧在7.8-8.2mg/L，pH7.5-8.0，盐度28-30，温度14-16℃。每天投喂2次，分别在07:00、19:00，饱食投喂，每日清除残饵及排泄物。

饲养试验结束后，解剖鱼体肠道，去除脂肪组织。用于石蜡包埋切片的样品，在10％福尔马林溶液中固定24h后，转移到70％的酒精溶液中，放置于4℃冰箱中保存。用于抗氧化力检测的肠道样品放于液氮中速冻，-80℃保存。

试验开始和结束时对每个平行的大菱鲆进行称重，计算大菱鲆的增重率。

增重率＝(W_t–W₀)/W₀×100

实验结果用平均值±标准误(mean±S.E.)表示。同一行右上角不同英文上标字母表示有显著性差异(P<0.05)，具体实验结果见表2。

表2.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对生长和饲料利用的影响

由表2可以看出，本发明产品的使用可以提高摄食豆粕替代鱼粉饲料的大菱鲆的生长和饲料利用率。

比较摄食两种饲料大菱鲆肠道黏膜的组织结构差异。肠道石蜡包埋切片的制作按照常规步骤进行。样品在经过乙醇溶液中脱水、二甲苯透明后，用石蜡进行包埋。组织经HE染色后，观察不同处理组大菱鲆肠道黏膜上皮细胞形态结构以及黏膜固有层和黏膜下层中免疫细胞数量、形态结构所发生的变化。组织切片的评估通过光学显微镜进行盲评。实验结果见表3。

表3：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道结构的影响

注：表中数字代表鱼尾数

由表3可以看出本发明产品的使用可以减轻摄食豆粕大菱鲆肠道组织结构的损伤程度。

比较摄食两种饲料的大菱鲆肠道丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的差异，从而反应本发明产品对摄食豆粕大菱鲆抗氧化力的影响。MDA采用硫代巴比妥酸比色法测定；SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定。MDA、SOD和GPx试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，以上操作严格按说明书进行。实验结果见表4。

实验结果用平均值±标准误(mean±S.E.)表示。同一行右上角不同英文上标字母表示有显著性差异(P<0.05)，具体实验结果见表4。

表4.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道抗氧化力的影响

由表4可以看出，本发明产品显著降低了摄食豆粕大菱鲆肠道的MDA含量，显著提高了肠道SOD和GPx活力。由此可见，本发明产品能够提高摄食豆粕大菱鲆肠道的抗氧化力。

实施例6：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂的应用

以鱼粉、豆粕、小麦粉、鱼油、卵磷脂、大菱鲆维生素预混料、大菱鲆矿物质预混料、氯化胆碱、微晶纤维素为主要原料，配制2种大菱鲆配合饲料(详见表1)：饲料1#为豆粕替代鱼粉的处理组，替代水平为45％；饲料2#在饲料1#的基础上添加20g/kg的上述实施例2的保护剂。饲料基础配方同实施例5。

大菱鲆的饲养管理、样品取样和计算方法同实施例5。

表5.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对生长和饲料利用的影响

由表5可以看出，本发明产品的使用可以提高摄食豆粕替代鱼粉饲料的大菱鲆的生长和饲料利用率。

表6：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道结构的影响

注：表中数字代表鱼尾数

由表6可以看出本发明产品的使用可以减轻摄食豆粕大菱鲆肠道组织结构的损伤程度。

表7.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道抗氧化力的影响

由表7可以看出，本发明产品显著降低了摄食豆粕大菱鲆肠道的MDA含量，显著提高了肠道SOD和GPx活力。由此可见，本发明产品能够提高摄食豆粕大菱鲆肠道的抗氧化力。

实施例7：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂的应用

以鱼粉、豆粕、小麦粉、鱼油、卵磷脂、大菱鲆维生素预混料、大菱鲆矿物质预混料、氯化胆碱、微晶纤维素为主要原料，配制2种大菱鲆配合饲料(详见表1)：饲料1#为豆粕替代鱼粉的处理组，替代水平为45％；饲料2#在饲料1#的基础上添加20g/kg的上述实施例3的保护剂。饲料基础配方同实施例5。

大菱鲆的饲养管理、样品取样和计算方法同实施例5。

表8.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对生长和饲料利用的影响

由表8可以看出，本发明产品的使用可以提高摄食豆粕替代鱼粉饲料的大菱鲆的生长和饲料利用率。

表9：大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道结构的影响

注：表中数字代表鱼尾数

由表9可以看出本发明产品的使用可以减轻摄食豆粕大菱鲆肠道组织结构的损伤程度。

表10.大菱鲆用抗豆粕损伤肠道黏膜保护剂对肠道抗氧化力的影响

由表10可以看出，本发明产品显著降低了摄食豆粕大菱鲆肠道的MDA含量，显著提高了肠道SOD和GPx活力。由此可见，本发明产品能够提高摄食豆粕大菱鲆肠道的抗氧化力。

将本发明的肠道保护剂添加到豆粕替代鱼粉的大菱鲆饲料中，添加量为1％-3％就可以减轻豆粕对大菱鲆肠道黏膜的损伤，提高大菱鲆的生长和肠道抗氧化力。

Claims

1.一种肠道黏膜保护剂，其特征在于，所述的保护剂中组分质量百分比含量如下：谷氨酰胺二肽40％～60％，L-精氨酸30％～40％，多糖混合物10％～20％；所述的多糖混合物为甘露寡糖和β-葡聚糖的混合物。

2.如权利要求1所述的肠道黏膜保护剂，其特征在于，所述的谷氨酰胺二肽为丙氨酸-谷氨酰胺。

3.如权利要求1所述的肠道黏膜保护剂，其特征在于，所述的甘露寡糖与β-葡聚糖的质量份数比为3-5:1-3。

4.如权利要求1所述的肠道黏膜保护剂作为添加剂在大菱鲆饲料中的应用。

5.一种大菱鲆饲料，其特征在于，所述的大菱鲆饲料中添加权利要求1所述的肠道黏膜保护剂。

6.如权利要求5所述的大菱鲆饲料，其特征在于，所述的肠道黏膜保护剂的质量百分比添加量为2％～3％。

7.如权利要求5所述的大菱鲆饲料，其特征在于，所述的大菱鲆饲料中豆粕的含量为34～42％。