CN102329718B - 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法 - Google Patents

多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102329718B
CN102329718B CN201110320703A CN201110320703A CN102329718B CN 102329718 B CN102329718 B CN 102329718B CN 201110320703 A CN201110320703 A CN 201110320703A CN 201110320703 A CN201110320703 A CN 201110320703A CN 102329718 B CN102329718 B CN 102329718B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacterial strain
container
strain
cell
immobilized cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201110320703A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102329718A (zh
Inventor
唐欣昀
章琦
张建
曹媛媛
倪敬田
陈晓琳
孙乐妮
常艳
韩国民
甘旭华
沈玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui Agricultural University AHAU
Original Assignee
Anhui Agricultural University AHAU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui Agricultural University AHAU filed Critical Anhui Agricultural University AHAU
Priority to CN201110320703A priority Critical patent/CN102329718B/zh
Publication of CN102329718A publication Critical patent/CN102329718A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102329718B publication Critical patent/CN102329718B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法。该方法所用A菌株为酿酒酵母Saccharomycescerevisiae,B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacterpasteurianussubsp.pasteurianus;具体操作步骤如下:1、菌株培养;2、菌株的固定化,分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒;3、固定化细胞连续发酵制醋。本发明采用现代生物工程技术进行食醋的生产,彻底改变传统食醋酿造工艺,实现精确调控生产工艺参数的目标;改变传统酿造工艺脏乱差的落后生产环境,降低工人劳动强度;提高原材料的利用率,提高生产效率。

