KR20140002444A - 유산균 배양용 배지 - Google Patents

유산균 배양용 배지 Download PDF

Info

Publication number
KR20140002444A
KR20140002444A KR1020120071503A KR20120071503A KR20140002444A KR 20140002444 A KR20140002444 A KR 20140002444A KR 1020120071503 A KR1020120071503 A KR 1020120071503A KR 20120071503 A KR20120071503 A KR 20120071503A KR 20140002444 A KR20140002444 A KR 20140002444A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
medium
lactic acid
acid bacteria
content
extract
Prior art date
Application number
KR1020120071503A
Other languages
English (en)
Inventor
김인철
문신혜
Original Assignee
목포대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 목포대학교산학협력단 filed Critical 목포대학교산학협력단
Priority to KR1020120071503A priority Critical patent/KR20140002444A/ko
Publication of KR20140002444A publication Critical patent/KR20140002444A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 유산균 배양배지 조성물, 보다 구체적으로 배추 열수 추출물, 말토스(maltose), 효모 추출물(yeast extract), 아세트산나트륨(Sodium Acetate, CH3COONa·H2O), 디소듐포스페이트(Disodium phosphate, Na2HPO4·2H2O), 시트르산나트륨(Sodium citrate, C6H5Na3O7·H2O), 황산암모늄(Ammonium sulfate, (NH4)2SO4), 황산마그네슘(Magnesium sulfate, MgSO4·H2O) 및 황산 망간(Manganese sulfate, MnSO4·4H2O)을 포함하는 유산균 배양배지 조성물에 과한 것이다.

