CN104757544B - 一种具有抑菌作用的膳食补充剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抑菌作用的膳食补充剂及其制备方法和应用。所述具有抑菌作用的膳食补充剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于番茄汁培养基中震荡发酵培养获得发酵液；(2)将步骤(1)所得发酵液离心取上清，冷冻干燥即得。本发明所述具有抑菌作用的膳食补充剂在制备时采用的原料为番茄汁，其来源天然，因而具有更高的食品安全性；本发明所述的膳食补充剂制备方法工艺简单，仅需三步：发酵、离心、冻干即可完成，大大减少了传统复杂工艺可能带来的污染问题。所得膳食补充剂的抑菌效果显著，抑菌作用稳定。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有抑菌作用的膳食补充剂及其制备方法和应用。
背景技术
膳食补充剂是一种日常营养补充剂，其可通过维生素、矿物质、氨基酸等营养成分的补充，来提高机体健康水平和降低疾病发生风险。然而现有的膳食补充剂基本都是通过多种营养成分的组合制备而成的，复杂的配方成分极大地增加了膳食补充剂在制备过程中被污染的风险，进而对消费者的健康形成了潜在的威胁。此外，由于微生物的代谢产物对机体的益生作用已被广泛认同，与膳食补充剂配合使用势必相得益彰，但目前对有害菌有明确抑制效果的功能性膳食补充剂较少，因此，寻找来源天然、操作简便、性质稳定的含益生菌并且具有抑菌功能的膳食补充剂及其制备方法将是膳食补充剂的重要研究方向之一。
发明内容
因此，本发明为了解决目前具有抑菌性能的膳食补充剂缺乏天然来源，而且这种膳食补充剂的制备工艺较为复杂，其稳定性差及抑菌效果不明确的问题，提供了一种具有抑菌作用的膳食补充剂及其制备方法。
本发明人发现，现有的膳食补充剂制备所涉及的配方相当复杂，正如背景技术内容所述，现有的膳食补充剂往往是通过多种营养成分的组合制备而成的，由于配方成分复杂，对膳食补充剂原料的安全性提出了更高的要求，同时大大增加了在膳食补充剂的制备过程中产生污染的风险，从而对消费者的健康构成了潜在的威胁，这种现状与当前消费者日益增强的食品安全意识构成了极大的矛盾和冲突，为了解决这一矛盾，发明人对抑菌性的膳食补充剂的制备方法，特别是菌种的培养方式，培养基的选择，发酵培养的温度、发酵培养的时间等一系列技术参数进行了认真的分析和筛选，最终得到了本发明所述的技术方案以及所得具有抑菌性能的膳食补充剂。制备该膳食补充剂的原料来源天然，而且制备方法工艺简便，所得产品的保存稳定性极佳，能够获得稳定性极佳的抑菌技术效果。本发明将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333，DSM28815发酵番茄汁培养基获得的发酵液上清冷冻干燥后，发现所得产物具有强烈的抑菌活性，通过反复验证，该抑菌活性的效果非常稳定，从而完成了本发明。
因此，为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一是：一种具有抑菌作用的膳食补充剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于番茄汁培养基中震荡发酵培养获得发酵液；
(2)将步骤(1)所得发酵液离心取上清，冷冻干燥即得。
其中步骤(1)为将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于番茄汁培养基中震荡发酵培养获得发酵液。其中所述类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)为本领域常规的类芽孢杆菌，较佳地为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)，其保藏编号为CGMCC No.8333。所述类芽孢杆菌为现有技术，其制备方法为本领域常规制备方法，或者通过从保藏中心购买获得。其中所述番茄汁培养基为本领域常规的番茄汁培养基，所述的番茄汁培养基较佳地由包括由以下步骤组成的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，过滤后煮沸，4,000-12,000g离心5～10min，取上清，灭菌，冷却即得。其中所述的过滤采用的方法为本领域常规的过滤方法，较佳地为采用100目纱布过滤，煮沸的时间较佳地为1～10分钟，所述番茄汁培养基的pH值较佳地为pH6.0～8.0，所述的灭菌温度较佳地为110～135℃，灭菌时间较佳地为10～30分钟。其中所述类芽孢杆菌的接种量较佳地为1～5％，更佳地为2～3％，最优选2.5％，所述百分比为体积百分比，类芽孢杆菌的发酵培养的温度较佳地为25℃～37℃，更佳地为30℃～35℃，最优选为32℃，所述震荡的速度较佳地为100rpm～300rpm，更佳地为150rpm～250rpm，最优选地为200rpm，所述发酵培养的时间较佳地为24小时～72小时，更佳地为36小时～48小时，最优选地为42小时。当所述发酵培养的温度和时间，或者类芽孢杆菌的接种量不在上述范围值之内时，所得发酵产物的抑菌效果会产生显著降低。