Description

多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法
技术领域
本发明属于发酵工程技术领域,具体涉及采用细胞固定化技术连续制醋的方法。
背景技术
食醋是我国传统的重要酿造调味品,大多数生产企业均采用传统固态发酵法酿造食醋,固态发酵工艺的产品风味、口感、品质较好,但存在卫生条件差、原料利用率较低、劳动强度大等缺点,生产工艺中淀粉转化率、糖酸转化率、产酸率均相对较低。
与传统的发酵技术相比较,细胞固定化发酵具有以下特出优点:
① 方法简便,将细胞与单体或聚合物一起聚凝,细胞被包埋在形成的聚合物之中;② 条件温和,可选用不同的聚合物载体,不同的包埋系统和条件,以保持细胞的酶催化活性;③ 细胞不易渗漏,稳定性好;④ 细胞密度高,有较高的细胞容量,聚合体中的细胞含量可达50%~70%;⑤ 固定化的细胞可以多批次使用。
现有的细胞固定化技术在理论方面研究的多、生产实践中用的少;很多研究也是局限于单一菌种的固定化。食醋酿造工艺涉及3种主要的微生物类群和相关技术过程:黑曲霉将淀粉转化为糖类,酵母菌将糖转化为酒精,醋酸杆菌将酒精转化为醋酸。在食醋酿造行业只有零星的研究涉及醋酸杆菌细胞固定化,这不能改变传统食醋酿造的面貌。因为采用固定化醋酸杆菌进行醋酸发酵,还需要采用传统的工艺将粮食等淀粉类原材料转化为糖类,再采用酵母菌将糖类转化为酒精,只有获得酒精,才能进入固定化醋酸杆菌发酵阶段。因此将食醋酿造相关微生物分别固定化,进而构建固定化细胞连续发酵技术,为酿造行业提供先进的发酵技术,将会改变食醋行业的生产面貌,提高企业生产效率,扩大生产规模,增加企业的经济效益,促进酿造行业的技术进步。
发明内容
为改变传统食醋酿造的落后面貌,采用细胞固定化技术将食醋酿造相关微生物菌株固定,构建固定化细胞发酵器,将固定化细胞发酵器串联形成固定化细胞连续发酵技术。
具体操作方法如下:
1、二个菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,具体操作步骤如下:
1.1、菌株培养
所用菌株为A菌株和B菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株,可将糖类转化为酒精;
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株,可将酒精转化为醋酸;
1.1.1、A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL~1.0×109/mL,得到A菌株菌液;
酿酒酵母培养基配方:5°Bé麦芽汁,121℃高压灭菌20分钟;
1.1.2、B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×107/mL~5.0×109/mL,得到B菌株菌液;
醋杆菌培养基配方:3°Bé麦芽汁,硫酸镁0.2%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.3%,葡萄糖2%, 121℃高压灭菌20分钟,灭菌后加95%酒精2~3%混匀;
1.2、菌株的固定化
1.2.1、细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL,分别在转速为5000~10000转/分钟条件下,离心分离10~15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液和B菌株细胞悬液;
1.2.2、取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的固定化载体溶液按体积比1: 1~4的比例混合均匀,成型造粒,固定化细胞颗粒直径2~5mm,室温固化2~6小时,置于4℃冰箱中,12小时平衡,倾去上清液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒,置于冰箱中备用;
所述固定化载体溶液中载体为琼脂或壳聚糖或角叉或聚乙烯醇,溶剂为水;
1.3、固定化细胞连续发酵制醋
1.3.1、取100g~500g的A菌株固定化细胞颗粒和100g~500g的B菌株固定化细胞颗粒,分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器;A容器的进口和B容器的进口均位于容器上部,A容器的出口和B容器的出口均位于容器下部;
1.3.2、A容器的出口连通着B容器的进口;常温下,通过进口向A容器中连续注入2%~6%的蔗糖溶液,控制流速为10~100mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;1~3天平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为1.0~4.0%。
 2、三个菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,具体操作步骤如下: 
2.1、菌株培养
所用菌株为A菌株、B菌株和C菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株,可将糖类转化为酒精;
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株,可将酒精转化为醋酸;
C菌株为黑曲霉变种Aspergillus niger var 2244菌株,可将淀粉转化为糖类;
2.1.1、 A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL~1.0×109/mL,得到A菌株菌液;
酿酒酵母培养基配方:5°Bé麦芽汁,121℃高压灭菌20分钟;
2.1.2、 B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×107/mL~5.0×109/mL,得到B菌株菌液;
醋杆菌培养基配方:3°Bé麦芽汁,硫酸镁0.2%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.3%,葡萄糖2%, 121℃高压灭菌20分钟,灭菌后加95%酒精2~3%混匀;
2.1.3、C菌株的培养,将黑曲霉变种接种至黑曲霉培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟 培养24~486h,使黑曲霉培养基中黑曲霉变种孢子浓度达到5.0×107/mL~5.0×108/mL,得到C菌株菌液;
黑曲霉培养基配方:蔗糖3%,硝酸钠0.2%,硫酸镁0.05%,氯化钾0.05%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸亚铁0.001%,121℃高压灭菌20分钟;
2.2、菌株的固定化