Description

유산균 배양용 배지{A CULTRURE MEDIUM FOR LACTIC ACID BACTERIA}
본 발명은 미생물 배양용 배지, 구체적으로 유산균 배양용 배지에 관한 것이다.
유산균은 인간의 식생활에 있어 고대로부터 이용되어 왔던 미생물의 하나로서, 우리나라에서는 김치나 된장 등과 같은 발효 식품에, 서양에서는 치즈 등과 같은 유가공 발효 식품에 많이 이용되어 있다.
최근에는 유산균에 대한 연구가 활발히 진행되어 일반 식품뿐만 아니라 건강기능식품 및 의약품으로써 이용되는 등 그 응용범위가 넓어지고 있다.
구체적으로, 상기 유산균은 사람이나 동물의 소화관이나 수십 종의 농산물에 이르기까지 자연계에 널리 분포되어 있으며, 또한 요구르트, 유산균음료, 치즈, 발효버터, 된장, 간장, 김치, 소시지 등의 식품에서 유산균체제 등의 약품 제조나 사료첨가제에 이르기까지 적극적으로 이용되고 있다.
상기 유산균은 일 예로, 스트렙토코코스 속(Streptococcus sp.) 속, 페디오코코스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.) 등이 있다.
상기 유산균을 이용하여 발효시킨 식품은 영양적인 가치뿐만 아니라 여러 가지 생리적인 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 생성된 유산이 제품의 보존 기간을 늘려주며, 특유의 상쾌한 신맛을 주고, 유해미생물에 대한 생장 억제기능을 발휘하며, 유단백질의 소화율을 높이고, 칼슘, 철, 인의 흡수를 촉진시키는 다양한 장점을 지고 있다.
현재까지 밝혀진 유산균의 건강 효과는 정장작용으로 설사·변비 예방, 유해세균 억제로 장암 및 노화 방지, 비타민 생성으로 발육촉진, 콜레스테롤 조절로 성인병 예방 및 면역력 증강 등이다. 또한, 상기 유산균은 장내에서 병원균 증식을 억제하고, 장내 상피세포나 면역세포로 하여금 면역 능력을 조절하는 물질을 생산하도록 유도하며, 병원균과 경합하여 병원균의 증식을 억제하고, 이차적으로는 항생제 치료나 외부 환경 변화에 대해 장내 세균총의 항상성을 유지하게 하는 것으로 보고되어 있다.
최근 들어, 장내 유익균의 기능, 즉 장 내의 산도를 내려 장의 운동을 촉진시켜 음식물의 소화와 영양소의 흡수를 돕고, 유해물질의 생성을 억제함과 동시에 분해하며, 비타민 및 아미노산을 합성하고, 병원균의 장관감염을 방어하며, 면역력을 높이는 등의 유산균의 중요한 역할 수행에 주목하여, 유산균을 분리하여 건강기능식품이나 의약품으로서 제품화하려는 다양한 노력이 활발히 진행되고 있다.
또한, 우리의 전통식품인 김치는 한국인이 가장 즐겨먹는 음식물 중 하나일 뿐 아니라, 국제적으로 보급되어 수출이 급증하고 있으며, 대단위 유통센터의 보급 및 학교 급식의 활성화로 공장 단위의 대량 생산이 이루어지고 있다.
김치를 제조하기 위한 주원료인 배추는 전체 원료의 90 중량% 정도를 차지하며, 이 중 상당부분은 폐기물로 버려지고 있는 실정이다. 특히, 대량의 배추 폐기물이 발생하는 김치 공장이나 청과물 시장 등에서는 배추 폐기물을 수집 및 처리하는데 상당한 노력, 시간, 및 비용을 소모하고 있다.
현재 배추 폐기물을 비롯한 유기성 폐기물은 전체 폐기물의 상당량을 차지하며, 쉽게 부패하여 악취를 발생시키고, 오수를 누출시켜 처리에 어려움을 겪고 있으며, 동시에 환경문제를 유발하고 있다.
따라서, 이러한 유기성 폐기물의 처리 방법에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다.
현재까지, 배추 폐기물은 대부분 매립되어 토양 미생물에 의한 분해에 의존하고 있으나 매립지에 한계가 있으며, 배추는 수분을 약 80%이상 함유하고 있어 부패가 빠르게 진행되기 때문에 악취가 발생하고, 폐기물의 분해산물이 수계로 유입될 경우 부영양화의 원인이 되기도 한다.
따라서, 매립 방법을 대체할 만한 다른 처리 방법이나 이를 활용하기 위한 용도의 개발에 대한 필요성이 증대되고 있는 실정이다.
KR 0453376 B
본 발명은 여러 환경과 관련된 문제를 발생되는 배추 폐기물의 새로운 용도와 관련하여, 배추 폐기물을 이용하는 미생물 배양배지, 구체적으로 배추 폐기물을 이용하는 유산균 배양배지에 관한 것이다.
본 발명은 배추 폐기물, 구체적으로 배추 또는 배추 폐기물의 열수 추출물을 유효성분으로 포함하는 유산균 배양배지 조성물에 관한 것이다.
상기 유산균 배양배지 조성물은 배추 열수 추출물, 말토스(maltose), 효모 추출물(yeast extract), 아세트산나트륨(Sodium Acetate, CH3COONa·H2O), 디소듐포스페이트(Disodium phosphate, Na2HPO4·2H2O), 시트르산나트륨(Sodium citrate, C6H5Na3O7·H2O), 황산암모늄(Ammonium sulfate, (NH4)2SO4), 황산마그네슘(Magnesium sulfate, MgSO4·H2O) 및 황산 망간(Manganese sulfate, MnSO4·4H2O)을 포함하는 유산균 배양배지 조성물일 수 있다.
