CN104797591A

CN104797591A - 氟化环氧酮系化合物及其作为蛋白酶体抑制剂的用途

Info

Publication number: CN104797591A
Application number: CN201380053443.0A
Authority: CN
Inventors: A·斯拉斯; P·达夫
Original assignee: Fu Luoyinuo Drugmaker
Current assignee: Terry Ulm treatment company
Priority date: 2012-08-14
Filing date: 2013-08-13
Publication date: 2015-07-22
Also published as: US20150203534A1; AU2013302269A1; EP2885314A4; WO2014026282A1; EP2885314A1; US20160347792A1; HK1211947A1; CA2881999A1; US9441012B2; JP2015526433A

Abstract

本申请涉及新颖的氟化环氧酮系化合物、包含这些化合物的组合物以及它们的用途特别是用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的用途。特别地，本申请包括式I的化合物及其组合物和用途：

Description

氟化环氧酮系化合物及其作为蛋白酶体抑制剂的用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年8月14日提交的共同待审的第61/682,836号美国临时申请的优先权，其内容以其整体援引加入本文。

发明领域

本发明涉及新颖的氟化环氧酮系化合物、其制备方法、包含其的组合物以及其在治疗中的用途。更特别地，本申请涉及用于治疗由蛋白酶体抑制介导的或与蛋白酶体抑制相关的疾病、病症或病况。

发明背景

多催化蛋白酶体是在整个植物界和动物界的细胞中发现的普遍存在的蛋白酶，其负责细胞内蛋白的泛素依赖性降解。在所有细胞(即在细胞质和细胞核)中发现了数千的副本，其构成了所有细胞蛋白内含物的至多3％。蛋白酶体发挥多种细胞内作用，例如包括受损蛋白的降解和影响炎性过程、病毒脱落、细胞周期、生长和分化的多种调节蛋白的调整[Cell1994，79，13-21；Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2005，6，79-87；Semin.Oncol.2004，31，3-9；Chem.Biol.2001，8，739-758]。

也称为泛素-蛋白酶体系统(UPS)的泛素-蛋白酶体途径(UPP)调节对靶标、时间和空间有特异性的细胞内蛋白的降解。在大部分哺乳动物细胞中，该途径在识别和降解错误折叠和异常的蛋白中发挥核心作用[Nature 2000，404，770-774]。此类过程在维持不同细胞过程的生物体内平衡和调节方面是非常重要的，所述不同细胞过程例如但不限于细胞分化、细胞周期控制、抗原加工和激素代谢[EMBO J.1998，17，7151-7160；Chem.Biol.2001，8，739-758]。在该途径中，26S蛋白酶体是主要的蛋白水解组分，其在所有真核细胞中发现并由圆柱形多催化蛋白酶复合物(MPC)20S蛋白酶体和两个调节颗粒(RP)19S蛋白酶体组成。位于20S蛋白酶体各端的19S蛋白酶体由18个亚基组成，并且控制蛋白底物到20S蛋白酶体内腔中的识别、重叠和易位[Annu.Rev.Biochem.1999，68，1015-1068]。

26S蛋白酶体的X-射线结晶学揭示了20S蛋白酶体由布置在四个堆叠环中的28个蛋白亚基组成，并且各环由按照α1-7β1-7化学计量的七个α-型和β-型亚基组成。两个外部腔室由α亚基形成，而包含蛋白水解活性位点的中心腔室由β亚基组成。14个β亚基中的三个亚基分别负责谷氨酰后肽水解活性(PGPH，归因于β1)、胰蛋白酶样活性(T-L，β2)和糜蛋白酶样活性(CT-L，β5)，并且这三种活性亚基均水解蛋白底物与N-端苏氨酸(Oγ-Thr1)的亲水γ-羟基的酰胺键。

对蛋白酶体和泛素系统的机制和功能的不断关注揭示了，难以发现不受降解系统的直接或间接影响的任何方面的细胞代谢网络。这包括例如细胞周期、新合成的蛋白的“品质控制”(ERAD：内质网相关性蛋白降解)、转录因子调节、基因表达、细胞分化和免疫反应，以及病理学过程，例如癌症、神经变性疾病、脂褐质形成、糖尿病、动脉粥样硬化、炎性过程和白内障形成，还包括老化过程和为了维持细胞体内平衡而进行的氧化蛋白的降解。但这似乎仅是总体的一小方面。能够改变蛋白水解的速率或特异性(将其配置成用于高度专门的任务)或通过泛素介导的降解而精确调节细胞蛋白的半衰期的各种调节蛋白使蛋白酶体和泛素-蛋白酶体系统成形为在细菌界、植物界和动物界这三界中的细胞功能的有用部分。

癌症是全世界的主要死因。尽管有大量的努力来寻找治疗癌症的新方法，但主要治疗选择仍为单独的外科手术、化学疗法和放射疗法或其组合。然而，外科手术和放射疗法一般仅用于清楚界定的癌症类型，并且对于治疗患有散播性疾病的患者具有有限的用途。化学疗法是可用于治疗患有转移性癌症或诸如白血病的弥散性癌症的方法。然而，尽管化学疗法可以提供治疗益处，但其通常不能导致疾病的治愈，因为患者的癌细胞变得对化学治疗剂有抗性。因此，存在对额外的治疗癌症的化学疗法的需求。

已知蛋白酶体抑制作为癌症治疗方法的构思。新药抑制剂硼替佐米是有效的选择性且可逆性蛋白酶体抑制剂，其靶向26S蛋白酶体复合物并抑制其功能。通过由26S蛋白酶的19S调节亚基识别聚泛素化蛋白来进行错误重叠或受损的细胞的蛋白酶体降解，并且随后水解成小的多肽。

用于治疗复发性/难治性多发性骨髓瘤(MM)和外膜细胞淋巴瘤的硼替佐米的成功开发已表明蛋白酶体抑制是有用的治疗策略[Nat.Rev.Cancer 2004，4，349-360；Bioorg.Med.Chem.Lett.1998，8，333-338；J.Clin.Oncol.2002，20，4420-4427；N.Engl.J.Med.2003，348，2609-2617；N.Engl.J.Med.2005，352，2487-2498；J.Clin.Oncol.2007，25，3892-3901]。硼替佐米主要抑制糜蛋白酶的蛋白酶体活性，而不改变胰蛋白酶或半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶样蛋白酶体活性。硼替佐米通过靶向下述a)至e)而对多发性骨髓瘤生物学具有多效性作用：a)细胞周期调节蛋白；b)经由调整浆细胞分化因子X-盒结合蛋白-1(XBP-1)的转录活性的未折叠蛋白酶反应(UPR)途径；c)p53-介导的细胞凋亡/MDM2；d)DNA修复机制；以及e)经由固有细胞死亡级联(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9介导的)和外源细胞死亡级联(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3介导的)的经典应力反应途径。具体地，硼替佐米活化c-Jun N-端激酶(JNK)，其触发线粒体细胞凋亡信号转导：从线粒体向细胞溶质释放细胞色素-c(cyto-c)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Smac)的第二线粒体活化剂，然后活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3。

尽管硼替佐米已表现出临床成功，但大部分患者复发或是难治的[J.Clin.Oncol.2005，23，676-684；J.Clin.Oncol.2005，23，667-675]。另外，已经报道了包括疼痛性周围神经病变和血小板减少症在内的剂量限制性毒性(DLT)[J.Clin.Oncol.2006，24，3113-3120；Blood 2005，106，3777-3784]。迄今为止，不清楚这些毒性是否可归因于脱靶作用，因为硼替佐米抑制了诸如丝氨酸蛋白酶的其他酶。

最近报道的称为卡非佐米(也称为PR-171)的微生物天然产物环氧霉素的结构类似物被初步确认了其抗肿瘤活性，并随后表现为蛋白酶体的有效抑制剂[Cancer Res.2007，67，6383-6391；Curr.Opin.Drug Discovery2008，11，616-625；J.Am.Chem.Soc.2000，122，1237-1238；J.Antibiot.(Tokyo)1992，45，1746-1752；Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，9，2283-2288；Cancer Res.1999，59，2798-2801；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1999，96，10403-10408]。卡非佐米选择性抑制20S蛋白酶体的CT-L活性，并且与其他蛋白酶类型的交叉反应性最小。

临床前研究和I期临床研究表明采用卡非佐米的连续每日给药方案是完全耐受的，并促进血液学恶性肿瘤的抗肿瘤活性，包括先前用硼替佐米治疗的患者[Blood 2007，110，3281-3290；Br.J.Hamaetol.2007，136，814-828；Blood 2007，110，409；Blood 2007，110，411]。目前在多发性骨髓瘤、非霍金奇淋巴瘤和实体瘤的I期和II期临床试验中评价卡非佐米。

已知蛋白酶体抑制剂治疗的临床反应需要频繁给药(例如每周两次)和长久治疗。例如，硼替佐米和卡非佐米每两周或以更频繁的给药方案来静脉给药(iv)，并且治疗可以延长超过6个月。因此，期望允许给药灵活并改善患者便利性的口服生物可用的蛋白酶体抑制剂的开发。

基于蛋白酶体抑制剂的治疗可用于超出临床肿瘤学的其他疾病。除了其在肿瘤治疗中的作用，蛋白酶体与大部分I型抗原的产生相关[Nature 1992，357，375-379]。因此，蛋白酶体的过度抑制可能增加病毒感染的机会。例如，报道了HIV-1病毒的复制可受到蛋白酶体的降解作用的限制，并且报道了蛋白酶体抑制剂MG-132或乳胞素增强了病毒复制的能力[J.Virol.1998，72，3845-3850]。相反，许多最近的出版物已经表明泛素-蛋白酶体途径在对逆转录病毒的组装、成熟和出芽的加工中具有有用的作用[Proc.Natl.Acad.Soc.USA 2000，97，13069-13074；Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2000，97，13057-13062；Proc.Natl.Acad.Sci.USA2000，97，13063-13068]。蛋白酶体抑制还干扰HIV-1和HIV-2的gag多多蛋白加工、释放和成熟，并且泛素化是逆转录病毒释放所需的。因此，蛋白酶体抑制剂可用于治疗HIV和其他病毒感染。

蛋白酶体抑制还具有通过多种途径治疗炎性疾病和自身免疫性疾病的临床潜能，所述多种途径包括MHC-介导的抗原呈递、细胞因子和细胞周期调节以及细胞凋亡[J.Rheumatol.2005，32，1192-119]。在炎性关节炎中，表明NF-κB调节在类风湿关节炎(RA)发病机理中所涉及的多个关键细胞因子[Arthritis Rheum.2004，50，2381-2386；Arthritis Rheum.2004，50，3541-3548]。在肽聚糖(peptoglycan)/多聚糖诱导的炎性关节炎模型中，蛋白酶体抑制剂通过抑制NF-κB活化、降低细胞粘附分子和IL-6的表达来改善关节炎分数。此外，蛋白酶体抑制可以通过控制血管生成来调节炎性关节炎的产生[J.Mol.Med.2003，81，235-245]。

银屑病是原型T细胞介导的疾病之一，并且其产生与NF-κB活化相关。已经报道蛋白酶体抑制剂的给药降低了移植到小鼠上的人类皮肤外植体中的银屑病病灶的尺寸。治疗还导致超抗原介导的T-细胞活化降低、细胞粘附分子表达减弱和T-细胞活化标记物(其在疾病过程中显著升高)的表达降低[J.Clin.Invest.2002，109，671-679]。

此外，其他研究表明硼替佐米的口服蛋白酶体抑制显著地限制了全身炎症，降低了NF-κB活化，降低了细胞粘附分子表达，抑制了氮氧化物合成酶活性，减弱了IL-6循环水平，降低了在动物关节中观察到的关节炎指数和肿胀，并且与载剂治疗的动物相比改善了关节的组织学外观[Carcinogenesis 2000，2，505-515]。

还已经证明蛋白酶体抑制、过敏症和哮喘之间的联系。2型协助T细胞(Th2)的异常活化导致哮喘症状和过敏症状[Nat.Immunol.2002，3，715-720]。E3泛素连接酶Itch在维持通过体外和体内Th2细胞介导的免疫耐受性方面发挥有用的作用。在过敏模型中，Itch缺乏小鼠不能阻止气道炎症的发展[J.Clin.Invest.2006，116，1117-1126]。与这些发现相符，在过敏原诱导的哮喘的啮齿动物模型中观察到有用的治疗作用[J.Allergy Clin.Immunol.1999，104，294-300]。

其他炎性疾病和自身免疫性疾病已与泛素-蛋白酶体系统(UPS)相关，例如血清反应阴性脊椎关节病(SpA)，其是特征为(但不限于)轴关节炎症的一组疾病。强直性脊柱炎(AS)是原型SpA。大部分患有AS的患者携带有MHC I类HLA-B27基因，因此许多研究工作涉及对该基因在疾病发病机理中的作用的了解。关注也集中在确定由HLA-B27呈递的肽的起源和性质，以及错误折叠的HLA-B27的细胞表面表达，其中已知UPS在这两个领域挥发作用。

UPS涉及细胞凋亡的调节或诱导。细胞凋亡涉及实验模型和临床系统性红斑狼疮(SLE)。在成熟的活化淋巴球中，蛋白酶体抑制剂乳胞素以剂量依赖性方式诱导DNA断裂和细胞凋亡，表明蛋白酶体抑制了这些细胞的细胞凋亡。自身抗原的改变的清除率被认为由免疫系统靶向并发展出自身免疫性。已经报道了UPS在调节Ku70和其他自身抗原的水平方面的参与[J.Biol.Chem.1998，273，31068-31074；J.Cell.Sci.1994，107(Pt 11)，3223-3233；Exp.Cell.Res.2006，312，488-499]。

蛋白酶体抑制已经与心脏病相关。不断出现证据来支持下述假设，即，蛋白酶体功能不足在心脏病的大的亚类中代表了共同的病理学现象，危害心肌细胞的蛋白品质控制，由此作为促进该亚类的心脏病进展成充血性心力衰竭的主要致病因子。通过对UPS在心脏蛋白质病中的研究代表了上述方面，所述研究利用表达UPS蛋白水解功能的荧光报告分子的转基因小鼠模型。

此外，蛋白酶体的药理学抑制已经在实验上开发为干涉一些形式的心脏病的潜在治疗策略，所述心脏病例如压力超负荷型心肌肥厚(pressure-overload cardiac hypertrophy)、病毒性心肌炎和心肌缺血性损伤[Biochimica et Biophysica Acta-Gene Regulatory Mechanisms，1799(9)，2010，597-668]。此外，对蛋白酶体抑制剂在心血管疾病中的作用的初步报告表明蛋白酶体抑制可以是降低动脉粥样化形成(artherogenesis)的进展阶段的增殖现象的有用的治疗策略[Cardiovasc.Res.2004，61，11-21]。与内皮氮氧化物合成酶(eNOS)表达的增加相关的改善体外内皮-依赖性血管舒张的最近数据表明了蛋白酶体抑制在动脉粥样硬化的初期阶段中的治疗潜能[FASEB 2004，18，272-279]。

已证明蛋白酶体抑制剂发挥实质性抗炎作用，其归因于因子NF-κB的活性降低[Cardiovasc.Res.2004，61，11-21]。因为糖尿病患者中的心血管事件的发病机理涉及炎症，所以使用蛋白酶体抑制剂可以是有用的疗法。除了用于炎性在糖尿病相关性心血管事件中的作用的流行病学证据之外，患者对心脏保护型药物方案的临床研究已揭示了许多药物疗法至少部分地通过抗炎活性来介导它们的益处。这是针对改善脂肪组织生理学和胰岛素敏感性的一类药物的情况，即，过氧化物酶体增殖物活化的受体-γ(PPARγ)激动剂[Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，717-726]。例如，降低炎症的PPARγ激动剂罗格列酮可以防止在患有无症状颈动脉狭窄的糖尿病患者中向不稳定表型的斑块进展，所述斑块进展使患者谋求经历用于颅外高等级(＞70％)内颈动脉狭窄的颈动脉内膜切除手术[Diabetes 2006，55，622-632]。

格列酮类的抗炎作用似乎部分通过它们对血糖过多的优异作用而介导，但还存在下述证据，即，格列酮类可以经由诸如NF-κB的转录因子而直接调整炎症[Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，717-726]。与此相符，最近的数据已表明罗格列酮对糖尿病病灶中泛素-蛋白酶体活性的抑制作用[Diabetes 2006，55，622-632]。在血糖水平的相同水平下，用罗格列酮治疗的糖尿病患者具有最低水平的与最高含量的斑块间质胶原相关的泛素以及蛋白酶体20S活性、斑块炎性细胞、细胞因子、氧化应激和MMP-9。与被分配给安慰剂的患者相比，被分配给罗格列酮的患者具有更少的向不稳定表型的斑块进展。

对于阿司匹林和他汀类药物，即，在治疗心血管疾病中最成功的药物中的两种，已经描述了蛋白酶体抑制作用[Mol.Pharmacol.2002，62，1515-1521]。

调节蛋白的蛋白酶体降解的药物可以是治疗胰岛素抗性和2型糖尿病的有用的药剂，并且靶向UPS活性的药理学疗法可用于治疗与糖尿病相关的血管生物学病症[Cardiovascular Diabetology 2007，6：35，1-9]。

泛素-蛋白酶体系统被认为降解主要的骨骼肌收缩蛋白并在肌萎缩中发挥主要作用。在泛素化、脱泛素化和蛋白水解机构中的不同的多个事件负责活化系统及随后的肌萎缩。然而，其他蛋白水解酶在UPS的上游(可能是m-钙蛋白酶、组织蛋白酶L和/或半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)和下游(三肽基-肽酶II和氨基-肽酶)用于将肌纤维蛋白完全分解成游离氨基酸。最近研究已经确认了肌萎缩所必要的少数蛋白，即，MAFbx(肌萎缩F-盒蛋白，还称为atrogin-1)蛋白和MuRF-1(肌肉特异性RING泛素-蛋白连接酶)蛋白。它们的信号转导途径的特征是导向可用于阻断或部分防止人类患者的肌萎缩的新的药理学方法[Essays Biochem.2005，41，173-86]。

UPS还与人类肥胖的产生相关。例如，表明在血浆泛素、26S蛋白酶体水平和肥胖之间可能存在关联。测定并在统计学上分析了体重指数(BMI)、血浆泛素水平和26S蛋白酶体活性水平。体重不足、正常体重和超重的群体之间的免疫球蛋白的比较证明了与正常对照相比，血浆泛素在肥胖个体中显著降低，并且发现血浆泛素水平与BMI反相关。此外，在红细胞中20S蛋白酶体水平与BMI之间存在反相关，而发现26S蛋白酶体活性定量依赖于红细胞中的S5a。此外，与正常对照相比，免疫球蛋白在超重个体中显著降低[Metabolism 2009，58(11)，1643-8]。

进行了多种临床前和早期临床研究以检验蛋白酶体抑制剂对治疗包括阿尔茨海默病(AD)和帕金森氏病(PD)在内的神经变性病症的潜在有用性。这些CNS病症特征在于选择性损失在脑部的特定且不同的区域中的神经元，并且结果通常是运动系统、感官系统或认知系统的破坏，导致患者的重度残疾。许多神经变性疾病的病理学特征是在受感染的脑部区域中存在不同的泛素-阳性的细胞内或细胞外的包涵体。通常，这些包涵物由不同的、未折叠的、未泛素化的多肽构成，所述多肽不能由26S蛋白酶体靶向并降解[J.Pathol.1988，155，9-15；Neuron 2001，29，15-32]。它们的表观稳定性可能部分归因于与年龄增加相关的26S蛋白酶体活性水平降低[Ann.N.Y.Acad.Sci.2001，928，54-64]。

目前已知与UPS相关的蛋白在家族形式的神经变性疾病中发挥直接或间接的作用，尤其是PD。蛋白的UPS介导的翻译后修饰和降解在大部分细胞过程中有用，所述细胞过程例如细胞循环、DNA修复、细胞信号转导、基因转录和细胞凋亡。在历史上，认为UPS是对真核生物体中的时空降解来选择蛋白的主要途径[Cell 2004，116，181-190；Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003，4，192-201]。与神经变性病症相关的包涵体的关键成分是错误折叠的蛋白。蛋白错误折叠及后续的功能损失的主要原因是蛋白的错义突变、修饰或转移后损伤，或氨基酸重复的扩展，如在诸如亨廷顿氏病(HD)的多聚谷氨酰胺(polyQ)病症中所观察到的。