2.2.1、细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL、C菌株菌液50mL,分别在转速为5000~10000转/分钟条件下,离心分离10~15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液、B菌株细胞悬液和C菌株细胞悬液;
2.2.2、取A菌株细胞悬液50mL、B菌株细胞悬液50mL和C菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的固定化载体溶液按体积比1: 1~4的比例混合均匀后,成型造粒,固定化细胞颗粒直径2~5mm,室温固化2~6小时,置于4℃冰箱中,12小时平衡,倾去上清液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒、B菌株固定化细胞颗粒和C菌株固定化细胞颗粒,置于冰箱中备用;
所述的固定化载体溶液中载体为琼脂或壳聚糖或角叉或聚乙烯醇,溶剂为水;
2.3、固定化细胞连续发酵制醋
2.3.1、取100g~500g的A菌株固定化细胞颗粒、100g~500g的B菌株固定化细胞颗粒和100g~500g的C菌株固定化细胞颗粒分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器,盛有C菌株固定化细胞颗粒的容器为C容器;A容器的进口、B容器的进口和C容器的进口均位于容器的上部,A容器的出口、B容器的出口和C容器的出口均位于容器的下部;
2.3.2、 C容器的出口连通着A容器的进口;A容器的出口连通着B容器的进口;常温下,通过进口向C容器中连续注入2%~6%的淀粉溶液,控制流速为10~100mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;10~18小时平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为1.0~4.0%。
在菌株的固定化步骤的第2步中取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的海藻酸钠溶液按体积比1: 1~4的比例混合均匀,滴入浓度0.5%~1.5%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒;所述海藻酸钠溶液为固定化载体溶液。
在菌株的固定化步骤的第2步中取A菌株细胞悬液50mL、B菌株细胞悬液50mL和C菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的海藻酸钠溶液按体积比1:1~4的比例混合均匀,滴入浓度0.5%~1.5%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒;所述海藻酸钠溶液为固定化载体溶液。
本发明使用的菌种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株、巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株和黑曲霉变种Aspergillus niger var 2244菌株均自中国工业微生物菌种保藏中心获得。
本发明的有益技术效果如下:
1、采用现代生物工程技术进行食醋的生产,彻底改变传统食醋酿造工艺,实现精确调控生产工艺参数的目标;
2、改变传统酿造工艺脏乱差的落后生产环境,降低工人劳动强度;
3、提高原材料的利用率,提高生产效率。
具体实施方式
下面对本发明作进一步地说明。
实施例1:固定化细胞组合物连续发酵制醋
本例采用二个菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,具体操作步骤如下:
1、菌株培养,所用菌株为A菌株和B菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株,可将糖类转化为酒精;
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株,可将酒精转化为醋酸;
A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速120转/分钟,培养24h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL,得到A菌株菌液;
酿酒酵母培养基配方:5°Bé麦芽汁,121℃高压灭菌20分钟;
B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速150转/分钟,培养24h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×108/mL,得到B菌株菌液;
醋杆菌培养基配方:3°Bé麦芽汁,硫酸镁0.2%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.3%,葡萄糖2%,121℃高压灭菌20分钟,灭菌后加95%酒精2.5%混匀;
2、菌株的固定化
细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL,分别在转速为6000转/分钟条件下,离心分离12分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液和B菌株细胞悬液;
取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL,与温度50℃、浓度2.7%的琼脂100mL混合均匀,冷却至25℃凝固,切割成直径4mm固定化细胞颗粒,室温固化4小时,置于4℃冰箱中,12小时平衡,倾去上清液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒,置于冰箱中备用;
1.3、固定化细胞连续发酵制醋
取500g的A菌株固定化细胞颗粒和500g的B菌株固定化细胞颗粒,分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器;A容器的进口和B容器的进口均位于容器上部,A容器的出口和B容器的出口均位于容器下部;
A容器的出口连通着B容器的进口;25℃下,通过进口向A容器中连续注入3%的蔗糖溶液,控制流速为35mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;24小时平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为2.5%。这套固定化细胞连续发酵装置连续运行性能稳定。
实施例2
二个菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,具体操作步骤如下:
1、菌株培养
所用菌株为A菌株和B菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株,可将糖类转化为酒精;