상기 배추 열수 추출물은 배추 또는 배추 폐기물의 열수 추출물, 바람직하게는 배추 잎 열수 추출물일 수 있다.
상기 유산균은 스트렙토코코스 속(Streptococcus sp.) 속, 페디오코코스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.)로 이루어진 군중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 유산균 배양배지 조성물에 있어서, 상기 말토스의 함량은 2%(w/v)이고, 상기 효모 추출물(yeast extract)의 함량은 0.25%(w/v)이며, 상기 아세트산나트륨의 함량은 2%(w/v)이고, 상기 디소듐포스페이트의 함량은 0.8%(w/v)이며, 상기 시트르산나트륨의 함량은 0.8%(w/v)이고, 상기 황산암모늄의 함량은 0.8%(w/v)이며, 상기 황산마그네슘의 함량은 0.04%(w/v)이고, 상기 황산 망간의 함량은 0.02%(w/v)일 수 있다.
본 발명의 유산균 배양배지 조성물은 기존 폐기되던 배추 폐기물 또는 배추를 이용하여, 고부가가가치의 유산균 생체량을 대량생산할 수 있는 배양용 배지를 제공함으로써, 경제효과 및 환경적 효과가 우수한 것으로 평가된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 배추 추출물이 Leuc . citreum GR1의 성장에 미치는 영향을 나타낸 성장곡성 그래프에 관한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 배추 추출물의 농도에 따른 Leuc . citreum GR1의 성장에 미치는 영향을 나타낸 성장곡성 그래프에 관한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 배추 추출물이 Leuc . citreum GR1의 성장에 미친 영향을 나타낸 그래프에 관한 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 MRS 고체 배지와 MFL 고체 배지를 이용하여 배양한 경우, Leuc . citreum GR1의 콜로니 크기를 나타낸 사진이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 탄소원이 유산균 성장에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 탄소원의 종류 및 함량이 유산균 성장에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 탄소원의 종류 및 함량이 Leuc . citreum GR1의 영향을 미친 것을 확인한 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 질소원이 유산균 성장에 미치는 영향을 나타낸 그래프에 관한 것이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 질소원의 종류 및 함량이 유산균 성장에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 염류원(mineral)의 함량이 Leuc . citreum GR1의 영향을 미친 것을 확인한 그래프이다
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 염류원(mineral)의 함량이 Leuc . citreum GR1의 영향을 미친 것을 확인한 그래프이다
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 염류원(mineral)의 함량이 Leuc . citreum GR1의 영향을 미친 것을 확인한 그래프이다
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 최적 배지와 Leuc . citreum GR1의 영향을 MRS와 비교하여 나타낸 그래프이다
도 14는 본 발명의 일 실시예에 따른 최적 배지와 Leuc . citreum GR1의 영향을 MRS와 비교하여 나타낸사진이다
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 최적 배지와 Leuc . citreum GR1의 영향을 MRS와 비교하여 나타낸 그래프이다
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 기재한다. 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 배추 추출물이 포함된 배지에 포함된 배추 추출물 최적함량 확인
1-1. 배추 추출물 제조