在所有神经变性疾病中，PD是与经由UPS的异常蛋白加工最相关的。实际上，在与遗传型PD相关的已知蛋白中，Parkin和UCH-L1是UPS的组分，而通过系统降解修饰的和/或突变的α-突触核蛋白和DJ-1[Nature 1998，392，605-608；Nature 1998，395，451-452；J.Biol.Chem.2003，278，36588-36595]。

进行了多种临床前和早期临床研究以检验蛋白酶体抑制剂对治疗下述疾病的潜在有用性：阿尔茨海默病[J.Neurochem.1999，72，255-261]、肌萎缩性脊髓侧索硬化症[J.Neurol.Sci.1996，139，15-20]、自身免疫性甲状腺疾病[Tissue Antigens.1997，50，153-163]、恶病质[N.Engl.J.Med.1996，335，1897-1905；Am.J.Physiol.1999，277，332-341]、克罗恩氏病[J.Pharmacol.Exp.Ther.1997，282，1615-1622]、乙型肝炎[Oncogene，1998，16，2051-2063]、炎性肠疾病[Inflamm.Bowel Dis.1996，2，133-147]、败血症[Ann.Surg.1997，225，307-316]、系统性红斑狼疮[J.Exp.Med.1996，10，1313-1318]以及移植排斥和相关免疫学[Drug Discov.Today 1999，4，63-70；Transplantation 2001，72，196-202]。

泛素-蛋白酶体系统还认为在眼部疾病的发病机理中发挥作用。眼部组织中细胞毒性异常蛋白的积聚在病因学上与许多年龄相关性眼病如视网膜退化、白内障和某些类型的青光眼相关。UPP的年龄诱导的或应激诱导的损伤或负担过重似乎归因于眼部组织中异常蛋白的积聚。通过这些过程的调节子的条件性UPP-依赖性降解来调节细胞周期和信号转导。UPP的损伤或负担过重可能会导致细胞周期对照和信号转导的调节异常。不适当的细胞周期和信号转导的结果诱导眼睛发育、伤口愈合、血管生成或炎性反应的缺陷。增强或保存UPP功能或者降低其负担的方法可以是预防年龄相关性眼疾病的有用策略[Pro.Mol.Biol.& Trans.Sc.，Vol.109，2012，347-396]。

对亚基选择性抑制剂的探索主要通过筛选天然产物[Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，9，3335-3340]、合理设计[Chem.Biol.2009，16，1278-1289]或化合物库建设[Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2001，98，2967-2972；Org.Biomol.Chem.2007，5，1416-1426]来进行。注意到在这些研究中，氟官能团在蛋白酶体抑制剂中的作用是相对未知的[Bioorg.Med.Chem.Lett.2009，19，83-86]。

最近报道了epoxomicin类似物PR-047是表现出中度至不良的代谢性的口服生物可用的候选药物[J.Med.Chem.2009，52，3028-3038]。尽管不希望受理论限制，但认为该不良代谢性归因于丝氨酸侧链中的甲氧基(OMe)经历脱甲基化而形成O-去甲基代谢物。因此，亟需发现阻断这种脱甲基化途径以得到具有有用的临床性质的化合物。

发明概述

制备了一类新颖的式I的卤化环氧酮系蛋白酶体抑制剂，并发现其可用于治疗癌症及其他蛋白酶体介导或与蛋白酶体相关的病症。

因此，本发明包括式I的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物或前药：

其中：

R¹选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-10卤代烷基、C_1-10氰基烷基、C_1-10烷氧基、C_2-10烯氧基、C_2-10炔氧基、C_3-10环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚烯基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚炔基-O-C_1-6卤代烷基、C_1-6亚烷基-C_3-8环烷基、C_1-6亚烷基-杂环烷基、C_1-6亚烷基-芳基、C_1-6亚烷基-杂芳基、C(O)R⁷、OC(O)R⁷、C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-O-R⁷、C_1-6亚烷基-C(O)R⁷、C_1-6亚烷基-O-C(O)R⁷、C_1-6亚烷基-C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-O-C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-C(O)NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-S-R⁷、C_1-6亚烷基-S(O)R⁷、C_1-6亚烷基-SO₂R⁷、C_1-6亚烷基-SO₂NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷SO₂R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷SO₂NR⁷R⁸、C(O)NR⁷R⁸以及C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)OR⁸，其中任何环状基团任选地被C_1-4烷基取代和/或任选地与另一环状基团稠合；

X不存在或选自O、NH、NC_1-6烷基、S、S(O)、SO₂、C(O)、C_1-6亚烷基、C_2-6亚烯基、C_2-6亚炔基、C_1-6卤代亚烷基、C_3-8亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基和亚杂芳基，或者X是O、NH、NC_1-6烷基、S、S(O)、SO₂、C_1-6亚烷基、C_2-6亚烯基、C_2-6亚炔基、C_1-6卤代亚烷基、C_3-8亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基中的两个或三个以线性方式连接在一起的组合，条件是O、NH、NC_1-6烷基、S、S(O)和SO₂中的两个或三个彼此不直接连接；

R²、R³和R⁴各自独立地选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-10卤代烷基、C_1-10氰基烷基、C_1-10烷氧基、C_2-10烯氧基、C_2-10炔氧基、C_3-10环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚烯基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚炔基-O-C_1-6卤代烷基、C_1-6亚烷基-C_3-8环烷基、C_1-6亚烷基-杂环烷基、C_1-6亚烷基-芳基、C_1-6亚烷基-杂芳基、C(O)R⁷、OC(O)R⁷、C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-O-R⁷、C_1-6亚烷基-C(O)R⁷、C_1-6亚烷基-O-C(O)R⁷、C_1-6亚烷基-C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-O-C(O)OR⁷、C_1-6亚烷基-NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-C(O)NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-S-R⁷、C_1-6亚烷基-S(O)R⁷、C_1-6亚烷基-SO₂R⁷、C_1-6亚烷基-SO₂NR⁷R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷SO₂R⁸、C_1-6亚烷基-NR⁷SO₂NR⁷R⁸、C(O)NR⁷R⁸以及C_1-6亚烷基-NR⁷C(O)OR⁸，其中任何环状基团任选地与另一个5-至7-元环状基团稠合，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是C_1-6-亚烷基-O-C_1-6卤代烷基，并且其中R²、R³和R⁴任选地被一个或多个独立选择的R⁶基团取代；

R⁵选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_1-6亚烷基-C_3-8环烷基、芳基、杂芳基以及杂环烷基；

R⁶选自C_1-6烷基、OH、卤素、O-(C_2-3亚烷基)-O、C_1-6烷氧基、芳氧基、-NH-C_1-6烷基、-N(C_1-6烷基)₂、C_1-6亚烷基-N(C_1-6烷基)₂、C_1-6亚烷基-NH-C_1-6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基以及杂芳基；和

R⁷和R⁸各自独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-10环烷基、C_1-6亚烷基-C_3-10环烷基、杂环烷基、芳基、C_1-6亚烷基-芳基、C_1-6亚烷基-杂环烷基、杂芳基以及C_1-6亚烷基-杂芳基，其中任何环状基团任选地与另一环状基团稠合。

本申请还包括包含一种或多种本申请的化合物以及载体的组合物。在一个实施方案中，所述组合物是包含一种或多种本申请的化合物以及药学可接受的载体的药物组合物。

已证明本申请的化合物为蛋白酶体活性的抑制剂。因此，本申请的化合物用于治疗由蛋白酶体抑制介导的或与蛋白酶体抑制相关的疾病、病症或病况。因此，本申请还包括治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物。

在另一实施方案中，本申请的化合物用作药物。因此，本申请还包括用作药物的本申请的化合物。

本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的药物中的用途。本申请还包括用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的一种或多种本申请的化合物。

在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是肿瘤性病症。在一个实施方案中，所述治疗以在需要此类治疗的个体中有效地减轻所述肿瘤性病症的至少一种症状(例如细胞增殖降低或肿瘤质量降低)的量进行。

在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是癌症。

在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是与直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性相关的疾病、病症或病况。在另一实施方案中，所述直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性是细胞的增殖活性。

本申请还包括抑制细胞的增殖活性的方法，其包括向所述细胞给药有效量的一种或多种本申请的化合物。

在另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是癌症，并且给药一种或多种本申请的化合物与一种或多种的额外癌症治疗的组合。在另一实施方案中，所述额外的癌症治疗选自放射疗法、化学疗法、靶向疗法如抗体疗法以及小分子疗法如酪氨酸-激酶抑制剂、免疫疗法、激素疗法和抗血管生成疗法。

在另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自病毒感染、炎性疾病、自身免疫性疾病、心脏病、年龄相关性眼病和神经变性疾病。

本申请还提供制备式I的化合物的方法。更详细地讨论了一般和具体的方法，并在以下实施例中示出。

在一个本申请的实施方案中，式I的化合物包含至少一个氟原子。当合成含氟的化合物时所要考虑的因素包括(a)氟原子(范德华半径为)相对于氢(范德华半径为)的相对小的尺寸；(b)氟的高吸电子特性；(c)C-F键相对于C-H键的更大的稳定性；以及(d)氟相对于氢的更大的亲脂性。向分子中引入氟原子可以由于其电负性而改变化合物的物理化学性质。

向分子中引入卤原子也提供了将该分子用于放射性同位素标记应用的机会。例如，¹⁸F用作正电子发射断层显像术(PET)的灵敏技术中的放射性同位素标记示踪剂。因此，本申请还包括出于诊断和成像目的来使用式I的化合物的方法。

基于以下详细描述，本申请的其他特征和优势会变得更为清楚。然而，应理解尽管这些详细描述和具体实例表明了本申请的实施方案，但仅以例示方式给出，因为基于该详细描述，本领域技术人员会清楚在本申请的主旨和范围内的各种变化和修改。

附图简述

现参考附图更详细地描述本申请，其中：

图1示出与硼替佐米相比，本发明的代表性化合物(实施例1的化合物)对纯化蛋白酶体的酶活性的作用。来自古细菌嗜酸热原体(Thermoplasma acidophilum)的纯化β蛋白酶体亚基(A)或来自人骨髓瘤细胞系LP1的全细胞溶解产物(B)。

图2示出当在低分级效应(fractional effect)水平下以固定比例组合72小时的实施例1的化合物与标准抗骨髓瘤疗法的组合。使用MTS测定和合用指数(combination index，CI)分析来评价协同，其中CI＜1表示两种药物之间的协同，CI＝1表示加和，而CI＞1表示拮抗。

图3示出实施例1的化合物对来自患有多发性骨髓瘤(A，C)的患者或来自患有浆细胞白血病(B)的患者的外周血液的样品的细胞活性的作用。

发明详述

I.定义

除非另外指出，该部分及其他部分所述的定义和实施方案旨在适用于本文描述为本领域技术人员认为其合适的本申请的所有实施方案和方面。除非在本申请中另外规定或除非本领域技术人员会另有理解，本申请中使用的术语通常遵循“Nomenclature of Organic Chemistry”(Pergamon Press，1979)的A、B、C、D、E、F和H部分所规定的实例和规则。任选地，使用化学命名软件：ACD/ChemSketch，Version 5.09/2001年9月，Advanced Chemistry Development，Inc.，Toronto，Canada来产生化合物的名称。

本文所用的术语“本发明的化合物”或“本申请的化合物”等是指式I的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。

如本申请所用，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数参照物，除非内容明显另有所指。以上例如，包括“化合物”的实施方案应理解为表示具有一种化合物、或两种或更多种的额外化合物的某些方面。

在包括“额外”或“第二”组分如额外或第二化合物的实施方案中，本文所用的第二组分是与其他组分或第一组分是在化学方面不同的。“第三”组分与其他、第一和第二组分不同，并且其他列举的或“额外的”组分也同样不同。

在理解本申请的范围时，如本文所用，术语“包括”及其衍生物旨在是开放式术语，指定了所规定的特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的存在，但不排除其他未规定的特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的存在。前述还适用于具有类似含义的措词，例如术语“包含”、“具有”及其衍生物。如本文所用，术语“由...组成”及其衍生物旨在是封闭式术语，指定了所规定的特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的存在，但排除其他未规定的特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的存在。如本文所用，术语“基本由...组成”旨在指定了所规定的特征、要素、组分、群、整数和/或步骤以及不实质性影响所述特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的基本特征和新颖性的那些特征、要素、组分、群、整数和/或步骤的存在。

如本文所用，术语“适当”表示特定化合物或条件的选择会取决于要进行的具体合成操作以及要转化的物质的特性，但该选择会完全在本领域技术人员的能力范围内。本文所述的所有方法步骤要在足以提供期望产物的条件下进行。本领域技术人员会理解，所有反应条件(包括例如反应溶剂、反应时间、反应温度、反应压力、反应物比例以及该反应是否应在无水或惰性气氛下进行)均可以进行变化以优化期望产物的收率并且其也在技术人员的能力范围内。

在本申请的实施方案中，本文所述的化合物具有至少一个不对称中心。在化合物具有多于一个的不对称中心的情况下，它们可以非对映异构体形式存在。应理解，所有此类异构体及其任何比例的混合物均包括在本发明的范围内。应进一步理解，尽管化合物的立体化学可以如本文列举的任何给定化合物中所示，但此类化合物还可以包含一定量(例如，小于20％，适当地，小于10％，更适当地，小于5％)的具有另外的立体化学的本申请的化合物。旨在任何旋光异构体(分离的、纯的或部分纯化的旋光异构体)或其外消旋混合物包括在本发明的范围内。

在本申请的实施方案中，具有双键的本文所述的化合物可以几何异构体(例如顺式或反式异构体)形式存在。应理解，所有此类几何异构体及其任何比例的混合物均包括在本发明的范围内。应进一步理解，尽管这些化合物的立体化学可以如本文列举的任何给定化合物中所示，但此类化合物还可以包含一定量(例如，小于20％，适当地，小于10％，更适当地，小于5％)的具有另外的立体化学的本申请的化合物。

本申请的化合物还可以不同互变异构形式存在，并且旨在所述化合物形成的任何互变异构形式均包括在本申请的范围内。

本申请的化合物还可以不同的多晶型形式存在，并且所形成的任何多晶型物均包括在本申请的范围内。

如本文所用，程度术语如“基本”、“约”和“大致”表示所修饰的术语的合理的偏差量，以使最终结果未显著变化。这些程度术语应解释为包括所修饰的术语的至少±5％的偏差，只要该偏差不会否定其所修饰的措词的含义，或除非上下文对本领域技术人员另有建议。

如本文所用，参考本文所公开的反应或方法步骤，表述“进行至足够的程度”表示反应或方法步骤进行至使原料或起始物质(substrate)向产物的转化最大化的程度。当多于约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的原料或起始物质转化为产物时，可以使转化最大化。

如本文所用，作为前缀的术语“七元”或“7-元”是指具有包含七个环原子的环的基团。

如本文所用，作为前缀的术语“六元”或“6-元”是指具有包含六个环原子的环的基团。

如本文所用，作为前缀的术语“五元”或“5-元”是指具有包含五个环原子的环的基团。

如本文所用，术语“烃”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指仅包含碳原子(至多14个碳原子)和氢原子的任何结构。

如本文所用，术语“烃基团”或“烃基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指由从烃去除氢原子而衍生的任何结构。

如本文所用，术语“亚烃基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指由从烃的两端去除氢原子而衍生的任何结构。

如本文所用，术语“烷基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)表示直链或支链的饱和烃基。例如，术语C_1-10烷基表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的烷基。

如本文所用，术语“亚烷基”表示直链或支链的饱和烃基，其是在两端上包含取代基的饱和碳链。例如，术语C_1-10亚烷基表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的亚烷基。

如本文所用，术语“烯基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)表示直链或支链的不饱和烯基。例如，术语C_2-10烯基表示具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子和至少一个双键(如1-3、1-2或1个双键)的烯基。

如本文所用，术语“亚烯基”表示直链或支链的不饱和亚烯基，其是在两端上包含取代基的不饱和碳链。例如，术语C_2-10亚烯基表示具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子和至少一个双键(如1-3、1-2或1个双键)的亚烯基。

如本文所用，术语“炔基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)表示直链或支链的不饱和炔基。术语C_2-6炔基表示具有2、3、4、5或6个碳原子和至少一个三键(如1-3、1-2或1个三键)的炔基。

如本文所用，术语“亚炔基”表示直链或支链的不饱和亚炔基，其是在两端上包含取代基的不饱和碳链。术语C_2-6亚炔基表示具有2、3、4、5或6个碳原子和至少一个三键(如1-3、1-2或1个三键)的亚炔基。

如本文所用，术语“卤代烷基”是指其中一个或多个(包括所有的)氢原子被卤原子替代的烷基。在一个实施方案中，所述卤素是氟，在该情况下，卤代烷基在本文被称为“氟代烷基”。在另一实施方案中，所述卤代烷基包括至少一个-CHF₂基团。

如本文所用，术语“卤代亚烷基”是指其中一个或多个(包括所有的)氢原子被卤原子替代的亚烷基。在一个实施方案中，所述卤素是氟，在该情况下，卤代亚烷基在本文被称为“氟代亚烷基”。在另一实施方案中，所述卤代亚烷基包括具有至少一个-CHF₂基团的支链氟代亚烷基。

如本文所用，术语“氰基烷基”是指被至少一个氰基取代的烷基。例如，术语C_1-10氰基烷基表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子和至少一个与其连接的氰基的烷基。

如本文所用，术语“烷氧基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指基团“烷基-O-”。例如，术语C_1-10烷氧基表示具有与烷氧基的氧原子连接的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的烷基。示例性烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基和异丁氧基。

如本文所用，术语“烯氧基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指基团“烯基-O-”。例如，术语C_2-10烯氧基表示具有与烯氧基的氧原子连接的2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子和至少一个双键的烯基。示例性烯氧基是烯丙氧基。

如本文所用，术语“炔氧基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指基团“炔基-O-”。例如，术语C_2-10炔氧基表示具有与炔氧基的氧原子连接的2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子和至少一个三键的炔基。示例性炔氧基是炔丙氧基。

如本文所用，术语“芳氧基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指基团“芳基-O-”。在本公开的一个实施方案中，芳基包含6、9、10或14个原子，例如苯基、萘基、茚满基或蒽基。

如本文所用，术语“环烷基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)表示具有至少一个环的饱和烷基。例如，术语C_3-10环烷基表示具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的环烷基。

如本文所用，术语“亚环烷基”是指在两端上包含取代基的环烷基。

如本文所用，术语“芳基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指包含至少一个芳香环的环状基团。在本一个申请的实施方案中，芳基包含6、9、10或14个原子，例如苯基、萘基、茚满基或蒽基。

如本文所用，术语“亚芳基”是指在两端上包含取代基的芳基。

如本文所用，术语“亚杂芳基”是指在两端上包含取代基的杂芳基。

如本文所用，术语“杂环烷基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而施用)是指具有作为环结构的一部分的一个或多个独立地选自N、O和S的多价杂原子并在环中包括至少3个、至多20个原子的非芳香族的包含环的基团。杂环烷基是饱和或不饱和的(即，包含一个或多个双键)，并且可以包含多于一个环。当杂环烷基包含多于一个环时，该环可以稠合、桥接、螺连接或经由单键连接。

第一环基团与第二环基团“稠合”表示第一环和第二环共享其间的至少两个相邻的原子。

第一环基团与第二环基团“桥接”表示第一环和第二环共享其间的至少两个不相邻的原子。

第一环基团与第二环基团“螺连接”表示第一环和第二环共享其间的一个原子。

杂环烷基包括单环杂环烷基，例如但不限于氮杂环丙基、氧杂环丙基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基(thietanyl)、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、二氧杂环戊基、环丁砜基(sulfolanyl)、2，3-二氢呋喃基、2，5-二氢呋喃基、四氢呋喃基、噻吩烷基、哌啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、吡喃基、硫代吡喃基、2，3-二氢吡喃基、四氢吡喃基、1，4-二氢吡啶基、1，4-二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环己烷基、二氧杂环己烷基、高哌啶基(homopiperidinyl)、2，3，4，7-四氢-1H-吖庚因基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、1，3-二氧杂环庚烷基、4，7-二氢-1，3-二氧杂环庚烯基(4，7-dihydro-1，3-dioxepinyl)以及环氧己烷基(hexamethylene oxidyl)。另外，杂环烷基包括多环杂环烷基，例如但不限于吡咯里西啶基(pyrolizidinyl)和喹诺里西啶基(quinolizidinyl)。除了上述多环杂环烷基之外，杂环烷基包括其中两个或多个环之间的环稠合包括两个环所共有的多于一个的键和两个环所共有的多于两个的原子的多环杂环烷基。此类桥接杂环的实例包括但不限于奎宁环基(quinuclidinyl)、二氮杂二环[2.2.1]庚基和7-氧杂二环[2.2.1]庚基。