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株,可将酒精转化为醋酸;
A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速100转/分钟,培养30h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到1.0×108/mL,得到A菌株菌液;
酿酒酵母培养基配方:5°Bé麦芽汁,121℃高压灭菌20分钟;
B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速150转/分钟,培养24h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×108/mL,得到B菌株菌液;
醋杆菌培养基配方:3°Bé麦芽汁,硫酸镁0.2%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.3%,葡萄糖2%, 121℃高压灭菌20分钟,灭菌后加95%酒精2.5%混匀;
2、菌株的固定化
细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL,分别在转速为6000转/分钟条件下,离心分离15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液和B菌株细胞悬液;
取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL(分别取多少?),与浓度2.8%的海藻酸钠溶液按体积比1:4的比例混合均匀,移入玻璃注射器中,适度加力,滴入浓度1.2%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒,固定化细胞颗粒直径4.5mm,室温固化3小时,置于4℃冰箱中,12小时平衡,倾去溶液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒,置于冰箱中备用;
3、固定化细胞连续发酵制醋
3.1、取500g的A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒,分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器;A容器的进口和B容器的进口均位于容器上部,A容器的出口和B容器的出口均位于容器下部;
3.2、A容器的出口连通着B容器的进口;25℃下,通过进口向A容器中连续注入3%的蔗糖溶液,控制流速为40mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;24小时平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为2.8%。固定化细胞连续发酵装置运行稳定。
实施例3:
三个菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,具体操作步骤如下:
1、菌株培养
所用菌株为A菌株、B菌株和C菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 1001菌株,可将糖类转化为酒精;
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus 7015菌株,可将酒精转化为醋酸;
C菌株为黑曲霉变种Aspergillus niger var 2244菌株,可将淀粉转化为糖类;
A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速100转/分钟,培养30h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到1.0×108/mL,得到A菌株菌液;
酿酒酵母培养基配方:5°Bé麦芽汁,121℃高压灭菌20分钟;
B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速150转/分钟,培养24h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×108/mL,得到B菌株菌液;
醋杆菌培养基配方:3°Bé麦芽汁,硫酸镁0.2%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.3%,葡萄糖2%, 121℃高压灭菌20分钟,灭菌后加95%酒精2.5%混匀;
C菌株的培养,将黑曲霉变种接种至黑曲霉培养基,温度30℃、转速140转/分钟 培养28h,使黑曲霉培养基中黑曲霉变种孢子浓度达到5.0×107/mL,得到C菌株菌液;
黑曲霉培养基配方:蔗糖3%,硝酸钠0.2%,硫酸镁0.05%,氯化钾0.05%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸亚铁0.001%,121℃高压灭菌20分钟;
2、菌株的固定化
细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL、C菌株菌液50mL,分别在转速为6000转/分钟条件下,离心分离15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液、B菌株细胞悬液和C菌株细胞悬液;
取A菌株细胞悬液50mL、B菌株细胞悬液50mL和C菌株细胞悬液50mL,与浓度2.5%的海藻酸钠溶液按体积比1:4的比例混合均匀,移入玻璃注射器中,适度加力,滴入浓度1.2%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒,固定化细胞颗粒直径5mm,室温固化4小时,置于4℃冰箱中,12小时平衡,倾去溶液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒,置于冰箱中备用;
3、固定化细胞连续发酵制醋
3.1、取400g的A菌株固定化细胞颗粒、400g的B菌株固定化细胞颗粒和400g的C菌株固定化细胞颗粒,分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器,盛有C菌株固定化细胞颗粒的容器为C容器;A容器的进口、B容器的进口和C容器的进口均位于容器上部,A容器的出口、B容器的出口和C容器的出口均位于容器下部;
3.2、C容器的出口连通着A容器的进口,A容器的出口连通着B容器的进口;25℃下,通过进口向C容器中连续注入3%的淀粉溶液,控制流速为32mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;24小时平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为3.4%。固定化细胞连续发酵装置运行性能仍稳定。

