CN104757255A - 一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，属于生物发酵技术领域，本发明利用鲜果渣材料，将酿酒酵母或产朊假丝酵母菌菌种经三级活化后进行液体深层发酵，制得高蛋白果渣。本发明中活化菌种的培养基与液体深层发酵的培养基成分相同，省去了活化菌种时配制专用培养基的成本，同时能够最大限度地对苹果渣进行综合利用。本发明采用发酵罐进行液体深层发酵，占地面积小，自动化程度高，能够实现大规模的生产；在发酵过程中可以随时监测各项指标，易于控制。

Description

一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法

技术领域

本发明属于苹果渣废物利用和生物饲料领域，具体涉及一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法。

背景技术

我国水果产量和种植面积均居世界前列，每年产生苹果渣近千万吨。苹果渣中所含水分较高，可溶性营养物的含量较高，容易造成微生物的滋生，如若不及时处理，就会腐败变质，不仅造成了资源的严重浪费，更会对环境造成危害。目前，苹果渣的利用主要分为非发酵利用和发酵利用两个方面。

非发酵利用的方法有：鲜食、干制饲料、分离提取有效成分等。鲜苹果渣由于其适口性差、易霉变、蛋白质含量低等原因不能直接作饲料，所以需与其他饲料进行配比；干制后虽解决了易霉变等问题，但在饲料中复配时仍然存在蛋白含量低等缺点；分离提取又会产生大量二次残渣。

发酵利用的方法分为自然发酵和接种发酵。自然发酵适口性较差、易滋生有害菌。接种发酵又分为两个大的方面：1.利用微生物发酵生产酒精、沼气、柠檬酸、苹果醋等；2.接种益生菌生产蛋白质饲料。其中，利用微生物发酵生产酒精、沼气、柠檬酸、苹果醋等，又会伴随着大量二次残渣的出现，形成对环境的二次污染。而接种益生菌生产蛋白饲料是一种能够将苹果渣达到完全的利用、无环境二次污染、成本较低且具有高附加值的利用方法，现就这一方面进行以下概述：

目前，利用接种益生菌生产蛋白饲料对苹果渣进行开发利用的研究成果来看，发酵方式大多为固态发酵，浅盘液体发酵也有报道。武运，李焕荣等人利用固态发酵法对苹果渣生产菌体饲料蛋白进行了研究。高卫卫利用产朊假丝酵母，对苹果渣进行固体发酵。而固态发酵也有其局限性，不利于工业化生产：1.菌种限于耐低水活性的微生物，菌种选择性少。2.发酵速度慢，周期较长。3.占地面积过大，规模受限。4.工艺参数难测准和控制。5.批量产出的产品少，工艺操作消耗劳力多，强度大。6.由于自动化程度差，过程中大多环节需要认为操作，易污染杂菌。张宗舟，巩晓芳等发表的专利中利用苹果渣液体培养基进行浅盘培养，发酵2-7天，取菌膜烘干供饲料添加所用。浅盘液体发酵的局限性在于：1.发酵占地面积大，规模受限。2.由于发酵过程中需要翻盘，人力消耗大。3.批量产出产品少。4.需要露天培养，更易污染杂菌。5.仅靠观察菌膜厚度判断发酵效果，工艺参数难测准和控制。徐抗震，宋纪蓉等利用液固态进行发酵，即菌种一次活化之后，将多菌种混合小规模液态发酵，再接入到固态培养基中进行固态发酵，此方法利用的液体发酵仅限于菌种二次活化以利于多菌种相互适应，在后期仍需固态发酵。另外，田杏芳，王连民则着手于利用苹果渣等配成的混合培养基生产发酵饲料，在发酵过程中不添加外源含氮物，在于利用培养基增菌，即将培养基中的蛋白质转换为菌体，着重益生菌发酵饲料的保健作用，不涉及蛋白质含量的大量增加。宁瑛的研究成果原理与之类似。这些研究所用的发酵方法也是固态发酵，或添加少量水成半固态，在发酵过程中的弊端与以上类似。

综上所述，现有的发酵方法弊端较多，受诸多不确定因素影响，发酵时间长，消耗大，最大的问题的是难以实现大规模工业化生产。

发明内容

为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，该方法发酵速度快、周期短，过程易控制，产量高，利于工业化生产。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，包括以下步骤：