대한민국 전라남도 소재 김치 공장(왕인식품)으로부터 폐 배추를 회수한 다음, 잎과 줄기를 분리하고, 각각의 잎과 줄기를 세척한 후, 물을 이용하여 열수 추출하였으며, 상기 열수 추출액을 이용하여, 하기 표 1에 기재된 바에 따라 기본 배지(MFL : media for lactic acid bacteria)를 제조하였다. 하기 표 1은 배추 추출물을 제외하고 첨가된 성분을 나타낸다.
Figure pat00001
1-2. 배양 균주
실시예 1 및 이하의 실시예에서 유산균의 성장 여부를 확인하기 위해 사용한 균주는 Leuconostoc citreum GR1을 사용하였다.
1-3. 배추 추출물 종류 및 농도 결정
김치 공장으로부터 폐배추를 회수한 다음, 추출하여 MFL 기본 배지에 적용함. Leuc . citreum GR1을 MRS 배지에 1 colony 접종하여 30/18~20 시간 배양 후, 원심분리(3,000 rpm/15 분)하여 균체를 회수함. 멸균수로 1 회 세척한 다음, 멸균수로 재현탁한 균체 현탁액을 MFL 배지에 1% 접종하여 30/24 시간 배양함. 시간 경과에 따른 생균수 및 분광광도계(Microplate spectrophotometer, BioTek)로 OD600 측정함. 대조구로 MRS 배지를 사용하고 배추 추출물 0~40% 범위 구간을 정하여, 그 결과를 도 1 내지 도 4와 하기 표 2 및 표 3에 나타내었다.
Figure pat00003
상기 도 1에 나타낸 바와 같이, Growth curve를 확인한 결과, MFL 배지에서 자란 Leuc . citreum GR1이 MRS 배지보다 흡광도 값이 0.2 이상 낮게 확인되었다.
또한, 상기 도 2에 나타낸 바와 같이, MFL 배지에 Leuc . citreum GR1 배양 후, 배추추출물 종류 및 농도에 따른 흡광도 값의 비교 결과, 잎 추출물 30%, 줄기 추출물 40%였을 때 가장 흡광도 값이 높게 나타났다.
또한, 상기 도 3에 나타낸 바아 같이, 24 시간 동안 배양 후, 생균수 측정 결과 MRS 배지, MFL 배지(줄기 추출물)보다 MFL 배지(잎 추출물 포함)에서 높게 나타났으며, 특히 30% 잎 추출물을 넣은 MFL 배지에서의 생균수가 가장 좋은 것으로 확인되었다.
또한, 상기 도 4에 나타낸 바와 같이, Leuc . citreum GR1의 집락이 MRS 배지보다 MFL(40% 배추 잎 추출물 및 줄기 추출물) 배지에서 더 작고 투명하여 외형의 변화가 발생하였다.
상기 결과를 볼 때, 배양 중 흡광도 값은 MFL 배지에서 생육한 Leuc . citreum GR1이 낮지만, 생균수는 MRS 배지보다 높게 나타난 이유는 Leuc . citreum GR1의 균체 크기가 작아졌기 때문으로 판단되었다.
실시예 2. 당 조성에 따른 종균 활성 최적화 배지 조건 확인
MFL 기본 배지(30% 배추 잎 추출물 포함)에 당 6 종(glucose, fructose, maltose, lactose, sucrose, galactose)를 사용하여 각각 0~8% 농도 범위를 설정하여 배지를 제조하였다.
Leuc . citreum GR1을 MRS 배지에 1 colony 접종하여 30/18~20 시간 배양 후, 원심분리(3,000 rpm/15 분)하여 균체를 회수함. 멸균수로 1 회 세척한 다음, 멸균수로 재현탁한 균체 현탁액을 MFL 배지에 1% 접종하여 30/24 시간 배양하였다. 시간 경과에 따른 생균수 및 분광광도계(Microplate spectrophotometer, BioTek)로 OD600 측정하였다. 상기 측정한 결과를 도 5 내지 도 7 및 표 4에 나타내었다.
상기 도 5 및 도 7에 나타낸 바와 같이, carbon source가 포함되지 않은 대조구 배지에서 Leuc . citreum GR1은 생육도가 매우 낮았으며, 24 시간 후 생균수 측정 결과, 109.07~108.19 CFU/mL으로 나타남으로써 초기 접종균수가 그대로 유지되는 것으로 확인되었다. 6 가지의 당 중 lactose와 galactose에 대해 흡광도 값은 0.05 이하를 나타내 성장을 하지 못했으며, 생균수 측정 결과 lactose에 대해 108.23~108.41 CFU/mL, galactose에 대해 107.68~107.73 CFU/mL로 확인되었으며, 이들은 각각 접종 균수에 대해 1.2~1.9 배, 0.37~0.37 배 증가하여 lactose에 대해 성장은 가능하나, galactose에 대해 오히려 생육이 억제되었다.