如本文所用，术语“杂芳基”表示包含5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个原子且其中一个或多个(如1至8、1至6、1至5或1至4个)原子是选自O、S、NH和NC_1-6烷基的杂基团(hetereomoiety)并且其余原子是C、CH或CH₂的单环或多环体系，所述环体系包含至少一个芳香环。

杂芳基包括例如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基、呋喃基、呋咱基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噻唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑、1，3，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基和1，3，4-噁二唑基。

杂芳基还包括多环杂环基，例如但不限于吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、1，4-苯并二氧杂环己烷基、香豆素基(coumarinyl)、二氢香豆素基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、异苯并呋喃基、色烯基、色烷基、异色烷基、呫吨基、吩噻噁基(phenoxathiinyl)、噻蒽基(thianthrenyl)、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、嘌呤基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、菲啶基、萘嵌间二氮苯基(perimidinyl)、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、1，2-苯并异噁唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、硫代黄嘌呤基(thioxanthinyl)、咔唑基、咔啉基和吖啶基。

五元杂芳基是包含具有5个环原子的环的杂芳基，其中1、2或3个环原子是选自O、S、NH和NC_1-6烷基的杂基团。示例性五元杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-噻唑基、1，3，4-噻二唑基和1，3，4-噁二唑基。

六元杂芳基是包含具有六个环原子的环的杂芳基，其中1、2或3个环原子是选自O、S、NH和NC_1-6烷基的杂基团。示例性六元杂芳基包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和哒嗪基。

如本文所用，术语“环状基团”是指本文所定义的任何环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基。

如本文所用，术语“杂基团”是指包含至少一个杂原子的一组原子。

作为前缀，如本文所用，术语“取代的”是指其中一个或多个可用的氢原子被一个或多个其他化学基团替代的结构、分子或基团。在一个实施方案中，所述化学基团是C_1-4烷基。在另一实施方案中，所述化学基团是C_1-12烷基或包含选自N、O、S、F、Cl、Br、I和P的一个或多个杂原子的化学基团。包含一个或多个杂原子的示例性化学基团包括杂环烷基、杂芳基、-NO₂、-OR、-R’OR、-Cl、-Br、-I、-F、-CF₃、-C(O)R、-NR₂、-SR、-SO₂R、-S(O)R、-CN、-C(O)OR、-C(O)NR₂、-NRC(O)R、-NRC(O)OR、-R’NR₂、氧代(O)、亚氨基(＝NR)、硫代(＝S)和肟基(＝N-OR)，其中每一“R”是氢或C_1-12烷基，并且“R’”是C_1-12亚烷基。例如，取代的苯基可以是指硝基苯基、吡啶基苯基、甲氧基苯基、氯苯基、氨基苯基等，其中硝基、吡啶基、甲氧基、氯和氨基可以替代苯环上任何可用的氢。

作为后缀，如本文所用，与在一个或多个变量或化学基团名称之后的第一结构、分子或基团相关的术语“取代的”是指通过用一个或多个变量或指定的化学基团替代第一结构、分子或基团的一个或多个可用的氢原子所产生的第二结构、分子或基团。例如，“由硝基取代的苯基”是指硝基苯基。

如本文所用，术语“可用的氢原子”是指分子或基团上的可以在不降解或分解母体化合物的条件下被另一基团替代的氢原子。此类条件包括使用保护基来保护分子中的敏感官能团，同时替换氢原子。

术语“任选取代的”是指被取代或未被取代的基团、结构或分子。

如本文所用，术语“胺”或“氨基”(无论其单独使用或作为另一基团的一部分而使用)是指通式-NRR’的基团，其中R和R’各自独立地选自氢或烷基，例如C_1-6烷基。

如本文所用，术语“卤素”是指卤原子并且包括氟、氯、溴和碘。

如本文所用，术语“acac”是指乙酰丙酮化物(acetylacetonate)。

如本文所用，术语“atm”是指大气压。

如本文所用，术语“aq.”是指水性或含水的。

如本文所用，术语“Boc”和“t-Boc”是指叔丁氧羰基。

如本文所用，DCM是指二氯甲烷。

如本文所用，DIPEA是指N，N-二异丙基乙胺。

如本文所用，DMF是指二甲基甲酰胺。

如本文所用，DMSO是指二甲亚砜。

如本文所用，EDCI.HCl是指N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。

如本文所用，EDC是指1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。

如本文所用，Et₂O是指乙醚。

如本文所用，EtOAc是指乙酸乙酯。

如本文所用，Et是指乙基。

如本文所用，Fmoc是指9-芴基甲氧基羰基。

如本文所述，术语“hr(s)”是指小时。

如本文所述，术语“min(s)”是指分钟。

如本文所述，HOBt是指N-羟基苯并三唑。

如本文所用，HBTU是指O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基六氟磷酸脲鎓。

如本文所用，MeOH是指甲醇。

如本文所用，Me是指甲基。

如本文所用，t-BuLi是指叔丁基锂。

如本文所用，ON是指过夜。

如本文所用，RT是指室温。

如本文所用，TEA是指三乙胺。

如本文所用，TFA是指三氟乙酸。

如本文所用，THF是指四氢呋喃。

如本文所用，t-Bu是指叔丁基。

如本文所用，SPE是指固相萃取，例如使用用于微型色谱法的包含硅胶的柱。

如本文所用，术语“保护基”或“PG”等是指保护或掩蔽分子的反应性部分以防止在分子的那些反应性部分中的副反应并同时对分子的不同部分进行操作或使其反应的化学基团。在操作或反应完成之后，在不降解或分解分子的剩余部分的条件下脱除保护基。可以由本领域技术人员进行合适的保护基的选择。许多常用的保护基是本领域已知的，例如在“Protective Groups in Organic Chemistry”McOmie，J.F.W.Ed.，PlenumPress，1973，在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，John Wiley & Sons，3^rd Edition，1999以及在Kocienski，P.Protecting Groups，3rd Edition，2003，Georg Thieme Verlag(TheAmericas)中描述。合适的保护基的实例包括但不限于t-Boc、cbz、Ac、Ts、Ms、甲硅烷基醚如TMSi、TBDMS、TBDPS、Tf、Ns、Bn、Fmoc、苯甲酰基、二甲氧基三苯甲基、甲氧基乙氧基甲醚、甲氧基甲醚、新戊酰基、对甲氧基苄醚、四氢吡喃基、三苯甲基、乙氧基乙醚、苄氧甲酰基(carbobenzyloxy)、苯甲酰基等。

如本文所用，Cbz是指苄氧羰基(carboxybenzyl)。

如本文所用，Ac是指乙酰基。

如本文所用，Ts(tosyl)是指对甲苯磺酰基。

如本文所用，Ms是指甲磺酰基。

如本文所用，TMS是指四甲基硅烷。

如本文所用，TMSi是指三甲基甲硅烷基。

如本文所用，TBDMS是指叔丁基二甲基甲硅烷基。

如本文所用，TBDPS是指叔丁基二苯基甲硅烷基。

如本文所用，Tf是指三氟甲磺酰基。

如本文所用，Ns是指萘磺酰基。

如本文所用，Bn是指苄基。

如本文所用，术语“细胞”是指单个细胞或多个细胞，并且包括在细胞培养基或个体中的细胞。

如本文所用，术语“个体”包括动物界的所有成员，包括哺乳动物，并且适当地指人类。因此，本申请的方法和用途适用于人类疗法和兽医应用。在一个实施方案中，所述个体为哺乳动物。在另一实施方案中，所述个体为人类。

术语“药学上接受的”表示与诸如人类的个体的治疗相容。

术语“药学上接受的载体”表示为了允许药物组合物(即，能够向个体给药的剂型)的形成而与活性成分混合的无毒的溶剂、分散剂、赋形剂、辅剂或其他材料。此类载体的一个非限制性实例是常用于肠胃外给药的药学上可接受的油。

术语“药学上可接受的盐”表示适于个体治疗或与其相容的酸加成盐或碱加成盐。

适于个体治疗或与其相容的酸加成盐是任何碱性化合物的任何无毒的有机或无机酸加成盐。形成酸加成盐的碱性化合物包括例如包含氨基的化合物。形成合适的盐的示例性无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸，以及酸性金属盐，例如正磷酸一氢钠和硫酸氢钾。形成合适的盐的示例性有机酸包括单羧酸、二羧酸和三羧酸。示例的此类有机酸为例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯基乙酸、苯乙烯酸、扁桃酸、水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、对甲苯磺酸以及其他磺酸如甲磺酸、乙磺酸和2-羟基乙磺酸。可以形成单酸盐或二酸盐，并且此类盐可以水合物、溶剂合物或基本无水的形式存在。通常，酸加成盐更可溶解于水和多种亲水有机溶剂中，并且通常与其游离碱形式相比展现出更高的熔点。合适的盐的选择标准是本领域技术人员已知的。其他非药学上可接受的盐(例如但不限于草酸盐)可以例如用于分离本申请的化合物以用于实验室用途或用于后续转化成药学上可接受的酸加成盐。在本申请的另一实施方案中，将式I的化合物转化成其药学上可接受的盐或溶剂合物，特别是酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

适于个体治疗或与其相容的碱加成盐是任何酸性化合物的任何无毒的有机或无机碱加成盐。形成碱加成盐的酸性化合物包括例如包含羧酸基团的化合物。形成合适的盐的示例性无机碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化钡以及氨水。形成合适的盐的示例性有机碱包括脂肪族、脂环族或芳香族的有机胺，例如异丙胺、甲胺、三甲胺、甲基吡啶、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多胺树脂等。示例性有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。[参见，例如，S.M.Berge等人，″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.1977，66，1-19]。合适的盐的选择可以是有用的，从而在化合物别处的酯官能性(如果存在的)不被水解。合适的盐的选择标准是本领域技术人员已知的。

本申请的化合物的前药可以例如是与可用的羟基、硫醇基、氨基或羧基形成的常见的酯。例如，可以在碱的存在下并任选地在惰性溶剂(例如含酰基氯的吡啶)中使用活化酸来酰化可用的羟基或氨基。已经用作前药的一些常见的酯是苯基酯、脂族(C₁-C₂₄)酯、酰氧基甲酯、氨基甲酸酯和氨基酸酯。

如本文所用，术语“溶剂合物”表示化合物或者化合物的盐或前药，其中合适的溶剂的分子并入晶格中。合适的溶剂在给药剂量下是生理学耐受的。合适的溶剂的实例是乙醇、水等。当水是溶剂时，该分子被称为“水合物”。本申请的化合物的溶剂合物的形成可以根据化合物和溶剂合物而变化。通常，通过将化合物溶解在合适的溶剂中并通过冷却或使用抗溶剂来分离溶剂合物，从而形成溶剂合物。通常在环境条件下干燥或共沸溶剂合物。可以由本领域技术人员来进行形成特定溶剂合物的适当条件的选择。

如本文所用以及本领域所公知的，术语“治疗”表示获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。有益或期望的临床结果可以包括但不限于减轻或改善病况的一种或多种症状、降低疾病程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、防止疾病蔓延、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态、减小疾病复发以及缓解(无论是部分或全部的)，无论是可检测或不可检测的。“治疗”还可以表示与不接受治疗的情况下的预期存活相比延长存活。如本文所用，“治疗”还包括预防性治疗。例如，患有早期癌症的个体可以经治疗以阻止进展，或者，可以用本文所述的化合物或组合物治疗处于缓解中的个体以防止复发。治疗方法包括向个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物，并且该治疗方法任选地由单次给药组成，或者包括一系列给药。例如，可以每周至少一次给药本申请的化合物。然而，在另一实施方案中，对于给定的治疗，可以向个体给药该化合物，从约每三周一次或约每周一次至约每天一次。在另一实施方案中，每天2、3、4、5或6次给药该化合物。治疗时段的长度取决于多种因素，例如疾病、病症或病况的严重性，个体年龄、本申请化合物的浓度和/或活性，和/或其组合。还会认识到，用于治疗的化合物的有效剂量可以基于特定治疗方案的进程而增加或降低。剂量的变化可以导致随着发生并且通过本领域已知的标准诊断测定可以变得明显。在一些情形下，可能需要长期给药。例如，以一定量向个体给药该化合物，并持续足以治疗患者的持续时间。

“减轻”疾病或病症表明与未治疗该病症相比，病症或疾病状态的程度和/或不期望的临床表现得到减弱和/或进展的时间进程变缓或延长。

如本文所用，术语“防止”或“预防”或其同义词是指患者受由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况折磨或者表现出与由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的症状的风险或可能性降低。

如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”表示在实现期望结果所必要的剂量和时段下有效的量。例如，在治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的情形下，有效量是例如与不给药该化合物的蛋白酶体抑制相比增加了蛋白酶体抑制的量。有效量可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和/或体重的因素而变化。给定化合物的与此类量相对应的量会根据多种因素而变化，例如给定的药物或化合物，药物配方，给药途径，病况、疾病或病症的类型，被治疗的个体的身份等，但可以由本领域技术人员常规确定。

如本文所用，术语“由...介导”或“与...相关”是指个体的疾病、病症或病况，其中至少一个诱因是规定的生理学异常，例如蛋白酶体活性增加，特别与不患有该疾病、病症或病况的个体相比。

如本文所用，术语“给药”表示向细胞培养基中的或个体中的细胞给药治疗有效量的本申请的化合物或组合物。

如本文所用，术语“肿瘤性病症”是指特征为下述细胞的疾病、病症或病况，所述细胞具有自主生长或复制的能力，例如特别为增殖细胞生长的异常状态或病况。如本文所用，术语“肿瘤(neoplasm)”是指由患有肿瘤性病症的个体中细胞的异常生长和/或分裂而导致的组织块。肿瘤可以是良性的(例如子宫平滑肌瘤和黑素细胞痣)、潜在恶性的(例如原位癌)或恶性的(即，癌症)。示例性肿瘤性病症包括但不限于癌、肉瘤、转移性病症(例如，由前列腺产生的肿瘤)、造血性肿瘤性病症(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤及其他恶性浆细胞病症)、转移性肿瘤及其他癌症。普遍的癌症包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、脑癌、卵巢癌和胰腺癌。

如本文所用，术语“癌症”是指细胞增殖性疾病状态，包括但不限于：成人急性成淋巴细胞性白血病；儿童急性成淋巴细胞性白血病；成人急性骨髓性白血病；肾上腺皮质癌；儿童肾上腺皮质癌；AIDS相关性淋巴瘤；AIDS相关性恶性肿瘤；肛门癌；儿童小脑星形细胞瘤；儿童小脑星形细胞瘤；肝外胆管癌；膀胱癌；儿童膀胱癌；骨癌，骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；儿童脑干胶质瘤；成人脑瘤；脑瘤，儿童脑干胶质瘤；脑瘤，儿童小脑星形细胞瘤；脑瘤，儿童脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤；脑瘤，儿童室管膜瘤；脑瘤，儿童髓母细胞瘤；脑瘤，儿童幕上原始神经外胚层肿瘤；脑瘤，儿童视神经通路和下丘脑胶质瘤；儿童(其他)脑瘤；乳腺癌；乳腺癌与妊娠；儿童乳腺癌；男性乳腺癌；儿童支气管腺瘤/类癌；儿童类癌肿瘤；胃肠类癌肿瘤；肾上腺皮质癌；胰岛细胞癌；原发灶不明的癌；原发性中枢神经系统淋巴瘤；儿童小脑星形细胞瘤；儿童脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤；子宫颈癌；儿童癌症；慢性淋巴细胞性白血病；慢性髓细胞性白血病；慢性骨髓增殖性病症；腱鞘的透明细胞肉瘤；结肠癌；儿童结肠直肠癌；皮肤T-CeIl淋巴瘤；子宫内膜癌；儿童室管膜瘤；卵巢上皮癌；食管癌；儿童食管癌；尤文家族肿瘤；儿童颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌，眼内黑色素瘤；眼癌，视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胃部(胃)癌症；儿童胃部(胃)癌；胃肠道类癌瘤；儿童颅外生殖细胞瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；卵巢生殖细胞瘤；妊娠滋养细胞肿瘤；儿童脑干胶质瘤；儿童视觉通路和下丘脑神经胶质瘤；毛细胞性白血病；头颈癌；成人(原发性)肝细胞(肝)癌；儿童(原发性)肝细胞(肝)癌；成人霍奇金淋巴瘤；儿童霍奇金淋巴瘤；妊娠期霍奇金淋巴瘤；下咽癌；儿童下丘脑和视觉通路胶质瘤；眼内黑色素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波氏肉瘤；肾癌；喉癌；儿童喉癌；成人急性淋巴细胞性白血病；儿童急性淋巴细胞性白血病；成人急性骨髓性白血病；儿童急性骨髓性白血病；慢性淋巴细胞性白血病；慢性骨髓性白血病；毛细胞性白血病；嘴唇和口腔癌；成人(原发性)肝癌；儿童(原发性)肝癌；非小细胞肺癌；小细胞肺癌；成人急性淋巴细胞性白血病；儿童急性淋巴细胞性白血病；慢性淋巴细胞性白血病；AIDS相关性淋巴瘤；中枢神经系统(原发性)淋巴瘤；皮肤T-CeIl性淋巴瘤；成人霍奇金淋巴瘤；儿童霍奇金淋巴瘤；妊娠期霍奇金淋巴瘤；成分非霍奇金淋巴瘤；儿童非霍奇金淋巴瘤；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；成人恶性间皮瘤；儿童恶性间皮瘤；恶性胸腺瘤；儿童髓母细胞瘤；黑色素瘤；眼内黑色素瘤；默克尔细胞癌；恶性间皮瘤；隐匿原发的转移性鳞癌颈部肿瘤；儿童多发性内分泌腺瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤；蕈样霉菌病(Mycosis Fungoides)；骨髓增生异常综合征；慢性骨髓性白血病；儿童急性骨髓性白血病；多发性骨髓瘤；慢性骨髓增殖性疾病；鼻腔及鼻窦癌；鼻咽癌；儿童鼻咽癌；神经母细胞瘤；成人非霍奇金淋巴瘤；儿童非霍奇金淋巴瘤；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；非小细胞肺癌；儿童口腔癌；口腔和唇癌；口咽癌；骨骼的骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；儿童卵巢癌；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜在肿瘤；胰腺癌；儿童胰腺癌；胰岛细胞胰腺癌；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺肿瘤；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；儿童松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤；垂体瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；妊娠和霍奇金淋巴瘤；妊娠和非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；成人原发性肝癌；儿童原发性肝癌；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；儿童肾细胞癌；肾盂和输尿管移行细胞癌；视网膜母细胞瘤；儿童横纹肌肉瘤；唾液腺癌；儿童唾液腺癌；肉瘤，尤文家族肿瘤；肉瘤，卡波西肉瘤；骨骼的肉瘤(骨肉瘤)/恶性纤维组织细胞瘤；肉瘤，儿童横纹肌肉瘤；成人软组织肉瘤；儿童软组织肉瘤；塞扎里综合征；皮肤癌；儿童皮肤癌；皮肤癌(黑色素瘤)；梅克尔细胞皮肤癌；小细胞肺癌；小肠癌；成人软组织肉瘤；儿童软组织肉瘤；隐匿原发的转移性鳞状颈部肿瘤；胃部(胃)癌症；儿童胃部(胃)癌；儿童幕上原始神经外胚层肿瘤；皮肤T-CeIl淋巴瘤；睾丸癌；儿童胸腺瘤；恶性胸腺瘤；甲状腺癌；儿童甲状腺癌；肾盂和输尿管的移行细胞癌；妊娠期滋养细胞肿瘤；儿童的未知原发位置的癌症；童年的罕见癌症；输尿管和肾盂移行细胞癌；尿道癌；子宫肉瘤；阴道癌；儿童视觉通路和下丘脑胶质瘤；外阴癌；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；以及肾母细胞瘤。也根据本文所述的方法来治疗前述癌症的转移。