发明所述制备方法中，将所述类芽孢杆菌CGMCC No.8333接种于番茄汁培养基之前，较佳地还包括该类芽孢杆菌CGMCC No.8333活化获得类芽孢杆菌种子的步骤。所述活化的步骤较佳地为：将本发明所述类芽孢杆菌CGMCC No.8333接种在TYC固体培养基中，25～30℃培养18～28小时即得类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子；将所得类芽孢杆菌CGMCCNo.8333种子的菌落均匀分散于TYC液体培养基内，再按2％～5％体积百分比的接种量接种于TYC液体培养基中震荡培养，摇床转速为100～200r/min，培养18-28小时，将所得培养物离心弃去上清，所得菌体用无菌蒸馏水洗涤后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，即得发酵用的类芽孢杆菌的种子。
其中步骤(2)为将步骤(1)所得发酵液离心取上清，冷冻干燥即得。其中所述离心的速度较佳地为8,000～12,000g，更佳地为10000～11000g，离心的时间较佳地为5～10分钟，更佳地为6～8分钟。当所述离心的速度和离心的时间不在上述范围值之内时，所得发酵产物的抑菌效果会产生显著降低，其抑菌性能的稳定性也会大幅下降。
其中所述的冷冻干燥为本领域常规的冷冻干燥方法，所述冷冻干燥方法较佳地为真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥条件较佳地为：板层极限温度≤-60℃，冷阱极限温度-70℃，板层装料厚度0.5～2.0mm，真空度10～30Pa。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二是：一种如本发明所述的制备方法所得具有抑菌作用的膳食补充剂。
本发明所述具有抑菌作用的膳食补充剂的制备方法中各步骤所述技术特征的优选范围与上文所述具有抑菌作用的膳食补充剂的制备方法中相应的内容完全一致，具体请参见上文所述内容，此处不再赘述。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三是：本发明所述的膳食补充剂在制备功能性食品中的应用。
本发明所述功能性食品为本领域常规的功能性食品，是指具有特定营养保健功能的食品，即适宜于特定人群食用，具有调节肌体功能，不以治疗为目的的食品。功能性食品有时也称为保健品食品。本发明所述功能性食品较佳地为：增强人体体质的食品，增强免疫能力的食品以及防止疾病的食品等等。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
1、本发明所述具有抑菌作用的膳食补充剂在制备时采用的原料为番茄汁，其来源天然，因而具有更高的食品安全性；
2、本发明所述用于制备膳食补充剂的原料为番茄，其来源广、成本低，发酵菌种为类芽孢杆菌单一菌种，上述组合有利于产品品质的标准化与工业大规模生产的成本控制。
3、创新性地将类芽孢杆菌应用于番茄汁发酵，并获得具有抑菌效果的膳食补充剂，相关技术尚未有过报道。
4、本发明所述的膳食补充剂制备方法工艺简单，仅需三步：发酵、离心、冻干即可完成，大大减少了传统复杂工艺可能带来的污染问题。
5、与现有膳食补充剂相比，本发明制备的膳食补充剂具有明确的抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)生长繁殖的作用，具有替代抗生素类添加剂应用于功能性食品中潜在价值。
6、采用本发明的制备方法获得的膳食补充剂在加热、酶解及长期保存条件下均表现出良好的抑菌活性，该膳食补充剂可应用于功能性食品的工业化生产及相关领域中，其应用前景十分广阔。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所使用的试剂若未加说明，均为分析纯试剂，购买自国药集团。
实施例1膳食补充剂的制备与抑菌效果的检测
1、材料与方法
种子(发酵菌种)的制备：将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)(所述类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.8333，该菌株被命名为DSM28815，该菌株的来源请参见公开号为CN103740618A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于TYC固体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mLTYC液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30℃、180rpm震荡培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于TYC液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃、180rpm震荡培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