또한, 상기 도 5 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 흡광도 값이 24 시간 경과 후, 0.6 이상을 나타낸 당은 glucose, fructose, maltose, sucrose 였으며, 특히 fructose 6%, 8%와 maltose 3~8%는 다른 carbon source에 비해 정상기 구간에 흡광도 값의 증가하는 것이 확인되었다. 이들의 24 시간 배양 후 생균수 측정 결과, glucose는 109.34~109.66 CFU/mL이었고 glucose 6%가 가장 많은 생균수를 나타냄. 흡광도 값은 glucose 3~4%가 가장 높았으나, 이는 사균체의 영향으로 보였다. fructose는 109.46~109.70 CFU/mL이었으며 fructose 6%가 가장 높았으며, 흡광도 값도 이와 유사한 결과가 확인되었다. maltose는 109.69~109.77 CFU/mL이었으며 생균수 결과에서 볼 때 maltose 1%를 제외하고 모두 유사하였으며, 특히 maltose 2~4%였을 때 흡광도 값이 1.05 이상을 보임. sucrose는 109.18~109.54 CFU/mL이었으며, fructose와 마찬가지로 당 농도가 증가함에 따라 생균수도 증가하였다. 흡광도 값 또한 sucrose 8%일 때, 1.1065로 다른 당들에 비해 가장 높은 값을 나타내었다. 그러나 maltose에 비해 생균수가 낮음. 생균수 및 흡광도 값으로 봤을 때, maltose 2%일 때, 109.77 CFU/mL, 1.08로 가장 좋은 생육도가 확인되었다.
Figure pat00004
또한, 상기 도 6 및 상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 성장곡선을 통해 대수기를 관찰한 결과, glucose 2~6시간, fructose 4~8시간, maltose 6~10시간, sucrose 2~6시간으로 나타났다. 대수기에서 가장 빠른 성장 속도를 확인하기 위해 이 구간에 대한 일차 방정식의 기울기 값을 확인하였다. sucrose는 6 시간 이내에 흡광도 0.8 이상을 보임에 따라 다른 당들에 비해 정상기로 가는 속도가 빨랐으나, 빨리 정상기에 도달한 후, 더 이상의 성장을 보이지 않았으며, 흡광도 값은 maltose 보다 높은 것으로 확인되었지만 사균체의 영향일 가능성이 큰 것으로 확인되었다. 실제로 생균수는 maltose가 더 많은 것으로 확인됨에 따라, 정상기 도달 시간이 최적 생육도에 미치는 영향은 적은 것으로 판단되었다.
따라서, carbon source로 MFL 배지에 대한 당은 maltose 2%로 결정하였다.
실시예 3. 질소원에 따른 종균 활성 최적화 배지 조건 확인
MFL 기본 배지(30% 배추 잎 추출물, 2% maltose 포함)에 질소원 3 종(yeast extract, bacto peptone, beef extract)을 0~1% 범위구간으로 제조하였다.
Leuc . citreum GR1을 MRS 배지에 1 colony 접종하여 30/18~20 시간 배양 후, 원심분리(3,000 rpm/15 분)하여 균체를 회수하였다. 멸균수로 1 회 세척한 다음, 멸균수로 재현탁한 균체 현탁액을 MFL 배지에 1% 접종하여 30/24 시간 배양하였다. 시간 경과에 따른 생균수 및 분광광도계(Microplate spectrophotometer, BioTek)로 OD600 측정하였다. 상기 측정한 결과로부터 도 8 및 도 9와 표 5에 나타내었다.
Figure pat00005
상기 도 8에 나타낸 바와 같이, 질소원에 따른 Leuc . citreum GR1의 성장곡선을 확인한 결과, MFL 배지에 질소원을 첨가하지 않은 경우와 beef extract를 사용한 경우 생육도가 낮은 것으로 나타났다.
yeast extract와 peptone을 첨가한 배지에서 Leuc . citreum GR1은 정상기 이후에도 계속 흡광도 증가를 보였다. MRS 배지에서의 Leuc . citreum GR1은 대수기 도달속도가 다른 질소원에 비해 빠르지만 정상기 이후 흡광도 값의 증가 양상은 보이지 않았다. 생균수 결과 질소원에 따른 영향은 당에 비해 크게 나타나지 않았으나, yeast extract 109.79~109.81 CFU/mL, peptone 109.63~109.72 CFU/mL, beef extract는 109.41~109.56 CFU/mL로 MRS 109.56 CFU/mL보다 높은 생균수를 보인 조건은 yeast extract 및 peptone 0.1~1.0%, beef extract는 0.75%였음. yeast extract의 경우 흡광도 값에 따른 성장곡선이 0.25%~0.75%가 거의 유사하게 나타났으나, 이 중 생균수가 가장 높은 것으로 나타난 조건은 yeast extract 0.25%와 0.5%이었다.
