CN104774840A - 基因突变体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了分离的核酸、分离的多肽、筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法、筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统、用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒、构建体及重组细胞。其中，分离的编码ABCA4的核酸，与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变，或者分离的编码CNGA1的核酸与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变。通过检测这些突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

Description

基因突变体及其应用

技术领域

本发明涉及基因突变体及其应用。具体地，本发明涉及分离的核酸、分离的多肽、筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法、筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统、用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒、构建体以及重组细胞。

背景技术

原发性视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，在本文中有时也简称为“RP”）是最常见的遗传性致盲疾病，在全世界的发病率约为1/3500至1/5000，在我国的发病率约为1/3467，目前已经成为威胁全球青年和中年人群视觉功能和质量的主要眼部疾病。RP是由于视网膜感光细胞（包括视锥细胞和视杆细胞以及视网膜色素上皮细胞）的变性，外层视网膜进行性退化而导致的眼底病。RP的遗传方式表现为多种形式，其中常染色体显性遗传（autosomadominant retinitis pigmentosa，简称为ADRP）约占发病率的15-20%、常染色体隐性遗传（autosoma recessive retinitis pigmentosa，简称为ARRP）占20-25%、X连锁遗传（X-linkedretinitis pigmentosa，简称为XLRP）占10-15%、其余40-55%不能确定其遗传方式。到目前为止，通过连锁分析或候选基因筛选已经确定了19个ADRP基因位点，26个ARRP基因位点,6个XLRP基因位点，其中43个基因已经得到克隆(RetNet:http://www.sph.uth.tmc.edu/retnet/sum-dis.htm)。虽然在每种遗传方式中均发现了一些致病基因，但仍存在着相当一部分未知致病基因位点，预计在人类中可能仍然存在70多个位点与RP相关。

因而，目前对原发性视网膜色素变性疾病的研究仍有待深入。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法。

本发明是基于发明人的下列工作而完成的：发明人通过已知致病基因捕获测序联合候选基因突变验证的方法确定了常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的致病基因上的新突变。

根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例，与SEQID NO：1相比，该核酸具有c.1924T>A突变；或者与SEQ ID NO：3相比，该核酸具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变。根据本发明的实施例，发明人确定了ABCA4和CNGA1基因突变体，这些新突变体与常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的发病密切相关，从而通过检测这些新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与SEQID NO：2相比，该分离的多肽具有p.F642I突变；或者与SEQ ID NO：4相比，该分离的多肽具有p.L158F*4突变，或者p.G582R突变。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：从生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ IDNO：1相比具有c.1924T>A突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，是所述生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的指示。通过根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，可以有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

根据本发明的第四方面，本发明提出了一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统。根据本发明的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，判断所述生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒含有：适于检测ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的试剂，其中与SEQ ID NO：1相比，所述ABCA4基因突变体具有c.1924T>A突变；与SEQ ID NO：3相比，所述CNGA1基因突变体具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变。利用根据本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构建体包含前面所述的分离的核酸。需要说明的是，“构建体包含前面所述的分离的核酸”表示，本发明的构建体包含与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变的ABCA4基因突变体的核酸序列，或者包含与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变的CNGA1基因突变体的核酸序列，或者同时包含上述ABCA4基因突变体和CNGA1基因突变体的核酸序列。由此，利用本发明的构建体转化受体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药物。

根据本发明的第七方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，该重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。根据本发明的一些实施例，利用本发明的重组细胞，能够有效地筛选治疗常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药物。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1：显示了根据本发明一个实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统及其组成部分的示意图，其中，

A为根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统的示意图，

B为根据本发明实施例的核酸提取装置的示意图，

C为根据本发明实施例的核酸序列确定装置的示意图；

图2：显示了根据本发明一个实施例的两个ARRP家系的家系图谱，其中，

A为根据本发明实施例的ARRP家系1的家系图谱，

B为根据本发明实施例的ARRP家系2的家系图谱；

图3：显示了根据本发明一个实施例，各物种间的ABCA4基因的p.642F、CNGA1基因的p.158L和p.582G，这3个位点的保守性比较结果；

图4：显示了根据本发明一个实施例，ARRP家系1内的先证者II:8及正常对照的ABCA4基因突变位点的Sanger测序验证峰图；

图5：显示了根据本发明一个实施例，ARRP家系2内的先证者II:6及正常对照的CNGA1基因突变位点的Sanger测序验证峰图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