1)菌种一级活化

向YPD培养基中接入0.5％～1％的酿酒酵母或产朊假丝酵母，灭菌后，培养活化至活菌数大于10⁸cfu/mL；

2)菌种二级活化

按1000：(2.5～4)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀、灭菌后，按3％～5％的接种量接入经一级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养至活菌数大于10⁸cfu/mL；

3)菌种三级活化

按1000：(2.5～4)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀后经超高温瞬时灭菌后，按5％～10％的接种量接入经二级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养至活菌数大于10⁸cfu/mL；

4)液体深层发酵

按1000：(2.5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀后经超高温瞬时灭菌后，按5％～10％的接种量接入经三级级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养18～24h后活菌数达4.0×10⁸～5.0×10⁸cfu/mL，制得高蛋白果渣。

步骤1)所述的菌种一级活化，是将YPD培养基装入0.05～1L的发酵容器中，装料量为20％～30％，在121℃下灭菌15-20min，然后接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，在25～30℃下培养12～24h。

YPD培养基的成分为：10g酵母浸粉、10g蛋白胨、20g葡萄糖及1L蒸馏水，调节pH值至5～6。

步骤2)菌种二级活化采用5～50L的发酵罐，装料量为70％～80％；灭菌是在115～121℃下，处理20～30min；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.5～0.7V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在25～28℃下，发酵培养20～48h，发酵过程中pH值控制在5～6。

步骤3)菌种三级活化采用50～100L的发酵罐，装料量为60％～70％；超高温瞬时灭菌是在135～140℃下处理4～8s；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.6～0.9V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在25～28℃下，发酵培养24～48h，发酵过程中pH值控制在5～6。

步骤4)液体深层发酵采用500～1000L的发酵罐，装料量为60％～70％；超高温瞬时灭菌是在135～140℃下处理6～10s；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.8～1.0V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在26～28℃下，发酵培养18～24h，发酵过程中pH值控制在5～6。

所述苹果渣浆料是按鲜苹果渣：水＝120～150kg：1000L的料液比，将鲜苹果渣和水混合后进行破碎打浆后制得。

破碎打浆的粒度为20～60目。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明方法利用新鲜果渣为原料，将酿酒酵母或产朊假丝酵母菌种经三级活化后再进行液体深层发酵，制得高蛋白果渣。本发明方法中三级活化菌种的培养基与液体深层发酵的培养基成分相同，省去了活化菌种时配制专用培养基的成本，同时能够最大限度地对苹果渣进行综合利用；活化好的菌体能够更好地适应生长环境，而且由于发酵罐能够控制溶氧，所以菌种在接入发酵罐后能在短时间内达到生长的高峰，同时真蛋白含量也达到最高峰，活菌数与真蛋白含量兼顾，有效缩短了发酵周期。本发明方法在制备过程中，由于减少了发酵过程中的人为操作，不易污染杂菌，且发酵过程中可以随时监测各项指标，易于控制。

附图说明

图1为培养过程中活菌数的细胞生长动力学变化曲线；

图2为培养过程中真蛋白增长动力学变化曲线。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明中公开的内容中：

1.文中所述通气量范围为0.5-1(V/V·min)，即指每分钟通入的无菌空气的体积：培养液的体积＝0.5-1。例如，设置通气量为0.5(V/V·min)时，内装1m³培养液的发酵罐，每分钟通入0.5m³的无菌空气。

2.文中所述真蛋白为干物质含量。真蛋白含量测定原理为：蛋白质在碱性条件下，与重金属盐类发生作用，沉淀析出，析出的沉淀不溶于热水，而非蛋白氮易溶于水，用热水洗涤沉淀，洗去非蛋白氮，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，即得真蛋白含量。

真蛋白增长量(g/kg)＝发酵后真蛋白含量(g/kg)-未发酵果渣中真蛋白含量(g/kg)。

3.通过文中所述方法进行发酵，可获得活菌数为4-5×10⁸cfu/mL，真蛋白含量为175-205g/kg的发酵液，发酵液可不经干燥直接饲喂，也可用通过流化床干燥机烘干、喷雾干燥等，即得干燥饲料。