또한, 상기 도 9 및 상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 성장곡선을 통해 대수기를 관찰한 결과, yeast extract 6~10시간, peptone 4~8시간, beef extract 4~8시간으로 나타났다.. 대수기에서 가장 빠른 성장 속도를 확인하기 위해 이 구간에 대한 일차 방정식의 기울기 값을 확인하였다. 성장속도는 yeast extract > peptone > beef extract 였으며, yeast extract는 대수기까지 가는 시간이 다른 질소원에 비해 느렸지만 정상기로 도달하는 속도를 나타내는 기울기가 0.1203~0.1474를 보여 다른 질소원에 비해 약 2 배 가까이 빠른 성장을 보임. 가장 빠른 속도를 보인 조건은 yeast extract 0.5%~1% 범위였으나, 24 시간 후의 생균수는 이들 조건보다 yeast extract 0.25%가 1.01~1.03 배 높았다.
그러므로, nitrogen source로 MFL 배지에 대한 질소원은 yeast extract 0.25%로 결정하였다.
실시예 4. 무기원에 따른 종균 활성 최적화 배지 조건 확인
무기원에 따른 배지 제조는 MFL 기본 배지(30% 배추 잎 추출물, 2% maltose, 0.25% yeast extract 포함)에 하기 표 6과 같이 무기원을 조절하여 수행하였다.
Figure pat00006
상기 표 6의 조성으로 무기원 농도를 조절한 배지를 제조한 후, Leuc . citreum GR1을 MRS 배지에 1 colony 접종하여 30/18~20 시간 배양 후, 원심분리(3,000 rpm/15 분)하여 균체를 회수하였다. 멸균수로 1 회 세척한 다음, 멸균수로 재현탁한 균체 현탁액을 MFL 배지에 1% 접종하여 30/24 시간 배양하였다. 시간 경과에 따른 생균수 및 분광광도계(Microplate spectrophotometer, BioTek)로 OD600 측정하였다. 상기 측정 결과를 도 10 내지 도 12 및 하기 표 7에 나타내었다.
Figure pat00007
상기 도 10 내지 도 12 및 표 7에 나타낸 바와 같이, 무기원에 따른 Leuc . citreum GR1의 성장곡선을 확인한 결과, MFL 배지에 무기원을 첨가하지 않은 경우 MRS 배지에서 배양한 경우보다 절반 이하의 흡광도 값을 보였다. 무기원이 풍부한 영양배지인 MRS에서는 10 시간 이후 정상기에 도달했으나, MFL 배지의 경우 무기원 농도가 높을수록 흡광도 값 증가 양상을 보이며 정상기 도달 시간이 늦어짐. 24 시간의 흡광도 값을 비교했을 때, MRS 배지와 0.5를 넣은 MFL 배지가 동일하게 나타났으며, 그 이상의 salt 농도에서는 MRS 배지보다 높은 흡광도를 보였다. 생균수 측정 결과에서 MRS 배지에서 배양된 Leuc . citreum GR1의 생균수는 109.54 CFU/mL이었으며, 0.25이하의 salt 농도를 지닌 MFL 배지에서는 이보다 낮았다. 반면, 1이상의 salt stock을 넣은 MFL 배지에서의 생균수는 MRS 배지에 대해 1.7~2.2 배 상승하였고. 특히 2salt stock 이상에서의 생균수는 109.87~109.88 CFU/mL로 유사하게 확인하였다.
또한, 상기 도 12에 나타낸 바와 같이, 성장곡선을 통해 대수기를 관찰한 결과, MRS 배지는 4~8시간, 0~1.0X salt는 6~10시간, 1.5X~2.5X salt는 8~12시간, 3X salt는 10~24 시간으로 나타났다.. 대수기에서 가장 빠른 성장 속도를 확인하기 위해 이 구간에 대한 일차 방정식의 기울기 값을 확인함. 성장속도는 2X > 1.5X > 1X농도였으며, 생균수가 높았던 2.5 X 및 3 X salt에서는 24 시간 이후에도 성장할 것으로 보였으나, 전체 생육 시간이 다른 무기원 농도에 비해 오래 걸릴 것으로 예상됨. 가장 빠른 속도를 보인 조건은 2 X salt 였다. 그러므로 MFL 배지에 대한 무기원의 농도는 2X로 결정하였다.
실시예 5. 종균 활성 최적화 배지에 Leuc . citreum GR1 의 배양
상기 확인된 최적 종균 활성 최적화 배지 즉, MFL 배지에 30% 배추 잎 추출물, 2% maltose 포함, 0.25% yeast extract, 2X salt를 혼합하여 제조한 배지를 이용하여, Leuc . citreum GR1의 최적화 배지 배양 후 관찰하였다. 상기 관찰한 결과를 도 13 내지 도 15에 나타내었다.
상기 도 13에 나타낸 바와 같이, 24 시간 배양 후, MRS 배지에서 109.54 CFU/mL인 반면, 최적화된 MFL 배지에서 109.87 CFU/mL로 생균수는 2.2 배 증진되었다.. 흡광도 값은 MRS에 비해 1.2 배 증가하였다.
또한, 상기 도 14 및 도 15에 나타낸 바와 같이, FE-SEM으로 각 배지에서 배양된 Leuc . citreum GR1의 균체를 관찰한 결과, MRS 배지보다 MFL 배지에서 자란 균체의 크기가 작고 동 용량 당 균체 밀도가 높은 것으로 확인됨. 이러한 결과는 두 배지간의 흡광도 차이는 크지 않으나, 생균수에서 차이가 큰 것이 반영된 결과로 예사되었다.