指示菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CGMCC 1.879、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)CGMCC 1.1848、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)CGMCC1.9136，以上几种指示菌株都购买自CGMCC。
指示菌液的制备：将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于LB固体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL LB液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30℃、180rpm震荡培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于LB液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃、180rpm震荡培养20h后，即得相应的指示菌液。
指示平板的制备：将上述方法制备的指示菌液进行稀释，使其细菌浓度约为107cfu/mL，以体积比1：150的比例吸取稀释的指示菌液注入45℃无菌LB固体培养基中，充分混匀后迅速倒平板，待平板凝固且表面水分蒸发完全后即可。
抑菌活性的检测方法：以点种法在指示平板上滴加20μL待测样品，置于30℃培养20h后测量并记录抑菌圈直径。
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸1min，12,000g离心10min取上清，调节pH至6.0，110℃灭菌30min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
2、膳食补充剂的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)以5％(体积百分比)接种量接种于pH6.0的番茄汁培养基中，25℃、300rpm震荡培养24h获得发酵液，将上述发酵液8,000g离心10min取上清，冷冻干燥即得膳食补充剂A。
3、膳食补充剂抑菌活性的测定
向膳食补充剂A加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表1 膳食补充剂的抑菌效果
由表1可以看出，膳食补充剂A作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为10mm、12mm和11mm，由此可见，本发明所得的膳食补充剂A对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例2膳食补充剂的制备与抑菌效果的检测
1、材料与方法：
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸10min，4000g离心10min取上清，调节pH至8.0，135℃灭菌10min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
其他材料与方法同实施例1。
2、膳食补充剂的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)以1％(体积百分比)接种量接种于pH8.0的番茄汁培养基中，37℃、100rpm震荡培养72h获得发酵液，将上述发酵液10,000g离心8min取上清，冷冻干燥即得膳食补充剂B。
3、膳食补充剂抑菌活性的测定
向膳食补充剂B加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表2 膳食补充剂的抑菌效果
由表2可以看出，膳食补充剂B作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为13mm、15mm和13mm，由此可见，本发明所得的膳食补充剂B对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例3膳食补充剂的制备与抑菌效果的检测
1、材料与方法同实施例1。
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，调节pH至7.0，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
其他材料与方法同实施例1。
2、膳食补充剂的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)以2％(体积百分比)接种量接种于pH7.0的番茄汁培养基中，30℃、180rpm震荡培养48h获得发酵液，将上述发酵液12,000g离心5min取上清，冷冻干燥即得膳食补充剂C。
3、膳食补充剂抑菌活性的测定
向膳食补充剂C加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表3 膳食补充剂的抑菌效果