4、本发明所用的酿酒酵母和产朊假丝酵母购自微生物研究院

实施例1

一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，包括以下步骤：

1.菌种的一级活化：将YPD培养基(酵母浸粉10g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、pH5-6，蒸馏水1L)分装入500mL的三角瓶中，装料量30％，在121℃下灭菌15min，接入0.5％的酿酒酵母，25℃培养18h。

2.菌种的二级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣120kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为60目)、3kg CO(NH₂)₂和0.7kg甘蔗糖蜜混匀后装入5L的发酵罐中，装料量70％，在115℃下灭菌20min，接入3％的酿酒酵母，通气量为0.5(V/V·min)，搅拌转速200rpm，25℃培养20h，发酵过程中pH控制在5-6。

3.菌种的三级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣120kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为60目)、3kg CO(NH₂)₂和0.7kg甘蔗糖蜜混匀后装入50L种子酵罐中，装料量60％，超高温瞬时灭菌(135℃，4秒)，接入5％的酿酒酵母，通气量为0.6(V/V·min)，搅拌转速200rpm，25℃培养24h，发酵过程中pH控制在5-6。

4.液体深层发酵：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣120kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为60目)、3kg CO(NH₂)₂和0.7kg甘蔗糖蜜混匀后装入500L发酵罐中，装料量60％，超高温瞬时灭菌(135℃，6秒)，接入5％的酿酒酵母，通气量为0.8(V/V·min)，搅拌转速200rpm，26℃培养，发酵过程中pH控制在5-6。发酵18h之后，活菌数达到最高峰，可达到4.85×10⁸cfu/mL，未发酵时苹果渣真蛋白含量为45g/kg，经过发酵后真蛋白含量为175g/kg，真蛋白增加量为130g/kg。

实施例2

一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，包括以下步骤：

1.菌种的一级活化：将YPD培养基(酵母浸粉10g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、pH5-6，蒸馏水1L)分装入1L的三角瓶中，装料量20％，在121℃下灭菌20min，接入1％的产朊假丝酵母，30℃培养24h。

2.菌种的二级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣150kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为20目)、7kg(NH₄)₂·SO₄和1.5kg甘蔗糖蜜混匀后装入50L的发酵罐中，装料量80％，在121℃下灭菌30min，接入5％的产朊假丝酵母，通气量为0.7(V/V·min)，搅拌转速300rpm，28℃培养48h，发酵过程中pH控制在5-6。

3.菌种的三级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣150kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为20目)、7kg(NH₄)₂·SO₄和1.5kg甘蔗糖蜜混匀后装入100L种子酵罐中，装料量70％，超高温瞬时灭菌(140℃，8秒)，接入10％的产朊假丝酵母，通气量为0.9(V/V·min)，搅拌转速300rpm，28℃培养48h，发酵过程中pH控制在5-6。

4.液体深层发酵：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣150kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为20目)、7kg(NH₄)₂·SO₄和1.5kg甘蔗糖蜜混匀后装入1000L发酵罐中，装料量70％，超高温瞬时灭菌(140℃，10秒)，接入10％的产朊假丝酵母，通气量为1(V/V·min)，搅拌转速300rpm，28℃培养，发酵过程中pH控制在5-6。发酵20h之后，活菌数达到最高峰，可达到5×10⁸cfu/mL，未发酵时苹果渣真蛋白含量为51g/kg，经过发酵后真蛋白含量为205g/kg，真蛋白增加量为154g/kg。

实施例3

一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，包括以下步骤：

1.菌种的一级活化：将YPD培养基(酵母浸粉10g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、pH5-6，蒸馏水1L)分装入50mL的三角瓶中，装料量25％，在121℃下灭菌15min，接入0.7％的酿酒酵母，28℃培养20h。

2.菌种的二级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣130kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为50目)、4kg CO(NH₂)₂和1k甘蔗糖蜜g混匀后装入30L的发酵罐中，装料量70％，在115℃下灭菌30min，接入4％的酿酒酵母，通气量为0.6(V/V·min)，搅拌转速200rpm，28℃培养30h，发酵过程中pH控制在5-6。