Claims (4)

  1. 본 발명은 배추 열수 추출물, 말토스(maltose), 효모 추출물(yeast extract), 아세트산나트륨(Sodium Acetate, CH3COONa·H2O), 디소듐포스페이트(Disodium phosphate, Na2HPO4·2H2O), 시트르산나트륨(Sodium citrate, C6H5Na3O7·H2O), 황산암모늄(Ammonium sulfate, (NH4)2SO4), 황산마그네슘(Magnesium sulfate, MgSO4·H2O) 및 황산 망간(Manganese sulfate, MnSO4·4H2O)을 포함하는 유산균 배양배지 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 배추 열수 추출물은 배추 잎 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 유산균 배양배지 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 유산균은 스트렙토코코스 속(Streptococcus sp.) 속, 페디오코코스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.)로 이루어진 군중에서 선택된 1종 이상인 것인 유산균 배양배지 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 유산균 배양배지 조성물에 있어서, 상기 말토스의 함량은 2%(w/v)이고, 상기 효모 추출물(yeast extract)의 함량은 0.25%(w/v)이며, 상기 아세트산나트륨의 함량은 2%(w/v)이고, 상기 디소듐포스페이트의 함량은 0.8%(w/v)이며, 상기 시트르산나트륨의 함량은 0.8%(w/v)이고, 상기 황산암모늄의 함량은 0.8%(w/v)이며, 상기 황산마그네슘의 함량은 0.04%(w/v)이고, 상기 황산 망간의 함량은 0.02%(w/v)인 유산균 배양배지 조성물.
KR1020120071503A 2012-06-30 2012-06-30 유산균 배양용 배지 KR20140002444A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120071503A KR20140002444A (ko) 2012-06-30 2012-06-30 유산균 배양용 배지