由表3可以看出，膳食补充剂C作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为15mm、17mm和14mm，由此可见，本发明所得的膳食补充剂C对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例4膳食补充剂的制备与抑菌效果的检测
1、材料与方法：番茄汁培养基的制备方法同实施例1。
2、膳食补充剂的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)以2％(体积百分比)接种量接种于pH8.0的番茄汁培养基中，30℃、150rpm震荡培养36小时获得发酵液，将上述发酵液10,000g离心6min取上清，冷冻干燥即得膳食补充剂。
3、膳食补充剂抑菌活性的测定
所得膳食补充剂抑菌活性的测定方法与实施例1相同，所得结果为：对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为11mm、14mm和12mm，由此可见，本发明所得的膳食补充剂对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例5膳食补充剂的制备与抑菌效果的检测
1、材料与方法：番茄汁培养基的制备方法同实施例1。
2、膳食补充剂的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)以2.5％(体积百分比)接种量接种于pH8.0的番茄汁培养基中，30℃、200rpm震荡培养42小时获得发酵液，将上述发酵液11,000g离心8min取上清，冷冻干燥即得膳食补充剂。
3、膳食补充剂抑菌活性的测定
所得膳食补充剂抑菌活性的测定方法与实施例1相同，所得结果为：对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别14mm、16mm和13mm，由此可见，本发明所得的膳食补充剂对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
效果实施例1常温保存条件下的膳食补充剂抑菌活性的稳定性
将实施例1-3制备的膳食补充剂A、B和C分装入无菌的铝箔袋，常温(25℃)保存6个月和12个月后取出，加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，测定其抑菌活性，结果如下表所示。
表4 常温保存条件下膳食补充剂抑菌活性的稳定性
由表4可知，所有测试的膳食补充剂在常温保存12个月后，稳定地保持了对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)抑菌活性。
效果实施例2不同pH条件下膳食补充剂抑菌活性的稳定性
将实施例1-3制备的膳食补充剂A、B和C分别加入pH＝3、5、7、9的0.2M磷酸盐缓冲溶液配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，获得待测样品A-3、A-5、A-7、A-9、B-3、B-5、B-7、B-9、C-3、C-5、C-7和C-9，各组样品的抑菌活性如下表所示：
表5 不同pH条件下膳食补充剂的抑菌活性
由表5可知，膳食补充剂在不同pH条件下的抑菌效果非常稳定，可见本发明制备的膳食补充剂即使在酸性消化液中依然保持良好的抑菌活性，因此该膳食补充剂具有工业化制备功能性食品的潜力。
效果实施例3酶处理后的膳食补充剂抑菌活性的稳定性
本发明还采用了胰蛋白酶(E.C.3.4.21.4，购买自Sigma)，胃蛋白酶(E.C.3.4.23.1，购买自Sigma)，脂肪酶(E.C.3.1.1.3，购买自Sigma)，蛋白酶K(E.C.3.4.21.64，购买自Sigma)处理膳食补充剂的方法来体外模拟动物体内不同的酶对膳食补充剂抑菌活性的影响，具体操作如下：
根据不同酶的最适反应pH配制对应pH的0.2M磷酸盐缓冲溶液，向实施例1-3制备的膳食补充剂A、B和C分别加入上述不同pH的的0.2M磷酸盐缓冲溶液配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后，在不同pH的上清液中溶入对应的酶，使酶的最终浓度为10mg/ml，将混合液在37℃水浴中保温2h，调节pH至中性，测定各样品组的抑菌活性，并与酶处理前的抑菌活性进行比较，结果如下表所示：
表6 酶处理后膳食补充剂的抑菌活性
由表6可知，膳食补充剂经不同酶处理后，其抑菌效果依然稳定，因此，本发明制备的膳食补充剂可以在动物体内的消化酶中保持良好的抑菌活性。
对比例1
将实施例3中的接种量、培养温度、培养基pH、震荡速度以及发酵时间逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的膳食补充剂。各组膳食补充剂的抑菌效果下表所示。
表7 不同方法制备所得膳食补充剂的抑菌效果
从表7所示的结果中可以得出，将所述膳食补充剂的制备方法中接种量、培养温度、培养基pH、震荡速度以及发酵时间调整到本发明请求保护的范围之外的时候，所得膳食补充剂的抑菌效果显著降低。
对比例2