ABCA4及CNGA1基因突变体

根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例，与SEQID NO：1相比，该核酸具有c.1924T>A突变；或者与SEQ ID NO：3相比，该核酸具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变。需要说明的是，本发明的分离的核酸编码ABCA4或者CNGA1突变体，也可以称为“编码ABCA4或者CNGA1突变体的核酸”，即该核酸可以理解为与编码ABCA4或者CNGA1突变体的基因相对应的核酸物质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与ABCA4和CNGA1的编码基因相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本发明的一个具体示例，前面所述的编码ABCA4和CNGA1突变体的核酸为DNA。根据本发明的实施例，发明人确定了ABCA4和CNGA1基因的新突变体，该突变体与常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病，也可以通过检测该突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

对于本发明说明书和权利要求书中，提及核酸，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如，提及SEQ ID NO:1，实际包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。

这些编码ABCA4和CNGA1突变体的核酸，是本申请的发明人通过已知致病基因捕获测序联合候选基因突变验证的方法，确定的常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的致病基因上的新突变，并且在现有技术中并未见到ABCA4基因上的c.1924T>A突变，以及CNGA1基因上的c.472delC、c.1744G>A突变与常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病相关的报道。野生型ABCA4基因的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示：

其编码的的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示：

野生型CNGA1基因的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示：

其编码的的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示：

发明人发现的ABCA4基因突变体与SEQ ID NO：1相比，具有c.1924T>A突变，即相对于野生型ABCA4基因，本发明的ABCA4基因突变体的cDNA中第1924位的T突变为A，由此，其所编码的产物与野生型ABCA4（SEQ ID NO：2）相比，具有p.F642I突变，即其第642位氨基酸从苯丙氨酸（F）突变为异亮氨酸（I）。

此外，发明人发现的CNGA1基因突变体与SEQ ID NO：3相比，具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变，即相对于野生型CNGA1基因，本发明的CNGA1基因突变体的cDNA缺失第472位碱基C，或者第1744位的碱基G突变为A，由此，其所编码的产物与野生型CNGA1相比，具有p.L158F*4突变，或者p.G582R突变，即其第158位编码氨基酸亮氨酸（L）突变为苯丙氨酸（F），且第161缬氨酸改变为终止密码子，或者第582位编码氨基酸由甘氨酸（G）突变精氨酸（R）。

本发明的发明人首次提出ABCA4基因的c.1924T>A突变以及CNGA1基因的c.472delC突变，或者c.1744G>A突变导致患者出现常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的症状。

根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与SEQID NO：2相比，该分离的多肽具有p.F642I突变（也可以表示为p.phe642Ile）；或者与SEQID NO：4相比，该分离的多肽具有p.L158F*4突变（也可以表示为p.Leu158Phefs*4），或者p.G582R突变（也可以表示为p.Gly582Arg）。根据本发明的一些具体示例，具有p.F642I突变的多肽是由前述分离的编码ABCA4突变体的核酸编码的，具有p.L158F*4突变，或者p.G582R突变的多肽是由前述分离的编码CNGA1突变体的核酸编码的。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病，也可以通过检测这些多肽在生物体中是否存在，有效地预测生物体是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法

根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法。根据本发明的实施例，该筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法可以包括以下步骤：

首先，从生物样品提取核酸样本。根据本发明的实施例，生物样品的类型并不受特别限制，只要从该生物样品中能够提取到反映生物样品ABCA4和CNGA1是否存在突变的核酸样本即可。根据本发明的实施例，生物样品可以为选自人体血液、皮肤、肌肉的至少一种。由此，可以方便地进行取样和检测，从而能够进一步提高筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的效率。根据本发明的实施例，这里所使用的术语“核酸样本”应做广义理解，其可以是任何能够反映生物样品中ABCA4和CNGA1是否存在突变的样本，例如可以是从生物样品中直接提取的全基因组DNA，也可以是该全基因组中包含ABCA4和CNGA1编码序列的一部分，可以是从生物样品中提取的总RNA，也可以是从生物样品中提取的mRNA。根据本发明的一个实施例，所述核酸样本为全基因组DNA。由此，可以扩大生物样品的来源范围，并且可以同时对生物样品的多种信息进行确定，从而能够提高筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的效率。另外，根据本发明的实施例，针对采用RNA作为核酸样本，从生物样品提取核酸样本可以进一步包括：从生物样品提取RNA样本，优选RNA样本为mRNA；以及基于所得到的RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所得到的cDNA样本构成核酸样本。由此，可以进一步提高利用RNA作为核酸样本筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的效率。