3.菌种的三级活化：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣130kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为50目)、4kg CO(NH₂)₂和1kg甘蔗糖蜜混匀后装入80L种子酵罐中，装料量65％，超高温瞬时灭菌(135℃，6秒)，接入7％的酿酒酵母，通气量为0.7(V/V·min)，搅拌转速240rpm，28℃培养30h，发酵过程中pH控制在5-6。

4.液体深层发酵：将1000kg苹果渣浆料(按鲜苹果渣130kg：水1000L的比例，在打浆机中进行破碎打浆，破碎粒度为50目)、4kg的CO(NH₂)₂和1kg甘蔗糖蜜混匀后装入800L发酵罐中，装料量70％，超高温瞬时灭菌(140℃，8秒)，接入8％的酿酒酵母，通气量为1(V/V·min)，搅拌转速240rpm，28℃培养，发酵过程中pH控制在5-6。发酵20h之后，活菌数达到最高峰，可达到4.95×10⁸cfu/mL，未发酵时苹果渣真蛋白含量为46g/kg，经过发酵后真蛋白含量为192g/kg，真蛋白增加量为146g/kg。

以上实施例中，二级活化所用菌种为一级活化后所得，三级活化所用菌种为二级活化后所得，液体深层发酵所用菌种为三级活化后所得。

培养过程中活菌数的变化为典型的S型曲线，符合以下Logistic方程描述的细胞生长动力学模型。

$\frac{\mathrm{dX}}{\mathrm{dt}}={\mathrm{\μ}}_{m}X(1-\frac{X}{X_m})---\left(1\right)$

该方程可积分为：

$X=\frac{X_0{X}_m{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}{X_m-X_0+X_0{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}---\left(2\right).$

X：菌体浓度(10⁸cfu/mL)，X₀：最初菌体浓度，X_m：最大菌体浓度；

t：发酵时间(h)；

μ：菌体比生长速率，μ_m：菌体最大比生长速率(h^-1)；

微生物生长速度。

最终拟合结果如图1。其中X₀＝0.02303，μ_m＝0.50843，X_m＝5.04165，相关系数R²＝0.99896。

活菌数(X)随时间变化的函数为：

$X=\frac{{0.1161e}^{0.50843t}}{5.0186+{0.023e}^{0.50843t}}---\left(3\right)$

将真蛋白视作产物，通过以下Luedeking piret方程描述真蛋白增长量与细胞生长的关系：

$\frac{\mathrm{dp}}{\mathrm{dt}}=\mathrm{\α}\frac{\mathrm{dX}}{\mathrm{dt}}+\mathrm{\βX}---\left(4\right)$

该方程根据方程(1)、(2)可积分为：

$p=p_0-\mathrm{\α}{X}_0+\mathrm{\α}\frac{X_0{X}_m{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}{X_m-X_0+X_0{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}+\mathrm{\β}\frac{X_m}{{\mathrm{\μ}}_m}\ln \left(\frac{X_m-X_0+X_0{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}{X_m}\right)---\left(5\right)$

由于0h时，X0对产物影响忽略不计，公式(5)可简化为：

$p=p_0+\mathrm{\α}\frac{X_0{X}_m{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}{X_m-X_0+X_0{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}+\mathrm{\β}\frac{X_m}{{\mathrm{\μ}}_m}\ln \left(\frac{X_m-X_0+X_0{e}^{{\mathrm{\μ}}_{m}t}}{X_m}\right)---\left(6\right)$

p：真蛋白增长量，p₀：接种后增加的真蛋白含量(g/kg)；

α、β：生长耦连系数；

真蛋白增长速度。

最终拟合结果如图2。其中p₀＝0.13，α＝30.60428，β＝0.11144，相关系数R²＝0.99611。

真蛋白增加量(p)随时间变化的函数为：

$p=0.13+\frac{{3.5534e}^{0.50843t}}{5.0186+{0.023e}^{0.50843t}}+1.105\ln \left(\frac{5.0186+{0.023e}^{0.50843t}}{5.04165}\right)---\left(7\right)$

由图1、图2可知，在发酵罐中发酵的酵母菌延滞期较短，发酵0-6h，活菌数增加不明显，真蛋白增加量也较少。6-16h为对数期，真蛋白量迅速增加。18h之后进入平稳期，活菌数达到最高峰，同时真蛋白增加量也为最大值。

综上所述，本发明公开的利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，具备以下优点：

1.利于工业化生产：本发明采用发酵罐进行液体深层发酵，占地面积小，自动化程度高，能够实现大规模的生产。

2.避免杂菌污染：由于减少了发酵过程中的人为操作，不易污染杂菌。

3.产量高、少人力：本发明批量产出的产品多，工艺操作简便，工作强度小，劳动力消耗少。

4.易控制：本发明在发酵过程中可以随时监测各项指标，易于控制。

5.最大限度利用果渣、低成本：本发明中活化菌种的培养基与液体深层发酵的培养基成分相同，省去了活化菌种时配制专用培养基的成本，同时能够最大限度地对苹果渣进行综合利用。

6.发酵速度快、周期短：本发明中活化好的菌体能够更好地适应生长环境，而且由于发酵罐能够控制溶氧，所以酵母菌在接入发酵罐后能在16-48h达到生长的高峰，同时真蛋白含量也达到最高峰，缩短了发酵周期。

7.活菌数与真蛋白含量兼顾。

8.提供有氧、多水分环境，菌种选择余地大。

9.本发明提供了动力学研究结果，可以进一步明确发酵过程中微生物的生理特点，了解活菌数的增长与真蛋白含量的关系。

Claims (8)

1.一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)菌种一级活化

向YPD培养基中接入0.5％～1％的酿酒酵母或产朊假丝酵母，灭菌后，培养活化至活菌数大于10⁸cfu/mL；

2)菌种二级活化

按1000：(2.5～4)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀、灭菌后，按3％～5％的接种量接入经一级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养至活菌数大于10⁸cfu/mL；

3)菌种三级活化

按1000：(2.5～4)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀后经超高温瞬时灭菌后，按5％～10％的接种量接入经二级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养至活菌数大于10⁸cfu/mL；

4)液体深层发酵

按1000：(2.5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、CO(NH₂)₂和甘蔗糖蜜，或按1000：(5～7)：(0.7～1.5)的质量比，取苹果渣浆料、(NH₄)₂·SO₄和甘蔗糖蜜；

混匀后经超高温瞬时灭菌后，按5％～10％的接种量接入经三级级活化的酿酒酵母或产朊假丝酵母，然后发酵培养18～24h后活菌数达4.0×10⁸～5.0×10⁸cfu/mL，制得高蛋白果渣。

2.根据权利要求1所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，步骤1)所述的菌种一级活化，是将YPD培养基装入0.05～1L的发酵容器中，装料量为20％～30％，在121℃下灭菌15-20min，然后接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，在25～30℃下培养12～24h。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，YPD培养基的成分为：10g酵母浸粉、10g蛋白胨、20g葡萄糖及1L蒸馏水，调节pH值至5～6。

4.根据权利要求1所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，步骤2)菌种二级活化采用5～50L的发酵罐，装料量为70％～80％；灭菌是在115～121℃下，处理20～30min；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.5～0.7V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在25～28℃下，发酵培养20～48h，发酵过程中pH值控制在5～6。

5.根据权利要求1所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，步骤3)菌种三级活化采用50～100L的发酵罐，装料量为60％～70％；超高温瞬时灭菌是在135～140℃下处理4～8s；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.6～0.9V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在25～28℃下，发酵培养24～48h，发酵过程中pH值控制在5～6。

6.根据权利要求1所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，步骤4)液体深层发酵采用500～1000L的发酵罐，装料量为60％～70％；超高温瞬时灭菌是在135～140℃下处理6～10s；且接入酿酒酵母或产朊假丝酵母后，发酵罐的通气量为0.8～1.0V/V·min，搅拌转速为200～300rpm，在26～28℃下，发酵培养18～24h，发酵过程中pH值控制在5～6。

7.根据权利要求1所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，所述苹果渣浆料是按鲜苹果渣：水＝120～150kg：1000L的料液比，将鲜苹果渣和水混合后进行破碎打浆后制得。

8.根据权利要求7所述的一种利用鲜果渣液体深层发酵制备高蛋白果渣的方法，其特征在于，破碎打浆的粒度为20～60目。