II.本申请的化合物

制备本申请的化合物并发现其抑制直接或间接受蛋白酶体影响的不受控制的和/或异常的细胞活性。特别地，本发明的化合物表现出作为蛋白酶体抑制剂的活性，并因此在用于例如治疗与蛋白酶体抑制直接或间接相关的肿瘤性病症(如癌症)和神经变性病症的疗法中是有用的。

其中：

在一个实施方案中，R¹选自：

(i)C_1-10烷基；

(ii)C_2-10烯基；

(iii)C_2-10炔基；

(iv)取代或未取代的C_6-14芳基；

(v)取代或未取代的杂芳基；

(vi)取代或未取代的C_3-10环烷基；以及

(vii)取代或未取代的C_3-10杂环烷基，

其中C_6-14芳基、杂芳基、C_3-10环烷基和C_3-10杂环烷基的取代基独立地选自C_1-4烷基。

在另一实施方案中，R¹选自：

(i)C_1-6烷基；

(ii)C_2-6烯基；

(iii)C_2-6炔基；

(iv)取代或未取代的C_6-10芳基；

(v)取代或未取代的5-或6-元杂芳基；

(vi)取代或未取代的C_3-8环烷基；以及

(vii)取代或未取代的C_3-8杂环烷基，

其中C_6-10芳基、5-或6-元杂芳基、C_3-8环烷基和C_3-8杂环烷基的取代基独立地选自C_1-4烷基。

在另一实施方案中，R¹选自：

(i)C_1-6烷基；

(ii)取代或未取代的5-或6-元杂芳基；以及

(iii)C_3-8杂环烷基，

其中5-或6-元杂芳基的取代基独立地选自C_1-4烷基。

一个实施方案是R¹选自未取代的5-或6-元杂芳基、被C_1-4烷基取代的5-或6-元杂芳基以及C_3-8杂环烷基。

在一个实施方案中，R¹为C_1-10烷基。在另一实施方案中，R¹为C_1-6烷基。在另一实施方案中，R¹为叔丁基。

一个实施方案是R¹是未取代的5-或6-元杂芳基、被C_1-4烷基取代的5-元杂芳基或6-元杂环烷基。

在一个实施方案中，R¹为杂环烷基。在另一实施方案中，R¹选自吗啉基、1，4-氧氮杂环庚烷基(1，4-oxazepanyl)、硫代吗啉基、1，4-硫氮杂环庚烷基(1，4-thiazepanyl)、1，4-硫氮杂环庚烷基-1-氧化物、1，4-硫氮杂环庚烷基-1，1-二氧化物、1，4-噻嗪烷基-1-氧化物(1，4-thiazinanyl-1-oxide)、1，4-噻嗪烷基-1，1-二氧化物、氮杂环丙基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌嗪基和1，4-二氮杂环庚烷基(1，4-diazepanyl)。在另一实施方案中，R¹是具有一个O原子和一个N原子作为环结构一部分的6-元杂环烷基。一个实施方案是R¹为吗啉基。在本申请的另一个实施方案中，R¹为

在一个实施方案中，R¹是未取代的5-或6-元杂芳基或被C_1-4烷基取代的5-或6-元杂芳基。在另一实施方案中，R⁷是未取代的5-元杂芳基。在另一实施方案中，R¹是未取代的6-元杂芳基。一个实施方案是R¹为被C_1-4烷基取代的5-元杂芳基。在另一实施方案中，R¹是被甲基取代的5-元杂芳基。

在一个实施方案中，R¹选自：

(i)取代或未取代的噻唑基；

(ii)取代或未取代的异噻唑基；

(iii)取代或未取代的噁唑基；

(iv)取代或未取代的异噁唑基；

(v)取代或未取代的噻吩基；

(vi)取代或未取代的呋喃基；

(vii)取代或未取代的1，2，4-三唑基；

(viii)取代或未取代的吡啶基；

(ix)取代或未取代的吡嗪基；

(x)取代或未取代的嘧啶基；以及

(xi)取代或未取代的1，2，4-三嗪基，

其中噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、呋喃基、1，2，4-三唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和1，2，4-三嗪基的取代基独立地选自C_1-4烷基，例如甲基。

在另一实施方案中，R¹选自：

(i)取代或未取代的异噁唑基；

(ii)取代或未取代的异噻唑基；

(iii)取代或未取代的呋喃基；

(iv)取代或未取代的噻吩基；

(v)取代或未取代的噁唑基；

(vi)取代或未取代的噻唑基；

(vii)取代或未取代的吡唑基；以及

(viii)取代或未取代的咪唑基，

其中异噁唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基和咪唑基的取代基独立地选自C_1-4烷基，例如甲基。

在另一实施方案中，R¹选自：

(i)取代或未取代的异噁唑基；

(ii)取代或未取代的呋喃基；以及

(iii)取代或未取代的噻唑基，

其中异噁唑基、呋喃基和噻唑基的取代基独立地选自C_1-4烷基，例如甲基。

在另一实施方案中，R¹选自：

在一个实施方案中，X不存在或选自O、NH、NC_1-6烷基、S、C_1-6亚烷基、C_2-6亚烯基和C_2-6亚炔基。在另一实施方案中，X不存在。在另一实施方案中，X为O或C_1-6亚烷基。一个实施方案是X为O。在另一实施方案中，X为C_1-4亚烷基。在另一实施方案中，X为-CH₂-。

在一个实施方案中，X为O并且R¹为C_1-6烷基。在另一实施方案中，X为O并且R¹为叔丁基。

在另一实施方案中，X为C_1-6亚烷基并且R¹为C_3-8杂环烷基。在另一实施方案中，X为C_1-4亚烷基并且R¹为6-元杂环烷基。本申请的一个实施方案是X和R¹一起形成以下结构：

在另一实施方案中，X不存在，并且R¹为取代或未取代的杂芳基，其中杂芳基的取代基独立地选自C_1-4烷基，例如甲基。会认识到，在此类本申请的实施方案中，杂芳基实施方案可以如上文关于R¹所讨论的那样。

在一个实施方案中，R²、R³和R⁴各自独立地选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-6亚烷基C_6-14芳基、C_1-6亚烷基-杂芳基、C_1-6亚烷基C_3-8环烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚烯基-O-C_1-6卤代烷基以及C_2-6亚炔基-O-C_1-6卤代烷基，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是C_1-6-亚烷基-O-C_1-6卤代烷基。在另一实施方案中，R²、R³和R⁴各自独立地选自C_1-6烷基、C_1-6亚烷基C_6-10芳基、C_1-6亚烷基-O-C_1-4烷基以及C_1-6亚烷基-O-C_1-4氟烷基，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是C_1-6-亚烷基-O-C_1-4氟烷基。在另一实施方案中，R²、R³和R⁴各自独立地选自C_1-6烷基、C_1-4亚烷基-苯基、C_1-4亚烷基-O-C_1-4烷基、C_1-4亚烷基-O-CH₂F、C_1-4亚烷基-O-CHF₂以及C_1-4亚烷基-O-CF₃，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是C_1-4亚烷基-O-CH₂F、C_1-4亚烷基-O-CHF₂或C_1-4亚烷基-O-CF₃。一个实施方案是R²、R³和R⁴各自独立地选自异丁基、-CH₂-Ph、-CH₂-O-CH₃、-CH₂-O-CH₂F、-CH₂-O-CHF₂以及-CH₂-O-CF₃，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是-CH₂-O-CH₂F、-CH₂-O-CHF₂或-CH₂-O-CF₃。在另一实施方案中，R²、R³和R⁴各自独立地选自异丁基、-CH₂-Ph、-CH₂-O-CH₃以及-CH₂-O-CHF₂，其中R²、R³和R⁴中的至少一个是-CH₂-O-CHF₂。

在一个实施方案中，R²和R³各自独立地选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚烯基-O-C_1-6卤代烷基以及C_2-6亚炔基-O-C_1-6卤代烷基，其中R²和R³中的至少一个是C_1-6-亚烷基-O-C_1-6卤代烷基。在另一实施方案中，R²和R³各自独立地选自C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-4烷基以及C_1-6亚烷基-O-C_1-4氟烷基，其中R²和R³中的至少一个是C_1-6亚烷基-O-C_1-4氟烷基。在另一实施方案中，R²和R³各自独立地选自C_1-6烷基、C_1-4亚烷基-O-C_1-4烷基、C_1-4亚烷基-O-CH₂F、C_1-4亚烷基-O-CHF₂以及C_1-4亚烷基-O-CF₃，其中R²和R³中的至少一个是C_1-4亚烷基-O-CH₂F、C_1-4亚烷基-O-CHF₂或C_1-4亚烷基-O-CF₃。一个实施方案是R²和R³各自独立地选自异丁基、-CH₂-O-CH₃、-CH₂-O-CH₂F、-CH₂-O-CHF₂以及-CH₂-O-CF₃，其中R²和R³中的至少一个是-CH₂-O-CH₂F、-CH₂-O-CHF₂或-CH₂-O-CF₃。在另一实施方案中，R²和R³各自独立地选自异丁基、-CH₂-O-CH₃以及-CH₂-O-CHF₂，其中R²和R³中的至少一个是-CH₂-O-CHF₂。

在一个实施方案中，R²和R³各自为C_1-6亚烷基-O-C_1-4氟烷基。在实施方案中，R²和R³各自为C_1-4亚烷基-O-CHF₂。在另一实施方案中，R²和R³各自为-CH₂-O-CHF₂。

在一个实施方案中，R⁴选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-6亚烷基C_3-8环烷基以及C_1-6亚烷基C_6-14芳基。在另一实施方案中，R⁴选自C_1-6烷基、C_1-6亚烷基C_3-8环烷基以及C_1-6亚烷基C_6-10芳基。在另一实施方案中，R⁴选自C_1-6烷基和C_1-4亚烷基-苯基。一个实施方案是R⁴为异丁基或-CH₂-Ph。在一个实施方案中，R⁴为异丁基。在另一实施方案中，R⁴为-CH₂-Ph。

在另一实施方案中，R²和R³中的至少一个或二者独立地选自C_1-6亚烷基-O-CH₂F、C_1-6亚烷基-O-CHF₂以及C_1-6亚烷基-O-CF₃。在另一实施方案中，R²和R³中的至少一个或二者为-CH₂-O-CHF₂。

在另一实施方案中，R⁴选自C_1-6烷基、C_1-6亚烷基C_3-8环烷基以及C_1-6亚烷基C_6-14芳基，其任选地被一个或多个独立选择的基团R⁶取代。在另一实施方案中，R⁴选自-CH₂-苯基、-(CH₂)₂-苯基、异丁基以及叔丁基。一个实施方案是R⁴为-CH₂-苯基或异丁基。

在一个实施方案中，R⁵选自H、C_1-6烷基、C_2-6烯基以及C_2-6炔基。在另一实施方案中，R⁵为C_1-6烷基。在另一实施方案中，R⁵为C_1-4烷基。一个实施方案是R⁵为甲基。

在一个实施方案中，R⁶选自C_1-4烷基、OH、C_1-4烷氧基、C_6-10芳氧基、-NH-C_1-4烷基、-N(C_1-4烷基)₂、C_1-4亚烷基-N(C_1-4烷基)₂、C_1-4亚烷基-NH-C_1-4烷基、C_3-8环烷基、杂环烷基、C_6-10芳基以及5-或6-元杂芳基。在另一实施方案中，R⁶选自C_1-4烷基、OH、C_1-4烷氧基、-NH-C_1-4烷基以及-N(C_1-4烷基)₂。

在一个实施方案中，R⁷和R⁸各自独立地选自H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-8环烷基、C_1-4亚烷基-C_3-8环烷基、杂环烷基、C_6-10芳基、C_1-4亚烷基-C_6-10芳基、C_1-4亚烷基-杂环烷基、杂芳基以及C_1-4亚烷基-杂芳基，其中任何环状基团任选地与另一个5-至7-元杂环烷基稠合。

在一个实施方案中，式I的化合物具有以下相对立体化学：

在一个实施方案中，本申请的化合物选自以下所示的实施例1至33的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药：

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-甲氧基乙基)酰胺；

2-甲基噁唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

3-甲基异噁唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

噁唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

5-甲基噻吩-2-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

5-甲基呋喃-2-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

噻吩-2-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]-1H-1，2，4-三唑-5-甲酰胺；

N-[(1S)-1-(二氟甲氧基甲基)-2-[[(1S)-1-(二氟甲氧基甲基)-2-[[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]-2-甲基噻唑-5-甲酰胺；

吡啶-2-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

N-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)烟酰胺；

N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]嘧啶-2-甲酰胺；

[1，2，4]三嗪-3-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

嘧啶-4-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-3-甲基丁基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-2-二氟甲氧基-1-{(S)-3-甲基-1-[(S)-3-甲基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙烷羰基)丁基氨甲酰基]丁基氨甲酰基}乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-2-二氟甲氧基-1-[(S)-3-甲基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙烷羰基)丁基氨甲酰基]乙基氨甲酰基}-3-甲基丁基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-3-甲基丁基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-2-二氟甲氧基-1-[(S)-3-甲基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙烷羰基)丁基氨甲酰基]乙基氨甲酰基}-2-苯基乙基)酰胺；

2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-苯基乙基)酰胺；

(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-N-[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]-3-苯基丙酰胺；

(S)-N-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}-3-二氟甲氧基-2-(2-吗啉-4-基乙酰基氨基)丙酰胺；

(2S)-N-[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰胺；

(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-4-甲基-N-[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]戊酰胺；

(2S)-N-[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-(1-甲基环己-1，3，5-三烯-1-基)丙酰胺；

(S)-4-甲基-2-(2-吗啉-4-基乙酰基氨基)戊酸-{(S)-2-二氟甲氧基-1-[(S)-3-甲基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙烷羰基)丁基氨甲酰基]乙基}酰胺；

(S)-4-甲基-2-(2-吗啉-4-基乙酰基氨基)戊酸-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}酰胺；

(2S)-N-[(1S)-2-[[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]-3-苯基丙酰胺；以及

(2S)-3-(二氟甲氧基)-N-[(1S)-1-(二氟甲氧基甲基)-2-[[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]氨基]-2-氧代乙基]-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰胺。

在另一实施方案中，本申请的化合物选自：

(S)-N-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}-3-二氟甲氧基-2-(2-吗啉-4-基-乙酰基氨基)丙酰胺；

(2S)-N-[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-(1-甲基环己-1，3，5-三烯-1-基)丙酰胺；以及

在另一实施方案中，本申请的化合物是2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺。

在一个实施方案中，本申请还包括式(I)的化合物：

其中：

R¹选自C_1-6-烷基、C_1-6-烷氧基、C_1-6-烷氧基烷基、C_1-6-烯氧基卤代烷基、C_1-6-炔氧基卤代烷基、C_1-6-卤代烷基、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_3-8-环烷基、C_1-6-烷基-C_3-8-环烷基、芳基、杂芳基、C_1-6-烷基芳基、C_1-6-烷基杂芳基、C_1-6-烷基杂环烷基、C(O)H、(CO)R⁷、O(CO)R⁷、C(O)OR⁷、C_1-6-烷基OR⁷、C_1-6-烷基(CO)R⁷、C_0-6-烷基CO₂R⁷、C_1-6-烷基氰基、C_1-6-烷基NR⁷R⁸、C_1-6-烷基(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁶(CO)R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基SR⁷、C_1-6-烷基(SO)R⁷、C_1-6-烷基SO₂R⁶、C_1-6-烷基(SO₂)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(SO₂)R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(SO₂)NR⁷R⁸、(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(CO)OR⁸以及可以包含一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的3-至7-元环，其中任何环状基团任选地与可以包含一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的5-至7-元环稠合；

X选自氢、碳、氧、氮、硫、C_1-6-烷基、C_1-6-烷氧基、C_1-6-烷氧基烷基、C_1-6-烯氧基氨基烷基(C_1-6-alkenyloxyamminoalkyl)、C_1-6-炔氧基卤代烷基、C_1-6-卤代烷基、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_3-8-环烷基、C_1-6-烷基-C_3-8-环烷基、芳基、杂芳基、C_1-6-烷基芳基、C_1-6-烷基杂芳基、C_1-6-烷基杂环烷基；

R²、R³和R⁴选自C_1-6-烷基、C_1-6-烷氧基、C_1-6-烷氧基烷基、C_1-6-烯氧基卤代烷基、C_1-6-炔氧基卤代烷基、C_1-6-卤代烷基、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_3-8-环烷基、C_1-6-烷基-C_3-8-环烷基、芳基、杂芳基、C_1-6-烷基芳基、C_1-6-烷基杂芳基、C_1-6-烷基杂环烷基、C(O)H、(CO)R⁷、O(CO)R⁷、C(O)OR⁷、C_1-6-烷基OR⁷、C_1-6-烷基(CO)R⁷、C_0-6-烷基CO₂R⁷、C_1-6-烷基氰基、C_1-6-烷基NR⁷R⁸、C_1-6-烷基(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁶(CO)R⁸、C_1-6-烷基N⁷(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基SR⁷、C_1-6-烷基(SO)R⁷、C_1-6-烷基SO₂R⁶、C_1-6-烷基(SO₂)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(SO₂)R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(SO₂)NR₇R₈、(CO)NR⁷R⁸、C_1-6-烷基NR⁷(CO)OR⁸以及可以包含一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的3-至7-元环，其中任何环状基团任选地与可以包含一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的5-至7-元环稠合；条件是至少一个R²、R³或R⁴是C_1-6-烷氧基卤代烷基，其任选地被一个或多个独立选择的基团R⁶取代；并且不能同时为C_1-6-烷氧基烷基；

R⁵选自H、C_1-6-烷基、C_1-6-烷基卤代、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_3-8-环烷基、C_1-6-烷基-C_3-8-环烷基、芳基、杂芳基以及可以包含一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的3-至7-元环；

R⁶选自H、C_1-6-烷基、F、Cl、Br、I、OH、-O-(CH₂)_2，3-O-、OC_1-6-烷基、OC_1-6-芳基、NH-C_1-6-烷基以及N(C_1-6-烷基)₂、C_1-6-烷基-N(C_1-6-烷基)₂、C_1-6-烷基-NH-C_1-6-烷基环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；

R⁷和R⁸独立地选自H、C_1-6-烷基、C_1-6-卤代烷基、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_3-8-环烷基、C_1-6-烷基-C_3-8-环烷基、环烷基、芳基、C_1-6-烷基芳基、C_0-6-烷基-杂环烷基、杂芳基以及C_1-6烷基杂芳基，其中任何环状基团任选地与可以包含一个或多个独立地选自C、N、O和S的杂原子的5-至7-元环稠合。

在一个实施方案中，X是C_0-7烷基并且R¹是5-或6-元杂芳基和非环状的3-7元胺。

在另一实施方案中，X是C_0-7烷基，R¹选自吗啉、1，4-氧杂环庚烷、硫代吗啉、1，4-硫氮杂环庚烷、1，4-硫氮杂环庚烷1-氧化物、1，4-硫氮杂环庚烷1，1-二氧化物、1，4-硫氮杂环己烷1-氧化物、1，4-硫氮杂环己烷1，1-二氧化物、氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌嗪和1，4-二氮杂环庚烷、噁二唑、异噁唑、异噻唑、呋喃、噻吩、噁唑、噻唑、吡唑和咪唑。

在另一实施方案中，R²、R³或R⁴中的至少一个选自C_1-6烷氧基卤代烷基，在另一方面，R²、R³或R⁴中的至少一个或全部选自单氟甲基、二氟甲基和三氟甲基基团。

在另一实施方案中，R²和R³中的至少一个选自C_1-6烷氧基卤代烷基，在另一方面，R²和R³中的至少一个或二者选自二氟甲基基团。

在另一实施方案中，R⁴选自C_1-6烷基、C_1-6烷基、C_1-6烷基环烷基以及C_1-6烷基芳基。在某些此类实施方案中，R⁴选自苯基甲基、苯基乙基、2-甲基-丁基、2，2-二甲基-丁基，优选选自苯基-甲基和2-甲基-丁基。