接下来，在得到核酸样本之后，可以对核酸样本进行分析，从而能够确定所得到核酸样本的核酸序列。根据本发明的实施例，确定所得到核酸样本的核酸序列的方法和设备并不受特别限制。根据本发明的具体实施例，可以通过测序方法，确定核酸样本的核酸序列。根据本发明的实施例，可以用于进行测序的方法和设备并不受特别限制。根据本发明的实施例，可以采用第二代测序技术，也可以采用第三代以及第四代或者更先进的测序技术。根据本发明的具体示例，可以利用选自Hiseq2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种对核酸序列进行测序。由此，结合最新的测序技术，针对单个位点可以达到较高的测序深度，检测灵敏度和准确性大大提高，因而能够利用这些测序装置的高通量、深度测序的特点，进一步提高对核酸样本进行检测分析的效率。从而，能够提高后续对测序数据进行分析时的精确性和准确度。由此，根据本发明的实施例，确定核酸样本的核酸序列可以进一步包括：首先，针对所得到的核酸样本，构建核酸测序文库；以及对所得到的核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果。根据本发明的一些实施例，可以采用选自Hiseq2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种对所得到的核酸测序文库进行测序。另外，根据本发明的实施例，可以对核酸样本进行筛选，富集ABCA4和CNGA1外显子，该筛选富集可以在构建测序文库之前，构建测序文库过程中，或者构建测序文库之后进行。根据本发明的一个实施例，针对核酸样本，构建核酸测序文库进一步包括：利用选自ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，对核酸样本进行PCR扩增；以及针对所得到的扩增产物，构建核酸测序文库。由此，可以通过PCR扩增，富集ABCA4和CNGA1外显子，从而能够进一步提高筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的效率。根据本发明的实施例，ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的序列不受特别限制，根据本发明的优选实施例，ABCA4基因外显子特异性引物可以具有如SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列，CNGA1基因外显子特异性引物可以具有如SEQ ID NO：7-10所示的核苷酸序列，其中，针对c.472delC突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸序列；针对c.1744G>A突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：9-10所示的核苷酸序列。发明人惊奇地发现，通过采用SEQ ID NO：5-6所示的引物，可以在PCR反应体系中显著有效地完成对ABCA4尤其是c.1924T>A所在的外显子序列的扩增；采用SEQ ID NO：7-10所示的引物，可以显著有效地完成对CNGA1尤其是c.472delC突变和c.1744G>A突变所在外显子序列的扩增。需要说明的是，这些SEQ ID NO：5-10所示的核苷酸序列是本发明的发明人在付出了艰苦的劳动后，意外获得的。

关于针对核酸样本，构建测序文库的方法和流程，本领域技术人员可以根据不同的测序技术进行适当选择，关于流程的细节，可以参见测序仪器的厂商例如Illumina公司所提供的规程，例如参见Illumina公司Multiplexing Sample Preparation Guide（Part#1005361;Feb2010）或Paired-End SamplePrep Guide（Part#1005063；Feb2010），通过参照将其并入本文。根据本发明的实施例，从生物样品提取核酸样本的方法和设备，也不受特别限制，可以采用商品化的核酸提取试剂盒进行。

需要说明的是，在这里所使用的术语“核酸序列”应作广义理解，其可以是在对核酸样本进行测序得到的测序数据进行组装后，得到的完整的核酸序列信息，也可以是直接采用通过对核酸样本进行测序所得到的测序数据（reads）作为核酸序列，只要这些核酸序列中含有对应ABCA4和CNGA1基因的编码序列即可。

最后，在确定核酸样本的核酸序列之后，将所得到的核酸样本的核酸序列相应的参考序列进行比对，当所得到的核酸序列中具有前述的c.1924T>A突变，或者具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变时，即指示生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。具体地，当获得的核酸样本是采用ABCA4基因外显子特异性引物扩增获得时，将该核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO：1的序列相比对，如果在所得到的核酸序列中具有c.1924T>A突变，则指示生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。当获得的核酸样本是采用CNGA1基因外显子特异性引物扩增获得时，将该核酸样本的核酸序列与SEQID NO：3的序列相比对，如果在所得到的核酸序列中具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，则指示生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。当获得的核酸样本是采用CNGA1及ABCA4基因外显子特异性引物扩增获得时，将该核酸样本的核酸序列分别与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的序列相比对，如果在所得到的核酸序列中具有c.1924T>A的纯合突变或者c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，则指示生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。由此，通过根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，可以有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。根据本发明的实施例，对核酸序列与SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：3进行比对的方法和设备并不受特别限制，可以采用任意常规的软件进行操作，根据本发明的具体实例，可以采用SOAPALIGNER/SOAP2进行比对。

需要说明的是，根据本发明实施例的“筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法”的用途不受特别限制，例如可以用作非诊断目的的筛选方法。

筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统和试剂盒

根据本发明的第四方面，本发明提出了一种能够有效实施上述筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法的系统。

参考图1，根据本发明的实施例，该筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统1000包括：核酸提取装置100、核酸序列确定装置200以及判断装置300。

根据本发明的实施例，核酸提取装置100用于从生物样品提取核酸样本。如前所述，根据本发明的实施例，核酸样本的类型并不受特别限制，对于采用RNA作为核酸样本，则核酸提取装置进一步包括RNA提取单元101和反转录单元102，其中，提取单元101用于从生物样品提取RNA样本，反转录单元102与RNA提取单元101相连，用于对RNA样本进行反转录反应，以便获得cDNA样本，所得到的cDNA样本构成核酸样本。

根据本发明的实施例，核酸序列确定装置200与核酸提取装置100相连，用于对核酸样本进行分析，以便确定核酸样本的核酸序列。如前所示，可以采用测序的方法确定核酸样本的核酸序列。由此，根据本发明的一个实施例，所述核酸序列确定装置200可以进一步包括：文库构建单元201以及测序单元202。文库构建单元201用于针对核酸样本，构建核酸测序文库；测序单元202与文库构建单元201相连，用于对核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果。如前所述，可以通过PCR扩增，富集ABCA4和CNGA1外显子，进一步提高筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的效率。由此，文库构建单元201可以进一步包括PCR扩增模块（图中未示出），在该PCR扩增模块中设置有选自ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，以便利用ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，对所述核酸样本进行PCR扩增，根据本发明的具体实施例，ABCA4基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列，CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-10所示的核苷酸序列，其中，针对c.472delC突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸序列，针对c.1744G>A突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：9-10所示的核苷酸序列。根据本发明的实施例，测序单元202可以包括选自HISEQ2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种。由此，结合最新的测序技术，针对单个位点可以达到较高的测序深度，检测灵敏度和准确性大大提高，因而能够利用这些测序装置的高通量、深度测序的特点，进一步提高对核酸样本进行检测分析的效率。从而，提高后续对测序数据进行分析时的精确性和准确度。

根据本发明的实施例，判断装置300与核酸序列确定装置200相连，适于将核酸样本的核酸序列进行比对，以便基于核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：3的区别判断生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。具体地，基于所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，判断生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。如前所述，根据本发明的一个实施例，核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ ID NO：1相比具有选自c.1924T>A纯合突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，是生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的指示。如前所述，根据本发明的实施例，对核酸序列与SEQ ID NO：1以及SEQ ID NO：3进行比对的设备并不受特别限制，可以采用任意常规的软件进行操作，例如根据本发明的具体实例，可以采用SOAPALIGNER/SOAP2进行比对。

由此，利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒。根据本发明的实施例，该用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒包括：适于检测ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的试剂，其中与SEQ ID NO：1相比，该ABCA4基因突变体具有c.1924T>A突变；与SEQ ID NO：3相比，该CNGA1基因突变体具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变。利用根据本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。在本文中，所使用的术语“适于检测ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的试剂”应做广义理解，即可以是检测ABCA4和CNGA1的编码基因的至少一种的试剂，也可以是检测ABCA4和CNGA1突变体的至少一种的试剂，例如可以采用识别特异性位点的抗体。根据本发明的一个实施例，该试剂为核酸探针。由此，可以高效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

构建体及重组细胞

根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构建体包含前面所述的分离的核酸。需要说明的是，“构建体包含前面所述的分离的核酸”表示，本发明的构建体包含与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变的ABCA4基因突变体的核酸序列，或者包含与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变的CNGA1基因突变体的核酸序列，或者同时包含上述ABCA4基因突变体和CNGA1基因突变体的核酸序列。由此，利用本发明的构建体转化受体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药物。其中，所述受体细胞的种类不受特别限制，例如可以为大肠杆菌细胞、哺乳动物细胞，优选该受体细胞来源于哺乳动物。

在本发明中所使用的术语“构建体”是指这样的一种遗传载体，其包含特定核酸序列，并且能够将目的核酸序列转入宿主细胞中，以获得重组细胞。根据本发明的实施例，构建体的形式不受特别限制。根据本发明的实施例，其可以为质粒、噬菌体、人工染色体、粘粒（Cosmid）、病毒的至少一种，优选质粒。质粒作为遗传载体，具有操作简单，可以携带较大片段的性质，便于操作和处理。质粒的形式也不受特别限制，既可以是环形质粒，也可以是线性质粒，即可以是单链的，也可以是双链的。本领域技术人员可以根据需要进行选择。在本发明中所使用的术语“核酸”可以是任何包含脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于经过修饰的或者未经修饰的DNA、RNA，其长度不受任何特别限制。对于用于构建重组细胞的构建体，优选所述核酸为DNA，因为DNA相对于RNA而言，其更稳定，并且易于操作。