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120071503A KR20140002444A (ko) 2012-06-30 2012-06-30 유산균 배양용 배지

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20140002444A true KR20140002444A (ko) 2014-01-08

Family

ID=50139512

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120071503A KR20140002444A (ko) 2012-06-30 2012-06-30 유산균 배양용 배지

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20140002444A (ko)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150144394A (ko) 2014-06-16 2015-12-28 대한민국(농촌진흥청장) 식물 추출물을 포함하는 유산균 배양용 배지 조성물 및 이의 제조방법
KR101951893B1 (ko) * 2018-11-27 2019-02-25 주식회사 셀로닉스 전통발효식품 유래의 프로바이오틱스활성 락토바실러스 파라카제이 srcm102343 균주의 고농도 제조 방법
KR102140765B1 (ko) 2020-02-12 2020-08-04 티아이칼렌버그코리아(주) Lng 탱크의 단열을 위한 스프레이 시스템 및 그 시공 방법
KR102140766B1 (ko) 2020-02-12 2020-08-04 티아이칼렌버그코리아(주) Lng 탱크의 단열을 위한 패널 시스템 및 그 시공 방법
CN117551592A (zh) * 2024-01-12 2024-02-13 深圳中科翎碳生物科技有限公司 乳酸菌发酵用碳源及采用该碳源的乳酸菌培养方法及应用

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150144394A (ko) 2014-06-16 2015-12-28 대한민국(농촌진흥청장) 식물 추출물을 포함하는 유산균 배양용 배지 조성물 및 이의 제조방법
KR101951893B1 (ko) * 2018-11-27 2019-02-25 주식회사 셀로닉스 전통발효식품 유래의 프로바이오틱스활성 락토바실러스 파라카제이 srcm102343 균주의 고농도 제조 방법
KR102140765B1 (ko) 2020-02-12 2020-08-04 티아이칼렌버그코리아(주) Lng 탱크의 단열을 위한 스프레이 시스템 및 그 시공 방법
KR102140766B1 (ko) 2020-02-12 2020-08-04 티아이칼렌버그코리아(주) Lng 탱크의 단열을 위한 패널 시스템 및 그 시공 방법
CN117551592A (zh) * 2024-01-12 2024-02-13 深圳中科翎碳生物科技有限公司 乳酸菌发酵用碳源及采用该碳源的乳酸菌培养方法及应用
CN117551592B (zh) * 2024-01-12 2024-04-26 深圳中科翎碳生物科技有限公司 乳酸菌发酵用碳源及采用该碳源的乳酸菌培养方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102356913B (zh) 一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法
CN102747009B (zh) 一株植物乳杆菌及其在发酵乳制品中的使用方法
CN102613518B (zh) 直投式短乳杆菌发酵剂生产菊芋泡菜及工艺
CN105533544A (zh) 一种天然果蔬酵素产品
CN101240255A (zh) 一种用于植物源蛋白的益生菌发酵剂的制备方法
KR101647049B1 (ko) 해조류의 유산균 발효액의 제조방법 및 이에 따라 제조된 유산균 발효액
CN104305465B (zh) 乳酸菌发酵型蓝莓果汁的制备方法
KR20140002444A (ko) 유산균 배양용 배지
CN115340965A (zh) 一株副干酪乳酪杆菌pc724及其应用
CN105433170A (zh) 一种多菌种微生物和小球藻复合饮料制剂及其制备方法
CN105274035B (zh) 一种基于泡菜发酵系统定向筛选益生乳酸菌的方法
CN105670959A (zh) 一株益生菌菌株及其应用
CN109864233A (zh) 一种富含活性植物乳杆菌的发酵苹果汁及其制备方法
CN105559087A (zh) 一种含燕窝酸的益生菌产品及其制备方法
CN109182397B (zh) 一种提高罗伊氏菌素产量的方法
CN102047960B (zh) 一种木槿花酸奶及其制作方法
CN104643094B (zh) 一种富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法
KR101814941B1 (ko) 맨드라미꽃 물추출물의 유산균 발효액을 함유하는 항산화 기능성 식품 조성물 및 그 제조방법
CN107822017A (zh) 一种高营养黄秋葵果健康食品的制备方法
KR101540746B1 (ko) 공액리놀레산(Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｌｉｎｏｌｅｉｃ Ａｃｉｄ, ＣＬＡ)의 생산방법
KR100449886B1 (ko) 버섯유산발효액의 제조방법 및 상기 제조방법에 의해제조된 버섯유산발효액
KR101685768B1 (ko) 발효렌틸콩의 제조방법
Njoki et al. Probiotic potential of lactic acid bacteria isolated from coconut (Cocos Nucifera) wine (mnazi) in Kenya
CN104651262B (zh) 一种植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法和应用
KR101540743B1 (ko) 공액리놀레산의 생산방법 및 콩 발효식품

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application