参考实施例3所述方法，比较了由类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCCNo.8333或DSM28815、植物乳杆菌(L.plantarum)ATCC 14917(购买自ATCC)、干酪乳杆菌(L.casei)ATCC 393(购买自ATCC)制备的膳食补充剂的抑菌效果，具体操作如下：
1、材料与方法
种子(发酵菌种)的制备：
植物乳杆菌和干酪乳杆菌种子的制备：将植物乳杆菌ATCC 14917和干酪乳杆菌ATCC 393的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(购买自Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(购买自Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
其他材料与方法同实施例3。
1、膳食补充剂抑菌活性的制备
将各菌株以2％(体积百分比)接种量接种于pH 7.0的番茄汁培养基中，分别培养(植物乳杆菌和干酪乳杆菌37℃厌氧培养，类芽孢杆菌30℃、180rpm震荡培养)48h获得发酵液，将上述发酵液12,000g离心5min取上清，冷冻干燥即得不同菌株生产的膳食补充剂。
3、膳食补充剂抑菌活性的检测
向膳食补充剂加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的膳食补充剂溶液，混合均匀后测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表8 不同菌株制备的膳食补充剂的抑菌效果
由表8可知，由类芽孢杆菌制备的膳食补充剂的抑菌效果显著高于其他菌株，因此，以类芽孢杆菌对番茄汁进行发酵是制备具有抑菌作用的膳食补充剂的优选方法。
对比例3
以实施例3所述方法制备的膳食补充剂C为待测样品，同时选用目前市场上常规的细菌素产品尼萨普林(Nisaplin，购买自丹尼斯克公司)为对照，分别溶解于pH＝3、5、7、9的0.2M磷酸盐缓冲溶液中，得到浓度为50mg/mL的待测样品组S-3、S-5、S-7、S-9和对照组N-3、N-5、N-7、N-9，各组样品的抑菌效果如下表所示。
表9 与常规细菌素产品的抑菌效果比较
表9显示了常规的细菌素制品与本发明制备的膳食补充剂在不同pH条件下的抑菌效果，数据表明，尼萨普林在中性或中性以上的pH条件下，其抑菌活性开始丧失，而本发明制备的膳食补充剂却在相同条件下依然保持着稳定的抑菌能力，由此可见，本发明制备的膳食补充剂具有更优秀的抑菌稳定性，该特性推翻了现有细菌素制品只能应用于偏酸环境下的食品加工领域的局限性，因此，本发明制备的膳食补充剂不仅本身可作为功能性膳食补充剂直接服用，而且也可作为抑菌添加剂应用于中性及中性以上pH环境的食品制备工艺中，其应用范围将比现有细菌素制品更广。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (8)
1.一种具有抑菌作用的膳食补充剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333接种于番茄汁培养基中震荡发酵培养获得发酵液；所述的番茄汁培养基由包括以下步骤的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，过滤，过滤后煮沸1～10分钟，4,000～12,000g离心5～10分钟，取上清，调节pH值到6.0～8.0，110℃～135℃灭菌10～30分钟，冷却即得；所述发酵培养的温度为25℃～37℃，所述震荡的速度为100rpm～300rpm，所述发酵培养的时间为24小时～72小时；
(2)将步骤(1)所得发酵液离心取上清，冷冻干燥即得。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述类芽孢杆菌的接种量为1～5％，所述百分比为体积百分比。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的速度为8,000～12,000g，离心的时间为5～10分钟。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述类芽孢杆菌的接种量为2～3％，所述百分比为体积百分比，所述发酵培养的温度为30℃～35℃，所述震荡的速度为150rpm～250rpm，所述发酵培养的时间为36小时～48小时。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述类芽孢杆菌的接种量为2.5％，所述百分比为体积百分比，所述发酵培养的温度为32℃，所述震荡的速度为200rpm，所述发酵培养的时间为42小时。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的速度为10000～11000g，离心的时间为6～8分钟。
7.一种如权利要求1～6任一项所述的制备方法所得具有抑菌作用的膳食补充剂。
8.如权利要求7所述的膳食补充剂在制备功能性食品中的应用。
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