根据本发明的第七方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，该重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。从而，本发明的重组细胞能够有效表达构建体所携带的ABCA4基因突变体和CNGA1基因突变体的至少一种。根据本发明的一些实施例，利用本发明的重组细胞，能够有效地筛选治疗常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药物。根据本发明的实施例，受体细胞的种类不受特别限制，例如可以为大肠杆菌细胞、哺乳动物细胞，优选所述受体细胞来源于非人哺乳动物。

需要说明的是，在本文前面筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法部分中所描述的特征和优点，同样适用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统或者试剂盒，在此不再赘述。

此外，还需要说明的是，根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法、系统以及试剂盒，是本申请的发明人经过艰苦的创造性劳动和优化工作才完成的。

下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，可以参照《分子克隆实验指南》第三版或者相关产品进行，所采用的试剂和产品也均为可商业获得的。未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

实施例1全外显子组测序确定致病基因及突变位点

1、样本收集：

发明人收集到2个常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病患者家系（以下简称ARRP家系），在本文中有时也称为“ARRP家系1”和“ARRP家系2”。其中，图2分别显示了上述2个ARRP家系的家系图谱。其中，图2A为ARRP家系1的家系图谱，图2B为ARRP家系2的家系图谱。如图2所示，○表示正常女性；□表示正常男性；●表示女性患者；表示已故正常男性；表示已故正常女性；箭头所指为先证者。

其中，ARRP家系1：家系中3名患者在7-8岁之间出现夜盲，约30岁左右出现明显的视野缩小和中心视力下降，无明显色觉异常。眼底检查表现为典型中心型视网膜色素变性样改变：视网膜呈青灰色，视盘颜色蜡黄，视网膜血管明显变细，骨细胞样色素沉着分布在赤道部至血管弓附近和视盘周围，随着年龄增长色素密度增加，黄斑区未见明显视网膜色素上皮萎缩。该家系中视网膜色素变性的患者的双亲均未出现RP表型（病史回顾），家系中的第二代中3名成员出现RP表型、2名成员未出现RP表型，二代家系成员的子女及家系中的第三代成员均未出现RP表型，第三代成员中年龄最小的20岁，符合常染色体隐性遗传特征。

ARRP家系2：家系中2名患者在10岁左右出现夜盲，约40岁左右出现明显的视野缩小和中心视力下降，无明显色觉异常。眼底检查表现为视网膜色素变性样改变（图2）：视网膜色素上皮层萎缩、以周边视网膜为主，周边视网膜可见散杂骨细胞样色素沉着，视盘颜色稍淡，视网膜动脉变细。该家系中视网膜色素变性患者的双亲中均未出现RP症状及体征，家系第二代出现2名具有RP表型的成员和3名未出现RP表型的成员，第二代成员的子女即第三代均未出现RP表型，第三代成员中年龄最小成员17岁，符合常染色体隐性遗传特征。

两个先证者的临床诊断均为：常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。

发明人收集获得上述两个ARRP家系中的先证者（ARRP家系1的II:8，ARRP家系2的II:6）的DNA样本。

2、RP已知致病基因捕获测序确定致病基因及突变位点

发明人利用NimbleGen SeqCap EZ Human Exome Library v2.0目的基因捕获平台结合Illumina Hiseq2000的高通量测序技术，对上述2个ARRP家系中的先证者（ARRP家系1的II:8，ARRP家系2的II:6）进行RP已知致病基因捕获测序，具体步骤如下：

2.1样品制备

分别取上述2个ARRP家系中先证者的外周血，利用常规酚-氯仿法抽提外周血白细胞中的基因组DNA，并利用分光光度计测量DNA的浓度及纯度，所得的每个标本基因组DNA的OD260/OD280均位于1.7-2.0之间，浓度不少于200ng/μl，总量不少于30μg，备用。

2.2文库构建及测序

利用超声波仪（CovarisS2,Massachusetts,USA）将各基因组DNA样本随机打断成250-300bp左右的片段，随后按照制造商提供的操作说明书，在片段两端分别连接上接头制备文库（可参见：http://www.illumina.com/提供的Illumina/Solexa标准建库说明书，通过参照将其全文并入本文）。文库经纯化后经过Ligation-mediated PCR(LM-PCR)的线性扩增与捕获试剂SureSelect Biotiny lated RNA Library(BAITS)进行杂交富集，再经过LM-PCR的线性扩增，文库检测合格后即可上机测序，以便获得原始测序数据。其中，参照Illumina标准的成簇和测序的protocol进行测序，测序平台为Illumina Hiseq2000，读取长度为90bp，样本的平均测序深度不低于50×。