III.本申请化合物的制备

本申请的化合物可以通过多种合成方法来制备。特定结构特征和/或取代基的选择可以影响选择一种方法而不选择另一种方法。制备给定的式I的化合物的特定方法的选择在本领域技术人员的范围内。用于制备本申请的化合物的一些原料可以得自商业化学来源。其他原料，例如下文所述的那些，易于使用本领域公知的简明转换由可得的前体制备。

在一个实施方案中，通常根据路线I所示的方法来制备式I的化合物。以下路线中的变量如上文对式I所定义，除非另有规定。

路线I

在一个实施方案中，如路线1所示，本申请的化合物通过式II的二肽经由肽键形成而与式III的环氧酮偶联来制备。用于通过肽(酰胺)碱偶联化合物的方法是本领域公知的，并且例如在The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.I.，eds.Academic Press，1979中描述。

在一个实施方案中，根据用于肽键形成的标准操作制备式II的中间体化合物，如路线II所示，其中式IV和V的化合物经由酰胺键形成而偶联。例如，式IV(其中R¹任选地为保护基，例如Boc或Cbz)和式V(其中A为例如烷基或苄基)的化合物从商业来源获得或通过本领域已知的方法制备。在下文所述的具体实例中提供式II的二肽的实例。

路线II

在一个实施方案中，使用修正的文献方法，如路线III所示的那样来制备式III的环氧酮[参见，例如，Bioorg.Med.Chem.Lett.2007，17，6169-6171；Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，9，2283-2288；Eur.J.Org.Chem.2005，4829-4834；and J.Med.Chem.2009，52，3028-3038]。

路线III

如路线III所示，在一个实施方案中，式III的环氧酮化合物由式VI的受保护的氨基酸制成，所述式VI的受保护的氨基酸转化成相应的式VII的Weinreb酰胺[参见，例如，Synthesis 1983，676；Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，2283-2288]，然后是适当的锂、锌或格林试剂缩合，产生式VIII的不饱和酮。与碱性过氧化氢的后续环氧化提供了非对映异构体混合物形式的式IX的环氧化物衍生物，其易于通过柱色谱法分离。保护基(PG)通过诸如氢解反应(例如，其中PG为Cbz基团)或在酸性条件中的水解(例如，其中PG为Boc保护基)而去除，这产生盐(例如三氟乙酸盐)形式的式III的环氧化物。

在另外的实施方案中，根据路线IV，式III的环氧酮中间体由式VIII的不饱和酮制备，所述式VIII的不饱和酮被还原成相应的式X的烯丙醇。随后，Sharpless不对称环氧化产生式XI的羟基-酮化合物，其被氧化以提供式IX的环氧酮中间体，所述式IX的环氧酮中间体随后被水解以提供式III的中间体化合物[参见，例如，J.Med.Chem.2009，52，3028-3038；Tetrahedron：Asymmetry 2001，12，943-947]。

路线IV

在一个实施方案中，作为将C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基并入本申请化合物的R²、R³和/或R⁴中的典型实例，其中R²、R³和/或R⁴是C_1-6亚烷基-OH的式I化合物的前体化合物如式II、III、IV或V的化合物或其受保护的形式在诸如碘化亚铜(I)的金属催化剂的存在下、于将C_1-6亚烷基-OH转化成C_1-6亚烷基-OCHF₂的条件下与例如2-氟磺酰基二氟乙酸反应。本领域技术人员会理解使用本领域可得的方法和试剂用供替代的C_1-6卤代烷基功能化C_1-6亚烷基-OH基团的其他方法。

本申请的另一方面提供了制备式I的化合物或其盐、溶剂合物或前药的方法。制备本申请的化合物的方法如本文所述。

因此，本申请包括用于制备式I的化合物的方法，其包括使式II的化合物与式III的化合物在形成酰胺键的条件下反应：

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上文对式I的化合物所定义或是其受保护的形式；并且

去除保护基(若存在的话)。

在另一实施方案中，式II的化合物通过下述制备：使式VIII的化合物在环氧化双键的条件下反应：

其中PG是保护基，并且R⁴和R⁵如上文对式I的化合物所定义或是其受保护的形式，

然后去除保护基。

在另外的实施方案中，式II的化合物通过下述制备：使式VIII的化合物在将酮还原成相应的醇的条件下反应：

然后环氧化双键，然后氧化该醇，随后去除保护基。

此外，旨在本申请涵盖使用标准有机合成技术(包括组合化学)或通过生物方法(例如，细菌消化、代谢、酶转化等)制得的化合物。

在本文所述的全部方法中，要理解，若合适的话，以本领域技术人员容易理解的方式向各种反应物和中间体添加合适的保护基，并随后将其从各种反应物和中间体中去除。使用此类保护基的常见操作以及合适的保护基的实例描述于例如“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Green，P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience，New York，(1999)中。还要理解，可以在朝向最终产物的合成途径上的任何中间体或最终产物上进行通过化学操作将基团或取代基转换成另一基团或取代基，其中仅由将该阶段的分子携带的其他官能性与转换中采用的条件或试剂的固有不相容性来限制转换的可能类型。本领域技术人员会容易地理解此类固有不相容性以及通过以合适的顺序实施适当的转换和合成步骤来避免所述不相容性的方法。本文给出转换的实例，并且要理解所述的转换并非仅限于用于例示该转换的一般性基团或取代基。文献及其他合适的转换的描述在“Comprehensive Organic Transformations-A Guide to FunctionalGroup Preparations”R.C.Larock，VHC Publishers，Inc.(1989)中给出。文献及其他合适的反应的描述在有机化学的教科书中描述，例如“AdvancedOrganic Chemistry”，March，4th ed.McGraw Hill(1992)or，“OrganicSynthesis”，Smith，McGraw Hill，(1994)。用于纯化中间体和最终产物的技术包括例如在柱或转板上的正相和逆相色谱法、重结晶、蒸馏以及液-液或固-液萃取，其会由本领域技术人员容易地理解。

IV.组合物

使用一种或多种载体，将本申请的化合物以常规方式适当地配制成组合物。因此，本申请还包括包含一种或多种本申请的化合物以及载体的组合物。在另一实施方案中，本申请的化合物以适于体内给药的生物学相容的形式配制成用于向个体给药的组合物。因此，本申请还包括包含一种或多种本申请的化合物以及药学上可接受的载体的药物组合物。

本申请的化合物以取决于所选的给药途径的多种方式向个体给药，如本领域技术人员所理解的。给药本申请的化合物，例如通过口服给药、肠胃外给药、颊内给药、舌下给药、经鼻给药、直肠给药、贴剂给药、泵送给药或经皮给药以及相应配制的药物组合物。在一个实施方案中，给药经由用于周期或连续递送的泵。

肠胃外给药包括静脉内给药途径、动脉内给药途径、腹膜内给药途径、皮下给药途径、肌肉内给药途径、经上皮给药途径、经鼻给药途径、肺内给药途径(例如，通过使用气雾剂)、鞘内给药途径、直肠给药途径和局部给药途径(包括使用贴剂或其他经皮递送装置)。在一个实施方案中，肠胃外给药通过在选定时段内的连续输注。用于选择和制备合适的组合物的常规操作和成分描述于例如Remington’s PharmaceuticalSciences(2000-第20版)以及The United States Pharmacopeia：TheNational Formulary(USP 24 NF19)1999出版。

在一个实施方案中，本申请的化合物例如与惰性稀释剂或与可吸收的食用载体一起口服给药，或其包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，或其可以压制成片剂，或其直接与饮食的食物合并。在另一实施方案中，为了口服治疗给药，将化合物与赋形剂合并，并以可消化的片剂、口含片、糖锭剂、胶囊、囊片、微丸、颗粒剂、锭剂、咀嚼胶、粉末、糖浆剂、酏剂、糯米纸囊剂、水溶液或悬浮液等形式使用。对于片剂，使用的载体包括乳糖、玉米淀粉、柠檬酸钠以及磷酸盐。药学上可接受的赋形剂包括粘合剂(例如预凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)。在一个实施方案中，通过本领域公知的方法来包被片剂。对于用于口服的片剂、胶囊、囊片、微丸或颗粒剂，任选地使用经设计以控制活性成分释放的pH敏感性肠溶包衣，例如Eudragits^TM。口服剂型还包括调控释放的配制剂，例如立即释放配制剂和定时释放配制剂。调控释放的配制剂的实例包括例如缓释(SR)、延释(ER、XR或XL)、随时间释放或定时释放、控释(CR)或连续释放(CR或Contin)，其采用例如包被的片剂、渗透递送装置、包被的胶囊、微封装的微球、聚集的颗粒(例如分子筛型颗粒)或者中空渗透细纤维束或在纤维包中聚集或约束的中空渗透短纤维形式。定时释放的组合物配制在例如脂质体中，或者被配制成如下组合物，其中用不同降解的包衣例如通过微封装、多层包被等保护活性化合物。脂质体递送系统包括例如小单层囊泡、大单层囊泡以及多层囊泡。在一个实施方案中，脂质体由多种磷脂质形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。对于胶囊形式的口服给药，可用的载体或稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。

用于口服给药的脂质制剂采用例如溶液、糖浆或悬浮液形式，或者它们以用于在使用前与水或其他合适的载剂构建的干燥产物形式适当地呈现。当口服给药水性悬浮液和/或乳液时，本申请的化合物被适当地悬浮或溶解在与乳化剂和/或助悬剂组合的油相中。若需要，添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。通过常规方法与药学上可接受的添加剂一起制备用于口服给药的此类液体制剂，所述添加剂例如助悬剂(例如，山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用油)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性载剂(例如，扁桃仁油、油酯或乙醇)；和/或防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲基丙酯或者山梨酸)。可用的稀释剂包括乳糖和/或高分子量聚乙二醇。

还可以冻干本申请的化合物并使用所获得的冻干产物，以例如用于制备注射用产品。

在另一实施方案中，肠胃外给药本申请的化合物。例如，在适当地与诸如羟丙基纤维素的表面活性剂混合的水中制备本申请的化合物的溶液。也在具有或不具有醇的甘油、液体聚乙二醇、DMSO及其混合物中以及在油中制备分散液。在通常的储存和使用的条件下，这些制剂可包含防腐剂以防止微生物的生长。本领域技术人员会理解如何制备合适的配制剂。对于肠胃外给药，通常制备本申请的化合物的无菌溶液，并且适当地调节并缓冲该溶液的pH。对于静脉内使用，应控制溶质的总浓度以使制剂成为等渗的。对于眼部给药，例如通过本领域已知的眼部递送系统如涂药器或眼滴管来递送软膏或可滴的液体。在一个实施方案中，此类组合物包含粘液模拟物(mucomimetics)如透明质酸、硫酸软骨素、羟丙基甲基纤维素和/或聚乙烯醇，防腐剂如山梨酸、EDTA和/或苄基氯化铬，以及常用量的稀释剂或载体。对于肺内给药，稀释剂和/或载体会经选择以适于允许形成气雾剂。

在另一实施方案中，本申请的化合物配制为通过注射(包括使用常规导管插入技术或输注)来肠胃外给药。用于注射的配制剂例如与添加的防腐剂以单位剂型形式呈现，例如在安瓿中或在多剂量容器中。在一个实施方案中，组合物采用诸如在油性载剂或水性载剂中的无菌悬浮液、溶液或乳液的形式，并且任选地包含诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂的配方试剂。在所有情况下，该形式必须是无菌的，并且必须以存在易于注射性(syringability)的程度流动。或者，本申请的化合物适当地为用于在使用前与诸如无菌无热原水的合适载剂重构的无菌粉末形式。

在一个实施方案中，用于经鼻给药的组合物合宜地配制为气雾剂、滴剂、凝胶剂和粉末。对于鼻内给药或通过吸入来给药，本申请的化合物合宜地以溶液、干燥粉末配制剂或悬浮液形式从被患者挤压或泵送的泵式喷雾容器递送，或以气雾剂喷雾表现形式从加压容器或喷雾器递送。气雾剂配制剂通常包含活性物质在生理学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或精细悬浮液，并且通常以在密封容器中的无菌形式的单剂量或多剂量形式呈现，所述密封容器可以采用药盒形式或与雾化装置一起使用的替换物形式。或者，密封容器是单一散布装置，例如单剂量鼻用吸入器或装备有旨在使用后丢弃的计量阀的气雾剂分配器。当剂型包含气雾剂分配器时，其会包括推进物，该推进物例如压缩气体，如压缩空气，或有机推进物如氟氯烃。合适的推进物包括但不限于二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、七氟烷烃、二氧化碳或另外的合适气体。对于加压气雾剂，剂量单位适当地通过提供用于递送计量的量的阀来确定。在一个实施方案中，加压溶剂或喷雾器包括活性化合物的溶液或悬浮液。用于吸入器或吹入器的胶囊或药盒(例如由明胶制成)例如经配制以包含本申请化合物和诸如乳糖或淀粉的合适粉末基体的粉末混合物。在一个实施方案中，气雾剂剂型还采用泵式雾化器(pump-atomizer)形式。

适于颊内给药或舌下给药的组合物包括片剂、锭剂以及软锭剂，其中活性成分与诸如糖、阿拉伯树胶、黄蓍胶和/或明胶和甘油的载体一起配制。用于直肠给药的组合物合宜地为包含诸如可可油的常用栓剂基体的栓剂形式。

本申请的栓剂形式可用于阴道给药、尿道给药和直肠给药。此类栓剂通常由在室温下为固体但在体温下熔化的物质的混合物构成。常用于产生此类载剂的物质包括但不限于可可油(还称为可可脂)、甘油明胶、其他甘油酯、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇的混合物和/或聚乙二醇的脂肪酸酯。对于栓剂剂型的进一步讨论，参见，例如Remington′sPharmaceutical Sciences，16th Ed.，Mack Publishing，Easton，PA，1980，pp.1530-1533。

在一个实施方案中，本申请的化合物与作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物组合。此类聚合物包括例如聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺-苯酚，或被棕榈酰残基取代的聚氧乙烯-聚赖氨酸。在另一实施方案中，本申请的化合物与一类可用于实现药物控释的可生物降解的聚合物组合，所述聚合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

本申请的化合物(包括其药学上可接受的盐、溶剂合物和前药)适当地原样使用，但通常会以药物组合物形式给药，其中一种或多种本申请的化合物(活性成分)与药学上可接受的载体相联合。根据给药方式，药物组合物会包含约0.05wt％至约99wt％或约0.10wt％至约70wt％的活性成分，以及约1wt％至约99.95wt％或约30wt％至约99.90wt％的药学上可接受的载体，所有重量百分比均基于总组合物。

本申请的化合物单独使用或与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的其他已知药剂组合使用。当与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的其他已知药剂组合使用时，一个实施方案是本申请的化合物与那些试剂同时给药。如本文所用，两种物质向个体的“同时给药”表示提供两种物质中的每一种物质以使它们同时在个体中均为生物活性的。给药的具体细节会取决于两种物质在彼此存在时的药代动力学，并且可以包括在彼此数小时内给药两种物质，或甚至在给药一种物质24小时内给药另一种物质，只要药代动力学是适当的即可。合适的给药方案的涉及对于本领域技术人员是常规的。在特定实施方案中，将基本同时给药两种物质，即，在彼此数分钟内，或以包含这两种物质的单一组合物形式给药两种物质。本申请的另一实施方案是以非同时方式向个体给药试剂的组合。在一个实施方案中，本申请的化合物与另一种治疗剂在单独的单位剂型中或一起在单一单位剂型中同时或依次给药。因此，本申请提供了包含式I的化合物、额外的治疗剂以及药学上可接受的载体的单一单位剂型。

本申请的化合物的剂量根据许多因素而变化，例如化合物的药效性质，给药方式，接受者的年龄、健康和体重，症状的性质和程度，治疗的频率和同步治疗(如果有的话)的类型，以及化合物在待治疗的个体中的清除率。本领域技术人员会基于上述因素确定适当的剂量。在一个实施方案中，本申请的化合物初始根据临床反应以合适的剂量给药，所述合适的剂量任选地根据需要而调节。会通常选择剂量以将本申请化合物的血清水平保持为约0.01μg/cc至约1000μg/cc，或约0.1μg/cc至约100μg/cc。作为典型的实例，一种或多种本申请的化合物的口服剂量对于成人会为约1mg/天至约1000mg/天，适当地为约1mg/天至约500mg/天，更适当地为约1mg/天至约200mg/天。对于肠胃外给药，典型的量为约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约0.1mg/kg至约1mg/kg。对于口服给药，典型的量为约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约0.1mg/kg至约1mg/kg。对于栓剂形式给药，典型的量为约0.1mg/kg至约10mg/kg或约0.1mg/kg至约1mg/kg。在本申请的实施方案中，组合物被配制为口服给药，并且化合物适当地为包含0.25、0.5、0.75、1.0、5.0、10.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、75.0、80.0、90.0、100.0、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg活性成分/片剂的片剂形式。在一个实施方案中，本申请的化合物以单一日剂量给药，或总日剂量被分成两个、三个、四个或更多个日剂量。

V.本申请的方法和用途

本申请的化合物已表现为能够抑制蛋白酶体活性。

因此，本申请包括抑制细胞(在生物样品中或在患者中)的蛋白酶体的方法，其包括向所述细胞给药有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于抑制细胞的蛋白酶体的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于抑制细胞的蛋白酶体的药物中的用途。本申请还包括用于抑制细胞的蛋白酶体的一种或多种本申请的化合物。

因为已证明本申请的化合物能够抑制蛋白酶体活性，所以本申请的化合物可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况。因此，本申请的化合物可用作药物。因此，本申请包括用作药物的本申请的化合物。

本申请还包括治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物。

在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是肿瘤性病症。因此，本申请还包括治疗肿瘤性病症的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于治疗肿瘤性病症的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于治疗肿瘤性病症的药物中的用途。本申请还包括用于治疗肿瘤性病症的一种或多种本申请的化合物。在一个实施方案中，治疗以在需要此类治疗的个体中有效地减轻肿瘤性病症的至少一种症状(尤其例如细胞增殖降低或肿瘤质量降低)的量进行。

已证明本申请的化合物有效针对60种人肿瘤细胞系组的细胞系。因此，在本申请的另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是癌症。因此，本申请还包括治疗癌症的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于治疗癌症的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。本申请还包括用于治疗癌症的一种或多种本申请的化合物。在一个实施方案中，给药所述化合物以在易患癌症的诸如哺乳动物的个体中预防癌症。

在一个实施方案中，所述癌症选自皮肤癌、血癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、乳腺癌如乳腺癌、肝癌、舌癌和肺癌。在另一实施方案中，癌症选自白血病、淋巴瘤、非霍金奇淋巴瘤和多发性骨髓瘤。在本申请的另一实施方案中，所述癌症选自白血病、黑色素瘤、肺癌、结肠癌、脑癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和肾癌。

在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是与直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性相关的疾病、病症或病况。在另一实施方案中，所述直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性是细胞的增殖活性。因此，本申请还包括抑制细胞的增殖活性的方法，其包括向所述细胞给药有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于抑制细胞的增殖活性的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于抑制细胞的增殖活性的药物中的用途。本申请还包括用于抑制细胞的增殖活性的一种或多种本申请的化合物。

本申请还包括抑制细胞(在生物样品中或在个体中)的直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性的方法，其包括向所述细胞给药有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于抑制细胞的直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性的用途，以及一种或多种本申请的化合物在制备用于抑制由细胞的蛋白酶体抑制直接或间接影响的不受控制的和/或异常的细胞活性的药物中的用途。本申请还包括用于抑制由细胞的蛋白酶体抑制直接或间接影响的不受控制的和/或异常的细胞活性的一种或多种本申请的化合物。

本文已证实本申请实施例1的化合物与硼替佐米或地塞米松的组合的给药能够是协同的。因此，本申请还包括治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的另一种已知药剂的组合。本申请还包括本申请的一种或多种的化合物与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的另一已知药剂的组合用于治疗由蛋白酶体抑制的疾病、病症或病况的用途，以及本申请的一种或多种的化合物与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的另一已知药剂的组合在制备用于治疗由蛋白酶体抑制的疾病、病症或病况的药物中的用途。本申请还包括用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的本申请的一种或多种的化合物与可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的另一已知药剂的组合。在一个实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是癌症，例如多发性骨髓瘤。在另一实施方案中，可用于治疗由蛋白酶体抑制介导的另一已知药剂是硼替佐米或地塞米松。