Claims (4)

1.多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,其特征在于具体操作步骤如下:
1.1、菌株培养
所用菌株为A菌株和B菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp.pasteurianus;
1.1.1、A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL~1.0×109/mL,得到A菌株菌液;
1.1.2、B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×107/mL~5.0×109/mL,得到B菌株菌液;
1.2、菌株的固定化
1.2.1、细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL,分别在转速为5000~10000转/分钟条件下,离心分离10~15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液和B菌株细胞悬液;
1.2.2、取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的固定化载体溶液按体积比1:1~4的比例混合均匀,成型造粒,固定化细胞颗粒直径2~5mm,室温固化2~6小时,温度4℃,12小时平衡,倾去上清液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒;
所述固定化载体溶液中载体为琼脂或壳聚糖或角叉或聚乙烯醇,溶剂为水;
1.3、固定化细胞连续发酵制醋
1.3.1、取100g~500g的A菌株固定化细胞颗粒和100g~500g的B菌株固定化细胞颗粒,分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器;A容器的进口和B容器的进口均位于容器上部,A容器的出口和B容器的出口均位于容器下部;
1.3.2、A容器的出口连通着B容器的进口;常温下,通过进口向A容器中连续注入2%~6%的蔗糖溶液,控制流速为10~100mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;1~3天平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为1.0~4.0%。
2.多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,其特征在于具体操作步骤如下:
1.1、菌株培养
所用菌株为A菌株、B菌株和C菌株;
A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,
B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp.pasteurianus;
C菌株为黑曲霉变种Aspergillus niger var;
1.1.1、A菌株的培养,将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL~1.0×109/mL,得到A菌株菌液;
1.1.2、B菌株的培养,将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟,培养24~48h,使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×107/mL~5.0×109/mL,得到B菌株菌液;
1.1.3、C菌株的培养,将黑曲霉变种接种至黑曲霉培养基,温度30℃、转速80~150转/分钟培养24~48h,使黑曲霉培养基中黑曲霉变种孢子浓度达到5.0×107/mL~5.0×108/mL,得到C菌株菌液;
1.2、菌株的固定化
1.2.1、细胞的离心洗涤:取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL、C菌株菌液50mL,分别在转速为5000~10000转/分钟条件下,离心分离10~15分钟,倾去上清液,用0.85%生理盐水悬浮细胞,完成一次细胞的离心洗涤;再重复2次细胞的离心洗涤,制得A菌株细胞悬液、B菌株细胞悬液和C菌株细胞悬液;
1.2.2、取A菌株细胞悬液50mL、B菌株细胞悬液50mL和C菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的固定化载体溶液按体积比1:1~4的比例混合均匀后,成型造粒,固定化细胞颗粒直径2~5mm,室温固化2~6小时,温度4℃,12小时平衡,倾去上清液,加入无菌水洗涤3次;分别制得A菌株固定化细胞颗粒、B菌株固定化细胞颗粒和C菌株固定化细胞颗粒;
所述的固定化载体溶液中载体为琼脂或壳聚糖或角叉或聚乙烯醇,溶剂为水;
1.3、固定化细胞连续发酵制醋
2.3.1、取100g~500g的A菌株固定化细胞颗粒、100g~500g的B菌株固定化细胞颗粒和100g~500g的C菌株固定化细胞颗粒分别置于容器中,盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器,盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器,盛有C菌株固定化细胞颗粒的容器为C容器;A容器的进口、B容器的进口和C容器的进口均位于容器的上部,A容器的出口、B容器的出口和C容器的出口均位于容器的下部;
1.3.2、C容器的出口连通着A容器的进口;A容器的出口连通着B容器的进口;常温下,通过进口向C容器中连续注入2%~6%的淀粉溶液,控制流速为10~100mL/小时,收集B容器出口流出的发酵液;1~3天平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液,醋酸溶液中醋酸含量为1.0~4.0%。
3.根据权利要求1所述的多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,其特征在于:在菌株的固定化步骤的第2步中:取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的海藻酸钠溶液按体积比1:1~4的比例混合均匀,滴入浓度0.5%~1.5%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒;所述海藻酸钠溶液为固定化载体溶液。
4.根据权利要求2所述的多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法,其特征在于:在菌株的固定化步骤的第2步中:取A菌株细胞悬液50mL、B菌株细胞悬液50mL和C菌株细胞悬液50mL,与浓度1%~5%的海藻酸钠溶液按体积比1:1~4的比例混合均匀,滴入浓度0.5%~1.5%的氯化钙(CaCl2)溶液,自然成型造粒;所述海藻酸钠溶液为固定化载体溶液。
CN201110320703A 2011-10-20 2011-10-20 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法 Expired - Fee Related CN102329718B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110320703A CN102329718B (zh) 2011-10-20 2011-10-20 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110320703A CN102329718B (zh) 2011-10-20 2011-10-20 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102329718A CN102329718A (zh) 2012-01-25
CN102329718B true CN102329718B (zh) 2012-10-10

Family

ID=45481686

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110320703A Expired - Fee Related CN102329718B (zh) 2011-10-20 2011-10-20 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102329718B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105062765B (zh) * 2015-07-24 2017-10-27 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所 连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法
CN105925625A (zh) * 2016-06-14 2016-09-07 北京林业大学 一种利用多菌株固定化细胞组合物连续生产4-羟基肉桂醇的方法
CN109486645B (zh) * 2018-12-20 2021-11-19 山西紫林醋业股份有限公司 应用固定化靶向多微菌种酿造调香老陈醋的方法
CN112798370A (zh) * 2020-12-24 2021-05-14 桂林优利特医疗电子有限公司 一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法
CN112522060A (zh) * 2021-01-28 2021-03-19 永春县岵山津源酱醋厂有限公司 一种固定化酵母菌发酵食醋工艺