2.3变异检测、注释及数据库比较

利用Illumina basecalling Software1.7对上述获得的原始测序数据进行处理，经过过滤去污染后，使用SOAPaligner/SOAP2（可参见：Li R,Li Y,Kristiansen K,et al,SOAP:shortoligonucleotide alignment program.Bioinformatics2008,24(5):713-714；Li R,Yu C,Li Y,ea al,SOAP2:an improved ultrafast tool for short read alignment.Bioinformatics2009,25(15):1966-1967，通过参照将其全文并入本文）比对到参考基因组UCSC NCBI37/hg19，以便获得比对到基因组上的唯一比对序列。然后利用SOAPsnp(可参见：Li R,Li Y,Fang X,YangH,et al,SNP detection for massively parallel whole-genome resequencing.Genome Res2009,19(6):1124-1132，通过参照将其全文并入本文)确定靶区域的基因型。

结果，发明人在ARRP家系1的先证者II:8中发现有3300个单核苷酸多态性（SNPs）、390处插入/缺失（Indels）；在ARRP家系2的先证者II:6中发现有3233个单核苷酸多态性（SNPs）、641处插入/缺失（Indels）。随后通过dbSNP数据库(http://hgdownload.cse.ucsc.edu/goldenPath/hg19/database/snp132.txt.gz)，HapMap数据库(ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/hapmap)，千人基因组数据库(ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp)，炎黄数据库(http://yh.genomics.org.cn/)等公共数据库的过滤，去掉所有已知的且在数据库中频率高的变异（变异MAF值高，通常为不致病的普通多态性），并利用SIFT软件进行SNP功能预测。最终得到3个可能具有致病意义的突变位点：ABCA4基因的c.1924T>A（p.phe642Ile）突变、CNGA1基因的c.472delC（p.Leu158Phefs*4）突变和c.1744G>A（p.Gly582Arg）突变。其中ABCA4基因的c.1924T>A（p.phe642Ile，即p.F642I）突变为ARRP家系1携带的纯合突变；CNGA1基因的c.472delC（p.Leu158Phefs*4，即p.L158F*4)和c.1744G>A（p.Gly582Arg，即p.G582R）突变为ARRP家系2携带的复合杂合突变。对上述3个通过NGS技术鉴定的可能具有致病意义的突变位点分别在携带者中进行Sanger测序验证，证实均为阳性位点，即突变位点确实存在于先证者中。

之后，发明人再次利用Sanger测序方法，对经过验证的3个突变位点分别在各家系成员中进行扫描，最终确定：

1、ABCA4基因的c.1924T>A点突变导致p.F642I错义突变，该纯合点突变与ARRP家系1视网膜色素变性疾病表型共分离，即家系内所有患者均携带ABCA4基因c.1924T>A纯合突变，而家系中具有血亲关系的未发病成员携带该基因位点的野生型或杂合突变型。

2、CNGA1基因2个复合杂合突变（c.472delC、c.1744G>A）与ARRP家系2视网膜色素变性疾病表型共分离，即患者均携带CNGA1基因c.472delC和c.1744G>A杂合突变，而家系中具有血亲关系的未发病成员携带该基因位点的野生型或单一杂合突变型。同时发明人比较了各物种间上述3个位点的保守性，发现3个RP基因新突变点位在各物种间均高度保守（见图3）。

此外，ABCA4基因编码一种ATP结合转运蛋白(ATP-binding cassette transporters，ABCR)，在脊椎动物视网膜光感受器细胞外节小盘边缘特异性表达。ABCA4是一种分子量约为250kDa的单链转运蛋白，由两个对称的部分组成，每个部分包含一个多次跨膜螺旋结构和一个核苷酸结合域，ABCR参与光感受器细胞中全-反视黄醛（all-trans-retinal aldehyde，atRAL）的代谢，防止其在光感受器细胞内聚集而产生毒性作用。研究证实，ABCA4基因突变导致包括RP19在内的多种视网膜变性疾病的发生，ABCR蛋白异位表达、蛋白构异常以及视觉形成过程重要分子缺乏等综合因素导致光感受器细胞的凋亡。CNGA1基因编码一种在视杆细胞中特异性表达的α亚基cGMP门控的阳离子通道蛋白。黑暗条件下光照使视杆细胞视紫红质视黄醛的构象发生改变，激活cGMP磷酸二酯酶，水解细胞中的cGMP，α亚基cGMP门控通道关闭，视杆细胞去极化，产生视觉信号。研究表明，CNGA1基因突变可以导致RP49型发病，当CNGA1功能发生异常时，模拟了视杆细胞内低cGMP水平，相当于使视杆细胞持续处于光照条件下，继而引发了一系列病理反应，最终导致视杆细胞凋亡。综上，结合RP家系遗传学研究证据以及ABCA4、CNGA1基因功能回顾，发明人认为本研究中发现的3个新突变位点（ABCA4基因的c.1924T>A（p.phe642Ile）突变、CNGA1基因的c.472delC（p.Leu158Phefs*4）突变和c.1744G>A（p.Gly582Arg）突变）为RP致病基因的新突变位点。

实施例2Sanger法测序验证常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的致病突变

分别对实施例1中所述的ARRP家系1中的患者（II:3、II:6、II:8）以及家系内正常成员（II:1、II:5、III:1、III:2），以及ARRP家系2中患者（II:1、II:6）以及家系内正常成员（I:2、II:4、III:1、III:5）的ABCA4和CNGA1基因进行检测，分别针对ABCA4基因的c.1924T>A突变位点和CNGA1基因的c.472delC突变、c.1744G>A突变位点所在序列设计引物，然后通过PCR扩增、产物纯化和测序的方法获得上述突变的有关序列，根据确定序列测定结果属于突变型还是野生型，是杂合突变还是纯合突变，以及序列与表型在家系内是否呈现共分离来验证ABCA4和CNGA1与常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病之间的相关性。

具体方法步骤如下：

1、DNA提取

按照实施例1中所述的提取DNA的方法，分别提取制备受试者外周静脉血中的基因组DNA，备用。

2、引物设计及PCR反应

首先，参考人类基因组序列数据库GRCh37.1/hg19，设计得到具有SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列的ABCA4基因外显子特异性引物，以及具有SEQ ID NO：7-10所示的核苷酸序列的CNGA1基因外显子特异性引物，具体见下表。

接着，分别按照以下配比配制各基因组DNA样本的PCR反应体系以及进行PCR反应。

针对各突变位点所在的外显子序列，均按以下配比分别配制各基因组DNA样本的PCR反应体系：

反应体系：25μl

体系组成	体积（单位μl）
		DNA模板(20ng/μl)	1
2×GC BufferⅠ(加入了Mg2+)	2.5
		2mM dNTP	2
LA Taq酶（5U/μl）	0.25
		引物（100ng/μl）正/反向	1/1
去离子水	加至25

然后，将配制获得各PCR反应体系按照以下反应条件分别进行PCR反应（不同的突变位点采用相同的反应条件）：

反应条件：

由此，获得上述各受试者的PCR扩增产物。

3、测序

将步骤2中获得的各受试者的PCR扩增产物，进行DNA测序。其中，测序采用ABI3730型测序仪进行。

基于测序结果，对上述各样本进行ABCA4和CNGA1基因编码序列比对。发明人发现，ABCA4基因的c.1924T>A点突变导致p.F642I错义突变，该纯合点突变与ARRP家系1视网膜色素变性疾病表型共分离，即家系内所有患者均携带ABCA4基因c.1924T>A纯合突变，而家系中具有血亲关系的未发病成员携带该基因位点的野生型或杂合突变型；CNGA1基因2个复合杂合突变（c.472delC、c.1744G>A）与ARRP家系2视网膜色素变性疾病表型共分离，即患者均携带CNGA1基因c.472delC和c.1744G>A杂合突变，而家系中具有血亲关系的未发病成员携带该基因位点的野生型或单杂合突变型。从而在遗传学方面证实了这3个RP基因新突变位点：ABCA4基因的c.1924T>A（p.phe642Ile）突变、CNGA1基因的c.472delC（p.Leu158Phefs*4）突变和c.1744G>A（p.Gly582Arg）突变为ARRP的致病基因突变。虽然ABCA4和CNGA1基因已被证实为不同RP表型的致病基因，但本研究中发现的3个突变位点为新致病突变位点，目前在国内、国外的其他相关文章中未见报道。

其中，图4显示了ARRP家系1的先证者II:8及正常对照的ABCA4基因突变位点的Sanger测序验证峰图，图5显示了ARRP家系2的先证者II:6及正常对照的CNGA1基因突变位点的Sanger测序验证峰图。由图4可知，ARRP家系1的先证者II:8的ABCA4基因由野生型c.1924T/T纯合位点突变为c.1924A/A纯合，突变导致ABCA4蛋白p.642苯丙氨酸改变为异亮氨酸。由图5可知，ARRP家系2的先证者II:6的CNGA1基因由野生型c.472C/C纯合位点突变为c.472C/472delC杂合，突变导致CNGA1蛋白p.158亮氨酸改变为苯丙氨酸、p.161缬氨酸改变为终止密码子；CNGA1基因由野生型c.1744G/G纯合位点突变为c.1744G/A杂合，突变导致CNGA1蛋白p.582甘氨酸改变为精氨酸。

综上，本实施例进一步证明了ABCA4基因的c.1924T>A（p.phe642Ile）突变、CNGA1基因的c.472delC（p.Leu158Phefs*4）突变和c.1744G>A（p.Gly582Arg）突变，为ARRP的致病基因新突变。

实施例3检测试剂盒

制备一检测试剂盒，其包含适于检测ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的引物（其中与SEQ ID NO：1相比，所述ABCA4基因突变体具有c.1924T>A突变；与SEQ ID NO：3相比，所述CNGA1基因突变体具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变），以便用于筛选易患常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品，其中这些引物包括SEQ ID NO：5-6所示的ABCA4基因外显子特异性引物（见实施例1），以及SEQ ID NO：7-10所示的CNGA1基因外显子特异性引物（见实施例1）。

利用上述试剂盒筛选易患常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的具体步骤为：按照实施例2的步骤1所述的方法提取待测者DNA，以所提取的DNA为模板与上述外显子特异性引物进行PCR反应，并按照本领域常规方法对PCR产物纯化，将纯化的产物进行测序，然后通过观察测序所得到的序列是否具有c.1924T>A纯合突变，或者具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，从而有效地检测待测者是否易患常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病，进一步，能够从待测者中筛选出易患常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种分离的核酸，其特征在于，

与SEQ ID NO：1相比，所述核酸具有c.1924T>A突变；或者

与SEQ ID NO：3相比，所述核酸具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变，

任选地，所述核酸为DNA。

2.一种分离的多肽，其特征在于，

与SEQ ID NO：2相比，所述分离的多肽具有p.F642I突变；或者

与SEQ ID NO：4相比，所述分离的多肽具有p.L158F*4突变，或者p.G582R突变，

任选地，所述多肽是由权利要求1所述的核酸编码的。

3.一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，其特征在于，包括以下步骤：

从所述生物样品提取核酸样本；

确定所述核酸样本的核酸序列；

所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，是所述生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的指示，

任选地，所述生物样品为选自人体血液、皮肤、毛发和肌肉的至少一种，

任选地，所述核酸样本为全基因组DNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，从所述生物样品提取核酸样本进一步包括：

从所述生物样品提取RNA样本，优选所述RNA样本为mRNA；以及

基于所述RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样本。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，确定所述核酸样本的核酸序列进一步包括：

针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及

对所述核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果，

任选地，采用选自Hiseq2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种对所述核酸测序文库进行测序，

任选地，针对所述核酸样本，构建核酸测序文库进一步包括：

利用选自ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，对所述核酸样本进行PCR扩增；以及

针对所得到的扩增产物，构建所述核酸测序文库，

任选地，所述ABCA4基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-10所示的核苷酸序列，其中，针对c.472delC突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸序列；针对c.1744G>A突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：9-10所示的核苷酸序列。

6.一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统，其特征在于，包括：

核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；

核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；

判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQ ID NO：1相比具有c.1924T>A突变，或者与SEQ ID NO：3相比具有c.472delC和c.1744G>A的复合杂合突变，判断所述生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病，

任选地，所述核酸提取装置进一步包括：

RNA提取单元，所述RNA提取单元用于从所述生物样品提取RNA样本；以及

反转录单元，所述反转录单元与所述RNA提取单元相连，用于对所述RNA样本进行反转录反应，以便获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样本。

7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述核酸序列确定装置进一步包括：

文库构建单元，所述文库构建单元用于针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及

测序单元，所述测序单元与所述文库构建单元相连，用于对所述核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果，

任选地，所述文库构建单元进一步包括：

PCR扩增模块，所述PCR扩增模块中设置有选自ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，以便利用ABCA4和CNGA1基因外显子特异性引物的至少一种，对所述核酸样本进行PCR扩增，

任选地，所述ABCA4基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-10所示的核苷酸序列，其中，针对c.472delC突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸序列；针对c.1744G>A突变，所述CNGA1基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO：9-10所示的核苷酸序列，

任选地，所述测序单元包括选自HISEQ2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种。

8.一种用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒，其特征在于，含有：

适于检测ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的试剂，其中

与SEQ ID NO：1相比，所述ABCA4基因突变体具有c.1924T>A突变；

与SEQ ID NO：3相比，所述CNGA1基因突变体具有c.472delC突变，或者c.1744G>A突变，

任选地，所述试剂为核酸探针或引物。

9.一种构建体，其特征在于，包含权利要求1所述的分离的核酸。

10.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求9所述的构建体转化受体细胞而获得的。