本申请还包括抑制能够降解蛋白的蛋白酶体对该蛋白的降解的方法，其包括使所述蛋白酶体与有效量的一种或多种本申请的化合物接触。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于抑制能够降解蛋白的蛋白酶体对该蛋白的降解的用途，以及一种或多种本申请的化合物在制备用于抑制能够降解蛋白的蛋白酶体对该蛋白的降解的药物中的用途。本申请还包括用于抑制能够降解蛋白的蛋白酶体对该蛋白的降解的一种或多种本申请的化合物。

在一个实施方案中，用泛素标记蛋白。在另一实施方案中，所述蛋白为p53。

本申请还包括治疗加速和/或增强的蛋白水解的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的一种或多种本申请的化合物。本申请还包括一种或多种本申请的化合物用于治疗加速和/或增强的蛋白水解的用途以及一种或多种本申请的化合物在制备用于治疗加速和/或增强的蛋白水解的药物中的用途。本申请还包括用于治疗加速和/或增强的蛋白水解的一种或多种本申请的化合物。在一个实施方案中，所述个体是具有加速和/或增强的蛋白水解或倾向具有加速和/或增强的蛋白水解的哺乳动物。

在本申请的另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自与细胞周期、内质网相关蛋白降解、转录因子调节、基因表达、细胞分化、免疫反应、血管生成以及细胞凋亡的调节或诱导相关的疾病、病症或病况。

在本申请的另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自病毒感染、炎性疾病、自身免疫性疾病、心脏病、年龄相关性眼病和神经变性疾病。

在本申请的另一实施方案中，所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自HIV感染、1型糖尿病、2型糖尿病、变态反应、哮喘、炎性关节炎、类风湿关节炎、骨质疏松症、骨关节炎、银屑病、血清阴性脊柱关节病(spondyloarthopathies)、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺疾病、充血性心力衰竭、压力超负荷型心肌肥厚、病毒性心肌炎、心肌缺血性损伤、心脏病、动脉粥样化形成(artherogenesis)、动脉粥样硬化、糖尿病患者的心脏事件(cardiac events indiabetes)、糖尿病患者的血管疾病(vascular disorders in diabetes)、肌萎缩、肥胖、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩侧索硬化、自身免疫性甲状腺病、恶病质、克罗恩氏病、炎性肠道疾病、败血病、乙型肝炎、移植排斥及相关免疫学、视网膜退化、白内障和青光眼。

在另一实施方案中，本申请的化合物用于治疗人类以及其他哺乳动物的与炎症相关的疾病或病症。示例性炎性病况尤其包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化、退行性关节病、脊柱关节病(spondouloarthropathies)、骨质疏松症、糖尿病、阿尔茨海默病、帕金森氏病、休克。

在另一实施方案中，本申请的化合物用于治疗选自过敏和呼吸病况的疾病或病症，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧气中毒、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征以及任何慢性阻塞性肺疾病(COPD)。

在另一实施方案中，本申请的化合物用于在患有所述疾病或病症或倾向患有所述疾病或病症的哺乳动物中治疗选自以下的疾病或病症：病毒感染(HIV-1和HIV-2)、骨质疏松症、骨关节炎、银屑病、再狭窄心脏病、糖尿病相关性心血管疾病、炎症性肠疾病、炎症和自身免疫性疾病(关节炎、银屑病)、血清阴性脊柱关节病(SpA)、肌萎缩、肥胖、过敏症和哮喘、包括阿尔茨海默病(AD)和帕金森氏病(PD)的神经变性疾病，以及自身免疫疾病。

向分子中引入卤原子也提供了将该分子用于放射性同位素标记应用的机会。例如，¹⁸F用作正电子发射断层显像术(PET)的灵敏技术中的放射性同位素标记示踪剂。因此，本申请还包括出于诊断和成像目的来使用式I的化合物的方法，其中式I的化合物包含至少一个放射性同位素标记，例如¹⁸F。

因此，本申请包括一种或多种本申请的化合物用于放射性同位素标记成像的用途，其中本申请的化合物包含至少一个放射性同位素标记，例如¹⁸F。

本申请还包括放射性同位素标记成像的方法，其包括使待成像的个体与一种或多种本申请的化合物接触，并且对该个体执行成像技术，其中本申请的化合物包含至少一个放射性同位素标记，例如¹⁸F。在一个实施方案中，所述个体是人类或动物，并且成像技术是PET，并且一种或多种本申请的化合物通过向个体给药成像有效量的化合物而与该个体接触。

以下非限制性实施例是本申请的例示。

实施例

向分子中引入氟原子可以实现母体分子的物理和/或化学性质的改变，例如其可以导致药代动力学性质和/或生物活性提高。氢原子的替换还可以导致热稳定性和代谢稳定性得到改善。改善的代谢稳定性通常是期望的特征，因为存在下述可能性，即，体内分解可以产生毒性作用。氟原子的性质包括其的小尺寸、低可极化性、高电负性及其与碳形成强键的能力。因此，包含氟化基团如-OCHF₂的生物活性化合物是有用的。

烷氧基或芳氧基与氟原子的偕合(geminal combination)提供了键/非键共振的可能性，这可以由共价和离子极限结构的叠加而在形式上表示。显现为碳-卤键的延长和弱化以及碳-氧键的缩短和增强的这种现象被称为广义端基异构效应(generalized anomeric effect)[Schlosser等人，Chem.Rev.2005，105，827-856]。

A.一般方法

本文所用的所有原料均是商购的或先前在文献中描述的。除非另外指出，使用TMS或残留溶剂信号作为内参，在作为溶剂的氘代氯仿中，于Bruker 300、Bruker DPX400或Varian+400光谱仪(对于¹H NMR分别在300MHz、400MHz和400MHz下操作)上记录¹H NMR和¹³C NMR谱。所有报告的化学位移在δ标尺上以ppm计，并且出现在记录中的信号的精细分裂例如通常指示为s：单峰，br s：宽单峰，d：双重峰，t：三重峰，q：四重峰，m：多重峰。除非另外指出，在下表中，使用CDCl₃作为溶剂，在400MHz下获得¹H NMR数据。

使用Chem Elut Extraction Columns(Varian，cat#1219-8002)、MegaBE-SI(Bond Elut Silica)SPE Columns(Varian，cat#12256018；12256026；12256034)或通过在填充二氧化硅的玻璃柱中的快速色谱法来进行产物的纯化。

B：化合物的合成和表征

I.式II的中间体化合物的制备

路线V概述了用于制备式II(a)(i)的中间体化合物、用于制备其中R₂和/或R₃为-CH₂-O-CHF₂基团的式I的化合物的式IV(a)和式V(a)的中间体化合物的合成。

路线V

用于路线V的试剂和条件：(i)2-氟磺酰基二氟乙酸，Cu(I)I，Na₂SO₄，CH₃CN 0℃/30min；(ii)H₂，Pd/C(10％)，THF，RT/2hrs；(iii)2M HCl/Et₂O，0℃至RT/2hrs。

(a)(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(XIII(a))的制备：

向式XII(a)的化合物2-(叔丁氧羰基氨基)-3-羟基丙酸苄酯(1g，3.38mmol)在乙腈(10mL)中的搅拌的溶液添加碘化亚铜(I)(64.4mg，0.338mmol)和硫酸钠(48.1mg，0.338mmol)。将所得的混合物在60℃搅拌，并在1.5h时段内用2，2-二氟-2-氟磺酰基乙酸(524μL，5.08mmol)以在乙腈(2mL)中的溶液形式滴加处理。在完成添加之后，将混合物另外搅拌30min，然后冷却至室温。将混合物用乙醚稀释并用盐水(2×)、水(3×)和盐水(1×)洗涤。将有机相干燥、过滤并真空浓缩，然后在含0-30％乙酸乙酯的己烷中用色谱法分离，从而得到无色粘稠油状的式XIII(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(458mg，40％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.32-7.38(m，5H)，6.18(wt，1H)，5.28(dd，1H)，5.19(dd，2H)，4.55(dt，1H)4.22(td，1H)，4.15(m，2H)，1，38(s，9H)。

或者，使用2，2-二氟-1，3-二甲基咪唑烷作为二氟甲基插入试剂，通过二氟甲基插入(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-硫代甲酰氧基丙酸苄酯，以40-90％的收率制备式XIII(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯。

(b)(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸(IV(a))的制备：

将式XIII(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(1.76g，5.09mmol)在THF中的溶液与10％Pd/C(360mg)在氢气氛下一起搅拌2小时。将反应混合物过滤并浓缩以得到粘稠无色油状的式IV(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸(1.3g，100％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)6.21(wt，1H)，5.35(d，1H)，4.59(m，1H)，4.35(m，1H)，4.21(m，1H)and 1.42(s，9H)。

(c)(S)-2-氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯盐酸盐(V(a))的制备：

将式XIII(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(2.11g，5.89mmol)在乙醚(10mL)中的溶液用2M HCl/乙醚处理，并在0℃搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干燥，并且与己烷/乙醚一起研磨，从而得到白色粉末状的式V(a)的化合物(S)-2-氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯盐酸盐(1.15g，69％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.40-7.33(m，5H)，6.53(broad s，1H)，6.18(wt，1H)，5.25(dd，1H)，5.21(dd，2H)，4.53(dt，1H)4.18(td，1H)，4.16-4.13(m，2H)。

路线VI概述了用于制备其中R₂和R₃为-CH₂-O-CHF₂基团的式I的化合物的式II(a)(i)的中间体化合物的合成。

路线VI

用于路线VI的试剂和条件：(i)EDCI.HCl，HOBt，N-甲基吗啉，CH₂Cl₂，0℃/ON；(ii)H₂，Pd/C(10％)，THF，RT/1hrs。

(d)(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(II(a)(ii))的制备

在0℃，向式IV(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸(1.15g，4.49mmol)和式V(a)的化合物(S)-2-氨基-3-二氟甲氧基丙酸苄酯盐酸盐(1.15g，4.08mmol)、HOBt(0.689g，5.10mmol)和EDCI.HCl(0.867g，5.10mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液滴加N-甲基吗啉(0.45mL，8.16mmol)。使反应混合物升温至室温并搅拌过夜。然后，混合物用乙酸乙酯稀释，并依次用水、1N HCl和盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法纯化，用含10％至12.5％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到灰白色固体状的式II(a)(ii)的化合物(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(1.29g，65％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.35-7.41(m，5H)，7.18(td，1H)，6.18(wt，1H)，6.22(wt，1H)，5.25-5.20(m，1H)，5.19(s，2H)，4.82(td，1H)，4.42(br s，1H)，4.31(td，1H)，4.20-4.15(m，2H)，4.01(dd，1H)，1.41(s，9H)。

以类似方式，使用上述一般操作合成表1所示的中间体化合物。

(e)(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-二氟甲氧基丙酸(II(a)(i))的制备

将式II(a)(ii)的化合物(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-二氟甲氧基丙酸苄酯(1.27g，2.63mmol)在THF中的溶液与10％Pd/C(400mg)在氢气氛下一起搅拌1小时。将反应混合物过滤并浓缩以得到粘稠灰白色泡沫状的式II(a)(i)的化合物(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-二氟甲氧基丙酸(1.03g，～100％)。NMR(d₆-DMSO，400MHz)δ(ppm)8.34(d，J＝8Hz，1H)，7.12(d，J＝8Hz，1H)，6.66(t，J＝76Hz，1H)，6.62(t，J＝76Hz，1H)，4.57-4.51(m，1H)，4.37-4.29(m，1H)，4.15-4.09(m，1H)，4.04-3.97(m，2H)，3.92-3.83(m，1H)，1.37(s，9H)。

路线VII概述了用于制备其中R₂和/或R₃为-CH₂-O-CH₃基团的式(I)的化合物的式IV(b)和式V(b)的化合物中间体的合成。

路线VII

用于路线VII的试剂和条件：(i)BF₄(OMe)₃，质子海绵，CH₂Cl₂，0℃至TR/ON；(ii)TFA，CH₂Cl₂，0℃/30min；(iii)HCl/Et₂O。

(a)(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸苄酯(XIII(b))的制备：

向式XII(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-羟基丙酸苄酯(1.7g，5.76mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液添加三甲基氧鎓四氟硼酸盐(1.11g，7.50mmol)，然后分批添加质子海绵(1.61g，7.50mmol)。在室温下搅拌24小时之后，将溶液浓缩，并且将残留物溶解在乙酸乙酯中，并通过硅藻土垫过滤溶液。将滤液用1M HCl和盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。使用含5％至15％乙酸乙酯的己烷的硅胶快速色谱法得到无色油状的式XIII(b)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸苄酯(1.24g，69.6％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.35-7.29(m，5H)，4.90-4.87(m，1H)，4.51(s，2H)，3.92-3.87(m，1H)，3.80-3.78(m，1H)，3.56(dd，2H)，3.42(dd，1H)，3.33(s，3H)，1.42(s，9H)。

(b)(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸(IV(b))的制备：

以与上述式IV(a)的化合物类似的方式，由式XIII(b)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸苄酯(0.76g，2.46mmol)制备式IV(b)的化合物，从而提供粘稠无色油状的式IV(b)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸(0.540mg，100％)。

(c)(S)-2-氨基-3-甲氧基丙酸苄酯盐酸盐(V(b))的制备

以与上述式V(a)的化合物类似的方式，由式XIII(b)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-甲氧基丙酸苄酯(0.80g，2.59mmol)制备盐酸盐形式的式V(b)的化合物，从而提供白色粉末状的式V(b)的化合物(S)-2-氨基-3-甲氧基丙酸苄酯盐酸盐(100％)。

路线VIII概述了用于制备其中R₂为-CH₂-O-CHF₂基团且R₃为-CH₂-O-CH₃基团的式(I)的化合物的式II(b)(i)的中间体化合物的合成。

路线VIII

用于路线VIII的试剂和条件：(i)EDCI.HCl，HOBt，DIPEA，CH₂Cl₂，0℃/ON；(ii)H₂，Pd/C(10％)，THF，RT/2hrs。

(d)(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-甲氧基丙酸苄酯(II(b)(ii))的制备：

以与上述式II(a)(ii)的化合物类似的方式，由式IV(a)的化合物(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酸和式V(b)的化合物(S)-2-氨基-3-甲氧基丙酸苄酯盐酸盐制备灰白色泡沫状的式II(b)(ii)的化合物。

(e)(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-甲氧基丙酸(II(b)(i))的制备：

以与上述式II(a)(i)的化合物类似的方式，由II(b)(ii)的化合物(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-甲氧基丙酸苄酯制备灰白色粘稠泡沫状的式II(b)(i)的化合物。

路线IX概述了用于制备其中R₂为-CH₂-O-CH₃基团且R₃为-CH₂-O-CHF₂基团的式(I)的化合物的式II(c)(i)的中间体的合成。

路线IX

用于路线IX的试剂和条件：(i)EDCI.HCl，HOBt，DIPEA，CH₂Cl₂，0℃/ON；(ii)H₂，Pd/C(10％)，THF，RT/2hrs。

以与上述一般操作类似的方式合成表2所示的其他化合物。

II.式III的中间体化合物的制备

路线X概述了用于制备其中R⁴为-CH₂C₆H₅且R⁵为甲基的式I的化合物的式III的中间体环氧酮的合成。

路线X

用于路线X的试剂和条件：(i)iBuOCOCl，N-甲基吗啉，HNMe(OMe)·HCl，TEA，CH₂Cl₂，0℃/45min；(ii)异丙烯基溴化镁，THF，0℃/2hrs或2-溴丙烯，t-BuLi，Et₂O，-78℃/2hrs；(iii)(a)H₂O₂(35％)，苄腈，iPr₂EtN，MeOH，0℃至RT/ON；(b)硅胶柱色谱法；(iv)TFA，CH₂Cl₂，0℃/30min。

以与路线X类似的方式，合成用于制备其中R₄为CH₂CH(CH₃)₂且R₅为甲基的式I的化合物的式III(b)的中间体环氧酮。

(a)[(S)-1-(甲氧基甲基氨甲酰基)-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(VII(a))的制备：

在0℃，向(S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基丙酸(24.85g，93.66mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液添加N-甲基吗啉(10.3mL，93.66mmol)，然后添加氯甲酸异丁酯(12.25mL，93.66mmol)。将反应混合物搅拌20min，然后一次添加N，O-二甲基羟胺盐酸盐(9.14g，93.66mmol)。随后，在15min内滴加三乙胺(13mL，93.66mmol)。将反应混合物再搅拌1小时，然后用1N HCl(100mL)将其淬灭，并且用饱和NaHCO₃和盐水(500mL)洗涤有机相。有机层经(MgSO₄)干燥，过滤并真空浓缩，从而得到透明粘稠油状的式VII(a)的Weinreb酰胺，[(S)-1-(甲氧基甲基氨甲酰基)-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(29.3g，100％)。¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)：δ(ppm)7.33-7.09(m，6H)，4.61-4.47(m，1H)，3.70(s，3H)，3.08(s，3H)，2.89-2.78(m，1H)，2.75-2.63(m，1H)，1.29(s，9H)。

(b)((S)-1-苄基-3-甲基-2-氧代丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(VIII(a))的制备：

在0℃，向上述式VII(a)的Weinreb酰胺(28.88g，93.66mmol)在THF(150mL)中的0℃溶液添加异丙烯基溴化镁(386mL，192.9mmol)的0.5M THF溶液，历时40min。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时。然后，在0℃，用1N HCl(350mL)淬灭反应混合物。将水层用EtOAc(2×200mL)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，从而在使用5％至10％乙酸乙酯/己烷的硅胶快速色谱法之后，得到白色粉末状的式VIII(a)的化合物(S)-1-苄基-3-甲基-2-氧代-丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(14.5g，53.5％)。¹H NMR(400MHz，d₆-DMSO)：δ(ppm)7.33-7.09(m，6H)，4.61-4.47(m，1H)，3.70(s，3H)，3.08(s，3H)，2.89-2.78(m，1H)，2.75-2.63(m，1H)，1.29(s，9H)。

(c)[(S)-1-苄基-2-((S)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯和[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(IX(a))的制备：

在0℃，向上述式VIII(a)的化合物((S)-1-苄基-3-甲基-2-氧代-丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(5.78g，20mmol)在MeOH(250mL)中的溶液添加苄腈(15.46mL，150mmol)、H₂O₂35％的水溶液(34.4mL，400mmol)和二异丙基乙胺(26mL，150mmol)。在0℃至室温下，将反应混合物搅拌过夜。将所得的混合物减压浓缩至干燥。用冰水(100mL)淬灭所获得的残留物，从而得到白色沉淀物。在过滤后，用含20％乙酸乙酯的己烷(2×200mL)萃取水层。有机层依次用水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，从而在使用3％至3.5％乙酸乙酯/己烷的硅胶快速色谱法之后，得到式S，R-IX(a)的化合物，白色固体状的[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(3.33g，54％)(¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.21-7.29(m，3H)，7.17-7.21(m，2H)，4.92(dd，1H)，4.58(td，1H)，3.25(d，1H)，3.18(dd，1H)，2.94(d，1H)，2.75(dd，1H)，1.45(s，3H)，1.39(s，9H))以及式S，S-IX(a)的化合物，粘稠油状的[(S)-1-苄基-2-((S)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.66g，27％)(¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.30-7.22(m，3H)，7.20-7.15(m，2H)，4.95(dd，1H)，4.62(td，2H)，3.25(d，1H)，3.00(dd，1H)，2.82(dd，1H)，2.61(dd，2H)，1.45(s，3H)，1.40(s，9H))。

(S)-2-氨基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸盐(S，R-III(a))的制备：

在0℃，向(2.20g，7.20mmol)的式S，R-IX(a)的化合物[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯在二氯甲烷(10mL)中的溶液添加TFA(3.3mL)。将反应混合物搅拌30min。将过量的TFA蒸干，并将所获得的残留物与含20％乙醚的己烷(20mL)一起研磨，然后与100％己烷一起研磨。在蒸发溶剂之后，真空干燥得到灰白色粉末状的式S，R-III(a)的化合物(S)-2-氨基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸盐(2.3g，100％)。¹H NMR(300MHz，methanol-d)：δ(ppm)7.22-7.44(m，5H)，4.32(dd，1H)，4.39(dd，1H)，3.17(dd，1H)，2.95(dd，1H)，2.88(dd，1H)，1.57(s，3H)。

或者，可以如路线XI和XII所概述的那样制备式S，S-III(a)和S，R-III(a)的环氧酮。

路线XI

用于路线XI的试剂和条件：(i)NaBH₄，CeCl₃·7H₂O，MeOH，THF，0℃/30min；(ii)(a)VO(acac)₂，t-BuO₂H，CH₂Cl₂，0℃至RT/1hr；(b)硅胶柱色谱法；(iii)(a)戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane)，CH₂Cl₂，0℃至RT/2hrs；(b)TFA，CH₂Cl₂，0℃/30min。

路线XII

用于路线XII的试剂和条件：(i)iBuOCOCl，N-甲基吗啉，HNMe(OMe).HCl，TEA，CH₂Cl₂，0℃/1hr.；(ii)异丙烯基溴化镁，THF，0℃/2hrs或2-溴丙烯，t-BuLi，Et₂0，-78℃/2hrs.；(iii)(a)H₂O₂(35％)，苄腈，i-Pr₂EtN，MeOH，0℃至RT/ON；(b)硅胶柱色谱法；(iv)H₂，Pd/C(10％)，TFA，RT/6hrs。

II.式(I)的化合物的制备

实施例1

路线XIII概述了实施例1的式I的化合物2-甲基噻唑-5-羧酸((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺的制备。

路线XIII

用于路线XIII的试剂和条件：(i)HBTU，HOBt，DIPEA，THF，0℃至RT/ON；(ii)H₂，Pd/C(10％)，THF，RT/2hrs.；(iii)HBTU，HOBt，DIPEA，THF，2-甲基噻唑-5-羧酸，0℃至RT/ON。

(a)((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(XIV(a))的制备：

在0℃，向式II(b)(i)的化合物(S)-2-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-二氟甲氧基丙酰基氨基)-3-甲氧基丙酸(2.75g，7.028mmol)和式S，R-III(a)的化合物(S)-2-氨基-1-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸盐(12.04g，6.389mmol)、HOBt(1.04g，7.67mmol)、HBTU(2.91g 7.67，mmol)在THF(75mL)中的溶液滴加DIPEA(2.22mL，12.75mmol)。使反应混合物升温至室温并搅拌过夜。然后，用冰水淬灭混合物，用NaHCO₃和盐水洗涤，并用2×100mL的乙酸乙酯萃取。有机层经MgSO₄干燥，并浓缩。粗制产物通过柱色谱法纯化，用含20％至30％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到灰白色固体状的题述化合物(2.7g，73％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.21-7.32(m，3H)，7.14(dd，2H)，6.85(wd，1H)，6.72(wd，1H)，6.18(wt，1H)，6.14(wt，1H)，5.26(br s，1H)，4.86(td，1H)，4.58(td，1H)，4.36(m，1H)，4.32-4.08(m，2H)，4.01(dd，1H)，3.90(dd，1H)，3.24(d，1H)，3.12(dd，1H)，2.90(d，1H)，2.85(dd，1H)，1.48(s，3H)，1.44(s，9H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表3所示的化合物。

(b)(S)-2-氨基-N-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}-3-二氟甲氧基丙酰胺三氟乙酸盐(XV(a))的制备：

在0℃，向式XIV(a)的化合物((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.68g，4.62mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液添加TFA(10mL)，并将所得的混合物搅拌1hr。将过量的TFA蒸干，并将所获得的残留物与含乙醚的己烷(2×20mL)一起研磨，从而得到浅黄色固体状的式XV(a)的化合物(S)-2-氨基-N-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}-3-二氟甲氧基丙酰胺三氟乙酸盐(2.34g，85％)。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO)：δ(ppm)7.42-7.32(m，3H)，7.23(dd，2H)，6.85(wd，1H)，6.71(br s，1H)，6.68(wd，1H)，6.10(w t，1H)，5.98(wt，1H)，5.12(br s，1H)，4.78(td，1H)，4.51(td，1H)，4.29(m，1H)，4.30-3.99(m，2H)，3.97(dd，1H)，3.85(dd，1H)，3.21(d，1H)，3.10(dd，1H)，2.86(d，1H)，2.81(dd，1H)，1.45(s，3H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表4所示的化合物。

(c)2-甲基噻唑-5-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺(实施例1)的制备：

在0℃，向式XV(a)的化合物(S)-2-氨基-N-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基}-3-二氟甲氧基丙酰胺三氟乙酸盐(2.2g，3.70mmol)、2-甲基噻唑-5-羧酸(0.635g，4.44mmol)、HOBt(0.649g，4.81mmol)和HBTU(1.82g，4.81mmol)在THF(70mL)中的溶液滴加DIPEA(1.29mL，7.4mmol)。使反应混合物升温至室温并搅拌过夜。然后，用冰水淬灭混合物，用NaHCO₃和盐水洗涤，并用2×100mL的乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸镁干燥，并浓缩。粗制产物通过柱色谱法纯化，用含70％至80％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到浅黄色固体状的实施例1的式I的化合物(2.11g，94.6％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)8.10(s，1H)，7.28-7.25(m，3H)，7.20(dd，2H)，6.82(d，1H)，6.79(d，1H)，6.65(d，1H)，6.18(wt，1H)，6.14(wt，1H)，4.90-4.65(m，2H)，4.60(td，1H)，4.35(dd，1H)，4.25(dd，1H)，4.05(td，1H)，3.95(dd，1H)，3.30(d，1H)，3.28(dd，1H)，3.16(d，1H)，2.90(dd，1H)，2.85(dd，1H)，2.75(s，3H)，1.41(s，3H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表5所示的实施例2至24的式I的化合物。

实施例25

根据以下合成操作来制备实施例25的式I的化合物(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-N-[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]-3-苯基丙酰胺。

(a)2-吗啉代乙酸叔丁酯的制备：

向溴乙酸叔丁酯(8.47mL，57.4mmol)在THF(50mL)中的搅拌溶液滴加三乙胺(8mL，57.4mmol)和吗啉(5.02mL，57.4mmol)的1∶1混合物(观察到轻微的放热)，并将所得的白色悬浮液在60℃搅拌2h。将混合物用水(100mL)和饱和碳酸钠(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机物用饱和碳酸钠(100mL)、水(3×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，然后在含0％至100％乙酸乙酯的己烷中进行色谱分离。将含产物的流分真空浓缩，得到浅黄色液体状的题述产物(11.5g，定量的)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)3.78-3.71(m，4H)，3.10(s，2H)，2.59-2.54(m，4H)，1.46(m，9H)。

(b)2-吗啉代乙酸盐酸盐的制备：

将2-吗啉代乙酸叔丁酯(11g，54.7mmol)与含4M HCl的二氧杂环己烷(54mL)一起搅拌，得到白色沉淀物(观察到轻微的放热)，使其在室温下边搅拌边缓慢溶解。在完成溶解之后10分钟，混合物凝固。然后，将混合物升温至60℃，并将稠悬浮液剧烈搅拌过夜。然后，将混合物冷却至室温，用乙醚(60mL)稀释，并过滤以收集白色固体状的题述化合物(8g，80％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)：δ(ppm)4.13(s，2H)，3.94(brm，4H)，3.41(brm，4H)。

(c)(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酸苄酯的制备：

向Boc-Phe-OH(10g，37.7mmoL)在DMF(50mL)中的搅拌溶液添加碳酸钾(7.81g，56.5mmol)，然后添加苄基氯(4.55mL，39.6mmol)，并将所得的悬浮液在60℃搅拌3天。混合物用水(400mL)稀释并用乙酸乙酯(75mL，2×25mL)萃取。合并的有机物用盐水(200mL)、水(3×100mL)和盐水(50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，然后硅胶上进行色谱分离，用含0％至20％乙酸乙酯的己烷洗脱。将含产物的流分真空浓缩，得到白色固体状的题述化合物(12.84g，95％)。

以与上述一般操作类似的方式合成(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸苄酯。

(d)(2S)-2-氨基-3-苯基丙酸苄酯盐酸盐的制备：

将(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酸苄酯(12.8g，36mmol)在含2M HCl的乙醚(90mL)和含4M HCl的二氧杂环己烷(18mL)中搅拌，并将所得的混合物在室温下搅拌过夜。然后，将混合物用己烷(100mL)稀释，并过滤以收集精细白色粉末状的题述化合物(7.98g，76％)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)：δ(ppm)7.40-7.15(m，10H)，5.23(s，2H)，4.36-4.31(m，1H)，3.26-3.12(m，2H)。

(e)(2S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(二氟甲氧基)丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯(II(g)(ii))的制备：

将(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(二氟甲氧基)丙酸(1.0g，3.92mmol)、(2S)-2-氨基-3-苯基丙酸苄酯(1.2g，4.11mmol)和HOBt水合物(0.66g，4.31mmol)在DCM(20mL)中搅拌。将所得的混合物用EDC盐酸盐(0.83g，4.31mmol)处理，冷却至0℃并用DIPEA(0.715mL，4.11mmol)处理。将混合物升温至室温并搅拌过夜。混合物用DCM(30mL)稀释并用饱和碳酸氢钠(2×50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，然后在含0％至40％乙酸乙酯的己烷中进行色谱分离。将含产物的流分真空浓缩，得到蜡样固体状的式II(g)(ii)的化合物(1.9g，98％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)7.40-6.95(m，10H)，6.71(m，1H)，6.14(t，J＝74Hz，1H)，5.19-5.09(m，2H)，4.95-4.85(m，1H)，4.40-4.20(m，2H)，3.98-3.90(m，1H)，3.19-3.10(m，2H)，1.44(s，9H)。

(f)(2S)-2-[[(2S)-2-氨基-3-(二氟甲氧基)丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯盐酸盐(XVI(a))的制备：

在室温下，将(2S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3(二氟甲氧基)丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯(1.9g，3.86mmol)在含2M HCl的乙醚(12mL)中搅拌过夜。所得的悬浮液用己烷稀释，并过滤以收集白色固体状的式XVI(a)的化合物(1.65g，定量收率)。该产物直接用于后续反应。

(g)(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯(XVII(a))的制备：

向(2S)-2-[[(2S)-2-氨基-3-(二氟甲氧基)丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯盐酸盐(1.65g，3.84mmol)、2-吗啉代乙酸盐酸盐(768mg，4.23mmol)和HOBt水合物(648mg，4.23mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液添加EDC盐酸盐(811mg，4.23mmol)。将所得的混合物冷却至0℃，并滴加DIPEA(0.736mL，4.23mmoL)处理，升温至室温并搅拌过夜。混合物用DCM(30mL)稀释并用饱和碳酸氢钠(2×50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，然后硅胶上进行色谱分离，用含0％至100％乙酸乙酯的己烷洗脱。将含产物的流分真空浓缩，得到白色固体状的式XVII(a)的化合物(1.54g，77％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)7.72(m，1H)，7.35-6.90(m，10H)，6.12(t，J＝74Hz，1H)，5.14-5.04(m，2H)，4.81-4.75(m，1H)，4.65-4.55(m，1H)，4.26-4.20(m，1H)，3.93-3.87(m，1H)，3.65-3.50(m，4H)，3.15-2.90(m，4H)，2.45-2.35(m，4H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表6所示的化合物。

(h)(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸(XVIII(a))的制备：

将(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸苄酯(1.54g，2.96mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液用钯(10wt.％，在活性炭上)(157mg，0.148mmol)处理，并在气球压力的氢气氛下搅拌1h。然后，将混合物通过Celite^TM垫过滤，并真空浓缩，得到无色泡沫状的式XVIII(a)的化合物(1.27g，定量收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)8.09(m，1H)，7.24-7.05(m，5H)，6.10(t，J＝74Hz，1H)，5.6(brs，1H)，4.70-4.60(m，2H)，4.15-4.01(m，1H)，3.95-3.85(m，1H)，3.70-3.55(m，4H)，3.25-2.90(m，4H)，2.65-2.50(m，4H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表7所示的化合物。

(i)(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-N-[(1S)-3-甲基-1-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-羰基]丁基]-3-苯基丙酰胺(实施例25)的制备：

向冷却至0℃的(2S)-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)-氨基]丙酰基]氨基]-3-苯基丙酸(200mg，0.46mmol)、(2S)-2-氨基-4-甲基-1-(2-甲基氧杂环丙烷-2-基)戊-1-酮三氟乙酸盐(133mg，0.46mmol)和HOBt水合物(71mg，0.46mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液添加HBTU(176mg，0.46mmol)，然后添加DIPEA(162μL，0.93mmol)。将混合物升温至室温，并搅拌4h。混合物用DCM(40mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠(2×50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，然后硅胶上进行色谱分离，用含50％至100％乙酸乙酯的己烷洗脱。将含产物的流分真空浓缩，并与己烷∶乙醚的1∶1混合物一起研磨，得到苍白色固体状的实施例25的式I的化合物(108mg，40％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)7.78(m，1H)，7.31-7.15(m，5H)，6.71(m，1H)，6.22(t，J＝74Hz，1H)，6.10(m，1H)，4.65-4.49(m，3H)，4.30-4.20(m，1H)，4.09-4.00(m，1H)，3.75-3.63(m，4H)，3.25-2.80(m，5H)，2.55-2.45(m，4H)，2.17(s，3H)，1.55-1.18(m，3H)，0.95-0.85(m，6H)。

以与上述一般操作类似的方式合成表8所示的实施例26至33的式I的化合物。

C.生物学测定

细胞和细胞培养

使人多发性骨髓瘤细胞系8226、H929、JJN3、KMH11、KMS11、KMS18、LP1、MM1S、OPM2和U266在Iscove改良Dulbecco培养基(IMDM)中生长。将人白血病细胞系K562、OCI-AML2和U937在RPMI-1640培养基中培养。通过Ficoll密度梯度离心从多发性骨髓瘤患者分离原代外周血单核细胞，并在Princess Margaret Cancer Centre of theUniversity Health Network(UHN；Toronto，ON，Canada)从多发性骨髓瘤患者获得骨髓抽出物。将原代细胞在IMDM中培养。由UHN伦理委员会(UHN institutional ethics review board)批准用于该研究的人类组织的收集和使用。所有细胞培养基从Ontario Cancer Institute Tissue CultureMedia Facility(Toronto，ON，Canada)获得，并补充有10％胎牛血清、100μg/mL青霉素和100U/mL链霉素(Hyclone，Logan，UT)。使所有细胞在具有5％CO₂的37C加湿孵育器中生长。

蛋白酶体酶活性(肿瘤细胞溶解立物)

通过在室温下以1,200rpm离心来获取细胞。细胞团块用PBS洗涤，并用测定细胞溶解缓冲液(50mM HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸)，pH 7.5；150mM NaCl；1％Triton X-100；2mM ATP)使其细胞溶解。将细胞溶解产物在冰上孵育30分钟，每5分钟通过涡旋来混合，然后以12,000g离心10分钟。将上清液转移至96孔板。对于每一测定，将10μg的全蛋白与增加浓度(1nM至10μM)的受试化合物在37℃一起孵育1小时，所述受试化合物在测定缓冲液(50mM Tris-HCl(三(羟甲基)氨基甲烷-HCl)，pH 7.5；150mM NaCl)中稀释。在每个测定板中，DMSO仅用作对照。在孵育后，以40μM最终浓度且100μL总体积，向每一测定反应添加特定的荧光蛋白酶体底物。N-琥珀酰-Leu-Leu-Val-Tyr-7-氨基-4-甲基香豆素(Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC)用于测量糜蛋白酶样(CT-L)活性，叔丁氧羰基-Leu-Arg-Arg-7-氨基-4-甲基香豆素(Boc-Leu-Arg-Arg-AMC)用于测量胰蛋白酶样(T-L)活性，并且苄氧羰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰基-L-谷氨酰基-7-氨基-4-甲基香豆素(Z-Leu-Leu-Glu-AMC)用于测量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶样(C-L)活性。将激发波长设定为360nm，并且在460nm检测AMC的荧光发射波长。用SpectraMax M5荧光光谱光度测量板读数器(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)测量在酶反应期间释放的游离AMC的荧光。以动力学模式在37℃测量AMC释放率，每5分钟记录，持续30分钟。以一式三份的方式进行实验，并重复至少两次。

细胞活性测定

根据制造商的说明(Promega；Madison，WI)通过3-(4，5-二甲基三唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)测定来主要评价细胞活性。首先将细胞以10,000个细胞/孔的密度接种在组织培养物处理的96孔板中。在接种后两个小时，用化合物以所示的浓度处理细胞72小时。作为对照，在每个测定板中仅用DMSO处理细胞。在处理和MTS测定后，通过在490nm读取光学密度(O.D.)并通过锥虫蓝染色排除(Invitrogen；Burlington，ON，Canada)来独立地确认细胞活性。通过用膜联蛋白V染色来测定原代单核细胞的活性。

表9总结了使用OCI-AML-2和KMS-11细胞系对代表性的式I的化合物的细胞活性和CT-L蛋白酶体活性所获得的数据。

从嗜酸热原体纯化的蛋白酶

将递增浓度(0、0.26μM、0.519μM、1.0375μM、2.075μM、4.15μM和8.3μM)的式(I)的化合物和硼替佐米与从嗜酸热原体分离的蛋白酶体的1μM纯化β亚基在补充有2mM ATP的测定缓冲液中一起孵育。单独的DMSO用作对照。在37℃孵育1小时之后，以40μM的最终浓度添加Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC底物，并且如上文对肿瘤细胞溶解产物所述的那样来测量CT-L蛋白酶体活性。

图1示出与硼替佐米相比，式I的化合物的代表(实施例1的化合物)对纯化的蛋白酶体的酶活性的作用，并且表明实施例1的式I的化合物破坏了泛素-蛋白酶体系统。在该研究中使用来自古细菌嗜酸热原体的纯化β蛋白酶体亚基(A)和来自人骨髓瘤细胞系LP1的全细胞溶解产物(B)。

免疫印迹分析

在RIPA细胞溶解缓冲液中由LP1细胞制备全细胞溶解产物。抗泛素抗体购自Cell Signaling Technology Inc，(Danvers，MA)，并且抗微管蛋白抗体购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)。二级山葵过氧化物酶结合的山羊抗-小鼠或抗兔IgG购自Amersham Bioscience(Piscataway，NJ)。使用来自Pierce(Rockford，IL)的增强化学发光试剂盒来进行检测。

暴露于式I的化合物的LP1细胞表现出通过免疫印迹所检测的大量高分子量泛素化蛋白的时间依赖性和剂量依赖性增加，使用微管蛋白作为负载对照硼替佐米；IB，免疫印迹。具体地，测试实施例1和25的化合物并表现出IC₅₀＜50nM。

联合测定：骨髓瘤LP1细胞在培养物中的活性

为了检查式I的化合物是否可以与其他常规的和较新的抗多发性骨髓瘤的药剂(例如分别为地塞米松和硼替佐米)组合，用递增浓度的式I的化合物与地塞米松或硼替佐米的组合处理LP1骨髓瘤细胞72小时。在孵育后，通过MTS测定来测量细胞生长和活性。合用指数(CI)分析用于测定通过与式I的化合物组合产生的细胞毒性是否是协同的、加和的或拮抗的，其中CI＜1表示两种药物之间的协同，CI＝1表示加和，并且CI＞1表示拮抗。

评价将这些药剂与式I的化合物的代表(即，实施例1的化合物)的组合对培养物中的骨髓瘤LP1细胞的活性的作用。用递增浓度的实施例1的化合物与地塞米松或硼替佐米的组合处理LP1细胞72小时。在孵育后，通过MTS测定来测量细胞生长和活性。

实施例1的化合物和硼替佐米的组合是协同的，在0.39、0.58和0.6的影响比例(fraction affected，Fa)水平下，合用指数值分别为0.41、0.46和0.88(图2A)。

因此，使用低剂量的硼替佐米可以限制其脱靶(off-target)活性以及相关的副作用，同时与式I的化合物(例如实施例1的化合物)组合允许CT-L蛋白酶体活性的更有效、协同和特异性的阻断。

实施例1的化合物和地塞米松的组合是协同的，在0.43、0.5和0.64的影响比例水平下，合用指数值分别为0.41、0.44和0.5(图2B)。

数据提供了将实施例1的化合物与诸如硼替佐米的另一药剂组合以实现有用的蛋白酶体抑制和抗肿瘤活性的基本原理，这可以允许使用更低剂量的诸如硼替佐米的药剂并潜在地降低副作用。

优于正常造血细胞的原代骨髓瘤细胞的细胞死亡

通过以下来评价用式I的化合物或硼替佐米处理的白血病和骨髓瘤细胞的活性：使用CellTiter 96^TM AQueous One Solution Cell ProliferationAssay(Promega，Madison，WI)，其为3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓内盐(MTS)测定的形式；或根据制造商的说明并如先前所述[J.Natl.Cancer Inst.2007，99(10)，811-822；Hum.Reprod.2007，22(5)，1304-1309]使用基于荧光的阿拉马蓝细胞活性试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)；或通过锥虫蓝染色。

通过用膜联蛋白V-荧光素异硫氰酸酯和碘化丙啶(均来自BiovisionResearch Products，Mountain View，CA)将用式I的化合物处理的细胞染色，并根据制造商的说明和如先前所述[Blood.2005，105(10)，4043-4050]进行流式细胞术，从而测量细胞凋亡。至少以一式三份的方式进行实验并重复至少两次(n＝4-20个数据点)。通过用藻红蛋白结合的小鼠单克隆抗CD138抗体(20μL/10⁶个细胞；Beckman Coulter，Brea，CA)来测定活的原代骨髓瘤细胞。与未处理的样品相比，在式(I)的化合物的处理之后对CD138呈阳性并对膜联蛋白V呈阴性的骨髓瘤细胞的百分比量化为细胞活性的标记，如先前所述[Blood.2007，109(12)，5430-5438]。

还研究了式I的化合物的代表(实施例1的化合物)对从患者样品分离的原代恶性和正常造血细胞的活性的作用。将来自患有骨髓瘤的患者的骨骼和骨髓的单核细胞与递增浓度的实施例1的化合物一起孵育24小时(患者1)；将来自患有浆细胞白血病的患者的外周血单核细胞与递增浓度的实施例1的化合物一起孵育24小时(患者2)；以及用递增浓度的实施例1的化合物处理原发性骨髓瘤患者的样品(患者3)。通过使用PE-标记的抗-CD138和FITC-标记的膜联蛋白V共同染色的流式细胞术来测量正常造血细胞(CD138-)和骨髓瘤细胞(CD138+)的活性。

数据表示为来自每一患者样品的活性细胞的百分比(图3)。图3示出相对于载剂对照，在24小时处理之后通过膜联蛋白V染色和流式细胞术测定的实施例1的化合物对来自骨髓瘤患者的原代样品的细胞活性的作用。相对于CD138-正常造血细胞，实施例1的化合物选择性降低原代CD138+骨髓瘤细胞的活性，所述细胞从患有多发性骨髓瘤的患者的骨髓分离(图3A和3C)或从患有浆细胞白血病的患者的外周血分离(图3B)。实施例1的化合物在纳摩尔浓度下诱导骨髓瘤患者的浆细胞的细胞死亡。实施例1的化合物对单核造血细胞具有较小的细胞毒性，LD₅₀＞2.5μM。相反，卡非佐米表现出在患者样品中CD138+与CD-138-之间的窄得多的治疗指数[Trudel等人，ASH 2009，Poster Board I-867]。

鼠科动物红细胞和器官匀浆

根据安大略省癌症研究所动物伦理审查委员会(Ontario CancerInstitute institutional animal review board)的准许进行所有小鼠实验。将五-至六-周龄雄性非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠随机分组(n＝3只小鼠/组)。通过静脉或通过口服强饲向小鼠给药不同剂量的载剂(5％DMSO，20％Cremophor)或式I的化合物，并且在24小时内从每只小鼠采集静脉血样品(20-50μL)。根据制造商的说明，将血液样品与肝素(APP Pharmaceuticals；Schaumburg，IL)在0.5mL管中混合。在以3000g离心分离10分钟之后，将底层的红细胞(RBC)转移到新的管中，并在-70℃储存，直至使用。用测定细胞溶解缓冲液使RBC细胞溶解，并在冰上孵育30分钟，每5分钟通过涡旋来混合，然后以12000g离心10分钟。将上清液转移到96孔板，并且如上文对细胞细胞溶解产物所述的那样来测量蛋白酶体活性。

为了评价在受治疗的小鼠的器官中式I的化合物的蛋白酶体活性，在以30mg至100mg的剂量用对照载剂口服强饲和给药式I的化合物的代表之后，通过吸入CO₂4小时来处死五-至六-周龄雄性NOD/SCID小鼠。移除脑部、肝脏、心脏、肺部、肾脏、股骨和骨髓，用PBS洗涤，并在-70℃储存，直至使用。在分析之前，将小鼠器官解冻并在冰上于测定细胞溶解缓冲液中均质化。在两端切开股骨，并用测定细胞溶解缓冲液冲掉骨髓。在4℃，以13000g离心器官匀浆30分钟，并将上清液用于如上文对肿瘤细胞溶解产物所述的那样测量蛋白酶体活性。

在口服给药式I的代表性化合物后24小时进程内，检测蛋白酶体亚基活性(分别是糜蛋白酶样、胰蛋白酶样、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶样、CT-L、T-L、C-L)。用实施例1的化合物(50mg/kg，通过口服强饲)和实施例26的化合物(60mg/kg，通过口服强饲)或载剂对照治疗NOD/SCID小鼠，持续24小时，如上所述。

表10概述了式(I)的代表性化合物(实施例1和26的化合物)的数据。从表10的数据可以看出，实施例1和26的化合物在向小鼠口服给药之后表现出药效学活性。

国家癌症研究所(NCI)筛选小组：

利用国家癌症研究所(NCI)筛选小组来筛选式I的代表性化合物，该筛选小组由60种不同的人肿瘤细胞系构成，代表了白血病[CCRF-CEM，HL-60(TB)，K-562，MOLT-4，SR]、黑色素瘤[LOX IMVI，MALME-3M，M14，SMDA-MB-435，SK-MEL-2，SK-MEL-28，SK-MEL-5，UACC-257和UACC-62]以及肺癌[A549/ATCC，EKVX，HOP-62，HOP-93，NCI-H226，NCI-H23，NCI-H322M，NCI-H460]、结肠癌[COLO 205，HCT-116，HCT-15，HT29，KM12，SW-620]、脑癌[SF-268，SF-295，SF-539，SNB-19，SNB-75，U251]、卵巢癌[IGROV1，OVCAR-3，OVCAR-4，OVCAR-5，OVCAR-8，NCI/ADR-RES，SK-OV-3]、乳腺癌[MCF7，MDA-MB-231，BT-549，T-47D，MDA-MB-468]、前列腺癌[PC-3，DU-145]和肾癌[786-0，A498，ACHN，CAKI-1，RXF-393，SN12C，TK-10，UO-31]。

在24小时之后，将每种细胞系的两个板用TCA原位固定以展现在药物添加时(T_z)每种细胞系的细胞群的测量值。将实验药物以期望的最终最大测试浓度400倍的浓度溶解在二甲亚砜中，并在使用之前冷冻储存。在药物添加时，将一等份的冷冻浓缩物解冻，并用包含50μg/ml庆大霉素的完全培养基稀释至期望的最终最大测试浓度的两倍。进行额外的4倍、10倍或1/2log连续稀释以提供总计5种药物浓度加对照。将100μl等份的这些不同的药物稀释物添加至已包含100μl培养基的合适的微量滴定孔，产生所需的最终药物浓度。

在药物添加之后，在37℃、5％CO₂、95％空气和100％相对湿度下将板再孵育48h。对于粘附细胞，通过添加冷的TCA(三氯乙酸)来终止测定。通过温和地添加50μl的冷50％(w/v)TCA(最终浓度，10％TCA)来原位固定细胞，并在4℃孵育60分钟。丢弃上清液，并用自来水洗涤该板5次，并风干。向每孔添加在1％乙酸中的0.4％(w/v)磺酰罗丹明B(SRB)溶液(100μl)，并将板在室温下孵育10分钟。在染色后，通过用1％乙酸冲洗5次来去除未结合的染料，并将板风干。随后用10mM曲兹马(trizma)基质溶解结合的着色剂，并在自动板读数器上在515nm波长下读取吸光度。对于悬浮细胞，方法相同，但通过温和地添加50μl的80％TCA(最终浓度，16％TCA)将沉淀的细胞固定在孔底部，从而终止测定。使用7种吸光度测量[时间零点(T_z)，对照生长(C)，以及在5种浓度水平的药物的存在下的测试生长(T_i)]，在每一药物浓度水平下计算生长百分比。生长抑制百分比以如下方式计算：[(T_i-T_z)/(C-T_z)]×100(对于其中T_i＞/＝T_z的浓度)，以及[(T_i-T_z)/T_z]×100(对于其中T_i＜T_z的浓度)。

计算每一实验试剂的三种剂量反应参数。50％生长抑制(GI₅₀)通过[(T_i-T_z)/(C-T_z)]×100＝50计算，其是在药物孵育期间导致对照细胞的蛋白净增(如SRB染色所测量的)的50％降低的药物浓度。通过T_i＝T_z计算导致生长完全抑制的药物浓度。通过[(T_i-T_z)/T_z]×100＝-50计算LC₅₀(导致在药物治疗结束时所测量的蛋白与开始时相比50％降低的药物浓度)，其表示在处理之后细胞的净损失。如果达到活性水平，则计算这三种参数的每一种参数的值。然而，如果未达到该效果或超过该效果，则该参数的值表示为大于或小于所测试的浓度的最大值或最小值。

从该研究所获得的结果表明式I的化合物针对该60种人肿瘤细胞系小组的细胞系是有效的。式(I)的代表性化合物对人癌症细胞系的体外抑制示于表11(实施例1)、表12(实施例25)、表13(实施例26)和表14(实施例29)中。

小鼠异种移植模型中的肿瘤生长的抑制：

在中空纤维测定(HFA)中对肿瘤生长的效能

进行中空纤维测定体内药效学研究。这种体内动物模型使用了半渗透的生物相容性纤维，其用癌细胞填充、热密封并手术移植(s.c.或i.p.)到小鼠或大鼠中，随后将所述小鼠或大鼠用化学疗法治疗。可以将来自不同组织来源和细胞特性的许多不同的细胞系封装在纤维内，提供低成本的筛选方法。

NCI的Oncology Program Screening and Characterization Strategy组使用HFA，其以时间和材料的最小支出而提供了药物效能的定量指标。因此，HFA正用作式I的化合物的初步体内经验。

每次实验准备总计3种不同的肿瘤细胞系，从而每只小鼠接收3个腹膜内移植物(每种肿瘤细胞系(tumor line)1个)和3个皮下移植物(每种肿瘤细胞系1个)。根据异种移植测试来考虑化合物，条件是其在所评价的剂量水平下产生任何细胞系的细胞杀灭，或其ip+sc分数之和为20以上，sc分数为8以上。这种计分系统经CTEP的DCTDC统计学家验证，用于展现将当前“标准”试剂计分为活性的所预期的检测水平。

经由两种剂量(75mg/kg/剂和35.5mg/kg/剂)的腹膜内给药(QD×4)，在HFA测定中评价实施例1的化合物。12种肿瘤细胞系的标准小组用于实施例1的化合物的中空纤维筛选。这些包括非小细胞肺癌的NCI-H23和NCI-H522，乳腺癌的MDA-MB-231，黑色素瘤的MDA-MB-435、LOX IMVI和UACC-62，结肠癌的SW-620和COLO 205，卵巢癌的OVCAR-3和OVCAR-5，以及CNS(中枢神经系统)癌的U251和SF-295。实施例1的式I的化合物在两种剂量(75mg/kg/剂和35.5mg/kg/剂)的任一种剂量下产生多种细胞系的细胞杀灭。

在白血病AML2异种移植模型中对肿瘤生长的效能：

通过口服强饲，使用30mg/kg至200mg/kg剂量的实施例1的化合物在第1天和第2天(QD×2)每周两次治疗携带确定的人肿瘤异种移植物的非致死量辐射的NOD-SCID小鼠，其源自用鼠科动物肿瘤细胞系AML2激发的RL和BALB/c小鼠。给药在肿瘤激发后第6天开始。结果表明式I的化合物表现出抗肿瘤反应。例如，实施例1的式I的化合物在30mg/kg下于AML2小鼠异种移植白血病模型中表现出大于40％肿瘤生长抑制的抗肿瘤反应，而没有观察到包括体重降低或行为改变在内的明显副作用。

在骨髓瘤MM.1S小鼠异种移植模型中对肿瘤生长的效能：

使用Co60辐射器源来辐射(200rad)小鼠。在24小时之后，用含5x10⁶个MM.1S肿瘤细胞的0.1ml PBS皮下接种每一小鼠，以用于肿瘤发展。当肿瘤体积达到100mm³时开始治疗。每一治疗组由10只小鼠组成。根据具体的预定方案来向携带肿瘤的小鼠给药实施例1的化合物。在50mg/kg(p.o，qd×28天)和100mg/kg(p.o，第1、3、5天/周×4周)的剂量水平下，来自实施例1的化合物与对照相比产生统计学显著的抗肿瘤活性，而没有观察到包括体重降低或行为改变在内的明显副作用。

尽管参考当前认为是优选实例的实施例来描述了本申请，但要理解本申请不限于所公开的实施例。相反，本申请旨在涵盖在所附权利要求的主旨和范围内所包括的多种修改和等同布置。

所有公开、专利和专利申请以其整体形式援引加入本文，其程度如同具体且单独地指出每一单个公开、专利或专利申请以其整体形式援引加入本文。在发现本申请的术语与援引加入本文的文献中不同的定义时，本文所提供的定义应用作该术语的定义。

Claims

1.式I的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药：

其中：

2.如权利要求1所述的化合物，其中R¹选自：

(i)C_1-6烷基；

(ii)取代或未取代的5-或6-元杂芳基；以及

(iii)C_3-8杂环烷基，

其中所述5-或6-元杂芳基的取代基独立地选自C_1-4烷基。

3.如权利要求2所述的化合物，其中R¹为C_1-6烷基并且X为O。

4.如权利要求3所述的化合物，其中R¹为叔丁基。

5.如权利要求2所述的化合物，其中R¹为取代或未取代的5-或6-杂芳基并且X不存在。

6.如权利要求5所述的化合物，其中R¹选自：

(i)取代或未取代的噻唑基；

(ii)取代或未取代的异噻唑基；

(iii)取代或未取代的噁唑基；

(iv)取代或未取代的异噁唑基；

(v)取代或未取代的噻吩基；

(vi)取代或未取代的呋喃基；

(vii)取代或未取代的1,2,4-三唑基；

(viii)取代或未取代的吡啶基；

(ix)取代或未取代的吡嗪基；

(x)取代或未取代的嘧啶基；以及

(xi)取代或未取代的1,2,4-三嗪基，

其中噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、呋喃基、1,2,4-三唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和1,2,4-三嗪基的取代基独立地选自C_1-4烷基。

7.如权利要求6所述的化合物，其中R¹选自：

8.如权利要求7所述的化合物，其中R¹为

9.如权利要求2所述的化合物，其中R¹为C_3-8杂环烷基并且X为C_1-6亚烷基。

10.如权利要求9所述的化合物，其中R¹选自吗啉基、1,4-氧氮杂环庚烷基、硫代吗啉基、1,4-硫氮杂环庚烷基、1,4-硫氮杂环庚烷基-1-氧化物、1,4-硫氮杂环庚烷基-1,1-二氧化物、1,4-噻嗪烷基-1-氧化物、1,4-噻嗪烷基-1,1-二氧化物、氮杂环丙基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌嗪基和1,4-二氮杂环庚烷基。

11.如权利要求10所述的化合物，其中R¹为

12.如权利要求10或11所述的化合物，其中X为-CH₂-。

13.如权利要求1至12中任一权利要求所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6卤代烷基、C_2-6亚烯基-O-C_1-6卤代烷基以及C_2-6亚炔基-O-C_1-6卤代烷基，其中R²和R³中的至少一个是C_1-6-亚烷基-O-C_1-6卤代烷基。

14.如权利要求13所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自异丁基、-CH₂-O-CH₃以及-CH₂-O-CHF₂，其中R²和R³中的至少一个是-CH₂-O-CHF₂。

15.如权利要求14所述的化合物，其中R²和R³各自为-CH₂-O-CHF₂。

16.如权利要求13至15中任一权利要求所述的化合物，其中R⁴选自C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_1-6亚烷基C_3-8环烷基以及C_1-6亚烷基C_6-14芳基。

17.如权利要求16所述的化合物，其中R⁴为异丁基或-CH₂-Ph。

18.如权利要求1至17中任一权利要求所述的化合物，其中R⁵选自H和C_1-6烷基。

19.如权利要求1至17中任一权利要求所述的化合物，其具有以下相对立体化学：

20.如权利要求1所述的化合物或其盐、溶剂合物或前药，选自：

N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]氨基]-1-(二氟甲氧基甲基)-2-氧代乙基]-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺；

[1,2,4]三嗪-3-羧酸-((S)-1-{(S)-1-[(S)-1-苄基-2-((R)-2-甲基氧杂环丙基)-2-氧代乙基氨甲酰基]-2-二氟甲氧基乙基氨甲酰基}-2-二氟甲氧基乙基)酰胺；

(2S)-N-[(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基氧杂环丙烷-2-基]-2-氧代乙基]-2-[[(2S)-3-(二氟甲氧基)-2-[(2-吗啉代乙酰基)氨基]丙酰基]氨基]-3-(1-甲基环己-1,3,5-三烯-1-基)丙酰胺；

21.如权利要求20所述的化合物或其盐、溶剂合物或前药，其中所述化合物为：

22.药物组合物，其包含权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物以及药学上可接受的载体。

23.抑制细胞的蛋白酶体的方法，其包括向所述细胞给药有效量的权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物。

24.抑制细胞的直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性的方法，其包括向所述细胞给药有效量的权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物。

25.治疗由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是与直接或间接受蛋白酶体抑制影响的不受控制的和/或异常的细胞活性相关的疾病、病症或病况。

27.如权利要求25所述的方法，其中所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况是癌症。

28.如权利要求27所述的方法，其中给药所述化合物以预防易患癌症的个体的癌症。

29.如权利要求28所述的方法，其中所述癌症选自皮肤癌、血癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、舌癌和肺癌。

30.如权利要求28所述的方法，其中所述癌症选自白血病、淋巴瘤、非霍金奇淋巴瘤和多发性骨髓瘤。

31.如权利要求27、29和30中任一权利要求所述的方法，其中给药所述化合物与一种或多种额外的癌症治疗的组合。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述额外的癌症治疗选自放射疗法、化学疗法、靶向疗法如抗体疗法以及小分子疗法如酪氨酸-激酶抑制剂、免疫疗法、激素疗法和抗血管生成疗法。

33.抑制由能够降解蛋白的蛋白酶体对所述蛋白的降解的方法，其包括使所述蛋白酶体与有效量的权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物接触。

34.如权利要求33所述的方法，其中由泛素标记所述蛋白。

35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述蛋白是p53。

36.治疗加速和/或增强的蛋白水解的方法，其包括向有此需要的个体给药治疗有效量的权利要求1至21中任一权利要求所述的化合物。

37.如权利要求25所述的方法，其中所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自病毒感染、炎性疾病、自身免疫性疾病、心脏病、年龄相关性眼病和神经变性疾病。

38.如权利要求25所述的方法，其中所述由蛋白酶体抑制介导的疾病、病症或病况选自HIV感染、1型糖尿病、2型糖尿病、变态反应、哮喘、炎性关节炎、类风湿关节炎、骨质疏松症、骨关节炎、银屑病、血清阴性脊柱关节病、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺疾病、充血性心力衰竭、压力超负荷型心肌肥厚、病毒性心肌炎、心肌缺血性损伤、心脏病、动脉粥样化形成、动脉粥样硬化、糖尿病患者的心脏事件、糖尿病患者的血管疾病、肌萎缩、肥胖、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩侧索硬化、自身免疫性甲状腺病、恶病质、克罗恩氏病、炎性肠道疾病、败血病、乙型肝炎、移植排斥及相关免疫学、视网膜退化、白内障和青光眼。