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN85104280A (zh) * 1985-05-31 1986-11-26 石代光 一种利用微生物连续酿造水果醋的方法
CN1250703C (zh) * 2003-11-12 2006-04-12 贵阳味莼园食品(集团)有限公司 棕做醋酸菌载体的液态醋发酵法
CN1837347A (zh) * 2005-03-25 2006-09-27 甘肃省科学院生物研究所 利用淀粉、柠檬酸的生产废水、废渣进行食醋生产的方法
CN1880436A (zh) * 2006-04-29 2006-12-20 周剑平 固定化酵母进行食醋生产的方法
CN100400641C (zh) * 2006-05-29 2008-07-09 药五忠 采用多菌种生产山西老陈醋的方法
CN101248899B (zh) * 2008-03-26 2011-08-24 广西科学院 芒果醋饮料及其制备方法
CN101875908A (zh) * 2009-12-04 2010-11-03 山西三盟实业发展有限公司 一种复合醋酸菌培养及进行固态醋酸发酵的方法
CN101857833B (zh) * 2010-06-11 2012-02-29 山西三盟实业发展有限公司 一种山西老陈醋标准化工业化的生产工艺

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈庆森 等.固定化细胞技术应用于酿醋的初步研究.《天津商学院学报》.1993,(第02期), *
陈庆森等.固定化细胞技术应用于酿醋的初步研究.《天津商学院学报》.1993,(第02期),

Also Published As

Publication number Publication date
CN102329718A (zh) 2012-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11149048B2 (en) High-purity D-psicose preparation method
CN102329718B (zh) 多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法
CN104911169B (zh) 一种培制蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法
CN106754411A (zh) 一株高产β‑D‑呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株及其液态发酵产酶方法
CN104745656A (zh) 一种利用热凝胶发酵液直接生产β-1,3-葡寡糖的方法
CN103952331B (zh) 一株凝结芽孢杆菌及其在原位产物分离发酵生产乳酸钙中的应用
CN108085280A (zh) 一种高密度发酵醋酸杆菌的方法
CN102533570B (zh) 一种黑曲霉及其应用及发酵制备柠檬酸的方法
CN105177084B (zh) 一种菊粉酶突变体发酵生产低聚果糖的方法
CN102127515B (zh) 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用
CN101638678A (zh) 一种魔芋低聚糖的制备方法
CN101486984B (zh) 一种氧化葡糖杆菌及利用其制备木酮糖的方法
CN107287123A (zh) 一种通过固定化微生物共培养利用蔗糖异养培养微藻的方法
CN102443611B (zh) 一种柠檬酸的生产方法
CN102851328A (zh) 一种利用固定化黑曲霉发酵玉米糖液制备柠檬酸的方法
CN105420286A (zh) 一种酒精生产方法
CN101463370B (zh) 利用米根霉发酵马铃薯淀粉制备l-乳酸的方法
CN104673767A (zh) 一种阿魏酸酯酶的生产方法
CN105624212B (zh) 一种以微藻为原料生产2,3-丁二醇的方法
CN110564804B (zh) 一种用于生产核黄素的清液发酵培养基及发酵方法
CN105624213B (zh) 一种利用微藻为原料生产2,3-丁二醇的方法
CN107254413A (zh) 一种通过与固定化微生物共培养利用淀粉异养培养微藻的方法
CN107058449A (zh) 一种餐厨垃圾解淀粉芽孢杆菌与鼠李糖乳杆菌混合发酵产乳酸的方法
CN102978191B (zh) 一种重组淀粉脱支酶发酵生产工艺
CN202688312U (zh) 一种丝状真菌华根霉固定化液态发酵装置

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20121010

Termination date: 20171020

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee